一種含lncRNA抑制劑的藥物組合物及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
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[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種短的核苷酸的新藥及其用途，特別是一種含IncRNA抑制劑的藥物組合物及其在預(yù)防或治療心臟疾病中的用途。
【背景技術(shù)】
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[0002]心血管疾病是人類健康和生命的主要威脅，是人類健康的頭號(hào)殺手，全世界每年有一千七百多萬人死于心血管疾病，其死亡率已接近所有癌癥死亡率的總和。隨著人類生活水平日益提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，心血管疾病死亡率呈明顯上升趨勢，已超過癌癥成為第一大致死原因。根據(jù)近期公布的最新統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，18歲及以上居民高血壓患病率為18.8%，估計(jì)全國患病人數(shù)1.6億多，由此造成的心肌肥大、心肌梗死、冠心病、以及心力衰竭等凋亡相關(guān)心臟疾病的病人達(dá)幾千萬。目前關(guān)于心臟疾病發(fā)病機(jī)理尚不完全清楚，心臟疾病的預(yù)防、診斷和治療尚不能達(dá)到讓人滿意的效果，急需開發(fā)新的藥物用于心臟病的診斷和防治。
[0003]細(xì)胞凋亡(apoptosis)又稱程序性細(xì)胞死亡，是指細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束生命的過程，是一個(gè)主動(dòng)的、高度有序的、由基因控制及一系列酶參與的過程，對(duì)正常胚胎發(fā)育，維持細(xì)胞群體及惡性病變過程中均起重要作用，在保證多細(xì)胞生物的健康生存過程中扮演著關(guān)鍵的角色。在許多心肌損傷或心臟病理狀態(tài)下，如心肌缺血再灌注損傷、心肌肥大和心力衰竭等，心肌細(xì)胞會(huì)發(fā)生凋亡。由于成熟的心肌細(xì)胞不能分裂增殖，心肌細(xì)胞過度凋亡必然會(huì)使心肌細(xì)胞數(shù)目減少，這可能是心臟疾病發(fā)病的機(jī)理。
[0004]通常，IncRNA是指大于200個(gè)核苷酸的非編碼RNA，與其他非編碼RNA相比較，IncRNA具有類型多、作用模式多和數(shù)量多的特點(diǎn)；IncRNA可以通過改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)來調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，也可以通過順式或反式方法來沉默或激活一個(gè)基因或一個(gè)基因家族，甚至整條染色體。由于IncRNA功能很廣泛，所以IncRNA與心臟疾病的關(guān)系已經(jīng)引起了人們的重視?，F(xiàn)在IncRNA在心臟中的表達(dá)調(diào)控以及功能尚且不為人們所知，我們想對(duì)這類在心臟中表達(dá)的IncRNA進(jìn)行表達(dá)調(diào)控以及功能的研宄，從而加深人們對(duì)心肌梗死分子機(jī)制的了解，提供新的藥物作用靶點(diǎn)。這對(duì)于開發(fā)以IncRNA為策略的心臟疾病的診斷和治療藥物具有及其重要的意義和應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

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[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種IncRNA抑制劑用于制備診斷、預(yù)防或治療心臟疾病的藥物組合物及其用途，確定或發(fā)現(xiàn)促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡和心肌梗死的心臟特異性表達(dá)的IncRNA，進(jìn)一步確定其在心臟疾病中的作用，并將其抑制劑應(yīng)用于這些心臟疾病的診斷和防治藥物中。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明涉及的一種含IncRNA抑制劑的藥物組合物包括IncRNA抑制劑和藥學(xué)上可接受的載體；所述IncRNA抑制劑的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示:5’ -CAGUGAGGUAGUCUCACAA-3’;所述載體為殼聚糖、膽固醇、納米顆粒和脂質(zhì)體中的一種或多種，優(yōu)選地為脂質(zhì)體納米粒；藥物組合物中IncRNA抑制劑的的含量為0.5-1克。
[0007]所述藥物組合物以口服或注射的方式給藥；其中，所述注射給藥方式包括靜脈注射、肌肉注射、冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射或心肌注射。
[0008]本發(fā)明的含IncRNA抑制劑的藥物組合物用于心肌梗死、心肌缺血損傷和心肌纖維化的治療和防治。
[0009]本發(fā)明的藥物組合物可制成用于預(yù)防或治療心臟疾病的試劑盒，含有的IncRNA抑制劑與載體構(gòu)成藥物導(dǎo)入體內(nèi)，所述載體為殼聚糖、膽固醇、納米顆粒和脂質(zhì)體中的一種或多種，優(yōu)選地為脂質(zhì)體納米粒，用于心肌梗死、心肌缺血損傷和心肌纖維化的預(yù)防與治療。
[0010]本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IncRNA在心肌缺血損傷及缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡過程中表達(dá)顯著上調(diào)；通過轉(zhuǎn)染和注射IncRNA抑制劑抑制IncRNA的表達(dá)能夠抑制心肌細(xì)胞凋亡、心肌缺血損傷和心肌梗死面積減少；通過抑制心肌細(xì)胞凋亡對(duì)心臟具有保護(hù)作用。
[0011]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其選用的原料科學(xué)合理，制備工藝簡單，藥物作用明顯，使用范圍廣，安全可靠，應(yīng)用環(huán)境友好。
【附圖說明】
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[0012]圖1為心肌缺血損傷及缺氧處理(Anoxia)的心肌細(xì)胞凋亡過程中IncRNA表達(dá)水平的變化圖；
[0013]圖2為抑制內(nèi)源性的IncRNA對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的抑制的作用圖；
[0014]圖3為IncRNA抑制劑對(duì)心肌缺血損傷的抑制作用圖。
【具體實(shí)施方式】
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[0015]下面通過具體實(shí)施例并結(jié)合附圖進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0016]以下各實(shí)施例中涉及的原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞轉(zhuǎn)染，心臟缺血再灌手術(shù)步驟，Evans blue/TTC 雙染和 TUNEL 檢測均參見以下文獻(xiàn):Wang JX, etal, miR-499regulatesmitochondrial dynamics by targeting calcineurin and dynamin-relatedprotein-1.2011 January 17:71-78 ;其中所用的試驗(yàn)動(dòng)物為小鼠，其小鼠品種為C57/BL6，購自北京醫(yī)科大學(xué)；所用的酶如限制性內(nèi)切酶、擴(kuò)增酶和逆轉(zhuǎn)錄酶等，均購自北京奧博生物有限公司；所用的試劑均為分析純級(jí)試劑，且從正規(guī)渠道商購獲得。
[0017]實(shí)施例1、
[0018]本實(shí)施例藥物組合物包括IncRNA抑制劑和藥學(xué)上可接受的載體；所用的IncRNA抑制劑的核苷酸序列如下列SEQ ID NO:1所示:5’ -AGUGAGGUA⑶CUCACAA-3’ ；所述載體為殼聚糖、膽固醇、納米顆粒和脂質(zhì)體中的一種或多種；藥物組合物中IncRNA抑制劑的的含量為0.5-1克。
[0019]將本發(fā)明的IncRNA抑制劑藥物組合物以口服或注射的方式給藥，用于心肌梗死、心肌缺血損傷和心肌纖維化的治療和防治。
[0020]實(shí)施例2、
[0021]心肌缺血及心肌細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡過程中IncRNA表達(dá)情況檢測，本實(shí)施例對(duì)心肌細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停捎贸Ｒ?guī)的方法培養(yǎng)大鼠乳鼠原代心肌細(xì)胞，低氧培養(yǎng)箱(氧濃度低于1% )培養(yǎng)不同時(shí)間，提取RNA，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測IncRNA的表達(dá)水平，圖1為心肌缺血損傷及缺氧處理(Anoxia)的心肌細(xì)胞凋亡過程中IncRNA表達(dá)水平的變化圖，其中圖1A表明原代心肌細(xì)胞缺氧處理IncRNA表達(dá)水平；圖1B表明小鼠心肌缺血損傷IncRNA表達(dá)水平；在低氧處理