一種治療慢性乙型肝炎病毒感染的藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種治療乙型肝炎病毒感染的藥物；特別涉及一種治療慢性乙型肝炎 病毒感染的藥物，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 乙型肝炎（HepatitisB，HB)是由乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus，HBV)引起 的一種嚴(yán)重危害人類健康的重要傳染病。乙型肝炎病毒感染所導(dǎo)致的慢性肝炎是全球性的 公共衛(wèi)生問題，給患者及社會(huì)帶來巨額經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。HBV持續(xù)感染會(huì)使機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)HBV抗原 的免疫耐受，導(dǎo)致慢性HBV感染。HBV感染導(dǎo)致病毒在宿主體內(nèi)持續(xù)存在并致病程慢性化的 關(guān)鍵，為機(jī)體缺乏有效的免疫應(yīng)答而不能清除病毒。目前慢性HBV感染主要依靠核苷類似 物及干擾素進(jìn)行治療，其存在高耐藥、低耐受及不良反應(yīng)等問題。目前，對(duì)慢性HBV感染者 尚無有效的特異性治療藥物。
[0003] 病毒感染后，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生抗原特異性的免疫反應(yīng)來對(duì)抗感染，尤其是細(xì)胞免疫反 應(yīng)才能夠?qū)⒉《厩宄?。目前的重組乙型肝炎疫苗可以使90%的接種者產(chǎn)生保護(hù)性抗體；但 是對(duì)慢性HBV攜帶者，由于其機(jī)體對(duì)HBsAg蛋白產(chǎn)生耐受，不能刺激機(jī)體產(chǎn)生體液和細(xì)胞免 疫，因此它只能作為一種預(yù)防性的疫苗。
[0004] 凝集素是一類能夠凝集細(xì)胞、非免疫來源的蛋白質(zhì)，其本身不能刺激機(jī)體形成凝 集素特異性抗體及T細(xì)胞免疫反應(yīng)。凝集素在食用菌中含量豐富。食用菌凝集素是一類從 食用菌中純化的活性蛋白。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何更有效地治療病毒慢性感染引起的疾病（如 慢性乙型肝炎）。
[0006] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供了糙皮側(cè)耳凝集素在制備抗病毒藥物佐劑中 的應(yīng)用。
[0007] 上述應(yīng)用中，所述病毒為乙型肝炎病毒。
[0008] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了一種抗病毒組合物，該抗病毒組合物含 有糙皮側(cè)耳凝集素和抗病毒藥物；
[0009] 所述糙皮側(cè)耳凝集素和所述抗病毒藥物可以單獨(dú)包裝，也可以混合包裝。
[0010] 上述抗病毒組合物中，所述抗病毒組合物的活性成分為所述糙皮側(cè)耳凝集素和所 述抗病毒藥物。
[0011] 上述任一所述的抗病毒組合物中，所述抗病毒組合物由所述糙皮側(cè)耳凝集素和所 述抗病毒藥物組成。
[0012] 上述任一所述的抗病毒組合物中，所述病毒為乙型肝炎病毒。
[0013] 上述任一所述的抗病毒組合物中，所述抗病毒藥物為重組乙型肝炎疫苗。
[0014] 上述任一所述的抗病毒組合物中，所述糙皮側(cè)耳凝集素和所述重組乙型肝炎疫苗 的比例為1微克：（50-200)微升。
[0015] 上述任一所述的抗病毒組合物中，所述糙皮側(cè)耳凝集素和所述乙肝疫苗的比例為 1微克：100微升。
[0016] 上述任一所述的抗病毒組合物中，所述重組乙型肝炎疫苗為華北制藥金坦生物技 術(shù)股份有限公司產(chǎn)品，國(guó)藥準(zhǔn)字S20020036。
[0017] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了上述任一所述的抗病毒組合物在制備如 下任一所示的產(chǎn)品中的應(yīng)用：
[0018] (1)提高HBV表面抗原特異性抗體水平的產(chǎn)品；
[0019] (2)提高HBV抗原特異性細(xì)胞免疫水平的產(chǎn)品；
[0020] (3)降低HBV表面抗原水平的產(chǎn)品；
[0021] (4)降低肝臟組織中淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的產(chǎn)品。
[0022] 上述應(yīng)用和抗病毒組合物中，所述糙皮側(cè)耳凝集素是從糙皮側(cè)耳子實(shí)體中提取得 到的具有凝集素活性的提取物。
[0023] 上述應(yīng)用和抗病毒組合物中，所述糙皮側(cè)耳凝集素可按照包括如下步驟的方法制 備：
[0024] (1)用NaCl水溶液浸提糙皮側(cè)耳，離心取上清液；
[0025] (2)將步驟⑴得到的上清液用（NH4)2SO4沉淀法進(jìn)行沉淀，收集沉淀；
[0026] (3)將步驟（2)得到的沉淀進(jìn)行分離純化得到具有凝集素活性的蛋白，即為糙皮 側(cè)耳凝集素。
[0027] 上述應(yīng)用和抗病毒組合物中，所述糙皮側(cè)耳可為糙皮側(cè)耳子實(shí)體；
[0028] 所述步驟（1)中，所述糙皮側(cè)耳與所述NaCl水溶液的比例為500-750克：2000 毫升，具體為750克：2000毫升；所述浸提的條件為0-4°C浸提2-12小時(shí)，具體為4°C浸提 2-12小時(shí)；所述NaCl水溶液為濃度為0. 1-0. 2mM的NaCl水溶液（溶劑為水，溶質(zhì)為NaCl)， 具體為〇. 15mM的NaCl水溶液；
[0029] 所述步驟⑵中，所述（NH4)2SOjX淀法中采用30% -80%飽和度的（NH4)2SCVK 溶液進(jìn)行沉淀，具體為80%飽和度的（NH4)2SO4水溶液進(jìn)行沉淀；所述沉淀的時(shí)間為4-8小 時(shí)，具體為6小時(shí)；
[0030] 所述步驟⑶中，所述將步驟⑵得到的沉淀進(jìn)行分離純化得到具有凝集素活性 的蛋白包括如下步驟：
[0031] a)將步驟（2)得到的沉淀進(jìn)行陰離子交換層析，收集具有凝集素活性的洗脫峰； 所述陰離子交換層析中所采用的陰離子交換基團(tuán)是DEAE，所采用的洗脫劑為pH7. 0-7. 8的 PBS，具體為IOmMpH7. 5 的PBS;所述IOmMpH7. 5 的PBS的溶質(zhì)為Na2HP04、KH2P04、NaCl和 KC1，溶劑為水，似2即04在IOmMpH7. 5的PBS中的濃度為10禮，1(112?04在IOmMpH7. 5的PBS 中的濃度為2mM，NaCl在IOmMpH7. 5的PBS中的濃度為137mM，KCl在IOmMpH7. 5的PBS 中的濃度為2. 7mM;
[0032] 所述陰離子交換層析中所采用的陰離子交換載體具體為纖維素；
[0033] 所述陰離子交換層析中所采用的陰離子交換層析柱的柱子直徑與柱子高度比具 體為1:6-8,再具體為1:7. 2 ;
[0034] b)將步驟a)收集的具有凝集素活性的洗脫峰進(jìn)行陽離子交換層析，收集具有凝 集素活性的洗脫峰；所述陽離子交換層析中所采用的陽離子交換基團(tuán)是CM，所采用的洗脫 劑為PH5-6的HAc-NaAc緩沖溶液，具體為IOmMpH5. 4的HAc-NaAc緩沖溶液；
[0035] 所述陽離子交換層析中所采用的陽離子交換載體具體為纖維素；
[0036] 所述陽離子交換層析中所采用的陽離子交換層析柱的柱子直徑與柱子高度比具 體為1:10-15,再具體為1:12 ;
[0037] c)將步驟b)收集的具有凝集素活性的洗脫峰進(jìn)行凝膠過濾層析，收集具有凝集 素活性的洗脫峰；所采用的洗脫劑為pH8. 5-9. 0的NH4HC〇31沖溶液，具體為IOOmMpH8. 8 的NH4HCO3緩沖溶液；所述IOOmMpH8. 8的NH4HC03緩沖溶液的溶質(zhì)為NH4HC03，溶劑為水， 順4110