組合物及其在抗病毒藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 單純皰疼病毒1型（Herpes simplex virus，HSV-1)和單純皰疼病毒2型（Herpes simplex virus，HSV-2)屬于皰疹科病毒，HSV-1和HSV-2不僅引起口唇或生殖粘膜皰疹，同 時(shí)也是引起腦炎、肝炎、全身嚴(yán)重感染甚至宮內(nèi)感染的重要病原。
[0003] 呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV)主要引起呼吸系統(tǒng)感染， 在嬰幼兒、老年以及免疫缺陷人群引起嚴(yán)重肺炎，是人類上呼吸道感染的重要病原之一。
[0004] 甲型流感病毒（Influenza A virus，F(xiàn)lu-A)屬于正粘科病毒，在人類和其他生物 每年都有小范圍的流行，引起上呼吸系統(tǒng)感染。大流行時(shí)，可引起嚴(yán)重呼吸系統(tǒng)感染，甚者 引起肺炎、腦炎甚至死亡。
[0005] 上述三種病毒的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物 中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物 最有重要價(jià)值。
[0006] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al.，2011. Artalbic acid, a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters, 52(2011)4543 - 4545)的化合物， 我們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化 合物III和化合物IV制備了組合物，并對該組合物抗病毒活性進(jìn)行了評價(jià)，其具有抗病毒 活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為35%和65%。
[0008]
[0009] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0010] 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗病毒作用。本發(fā)明的藥學(xué)上可接 受的鹽具有同樣的藥效。
[0011] 組合物的體外實(shí)驗(yàn)表明，組合物具有很強(qiáng)的抗HSV-1、HSV-2、RSV和flu A的活性， 因此本發(fā)明的組合物有望被用于制備新型抗病毒藥物。
[0012] 以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 實(shí)施例1化合物Artalbic acid的制備
[0014] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的 文南犬(Antonella Maggio et al. , 2011. Artalbic acid, a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters, 52 (2011) 4543 - 4545)的方法。
[0015]
[0016] 實(shí)施例2 Artalbic acid的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0017] 將化合物I (266mg，1. OOmmol)溶于10mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0. 08g)，1，2-二溴乙烷（3. 760g，20.0 Ommol)和6mL的50 %氫氧化鈉溶液。混合物在40 攝氏度攪拌16h。16h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相 溶液。然后對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減 壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油醚/丙酮 =100:1.0, v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末（272mg， 73% ) 〇
[0018] 4 NMR (500MHz，DMS0-d6) δ 11.41 (s，1H)，6.06 (s，1H)，5.76 (s，1H)，4.99 (s，1H)，4 .71 (s, 1Η), 4. 56 (s, 1H), 3. 86 (s, 2H), 3. 54 (s, 2H), 2. 65 (s, 1H), 2. 43 (s, 2H), 2. 33 (s, 2H), 2 .10 (s, 1H), 1. 64 (s, 3H), 1. 54 (s, 1H), 1. 44 (s, 2H), 0. 95 (s, 3H).
[0019] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6) δ 201. 95(s)，175. 93(s)，149. 13(s)，148. 15(s)，117. 0 5 (s), 109. 43 (s), 81. 86 (s), 70. 27 (s), 57. 68 (s), 41. 26 (s), 39. 07 (s), 38. 86 (s), 35. 69 (s) ,33. 36 (s), 30. 72 (s), 20. 44 (s), 18. 42 (s).
[0020] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for C17H26Br04:3 7 3. 10 1 4 ；found 373. 1017.
[0022] 實(shí)施例3 Artalbic acid的0_(二乙胺基）乙基衍生物（III)的合成
[0023] 將化合物II (187mg，0. 5mmol)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，碘化鉀（84mg，0. 5mmol)和二乙胺（1460mg，20mmol)，混合物加熱回流 12h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取4次，合并有機(jī)相。依次用水 和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物 粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油醚/丙酮=100:0.5, v/v)，收集棕色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物ΠΙ的棕色粉末（111. 3mg，61% )。
[0024] 4 NMR(500MHz，DMS0-d6) δ 11.52(s，1H), δ6· 13(s，lH)，5.81(s，lH)，4.73(s，1H) ,4. 62 (d, J = 10. 9Hz, 2H), 3. 59 (s, 2H), 2. 92 (s, 4H), 2. 68 (d, J = 10. 5Hz, 3H), 2. 56 (s, 2H), 2. 48 (s, 2H), 2. 22 (s, 1H), 1. 70 (s, 3H), 1. 54 (d, J = 10. 2Hz, 3H), 1. 16 (s, 6H), 1. 00 (s, 3H).
[0025] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 201. 95 (s), 175. 93 (s), 149. 13 (s), 148. 15 (s), 117. 0 5 (s), 109. 43 (s), 81. 86 (s), 67. 06 (s), 57. 68 (s), 52. 53 (s), 47. 72 (s), 41. 30 (s), 39. 06 (s) ,38. 85 (s), 35. 68 (s), 30. 72 (s), 20. 44 (s), 18. 42 (s), 12. 35 (s).
[0026] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C21H36N04:366 . 26 44 ;found:366. 2640。
[0028] 實(shí)施例4 Artalbic acid的0_(四氫吡咯基）乙基衍生物（IV)的合成
[0029] 將化合物II (187mg，0. 5mmol)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀 (34511^，2.5_31)，碘化鉀（8411^，0.5_31)和吡略燒（142〇11^，20_31)，混合物加熱回流 8h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水和 飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗 品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油醚/丙酮=100:1. 0, v/V)，收集棕色集 中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物IV的棕色粉末（107. lmg，59% )。
[0030] NMR(500MHz, DMS〇-d6) δ 14. 01 (s, 1Η), 6. 15 (s, 1H), 5. 83 (s, 1H), 4. 7 5 (s, 1H), 4. 63 (s, 1H), 3. 96 (s, 1H), 3. 58 (s, 2H), 2. 70 (d, J = 6. 1Hz, 3H), 2. 56 - 2. 49 (m, 8H), 2. 09 (s, 1H), 1. 68 (d, J = 10. 0Hz, 7H), 1. 58 (s, 2H), 1. 44 (s, 1H), 1. 02 (s, 3H).
[0031] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6) δ 201. 85(s), 175. 85(s), 149. 07(s), 148. ll(s), 117. 0 3 (s), 109. 33 (s), 81. 78 (s), 67. 00 (s), 57. 64 (s), 54. 44 (d, J = 17. 1Hz), 41. 20 (s), 38. 98 ( s), 38. 79 (s), 35. 64 (s), 30. 70 (s), 25. 21 (s), 20. 35 (s), 18. 36 (s).
[0032] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C21H34N04:364. 24 88 ;found:364. 2491。
[0034] 實(shí)施例5組合物抗病毒活性
[0035] (一）實(shí)驗(yàn)例：組合物對皰疹病毒的作用研究：
[0036] (1)細(xì)胞株與病毒株：
[0037] 人胚腎細(xì)胞（HEK293,為HSV-1、HSV-2病毒敏感細(xì)胞）購自美國Clontech公司； 單純皰疹病毒1型（HSV-1) Sm44株、單純皰癥病毒2型（HSV-2) 333株引自中國⑶C病毒病 研究所。
[0038] (2)細(xì)胞毒性測定：
[0039] 組合物的制備：將35mg化合物III的粉末和65mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小 管中并用渦輪攪拌儀混合即得到l〇〇mg組合物。
[0040] 參照文獻(xiàn)（汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對病毒抑制作用的實(shí)驗(yàn)研 究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008 ;24(1) :25~27)的方法，將各樣品以2倍比做系列稀釋 (2°~5)，然后按稀釋順序橫向接種于96板孔中的HEK293上，每孔100uL，每稀釋度縱向重 復(fù)3孔（A、B、C行），平行設(shè)微孔板D的1~6孔為細(xì)胞對照，7~12孔不接種細(xì)胞為空白 對照，顯微鏡下每日觀察CPE，連續(xù)觀察7d，中性紅染色，在540nm波長測定0D值，將實(shí)驗(yàn)組 與細(xì)胞對照組0D值相比計(jì)算細(xì)胞存活率，用Reed-Muench方法計(jì)算藥物半數(shù)細(xì)胞中毒濃度 (TD5〇) 〇
[0041] (4)抑毒試驗(yàn)：
[0042] 參照文獻(xiàn)（汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對病毒抑制作用的實(shí)驗(yàn) 研究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008 ;24(1) :25~27)的方法，將樣品按稀釋順序（2 14)橫 向接種于96板孔中的單層細(xì)胞上，每孔100uL，每稀釋度縱向重復(fù)4孔，微孔板的A、B、C行 加含100個(gè)TCID5。的病毒100uL作為試驗(yàn)組，D行補(bǔ)充等容量細(xì)胞維持液為不同濃度藥物 對照，平行設(shè)F行作為病毒對照，E行的1~12作為細(xì)胞對照。37°C、5%