退行性關(guān)節(jié)病的治療的制作方法
【專利說明】
[0001] 本申請是中國發(fā)明專利申請（申請日：2012年10月10日；【申請?zhí)枴?201280047779. 1(國際【申請?zhí)枴縋CT/US2012/059455);發(fā)明名稱：退行性關(guān)節(jié)病的治療）的 分案申請。
[0002] 相關(guān)申請的交叉參考
[0003] 根據(jù)美國35U.S.C. § 119(e)，本申請要求于2011年10月10日提交的美國專利臨 時申請No. 61/545, 474和于2011年11月17日提交的美國臨時專利申請No. 61/561,221 的優(yōu)先權(quán)。美國臨時專利申請No. 61/545, 474和No. 61/561，221的全文內(nèi)容在此引入作為 參考。
技術(shù)領(lǐng)域
[0004] 本發(fā)明涉及一種治療退行性關(guān)節(jié)病的方法。所述方法包括給藥有效量的藥物組合 物，該藥物組合物包含具有天冬氨酸和丙氨酸氨基酸側(cè)鏈的二酮哌嗪（DA-DKP)。本發(fā)明還 提供包含DA-DKP的藥物產(chǎn)品。
【背景技術(shù)】
[0005] 骨關(guān)節(jié)炎是關(guān)節(jié)炎最常見的形式，其在美國影響25-35萬人。骨關(guān)節(jié)炎的慢性疼 痛和殘疾最初是由隨時間推移逐漸惡化的關(guān)節(jié)軟骨和骨的炎癥反應(yīng)引起的。膝的癥狀性骨 關(guān)節(jié)炎發(fā)病于10-13%的60歲及以上的老年人。僅膝骨關(guān)節(jié)炎就增加了喪失活動能力的風(fēng) 險，如走路或爬樓梯需要協(xié)助，該風(fēng)險高于在65歲及以上老年人中的任何其他醫(yī)學(xué)癥狀。
[0006] 目前治療膝骨關(guān)節(jié)炎的藥物僅限于鎮(zhèn)痛藥、非留體類抗炎藥（NSAIDs)和關(guān)節(jié)內(nèi) 類固醇注射，以上這些均由于不良反應(yīng)受到顯著限制。盡管有這些藥物治療，慢性膝骨關(guān)節(jié) 炎通常會引起需要全關(guān)節(jié)置換的進(jìn)行性殘疾。老齡和肥胖人口的膝骨關(guān)節(jié)炎增加的患病率 表明了對安全且有效的局部膝部治療的越來越多的臨床需要，該治療將延緩并潛在地消除 進(jìn)行更廣泛的手術(shù)治療的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的一個實(shí)施方案涉及一種通過向有需要的動物給藥有效量的包含DA-DKP 的藥物組合物以治療退行性關(guān)節(jié)病的方法。在一個方面，所述退行性關(guān)節(jié)病是骨關(guān)節(jié)炎。
[0008] 在另一方面，給藥所述組合物的頻率不超過每6個月一次、每5個月一次、每4個 月一次、每3個月一次或每2個月一次。
[0009] 在另一方面，可以通過各種給藥途徑給藥所述組合物。例如，給藥途徑可以是局部 給藥（localadministration)、表面給藥（topicaladministration)或注射給藥。在一個 方面，注射給藥是關(guān)節(jié)內(nèi)注射。還在另一個方面，關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥的組合物是具有約50yM 至約350yMDA-DKP濃度的組合物。
[0010] 在另一方面，所述組合物還包含N-乙酰基色氨酸（NAT)、辛酸、辛酸鹽或其組合。 在另一方面，該組合物中NAT、辛酸、辛酸鹽及其組合的濃度可以是約4mM至約20mM。
[0011] 在所述方法的其它方面，DA-DKP在通過從人血清白蛋白組合物溶液去除白蛋 白制備的組合物中。例如，去除的步驟可以是通過分離的方法處理人血清白蛋白組合 物。該分離方法可以包括超濾（ultrafiltration)、鹿糖梯度離心（sucrosegradient centrifugation)、色譜、鹽析和超聲處理。此外，去除的步驟可以是將人血清白蛋白組合物 通過具有保留所述白蛋白的分子量截留的超濾膜，并且得到的濾液包含DA-DKP。在一個方 面，所述超濾膜具有小于50kDa的分子量截留。在另一方面，該超濾膜具有小于40kDa、小于 30kDa、小于20kDa、小于10kDa、小于5kDa或小于3kDa的分子量截留。在另一方面，所述組 合物還包含NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合。在另一方面，所述組合物中NAT、辛酸、辛酸鹽及其 組合的濃度可以是約4mM至約20mM。
[0012] 在另一方面，本發(fā)明的方法可進(jìn)一步包括給藥第二藥物。例如，所述第二藥物可以 是止痛劑、抗炎藥或其組合。
[0013] 本發(fā)明的另一個實(shí)施方案是一種配制用于注射給藥的包含含DA-DKP的組合物的 藥物產(chǎn)品。在一個方面，所述產(chǎn)品被配制用于關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥。在另一方面，所述DA-DKP 是通過從人血清白蛋白組合物溶液去除白蛋白制備的。在一個方面，去除白蛋白的步驟可 以是通過分離的方法處理人血清白蛋白組合物。例如，所述分離的方法可以是超濾、蔗糖梯 度離心、色譜、鹽析或超聲處理。此外，去除的步驟可以是將人血清白蛋白組合物通過具有 保留所述白蛋白的分子量截留的超濾膜，并且得到的濾液包含DA-DKP。在一個方面，所述超 濾膜具有小于50kDa的分子量截留。在另一方面，所述超濾膜具有小于40kDa、小于30kDa、 小于20kDa、小于10kDa、小于5kDa或小于3kDa的分子量截留。
[0014] 在另一方面，關(guān)節(jié)內(nèi)注射給藥的藥物產(chǎn)品的DA-DKP是具有約50 yM至約350 yM DA-DKP濃度的組合物。
[0015] 在另一方面，所述產(chǎn)品包含所述DA-DKP組合物，其進(jìn)一步包含NAT、辛酸、辛酸鹽 或其組合。在另一方面，該產(chǎn)品中NAT、辛酸、辛酸鹽或其組合的濃度可以是約4mM至約 20mM〇
[0016] 在另一方面，所述藥物產(chǎn)品還包含藥學(xué)上可接受的載體。
[0017] 本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及一種試劑盒，其包含藥物產(chǎn)品。在一個方面，所述產(chǎn)品 包含配制用于注射給藥的含有DA-DKP的組合物。在另一方面，該試劑盒中的DA-DKP是通 過從人血清白蛋白組合物溶液中去除白蛋白制備的。
【附圖說明】
[0018] 圖1顯示了在一個膝蓋以單次10ml注射Ampion?(〈5000MW級分）聯(lián)合類固醇（倍 他米松（betamethasone))/利多卡因（lidocaine)混懸液或注射生理鹽水安慰劑聯(lián)合類固 醇（倍他米松）/利多卡因混懸液治療的受試者的疼痛數(shù)字評價量表（NRS)中的平均變化。 得分在第1天給藥6小時后、第2天給藥24小時后和第4天給藥72小時后完成。
[0019] 圖2顯示了如圖1中所描述的疼痛NRS的平均變化并包括重復(fù)測量方差分析 (AN0VA)〇
[0020] 圖3A顯示了圖1中所描述的治療第24小時在WOMAC(WesternOntarioMcMaster University骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)3. 1)疼痛子分?jǐn)?shù)中的絕對差。
[0021] 圖3B顯示了圖1中所描述的治療第72小時在W0MAC疼痛子分?jǐn)?shù)中的絕對差。
[0022] 圖4A顯示了圖1中所描述的治療第24小時在WOMAC僵硬子分?jǐn)?shù)中的絕對差。
[0023] 圖4B顯示了圖1中所描述的治療第72小時在W0MAC僵硬子分?jǐn)?shù)中的絕對差。
[0024] 圖5A顯示了圖1中所描述的治療第24小時在W0MAC功能子分?jǐn)?shù)中的絕對差。
[0025] 圖5B顯示了圖1中所描述的治療第72小時在W0MAC功能子分?jǐn)?shù)中的絕對差。
[0026] 圖6顯示了一種潛在的類固醇時間進(jìn)程。
[0027] 圖7顯示了隨訪圖1中所描述治療的所有受試者自基線的平均變化。（"LS"表示 最小二乘法）
[0028] 發(fā)明詳述
[0029] 本發(fā)明提供了一種治療退行性關(guān)節(jié)病的方法。所述治療包括向有需要的個體給藥 有效量的包含天冬氨酰基-丙氨?；哙海―A-DKP)的藥物組合物。
[0030] DA-DKP具有多種抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，其包括在轉(zhuǎn)錄水平對多種促炎性細(xì)胞因 子、趨化因子和信號分子的抑制，對T細(xì)胞和單核細(xì)胞迀移和粘附的抑制，在G-偶聯(lián)蛋白受 體水平的活性，對肌動蛋白依賴的細(xì)胞骨架事件的活性，血管通透性的降低，對血小板活化 因子引起的炎癥的抑制。如下面更詳細(xì)的描述，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與使用類固醇相比，DA-DKP對退 行性關(guān)節(jié)病的影響意外地會持久并且在一些研宄中發(fā)現(xiàn)會隨時間而增加。
[0031] 本發(fā)明還提供包含DA-DKP組合物的藥物產(chǎn)品。該產(chǎn)品的DA-DKP可以通過從人血 清白蛋白溶液去除白蛋白而制備。
[0032] 本發(fā)明還提供了包含配制用于注射給藥的DA-DKP組合物的試劑盒。
[0033] 退行性關(guān)節(jié)病是覆蓋關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)軟骨的逐漸退化。退行性關(guān)節(jié)?。ü顷P(guān)節(jié)炎）是 負(fù)重關(guān)節(jié)非感染性的進(jìn)行性疾病。正常的關(guān)節(jié)軟骨是光滑、白色和半透明的。它是由包埋 在海綿樣基質(zhì)中的軟骨細(xì)胞（軟骨細(xì)胞（chondrocytes))組成，該海綿樣基質(zhì)是由膠原、蛋 白多糖和水構(gòu)成。早期原發(fā)性關(guān)節(jié)炎中，軟骨在表面軟化和粗糙的局部區(qū)域變成黃色和不 透明。由于退化的進(jìn)展，軟區(qū)變得破裂和磨損，暴露出軟骨下的骨。然后該骨開始重塑且密 度增加而任何剩余的軟骨開始磨損。最終，在關(guān)節(jié)的邊緣形成由軟骨所覆蓋的骨贅（新骨 刺）。由于機(jī)械磨損增加，所述軟骨需要修復(fù)。軟骨細(xì)胞不能產(chǎn)生足夠的海綿樣基質(zhì)，因此 受損的軟骨不能自我修復(fù)。所述軟骨沒有血液供應(yīng)以提高愈合。多數(shù)退行性關(guān)節(jié)病是關(guān)節(jié) 內(nèi)機(jī)械不穩(wěn)定性或衰老變化的結(jié)果。這包括老年退行性關(guān)節(jié)炎，并且在較年輕的個體中，可 以是例如損傷、淤傷、異常關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)（即髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良）、或者由前十字韌帶斷裂、髕骨異 位或剝脫性骨軟骨炎所致的機(jī)械磨損所引起的。退行性關(guān)節(jié)病可發(fā)生在身體的任何關(guān)節(jié)， 包括但不限于，膝、髖、肩、手和脊柱。
[0034] 退行性關(guān)節(jié)病的常規(guī)藥物治療包括對乙酰氨基酚、非留體抗炎藥（NSAIDS)、麻醉 劑和皮質(zhì)類固醇。
[0035]本文中使用的"治療"是指減少（全部或部分）疾病的癥狀、持續(xù)時間或嚴(yán)重程度。
[0036] 將本發(fā)明包含DA-DKP的藥物組合物給藥至有治療需要的動物。優(yōu)選地，所述動物 是哺乳動物，例如兔、山羊、狗、貓、馬或人。有效劑量可以根據(jù)醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)領(lǐng)域公知的疾病 或病癥的嚴(yán)重程度、給藥途徑、治療的持續(xù)時間、給藥至動物的任何其他藥物的鑒別、動物 的年齡、大小和物種、以及類似的因素而變化。
[0037]因為本發(fā)明的治療對退行性關(guān)節(jié)病的癥狀提供持久的效果，本發(fā)明的一個方面是 可將包含DA-DKP的組合物以比常規(guī)治療預(yù)期的更長的時間間隔給藥至動物。例如，給藥本 組合物的頻率可以不超過每6個月一次、每5個月一次、每4個月一次、每3個月一次、每2 個月一次、給月一次、每4周一次、每3周一次、每2周一次或每周一次。
[0038] 本發(fā)明包含DA-DKP的組合物可通過任何合適的給藥途徑給藥至進(jìn)行治療的動物 患者，所述給藥途徑包括局部、胃腸外（例如，注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射、靜脈內(nèi)、脊柱內(nèi)、腹膜內(nèi)、 皮下或肌內(nèi)）、經(jīng)皮和表皮給藥。優(yōu)選的給藥途徑是關(guān)節(jié)內(nèi)注射。
[0039] 本發(fā)明的組合物可以是具有約10yM、約20yM、約30yM、約40yM、約50yM、約 60yM、約 70yM、約 80yM、約 90yM、約 100yM、約 110yM、約 120yM、約 130yM、約 140yM、 約 150yM、約 160yM、約 170yM、約 180yM、約 190yM、約 200yM、約 210yM、約 220yM、 約 230yM、約 240yM、約 240、約 250yM、約 260yM、約 270yM、約 280yM、約 290yM、約 300yM、約 310yM、約 320yM、約 330yM、約 340yM、約 350yM、約 360yM、約 370yM、約 380yM、約390yM或約400yM的下端點(diǎn)的DA-DKP濃度范圍的藥物溶液。本發(fā)明的組合物 可以是具有約 600yM、約 580yM、約 570yM、約 560yM、約 550yM、約 540yM、約 530yM、 約 520yM、約 510yM、約 500yM、約 490yM、約 480yM、約 470yM、約 460yM、約 450yM、 約 440yM、約 430yM、約 4