重組人抗人TNFα單克隆抗體的制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種單抗制劑，特別是涉及一種穩(wěn)定的重組人抗人TNF a單克隆抗體 的制劑。
【背景技術】
[0002] 腫瘤壞死因子a (TNFa )是由多種類型的細胞產生的細胞因子，包括單核細胞和 巨噬細胞，最初是根據它們誘導某些小鼠腫瘤壞死的能力鑒定的?，F在已經證實TNFa與 多種人類疾病相關，包括膿毒癥，感染，自身免疫性疾病，移植排斥等。
[0003] 由于能夠結合并中和人腫瘤壞死因子（hTNF a )從而抑制hTNF a活性，抗hTNF a 成為治療hTNF a相關疾病的手段。早期的hTNF a為雜交瘤分泌的小鼠單克隆抗體或者用 遺傳工程方法制備的嵌合抗體（抗體鏈的可變區(qū)是源于鼠的）或者人源化抗體（抗體鏈高 變區(qū)是源于鼠的），在人體內不能誘導某些人效應功能或者會引發(fā)"人抗-小鼠抗體"反應 (HAMA)。當考慮到長期施用于慢性疾病，如類風濕關節(jié)炎時，此缺陷顯得更加明顯。
[0004] 本說明書中提到的重組人抗人TNFa單克隆抗體指通過重組方法制備，表達，生 產或分離的人抗體。所述抗體具有源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)，其中某 些氨基酸位點可能接受了體外誘變。
[0005] 現有的人抗人TNFa單克隆抗體制劑專利：
[0006] 艾博特生物技術有限公司H ? -J ?克勞澤，L ?鮑斯特和M ?迪克斯申請了 "用于 治療TNF-a相關病癥的人抗體的制劑"（申請?zhí)枮?3824272. 9,授權公告號CN1688339B)。 其優(yōu)點在于提供了一種制劑，使人TNFa單克隆抗體在高濃度下具有較長時間的穩(wěn)定性， 但缺點在于配方復雜，緩沖體系由兩種緩沖液組成，制備不方便。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種重組人抗人TNFa單克隆抗體的制劑。該制 劑具有高蛋白濃度、制備簡單、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。
[0008] 為解決上述技術問題，本發(fā)明的重組人抗人TNF a單克隆抗體的制劑，其組成包 括：重組人抗人TNFa單克隆抗體、賦形劑、滲透壓調節(jié)劑、保護劑和緩沖鹽；
[0009] 其中，在所述制劑中，重組人抗人TNFa單克隆抗體的蛋白含量為1~150mg/mL ;
[0010] 賦形劑在所述制劑中的含量為〇~20%;
[0011] 滲透壓調節(jié)劑在所述制劑中的含量為1~20g/L ;
[0012] 保護劑在所述制劑中的含量為0. 1~10g/L ;
[0013] 緩沖鹽在所述制劑中的濃度為5~200mmol/L ;
[0014] 所述制劑的pH為4~8。
[0015] 對于上述制劑，所述重組人抗人TNFa單克隆抗體的蛋白含量優(yōu)選為25~100mg/ ml〇
[0016] 所述賦形劑包括：糖類或多醇類，如包括：蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇中的一種 或多種。其中，賦形劑在制劑中的含量優(yōu)選為1~10%。
[0017] 所述滲透壓調節(jié)劑包括：糖類或鹽類，如包括：蔗糖、甘露醇、氯化鈉中的一種或 多種。其中，滲透壓調節(jié)劑在所述制劑中的含量優(yōu)選為2~10g/L。
[0018] 所述保護劑包括：糖類、醇類或吐溫，如包括：吐溫、甘露醇、蔗糖中的一種或多 種。其中，保護劑在所述制劑中的含量優(yōu)選為〇. 5~2g/L。
[0019] 所述緩沖鹽包括：組氨酸緩沖鹽體系（如包括：組氨酸與組氨酸鹽酸鹽的緩沖體 系），其中，緩沖鹽在所述制劑中的濃度為10~100mm〇l/L。
[0020] 所述制劑的pH優(yōu)選為pH4~6。
[0021] 本發(fā)明中，蔗糖、甘露醇既可作為保護劑，又作為滲透壓調節(jié)劑，還可作為賦形劑。
[0022] 另外，關于上述制劑的制備方法，可舉出以下方法。
[0023] 如上述制劑的制備方法，其步驟可包括：
[0024] 配制所述制劑的制劑緩沖液，包括：20mM組氨酸-組氨酸鹽酸鹽緩沖液，50g/L蔗 糖、2.93g/L氯化鈉，pH值5.2;
[0025] 將用超濾膜/管將已經分離純化好的重組人抗人TNF a單克隆抗體加入至上述制 劑緩沖液中，并用上述制劑緩沖液將重組人抗人TNF a單克隆抗體濃度調整至50mg/mL;然 后，添加聚山梨酯80至其含量為lg/L;
[0026] 用0. 22ym過濾器過濾，并分裝至2R西林瓶中。
[0027] 再者，本發(fā)明還提供一種重組人抗人TNFa單克隆抗體的制劑的應用，其用途是 用于制備治療其中TNF a活性是有害的病癥的藥物，其中制備的藥物通過液體注射形式使 用。
[0028] 本發(fā)明的制劑的實際施用量（即活性組分）依賴于許多因素，如待治療疾病的嚴 重性、治療對象的年齡和相對健康程度、所使用的抗體的效能、施用途徑和形式，以及其他 因素。
[0029] 本發(fā)明的制劑，其配方簡單，制備方便。同時，相比較于艾博特生物技術有限公司 H ? -J ?克勞澤，L ?鮑斯特和M ?迪克斯申請的"用于治療TNF-a相關病癥的人抗體的制 劑"專利（授權公告號CN1688339B)，本發(fā)明制劑具有更強的穩(wěn)定性。
【具體實施方式】
[0030] 以下通過實施例詳細說明本發(fā)明的內容，但這些實施例并不構成對本發(fā)明的限 制。
[0031] 實施例1制劑的制備
[0032] 本發(fā)明的制劑是按照以下方法制備的。
[0033] 分別按表1、2和3中所列組分含量配制溶液A、溶液B和溶液C。
[0034]表1溶液A
[0035]
[0036] 表2溶液B
[0037]
[0038] 表3溶液C
[0039]
[0040]配制好的溶液A滴加至溶液B中，一邊滴加一邊測量pH值，直至pH值為5. 2,命名 為溶液D。溶液C用0. 22 y m過濾器過濾至無菌無內毒素接收容器中。
[0041] 用超濾膜/管對已經分離純化好的重組人抗人TNF a單克隆進行換液濃縮，替換 至上述緩沖液D中。用溶液D將換液濃縮后的樣品稀釋至重組人抗人TNF a單克隆抗體為 50mg/mL。添加溶液C至聚山梨酯80的含量為lg/1。稀釋后的樣品用0. 22ym過濾器過 濾，分裝至2R西林瓶中，0. 8mL/管，并將其制劑樣品（本發(fā)明的制劑）命名為F1。
[0042] 實施例2穩(wěn)定性比較研究
[0043] 將艾博特生物技術有限公司申請的"用于治療TNF-a相關病癥的人抗體的制 劑"（授權公告號CN1688339B)所提及的制劑處方中的D2E7替換為本發(fā)明的重組人抗人 TNF a單克隆抗體（該抗體已經用超濾膜/管分離純化好），具體組成為：50mg/ml的重組 人抗人TNFa單克隆抗體，12mg/ml的甘露糖醇，lmg/ml的失水山梨醇聚氧乙?。?0)醚油 酸酯，1. 3mg、ml的朽1檬酸，0? 3mg/ml的梓檬酸鈉，1. 5mg/ml的二水合磷酸氫二鈉，0? 9mg/ml 的二水合磷酸二氫鈉，6. 2mg/ml的氯化鈉，pH值為5. 0 ;并將該制劑樣品命名為F2。
[0044] 通過振搖穩(wěn)定性考察、40°C高溫加速穩(wěn)定性考察和2~8°C穩(wěn)定性考察實驗比較 本發(fā)明所述的制劑（實施例的F1)與艾博特生物技術有限公司專利中提及的制劑（F2)的 穩(wěn)定性。其中，兩種制劑樣品的制備均采用了上海藥明康德新藥開發(fā)有限公司制備并提供 的重組人抗人TNF a單克隆抗體。
[0045] 表4處方2~8 °C穩(wěn)定性研究結果
[0046]
[0049] 表6處方40 °C穩(wěn)定性研究結果
[0050]
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[0051] 從表4和表5可以看出，FI和F2兩種處方樣品所有檢測指標在考察條件下表 現出了相當的穩(wěn)定性。從表6可以看出，在40°C加速條件下，F1處方樣品在關鍵質量指 標SEC-HPLC純度和CEX-HPLC純度上表現出優(yōu)于F2處方樣品的穩(wěn)定性。具體地，關于 SEC-HPLC純度，考察時間為4周時，F1處方樣品下降了 4. 8，F2處方樣品下降了 6. 9 %;關于 CEX-HPLC純度，考察時間為4周時，F1處方樣品下降了 18. 0 %，F2處方樣品下降了 21. 7 %。
【主權項】
1. 一種重組人抗人TNF a單克隆抗體的制劑，其特征在于，其組成包括：重組人抗人 TNFa單克隆抗體、賦形劑、滲透壓調節(jié)劑、保護劑和緩沖鹽； 其中，在所述制劑中，重組人抗人TNFa單克隆抗體的蛋白含量為1~150mg/mL ; 賦形劑在所述制劑中的含量為〇~20% ; 滲透壓調節(jié)劑在所述制劑中的含量為1~20g/L ; 保護劑在所述制劑中的含量為〇. 1~l〇g/L ; 緩沖鹽在所述制劑中的濃度為5~200mmol/L ; 所述制劑的pH為4~8。2. 如權利要求1所述的制劑，其特征在于：所述重組人抗人TNF a單克隆抗體的蛋白 含量為25~lOOmg/ml ; 所述賦形劑包括：糖類或多醇類； 所述滲透壓調節(jié)劑包括：糖類或鹽類； 所述保護劑包括：糖類、醇類或吐溫。3. 如權利要求2所述的制劑，其特征在于：所述賦形劑包括：蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山 梨醇中的一種或多種；其中，賦形劑在制劑中的含量為1~10% ; 所述滲透壓調節(jié)劑包括：蔗糖、甘露醇、氯化鈉中的一種或多種；其中，滲透壓調節(jié)劑 在所述制劑中的含量為2~10g/L ; 所述保護劑包括：吐溫、甘露醇、蔗糖中的一種或多種；其中，保護劑在所述制劑中的 含量為〇. 5~2g/L。4. 如權利要求1所述的制劑，其特征在于：所述緩沖鹽包括：組氨酸緩沖鹽體系； 其中，緩沖鹽在所述制劑中的濃度為10~lOOmmol/L ; 所述制劑的pH為pH4~6。5. 如權利要求4所述的制劑，其特征在于：所述組氨酸緩沖鹽體系包括：組氨酸與組氨 酸鹽酸鹽的緩沖體系。6. -種如權利要求1所述的制劑的制備方法，其特征在于，其步驟包括： 配制所述制劑的制劑緩沖液，包括20mM組氨酸-組氨酸鹽酸鹽緩沖液，50g/L蔗糖、 2.93g/L 氯化鈉，pH 值 5.2 ; 將重組人抗人TNF a單克隆抗體加入至上述制劑緩沖液中，并用上述制劑緩沖液將重 組人抗人了即€1單克隆抗體濃度調整至5〇1^/1111^然后，添加聚山梨酯80至其含量為4/1; 用0. 22 y m過濾器過濾，并分裝至2R西林瓶中。7. -種如權利要求1所述的制劑的應用，其特征在于：所述制劑用于制備治療其中 TNFa活性是有害的病癥的藥物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種重組人抗人TNFα單克隆抗體的制劑，其組成包括：重組人抗人TNFα單克隆抗體、賦形劑、滲透壓調節(jié)劑、保護劑和緩沖鹽；其中，在所述制劑中，重組人抗人TNFα單克隆抗體的蛋白含量為1～150mg/mL；賦形劑在所述制劑中的含量為0～20％；滲透壓調節(jié)劑在所述制劑中的含量為1～20g/L；保護劑在所述制劑中的含量為0.1～10g/L；緩沖鹽在所述制劑中的濃度為5～200mmol/L；所述制劑的pH為4～8。該制劑具有高蛋白濃度、制備簡單、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。<pb pnum="1" />
【IPC分類】A61P37/06, A61K9/08, A61K39/395, A61P31/00
【公開號】CN105012949
【申請?zhí)枴緾N201410173934
【發(fā)明人】羅建軍, 韓建峰, 周偉昌, 陳智勝
【申請人】上海藥明康德新藥開發(fā)有限公司, 無錫藥明康德生物技術股份有限公司
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2014年4月28日