一種預防腸粘連膜液及其制備方法與應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明具體涉及一種用于腹部術后預防腹膜粘連的膜液。
【背景技術】
[0002] 粘連是腹部術后常見的并發(fā)癥之一，表現(xiàn)為原本分離的臟器或臟器與腹壁之間出 現(xiàn)異常的纖維化粘連條帶，易導致炎癥、疼痛、腸梗阻甚至女性不孕等病癥。剖腹術后腹膜 粘連的發(fā)生率約68%~100%。粘連和瘢痕的效應細胞主要是成纖維細胞，該細胞增殖對粘 連組織的形成起了重要的作用。
[0003] 目前預防腹膜粘連的藥械包括不可吸收隔離物、可吸收隔離物、粘性溶液等，隔離 物能夠起到較好的防粘連作用，但使用不便，溶液使用方便，但是防粘連效果欠佳，不能完 全預防剖腹后腹膜粘連的發(fā)生。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術中存在的缺陷，提供一種能有效預防術后腸粘 連，且使用方便的膜液。
[0005] 為了達到上述目的，本發(fā)明提供了一種預防腸粘連膜液，該膜液包括溶液A和溶 液B ;溶液A為溶解有羧甲基殼聚糖和環(huán)孢素A的生理鹽水溶液；溶液A中羧甲基殼聚糖 的濃度為10_40mg/ml，環(huán)孢素A的濃度為1. 0-1. 8mg/ml ;溶液B為CaCl2的生理鹽水溶液， CaCl^濃度為2. 5mg/ml ;溶液A和溶液B的體積比為25:8-25:40。
[0006] 其中，溶液A中羧甲基殼聚糖的優(yōu)選濃度為20mg/ml，環(huán)孢素A的優(yōu)選濃度為 1.8mg/ml ;溶液A與溶液B的優(yōu)選體積比為25:10-25:25,最佳采用25:20。
[0007] 本發(fā)明還提供了上述預防腸粘連膜液的制備方法，包括以下步驟： (1) 溶液A制備：無菌條件下，取羧甲基殼聚糖溶于生理鹽水中，在攪拌條件下，逐漸加 入環(huán)孢素A，持續(xù)攪拌5-10min后，形成溶液A ; (2) 溶液B制備，取0&(：12溶于生理鹽水中，形成溶液B。
[0008] 本發(fā)明還提供了上述預防腸粘連膜液在預防剖腹后腹膜粘連方面的應用：在剖腹 術后，將溶液A和溶液B采用鈷60輻照消毒后混合搖勻，對創(chuàng)面進行沖洗。
[0009] 本發(fā)明相比現(xiàn)有技術具有以下優(yōu)點： 1、本發(fā)明膜液在使用前溶液A和溶液B均為液體，使用時溶液A和溶液B混合在體內 能夠形成薄膜，起到物理隔離的作用，即結合了溶液使用方便，又具有物理隔離的優(yōu)良防粘 連作用。
[0010] 2、本發(fā)明膜液具有防防粘連'二相性'，早期能夠對環(huán)孢素A緩釋，起到抑制成纖 維細胞的生長，防止粘連，后期羧甲基殼聚糖能夠促進上皮細胞的生長，促進愈合。
【附圖說明】
[0011] 圖1為成膜重量(干重）隨溶液B體積變化的趨勢圖； 圖2為溶液A與溶液B混合成膜的照片； 圖3為本發(fā)明膜液成膜后在不同pH緩沖溶液中的溶脹系數(shù)變化柱狀圖； 圖4為本發(fā)明膜液中環(huán)孢素A的緩釋圖； 圖5為本發(fā)明膜液的生物兼容性柱狀圖； 圖6為本發(fā)明膜液的凝血作用柱狀圖； 圖7為本發(fā)明膜液對創(chuàng)面沖洗后成膜效果圖； 圖8為本發(fā)明膜液的防粘連效果圖。
【具體實施方式】
[0012] 下面結合附圖對本發(fā)明進行詳細說明。
[0013] 實施例1 制備方法：無菌條件下，取2g羧甲基殼聚糖溶于100mL生理鹽水，于磁力攪拌器中，在 攪拌的條件下，逐漸加入180mg環(huán)孢素A，持續(xù)攪拌IOmin后，形成溶液A ; 取2. 5gCaCl2溶于100mL生理鹽水中，形成溶液B ; 成膜實驗：將溶液B逐漸加入溶液A中，隨著加入溶液B體積的增加，逐漸能夠形成 薄膜(溶液A與溶液B的體積比達到25:8時)，到厚度增加（溶液A與溶液B的體積比達到 25:10時，膜具有一定的厚度)，當溶液A與溶液B的體積比為25:20時，膜的重量不再增加 (如圖1所示)，所形成膜如圖2所示，此時溶液A和溶液B達到完成反應時，成膜的效果最 好，也不會造成浪費。
[0014] 平衡溶脹率實驗：取上述形成的膜，將其剪成2 cmX 2 cm大小，放入含有不同pH 值得緩沖溶液的燒杯中，置于恒溫振蕩儀中，于37 °C恒溫，每隔一定時間取出，用濾紙吸干 膜表面水分并記錄膜此時質量Ws。膜的溶脹率按下式進行計算：ESR= (Ws -Wt ) /Wt。
[0015] 如圖3所示為本發(fā)明膜液成膜后在不同pH的緩沖溶液中的溶脹系數(shù)變化柱狀圖。 腹腔手術后，創(chuàng)面的PH值會變?。?-6之間)，這時防粘連膜的平衡溶脹率較小，分解的速度 就較小，會長時間保持膜的狀態(tài)，起到物理隔絕的作用；當創(chuàng)面逐步愈合，創(chuàng)面的PH值逐步 恢復到正常7. 4,防粘連膜的平衡溶脹率加大，分解速度也加快，促進組織的吸收。在pH為 8.0以上時，膜已溶脹蓬松，易于分解。
[0016] 效果實施例1 溶液A和溶液B的制備方法同實施例1。
[0017] 本發(fā)明膜液的制備：取溶液A和溶液B以體積比25:20混合。
[0018] 環(huán)孢素A的體外釋放實驗： 取本發(fā)明膜液2ml，靜置形成膜后，將膜置于試管中，加入0.184mol /L KH2PO4緩沖鹽 溶液10 ml作為釋放介質，于37°C恒溫搖床上進行釋放實驗，轉速為100轉/min，依法操 作，在第0.2511、0511、111、211、411、811、1211、2411、4811、7211、9611取出試管（11 = 3)，高效液相色譜 測定其中的環(huán)孢素A。
[0019] 如圖4所示，環(huán)孢素A在最初的12h從羧甲基殼聚糖中釋放出來的速度較快，能夠 有效的抑制成纖維細胞的生長，防止粘連。到第2天，釋放的速度趨于平穩(wěn)，緩慢的從羧甲 基殼聚糖中釋放出來，能夠鞏固防粘連效果。
[0020] 效果實施例2 本發(fā)明膜液的制備同效果實施例1。
[0021] 細胞毒性實驗：采用MTT進行細胞毒性實驗。
[0022] 培養(yǎng)大鼠皮膚成纖維細胞（L929細胞)，種于96孔板中，培養(yǎng)24h，加入用DMEM培養(yǎng) 基（Hyclone (美國）)配制的本發(fā)明膜液成膜后的24h浸提液，繼續(xù)培養(yǎng)24h后，加入MTT進 行呈色，4h后吸去液體，加入二甲基亞砜（DMS0)，振蕩IOmin后，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm 處測定吸收值。
[0023] 如圖5所示，本發(fā)明膜液對L929細胞的相對增殖率在90%以上，說明該預防腸粘連 膜液對細胞無明顯毒性，能夠應用于防止腸粘連的研宄中。
[0024] 效果實施例3 本發(fā)明膜液和溶液A的制備同效果實施例1。
[0025] 凝血作用實驗： 手術后纖維蛋白原和血液會從傷口處滲出，纖維蛋白原轉變成不溶的纖維蛋白，合并 白細胞、紅細胞、血小板等形成凝血，最后進一步機化成永久性組織粘連。因此，材料的凝血 性是預防粘連形成的關鍵之一，凝血（或止血）速度越快，滲出液的流出越少，粘連生成量 越少，防粘連的效果就越好。
[0026] 方法：實驗分組為空白對照組、溶液A組，防粘連膜(溶液A+B)組。每組3支試管， 加入受試樣品水溶液ImU生理鹽水0. 5mL。由家兔頸動脈取新鮮血液，依次將兔血2mL加 入每支試管內，37°C水浴恒溫，計時。定時傾斜第一管，觀察到凝血發(fā)生后再同樣方法觀察 第二管，直至第三管凝血，記錄該時間為樣品的凝血時間。每樣重復測定3次，取均值，并與 不加樣品的空白組對照。
[0027] 如圖6所示，空白對照組的凝血時間為10±0. 5分鐘，溶液A的抗凝血時間為 8. 1±0. 2分鐘與對照組相比具有差異性（K0. 05)，而本發(fā)明膜液的凝血時間為5. 5±0. 6 分鐘，與對照組相比，具有顯著性差異（K0. 01)，除了羧甲基殼聚糖能夠激活凝血外，鈣離 子從防粘連液中釋放出來，對凝血起到了關鍵作用。
[0028] 效果實施例4 本發(fā)明膜液和溶液A的制備同效果實施例1。
[0029] 粘連效果實驗： 1、盲腸刮傷模型的建立： 正常SD大鼠由南通大學實驗動物中心提供，雌雄各半，體重約200±20g，禁食12h后腹 腔注射10%水合氯醛（0. 3ml~0. 4ml/100g)，全身麻醉后腹部剃毛，固定于手術臺，用75% 的酒精反復擦拭進行消毒。在下腹部中線位置縱向切開約4~5cm的切口，露出大鼠腹壁， 距離切口 1~I. 5cm處去除部分肌層，形成面積約I. 5cmX I. 5cm的方形缺損面，將盲腸從 腹內提出，用酒精擦拭后，用軟刷在正對缺損面的一側輕輕摩擦，直至盲腸表面出現(xiàn)淤血或 瘀斑，擦傷面積約為I. 5cmX I. 5cm。
[0030] 2、分組及給藥： 實驗分為對照組(生理鹽水處理組)、溶液A組，本發(fā)明膜液組，每組8只，雌雄各半。
[0031] 本發(fā)明膜液組在使用前10-30分鐘，將溶液B加到溶液A中，混勻即得到防粘連膜 液。各組均用2ml的藥液對腹壁缺口處與盲腸刮傷處沖洗。然后把盲腸刮傷面與腹壁缺損 面相對放置使其完全接觸，用手術線將腹部分兩層縫合。
[0032] 3、防粘連效果評分標準 按照表1中粘連的評分標準，總分最高為11分，總分最低為0分，總分越少表示粘連程 度越輕微，中位數(shù)越少>3分粘連比率越少也表示粘連越輕微。
[0033] 表1粘連的評分標準
【主權項】
1. 一種預防腸粘連膜液，其特征在于，所述預防腸粘連膜液包括溶液A和溶液B ;所述 溶液A為溶解有羧甲基殼聚糖和環(huán)孢素 A的生理鹽水溶液；所述溶液A中羧甲基殼聚糖的 濃度為10_40mg/ml，環(huán)孢素 A的濃度為1. 0-1. 8mg/ml ;所述溶液B為CaCl2的生理鹽水溶 液，CaClJ^濃度為2. 5mg/ml ;所述溶液A和溶液B的體積比為25:8-25:40。
2. 根據(jù)權利要求1所述的預防腸粘連膜液，其特征在于，所述溶液A中羧甲基殼 聚糖的濃度為20mg/ml，環(huán)孢素 A的濃度為I. 8mg/ml ;所述溶液A與溶液B的體積比為 25:10-25:25。
3. 根據(jù)權利要求2所述的預防腸粘連膜液，其特征在于，所述溶液A與溶液B的體積比 為 25:20。
4. 權利要求1至3任一所述預防腸粘連膜液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 溶液A制備：無菌條件下，取羧甲基殼聚糖溶于生理鹽水中，在攪拌條件下，逐漸加 入環(huán)孢素 A，持續(xù)攪拌5-10min后，形成溶液A ; (2) 溶液B制備，取0&(：12溶于生理鹽水中，形成溶液B。
5. 權利要求1至3任一所述預防腸粘連膜液在預防剖腹后腹膜粘連方面的應用。
6. 根據(jù)權利要求5所述的應用，其特征在于，在剖腹術后，將溶液A和溶液B采用鈷60 輻照消毒后混合搖勻，對創(chuàng)面進行沖洗。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種預防腸粘連膜液及其制備方法與應用。本發(fā)明膜液包括溶液A和溶液B；溶液A為溶解有羧甲基殼聚糖和環(huán)孢素A的生理鹽水溶液；溶液A中羧甲基殼聚糖的濃度為10-40mg/ml，環(huán)孢素A的濃度為1.0-1.8mg/ml；溶液B為CaCl2生理鹽水溶液，CaCl2的濃度為2.5mg/ml；溶液A和溶液B的體積比為25:8-25:40。本發(fā)明膜液能有效預防術后腸粘連，且使用方便。
【IPC分類】A61K9-70, A61K33-14, A61P41-00, A61K31-722, A61K38-13
【公開號】CN104826092
【申請?zhí)枴緾N201510269243
【發(fā)明人】何紅, 李曉東, 夏棟林, 陳超, 王雨飛, 陳燕培, 沈鈴玲, 顧海鷹
【申請人】南通大學, 南通大學附屬醫(yī)院, 南通通大化學物安全性評價中心有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年5月25日