抗炎劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及顯示出抑制炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生的優(yōu)良效果的，改善生物體中的過度炎 癥反應(yīng)（excessive infla_ation)的，對例如結(jié)締組織疾病、變應(yīng)性疾病、代謝性疾病和傳 染病的預(yù)防或治療有用的，并且具有優(yōu)良的穩(wěn)定性和安全性的抗炎劑。本發(fā)明還涉及各自 包含抗炎劑的抗炎用飲食品、抗炎用營養(yǎng)組合物和抗炎用飼料。
【背景技術(shù)】
[0002] 炎性細(xì)胞因子由淋巴細(xì)胞（lymphocytes)和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生并且參與細(xì)菌或病毒 感染、腫瘤或組織損傷相關(guān)的炎癥反應(yīng)。已知的炎性細(xì)胞因子包括白細(xì)胞介素-1 (IL-1)、白 細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子（TNF-a)和GM-CSF。炎性細(xì)胞因子作用于生物體內(nèi)的 肝臟，以誘導(dǎo)急性期蛋白質(zhì)的合成和分泌、或提高中性粒細(xì)胞（neutrophils)至內(nèi)皮細(xì)胞 的附著。另外，炎性細(xì)胞因子誘導(dǎo)如白細(xì)胞介素-8(IL-8)和MCP-1等趨化因子介導(dǎo)中性粒 細(xì)胞、單核細(xì)胞或淋巴細(xì)胞向炎癥部位的趨化性，導(dǎo)致炎癥的開始。炎性細(xì)胞因子的過剩產(chǎn) 生引起病理狀態(tài)，如全身炎癥反應(yīng)綜合征、結(jié)締組織疾病（例如，慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）、變 應(yīng)性疾病、代謝性疾?。ɡ?，動脈硬化、胰島素耐受性和糖尿?。⒑蛡魅静。ɡ?，多發(fā) 性硬化癥、移植物抗宿主?。╣raft-versus-host disease)、病毒性肝炎和HIV感染）。因 此，已報道炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生抑制對此類病理狀態(tài)的預(yù)防、治療或改善，或者其復(fù)發(fā)的預(yù) 防非常有用。盡管已知抗組胺或類固醇為抑制生物體內(nèi)的過度炎癥反應(yīng)的藥物，但此類藥 物可引起副作用，包括耳鳴、頭痛和厭食。另外，考慮到安全性或生產(chǎn)成本，此類物質(zhì)不可添 加至飲食品中。在這些情況下，出現(xiàn)對可日常安全地攝取并且可抑制炎性細(xì)胞因子的過剩 產(chǎn)生的飲食品或飼料的開發(fā)的需要。
[0003] 乳凝集素（lactadherin)為存在于乳脂肪球膜中的糖蛋白，并占牛乳脂肪球膜所 包含的蛋白質(zhì)的10%。乳凝集素的分子量為43kDa至53kDa，等電點為7. 0,并包括兩個表 皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域。牛乳中包含的乳凝集素還稱作PAS-VI-VII (PAS6/7)，鼠乳中包含的 乳凝集素還稱作MFG-E8。乳凝集素被認(rèn)為在調(diào)節(jié)新生兒的胃腸功能中發(fā)揮作用，并且出于 防止新生兒感染輪狀病毒的目的將乳凝集素?fù)饺雼雰耗谭邸?br>[0004] 能夠抑制炎性細(xì)胞因子的過剩產(chǎn)生的傳統(tǒng)食品成分包括鞘磷脂、乳過氧化物酶和 酸性低聚木糖（acidic xylooligosaccharides)。不幸地，尚未知道乳凝集素和/或乳凝集 素的分解物具有抑制炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生的優(yōu)良效果，或者改善生物體內(nèi)的過度炎癥反應(yīng)。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)文獻
[0006] 專利文獻
[0007] 專利文獻1 :日本專利申請?zhí)亻_2007-112793號公報
[0008] 專利文獻2 :日本專利申請?zhí)亻_2007-223910號公報
[0009] 非專利文獻
[0010] 非專利文南犬 1 ：Journal of Nutritional Science and Vitaminology，56, 54-59, 2010

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]發(fā)明要解決的問題
[0012] 本發(fā)明的目的為提供顯示出抑制炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生的顯著效果的，改善生物體中 的過度炎癥反應(yīng)的，對例如結(jié)締組織疾病、變應(yīng)性疾病、代謝性疾病和傳染病的預(yù)防或治療 有用的抗炎劑。本發(fā)明的另一目的為提供包含該抗炎劑的抗炎用飲食品、抗炎用營養(yǎng)組合 物和抗炎用飼料。
[0013] 用于解決問題的方案
[0014] 本發(fā)明人已進行廣泛研究以解決上述問題，因此已發(fā)現(xiàn)乳凝集素和/或乳凝集素 的分解物具有抑制炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生的優(yōu)良的效果。
[0015] 本發(fā)明包括以下方面：
[0016] 方面（1)。一種抗炎劑，其包含乳凝集素和/或乳凝集素的分解物作為活性成分。
[0017] 方面（2)。根據(jù)方面（1)的抗炎劑，其中乳凝集素和/或乳凝集素的分解物源于牛 乳。
[0018] 方面（3)。根據(jù)方面（1)或（2)的抗炎劑，其中乳凝集素的分解物由乳凝集素用蛋 白酶分解來制備。
[0019] 方面（4)。根據(jù)方面⑶的抗炎劑，其中蛋白酶為選自由胰蛋白酶、胰酶制劑 (pancreatin)、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶組成的組中的至少一種。
[0020] 方面（5)。一種抗炎用飲食品、抗炎用營養(yǎng)組合物或抗炎用飼料，其包括根據(jù)方面 (1)至⑷任一項的抗炎劑。
[0021] 方面（6)。一種生物體內(nèi)的炎癥改善方法，其包括經(jīng)口攝取根據(jù)方面（1)至（4)任 一項的抗炎劑。
[0022] 方面（7)。一種包含乳凝集素和/或乳凝集素的分解物作為活性成分的抗炎劑的 使用方法，所述方法包括將抗炎劑用于患有炎癥的患者。
[0023] 發(fā)明的效果
[0024] 本發(fā)明的抗炎劑顯示出抑制炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生的顯著效果，并且對例如結(jié)締組織 疾病、變應(yīng)性疾病、代謝性疾病和傳染病的預(yù)防或治療有用。
【具體實施方式】
[0025] 為抗炎劑的活性成分的乳凝集素可通過將組分（A)、⑶或（C)使用超濾（UF)膜、 微濾（MF)膜、反滲透（R0)膜或離子交換樹脂的脫鹽（desaltation)或濃縮來制備，其中 組分（A)為酪乳，其為由原料乳生產(chǎn)黃油（butter)期間制備的水相組分；組分（B)為將原 料乳的分離器分離獲得的具有40至50%脂肪含量的奶油（cream)再次分離器分離獲得的 具有60%以上的脂肪含量的高脂肪奶油進行加熱或剪切處理，高脂肪奶油相轉(zhuǎn)變（phase inversion)時排出的水相組分；和組分（C)為黃油乳清（butter serum)，其為從加熱恪融 的黃油中分離的水相組分。可選地，乳凝集素可由以下程序制備：將鹽酸添加至黃油乳清至 pH為4. 4,將氯化鈣添加至所得混合物并將混合物保持在50°C達30分鐘，接著分離，并將 所得沉淀物溶解或懸浮在水中，接著使用超濾（UF)膜、微濾（MF)膜、反滲透（R0)膜或離子 交換樹脂將溶液或懸浮液脫鹽或濃縮。為抗炎劑的活性成分的乳凝集素分解物可由乳凝集 素用蛋白酶分解來制備。蛋白酶的實例包括商購可得的食品?工業(yè)用蛋白酶產(chǎn)品如蛋白酶 八〃八111&11〇〃30(商品名）、1']161'1]1〇&86?(]1(^(商品名）和？1'〇1:;[1130-4￥10(商品名），膜蛋白 酶，胰酶制劑，胰凝乳蛋白酶，胃蛋白酶和木瓜蛋白酶?？山M合使用這些蛋白酶。上述制備 的乳凝集素和/或乳凝集素的分解物可冷凍干燥或噴霧干燥。
[0026] 乳凝集素和/或乳凝集素的分解物可由哺乳類如人、奶牛、水牛、山羊或綿羊的乳 制備、通過基因工程技術(shù)生產(chǎn)、或由此類哺乳類的血液或器官的精制。乳凝集素和/或乳凝 集素的分解物可由此類材料通過簡單工序以低成本生產(chǎn)，且所得產(chǎn)物可日常安全地攝取。 特別地，乳凝集素和/或乳凝集素的分解物優(yōu)選源于牛乳。乳凝集素和/或乳凝集素的分 解物可為商購可得的精制試劑。
[0027] 乳凝集素和/或乳凝集素的分解物可用作抗炎劑而無需任何處理，或者可任選地 由常規(guī)工藝制備為粉末劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑或飲品。冷凍干燥或噴霧干燥的乳凝集素 和/或乳凝集素的分解物可用作抗炎劑而無需任何處理，或可由常規(guī)工藝制備為任何產(chǎn) 品。
[0028] 可將所得乳凝集素產(chǎn)品摻入至營養(yǎng)劑、飲食品（例如，酸奶、飲料和薄餅）、營養(yǎng)組 合物或飼料。
[0029] 除乳凝集素和/或乳凝集素的分解物以外，本發(fā)明的抗炎用飲食品、抗炎用營養(yǎng) 組合物或抗炎用飼料可包含常見包含于任何其它飲食品或飼料中的任何材料。此類材料的 實例包括穩(wěn)定劑、糖類、脂質(zhì)、香料、維生素、礦物質(zhì)、類黃酮和多酚?？寡子蔑嬍称?、抗炎用 營養(yǎng)組合物或抗炎用飼料可包含與作為活性成分的乳凝集素和/或乳凝集素的分解物組 合顯示出抗炎效果的任何組分，如鞘磷脂、乳過氧化物酶或酸性低聚木糖。
[0030] 抗炎用飲食品、抗炎用營養(yǎng)組合物或抗炎用飼料可以任意量包含乳凝集素和/或 乳凝集素的分解物。本發(fā)明中為了實現(xiàn)抑制炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生的效果，優(yōu)選調(diào)整乳凝集素 和/或乳凝集素的分解物摻入至藥物、飲食品或飼料的量以使乳凝集素和/或乳凝集素的 分解物的每成人每日口服劑量為5mg以上。
[0031] 通過將適當(dāng)?shù)闹鷦┨砑又疗錇榛钚猿煞值娜槟睾?或乳凝集素的分解物中 可將抗炎劑制備為任何藥物產(chǎn)品。藥物產(chǎn)品的制備可涉及使用常見的賦形劑或稀釋液，如 填充劑、增量劑（extender)、粘結(jié)劑、崩解劑（disintegrant)、表面活性劑或潤滑劑。賦形 劑的實例包括蔗糖、乳糖、淀粉、結(jié)晶性纖維素、甘露糖醇、輕質(zhì)無水硅酸、鋁酸鎂、合成硅酸 錯、娃酸錯酸鎂（magnesiummetasilicatealuminate)、碳酸媽、碳酸氫鈉、磷酸氫媽和羧 甲基纖維素鈣。這些賦形劑可單獨或組合使用。
[0032] 盡管參考實施方案描述本發(fā)明，但該實施方案構(gòu)成本公開的一部分且不應(yīng)當(dāng)解釋 為限制本發(fā)明。從本公開的各種可選實施方案、實施例和操作技術(shù)對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是 明顯的。
[0033] 例如，提供抗炎劑的使用方法，其中將包含實施方案中描述的乳凝集素和/或乳 凝集素的分解物作為活性成分的抗炎劑適用于患有炎癥的患者。用于該方法的乳凝集素和 /或乳凝集素的分解物可由下述實施例中說明的原料分離或精制。抗炎劑還可用于非人類 的哺乳類，包括如狗、猴子、貓、牛、馬、豬、雞和羊等家畜。
[0034] 實施例
[0035] 經(jīng)由實施例和試驗例詳細(xì)描述本發(fā)明，實施例和試驗例不應(yīng)當(dāng)解釋為限制本發(fā) 明。
[0036] 實施例1
[0037] 將丙酮（100kg)添加至冷凍干燥的未滅菌的酪乳粉末（10kg)，并用夸克分離器處 理混合物以完全除去沉淀物。用蒸發(fā)器將丙酮從所得上層清液中除去，并將殘渣溶解在去 離子水中。隨后，用具有60kDa截留分子量（cut-off molecular weight)的超濾膜處理溶 液以回收濾液。然后