一種具有抗炎鎮(zhèn)痛活性的塞隆骨提取物、制備方法及中藥制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物提取物，具體地說，涉及一種具有抗炎鎮(zhèn)痛活性的塞隆骨提 取物、制備方法及中藥制劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 塞隆骨為倉鼠科動(dòng)物高原齡鼠（MyospalaxbaileyiThomas)去腦的干燥全架骨 骼。夏、秋兩季器械捕捉，獵獲后立即處死，剝?nèi)テ?、肉、去腦，剔凈殘留筋肉，及時(shí)陰干或低 濕烘干。用時(shí)打碎，水煎或泡酒服。具有祛風(fēng)散寒除濕、通絡(luò)止痛、補(bǔ)益肝腎的功效，可用于 風(fēng)寒濕痹引起的肢體關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、屈伸不利，肌膚麻木，腰膝酸軟。研究表明（海平.塞 隆骨抗炎作用（II).高原醫(yī)學(xué)雜志，2002, 12(1) ;8-10 ;海平.塞隆骨鎮(zhèn)痛作用和對(duì)腦內(nèi) 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響.山東中醫(yī)雜志，2001，20(4) ;232-234)塞隆骨具有一定的抗炎和 鎮(zhèn)痛作用，但現(xiàn)有技術(shù)中采用的都是用塞隆骨泡水或泡酒服用，其成分復(fù)雜，效果不明顯， 因此十分有必要制備分離塞隆骨的活性部位。
[0003] 中國專利文獻(xiàn)CN201410472564. 5,公開日2015. 01. 14,公開了 一種從塞隆骨 中提取7-0 -羥基膽固醇的方法，包括以下步驟：用1-15%乙醇-正己烷溶解塞隆骨至 50-200mg/mL;-維液相色譜：A相正己烷，B相乙醇，洗脫方式為B相1%等度12min、5% 等度 10min、8%等度 10min、15%等度 10min、30%等度 25min、50%等度 15min、70%等度 15min、100%等度15min，根據(jù)紫外吸收光譜收集目的組分；用2-15%乙醇-正己烷溶解至 50-100mg/mL;二維液相色譜：A相正己烷，B相乙醇，5%B相等度30min洗脫，根據(jù)紫外吸收 光譜收集目的組分，即得到目的提取物。該方法得到的7-0 -羥基膽固醇純度可達(dá)到99% 以上。
[0004] 然而，目前還未見從塞隆骨中分離純化獲得具有顯著抗炎鎮(zhèn)痛活性成分的相關(guān)報(bào) 道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種具有抗炎鎮(zhèn)痛活性的塞隆骨提 取物。
[0006] 本發(fā)明的再一的目的是提供所述的塞隆骨提取物的制備方法。
[0007] 本發(fā)明的另一的目的是提供供所述的塞隆骨提取物的用途。
[0008] 本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種具有抗炎鎮(zhèn)痛活性的中藥制劑。
[0009] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0010] 為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種塞隆骨提取物的制備方 法，包括以下步驟：
[0011] ⑴粉碎；
[0012] (2)提?。簻p壓蒸餾提取塞隆骨脂溶性提取部位；
[0013] (3)萃取：將步驟⑵所得脂溶性提取部位用去離子水溶解，先用石油醚萃取，水 相再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，濃縮至干得到乙酸乙酯部分；
[0014] (4)柱分離：
[0015] 干法拌樣：在乙酸乙酯部分中加入甲醇充分溶解，再加入硅膠進(jìn)行拌樣，研碎至粉 末狀；
[0016] 干法裝柱：在柱子中裝入硅膠和拌好的樣品，以乙酸乙酯：甲醇=1:1的溶劑作為 洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫液干燥即得塞隆骨提取物。
[0017] 優(yōu)選的，所述步驟（2)為在70攝氏度下用體積比為95%乙醇減壓蒸餾提取，提取 液濃縮至干，得到塞隆骨脂溶性提取部位。
[0018] 優(yōu)選的，所述步驟（4)中裝入柱子的硅膠為200-300目。
[0019] 優(yōu)選的，所述步驟（4)中裝入柱子的硅膠為拌后的樣品體積的40-60倍。
[0020] 優(yōu)選的，所述步驟（4)中洗脫時(shí)依次以石油醚：乙酸乙酯=4:1、2:1和1:1進(jìn)行 梯度洗脫。
[0021] 優(yōu)選的，所述步驟（4)中通過TLC的位置和顯色確定餾分是否一致，收集餾分一致 的部分進(jìn)行干燥得塞隆骨提取物。
[0022] 為實(shí)現(xiàn)上述第一個(gè)目的，本發(fā)明公開了由上述的制備方法制備的塞隆骨提取物。
[0023] 為實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：上述塞隆骨提取物在制備抗 炎鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。
[0024] 為實(shí)現(xiàn)上述第四個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種具有抗炎鎮(zhèn)痛活性的中 藥制劑，其由上述塞隆骨提取物或者添加藥物學(xué)常用的輔料和藥學(xué)可接受的載體制成。
[0025] 優(yōu)選的，所述塞隆骨提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)20-90%。
[0026] 其中經(jīng)檢測，具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛活性的部位是：石油醚：乙酸乙酯=1:1洗脫部分 (得到白色粉末狀和針狀晶體混合物）。
[0027] 本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明所獲得的塞隆骨提取物具有抗炎鎮(zhèn)痛活性，可以制備抗 炎鎮(zhèn)痛藥物，尤其是中藥制劑。該中藥制劑中的塞隆骨提取物可占制劑總質(zhì)量的20-90%， 其余可添加藥物學(xué)常用的輔料和藥學(xué)可接受的載體。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 實(shí)施例1本發(fā)明的塞隆骨提取物的制備
[0029] 一、方法步驟
[0030](1)取塞隆骨風(fēng)干品進(jìn)行粉碎，可以為粉碎后過120目篩。
[0031] (2)提取：在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀70攝氏度下用體積比為95%乙醇提取4次，2h/次，再將 這4次的提取液合并，減壓濃縮至干，得到塞隆骨脂溶性提取部位。（高濃度乙醇提取可避 免大極性物質(zhì)被同時(shí)提出，減少分離過程中的物質(zhì)干擾）。
[0032] (3)脂溶性部分的萃?。喝ルx子水溶解，分別用石油醚和用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，每 次萃取靜置半小時(shí)，萃取4一6次，合并萃取液分別濃縮至干得到石油醚部分和乙酸乙酯部 分。具體是：先用石油醚進(jìn)行萃取，目的是減少乙酸乙酯部分中的小極性雜質(zhì)。石油醚萃取 的水相再用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相即萃取液。
[0033] (4)柱分離：乙酸乙酯部分
[0034] 干法拌樣：在5g的乙酸乙酯部分中加入15ml純甲醇溶液充分溶解，再加入約15g 200-300目硅膠進(jìn)行拌樣，研碎至粉末狀；
[0035] 干法裝柱：裝柱硅膠為200-300目，約干法拌樣所得粉末狀樣品的50倍
[0036] 必須保證柱子平、實(shí)、正三個(gè)原則；將拌好的樣品均勻的倒入柱子里，放一團(tuán)棉花， 防止沖柱時(shí)把樣品沖起來；則以石油醚：乙酸乙酯=4:l(v/v)的溶劑開始沖柱，至淡黃色 色帶無色為止，換石油醚：乙酸乙酯=2:1的梯度繼續(xù)沖，同上，依次以石油醚：乙酸乙酯 =1:1梯度沖到色帶跑完為止，最后點(diǎn)板子進(jìn)行合并。
[0037] 所述點(diǎn)板子即以硅膠板為固定相，乙酸乙酯：石油醚=1:1. 5(體積比）為流動(dòng)相， 顯示劑為5%硫酸乙醇溶液，以色譜板上至下第二個(gè)點(diǎn)（最大的點(diǎn)）顯色為紫色點(diǎn)的部分進(jìn) 行合并。
[0038] 點(diǎn)板子的目的是合并洗脫液中餾分相同的部分。
[0039]二、結(jié)果
[0040] 其中經(jīng)檢測，具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛活性的部位是：石油醚：乙酸乙酯=1:1洗脫部 分（得到白色粉末狀和針狀晶體混合物），本發(fā)明所得塞隆骨脂溶性部分部分的純化產(chǎn)物 稱之為SLG-e。
[0041] 本發(fā)明所得的塞隆骨提取物可以制備抗炎鎮(zhèn)痛藥物，尤其是中藥制劑。該中藥制 劑中的塞隆骨提取物可占制劑總質(zhì)量的20-90%，其余可添加藥物學(xué)常用的輔料和藥學(xué)可 接受的載體。
[0042] 三、實(shí)驗(yàn)
[0043] 1.本發(fā)明的塞隆骨提取物SLG-e對(duì)以二甲苯所致的小鼠耳腫脹急性炎癥模型的 影響
[0044] 1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0045] 昆明種小鼠，雌性，6-8周齡，體重20 - 25g，分為5組，每組10只。購自青海省實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0046] 1.2受試藥物及實(shí)驗(yàn)材料：；
[0047] 二甲苯，塞隆骨脂溶性部分部分純化產(chǎn)物SLG-e
[0048] 1. 3實(shí)驗(yàn)方法
[0049] 小鼠隨機(jī)分組，連續(xù)給藥一周，每鼠于右耳廓均勻涂10-50iil二甲苯，左耳作對(duì) 照。2小時(shí)后脫椎處死，剪下小鼠耳廓，用9mm的穿孔器將耳廓圓片取下，稱重。
[0050] 1. 4結(jié)果
[0051] 表1 :塞隆骨提取物對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹的抑制作用
[0052]
[0053] *p〈0. 05, **p〈0. 01，***p〈0.OOlvsModel
[0054]SLG-e能明顯抑制（P〈0. 05,P〈0. 01)二甲苯所致的小鼠急性炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)出很 好的量效關(guān)系。
[0055] 2.SLG-e對(duì)蛋清致大鼠足腫脹的影響
[0056] 2. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0057]SD大鼠，雌雄性兼?zhèn)洌?-8周齡，體重120 - 150g，分為5組，每組10只。購自青海 省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0058] 2. 2受試藥物及實(shí)驗(yàn)材料：
[0059] 塞隆骨提取物（SLG-e)，新鮮雞蛋清。自制大鼠足腫脹測定儀。
[0060] 2. 3實(shí)驗(yàn)方法
[0061] 選用健康SD大鼠50只，雌雄各半，體重150 士 30g，隨機(jī)分為5組，分別為空白對(duì) 照組、陽性對(duì)照組和SLG-e高、中、低劑量組，按照表2所列劑量與途徑給藥?？瞻讓?duì)照組灌 胃等容積的生理鹽水，每日給藥1次，連續(xù)給藥7d實(shí)驗(yàn)前于每只大鼠左后足踩關(guān)節(jié)處做標(biāo) 記，用外徑千分尺測定大鼠左后足厚度。末次給藥30min后于大鼠左后足拓皮下