腦組織中T-S0D含量。
[0049]SOD活力扣/m甜rot) =SOD抑制率今50 %X反應(yīng)體系稀釋倍數(shù) (0. 24ml/0. 02ml)今待測樣本蛋白濃度(m甜rot/ml)。用陽MS3. 1軟件進(jìn)行t檢驗統(tǒng)計學(xué) 處理。見表5 :
[0050] 表5徑基酪醇對小鼠腦組織中過氧化物酶活性的影響(xAs?,打口姑)
[0051]
[005引注:與空白對照組相比,*P< 0. 05;與模型組相比,#P< 0. 05。
[0053] 結(jié)果,模型組SOD活性顯著低于空白對照組(P< 0. 05)。徑基酪醇高劑量組和陽 性對照組與模型組比較均顯著增高(P< 0. 05)。而徑基酪醇低劑量組和中劑量組與模型組 相比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P> 0. 05),且徑基酪醇中劑量組與空白對照組相比較顯著降低(P < 0. 0巧。
[0054] 3. 6徑基酪醇對小鼠腦組織中還原型谷脫甘膚氧化酶(GSH-P、)活性的影響:
[00巧]取10%腦組織勻漿液200ml,按GSH-P、測定試劑盒說明書的具體操作步驟和 計算公式要求進(jìn)行,用紫外分光光度計在412nm處比色,測定腦組織中GSH-P、活性。 組織中GSH-Px活
X標(biāo)準(zhǔn)管濃度(20umot/L)X綺釋僖徽巧稽)-反應(yīng)時間子(取樣量X樣本蛋白濃度)。[005引用陽MS3. 1軟件進(jìn)行t檢驗統(tǒng)計學(xué)處理。見表6 :
[0057] 表6 徑基酪醇對小鼠腦組織中還原型谷脫甘膚氧化酶(GSH-P、)活性的影響 (X±Sy 11=12)
[0058]
[0059]注:與空白對照組相比,*P< 0. 05;與模型組相比,#P< 0. 05,##P< 0. 01。
[0060] 結(jié)果,模型組GSH-Px活性顯著低于空白對照組(P< 0. 05)。徑基酪醇低劑量、中 劑量、高劑量組和陽性對照組與模型組比較均顯著增高(P< 0. 05或P< 0. 01),而與空白 對照組相比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P> 0. 05)。
[00川 4小結(jié)及討論:
[0062] 4. 1 小結(jié):
[0063] 4. 1. 1動物行為學(xué)實驗發(fā)現(xiàn),采用3mg/kg東賞窘堿腹腔注射制備短暫性記憶獲得 性缺失小鼠模型時,模型組較空白對照組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降。給藥各組小鼠學(xué)習(xí) 記憶能力均有不同程度的增強趨勢。
[0064] 4. 1. 2通過對各組動物腦組織中各項指標(biāo)的檢測,結(jié)果模型組超氧化物歧化酶 (T-S0D)和還原型谷脫甘膚氧化酶(GSH-P訝活性均明顯低于正常對照組,模型組乙酷膽堿 醋酶(A化巧活性和丙二醒(MAD)含量明顯高于空白對照組,表明東賞窘堿腹腔注射制備小 鼠記憶缺失動物模型與臨床檢測指標(biāo)相似,可部分模擬老年癡呆的臨床癥狀。
[0065] 4. 1. 3各給藥組均能明顯改善和增強模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
[0066] 4. 1. 4徑基酪醇各給藥組均能明顯升高腦組織中超氧化物歧化酶(T-S0D)和還原 型谷脫甘膚氧化酶(GSH-P訝活性,降低乙酷膽堿醋酶(A化巧活性和丙二醒(MAD)含量。
[0067] 由W上實驗結(jié)果表明,采用3mg/kg東賞窘堿腹腔注射制備短暫性記憶獲得性缺 失小鼠模型,能夠模擬臨床觀察的部分指標(biāo),通過給藥組與模型組的比較,徑基酪醇各組能 夠改善造模對小鼠各項指標(biāo)的影響,表明徑基酪醇有很好的治療作用,與陽性對照藥療效 相當(dāng)。
[0068] 實施例2徑基酪醇提高腦缺血缺氧小鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力:
[006引 1實驗?zāi)康模?br>[0070] 通過雙側(cè)頸總動脈反復(fù)夾閉再通可W造成急性腦缺血W及缺氧損傷,引起神經(jīng)元 缺血缺氧后功能減退,包括學(xué)習(xí)記憶功能降低。本實驗旨在觀察徑基酪醇對雙側(cè)頸總動脈 反復(fù)夾閉再通小鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力的影響。
[0071] 2實驗方法及結(jié)果:
[0072] 2. 1造模及給藥方法:
[007引KM小鼠,體質(zhì)量20±2g,實驗分6組,每組12只:(1)正常組;似模型組; (3) 0. 5mg/kg的徑基酪醇給藥組;(4) 5mg/kg的徑基酪醇給藥組;(5) 50mg/kg的徑基酪醇 給藥組;(6)lOOmg/kg的徑基酪醇給藥組;正常組和模型組連續(xù)灌胃等計量生理鹽水7山各 徑基酪醇給藥組連續(xù)灌胃徑基酪醇7d,除正常組外,其余實驗組小鼠,末次給藥后比,用質(zhì) 量百分比為4%的水合氯醒腹腔注射麻醉,體積百分比為75 %的酒精頸前皮膚消毒,頸正 中切口,分離雙側(cè)頸總動脈,用微動脈夾反復(fù)夾閉雙側(cè)頸總動脈,夾閉在通(夾閉2次,每 次15min,中間再通lOmin),模型組和各徑基酪醇給藥組術(shù)后第7d與正常組一起開始進(jìn)行 Morris水迷宮和小鼠跳臺測試,檢測其學(xué)習(xí)記憶能力。
[0074] 2. 2小鼠跳臺測試:
[00巧]學(xué)習(xí)記憶能力測試:將正常組、術(shù)后的模型組和各徑基酪醇給藥組中的小鼠放在 箱內(nèi)適應(yīng)3min后通W36V的交流電,當(dāng)小鼠為了躲避電擊刺激時而跳上絕緣平臺時,開 始計時,記錄從計時開始至小鼠跳下平臺遭受電擊的時間,作為小鼠潛伏期(Stepdown latency,SDL),S化大于300s,則按300s記錄,同時記錄5min內(nèi)小鼠跳下平臺遭受電擊的 次數(shù)(即錯誤次數(shù)),W此作為學(xué)習(xí)成績,24h后再重復(fù)進(jìn)行1次,測其記憶保持能力。
[0076] 結(jié)果,與空白對照組相比較,模型組小鼠逃避潛伏期明顯縮短(P< 0. 05),錯誤次 數(shù)明顯減少(P< 0.05)。與模型組相比較,化拉西坦組可延長小鼠逃避潛伏期和減少錯誤 次數(shù)(P<〇. 05),而徑基酪醇低、中劑量組可顯著延長小鼠逃避潛伏期(P<0.01)和減少 錯誤次數(shù)(P< 0. 05或P< 0. 01),而徑基酪醇高劑量組和Ve組與模型組相比較無統(tǒng)計學(xué) 差異。
[0077] 2. 3Morris水迷宮測試:
[0078] 第84d,給藥后化參照Morris水迷宮實驗方法測定小鼠空間識別能力,分為定位 航行和空間探索兩部分。實驗室溫度保持在23-25°C,水迷宮中加入墨汁,水面高過安全平 臺1cm,水溫保持在22°C左右,水中不能明顯見到安全平臺。實驗過程中室內(nèi)所有物體的擺 放位置固定,W免對小鼠產(chǎn)生干擾。實驗時平臺位置固定不變,置于第二象限中央。選擇第 =、四象限的池壁中作為入水點,實驗時將動物面朝池壁輕輕放入水中,避免應(yīng)激和將小鼠 頭部浸入水中。實驗歷時6山每天訓(xùn)練2次,小鼠面向池壁入水,每次入水點不相同,記錄小 鼠自入水到找到站臺后四肢爬上站臺時所需的時間,作為潛伏期。同時在記錄小鼠入水后 的游泳軌跡,將此作為分析小鼠捜索目標(biāo)時所采用何種策略的依據(jù)。將捜索策略分為4類: (1)邊緣式,小鼠沿水池邊緣運動,無尋找動機:似隨機式,小鼠捜索時無明確方向;做趨 向式,小鼠己記得平臺的大概位置,在發(fā)現(xiàn)平臺前轉(zhuǎn)彎少于4次;(4)直線式,大鼠已明確記 得平臺的位置,直接游向平臺。
[0079] 定位航行實驗共5d,每天連續(xù)重復(fù)訓(xùn)練兩次。將小鼠放在站臺上站立15s。然后 從不同象限將小鼠放入水池,第1次將小鼠放入第二象限固定的起點,第2次將小鼠放入第 立象限固定的起點,使其自由游泳,尋找隱藏于水中的平臺。若小鼠在入水后90s內(nèi)未找到 水池中的站臺或未能爬上站臺,可將小鼠放置于站臺上站立15s,然后將動物從站臺上拿下 來,休息化W后,再進(jìn)行下一次訓(xùn)練。每天取兩次潛伏期平均值作為當(dāng)天學(xué)習(xí)記憶成績。
[0080] 定位航行實驗后即第6山開始空間捜索實驗,測Id, 2次/d。第1次將小鼠從第S 象限的起點置入水中,記錄小鼠在90s內(nèi)的潛伏期和上臺的捜索策略。第2次移除平臺, 將小鼠從第四象限的起點置入水中,記錄小鼠在90s內(nèi)穿越平臺所在區(qū)域的次數(shù)和捜索策 略,及小鼠在原平臺所在象限的捜索時間及捜索距離(W小鼠在原平臺所在象限的游泳距 離占總距離的百分比校正捜索距離W消除每只小鼠游泳速度的差異)。用SPASS16. 0軟件 進(jìn)行t檢驗統(tǒng)計學(xué)處理。
[0081] 結(jié)果,與空白對照組相比較,模型組小鼠尋找平臺平均潛伏期均有不同程度的延 長,從d2W后明顯增加(P< 0. 01)。與模型組相比較,徑基酪醇各給藥組平均潛伏期均縮 短,d2W后其差別愈明顯(P< 0. 05或P< 0. 01),Ve組平均潛伏期也縮短,d2W后差異明 顯(P< 0. 05或P< 0. 01),而化拉西坦片組的平均潛伏期縮短d3W后差異明顯(P< 0. 05 或P< 0.01)。另外,與空白對照組相比較,模型組穿臺次數(shù)明顯減少(P< 0.01)。與模型 組相比較,徑基酪醇各給藥組穿臺次數(shù)明顯增多(P< 0. 05或P< 0. 01),Ve組和化拉西坦 組穿臺次數(shù)也明顯增多(P< 0. 05)。
[0082] 2. 4徑基酪醇對小鼠血清中乙酷膽堿醋酶(A化巧活性的影響:
[0083] 取血清30y1,按A化E測定試劑盒說明書的具體操作步驟和計算公式要求進(jìn)行, 用酶標(biāo)儀在412nm處讀數(shù),測定血清中M:hE活性。血清中M:hE活力扣/ml)=(測定管吸 光度-對照管吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-空白管吸光度)X標(biāo)準(zhǔn)管濃度(1ymol/ml)。用 SPASS16. 0軟件進(jìn)行t檢驗統(tǒng)計學(xué)處理。
[0084] 結(jié)果,模型組A化E活性顯著性高于空白對照組(P<