一種兩性霉素b納米復(fù)合物及其制備方法【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明涉及一種兩性霉素B納米復(fù)合物及其制備方法，屬于藥物制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]兩性霉素B(AmphotericinB，AMB)是從鏈霉菌的培養(yǎng)液中分離而得的多烯類抗真菌藥。它的抗真菌機(jī)制是與真菌細(xì)胞膜上的固醇(主要為麥角固醇)結(jié)合，改變膜通透性，細(xì)胞內(nèi)容物流出，從而引起真菌細(xì)胞死亡。臨床上用于治療嚴(yán)重的深部真菌引起的內(nèi)臟或全身感染。[0003]兩性霉素B水中不溶，為改善其溶解性，最先采用脫氧膽酸鈉增溶，上市產(chǎn)品的商品名為Fungizone?。但Fungizone?有較強(qiáng)的腎毒性，幾乎所有患者均可出現(xiàn)不同程度的腎功能損害，可出現(xiàn)蛋白尿、管型尿，血尿素氮及肌酐升高，肌酐清除率降低，也可引起腎小管性酸中毒，不良反應(yīng)多，如靜滴過程中或靜滴后數(shù)小時(shí)發(fā)生寒戰(zhàn)、高熱、嚴(yán)重頭痛、惡心和嘔吐，有時(shí)并可出現(xiàn)血壓下降、眩暈等。對(duì)血液系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等都有毒性。[0004]為改善不良反應(yīng)，相繼有兩性霉素B脂質(zhì)體Ambisome?、Amphotec?、Amphocil?、Abelcet?、Fungisome?產(chǎn)品上市。后繼上市的制劑均可以明顯改善兩性霉素B與正常細(xì)胞的結(jié)合率，提高了藥物的穩(wěn)定性與抗真菌能力，降低了毒性，減少兩性霉素B所產(chǎn)生的副作用，但采用的關(guān)鍵輔料比較昂貴，制備工藝復(fù)雜，制備成本高。[0005]ThreeRiversPharmaceuticals公司將兩性霉素B開發(fā)成Amphotec?,雖然稱為"脂質(zhì)體"，但其結(jié)構(gòu)與一般的膠束或脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)不同（ComplexesofamphotericinBandcholesterylsulfate[J]·JournalofLiposomeResearch，1993:3(3):473_490)，其實(shí)際結(jié)構(gòu)為兩性霉素B與膽固醇硫酸鈉（CS)組成的不含有內(nèi)水相的盤狀納米復(fù)合物（Novelantifungaldrugdelivery:stableamphotericinB-cholesterylsulfatediscs[J].InternationalJournalofPharmaceutics,1991:75:45-54)。[0006]上述的Amphotec?等"脂質(zhì)體"，本發(fā)明中稱其為納米復(fù)合物。靜脈注射兩性霉素B納米復(fù)合物后半衰期較短，血藥濃度降低很快，在一定程度上減弱了療效。其原因是兩性霉素B納米復(fù)合物入血后快速被單核吞噬系統(tǒng)的庫弗細(xì)胞(主要在肝臟部位）攝取，攝取的復(fù)合物在吞噬體內(nèi)逐漸解離，游離的兩性霉素B以較低的濃度再重新釋放進(jìn)入血液，因此給藥后血漿中兩性霉素B的濃度相對(duì)較低。納米粒子在體內(nèi)很容易被免疫識(shí)別系統(tǒng)識(shí)別和吞噬，為解決這一問題，通常加入甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酸磷脂酰乙醇胺(mPEG2000-DSPE)以制成長(zhǎng)循環(huán)納米制劑。然而本發(fā)明的發(fā)明人在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，由于兩性霉素B納米復(fù)合物的特殊結(jié)構(gòu)，用mPEG2000-DSPE進(jìn)行修飾后無長(zhǎng)循環(huán)特性。[0007]由于有較多的方法可能應(yīng)用于制備兩性霉素B納米復(fù)合物，為了方便實(shí)驗(yàn)室樣品制備和更容易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，我們選擇了經(jīng)過改良的有機(jī)溶劑注入法進(jìn)行樣品制備。[0008]發(fā)明人對(duì)有機(jī)溶劑注入法制備兩性霉素B納米復(fù)合物的影響因素進(jìn)行了試驗(yàn)，進(jìn)行了有機(jī)溶劑選擇，對(duì)注入溫度、攪拌速度、油水相比例進(jìn)行了優(yōu)化，同時(shí)增加了微射流整粒工藝步驟。有機(jī)溶劑優(yōu)選二甲基亞砜，注入溫度為35°C-45°C，油水相比例為1:15-20。按照優(yōu)化的工藝參數(shù)能夠制備出粒徑均勻、包封率高、質(zhì)量穩(wěn)定的兩性霉素B納米復(fù)合物?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0009]納米粒子在體內(nèi)很容易被免疫識(shí)別系統(tǒng)識(shí)別和吞噬，為解決這一問題，通常加入甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酸磷脂酰乙醇胺（mPEG2000-DSPE)以制成長(zhǎng)循環(huán)納米制劑。然而本發(fā)明的發(fā)明人在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，由于兩性霉素B納米復(fù)合物的特殊結(jié)構(gòu)，用mPEG2000-DSPE進(jìn)行修飾后無長(zhǎng)循環(huán)特性。當(dāng)采用含有兩性霉素B、膽固醇硫酸鈉和mPEG2000-DSPE的處方時(shí)，嘗試在很大范圍內(nèi)調(diào)整mPEG2000-DSPE的使用量(mPEG2000-DSPE的摩爾數(shù)在膽固醇硫酸鈉和mPEG2000-DSPE總摩爾數(shù)中所占比例小于等于40%，大于0。制備方法詳見實(shí)施例3,雖然在粒徑和包封率等方面可以滿足要求，但其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)表明該處方的納米復(fù)合物消除快，AUC小?？梢姡琺PEG2000-DSPE并不能使任意一種藥物在制成納米制劑后具有令人滿意的長(zhǎng)循環(huán)性質(zhì)。藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果詳見本發(fā)明的實(shí)施例6。[0010]本發(fā)明的發(fā)明人在實(shí)踐中出乎意料地發(fā)現(xiàn)，采用膽固醇-PEG(CH-PEG)對(duì)含有兩性霉素B和膽固醇硫酸鈉的納米復(fù)合物進(jìn)行修飾，不僅獲得了令人滿意的粒徑、包封率等結(jié)果，更顯示了良好的長(zhǎng)循環(huán)性質(zhì)。[0011]【
背景技術(shù)：
】中所述的注射用兩性霉素B脂質(zhì)體Amphotec?,處方中含有兩性霉素B和膽固醇硫酸鈉，雖然膽固醇硫酸鈉的硫酸鈉部分也具有一定的親水性，但是當(dāng)使用膽固醇硫酸鈉制備納米復(fù)合物時(shí)，該納米復(fù)合物并不具有理想的延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)的性質(zhì)，僅僅是可以增大兩性霉素B的溶解性。由本發(fā)明實(shí)施例6可以看到，雖然AMB:CS:CH-PEG=IO:10:0的處方所獲得的體內(nèi)半衰期與含有CH-PEG的處方相比沒有明顯差異，但其藥時(shí)曲線下面積（AUCchJPAUCchoo)比后者小得多，并且其血漿清除率Cl比后者大幾十倍，因此含有CH-PEG的處方在體內(nèi)可以更好地發(fā)揮藥效。[0012]本發(fā)明提供了一種兩性霉素B納米復(fù)合物，含有兩性霉素B、膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG。[0013]進(jìn)一步地，兩性霉素B的摩爾數(shù)與膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG總摩爾數(shù)的比為1:1。[0014]進(jìn)一步地，膽固醇-PEG的摩爾數(shù)在膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG總摩爾數(shù)中所占比例為a，其中0<a彡20%。[0015]進(jìn)一步地，兩性霉素B、膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG的摩爾比為10:9:1或10:8:2。[0016]本發(fā)明還提供了另一種制備所述兩性霉素B納米復(fù)合物的方法，含有以下步驟：兩性霉素B、膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG溶解于有機(jī)溶劑中作為油相，配制水相，將水相置于容器中，攪拌，將油相注入水相中，繼續(xù)攪拌，去除有機(jī)溶劑，整粒。[0017]本發(fā)明提供一種藥物組合物，含有上述兩性霉素B納米復(fù)合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。其中所述藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體選自凍干保護(hù)劑。其中所述凍干保護(hù)劑選自蔗糖、乳糖、海藻糖或甘露醇。[0018]本發(fā)明還提供了所述兩性霉素B納米復(fù)合物在制備治療抗真菌藥物中的用途【具體實(shí)施方式】通過以下的具體例子，可以更加具體的說明本發(fā)明，但本發(fā)明不局限于以下例子。[0019]其中含量（％)是指重量百分比。AMB為兩性霉素B，CS為膽固醇硫酸鈉，CH-PEG為膽固醇-PEG，AMB-C為兩性霉素B納米復(fù)合物，CH-PEG-AMB-C為膽固醇-PEG修飾的兩性霉素B納米復(fù)合物。mPEG-DSPE-AMB-C為mPEG-DSPE修飾的兩性霉素B納米復(fù)合物。[0020]實(shí)施例1兩性霉素B納米復(fù)合物的制備(有機(jī)溶劑注入法)。[0021]精密稱取摩爾比為10:10:0或10:9:1的兩性霉素B、膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG溶解于適量的二甲基亞砜中，作為油相。配制95g/L的乳糖、0.564g/L的氨丁三醇、37.2mg/L的依地酸二鈉水溶液，作為水相。將水相（25°C)置于合適容器中，用混合乳化機(jī)進(jìn)行攪拌(1200rpm/min)，將油相緩慢注入水相中，控制油水相比為1:17.5,繼續(xù)攪拌2-3min;將得到的初乳用超濾的方法去除二甲基亞砜；用微射流進(jìn)行整粒，得到粒度均一的納米復(fù)合物；然后分裝于西林瓶中進(jìn)行冷凍干燥。[0022]實(shí)施例2膽固醇-PEG加入量范圍篩選。[0023]采用實(shí)施例1的方法制備兩性霉素B、膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG摩爾比為10:10:0、10:9:1、10:8:2、10:7:3、10:6:4的兩性霉素B納米復(fù)合物，相同整粒條件下用微射流進(jìn)行整粒后檢測(cè)粒徑，結(jié)果顯示10:7:3、10:6:4的兩性霉素B納米復(fù)合物PDI較大，說明粒徑不均勻，納米制劑粒徑會(huì)影響其安全性及有效性，所以處方中膽固醇-PEG加入量限制為小于等于20%(即膽固醇-PEG在膽固醇-PEG與膽固醇硫酸鈉總摩爾數(shù)中所占比例小于等于20%)。[0024]【主權(quán)項(xiàng)】1.一種兩性霉素B納米復(fù)合物，含有兩性霉素B、膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG。2.如權(quán)利要求1所述的兩性霉素B納米復(fù)合物，其特征在于兩性霉素B的摩爾數(shù)與膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG總摩爾數(shù)的比為1:1。3.如權(quán)利要求1所述的兩性霉素B納米復(fù)合物，其特征在于膽固醇-PEG的摩爾數(shù)在膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG總摩爾數(shù)中所占比例為a，其中O<a彡20%。4.如權(quán)利要求1所述的兩性霉素B納米復(fù)合物，其特征在于兩性霉素B、膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG的摩爾比為10:9:1或10:8:2。5.-種制備如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的兩性霉素B納米復(fù)合物的方法，含有以下步驟：兩性霉素B、膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG溶解于有機(jī)溶劑中作為油相，配制水相，將油相注入水相中，去除有機(jī)溶劑，整粒，即得所述的兩性霉素B納米復(fù)合物。6.-種藥物組合物，含有如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述兩性霉素B納米復(fù)合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體選自凍干保護(hù)劑。8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于所述凍干保護(hù)劑選自蔗糖、乳糖、海藻糖或甘露醇。9.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述兩性霉素B納米復(fù)合物在制備治療抗真菌藥物中的用途?！緦＠勘景l(fā)明涉及一種兩性霉素B納米復(fù)合物，含有兩性霉素B、膽固醇硫酸鈉和膽固醇-PEG。本發(fā)明的兩性霉素B納米復(fù)合物，采用膽固醇-PEG對(duì)含有兩性霉素B和膽固醇硫酸鈉的納米復(fù)合物進(jìn)行修飾，不僅獲得了令人滿意的粒徑、包封率等結(jié)果，更顯示了良好的長(zhǎng)循環(huán)性質(zhì)?！綢PC分類】A61K47-34,A61P31-10,A61K47-28,A61K9-00,A61K31-7048,A61K9-19【公開號(hào)】CN104856931【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410061519【發(fā)明人】李春雷,修憲,李永豐,王紅葉,陳東健,趙曦,王彩霞,杜艷玲,梁敏【申請(qǐng)人】石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)（石家莊）有限公司【公開日】2015年8月26日【申請(qǐng)日】2014年2月24日