一種從褐參中同時(shí)提取和分離皂苷和多糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及褐參的提取方法，具體涉及一種從褐參中同時(shí)和分離提取皂苷和多糖 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人參為珍貴的藥用植物，能夠保護(hù)心臟、調(diào)節(jié)血糖血壓、增強(qiáng)免疫力等。人參皂苷 和人參多糖被認(rèn)為人參主要有效成分。人參皂苷根據(jù)皂苷元的不同被分為原人參二醇類皂 苷、原人參三醇類皂苷及齊墩果酸類皂苷，對(duì)中樞系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等都表現(xiàn)出一定的調(diào)節(jié) 效果。人參多糖組成復(fù)雜，結(jié)構(gòu)多樣，根據(jù)單糖組成不同，可將人參多糖主要分為人參中性 糖和人參酸性果膠兩大類。多糖作為人參的有效活性成分，具有多樣的生物活性，如抗腫 瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗輻射、降血糖等。因此，對(duì)于人參中皂苷、多糖的提取研究意義深遠(yuǎn)。它將為 闡明人參的生物活性與藥理作用，進(jìn)一步研究人參藥理作用機(jī)制奠定良好的基礎(chǔ)。
[0003] CN101780128A公開(kāi)了一種褐參的制備方法，將鮮人參、生曬參、紅參等粗原料經(jīng)β-D-葡萄糖苷酶水解，在合適的條件下進(jìn)行高溫蒸汽處理，和加熱烘干，獲得的人參制品。在 酶解和高溫蒸汽處理過(guò)程中，人參中Rgl，Re均脫糖轉(zhuǎn)化為Rg3，Rh2等稀有皂苷，因此該褐參 制品具有稀有皂苷Rg3，Rh2等含量高的特點(diǎn)。稀有皂苷Rg3，Rh2等具有抗疲勞、舒張血管、提 高免疫力和抗腫瘤等藥理作用[程慧，藥物評(píng)價(jià)研究，2010, 33(4)]。因此，制備和轉(zhuǎn)化高 人參皂苷Rg3、Rh2含量的褐參深加工產(chǎn)品具有重要的意義。
[0004] 褐參的提取物方面，目前僅褐參乙醇提取物有提取和應(yīng)用的報(bào)道，CN104523789A， 由于褐參中具有較高含量的稀有皂苷Rg3、Rh2等，其乙醇提取物和未處理人參的乙醇提取 物相比，抗腫瘤活性顯著提高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供一種從褐參中同時(shí)提取和分離皂苷和多糖的方法，該方法可以同時(shí)提 取皂苷和多糖，且皂苷抗腫瘤活性提高，成本低，對(duì)儀器設(shè)備要求低，能夠使褐參的活性成 分得到充分的開(kāi)發(fā)和利用。
[0006] 本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 一種從褐參中同時(shí)提取和分離皂苷和多糖的方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 褐參酶解:取褐參樣品，粉碎，過(guò)篩，添加 α-淀粉酶酶解，添加量為0.1-0.5微升/1克 褐參； (2) 醇提:酶解后降溫，加入乙醇水溶液，提取2~5次，合并提取液，剩余藥渣； (3) 離心:提取液冷卻，靜置，離心，得到濾液和固形物料渣； (4) 褐參多糖提取:將步驟(2)中的藥渣揮去溶劑，加入蒸餾水，回流提取，提取2~4次， 過(guò)濾，合并提取液，濃縮，醇沉，室溫放置，離心，沉淀為粗糖提取物，與步驟(3)的固形物料 渣合并，水溶，醇沉，離心，沉淀為褐參多糖，活性炭脫色，得多糖粉末； (5) 褐參皂苷提取:步驟(3)中濾液，減壓過(guò)濾回收乙醇，大孔樹(shù)脂純化得褐參皂苷。
[0007] 優(yōu)選地，步驟(1)中α-淀粉酶酶解溫度為70-90°C，時(shí)間為20-40min。
[0008] 優(yōu)選地，步驟(2)乙醇水溶液的體積百分濃度為70%-100%，添加量為褐參樣品質(zhì)量 的3-10倍。
[0009] 優(yōu)選地，步驟(4)中提取液的濃縮為減壓濃縮，濃縮體積為提取液體積的1/8-1/3。 [0010]本發(fā)明的有益成果是： 1.利用酶解、提取、濃縮、靜置、離心、脫色、大孔吸附樹(shù)脂柱純化等簡(jiǎn)單的操作方法，將 多糖和皂苷同時(shí)提取，得到的皂苷的抗腫瘤活性比已有的皂苷提取物顯著提高。
[0011] 2.褐參中淀粉較多，加入α-淀粉酶有效的去除淀粉，減少淀粉對(duì)多糖藥效的影響 和皂苷提取過(guò)程中對(duì)皂苷的吸附。
[0012] 3.提取過(guò)程中，將醇提法與水提法中得到的沉淀合并，使得藥渣中的有效成分充 分保留，提高了有效成分多糖的提取率。
【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例1 (1)取褐參樣品，褐參樣品購(gòu)自吉林玉參醫(yī)藥科技有限公司，粉碎，過(guò)30目篩。加熱至90 °C，加入α-淀粉酶溶液，加入量為0.1微升/1克褐參樣品，酶解20 min。
[0015] (2)降溫至室溫，加入體積百分濃度為75%的乙醇水溶液，加入質(zhì)量為褐參質(zhì)量10 倍。超聲提取30 min，提取2次，合并提取液，剩余藥渣。
[0016] (3)提取液室溫靜置3天，有沉淀析出。三足式離心機(jī)離心，得到濾液和固形物料 渣。
[0017] (4)將步驟(3)中藥渣揮去溶劑之后，向其中加入8倍質(zhì)量的水于水浴中加熱回流 提取，回流3小時(shí)，反復(fù)提取3次，合并提取液。將上述提取液減壓濃縮為水提取液體積的1/8 后，加入95%乙醇使乙醇濃度80%，進(jìn)行醇沉，室溫放置3天，離心，取沉淀，得粗糖提取物。該 粗糖提取物與步驟(3)中的固形物料渣合并，經(jīng)水溶后，加入95%乙醇使乙醇濃度80%，醇沉 放置3天，離心，沉淀為褐參多糖。加入褐參多糖重量15%的活性炭100°C回流30分鐘脫色，離 心，重復(fù)4次，取水層濃縮、干燥，得到棕褐色褐參多糖粉末。
[0018] (5)取步驟(3)中離心濾液，減壓回收乙醇，水浴蒸發(fā)至無(wú)醇味。取足量大孔吸附樹(shù) 月旨，裝柱。吸取人參樣品液上柱，預(yù)吸附1小時(shí)，過(guò)柱流出液重吸附1次，吸附流速2.0 mL/ min。超純水洗至流出液近無(wú)色，70%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，用量5倍柱體積，洗脫流 速為1 mL/min。減壓濃縮，減壓蒸干，真空干燥，得褐參阜苷。
[0019] 褐參多糖得率為30.2%，純度為64.3%，褐參皂苷得率為22.3%，純度為68.2%。
[0020] 實(shí)施例2: (1)取褐參樣品，褐參樣品購(gòu)自吉林玉參醫(yī)藥科技有限公司，粉碎，過(guò)40目篩。加熱至70 °C，加入α-淀粉酶溶液，加入量為0.5微升/1克褐參樣品，酶解40 min。
[0021] (2)降溫至室溫，加入純乙醇，加入質(zhì)量為褐參質(zhì)量3倍。水浴鍋中熱回流提取3 h， 提取5次，合并提取液，剩余藥渣。
[0022] (3)提取液室溫靜置1天，有沉淀析出。三足式離心機(jī)離心，得到濾液和固形物料 渣。
[0023] (4)將步驟(3)中藥渣揮去溶劑之后，向其中加入10倍質(zhì)量的水于水浴中加熱回流 提取，回流3小時(shí)，反復(fù)提取3次，合并提取液。將上述提取液減壓濃縮為水提取液體積的1/3 后，加入95%乙醇使乙醇濃度85%，進(jìn)行醇沉，室溫放置3天，離心，