一種改善皮膚的制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種改善皮膚的制劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 透明質(zhì)酸是廣泛存在于人體內(nèi)的一種酸性粘多糖，主要作用是保留人體的水分， 隨著年齡的增加，透明質(zhì)酸在體內(nèi)的含量會減少，皮膚就會出現(xiàn)皺紋，松弛，缺乏彈性。不過 人們發(fā)現(xiàn)，通過動物組織或是微生物發(fā)酵提取到的透明質(zhì)酸與人體內(nèi)的內(nèi)透明質(zhì)酸的結(jié)構(gòu) 是一樣的，可被人體完全分解，不會殘留體內(nèi)對人體造成毒副作用，可見它的安全性較高。 所以在美容中使用透明質(zhì)酸是可以起到除皺抗衰老的作用的，使用透明質(zhì)酸的原理就是利 用最新劑型的顆粒經(jīng)過圓磨技術(shù)處理，呈現(xiàn)自然圓潤的效果并可刺激膠原蛋白，透明質(zhì)酸 填補受損的膠原纖維，讓肌齡年輕，以柱狀式打法，將肌膚填滿撐起，皮膚進而有往上拉提 的作用。
[0003]目前很多美容機構(gòu)是向人體局部注入透明質(zhì)酸而達(dá)到填充效果，一般而言，注入 的透明質(zhì)酸很容易被機體吸收，所維持的效果約在6-8個月之間，不能長期維持朔形的效 果，無法滿足人們的需求。
[0004] 纖維母細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)干細(xì)胞分化而 來。纖維母細(xì)胞基本不具有分化功能但分裂功能旺盛，在體外培養(yǎng)條件下能保持良好的分 裂繁殖能力。皮膚內(nèi)纖維母細(xì)胞的主要功能是分泌膠原蛋白、彈力纖維、透明質(zhì)酸等細(xì)胞外 基質(zhì)，這種來源于自身的膠原蛋白修復(fù)體系一旦形成，它的生命旺盛期為10-15年。纖維母 細(xì)胞是皮膚真皮中的主體細(xì)胞成分，它與自身分泌的膠原纖維、彈性纖維及基質(zhì)成分一同 構(gòu)成了真皮的主體。成纖維細(xì)胞的主要功能是：合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、基質(zhì)大分 子物質(zhì)和某些生長因子，對維持皮膚的彈性和韌性具有重要作用，纖維母細(xì)胞的減少也是 引起皺紋產(chǎn)生的重要原因，故使用纖維母細(xì)胞是目前理想的改善肌膚方法。
[0005] 本發(fā)明提供一種將透明質(zhì)酸與人自體纖維母細(xì)胞制成的用于改善皮膚的混懸制 劑來改善皮膚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提供一種改善皮膚的制劑，不僅對人體沒有 任何毒副作用，安全性高，而且能提高肌膚再生能力、促進原有肌膚的修復(fù)，消除皺紋和疤 痕，改善皮膚的效果持久明顯。
[0007] 本發(fā)明還提供一種改善皮膚的制劑的制備方法。
[0008] 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)該目的：
[0009] -種改善皮膚的制劑，所述制劑的原料包括纖維母細(xì)胞懸液和透明質(zhì)酸，所述各 原料的含量為：
[0010]透明質(zhì)酸 0·05~0·5v/v%
[0011] 自體纖維母細(xì)胞 1. 0Χ105~5. 0X106/mL。
[0012] 作為優(yōu)選的，所述各原料的含量為：
[0013] 透明質(zhì)酸 0· 1 ~0· 3v/v%
[0014] 自體纖維母細(xì)胞 1. 0X106~3. 0X106/mL。
[0015] 作為進一步優(yōu)選的，所述各原料的含量為：
[0016] 透明質(zhì)酸 0·2ν/ν%
[0017] 自體纖維母細(xì)胞 2.0X106/mL。
[0018] 其中，所述制劑為注射用液劑。
[0019] -種改善皮膚的制劑用于作為改善皮膚的藥物的新用途。
[0020] -種改善皮膚的制劑的制備方法，包括如下步驟：
[0021] 步驟1 :纖維母細(xì)胞的分離培養(yǎng)，制成纖維母細(xì)胞懸液，于2~8°C保存?zhèn)溆茫?br>[0022] 步驟2 :向步驟1制備的纖維母細(xì)胞懸液中加入所述含量的透明質(zhì)酸，混合均勻， 制得所述改善皮膚的制劑。
[0023] 其中，步驟1具體為：
[0024] 1)采集志愿者耳后皮膚真皮組織，在無菌操作實驗室用細(xì)胞清洗液離心清洗2 遍，用眼科剪刀剪成1~2mm2小塊，再加清洗液清洗3遍；用I型膠原酶置4°C消化3h，轉(zhuǎn) 移置至37°C搖床至消化完全；
[0025] 2)向消化完畢后的纖維母細(xì)胞液中加入細(xì)胞培養(yǎng)液，離心后棄上清液，再加入細(xì) 胞培養(yǎng)基混勻轉(zhuǎn)移到六孔板培養(yǎng)，每隔3天更換培養(yǎng)基，實時觀察細(xì)胞狀態(tài)并做好記錄；在 細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到70%匯合度時，傳代培養(yǎng)，P1代細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到80%的匯合度時，傳為P2代， P2代細(xì)胞匯合度到85%時，收集1X107個細(xì)胞用5ml生理鹽水重懸，至4°C保存待用。
[0026] 作為優(yōu)選的，所述細(xì)胞清洗液為由D-Hank's液、青霉素和萬古霉素組合配置而成 的清洗液。
[0027] 作為優(yōu)選的，所述青霉素的濃度為0. 5%，所述萬古霉素的濃度為0. 1%。
[0028] 作為優(yōu)選的，所述細(xì)胞培養(yǎng)基為由DMEM和10%的FBS組合配制成的培養(yǎng)基。
[0029] 相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明的改善皮膚的制劑為將透明質(zhì)酸 與人自體纖維母細(xì)胞制成混懸制劑，透明質(zhì)酸存在于人體的肌膚內(nèi)可完全分解，對人體及 纖維母細(xì)胞無毒副作用，使用安全，而且由于透明質(zhì)酸具有保留水分的作用，更有利于纖維 母細(xì)胞的生長；自體的纖維母細(xì)胞不會發(fā)生排斥反應(yīng)，使細(xì)胞存活率高，填充效果明顯持 久；即使透明質(zhì)酸被機體吸收完，纖維母細(xì)胞分泌的活性因子FGF，能顯著提高肌膚再生能 力、促進原有肌膚的修復(fù)，消除皺紋和疤痕，在塑形的同時還能起到全方位改善膚質(zhì)的效 果；透明質(zhì)酸較現(xiàn)有技術(shù)的用量少，節(jié)約成本。
【附圖說明】
[0030] 圖1為實施例6中的實驗組在使用本發(fā)明的制劑前的皮膚狀況圖。
[0031] 圖2為實施例6中的實驗組在使用本發(fā)明的制劑后的皮膚狀況圖。
【具體實施方式】
[0032] 以下結(jié)合附圖及具體實施例對本發(fā)明進行詳細(xì)描述。
[0033] 實施例1、
[0034] 本實施例的改善皮膚的制劑，所述制劑的原料包括纖維母細(xì)胞懸液和透明質(zhì)酸， 所述各原料的含量為：
[0035] 透明質(zhì)酸 0·05~0·5ν/ν%
[0036] 自體纖維母細(xì)胞 1.ΟΧ105~5· 0Χ10 6/mL。
[0037] 本實施例的改善皮膚的制劑的制備方法，包括如下步驟：
[0038] 步驟1 :纖維母細(xì)胞的分離培養(yǎng)，制成纖維母細(xì)胞懸液，活力85%以上，于2~8°C 保存?zhèn)溆茫?br>[0039] 步驟2 :向步驟1制備的纖維母細(xì)胞懸液中加入所述含量的透明質(zhì)酸，混合均勻， 制得所述改善皮膚的制劑，于2~8°C保存?zhèn)溆谩?br>[0040] 實施例2。
[0041]