塞性肺?。–0PD)的藥物的用途。
[0062] 基于組合物的總重，用于治療或預(yù)防慢性阻塞性肺病（C0PD)的發(fā)明的組合物可 包含按重量計(jì)〇. 1至99 %、優(yōu)選0. 1至50 %的上述提取物或化合物。
[0063] 根據(jù)本發(fā)明的組合物可以提供為藥物組合物，所述藥物組合物包含制藥上可接受 的載體、輔料或稀釋劑，例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚醇、麥芽糖 醇、淀粉、阿拉伯膠、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、 水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。制劑可以另外包括填料、 抗凝集劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、調(diào)味劑、乳化劑、防腐劑等。本發(fā)明的組合物可以通過(guò)使用本領(lǐng) 域公知的任何方法來(lái)配制以在給患者施用后提供活性成分的快速、持續(xù)或延遲釋放。
[0064]例如，本發(fā)明的組合物可以溶解在油、丙二醇或者常用于制備注射劑的其他溶劑 中。所述載體的合適的實(shí)例包括生理鹽水、聚乙二醇、乙醇、植物油、肉豆蔻酸異丙酯等，但 不限于它們。對(duì)于局部給藥，本發(fā)明的提取物可以配制為軟膏和乳膏的形式。
[0065] 可以以任何形式來(lái)制備含有本發(fā)明組合物的藥物制劑，例如口服劑型（散劑、片 劑、膠囊劑、軟膠囊劑、含水藥物、糖漿劑、酏劑、丸劑、散劑、囊劑、顆粒劑），或局部用制劑 (乳膏劑、軟膏劑、洗劑、凝膠劑、香膏劑、貼劑、糊劑、噴霧溶液、氣霧劑等），或注射制劑（溶 液、懸浮液、乳液）。
[0066] 在藥物劑型中的本發(fā)明的組合物可以以它們制藥上可接受的鹽的形式使用，并且 也可以單獨(dú)使用或適當(dāng)聯(lián)合使用，以及與其他藥學(xué)上的活性化合物組合使用。
[0067] 本發(fā)明提取物的理想的劑量根據(jù)患者的病情和體重、嚴(yán)重性、藥物形式、給藥途徑 和時(shí)間而不同，并且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)選擇。然而，為了獲得理想的效果，通常建議 以0. 0001至1000mg/kg重量/天的量、優(yōu)選0. 001至100mg/kg重量/天的量施用本發(fā)明 的發(fā)明的提取物。所述劑量可以單次施用或分成每天幾次。
[0068] 本發(fā)明的藥物組合物可以經(jīng)由各種途徑施用給受試動(dòng)物（例如哺乳動(dòng)物（大鼠、 小鼠、家畜或人））?？紤]了給藥的所有模式，例如，給藥可以通過(guò)口服、經(jīng)直腸或通過(guò)靜脈 內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、鞘內(nèi)、硬膜外或腦室內(nèi)注射而進(jìn)行。
[0069] 本發(fā)明的發(fā)明提取物還可以在各種功能性健康食品和保健食品的制備中用作主 要成分或添加劑和輔助劑。
[0070] 因此，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供包含治療有效量的由上述方法制備的含有活性 成分的新純化提取物或選自藜蘆酸、毛蕊花甙、梓苷、胡黃連苷II、異香草酰梓醇和6-0-藜 蘆酰梓醇的至少一種化合物的健康功能食品，以預(yù)防或緩解慢性阻塞性肺病（C0PD)。
[0071] 因此，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供包含具有40-93 %的毛蕊花甙、1. 0-10 %的藜 蘆酸、2. 0-25 %的梓苷、1.0-15 %的胡黃連苷II、1.0-15 %的異香草酰梓醇和2. 0-25% 的6-0-藜蘆酰梓醇的混合重量比的組合的化合物，優(yōu)選具有45-90 %的毛蕊花甙、 1. 0-7. 0 %的藜蘆酸、3. 0-15 %的梓苷、2. 0-10 %的胡黃連苷II、2. 0-10 %的異香草酰梓醇 和2. 0-15%的6-0-藜蘆酰梓醇的混合重量比的組合的化合物的健康功能食品，以預(yù)防或 緩解慢性阻塞性肺?。–0PD)。
[0072] 在本文中定義的術(shù)語(yǔ)"功能性健康食品"是指通過(guò)將本發(fā)明的提取物加入到常規(guī) 食品中以預(yù)防或改善人或哺乳動(dòng)物的目標(biāo)疾病的"具有增強(qiáng)的功能性（例如物理功能性或 生理功能性）的功能性食品。
[0073] 本發(fā)明的其他目的是提供包含治療有效量的由上述方法制備的含有大量活性成 分的新純化提取物或選自藜蘆酸、毛蕊花甙、梓苷、胡黃連苷II、異香草酰梓醇和6-0-藜蘆 酰梓醇的至少一種化合物和飲食學(xué)上可接受的添加劑的保健食品，以預(yù)防或緩解慢性阻塞 性肺?。–0PD)。
[0074] 在本文中定義的術(shù)語(yǔ)"保健食品"是指"以作為添加劑的形式少量或以作為散劑、 顆粒、膠囊劑、丸劑、片劑等的形式全部量不顯示特定的預(yù)期效果但顯示一般預(yù)期的效果的 含有本發(fā)明的提取物的食品。
[0075] 在本文中定義的術(shù)語(yǔ)"飲食學(xué)上可接受的添加劑"包括"預(yù)期用途直接或間接地 導(dǎo)致或可合理地預(yù)期會(huì)導(dǎo)致_直接或間接地_其成為一種組分或以其他方式影響任何食 物的特性的任何物質(zhì)"，并且根據(jù)其來(lái)源可分類(lèi)為三組，即（1)化學(xué)合成的添加劑，例如酮、 甘氨酸、檸檬酸鉀、煙酸等；（2)天然添加劑，例如柿子染料、甘草提取物、結(jié)晶纖維素、瓜達(dá) 姆（gua dum)等；（3)與此有關(guān)的混合添加劑，例如L-谷氨酸鈉、防腐劑、焦油染料等，或 者根據(jù)其在食品中的功能可分類(lèi)為各種類(lèi)別，例如增稠劑（thickening agent)、熟化劑、漂 白劑、螯合劑、保濕劑、防結(jié)塊劑、澄清劑、固化劑、乳化劑、穩(wěn)定劑、稠化劑（thickener)、堿 和酸、發(fā)泡劑、營(yíng)養(yǎng)素、著色劑、風(fēng)味劑、甜味劑、防腐劑、抗氧化劑等，這些是在現(xiàn)有技術(shù)或 者先前的文獻(xiàn)中已公知的(見(jiàn)GSFA Online ：www. codexalimentarius. net/gsfaonline/ index.html 首頁(yè)頁(yè)面中的"Codex General Standard for Food Additives"（GSFA，CODEX STAN 192-1995))〇
[0076] 如果為了在食品中特定目的而將一種物質(zhì)添加到該食品中，則其被稱(chēng)為直接添加 劑，而間接食品添加劑是由于其包裝、儲(chǔ)存或以其他處理而以痕量成為食品的部分的那些 食品添加劑。
[0077] 為了預(yù)防或改善目標(biāo)疾病，在本文中公開(kāi)的術(shù)語(yǔ)"保健食品或健康功能食品"可 以包含在食品、保健飲料、膳食補(bǔ)充劑等中，并且可以配制成藥學(xué)劑型的形式，例如散劑、 顆粒劑、片劑、懸浮液、乳劑、糖漿劑、咀嚼片劑、膠囊劑、飲料等；或食品的形式，例如面 包、米糕（rice cake)、干果（dry fruit)、糖果、巧克力、口香糖、冰淇淋、奶（例如低脂 奶、水解乳糖奶、山羊奶、加工奶）、乳制品（例如發(fā)酵乳、黃油，煉乳、精制奶油、奶油、天 然乳酪、加工乳酪、干乳、乳清等）、加工的肉制品（例如漢堡包、火腿、香腸、臘肉等）、加 工蛋制品、魚(yú)肉制品（例如魚(yú)餅等）、面條制品（例如方便面、掛面、濕面條、炒面、非油炸 面條、糊化干面條、熟面條、冷凍面條、意大利面（Pasta)等）、茶產(chǎn)品（例如袋包茶、過(guò)濾 茶等）、健康飲料（例如水果飲料、蔬菜飲料、碳酸軟飲料、豆奶飲料、乳酸飲料、混合飲料 等）、調(diào)味食品（例如醬油、豆醬、紅辣椒醬、甜面醬（chunjang，一種由焦糖著色的發(fā)酵大 豆產(chǎn)品）、cheonggukjang(用枯草芽孢桿菌（B.subtillis)天然發(fā)酵的大豆）、混合醬、 醋、沙司（sauce)、番前醬、咖喱、調(diào)味品（dressing)等）、人造黃油（margarine)、起酥油 (shortening)、比薩餅等，但本發(fā)明并不限于此。
[0078] 另外，上述提取物可以添加到食品或飲料中用于預(yù)防和改善目標(biāo)病癥。在作為功 能性健康食品或保健食品的食品或飲料中的上述提取物的量一般為功能性健康食品組合 物的食品的總重量的約0.01至lOOw/w%。特別是，雖然在功能性健康食品、保健食品或 特殊營(yíng)養(yǎng)食品中的本發(fā)明的提取物的優(yōu)選量可以根據(jù)每種食品的預(yù)期目的而變化，對(duì)于 100%的比例的食品組合物，通常優(yōu)選在食品（例如面條等）中以約0.01至5%的范圍、在 保健食品中以40至100%的范圍的量作為添加劑使用本發(fā)明的提取物。
[0079] 如果本發(fā)明的健康飲料組合物以所指示的比率包含上述提取物作為必要成分，對(duì) 于其他液體組分沒(méi)有特別的限制，其中所述其它組分可以是各種除臭劑或天然碳水化合物 等（例如常規(guī)飲料）。上述天然碳水化合物的實(shí)例是單糖，例如葡萄糖、果糖等；雙糖，例如 麥芽糖、蔗糖等；常規(guī)糖類(lèi)，例如糊精、環(huán)糊精；以及糖醇，例如木糖醇和赤蘚醇等。作為除 了上述那些之外的其他除臭劑，天然除臭劑，例如索馬甜（taumatin)、甜葉菊提取物（例如 levaudioside A)、甘草甜素等；以及合成除臭劑，例如糖精、阿斯巴甜等可以有利地使用。 在100ml的本發(fā)明飲料組合物的比例中，上述天然碳水化合物的量一般在約1至20g、優(yōu)選 5至12g的范圍內(nèi)。
[0080] 除了前述組分之外的其它組分是各種營(yíng)養(yǎng)素、維生素、礦物質(zhì)或電解質(zhì)、合成風(fēng)味 劑、在奶酪、巧克力等的情況下的著色劑和改進(jìn)劑，果膠酸及其鹽、海藻酸及其鹽、有機(jī)酸、 保護(hù)性膠體粘合劑、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、醇、用于碳酸飲料中的碳化劑等。除 了前述成分之外的其它成分可以是用于制備天然果汁、果汁飲料和蔬菜飲料的果汁，其中， 所述成分可以單獨(dú)使用或組合使用。各成分的比例不重要，但通常為每lOOw/w%本發(fā)明組 合物中約0至20w/w%。含有上述提取物的可添加的食品的實(shí)例為各種食品、飲料、口香糖、 維生素復(fù)合物、健康改善食品等。
[0081] 本發(fā)明的發(fā)明提取物或化合物沒(méi)有毒性和，因此沒(méi)有副作用；因此可以安全使用 它們。
[0082] 對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明的精神或范圍內(nèi)，在本發(fā)明的組合物、 用途和制備中能夠進(jìn)行各種修改和變型是顯而易見(jiàn)的。
[0083] 通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更具體地說(shuō)明。然而，應(yīng)該理解的是，本發(fā)明并不以 任何方式限定于這些實(shí)施例。
[0084] 有益效果
[0085] 如本發(fā)明所述，通過(guò)利用BALB/c雄性小鼠進(jìn)行的各種體內(nèi)試驗(yàn)（例如，由COPD發(fā) 生導(dǎo)致的招募至肺的炎性免疫細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的增殖和活性的抑制試驗(yàn)；參與肺細(xì)胞 的損壞的趨化因子（如，MIP-2/CXCL-2、TNF- a、KC/CXCL-1 (趨化因子 Gro- a )和 CXCL-8 等）的再生的抑制試驗(yàn)；在利用SPF(無(wú)特定病原體）Sprague-Dawley大鼠的動(dòng)物試驗(yàn)中通 過(guò)降低NF-kB活性減少對(duì)IL-1 、IL-6、TNF- a和MMP-9表達(dá)的釋放的影響）以及在分子 表達(dá)譜變化試驗(yàn)中誘導(dǎo)對(duì)Th2細(xì)胞的IL-4-表達(dá)的影響的體外試驗(yàn)（例如，對(duì)MUC5AC(低 聚粘液/凝膠形成）的表達(dá)的抑制試驗(yàn)），來(lái)自東北婆婆納的提取物的含有大量活性物質(zhì) (如梓醇衍生物）的發(fā)明的純化提取物或選自藜蘆酸、毛蕊花甙、梓苷、胡黃連苷II、異香草 酰梓醇和6-0-藜蘆酰梓醇的至少一種化合物顯示出有效力的抗coro活性而無(wú)0 -2-受體 對(duì)抗應(yīng)答。因此，其可以用作用于治療和預(yù)防慢性阻塞性肺病（C0PD)的治療或功能性健康 食品。
【附圖說(shuō)明】
[0086] 結(jié)合附圖從以下詳細(xì)描述，可以更清楚地理解本發(fā)明的上述和其它目的、特征和 其他優(yōu)點(diǎn)，其中：
[0087]圖1顯示在比較例1中制備的東北婆婆納的粗提物的HPLC分析；
[0088] 圖2顯示中實(shí)施例1中制備本發(fā)明的的東北婆婆納的純化提取物（ATC1)的HPLC 分析；
[0089] 圖3顯示在實(shí)施例2中制備的本發(fā)明的東北婆婆納的純化提取物（ATC2)的HPLC 分析；
[0090] 圖4顯示建立ADRB2GPCR-表達(dá)細(xì)胞系模型的簡(jiǎn)要步驟；
[0091] 圖5顯示用已知的ADRB激動(dòng)劑處理的U20S細(xì)胞的斑點(diǎn)形成；
[0092] 圖6顯示用本發(fā)明的純化提取物和化合物處理的U20S細(xì)胞的斑點(diǎn)形成；
[0093] 圖7顯示使用HSC進(jìn)行的MUC5AC表達(dá)的數(shù)字化結(jié)果；
[0094] 圖8表示在使用TGFbl處理的A549細(xì)胞中MUC5AC表達(dá)的變化；
[0095] 圖9表示在使用本發(fā)明的純化提取物或化合物預(yù)處理然后使用TNF-a處理的 A549細(xì)胞中MUC5AC表達(dá)的變化；
[0096] 圖10表示在使用丙烯醛、本發(fā)明的純化提取物或化合物處理的A549細(xì)胞中 MUC5AC表達(dá)的變化；
[0097] 圖11顯示本發(fā)明的純化提取物或化合物對(duì)從初始⑶4+T細(xì)胞（⑶4+⑶62L+)誘導(dǎo) Th2分化的影響；
[0098] 圖12顯示本發(fā)明的純化提取物或化合物對(duì)小鼠Th2的分化的影響；
[0099] 圖13顯示本發(fā)明的純化提取物或化合物對(duì)小鼠Th2細(xì)胞的分化標(biāo)記IL-4表達(dá)的 影響；
[0100] 圖14顯示在LPS吸入（i. t)至Balb/c小鼠和香煙煙激發(fā)后，本發(fā)明的純化提取 物或化合物對(duì)免疫細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞的總數(shù)和T淋巴細(xì)胞的水平的影響；
[0101] 圖15顯示本發(fā)明的純化提取物或化合物對(duì)BALF的⑶4+&CD8 +T細(xì)胞數(shù)的影響 (A:總細(xì)胞數(shù)（xl05)/BALF(mL) ;B:嗜中性粒細(xì)胞數(shù)（xl04)/BALF(mL) ;C:CD4+&CD8+T 細(xì)胞 的絕對(duì)數(shù)（xl04)/BALF(mL)，數(shù)據(jù)被表達(dá)為平均細(xì)胞數(shù)土SEM(P〈0. 05, P〈0. 01，P〈0. 001對(duì) LPS+CS ；n = 10)；
[0102] 圖16顯示在LPS吸入（i. t)至Balb/c小鼠和香煙煙激發(fā)后，本發(fā)明的純化提取 物或化合物對(duì)CXCL-1、TNF- a、和MIP-2的水平的影響；
[0103] 圖17顯示本發(fā)明的純化提取物或化合物對(duì)炎性細(xì)胞數(shù)的影響；
[0104] 圖18顯示本發(fā)明的純化提取物或化合物對(duì)BALF的總細(xì)胞數(shù)的影響；
[0105] 圖19顯示本發(fā)明的純化提取物或化合物對(duì)肺組織的MMP-9活性的影響；
[0106] 圖20顯示本發(fā)明的純化提取物或化合物對(duì)肺組織的促炎性蛋白的表達(dá)的影響；
[0107] 圖21表示通過(guò)利用支氣管肺泡灌洗的組織學(xué)檢查，本發(fā)明的純化提取物或化合 物對(duì)肺組織細(xì)胞的炎性應(yīng)答的抑制效應(yīng)。
【具體實(shí)施方式】
[0108] 對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明的精神或范圍內(nèi)，對(duì)本發(fā)明的組合物、 用途和制備進(jìn)行各種修改和變型是顯而易見(jiàn)的。
[0109] 通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更具體地說(shuō)明。然而，應(yīng)該理解的是，本發(fā)明并不以 任何方式限定于這些實(shí)施例。
[0110] 實(shí)施例
[0111] 以下參考實(shí)施例、實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)實(shí)施例旨在進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明而不限制其范圍。
[0112] 比較例1.東北婆婆納的粗提物的制備
[0113] 1-1粗提物（ATE)的制備
[0114] 將lkg干東北婆婆納（按照GAP，在韓國(guó)忠清北道陰城郡蘇伊面244號(hào)（244， 5〇;[-1115^011￡111118601^-8111101111^(311601^13111<-(10)栽培）切成小塊，并與101^40%乙醇混 合。將混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，并在78°C下用回流提取進(jìn)行提取12小時(shí)，收集濾液， 重復(fù)三次。用濾紙過(guò)濾提取物以除去碎肩。將收集的濾液在55至65°C下通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (EYELA，N-2100,日本）減壓濃縮，并用冷凍干燥機(jī)干燥以獲得202g干燥粗提物（下文中稱(chēng) 為" ACE "），用于作為比較例。
[0115] 1-2成分分析
[0116] 通過(guò)使用HPLC(Agilent 1260型號(hào)，USA)，根據(jù)表1中的條件進(jìn)行成分分析，其結(jié) 果示于圖1中。
[0117] 如在圖1中所示，已確認(rèn)，分別在以下時(shí)間檢測(cè)到各個(gè)成分：9. 548分鐘（毛蕊花 甙）、10. 817分鐘（藜蘆酸）、16. 728分鐘（梓苷）、20. 346分鐘（胡黃連苷II)、21. 853分 鐘（異香草酰梓醇）和30. 462分鐘（6-0-藜蘆酰梓醇）。
[0118] 根據(jù)數(shù)學(xué)式1，基于HPLC圖譜（保留時(shí)間），計(jì)算樣品中每種成分的含量（％)。
[0119] [數(shù)學(xué)式1]
[0120] 每種成分的含量=標(biāo)準(zhǔn)的濃度（mg/ml)/測(cè)試樣品的濃度（mg/ml) XAt/AsX標(biāo)準(zhǔn) 的純度（％ )
[0121] 其中，"At"表示在測(cè)試樣品中的成分面積，"As"表示在標(biāo)準(zhǔn)中的成分面積，條件是 測(cè)試樣品和標(biāo)準(zhǔn)的采樣體積彼此相同。
[0122] 表 1
[0123] [表 1]
[0124] HPLC 條件
[0125]
[0126] 如在表2中所示，在結(jié)果中，已經(jīng)證實(shí)，東北婆婆納的粗提物僅包含8. 49% (w/w) 梓苷衍生物，即分別為5.9 % (w/w)毛蕊花甙、0.21 % (w/w)藜蘆酸、0.82 % (w/w)梓苷、 0. 40% (w/w)胡黃連苷II、0. 42% (w/w)異香草酰梓醇和0. 74% (w/w)6-〇-藜蘆酰梓醇。
[0127] 表 2
[0128] [表 2]
[0129] HPLC 結(jié)果（粗提物：ACE)
[0130]
[0131] 實(shí)施例1.東北婆婆納的純化提取物（ATC1)的制備
[0132] 將根據(jù)比較例1的常規(guī)方法制備的東北婆婆納的粗提物（ACE)懸浮于2L蒸餾水 中，在懸浮液中加入2L 丁醇，分餾成可溶于丁醇的餾分和水溶性餾分。收集可溶于丁醇的 餾分，減壓濃縮并干燥，得到82g本發(fā)明的用丁醇分餾的純化提取物（ATC1)用作實(shí)驗(yàn)例。
[0133] 通過(guò)使用HPLC(Agilent 1260型號(hào)，USA)，根據(jù)表1中的條件進(jìn)行成分分析，其結(jié) 果示于圖2中。
[0134] 如在圖2中所示，已確認(rèn)，分別在以下時(shí)間檢測(cè)到各個(gè)成分：9. 545分鐘（毛蕊花 甙）、10. 821分鐘（藜蘆酸）、16. 727分鐘（梓苷）、20. 345分鐘（胡黃連苷II)、21. 853分 鐘（異香草酰梓醇）和30. 462分鐘（6-0-藜蘆酰梓醇）。
[0135] 根據(jù)數(shù)學(xué)式1，基于HPLC圖譜（保留時(shí)間），計(jì)算樣品中每種成分的含量（％ )。
[0136] 如在表3中所示，在結(jié)果中，已經(jīng)證實(shí)，東北婆婆納的本發(fā)明的用丁醇分餾的純化 提取物（ATC1)包含25. 64% (w/w)梓苷衍生物，即分別為17. 60% (w/w)毛蕊花甙、0. 72% (w/w)藜蘆酸、2.62% (w/w)梓苷、1.08% (w/w)胡黃連苷II、1.26% (w/w)異香草酰梓醇 和2. 36 % (w/w) 6-0-藜蘆酰梓醇。
[0137] 表 3
[0138] [表 3]
[0139] HPLC結(jié)果（純化提取物：ATC1)
[0140]
[0142] 實(shí)施例2.東北婆婆納的純化提取物（ATC2)的制備
[0143] 將根據(jù)實(shí)施例1的東北婆婆納的本發(fā)明的用丁醇分餾的純化提取物（ATC1)溶 解于75ml混合溶劑（蒸餾水：甲醇=1:0. 003)，并將75g該溶液裝載在反相柱色譜 (C18 (IV )-D-75-120nm，AGCSi-Tech有限公司，日本，450g)，通過(guò)使用洗脫溶劑（蒸餾水： 甲醇=90:10 - 60:40)洗脫該懸浮液。收集在初始洗脫溶劑系統(tǒng)（蒸餾水：甲醇=90:10) 中運(yùn)行的8. 4L洗脫溶液，并減壓濃縮。收集在晚期洗脫溶劑系統(tǒng)（蒸餾水：甲醇= 60:40) 中運(yùn)行的5. 6L洗脫溶液，減壓濃縮并干燥，得到33g本發(fā)明的用二級(jí)分餾的純化提取物 (ATC2)用作實(shí)驗(yàn)例。
[0144]通過(guò)使用HPLC(Agilent 1260型號(hào)，USA)，根據(jù)表1中的條件進(jìn)行成分分析，其結(jié) 果示于圖3中。
[0145] 如在圖3中所示，已確認(rèn)，分別在以下時(shí)間檢測(cè)到各個(gè)成分：9. 525分鐘（毛蕊花 甙）、10. 818分鐘（藜蘆酸）、16. 721分鐘（梓苷）、20. 346分鐘（胡黃連苷II)、21. 857分 鐘（異香草酰梓醇）和30. 462分鐘（6-0-藜蘆酰梓醇）。
[0146] 根據(jù)數(shù)學(xué)式1，基于HPLC圖譜（保留時(shí)間），計(jì)算樣品中每種成分的含量（％ )。
[0147] 如在表4中所示，在結(jié)果中，已經(jīng)證實(shí)，東北婆婆納的本發(fā)明的用二級(jí)分餾的純化 提取物（ATC2)包含65. 63% (w/w)梓苷衍生物，即分別為43. 83% (w/w)毛蕊花甙、1.80% (w/w)藜蘆酸、7.07(w/w)梓苷、2.93% (w/w)胡黃連苷II、3.85% (w/w)異香草酰梓醇和 6.15% (w/w)6-〇-藜蘆酰梓醇。
[0148] 表 4
[0149] [表 4]
[0150] HPLC結(jié)果（純化提取物：ATC2)
[0151]
[0153] 實(shí)施例3.來(lái)自東北婆婆納的本發(fā)明的化合物的制備
[0154] 根據(jù)在韓國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)第10-2006-125499號(hào)中公開(kāi)的分離方法，從東北婆婆納的 提取物中純化本發(fā)明的化合物，即，具有以下物理-化學(xué)性質(zhì)的毛蕊花甙、藜蘆酸、梓苷、胡 黃連苷II、異香草酰梓醇和6-0-藜蘆酰梓醇，并且，為每種化學(xué)結(jié)構(gòu)的識(shí)別，比較每種化合 物的物理-化學(xué)性質(zhì)和在已經(jīng)發(fā)表的文獻(xiàn)中的化合物的物理-化學(xué)性質(zhì)。
[0155] 1?毛蕊花甙（=6-0_(3, 4-二羥基苯甲?；╄鞔迹?br>[0156] :H NMR (400MHz, DMS〇-d6) 8 ： 2. 47 (1H, dd, J = 8. 0, 9. 2Hz, H-9), 2. 59 (1H, dddd, J =1. 6, 4. 0, 8. 0, 8. 0, H-5), 3. 00 (1H, m, H-G4), 3. 05 (1H, m, H-G2) ,3. 14 (1H, m, H-G5) ,3. 18 (1H, m, H-G3), 3. 42, 3. 71 (2H, m, H-G6). 3. 67 (1H, s, H-7), 3. 71, 3. 91 (2 H, d, J = 13. 2Hz, each, H-10), 4. 61 (1H, d, J = 7. 6Hz, H-Gl), 4. 94 (1H, dd, J = 4. 0, 6. 0Hz, H-4), 5. 03 (1H, d, J = 8. OHz, H-6), 5. 09 (1H, d, J = 9. 2Hz, H-l), 6. 41 (1H, dd, J =1.6.6. OHz, H-3) , 6. 82 (1H, d, J = 8. OHz, H-5' ) , 7. 35 (1H, dd, J = 2. 0, 8. OHz, H-6'），7. 39 (1H, d, J = 2. OHz, H-2'）。
[0157] 13C-NMR(100MHz，DMS0-d6)S :93.0 (C-l)，141. l(C-3)，101.8 (C-4)，35.2 (C-5)，79 ? 5 (C-6)，58. 2 (C-7)，65. 8 (C-8)，41. 8 (C-9)，120. 0 (C-1'），116. 4 (C-2'），145. 1 (C-3'），150 ? 8 (C-4,），115. 4 (C-5,），122. 6 (C-6,），165. 6 (C-7,），97. 9 (C-Gl)，73. 4 (C-G2)，76. 4 (C-G3) ，70. 3 (C-G4)，77. 5 (C-G5)，61. 4 (C-G6)。
[0158] 2?胡黃連苷II ( = 6-0-(4-羥基-3-甲氧基苯甲酰基）梓醇）