；"在空氣中"混合8μ1，30次；從瓶5中吸取32μ1 (水）；"在空氣 中"混合20μ1，最大速度，2次；進(jìn)樣； 其中所述金銀花提取物或總有機酸W及本發(fā)明注射液等物料中所含有的化學(xué)成分特 別是總有機酸及其各具體的有機酸，可照W下HPLC含量測定法4描述的方法進(jìn)行測定： 【HPLC含量測定法4】（其可用于測定各種物料中的單一有機酸量，特別是可用于測定 總有機酸值）：照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VID)測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（柱長為25cm，內(nèi)徑 為4.6mm，粒徑為5μm);W乙臘為流動相A，W0.1%甲酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定 進(jìn)行梯度洗脫（出峰完畢后用高比例的乙臘沖洗色譜柱）；柱溫為30°C;檢測波長為325nm; 理論板數(shù)按咖啡酸峰計算應(yīng)不低于50000 ;對照品溶液的制備：取咖啡酸和綠原酸對照品適量，精密稱定，分別加50%甲醇制成 每1ml含30μg的溶液，即得； 供試品溶液的制備：精密量取或稱取供試品適量（根據(jù)預(yù)試驗確定其中分別含有與上 述對照品溶液制備過程中的相應(yīng)成分相當(dāng)數(shù)量級的量），置量瓶中，加甲醇溶解/稀釋至刻 度，搖勻，必要時過濾，即得供試品溶液； 測定法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，記 錄色譜峰，可W算得咖啡酸和綠原酸在測試物中的含量； 進(jìn)一步，可W分別使用W下各公式計算測試物中新綠原酸、隱綠原酸、3, 4-二咖啡酸酷 奎尼酸、3, 5-二咖啡酸酷奎尼酸、4, 5-二咖啡酸酷奎尼酸的含量：進(jìn)一步地，可w使用w下公式計算測定物中的有機酸總量（即總有機酸的量）： 有機酸總量=新綠原酸含量+ 綠原酸含量+ 隱綠原酸含量+ 咖啡酸含量+ 3, 4-二咖啡酸酷奎尼酸含量+ 3, 5-二咖啡酸酷奎尼酸含量+ 4, 5-二咖啡酸酷奎尼酸含量。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5的注射液，其特征在于： 所述注射液或者相關(guān)提取物特別山羊角提取物或者總氨基酸照所述HPLC含量測定法 3進(jìn)行測定，其具有如本發(fā)明圖1所示的典型液相色譜圖；換言之，所述注射液或者相關(guān)提 取物特別是山羊角提取物或者總氨基酸具有圖1所示的指紋圖譜；進(jìn)一步的，在測定指紋 圖譜1時，使用的參照物溶液的制備方法為：取丙氨酸對照品適量，精密稱定，加水制成每 1ml含0. 2mg的溶液，即得；進(jìn)一步的，所述注射液照所述HPLC含量測定法3進(jìn)行測定所得 指紋圖譜與圖1指紋圖譜相比，脯氨酸出峰W后的色譜峰除外，經(jīng)計算機模擬相似度軟件 計算，相似度大于0.90 ; 所述注射液或者相關(guān)提取物特別金銀花提取物或者總有機酸可照本發(fā)明所述HPLC含 量測定法4進(jìn)行測定，檢測波長為280nm，其具有類似于本發(fā)明圖2所示的典型液相色譜圖； 換言之，所述注射液或者相關(guān)提取物特別是金銀花提取物或者總有機酸具有圖2所示的指 紋圖譜的特征；進(jìn)一步的，在測定指紋圖譜2時，使用的參照物溶液的制備方法為：取咖啡 酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；進(jìn)一步的，本發(fā)明 注射液照本發(fā)明所述HPLC含量測定法4進(jìn)行測定（檢測波長為280nm)所得指紋圖譜與指 紋圖譜2相比，經(jīng)計算機模擬相似度軟件計算，相似度大于0. 90。7. 制備權(quán)利要求1-6的方法，其包括W下步驟： (i) 提供W下五種物料：熊總膽酸或熊去氧膽酸、山羊角水解物、黃琴提取物、金銀花 提取物、連翅提取物，并確定各物料中的目標(biāo)物的含量； (ii) 根據(jù)所述目標(biāo)物在配方中的比例，分別稱取步驟（i)的五種物料； (iii) 將步驟（ii)稱取的五種物料與丙二醇和適量注射用水混合溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑 調(diào)節(jié)溶液的抑值，用水添加至全量；或者將步驟（ii)稱取的五種物料混合，接著再與丙二 醇和適量注射用水混合溶解，用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)溶液的抑值，用水添加至全量； (iv)將步驟（iii)所得藥液經(jīng)無菌過濾，分裝到玻璃瓶中，密封，熱壓滅菌，即得注射 液。8.測定權(quán)利要求1至6任一項的注射液或制備其的各物料的方法，其特征在于： (1) 測定各種物料中的黃琴巧、熊去氧膽酸、碟去氧膽酸的含量： 照中國藥典2010年版一部附錄VID所載高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，W0. 〇5%Ξ氣乙酸 溶液為流動相Α，乙臘為流動相Β，按下表進(jìn)行梯度洗脫；用蒸發(fā)光散射檢測器；漂移管溫度 95°C;理論板數(shù)按黃琴巧峰計算，應(yīng)不低于10000 ;_^^對照品溶液的制備：精密稱取黃琴巧對照品、熊去氧膽酸對照品和碟去氧膽酸對照品 (運些對照品W及本發(fā)明使用的其它對照品均可W容易地從市場購得，例如從中國藥品食 品檢定研究院購得）適量，加丙二醇和甲醇適量，超聲使完全溶解，放冷，加甲醇稀釋制成 每1ml含黃琴巧0. 5mg、熊去氧膽酸0. 6mg、碟去氧膽酸0.Img的混合溶液，即得； 供試品溶液的制備：精密量取或稱取供試品適量（根據(jù)預(yù)試驗確定其中分別含有與上 述對照品溶液制備過程中的相應(yīng)成分相當(dāng)數(shù)量級的量），置10ml量瓶中，加甲醇溶解/稀釋 至刻度，搖勻，必要時過濾，即得； 測定法：分別精密吸取對照品溶液4μ1、8μ1及供試品溶液5μ1，注入液相色譜儀，測 定，用外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算含量，即得，可W算得供試品中黃琴巧、熊去氧膽酸、碟去氧 膽酸的含量；該含量通?？擅縨g物料中所含黃琴巧的mg數(shù)表示，表示其它物質(zhì)的含量 時具有類同含義； (2) 測定各種物料中的野黃琴巧： 照中國藥典2010年版一部附錄VID所載高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；W乙臘為流動相A，W0. 1 %甲酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為280nm;理論板數(shù) 按野黃琴巧峰計算，應(yīng)不低于3000 ;_對照品溶液的制備：精密稱取野黃琴巧對照品適量，加甲醇溶解并制成每1ml含25μg的溶液，搖勻，即得； 供試品溶液的制備：精密量取或稱取供試品適量（根據(jù)預(yù)試驗確定其中分別含有與上 述對照品溶液制備過程中的相應(yīng)成分相當(dāng)數(shù)量級的量），置量瓶中，加水溶解/稀釋至刻 度，搖勻，必要時過濾，即得； 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，可W算得供試品中野黃琴巧（C21H18012)的含量； (3)測定各種物料中的單一氨基酸量，特別是測定總氨基酸值： 照中國藥典2010年版一部附錄VID所載高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Hypersil-ODS色譜 柱，柱長為20cm，內(nèi)徑為4. 6mm，粒徑5μm);流動相A:取醋酸鋼（Ξ個結(jié)晶水）7.OOg，加水 4000ml使溶解，加Ξ乙胺0. 8ml，四氨巧喃24ml，混勻，用2%冰醋酸溶液調(diào)節(jié)抑值至7. 2 ; 流動相B:取醋酸鋼（Ξ個結(jié)晶水）10. 88g，加水800ml使溶解，用2%冰醋酸溶液調(diào)節(jié)抑值 至7. 2,加乙臘1400ml，甲醇1800ml，混勻，按下表進(jìn)行梯度洗脫；0~37. 5分鐘，檢測波長 為338nm，37. 5分鐘之后，檢測波長為262nm;柱溫：35°C;理論板數(shù)按丙氨酸峰計算應(yīng)不低 于 40000 ;對照品溶液的制備：精密稱取天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、異 亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鄉(xiāng)氨酸、亮氨酸對照品適量，置10ml量瓶中，加0.Imol/L鹽酸溶液 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備溶液（每1ml各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、絲 氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鄉(xiāng)氨酸、亮氨酸Img，苯丙氨酸0.5mg);精密吸取 上述對照品儲備溶液2ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液（每1ml 各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鄉(xiāng)氨酸、亮氨酸 0. 2mg，苯丙氨酸 0.Img); 供試品溶液的制備：精密量取或稱取供試品適量（根據(jù)預(yù)試驗確定其中分別含有與上 述對照品溶液制備過程中的相應(yīng)成分相當(dāng)數(shù)量級的量），置量瓶中，加水溶解/稀釋至刻 度，搖勻，必要時過濾，即得； 測定法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各1μ以注入液相色譜儀，采用1%鄰 苯二甲醒（0ΡΑ)溶液與0. 5%-氯甲酸巧甲醋溶液（FM0C)計算機模擬柱前衍生化，測定并 計算上述各氨基酸的量，W及它們的總量（為總氨基酸量）； 在W上HPLC含量測定法中設(shè)及到的試液和操作法可照如下方法配制或執(zhí)行： 0. 4mol/L棚酸緩沖液（pHlO.。：取棚酸，配制成0. 4mol/L的溶液，用40%氨氧化鋼溶 液調(diào)節(jié)抑值至10. 2,即得（本液需冷藏）； 1%鄰苯二甲醒（0PA)溶液：稱取鄰苯二甲醒（0PA)80mg，加棚酸緩沖液（P化0. 2)7ml， 乙臘1ml，琉基丙酸125μ1，混勻，即得（本液需冷藏）； 0.5%-氯甲酸巧甲醋（尸10〇溶液：稱取一氯甲酸巧甲醋（尸10〇50111邑，用乙臘適量使 溶解，并稀釋至10ml (本液需冷藏）； 柱前衍生化反應(yīng)：供試品溶液和對照品溶液在抑10. 2的棚酸緩沖液中首先和OPA反 應(yīng)，再用FMOC進(jìn)行衍生； 柱前衍生化進(jìn)樣程序（瓶1~5分別為OPA、FMOC、水、棚酸鹽緩沖液、水）：從瓶3吸 取0 μ 1 (水，清洗針頭）；從瓶4吸取5 μ 1 (棚酸鹽緩沖液）；從瓶3吸取0 μ 1 (水，清洗針 頭）；從瓶1吸取1 μ 1 (ΟΡΑ);從瓶3吸取0 μ 1 ( 7心清洗針頭）；吸取樣品1 μ 1 ;從瓶3吸 取0 μ 1 (水，清洗針頭）；"在空氣中"混合7 μ 1，10次；從瓶2吸取1 μ 1 (FMOC);從瓶3吸 取0 μ 1 (水，清洗針頭）；"在空氣中"混合8 μ 1，30次；從瓶5中吸取32 μ 1 (水）；"在空氣 中"混合20 μ 1，最大速度，2次；進(jìn)樣； (4)測定各種物料中的單一有機酸量，特別是測定總有機酸值： 照中國藥典2010年版一部附錄VID所載高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（柱長為25畑1，內(nèi)徑 為4.6mm，粒徑為5μm);W乙臘為流動相A，W0.1%甲酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定 進(jìn)行梯度洗脫（出峰完畢后用高比例的乙臘沖洗色譜柱）；柱溫為30°C;檢測波長為325nm; 理論板數(shù)按咖啡酸峰計算應(yīng)不低于50000 ;_^^對照品洛液的制備：取咖啡酸和綠原酸對照品適量，精醬稱定，分別加50 %甲醇制成 每1ml含30 μ g的溶液，即得； 供試品溶液的制備：精密量取或稱取供試品適量（根據(jù)預(yù)試驗確定其中分別含有與上 述對照品溶液制備過程中的相應(yīng)成分相當(dāng)數(shù)量級的量），置量瓶中，加甲醇溶解/稀釋至刻 度，搖勻，必要時過濾，即得供試品溶液； 測定法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，記 錄色譜峰，可W算得咖啡酸和綠原酸在測試物中的含量； 進(jìn)一步，可W分別使用W下各公式計算測試物中新綠原酸、隱綠原酸、3, 4-二咖啡酸酷 奎尼酸、3, 5-二咖啡酸酷奎尼酸、4, 5-二咖啡酸酷奎尼酸的含量：> 進(jìn)一步地，可w使用w下公式計算測定物中的有機酸總量（即總有機酸的量）： 有機酸總量=新綠原酸含量+ 綠原酸含量+ 隱綠原酸含量+ 咖啡酸含量+ 3, 4-二咖啡酸酷奎尼酸含量+ 3, 5-二咖啡酸酷奎尼酸含量+ 4, 5-二咖啡酸酷奎尼酸含量。9. 根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其特征在于： 所述注射液或者相關(guān)提取物特別山羊角提取物或者總氨基酸照所述HPLC含量測定法 3進(jìn)行測定，其具有如本發(fā)明圖1所示的典型液相色譜圖；換言之，所述注射液或者相關(guān)提 取物特別是山羊角提取物或者總氨基酸具有圖1所示的指紋圖譜；進(jìn)一步的，在測定指紋 圖譜1時，使用的參照物溶液的制備方法為：取丙氨酸對照品適量，精密稱定，加水制成每 1ml含0. 2mg的溶液，即得；進(jìn)一步的，所述注射液照所述HPLC含量測定法3進(jìn)行測定所得 指紋圖譜與圖1指紋圖譜相比，脯氨酸出峰W后的色譜峰除外，經(jīng)計算機模擬相似度軟件 計算，相似度大于0.90 ; 所述注射液或者相關(guān)提取物特別金銀花提取物或者總有機酸可照本發(fā)明所述HPLC含 量測定法4進(jìn)行測定，檢測波長為280nm，其具有類似于本發(fā)明圖2所示的典型液相色譜圖； 換言之，所述注射液或者相關(guān)提取物特別是金銀花提取物或者總有機酸具有圖2所示的指 紋圖譜的特征；進(jìn)一步的，在測定指紋圖譜2時，使用的參照物溶液的制備方法為：取咖啡 酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；進(jìn)一步的，本發(fā)明 注射液照本發(fā)明所述HPLC含量測定法4進(jìn)行測定（檢測波長為280nm)所得指紋圖譜與指 紋圖譜2相比，經(jīng)計算機模擬相似度軟件計算，相似度大于0. 90。10. 權(quán)利要求1-6任一項所述注射液在制備清熱、化疲、解毒的藥物中的用途；或者，在 制備用于風(fēng)溫肺熱病疲熱阻肺證的藥物中的用途；或者，在制備發(fā)熱、咳嗽、咯疲不爽、咽喉 腫痛、口渴、舌紅、苔黃；肺炎早期、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作W及上呼吸道感 染屬上述證候者的藥物中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于清熱化痰解毒的注射液。該注射液包括活性物質(zhì)、丙二醇、和注射用水。所述活性物質(zhì)是由以下物料制備得到的：熊膽粉或熊去氧膽酸、山羊角、黃芩、金銀花、連翹。本發(fā)明還涉及該注射液的制備方法以及其制藥用途。本發(fā)明注射液可用于清熱、化痰、解毒，可用于風(fēng)溫肺熱病痰熱阻肺證，可用于發(fā)熱、咳嗽、咯痰不爽、咽喉腫痛、口渴、舌紅、苔黃；肺炎早期、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作以及上呼吸道感染屬上述證候者。
【IPC分類】A61P11/14, A61K31/575, A61K35/32, A61K36/634, A61P29/00, A61P11/10, A61K9/08, A61K35/413, A61P11/00, A61P11/04
【公開號】CN105395616
【申請?zhí)枴緾N201510827913
【發(fā)明人】李興惠
【申請人】李興惠
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2013年12月2日
【公告號】CN103610757A, CN103610757B