山菅蘭的活性提取物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及植物分離提取領(lǐng)域，具體而言，涉及一種山菅蘭的活性提取物及其制 備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，隨著市面上各種化學(xué)合成類的化妝品屢次出現(xiàn)中毒事件，人們在選擇化 妝品的時候越來越崇尚一些純天然的植物類別的化妝品。中草藥因其具有藥效溫和、不良 作用小而得到消費者的廣泛認(rèn)同。然而，我國的中草藥種類繁多，藥性多變，且每味藥材中 均含有多種的化學(xué)成分，這就對尋找開發(fā)一種高效、副作用小的天然中草藥美白化妝品造 成極大的困難。
[0003] 山菅蘭為百合科山菅屬草本植物山菅(Dianella ensifolia)的干燥全草，是廣泛 分布于中國云南、四川、貴州東南部、廣西、廣東南部、江西南部、浙江沿海地區(qū)、福建和臺灣 的常見草本植物。藥用價值上，山菅蘭的根狀莖磨干粉后調(diào)醋外敷，可治癰瘡膿腫、癬、淋巴 結(jié)炎等。
[0004] 近年來對山菅蘭的化學(xué)成分研究分離得到的間苯二酚類化合物有:2,4_二羥基-3，6_二甲基苯甲酸甲酯（methy 1 2，4-dihydroxy-3，6-dimethylbenzoate)、2，4_二羥基_6_ 甲基苯甲酸甲酯即苔色酸甲酯（methyl 2,4-dihydroxy-6_methylbenzoate， methylorsellinate)2 和4_二羥基-6-甲氧基-3-甲基苯乙酮（2，4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone)〇
[0005] 綜合現(xiàn)有文獻(xiàn)資料，未發(fā)現(xiàn)山菅蘭及其所含成分具有美白作用的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種山菅蘭的活性提取物。這種山菅蘭的活性提取物 具有抗酪氨酸酶活性、并對B16黑色素細(xì)胞有抑制作用，且其對皮膚的副作用小，能夠作為 天然植物美白制劑應(yīng)用在各種美白化妝品中。
[0007] 本發(fā)明的第二目的在于提供一種山菅蘭的活性提取物的制備方法。采用這種方法 制備的山菅蘭的活性提取物中有效成分的純度高，且對酪氨酸酶和B16黑色素細(xì)胞的抑制 作用大。
[0008] 本發(fā)明的第三目的在于提供一種山菅蘭的活性提取物的應(yīng)用，即將山菅蘭的活性 提取物作為美白化妝品的活性成分。
[0009] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
[0010] -種山菅蘭的活性提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0011] 浸提步驟:將山菅蘭粉末浸泡于pH值為8-10的弱堿水中進(jìn)行浸提，然后去除山菅 蘭粉末得到浸提液，再調(diào)節(jié)浸提液的pH值為2-6,然后靜置處理，再去除浸提液的上清液得 到沉淀物，將沉淀物干燥后得到山菅蘭粗提物；
[0012] 萃取步驟:將山菅蘭粗提物用水溶解得到山菅蘭溶解液，然后向山菅蘭溶解液中 加入萃取劑進(jìn)行萃取，得到萃取物，其中萃取劑的體積是山菅蘭溶解液的體積的ο. 5-2倍；
[0013] 分離步驟：用吸附色譜法對萃取物進(jìn)行分離，用不同配比的有機(jī)溶劑混合液作為 洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得到洗脫液，然后再去除洗脫液中的洗脫劑，得到山菅蘭的活性提取 物。美白劑能夠抑制酪氨酸酶活性或者阻斷酪氨酸生成黑色素的氧化途徑，從而減少黑色 素生成達(dá)到美白皮膚的效果。皮膚美白劑就是作用于皮膚黑色素生成、代謝過程中，抑制黑 色素生成且符合規(guī)范的物質(zhì)。然而傳統(tǒng)的皮膚美白劑，往往采用化學(xué)性物質(zhì)，如具有增白作 用的汞鹽和具有祛斑作用的氫醌。這些化合物雖然有快速達(dá)到美白之功效，但對皮膚有較 大的毒副作用，尤其對敏感性皮膚的損傷更為嚴(yán)重，長期使用會引起接觸性皮炎或引起永 久脫色等不良作用，在許多國家已被禁用。目前要求的皮膚美白劑應(yīng)該符合兩個標(biāo)準(zhǔn):一是 對酪氨酸酶活性有較高的抑制率，能顯著的減少黑色素的生成;二是有較高的安全性，對人 體皮膚無毒無刺激。
[0014] 本發(fā)明中，采用山菅蘭這一傳統(tǒng)的藥用植物為研究客體，得到一種具有抗酪氨酸 酶活性、并對B16黑色素細(xì)胞有抑制作用的山菅蘭活性提取物。山菅蘭為天然植物，美白效 果好，藥性溫和，對皮膚的刺激性小，且副作用小。因此，這種山菅蘭提取物能夠作為美白化 妝品的活性成分，應(yīng)用于美白化妝品中。
[0015] 在制備這種山菅蘭的活性提取物時，首先采用堿提酸沉法進(jìn)行粗提取。這種提取 方法的好處在于pH為8-10的弱堿水能夠增大山菅蘭中酸性成分和弱堿性成分的溶出率，從 而提高提取效率。隨后調(diào)節(jié)所得浸提液的pH值為2-6的目的在于，使溶液中的酸性成分和弱 堿性成分的溶解性降低，從浸提液中析出，靜止后得到沉淀，從而去除水提取液中的部分雜 質(zhì)，進(jìn)一步達(dá)到分離純化的效果。
[0016] 隨后，用萃取劑進(jìn)行萃取，根據(jù)相似相容原理，將山菅蘭溶解液中的化學(xué)成分按照 極性大小進(jìn)行分段，且能夠除去山菅蘭溶解液中的一些極性很大或者很小的化學(xué)成分。對 所得的萃取物采用吸附色譜法進(jìn)行更進(jìn)一步的純化后，所得山菅蘭的活性提取物中，有效 活性物質(zhì)的含量增多，純度增大，其抗酪氨酸酶活性和對B16黑色素細(xì)胞的抑制作用得到了 顯著的提升。
【具體實施方式】
[0017] 下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會 理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為 可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0018] -種山菅蘭的活性提取物，通過包括如下步驟的方法制得：
[0019] 浸提步驟:將山菅蘭粉末浸泡于pH值為8-10的弱堿水中進(jìn)行浸提，然后去除山菅 蘭粉末得到浸提液，再調(diào)節(jié)浸提液的pH值為2-6,然后靜置處理，再去除浸提液的上清液得 到沉淀物，將沉淀物干燥后得到山菅蘭粗提物。
[0020] 在本發(fā)明的一些優(yōu)選的實施例中，山菅蘭為粉末，提取時所加的弱堿水與山菅蘭 粉末的體積比為1:6-1:10。更進(jìn)一步的優(yōu)選為，采用超聲波法進(jìn)行提取，提取1-3次，每次以 20MHz-50MHz的頻率超聲30min-50min，過濾后合并濾液，得到浸提液。這種提取方法能夠增 加山菅蘭中有效物質(zhì)的溶出率，進(jìn)一步能夠提高山菅蘭粗提物對酪氨酸酶和B16細(xì)胞的抑 制活性。
[0021 ] 萃取步驟:將山菅蘭粗提物用水溶解得到山菅蘭溶解液，然后向山菅蘭溶解液中 加入萃取劑進(jìn)行萃取，得到萃取物，其中萃取劑的體積是山菅蘭溶解液的體積的0.5-2倍。 [0022]在本發(fā)明的一些優(yōu)選的實施例中，萃取劑為乙酸乙酯，得到乙酸乙酯萃取物。由于 乙酸乙酯屬于中等極性的有機(jī)溶劑，根據(jù)相似相容原理，能夠除去水提液中的一些極性很 大或者很小的化學(xué)成分，保留能夠溶解在乙酸乙酯中的化學(xué)成分。更進(jìn)一步的，在本發(fā)明的 一些優(yōu)選的實施例中，萃取劑包括石油醚、氯仿、乙酸乙酯，萃取步驟為依次用石油醚、氯 仿、乙酸乙酯對山菅蘭溶解液進(jìn)行萃取，得到石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物。 這種萃取方法得到的乙酸乙酯萃取物中所含的雜質(zhì)較少，從而降低雜質(zhì)對酪氨酸酶和B16 細(xì)胞的抑制活性的影響。分離步驟:用吸附色譜法對萃取物進(jìn)行分離，用不同配比的有機(jī)溶 劑混合液作為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得到洗脫液，然后再去除洗脫液中的洗脫劑，得到山菅 蘭的活性提取物。在本發(fā)明的一些優(yōu)選的實施例中，用吸附色譜法進(jìn)行分離的萃取物為乙 酸乙酯萃取物，根據(jù)萃取物對酪氨酸酶和B16細(xì)胞的抑制活性跟蹤發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯萃取物對 酪氨酸酶和B16細(xì)胞的抑制活性大，因此，直接對乙酸乙酯萃取物進(jìn)行吸附色譜分離，有利 于減少工序、降低時間和經(jīng)濟(jì)成本，在短時間內(nèi)即可得到對酪氨酸酶和B16細(xì)胞的抑制活性 最好的活性提取物。
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