越橘花青素組合物及其在制備防治近視藥物或食品的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別設(shè)及越橘花青素組合物及其在制備防治近視藥物 或食品的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 近視是最常見的視覺障礙，影響全世界超過30%的青少年和成人。近視已成為危 害我國青少年視力健康的重大公共衛(wèi)生問題。青少年近視不僅給學(xué)習(xí)和生活帶來諸多不 便，而且高度近視還會(huì)引起一系列嚴(yán)重的眼部并發(fā)癥，運(yùn)已成為主要致盲原因之一。如何預(yù) 防近視、阻控近視的發(fā)展成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)眼科學(xué)界需要攻克的重大課題。我國具有高于世界 其他地區(qū)、種族的近視發(fā)病率和最多的人口總量，對(duì)近視人群發(fā)病機(jī)制研究具有非常重大 的社會(huì)意義。
[0003] 花青素是自然界一類廣泛存在于植物中的水溶性天然色素。研究表明花青素作 用于視黃醒異構(gòu)酶，可加速視紫紅質(zhì)生成速率，W促進(jìn)視覺敏銳度。它還是強(qiáng)效的抗氧化 劑，可維持正常的細(xì)胞連結(jié)、血管穩(wěn)定、增進(jìn)微細(xì)血管循環(huán)、提高微血管和靜脈的流動(dòng)。還可 抑制膠原酶降解加固膠原纖維，增強(qiáng)毛細(xì)血管抗性。國外研究表明其可影響與近視相關(guān)的 眼部特征，且兒童服用無毒副作用；其對(duì)近視眼的作用是否是一個(gè)多因素、多途徑影響的過 程，目前國內(nèi)外尚未有全面深入的研究。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)CN103860625A提供了一種越橘提取物眼用制劑，主要有越橘提取物和 蜂膠提取物組成。未知越橘提取物何種具體化合物為起作用的真正物質(zhì)，更未知哪些物質(zhì) 的組合可W產(chǎn)生協(xié)同作用，提高防治眼科疾病效果。 陽0化]現(xiàn)有技術(shù)CN103570664A公開了一種從越橘中提取原花青素的方法。但未有分離 到具有優(yōu)異防治眼科疾病效果的活性物質(zhì)，未知何種具體花青素化合物為起作用的真正物 質(zhì)，更未知哪些物質(zhì)的組合可W產(chǎn)生協(xié)同作用，提高防治眼科疾病效果。
[0006] 具體花青素中那種提純物起到主要控制近視和預(yù)防近視發(fā)生的作用，是否可W將 運(yùn)種物質(zhì)做成更容易被眼部吸收的劑型應(yīng)用臨床，對(duì)于臨床預(yù)防和治療近視具有非?，F(xiàn)實(shí) 的意義，同時(shí)將給近視防控帶來深遠(yuǎn)的社會(huì)意義。所W，本領(lǐng)域仍需進(jìn)一步的深入研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的技術(shù)問題，本發(fā)明第一方面：對(duì)所有越橘花青素中的有效成 分進(jìn)行篩選，選定出最有效的防治眼科疾病，特別是控制近視眼軸延長和鞏膜重塑的組合 物W及單體成分。
[0008] 具體的：提供了一種越橘花青素組合物，所述越橘花青素組合物W氯化花青素計(jì) (CisHiiClOe)，氯化花青素大于總黃酬質(zhì)量的4%。
[0009] 其中，優(yōu)選化合物主要含有飛燕草素（delphinidine)、矢車菊素（cyanidins)、二 甲花翠素（malvidine)、巧藥素（peonidine)，各花青素的實(shí)際量為0.OOlmg-lOOOmg。
[0010] 該組合物化合物的總的分子結(jié)構(gòu)如下：
[0011]
陽012] R-OH,R2-H,OHorOMe(Me=Methyl:-邸3)
[0013] 其中，本發(fā)明所述的飛燕草素值el地inidin)的結(jié)構(gòu)式如下：
[0014]
[0015] 其中，R1 = 0H，R2 = 0H。
[0016] 本發(fā)明所述的矢車菊素（切anidin)的結(jié)構(gòu)式如下：
[0017]
[0018] 其中，R1 = 0H，R2 =H。
[0019] 本發(fā)明所述的二甲花翠素（malvidine)的結(jié)構(gòu)式如下：
[0020]
[0021] 其中，R1 = 0-邸3,R2 = 0-邸3。
[0022] 本發(fā)明所述的巧藥素（peonidine)的結(jié)構(gòu)式如下：
[0023]
[0024]其中，Rl= 〇-邸3,R2 =無
[00巧]本發(fā)明所用的飛燕草素（delphinidine)、矢車菊素kyanidins)、二甲花翠素 (malvidine)、巧藥素（peonidine)。包括其藥學(xué)上可接受的鹽或鹽的溶劑化物，溶劑化物優(yōu) 選為水合物，W及其各種物理形態(tài)，如晶型或無定型態(tài)。所述飛燕草素、矢車菊素、二甲花翠 素W及巧藥素均可W通過市售獲得，或者通過現(xiàn)有技術(shù)已知的制備工藝分離獲得。
[00%] 本發(fā)明越橘花青素組合物難W通過簡(jiǎn)單的提取獲得，需要通過現(xiàn)有技術(shù)如大孔樹 脂或者硅膠吸附樹脂的方式進(jìn)行花青素富集，然后加入到常規(guī)的越橘花提取物中才能得 到。
[0027] 本發(fā)明第二方面：所述越橘花青素組合物在制備防治近視藥物或食品的應(yīng)用。
[0028] 所述防治近視優(yōu)選通過控制近視眼軸延長，或者鞏膜重塑來實(shí)現(xiàn)。
[0029] 本發(fā)明第=方面：提供一種含有所述組合物的臨床應(yīng)用制劑，具體的本發(fā)明的藥 物組合物為了臨床使用需要，可W制備為口服、注射、外用等多種劑型的制劑，如片劑、膠囊 劑、注射粉針劑、注射夜，滴眼劑等，所述藥物組合物中可W含有一種W上藥學(xué)上可接受的 賦形劑，所述賦形劑包括各種支持劑、助溶劑等。
[0030] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，為了臨床需要，采用本發(fā)明的組合物可W進(jìn)一步與其他眼 科疾病的藥物聯(lián)用，所述優(yōu)選藥物，包括但不限于抗炎劑，抗眼疲勞劑，眼補(bǔ)水劑等臨床常 用藥物。
[0031] 本發(fā)明組合物相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)的有益效果在于： 陽03引 （1)、本發(fā)明提供的越橘花青素組合物，W氯化花青素計(jì)（CisHiiCl化)，氯化花青素 大于總黃酬質(zhì)量的4%，其中，含有飛燕草素（del地inidine)、矢車菊素（cyanidins)、二甲 花翠素（malvidine)、巧藥素（peonidine),各花青素的實(shí)際量為O.OOlmg-lOOOmg。所述組 合物起到了協(xié)同作用，相對(duì)于單用某一單體成分，越橘提取物花青素組合物具有更為優(yōu)異 的防治眼科疾病的用途。
[0033] (2)、本發(fā)明的藥物組合利用體外細(xì)胞和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在體研究，觀察越橘花青素 對(duì)豚鼠形覺剝奪性近視（抑M)模型的防治作用；分離視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮、視網(wǎng)膜色素上皮-脈 絡(luò)膜復(fù)合體和鞏膜組織；對(duì)可能參與的信號(hào)通路的分子生物學(xué)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明 組合物通過控制近視眼軸延長或者鞏膜重塑來實(shí)現(xiàn)上述優(yōu)異效果。
【具體實(shí)施方式】：
[0034] W下優(yōu)選實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，應(yīng)當(dāng)理解為不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0035] 本發(fā)明提供的越橘花青素組合物，其中，氯化花青素大于總黃酬質(zhì)量的4%，其 中，氯化花青素主要含有飛燕草素（delphinidine)、矢車菊素（cyanidins)、二甲花翠素 (malvidine)、巧藥素（peonidine),其中，各花青素的實(shí)際量為O.OOlmg-lOOOmg。可W通過 現(xiàn)有技術(shù)如大孔樹脂或者硅膠吸附樹脂的方式進(jìn)行富集，然后加入到常規(guī)的越橘花提取物 中。
[0036] 實(shí)施例1:細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)鑒定越橘花青素組合物的效果
[0037] 1材料與方法
[0038] 儀器：細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備
[0039]細(xì)胞系：人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（A-RPE19)、人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞（HFSF)、視 網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞
[0040] 給藥濃度：0.001mo；L-0.1mol(例如，下述W 0.0 lmol實(shí)驗(yàn)的技術(shù)方案）
[0041] 方法：細(xì)胞共浴方法，M1T法，流式細(xì)胞儀（FCM)方法，高效液相色譜法，PCR和 WesternBlot W42]效果計(jì)算方法:M1T法找到不產(chǎn)生細(xì)胞毒性的濃度，檢測(cè)共浴后MMP-2，Collagen-I，CTGF，TGF-P，RAR-P，Smad3含量。推斷有效性W及作用機(jī)制。
[0043] 結(jié)果：體外培養(yǎng)的鞏膜細(xì)胞，在TGF-P因子的存在下，加越橘花青素組合物的組 mmp2蛋白表達(dá)量（0.36)比較不加花青素組表達(dá)量mmp2(0.64)明顯降低，collagenI蛋白 表達(dá)量（0.35)比較不加花青素組的表達(dá)量collagen1(0. 32)明顯增高。
[0044] 總結(jié)：通過上述結(jié)果，本發(fā)明提供的越橘花青素組合物，其中，氯化花青素大 于總黃酬質(zhì)量的4%，其中，氯化花青素主要含有飛燕草素（delphinidine)、矢車菊素 kyanidins)、二甲花翠素（malvidine)、巧藥素（peonidine)，其中，各花青素的實(shí)際量為 0.OOlmg-lOOOmg。所述氯化花青素化合物的組合起到了協(xié)同作用，相對(duì)于不含或者低于相 應(yīng)氯化花青素含量的越橘提取物組合物具有更為優(yōu)異的防治效果。
[0045] 實(shí)施例2 :動(dòng)物實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)鑒定越橘花青素組合物的效果
[0046] 1材料與方法
[0047] 儀器：A超生物測(cè)量?jī)x
[0048] 給藥濃度：300-500mg/kg(例如，下述W 400mg mg/kg技術(shù)方案）
[0049] 方法：豚鼠形覺剝奪性近視（抑M)模型，分為正常對(duì)照組、花青素灌胃28天。第28 天每組隨機(jī)選取3只豚鼠6只眼球，行肥染色及免疫組化觀察眼部組織結(jié)構(gòu)及mmp2蛋白 及collagen I蛋白的表達(dá)，眼球后極部鞏膜組織采用實(shí)時(shí)定量基因擴(kuò)增巧光法及蛋白印跡 法檢測(cè)觀mmp2蛋白和collagen I蛋白的含量。 陽化0] 效果：遮蓋灌藥組和不灌藥組相比，其遮蓋眼的mmp2蛋白表達(dá)量（0. 662 + 0. 016) 明顯降低，collagen I蛋白表達(dá)量（0.801 + 0.020);相對(duì)于不灌藥組遮蓋眼的表達(dá)量： 117 + 0. 014)，collagen1(0. 511 + 0. 019)，均有明顯增高。
[0051] 總結(jié)：通過上述結(jié)果，W及分離視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮、視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡(luò)膜復(fù)合體 和鞏膜組織；對(duì)可能參與的信號(hào)通路的分子生物學(xué)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明組合物通過 控制近視眼軸延長或者鞏膜重塑來實(shí)現(xiàn)上述效果。
[0052] 特別是本發(fā)明提供的越橘花青素組合物，其中，氯化花青素大于總黃酬質(zhì)量的 4%，其中，氯化花青素主要含有飛燕草素（delphinidine)、矢車菊素（cyanidins)、二甲花 翠素（malvidine)、巧藥素（peonidine)，其中，各花青素的實(shí)際量為0.OOlmg-lOOOmg。所述 氯化花青素化合物的組合起到了協(xié)同作用，相對(duì)于不含或者低于相應(yīng)氯化花青素含量的越 橘提取物組合物具有更為優(yōu)異的防治效果。
[0053] 應(yīng)當(dāng)理解的是，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員均可由說明書及本申請(qǐng)的權(quán)利要求所公開的 內(nèi)容，根據(jù)需要加w適當(dāng)?shù)淖兓蛘咛娲绞?，而運(yùn)些變化和替代方式均含于本發(fā)明的范 疇。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 越橘花青素組合物，其特征在于，氯化花青素大于總黃酮質(zhì)量的4%。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的越橘花青素組合物，其特征在于，組合物中主要含有 飛燕草素（delphinidine)、矢車菊素（cyanidins)、二甲花翠素（malvidine)、茍藥素 (peonidine)，各花青素的實(shí)際量為0?OOlmg-1000 mg03. 權(quán)利要求1一2任一權(quán)利要求所述的越橘花青素組合物在制備防治近視藥物或食品 的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的所述防治近視藥物或食品的應(yīng)用，其特征在于，防治近視通 過控制近視眼軸延長來實(shí)現(xiàn)。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的所述防治近視藥物或食品的應(yīng)用，其特征在于，防治近視通 過鞏膜重塑來實(shí)現(xiàn)。6. -種臨床應(yīng)用的制劑，其特征在于，所述制劑含有權(quán)利要求1一2任一權(quán)利要求所述 的越橘花青素組合物。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種臨床應(yīng)用的制劑，其特征在于，所述制劑制備為口服、注 射或外用給藥劑型。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種臨床應(yīng)用的制劑，其特征在于，所述劑型包括片劑、膠囊 劑、注射粉針劑、注射夜，滴眼劑。
【專利摘要】本發(fā)明提供了越橘花青素組合物及其在制備防治近視藥物或食品的應(yīng)用，其中，氯化花青素大于總黃酮的4％，并提出有效的單體成分矢車菊素,飛燕草素，二甲花翠素和芍藥素。本發(fā)明組合物以及單體均能通過控制近視眼軸延長或者鞏膜重塑來實(shí)現(xiàn)優(yōu)異效果，并且組合物的效果最好，對(duì)于臨床預(yù)防和治療近視具有非常現(xiàn)實(shí)的重要意義。
【IPC分類】A61P27/02, A61K31/352
【公開號(hào)】CN105213367
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510715911
【發(fā)明人】鄧宏偉, 孟晶, 沈靜
【申請(qǐng)人】鄧宏偉, 孟晶, 沈靜
【公開日】2016年1月6日
【申請(qǐng)日】2015年10月28日