3-(3-(苯并呋喃-2-羰基)硫脲基)-4-甲氧基苯甲酸的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種小分子化合物的醫(yī)藥應(yīng)用，具體涉及 3- (3-(苯并呋喃-2-羰基）硫脲基）-4-甲氧基苯甲酸或其可藥用鹽在制備用于治療與MIF 相關(guān)的炎癥性疾病的藥物，特別是MIF抑制劑中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 巨細胞移動抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor，MIF)是一 種集細胞因子、酶活性、神經(jīng)內(nèi)分泌激素于一身的多功能蛋白質(zhì)。作為一種細胞因子，MIF 幾乎參與所有炎癥性疾病過程，它通過活化巨噬細胞和T細胞來促進先天性和獲得性免疫 響應(yīng)，是先天性免疫系統(tǒng)的重要調(diào)節(jié)因子，被認為是連接內(nèi)分泌系統(tǒng)和免疫體系的介導(dǎo)劑。 MIF與多種免疫性和炎癥性疾病的發(fā)病機制密切相關(guān)，如MIF在單核/巨噬細胞的血管壁粘 附、跨膜移動、內(nèi)皮下聚集、泡沫細胞形成及斑塊穩(wěn)定中的作用，涉及到類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動 脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的多個方面。MIF還直接影響正常細胞的分裂和瘤基因誘導(dǎo)的惡性 轉(zhuǎn)化，或間接通過調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)，促進細胞增殖、迀移以及血管增生等。
[0003] 由于具有廣泛的生物活性，MIF與多種免疫、炎癥以及腫瘤等疾病密切相關(guān)，已經(jīng) 成為治療這些疾病的一個重要靶點。在與MIF相關(guān)的抗炎藥物研宄方面，國外許多醫(yī)藥公 司和科研機構(gòu)正在開發(fā)新的具有抗炎效果的MIF抑制劑，但目前還沒有成功上市的MIF抑 制劑。因此，積極尋找和設(shè)計新的MIF抑制劑，并探索其抗炎效果，具有重要的臨床意義和 廣闊的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對上述情況，本發(fā)明提供了一種小分子化合物一一3-(3-(苯并呋喃-2-羰基） 硫脲基）_4_甲氧基苯甲酸或其可藥用鹽在制備用于治療與MIF相關(guān)的炎癥性疾病的藥物 中的用途，其中所述3-(3-(苯并呋喃-2-羰基）硫脲基）-4-甲氧基苯甲酸的結(jié)構(gòu)式如下：
[0UU5J 1兀選的，仕上還忟不力菜干，所還n」約用鹽包括（但不限于）3-(3-(苯并呋 喃-2-羰基）硫脲基）_4_甲氧基苯甲酸與鹽酸、磷酸、硫酸等無機酸形成的酸加成鹽以及 與醋酸、馬來酸、枸櫞酸、苯磺酸、甲基苯磺酸、富馬酸、酒石酸等有機酸形成的酸加成鹽。
[0006] 優(yōu)選的，在上述技術(shù)方案中，所述與MIF相關(guān)的炎癥性疾病包括(但不限于)類風(fēng)濕 性關(guān)節(jié)炎、動脈粥樣硬化和敗血癥。
[0007] 優(yōu)選的，在上述技術(shù)方案中，所述用于治療與MIF相關(guān)的炎癥性疾病的藥物為MIF 抑制劑。
[0008] 本發(fā)明對上述小分子化合物進行了生物學(xué)活性測定，發(fā)現(xiàn)其對MIF具有明顯的酶 抑制活性，對小鼠腹腔巨噬細胞RAW264. 7中的糖皮質(zhì)激素具有負向調(diào)節(jié)效果，可以顯著抑 制脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的炎性因子（TNF-a和NO)的釋放，該化合物 還可以抑制MIF引起的巨噬細胞的趨化迀移。此外，MTT法檢測證實該化合物在10、20和 40 y M三個濃度下對小膠質(zhì)細胞BV-2和巨噬細胞RAW264. 7的活力均沒有顯著影響。在此 基礎(chǔ)上，進一步研宄化合物抗炎作用是否與抑制MIF對ERK1/2的活化有關(guān)，發(fā)現(xiàn)這個化合 物可以抑制ERK1/2的磷酸化。
[0009] 本發(fā)明中的小分子化合物3-(3-(苯并呋喃-2-羰基）硫脲基）-4_甲氧基苯甲酸 具備MIF抑制劑的功能，對與MIF相關(guān)的炎癥性疾病具有明顯的抑制作用，可以用于制備與 MIF相關(guān)的抗炎藥物。
【附圖說明】
[0010] 圖1為實施例1中化合物對MIF的酶抑制活性曲線。
[0011] 圖2為實施例2中化合物對MIF引起的巨噬細胞趨化迀移的影響效果圖。
[0012] 圖3為實施例3中化合物對培養(yǎng)細胞的敏感性效果圖。
[0013] 圖4為實施例4中化合物對小膠質(zhì)細胞中LPS誘導(dǎo)炎性因子的影響效果圖。
[0014] 圖5為實施例5中化合物對MIF刺激的RAW264. 7巨噬細胞中ERK活化的影響效 果圖。
【具體實施方式】
[0015] 下面將結(jié)合附圖及具體實施例對本發(fā)明做出進一步的描述。
[0016] 實施例1 :化合物對MIF的酶抑制活性實驗。
[0017] 實驗原理：MIF具有多巴色素互變異構(gòu)酶活性，可以將橙色的D、L型多巴色素甲 醋轉(zhuǎn)化為無色的 11引噪衍生物，吸光度采用Tecan Infinite M1000酶標儀在475nm波長下進 行3分鐘吸光度測試。
[0018] 實驗試劑的準備：脂多糖(大腸桿菌血清型055:B5)、（L)-3, 4-二羥基苯丙酮酸甲 酯和高碘酸鈉購買自西格瑪奧德里奇(美國密蘇里州東部城市圣路易斯）；（S，R) -3- (4-羥 苯基）-4, 5-二氫-5-異惡唑乙酸甲酯（IS0-1)為MIF的典型抑制劑，購買自德國Merck公 司旗下的生化試劑品牌Calbiochem公司，在這里作為陽性對照；將化合物溶解在10mM的 DMS0儲備溶液中，最后在緩沖液中DMS0的濃度低于0. 25%情況下，將RAW264. 7巨噬細胞 在37°C條件下添加5%熱滅活胎牛血清（Fetal bovine serum，F(xiàn)BS)，慶大霉素（50g/ml)和 5%(1)2的達爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基（Dulbecco' s modified Eagle's medium，DMEM)中生 長和維持，重組人類MIF在大腸桿菌中表達，并且進行純化。
[0019] 實驗步驟：為了制備（L)-多巴色素甲酯，將等體積（L)-3, 4-二羥基苯甲基丙氨酸 甲酯（4mM)和高碘酸鈉（10mM)混合，并且在室溫下培養(yǎng)3~5分鐘，然后將（L)-多巴色素甲 酯（30yL)添加到包含重組人類MIF (120nM)和10mM磷酸鉀緩沖液的96孔板中，另外添加 0. 5mM EDTA并保持pH=6. 2。為了測試化合物對MIF互變異構(gòu)酶活性的抑制效應(yīng)，將濃度為 1、5、10、25、50和100 y M的化合物分別添加到包含重組人類MIF( 120nM)的96孔板中，在添 加（L)-多巴色素甲酯之前培養(yǎng)30分鐘，將孔板中的氣泡去掉，采用Tecan InfiniteMlOOO 酶標儀在475nm波長下進行3分鐘吸光度測試。
[0020] 實驗結(jié)果：將濃度為1、5、10、25、50和1001^的3-(3-(苯并呋喃-2-羰基）硫脲 基）-4-甲氧基苯甲酸進行MIF的酶抑制活性實驗，發(fā)現(xiàn)該化合物有很好的抑制活性，其半 抑制濃度IC 5Q為7. 47 yM/L (如圖1所示)。
[0021] 實施例2:化合物對MIF引起的巨噬細胞趨化迀移的影響實驗。
[0022] 實驗原理：MIF對巨噬細胞有趨化迀移作用，抑制劑作用于MIF，可以在一定程度 上抑制MIF引起的巨噬細胞的趨化迀移。
[0023] 實驗步驟：將重組人類MIF在添加或者缺失MIF互變異構(gòu)酶抑制劑的情況下，分別 置于CM-16板的下室，然后在上室將RAW264. 7巨噬細胞接種于包含20000個細胞的無血 清培養(yǎng)基中。然后將CIM-16孔板轉(zhuǎn)移到xCELLigence RTCA-DP中(德國曼海姆羅氏診斷公 司），在4小時的檢測周期內(nèi)每隔15分鐘采集一次數(shù)據(jù)，最后通過RTCA 1. 2軟件進行數(shù)據(jù) 分析。
[0024] 實驗結(jié)果：Hit MIF表示熱滅活的（Heat-inacti