4-羥基水楊酰苯胺在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明設(shè)及抗腫瘤藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是4-徑基水楊酷苯胺在制備抗腫瘤 藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一種克隆性漿細(xì)胞異常增殖的惡性疾 病，是血液系統(tǒng)第二位常見的惡性腫瘤，約占血液系統(tǒng)惡性腫瘤的10%，多發(fā)于中老年人 群，目前仍無法治愈，其中位生存時(shí)間為5~6年。傳統(tǒng)治療多發(fā)性骨髓瘤的主要方法是化療 和造血干細(xì)胞移植，其臨床療效很難維持。近10年來，隨著新型藥物如蛋白酶體抑制劑棚替 佐米、免疫調(diào)節(jié)劑沙利度胺及來那度胺等的出現(xiàn)，多發(fā)性骨髓瘤患者的完全緩解率及總體 生存率明顯提高。但同時(shí)仍存在W下不足:首先，W上運(yùn)些藥物在復(fù)發(fā)/難治患者中的單藥 有效率僅為25%~50%;其次，盡管無疾病生存時(shí)間得到延長(zhǎng)，但多數(shù)患者終將復(fù)發(fā)，且出 現(xiàn)顯著的藥物抵抗;第=，神經(jīng)炎等某些嚴(yán)重的副作用限制了藥物的應(yīng)用。因而，研發(fā)、檢驗(yàn) 新的治療藥物仍然是目前多發(fā)性骨髓瘤治療所需面臨的重要難題。
[0003] 淋己瘤是血液系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，在我國(guó)常見惡性腫瘤中占第8位，并且 近年來它的發(fā)病率仍在逐漸增加。新的化療方案、單克隆抗體、細(xì)胞免疫治療等治療方式已 經(jīng)顯著改善了淋己瘤患者的生存。特別是利妥昔單抗的出現(xiàn)，淋己瘤的治療有了突破性的 進(jìn)展，尤其是對(duì)CD20陽性的B細(xì)胞淋己瘤，有效率更高，緩解時(shí)間更長(zhǎng)，顯著改善預(yù)后。但是， 淋己瘤患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)或耐藥的比例仍然很高。因此仍需進(jìn)一步研發(fā)新藥，W提高淋己瘤的 治療效果與治愈率。
[0004] 4-徑基水楊酷苯胺，其結(jié)構(gòu)式為：
[0006] 該化合物的分子式為Cl出iiN〇3，白色粉末狀，分子量為229.24，CAS編號(hào)為526-18-1。該化合物的通用名為柳胺酪片，目前用于肝膽病用藥，作用機(jī)制與去氨膽酸相似，能增加 肝血流量，改善肝功能，可使膽汁中水分顯著增加。利膽作用較去氨膽酸強(qiáng)，能使Oddi括約 肌松弛。研究已表明，4 -徑基水楊酷苯胺為核糖核巧酸還原酶（R i b O n U C 1 e O t i d e reductase，RR)的抑制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供4-徑基水楊酷苯胺的新用途。
[000引為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0009] 4-徑基水楊酷苯胺在制備預(yù)防或治療多發(fā)性骨髓瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0010] 4-徑基水楊酷苯胺在制備預(yù)防或治療淋己瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 所述的藥物包含4-徑基水楊酷苯胺和藥學(xué)上可接受的載體。
[0012] 所述的藥物制備成片劑、顆粒劑、針劑或膠囊劑等常規(guī)劑型。
[0013] 實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在體外，該化合物能有效抑制多發(fā)性骨髓瘤及淋己瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，在 體內(nèi)，該化合物能有效抑制小鼠多發(fā)性骨髓瘤及淋己瘤腫瘤生長(zhǎng)，可發(fā)展為多發(fā)性骨髓瘤 及淋己瘤的預(yù)防及治療藥物。該化合物可添加藥物可接受的載體，制成常規(guī)的劑型如片劑、 顆粒劑、針劑等。
[0014] 本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：
[001引1、本發(fā)明對(duì)已知藥物4-徑基水楊酷苯胺發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了新的應(yīng)用領(lǐng) 域。
[0016] 2、4-徑基水楊酷苯胺對(duì)多發(fā)性骨髓瘤及淋己瘤細(xì)胞具有較高的殺傷活性。
[0017] 3、4-徑基水楊酷苯胺是保肝老藥，安全性高，預(yù)示著其在癌癥領(lǐng)域有很好的藥用 前景。
【附圖說明】
[0018] 圖1-圖5為4-徑基水楊酷苯胺對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞化929細(xì)胞、0PM2細(xì)胞、U266細(xì) 胞、0CI-MY5細(xì)胞、RPMI 8266細(xì)胞)的抑制曲線；
[0019] 圖6-圖7為4-徑基水楊酷苯胺抑制多發(fā)性骨髓瘤的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；
[0020] 圖8-圖14為4-徑基水楊酷苯胺對(duì)淋己瘤細(xì)胞（SUDHk4細(xì)胞、OCI-LYl細(xì)胞、OCI-LY8細(xì)胞、DB細(xì)胞、NU-孤L-I細(xì)胞、U2932細(xì)胞、TMD8細(xì)胞）的抑制曲線；
[0021] 圖15-圖16為4-徑基水楊酷苯胺抑制淋己瘤的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0023] 實(shí)施例1:針對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的殺傷活性
[0024] 1.實(shí)驗(yàn)材料；
[0025] (1)細(xì)胞株:人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞化929細(xì)胞、0PM2細(xì)胞、U266細(xì)胞、0CI-MY5細(xì)胞、 RPMI 8266細(xì)胞)（美國(guó)ATCC，本實(shí)驗(yàn)室傳代保存），培養(yǎng)于1640培養(yǎng)基(含10 %胎牛血清）。
[0026] (2)主要試劑：1640培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco公司），胎牛血清（美國(guó)Gibco公司），4-徑基 水楊酷苯胺(上海泰坦化學(xué)有限公司），Cell Counting Kit-8試劑盒(CCK8,日本株式會(huì)社 同仁化學(xué)研究所）。
[0027] (3)主要儀器：二氧化碳培養(yǎng)箱（美國(guó)化ermo Forma公司），全自動(dòng)酶標(biāo)儀(Bio-T邸，ElxSOO)。
[002引2.實(shí)驗(yàn)方法：
[0029] (1)細(xì)胞培養(yǎng)
[0030] 細(xì)胞培養(yǎng)于1640培養(yǎng)基(含10%胎牛血清，pH 7.2)，培養(yǎng)基加2mmol/L谷氨酷胺， 置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中在37 °C、5 % C02環(huán)境下培養(yǎng)。
[0031 ] (2)CCK8試劑盒測(cè)定各藥物的細(xì)胞毒性
[0032] 取人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞(H929細(xì)胞、0PM2細(xì)胞、U266細(xì)胞、0CI-MY5細(xì)胞、RPMI 8266 細(xì)胞）的單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后調(diào)整細(xì)胞濃度至2X IO5個(gè)/mL。取96孔培養(yǎng)板每孔加入95化上 述細(xì)胞懸液，然后加不同濃度的用培養(yǎng)基配制的藥物化L，對(duì)照組加入相應(yīng)體積的培養(yǎng)基， 每組設(shè)置3個(gè)平行孔。連續(xù)培養(yǎng)72h，培養(yǎng)結(jié)束前化，每孔加入CCK8試劑10化，于C02解箱中繼 續(xù)培養(yǎng)。2h后自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm各孔OD值。計(jì)算細(xì)胞存活率與抑制率:細(xì)胞存活率（％ ) =(實(shí)驗(yàn)孔OD均值/對(duì)照孔OD均值）X 100%。細(xì)胞抑制率（％ ) = 100%-細(xì)胞存活率（％ )。擬 合函數(shù)求出抑制細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)50%時(shí)藥物濃度IC50。實(shí)驗(yàn)重復(fù)=次。
[0033] 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0034] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1-圖5。
[0035] 結(jié)論:4-徑基水楊酷苯胺對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞具有殺傷活性，H929細(xì)胞、0PM2細(xì) 胞、U266細(xì)胞、0CI-MY5細(xì)胞和RPMI 8266細(xì)胞的IC50分別為17化]?、84咖、271咖、211咖和170 JiMo
[0036] 實(shí)施例2:針對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0037] 1.實(shí)驗(yàn)材料
[0038] (1)細(xì)胞株:人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞化929細(xì)胞）（美國(guó)ATCC，本實(shí)驗(yàn)室傳代保存），培 養(yǎng)于1640培養(yǎng)基(含10%胎牛血清）。
[0039] (2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性BALB/C裸鼠（6-8周，購(gòu)自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公 司），置于SPF級(jí)環(huán)境中飼養(yǎng)(上海第十人民醫(yī)院中屯、實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房）。
[0040] 2.實(shí)驗(yàn)方法
[0041 ] (1)細(xì)胞培養(yǎng)參見實(shí)施例1。
[0042] (2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0043] 將含2X IO6個(gè)朋29細(xì)胞的1640培養(yǎng)基注射到裸鼠右蔽窩皮下，當(dāng)瘤子長(zhǎng)成并可測(cè) 量時(shí)，隨機(jī)分至對(duì)照組和給藥組。給藥組裸鼠隔天尾靜脈注射4-徑基水楊酷苯胺lOOmg/kg, 對(duì)照組裸鼠注射相同體積的溶劑(200化，5 %DMS0+4 %藍(lán)麻油+91 %生理鹽水）。每?jī)商鞙y(cè)量 一次瘤子大小(測(cè)量瘤子的長(zhǎng)和寬，瘤子體積= 4V3 X (寬/2)~2 X (長(zhǎng)/2))。給藥20天后處 死老鼠并取瘤子拍照。
[0044] 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0045] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖6-圖7。
[0046] 結(jié)論:4-徑基水楊酷苯胺能夠有效抑制裸鼠多發(fā)性骨髓瘤的生長(zhǎng)。
[0047] 實(shí)施例3:針對(duì)人淋己瘤細(xì)胞的殺傷活性 [004引 1.實(shí)驗(yàn)材料
[0049] 人淋己瘤細(xì)胞(SU的正-4細(xì)胞、OCI-LYl細(xì)胞、0CI-LY8細(xì)胞、DB細(xì)胞、NU-D化-1細(xì)胞、 U2932細(xì)胞、TMD8細(xì)胞）（美國(guó)ATCC，本實(shí)驗(yàn)室傳代保存）。IMDM培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司）。DMEM 培養(yǎng)基(低糖）（美國(guó)Gibco公司）。其他同實(shí)施例1。
[(K)加]2.實(shí)驗(yàn)方法
[0051 ] 0CI-LY8細(xì)胞培養(yǎng)于IMDM培養(yǎng)基。U2932細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)基(低糖）。其他同實(shí) 施例1。
[0化2] 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0化3] 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見圖8-圖14。
[0054] 結(jié)論:4-?基水楊酷苯胺對(duì)人淋己瘤細(xì)胞具有殺傷活性，SUD化-4細(xì)胞、OCI-LYl細(xì) 胞、0CI-LY8細(xì)胞、DB細(xì)胞、NU-DUkl細(xì)胞、U2932細(xì)胞和TMD8細(xì)胞的IC50分別是73測(cè)、117測(cè)、 76亂 17祉M、18祉M、156iiM和 16補(bǔ)。
[0055] 實(shí)施例4:針對(duì)淋己瘤的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0化6] 1.實(shí)驗(yàn)材料
[0057] (1)細(xì)胞株:人淋己瘤細(xì)胞(OCI-U^細(xì)胞）（美國(guó)ATCC，本實(shí)驗(yàn)室傳代保存），培養(yǎng)于 IMDM培養(yǎng)基(含10 %胎牛血清）。
[0058] (2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:參見實(shí)施例2。
[0化9] 2.實(shí)驗(yàn)方法
[0060] (1)細(xì)胞培養(yǎng)參見實(shí)施例3。
[0061 ] (2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0062] 將含3 X IO6個(gè)OCI-U^細(xì)胞的IMDM培養(yǎng)基注射到裸鼠右蔽窩皮下，當(dāng)瘤子長(zhǎng)成并 可測(cè)量時(shí)，隨機(jī)分至對(duì)照組和給藥組。給藥組裸鼠隔天尾靜脈注射4-徑基水楊酷苯胺60mg/ kg，對(duì)照組裸鼠注射相同體積的溶劑（200化，5 %DMS0+4%藍(lán)麻油+91 %生理鹽水）。每?jī)商?測(cè)量一次瘤子大?。y(cè)量瘤子的長(zhǎng)和寬，瘤子體積=4V3 X (寬/2 r 2 X (長(zhǎng)/2))。給藥20天 后處死老鼠并取瘤子拍照。
[0063] 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0064] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖15-圖16。
[0065] 結(jié)論:4-徑基水楊酷苯胺能夠有效抑制裸鼠淋己瘤的生長(zhǎng)。
[0066] W上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可W做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，運(yùn)些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.4- 羥基水楊酰苯胺在制備預(yù)防或治療多發(fā)性骨髓瘤的藥物中的應(yīng)用。 2.4- 羥基水楊酰苯胺在制備預(yù)防或治療淋巴瘤的藥物中的應(yīng)用。3. 根據(jù)權(quán)利要求1、2任一所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物包含4-羥基水楊酰苯胺 和藥學(xué)上可接受的載體。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物制備成片劑、顆粒劑、針劑或膠 囊劑。
【專利摘要】本發(fā)明涉及4-羥基水楊酰苯胺在制藥領(lǐng)域中的新用途，可用于制備防治多發(fā)性骨髓瘤和淋巴瘤的藥物。其優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在：在體外，該化合物能有效抑制多發(fā)性骨髓瘤及淋巴瘤細(xì)胞生長(zhǎng)；在體內(nèi)，該化合物能有效抑制小鼠多發(fā)性骨髓瘤及淋巴瘤腫瘤生長(zhǎng)，可發(fā)展為多發(fā)性骨髓瘤及淋巴瘤的預(yù)防及治療藥物。4-羥基水楊酰苯胺是保肝老藥，安全性高，預(yù)示著其在癌癥領(lǐng)域有很好的藥用前景。
【IPC分類】A61K31/609, A61P35/00
【公開號(hào)】CN105663147
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610220405
【發(fā)明人】施菊妹, 朱維良, 邵吉民, 楊洸, 徐志建, 劉霞, 高露, 李波, 陳新煥
【申請(qǐng)人】施菊妹
【公開日】2016年6月15日
【申請(qǐng)日】2016年4月11日