一種疫苗組合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及豬支原體肺炎疫苗組合物及其應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 豬支原體肺炎（Mycoplasmalpneumonia of swine, MPS)又稱(chēng)豬喘氣?。ɡ顝┟?， 張映.豬肺炎支原體生物學(xué)研究進(jìn)展，動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2003, 24(3):25-27)或豬地方性流 行性肺炎，是由豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)所引起的一種豬接觸性慢 性呼吸道疾病，分布十分廣泛，以慢性、接觸性、高度傳染性、高發(fā)病率以及低死亡率等為特 點(diǎn)，主要表現(xiàn)為咳嗽和呼吸困難，解剖可見(jiàn)肺組織呈肉變或大理石樣病變。
[0003] 衣阿華大學(xué)Ross研究發(fā)現(xiàn)：Mhp感染后淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力下降，細(xì)胞免疫 力下降，肺泡巨噬細(xì)胞對(duì)病原的吞噬和清除能力亦下降，抑制性T細(xì)胞的活動(dòng)增強(qiáng)，導(dǎo)致 呼吸道免疫力減弱，抗病力下降，從而使其他病原體更容易侵入，可繼發(fā)感染豬繁殖與呼 吸綜合征、豬圓環(huán)等，從而導(dǎo)致多種疫苗接種失敗。Mhp可經(jīng)空氣傳播，易與其他細(xì)菌性疾 病如豬肺疫、傳染性胸膜肺炎等并發(fā)(王茂文，豬肺炎支原體病的特點(diǎn)及其防制措施.畜 禽業(yè)，2008 (2): 16-17; Dee S，0take S，Oliveira S，et al. Evidence of long distance airborne transport of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and Mycoplasma hyopneumoniae. Veterinary research, 2009, 40(4) : 39)，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成重大 的經(jīng)濟(jì)損失，是當(dāng)前最常發(fā)生、最廣流行、最難凈化的重要疫病之一。
[0004] 豬支原體肺炎亞單位疫苗不含全菌疫苗的核酸，不僅不存在滅活不徹底造成的 安全隱患，而且由于其不含全菌的所有抗原，有利于疾病的凈化。但目前豬支原體肺炎 亞單位疫苗免疫效果不佳，不能給豬提供完全的保護(hù)（Fagan PK，Djordievic SP. Chin J, et al. Oral immunization of mice with attenuated Salmonella typhimurium aroA expressing a recombinant Mycoplasma hyopeumoniae antigen(NrdF). Inffction and immunity, 1997, 65:2502-2507)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種豬支原體肺炎疫苗組合物。
[0006] 本發(fā)明的主要目的在于提供一種豬支原體肺炎疫苗組合物，所述疫苗組合物含有 P46蛋白、P65蛋白、NrdF蛋白和獸醫(yī)學(xué)上可接受的佐劑，其特征在于，所述疫苗組合物不含 P36蛋白。
[0007] 本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"豬支原體肺炎"在臨床上的癥狀包括(但不限于）：呼吸癥狀(嚴(yán) 重急性臨床肺炎、咳嗽、呼吸困難、呼吸速迫)、發(fā)熱、高度傳染性、高發(fā)病率、低死亡率、壞死 性細(xì)胞支氣管炎及繼發(fā)性細(xì)菌性呼吸道感染增加。
[0008] 本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"豬支原體肺炎疫苗組合物"是指能夠用于預(yù)防和/或治療由豬 肺炎支原體感染所知病癥或疾病的疫苗，該疫苗組合物可包括任何能夠有效預(yù)防和/或治 療豬受豬肺炎支原體感染的疫苗，能夠用于豬支原體肺炎疫苗組合物包括(但不限于）完全 或部分豬支原體肺炎細(xì)胞制劑、滅活或改良活體疫苗、亞單位疫苗。
[0009] 本發(fā)明所述的豬支原體肺炎疫苗組合物優(yōu)選為亞單位疫苗，所述"亞單位疫苗"包 含一個(gè)或多個(gè)豬肺炎支原體衍生的多肽或蛋白質(zhì)，或所述多肽或蛋白質(zhì)的免疫原性片段， 或編碼所述一個(gè)或多個(gè)豬肺炎支原體衍生多肽或蛋白質(zhì)，或所述多肽或蛋白質(zhì)免疫原性片 段的一個(gè)或多個(gè)豬肺炎支原體基因或核酸，且所述基因或核酸能在豬體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)。豬肺 炎支原體多肽、蛋白質(zhì)、所述多肽和蛋白質(zhì)的免疫原性片段、或豬肺炎支原體基因或核酸可 用于本領(lǐng)域公知技術(shù)合成或重組制備。
[0010] 本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"預(yù)防和/或治療"在涉及豬肺炎支原體感染時(shí)是指抑制豬肺炎 支原體細(xì)菌的復(fù)制、抑制豬肺炎支原體的傳播或防止豬肺炎支原體在其宿主體內(nèi)定居，以 及減輕豬肺炎支原體感染所之疾病或病癥的癥狀。若細(xì)菌荷載量減少、肺部感染減輕和/ 或攝食量和/或生長(zhǎng)增加，那么就可以認(rèn)為所述治療達(dá)到了治療效果。
[0011] 本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"豬"是指任何屬于豬科（Suidae)成員的動(dòng)物，如豬。
[0012] 本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"P46蛋白"屬于Mhp的細(xì)胞膜表面抗原蛋白，引起早期免疫反 應(yīng)；該蛋白分子量達(dá)46kD，為含1257bp (編碼419AA)的ORFs (Open reading frames,即 開(kāi)放閱讀框）；該蛋白種內(nèi)高度保守，且其基因序列中有3個(gè)編碼色氨酸（Trp)的密碼子 TGA (Futo S，Seto Y，Mitsuse S，et al. Molecular cloning of a46_kilodalton surface antigen (p46)gene from mycoplasma hyopneumoniae:direct evidence of egg codon usage for arginine，J Bacteriol， 1995, 177(7):1915-1917)。
[0013] 優(yōu)選地，所述P46蛋白為SEQ ID No.2或SEQ ID No.4編碼的一種或兩種蛋白混 合物。
[0014] 所述P46蛋白的核苷酸序列可為SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 3。
[0015] 本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"P65蛋白"是一種解脂酶（lipoiytic enzyme),是Mhp主要的 具有免疫原性的細(xì)胞膜表面脂蛋白之一，屬于熱休克Hsp70家族；該蛋白分子量達(dá)65kD， 為含1803bp (編碼600AA)的ORFs，且基因序列中含1個(gè)編碼色氨酸（Trp)的密碼子TGA (Kim SW，Kim MF. Major membrane surface proteins of Mycoplasma hyopneumoniae selectively modified by covalently bound lipid.Journal of bacteriology, 1987 ，169:5546_5555;Kim MF, Heidari MB, Stull SJ，et al. Identification and mapping of an immunogenic region of Mycoplasma hyopneumoniae p65surface lipoprotein expressed in Escherichia coli from a cloned genomic fragment. Infection and immunity，1990, 58:2637-2643)。
[0016] 優(yōu)選地，所述P65蛋白為SEQ ID No. 6或SEQ ID No. 8編碼的一種或兩種蛋白混 合物。
[0017] 所述P65蛋白的核苷酸序列可為SEQ ID No. 5、SEQ ID No. 7。
[0018] 本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"NrdF蛋白"是核苷酸還原酶，含96AA (以TAA終止）（Fagan PK,Djordjevic SP, Eamens GJ, et al. Molecular characterization of a ribonucleotide reductase(NrdF)gene fragment of Mycoplasma hyopneumoniae and assessment of the recombinant product as an experimental vaccine for enzootic pneumonia. Infection and immunity， 1996,64:1060-1064)。
[0019] 優(yōu)選地，所述NrdF蛋白為SEQ ID No. 10編碼的蛋白。
[0020] 所述NrdF蛋白的核苷酸序列可為SEQ IDNo.9。
[0021 ] 在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述疫苗組合物含有P46蛋白、P65蛋白、NrdF蛋白、 P97R1蛋白和獸醫(yī)學(xué)上可接受的佐劑。
[0022] 本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"P97R1蛋白"是Mhp纖毛粘附因子P97蛋白編碼的C端的兩個(gè) 重復(fù)序列區(qū)域之一，由15個(gè)連續(xù)的5AA (AAKPV/E)基元構(gòu)成（Hus T, Artiushin S, Minion FC. Cloning and functional analysis of the P97swine cilium adhesion gene of Mycoplasma hyoneumoniae. Journal of Bacteriology, 1997, 179(4):1317-1323)。
[0023] 優(yōu)選地，所述P97R1蛋白為SEQ IDNo.12編碼的蛋白。
[0024] 所述P97R1蛋白的核苷酸序列可為SEQ ID No. 11。
[0025] 在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，所述疫苗組合物含有P46蛋白、P65蛋白、NrdF蛋 白、P102蛋白和獸醫(yī)學(xué)上可接受的佐劑。
[0026] 本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"P102蛋白"為P102全蛋白中的具有免疫原性的蛋白片段。 其中，所述P102全蛋白位于P97蛋白下游，并與P97蛋白相鄰，且具有細(xì)胞粘附作用 或輔助P97蛋白的細(xì)胞粘附作用；該蛋白分子量為102. 3kD，由2700bp左右編碼而成 (Hus T，Artiushin S，Minion FC. Cloning and functional analysis of the P97swine cilium adhesion gene of Mycoplasma hyoneumoniae. Journal of Bacteriology, 1997 ,179 (4):