在制備抗腫瘤藥物中的應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物的制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及有機銅劑Cu2(CH3C00) 4(BET)2 在制備抗腫瘤藥物中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 銅是人體必需的微量元素，其代謝平衡對機體至關(guān)重要。臨床上，許多疾病與銅代 謝紊亂有關(guān)，包括冠心病、肝硬化、糖尿病、腫瘤等。
[0003] 學者們研究發(fā)現(xiàn)癌癥患者血清銅水平明顯高于正常人，而且對化療藥不敏感的乳 腺癌、結(jié)腸癌及肺癌病人，其血清銅水平高于對化療藥敏感的病人。研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌病人 血清總銅顯著高于正常人，而血清銅水平升高的主要原因是血清銅藍蛋白結(jié)合銅（緊密結(jié) 合銅）升高。由此，許多學者認為腫瘤病人體內(nèi)銅過剩，由銅產(chǎn)生的氧自由基損傷可能在腫 瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，因此提出了利用銅螯合劑或限銅飲食來控制腫瘤發(fā)展。有體 外研究表明銅螯合劑可減少腫瘤血管內(nèi)皮細胞生成因子的產(chǎn)生，臨床上應用可有效降低腫 瘤病人血清銅藍蛋白結(jié)合銅水平。與此相反，許多學者實驗證明，銅是具有抗腫瘤活性的金 屬，實驗中也發(fā)現(xiàn)無機銅可抑制癌細胞增殖。
[0004] 因此，我們認為腫瘤病人血清銅升高，可能僅是腫瘤生長過程中體內(nèi)銅重新分布 的一個中間環(huán)節(jié)，并不代表體內(nèi)總體銅水平的過剩，而有可能是機體銅匱乏時代償?shù)囊环N 表現(xiàn)。我們對血清及組織銅測定方法進行改進后發(fā)現(xiàn)，肝癌及宮頸癌患者血清總銅增高，但 非蛋白結(jié)合銅及可交換銅（即蛋白疏松結(jié)合銅）顯著低于正常人。該結(jié)果進一步說明腫瘤 病人體內(nèi)銅失衡狀態(tài)不能簡單地用總銅水平來衡量。
[0005] 我們發(fā)現(xiàn)腫瘤病人體內(nèi)存在銅代謝紊亂，癌癥病人血清總銅顯著高于常人，血清 總銅升高的主要原因是血清銅藍蛋白結(jié)合銅升高，而血清非蛋白結(jié)合銅及可交換銅顯著低 于正常人。體外實驗表明，氯化銅可顯著抑制肝癌細胞IfepG2增殖。X染色體連鎖的凋亡抑 制基因（XIAP)是細胞內(nèi)銅的感受器，XIAP直接或間接影響細胞內(nèi)C0MMD1、ATP7A/ATP7B、 CTR-1等銅轉(zhuǎn)運體的蛋白表達及銅轉(zhuǎn)運伴侶分子CCS的遞銅活性。XIAP過表達于多種腫瘤 細胞株及腫瘤組織中，并被認為與腫瘤細胞耐藥有關(guān)。由于銅可結(jié)合XIAP并促進其降解， 我們進一步發(fā)現(xiàn)腫瘤中XIAP過表達可能在腫瘤機體銅代謝失衡中發(fā)揮中心調(diào)節(jié)作用，而 銅劑抑瘤機制可能與其結(jié)合并降解XIAP在轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮抗瘤作用有關(guān)。
[0006] 然而，氯化銅等無機銅劑具有一定的毒性，且抗腫瘤效果較差，限制了銅劑在抗腫 瘤方面的應用。因此，需要尋找具備低毒安全、高效抗腫瘤的銅劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供有機銅劑Cu2(CH3C00) 4(BET)2在制備抗腫瘤藥 物中的應用，其制備的抗腫瘤藥物低毒安全且抗腫瘤效果好。采用的技術(shù)方案如下：
[0008] 有機銅劑Cu2 (CH3C00) 4 (BET) 2在制備抗腫瘤藥物中的應用，所述有機銅劑 Cu2(CH3C00)4(BET)2 的結(jié)構(gòu)式為：
[0010] 所述腫瘤可為肝癌、肺癌、淋巴瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、食管癌、鼻咽癌、宮頸癌、 胰腺癌、膀胱癌等惡性腫瘤，特別是肝癌。
[0011] 上述抗腫瘤藥物可為注射劑、口服液、片劑或膠囊。
[0012] 有機銅劑Cu2(CH3C00)4(BET)^甜菜堿（BET)與銅形成的絡合物。甜菜堿是廣泛分 布于自然界一種堿性物質(zhì)，無毒，物化性質(zhì)穩(wěn)定。使用甜菜堿與銅形成絡合物，可有效降低 銅劑的毒性，顯著提高銅的抗癌作用，促進腫瘤細胞凋亡，同時改善機體銅代謝失衡狀態(tài)。 我們研究發(fā)現(xiàn)，有機銅劑Cu2(CH3C00)4(BET)2$全低毒、理化性質(zhì)穩(wěn)定、制備簡單、協(xié)同銅劑 的抗腫瘤效應、能夠提高癌細胞對化療藥物的敏感性、降低癌細胞的耐藥性、同時能夠改善 機體銅代謝。
[0013] 本發(fā)明具有以下有益效果：有機銅劑Cu2(CH3C00) 4(BET)2用于制備抗腫瘤藥物，由 于有機銅劑Cu2(CH3C00)4(BET)2可高效誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞生長，表現(xiàn)出很強 的腫瘤殺傷和抑制活性，而對正常細胞的毒性作用非常微弱，因此制備的抗腫瘤藥物（如 抗肝癌藥物）具有很強的抗腫瘤活性及低副作用，具有低毒安全且抗腫瘤效果好的優(yōu)點。
【具體實施方式】
[0014] 有機銅劑Cu2 (CH3C00) 4 (BET) 2在制備抗腫瘤藥物（如抗肝癌藥物）中的應用。
[0015] 有機銅劑Cu2 (CH3C00) 4 (BET) 2的結(jié)構(gòu)式為：
[0016]
[0017] 上述抗腫瘤藥物可為注射劑、口服液、片劑或膠囊。
[0018] 有機銅劑Cu2 (CH3C00) 4 (BET) 2的抗腫瘤活性研究：
[0019] -、體外實驗
[0020] 利用肝癌細胞系IfepG2細胞，檢測藥物的抗腫瘤作用。HepG2細胞接種后，進行不 同的處理分組，設立對照組（不給予藥物）、氯化銅組（加入50 μ mol/L的氯化銅）、甜菜 堿組（加入50 ymol/L的甜菜堿）、有機銅劑Cu2(CH3C00)4(BET)^ (加入50 ymol/L的 Cu2(CH3C00)4(BET) 2)，孵育48小時，收集細胞。然后對細胞進行以下檢測：① Western-blot 檢測細胞中XIAP的蛋白表達；②RT-PCR檢測XIAP的mRNA表達，分析氯化銅的影響是在轉(zhuǎn) 錄前還是轉(zhuǎn)錄后水平；③分光光度法檢測細胞勻漿中caspase-3, 7, 9活性；④MTT法檢測 細胞生長抑制率。
[0021] 使用Western-blot檢測！fepG2細胞中XIAP的表達情況，檢測表達下調(diào)效率，下調(diào) 率（％) = (1 -給藥組細胞XIAP表達量/對照組細胞XIAP表達量）X100%，下調(diào)率越高， 表明藥物越能抑制XIAP表達及具有越高的抗腫瘤作用。XIAP蛋白下調(diào)率檢測結(jié)果為：氯 化銅組27. 5 %，甜菜堿組5. 2 %，有機銅劑Cu2 (CH3C00) 4 (BET) 2組49. 7 %。檢測結(jié)果表明有 機銅劑Cu2(CH3C00)4(BET)2相比其它藥物能夠顯著抑制XIAP表達，有更為有效的抗腫瘤作 用。
[0022] 使用RT-PCR檢測HepG2細胞XIAP的mRNA表達情況，檢測表達下調(diào)效率，下調(diào)率 (%) = (1-給藥組細胞XIAP的mRNA表達量/對照組細胞XIAP的mRN