人用乙型腦炎減毒活疫苗無明膠凍干穩(wěn)定劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于疫苗制劑領(lǐng)域，具體而言，涉及一種人用乙型腦炎減毒活疫苗無明膠 凍干穩(wěn)定劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 流行性乙型腦炎由乙型腦炎病毒感染所引起，是人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的蟲媒 病之一，廣泛分布于亞洲，近年來流行范圍逐漸擴(kuò)大，其致死率高達(dá)30 %，另有50%患者會 留下永久性神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，被世界衛(wèi)生組織（WHO)列為重點(diǎn)防控疾病。疫苗接種是預(yù)防 和控制乙型腦炎最經(jīng)濟(jì)、最有效的手段。
[0003] 目前市售乙型腦炎減毒活疫苗和乙型腦炎滅活疫苗皆為冷凍干燥技術(shù)所制，這種 技術(shù)有著無可比擬的優(yōu)點(diǎn)：毒種在低溫下干燥，各種成分的活性喪失少；復(fù)水性好，能很快 地吸水還原成干燥前的鮮活狀態(tài)；脫水徹底，保存期長，儲存運(yùn)輸、銷售方便。而在此項(xiàng)技術(shù) 中，穩(wěn)定劑的選擇至關(guān)重要。
[0004] 目前市售的乙型腦炎減毒活疫苗保護(hù)劑均含有明膠成分，明膠，是由動物膠原水 解得到，來源于牛、豬等動物的皮、骨、腱與韌帶中的膠原，既可以引起細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)， 也可以引起非細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)；此外，明膠也是細(xì)菌內(nèi)毒素的主要來源，可導(dǎo)致人體產(chǎn)生 發(fā)熱反應(yīng)。Rottem M經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，接種疫苗后出現(xiàn)過敏反應(yīng)的兒童80%以上血清中可檢測 出明膠IgE。此外，明膠來源于?；蜇i，因此還具有攜帶動物源性病毒的潛在危險(xiǎn)性。病毒 侵入可能引起人海綿體腦炎等異種病毒感染性疾病。因此，為降低凍干穩(wěn)定劑中明膠等動 物源性蛋白成分引發(fā)的接種人群嚴(yán)重副反應(yīng)及杜絕外源因子污染的可能性，并加強(qiáng)疫苗 的穩(wěn)定性，篩選新的凍干穩(wěn)定劑已勢在必行。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明涉及人用乙型腦炎減毒活疫苗無明膠凍干穩(wěn)定劑，本發(fā)明即采用不含明膠 成分的穩(wěn)定劑作為替代，使疫苗制品對于人體的刺激性大為降低，并能保持較高安全性與 穩(wěn)定性，從而優(yōu)化疫苗制品，提尚疫苗質(zhì)量。
[0006] 本發(fā)明特點(diǎn)和優(yōu)勢：
[0007] (1)凍干穩(wěn)定劑不含明膠成分；
[0008] (2)本凍干穩(wěn)定劑配方刺激性小，無已知過敏性人群，使用安全性較好。
[0009] (3)本凍干穩(wěn)定劑，對疫苗成分保護(hù)性好，以此為支架的疫苗，在同樣存儲條件下， 穩(wěn)定性大大優(yōu)于現(xiàn)有疫苗品種。
[0010] 本發(fā)明所述的凍干穩(wěn)定劑配方如下：
[0011] 磷酸氫二鈉（包括其含水化合物）〇? 02~0? 05M、蔗糖0? 08~0? 15M、磷酸二氫鈉 (包括其含水化合物）〇? 02~0? 06M、尿素0? 50~0? 80M、乳糖0? 20~0? 70M，pH6. 5~7. 8。
[0012] 本發(fā)明還涉及所述的人用乙型腦炎減毒活疫苗無明膠凍干穩(wěn)定劑的制備方法，其 特征在于：
[0013] 步驟（1)，依次稱取需要量的磷酸氫二鈉（包括其含水化合物）、蔗糖、磷酸二氫鈉 (包括其含水化合物）、尿素、乳糖，溶解于注射用水中；
[0014] 步驟（2)，調(diào)節(jié)pH至需要值。
[0015] 本發(fā)明還涉及使用所述無明膠凍干穩(wěn)定劑制備人用乙型腦炎減毒活疫苗凍干制 劑的方法，其特征在于，
[0016]步驟（1)，開啟凍干機(jī)，待板層溫度達(dá)到-30°C至_40°C后制品允許入柜并進(jìn)行保 持，直至產(chǎn)品入柜結(jié)束；
[0017]步驟（2)，對制品加速進(jìn)行制冷，_40°C以下保持2小時以上使柜內(nèi)所有制品完全 凍結(jié)；
[0018] 步驟（3)，調(diào)節(jié)凍干機(jī)氣壓至10Pa以下，在該氣壓和步驟（2)溫度下使產(chǎn)品在低溫 低壓下干燥；
[0019] 步驟（4)，第一階段干燥：給制品進(jìn)行緩慢的加溫至-10°C至0°C保持，直至使制品 外觀成形，為淡黃色疏松體，外觀完整無缺損；
[0020]步驟（5)，第二階段干燥：制品在22°C -28°c條件下保持8小時以上；
[0021] 步驟（6)，壓塞停機(jī)，完成凍干程序。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 實(shí)施例1.凍干穩(wěn)定劑的配方及配制方法
[0023] 篩選及優(yōu)化出人用乙型腦炎減毒活疫苗無明膠凍干穩(wěn)定劑適宜配方，含鹽類、糖 類等成分，注射用水溶解配制而成。
[0024]
[0025] 將以上處方中各成分依次稱取，溶解于注射用水中，待全部溶解后，調(diào)節(jié)pH至 6. 5 ~7. 8〇
[0026] 將乙型腦炎減毒活苗原液與凍干穩(wěn)定劑按照一定體積進(jìn)行混合，配制時長不超過 4小時，攪拌至均勻。
[0027] 實(shí)施例2.凍干曲線程序的優(yōu)化
[0028] 優(yōu)化了從預(yù)凍到升華干燥，最終解析干燥的時間控制。使成品的凍干效果更優(yōu)，成 型性更佳。開啟凍干機(jī)，待板層溫度達(dá)到_30°C至-40°C后制品允許入柜并進(jìn)行保持，直至 廣品入柜結(jié)束。制品入柜完畢，柜門關(guān)閉確認(rèn)后，對制品加速進(jìn)彳丁制冷，使柜內(nèi)所有制品完 全凍結(jié)（_40°C以下保持2小時以上）。給箱體制造一個低氣壓的環(huán)境（lOPa以下），使產(chǎn)品 在低溫低壓下干燥，抽真空。第一階段干燥：給制品進(jìn)行緩慢的加溫至_l〇°C至0°C保持，直 至使制品外觀成形，為淡黃色疏松體，外觀完整無缺損。第二階段干燥：制品在要求的溫度 (22°C -28°C )的條件下保持8小時以上。壓塞停機(jī)：壓塞，再停機(jī)，完成凍干程序。
[0029] 實(shí)施例3.凍干后的產(chǎn)品質(zhì)量檢測
[0030] 根據(jù)中華人民共和國藥典三部相關(guān)規(guī)定進(jìn)行全部相關(guān)項(xiàng)目檢測。
[0031]
[0033] 檢測結(jié)果顯示，無明膠凍干穩(wěn)定劑凍干的疫苗產(chǎn)品，各項(xiàng)指標(biāo)均符合國家規(guī)定及 企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。
[0034] 實(shí)施例4.成品長期穩(wěn)定性與加速穩(wěn)定性試驗(yàn)研究
[0035] 對成品進(jìn)行長期穩(wěn)定性研究，開展0個月、3個月、6個月、9個月、12個月、16個月、 24個月、36個月的各項(xiàng)相關(guān)指標(biāo)的檢測?，F(xiàn)進(jìn)行檢測的各項(xiàng)指標(biāo)均符合標(biāo)準(zhǔn)，且無明顯變 化。并開展加速穩(wěn)定性試驗(yàn)的研究，對成品進(jìn)行28天、37°C熱穩(wěn)定性研究，結(jié)果無明顯變 化。
[0036]批號：試201403001
[0037]
[0038]批號：試 201403002
[0039]
[0040]批號：試 201403003 [0041 ]
[0042]
[0043] 長期穩(wěn)定性研究結(jié)果表明，乙型腦炎減毒活疫苗成品的主要質(zhì)量指標(biāo)，無明顯變 化。
[0044]
[0045] 試201403001、試201404012、試201404013三批成品進(jìn)行28天、37°C熱穩(wěn)定性加 速試驗(yàn)研究，結(jié)果表示成品滴度結(jié)果無明顯變化。
[0046] 實(shí)施例5.對穩(wěn)定劑配方單組份安全性試驗(yàn)進(jìn)行研究
[0047] 對無明膠凍干穩(wěn)定劑各組分的安全性試驗(yàn)進(jìn)行研究，且進(jìn)行各組分相應(yīng)濃度的翻 倍量進(jìn)行試驗(yàn)，進(jìn)行異常毒性、乳鼠返祖試驗(yàn)、腦內(nèi)致病力試驗(yàn)。結(jié)果均符合規(guī)定，無異常反 應(yīng)。
[0048]
[0049] 按照如表所示的實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果均符合藥典規(guī)定，無異常反應(yīng)。
[0050] 實(shí)施例6.對成品進(jìn)行安全性試驗(yàn)研究
[0051] 對成品進(jìn)行安全性試驗(yàn)研究，開展刺激性試驗(yàn)、過敏性試驗(yàn)、溶血性試驗(yàn)，所有試 驗(yàn)結(jié)果均符合規(guī)定要求?，F(xiàn)已制備凍干人用乙型腦炎減毒活疫苗無明膠凍干穩(wěn)定劑疫苗， 質(zhì)量指標(biāo)無顯著差異，有效性指標(biāo)和安全性指標(biāo)能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明：該穩(wěn)定劑保護(hù)效果 良好，以該穩(wěn)定劑制備的凍干乙型腦炎減毒活疫苗具有良好的安全性和免疫效果。
[0052] 最后需要說明的是，以上實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，并不作為對本發(fā)明保 護(hù)范圍的限定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種人用乙型腦炎減毒活疫苗無明膠凍干穩(wěn)定劑，其特征在于，所述凍干穩(wěn)定劑配 方為： 磷酸氫二鈉（包括其含水化合物）〇? 02~0? 05M、蔗糖0? 08M~0? 15M、磷酸二氫鈉（包 括其含水化合物）〇? 02~〇? 06M、尿素0? 50~0? 80M、乳糖0? 20~0? 70M，pH6. 5~7. 8。2. 權(quán)利要求1所述的人用乙型腦炎減毒活疫苗無明膠凍干穩(wěn)定劑的制備方法，其特征 在于，包括如下步驟：步驟（1)，依次稱取需要量的磷酸氫二鈉（包括其含水化合物）、蔗糖、 磷酸二氫鈉（包括其含水化合物）、尿素、乳糖，溶解于注射用水中； 步驟⑵調(diào)節(jié)pH至需要值。3. 疫苗凍干穩(wěn)定劑不含明膠成分。4. 使用權(quán)利要求1所述人用乙型腦炎減毒活疫苗無明膠凍干穩(wěn)定劑制備人用乙型腦 炎減毒活疫苗凍干制劑的方法，其特征在于，包括如下步驟： 步驟（1)，開啟凍干機(jī)，待板層溫度達(dá)到_30°C至-40°C后制品允許入柜并進(jìn)行保持，直 至廣品入柜結(jié)束； 步驟（2)，對制品加速進(jìn)行制冷，-40°C以下保持2小時以上使柜內(nèi)所有制品完全凍結(jié)； 步驟（3)，調(diào)節(jié)凍干機(jī)氣壓至IOPa以下，在該氣壓和步驟（2)溫度下使產(chǎn)品在低溫低壓 下干燥； 步驟（4)，第一階段干燥：給制品進(jìn)行緩慢的加溫至-KTC至(TC保持，直至使制品外觀 成形，為淡黃色疏松體，外觀完整無缺損； 步驟（5)，第二階段干燥：制品在22°C -28°C的條件下保持8小時以上； 步驟(6)，壓塞停機(jī)，完成凍干程序。5. 使用權(quán)利要求1所述的凍干穩(wěn)定劑制備的人用乙型腦炎減毒活疫苗凍干制劑。6. 使用權(quán)利要求4所述的方法制備獲得的人用乙型腦炎減毒活疫苗凍干制劑。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種人用乙型腦炎減毒活疫苗無明膠凍干穩(wěn)定劑，所述凍干穩(wěn)定劑不含明膠成分，該配方配制的疫苗經(jīng)試驗(yàn)及檢測，證明疫苗穩(wěn)定及安全性較高，刺激性小，無已知過敏性人群。所述的凍干保護(hù)劑的配方為：磷酸氫二鈉(包括其含水化合物)0.02～0.05M、蔗糖0.08～0.15M、磷酸二氫鈉(包括其含水化合物)0.02～0.06M、尿素0.50～0.80M、乳糖0.20～0.70M，pH6.5～7.8。
【IPC分類】A61P31/14, A61K9/19, A61K47/04, A61K47/26, A61K47/18, A61K39/12
【公開號】CN105106964
【申請?zhí)枴緾N201510144286
【發(fā)明人】呂文利, 張威, 鄂文娟, 趙新華, 田小鳳, 胡志雄, 張雪, 朱蓉
【申請人】武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年3月30日