聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合物，其原料藥包括黨參、炒白術(shù)、炙黃芪、茯苓、生甘草、法半夏、陳皮、木香、當(dāng)歸、白芍、丹參、川芎、熟地黃、延胡索、香附、狗脊、桑寄生、續(xù)斷、秦艽、刺五加、三棱、莪術(shù)、斑蝥、地龍、全蝎、海藻、生牡蠣、夏枯草和王不留行。本發(fā)明中藥復(fù)方組合物具有很好的治療骨肉瘤的作用，并且改善患者帶瘤生存質(zhì)量，適用于臨床推廣。
【專利說(shuō)明】
聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及中醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組 合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 骨肉瘤是最常見(jiàn)的原發(fā)惡性骨腫瘤，好發(fā)于青少年，多發(fā)于長(zhǎng)骨兩端，患者一旦發(fā) 病，從發(fā)現(xiàn)到確診一般已經(jīng)處于中晚期，手術(shù)治療機(jī)會(huì)大大減少，而僅限于化療，但是化療 毒副作用大，從而使一部分患者傾向于中醫(yī)藥治療或中醫(yī)輔助治療，使得中醫(yī)藥在治療骨 肉瘤方面有一定的發(fā)展空間。
[0003] 中醫(yī)從整體觀念出發(fā)，將骨肉瘤的病因歸納為內(nèi)因、外因和不內(nèi)外因，認(rèn)為其發(fā)病 機(jī)理是腎氣虧虛，腎精虧損，勞倦內(nèi)傷，骨髓空虛，毒邪乘虛而入，尤以寒邪熱毒等邪陷肌 膚，毒攻于內(nèi)，傷筋蝕骨，或暴力損傷骨骼，氣滯血凝，經(jīng)絡(luò)受阻，日久不化，蘊(yùn)結(jié)成毒，耗傷 陰液，腐骨蝕骼，聚結(jié)成瘤;或由于腎氣不足，骨無(wú)營(yíng)養(yǎng)，寒濕之邪侵襲，痰濁蘊(yùn)阻骨骼積聚 日久，以致瘀血毒邪凝滯，絡(luò)道阻塞聚而成形發(fā)為骨瘤。所以治療上宜標(biāo)本同治，虛實(shí)兼顧。
[0004] 當(dāng)前骨肉瘤的治療上，手術(shù)和化療仍然占主導(dǎo)地位，手術(shù)技術(shù)的提高和化療的規(guī) 范化使骨肉瘤患者的長(zhǎng)期生存率有所提高，但是化療的副作用很明顯，如胃腸道反應(yīng)、內(nèi)臟 損壞、骨髓抑制等等，中西醫(yī)結(jié)合治療可以很好地解決這些問(wèn)題。
[0005] 中西醫(yī)結(jié)合治療骨肉瘤，當(dāng)前臨床研究主要集中于中藥對(duì)骨肉瘤化療增敏作用和 防治化療副作用的研究上。中醫(yī)藥在對(duì)局部病灶的處理上不及西醫(yī)的效果那么明顯，但是 中醫(yī)藥對(duì)調(diào)整患者的全身狀況，糾正臟腑失調(diào)，增強(qiáng)化療和手術(shù)效果，減輕化療的毒副作 用，增強(qiáng)患者自身的免疫力，從而提高生活質(zhì)量及生存率都有獨(dú)到之處，彌補(bǔ)西醫(yī)只重視局 部而忽視整體的弊端。
[0006] 目前認(rèn)為，骨肉瘤的化療應(yīng)盡可能早點(diǎn)進(jìn)行。化療后患者全身狀況較差，單純化療 效果并不理想，且化療藥物大多具有細(xì)胞毒性，在抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的同時(shí)，也殺傷正常細(xì) 胞，使患者術(shù)后免疫功能更加低下，臨床上因細(xì)胞減少和嚴(yán)重貧血等化療藥物毒副作用造 成化療中斷或終止者并不少見(jiàn)。因此，化療藥物增敏作用的提高，化療藥物毒副作用的降 低，人體免疫功能的提高，是臨床化療治療骨肉瘤的重要因素。中醫(yī)在臨床上常應(yīng)用補(bǔ)腎健 脾、軟堅(jiān)散結(jié)、祛痰破瘀、扶正固本的方法組方來(lái)達(dá)到此目的。
[0007] 本發(fā)明中藥復(fù)方組合物通過(guò)理論分析，并進(jìn)行一定樣本量的臨床觀察，進(jìn)一步利 用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)進(jìn)行體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究以探討本發(fā)明中藥復(fù)方組合物抗腫瘤作用機(jī)理，為該 方的臨床合理應(yīng)用提供科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)，得出的結(jié)論證實(shí)，本發(fā)明中藥復(fù)方組合物聯(lián)合化療 藥，對(duì)骨肉瘤具有很好的治療作用，對(duì)化療起到增敏作用，降低化療藥毒副作用，有效提高 患者帶瘤生存質(zhì)量，適用于臨床推廣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合 物，本發(fā)明中藥復(fù)方組合物聯(lián)合化藥，具有很好的治療骨肉瘤的作用，并且改善患者帶瘤生 存質(zhì)量，適用于臨床推廣。
[0009]基于此，本發(fā)明提供了一種聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合物，其原料藥 包括黨參、炒白術(shù)、炙黃芪、茯苓、生甘草、法半夏、陳皮、木香、當(dāng)歸、白芍、丹參、川芎、熟地 黃、延胡索、香附、狗脊、桑寄生、續(xù)斷、秦艽、刺五加、三棱、莪術(shù)、斑蝥、地龍、全蝎、海藻、生 牡蠣、夏枯草和王不留行。
[0010]其中，所述中藥復(fù)方組合物中各原料藥的重量分別為黨參35g~50g、炒白術(shù)20g~ 30區(qū)、炙黃苗25&~4(^、茯苳158~258、生甘草1(^~2(^、法半夏158~258、陳皮1(^~2(^、木 香15g~25g、當(dāng)歸10g~30g、白茍25g~30g、丹參15g~20g、川考25g~35g、熟地黃20g~ 3(^、延胡索1(^~2(^、香附58~158、狗脊1(^~2(^、桑寄生1(^~2(^、續(xù)斷58~158、秦充 10g~20g、刺五加20g~30g、三棱15g~25g、莪術(shù)20g~30g、斑蜜5g~15g、地龍10g~20g、全 蝎15g~25g、海藻10g~20g、生牡~20g、夏枯草15g~25g、王不留行20g~30g。
[0011] 其中，所述中藥復(fù)方組合物中各原料藥的重量分別為黨參40g~45g、炒白術(shù)25g~ 30區(qū)、炙黃苗3(^~358、茯苳2(^~258、生甘草1(^~158、法半夏2(^~258、陳皮158~2(^、木 香15g~20g、當(dāng)歸20g~25g、白茍25g~30g、丹參15g~20g、川考30g~35g、熟地黃20g~ 25區(qū)、延胡索1(^~158、香附58~1(^、狗脊158~2(^、桑寄生1(^~158、續(xù)斷58~1(^、秦充 10g~15g、刺五加25g~30g、三棱15g~20g、莪術(shù)25g~30g、斑蜜5g~10g、地龍10g~15g、全 蝎15g~20g、海藻10g~15g、生牡^lOg~15g、夏枯草15g~20g、王不留行20g~25g。
[0012] 其中，所述中藥復(fù)方組合物中各原料藥的重量分別為黨參45g、炒白術(shù)25g、炙黃芪 35g、茯苓20g、生甘草15g、法半夏20g、陳皮15g、木香20g、當(dāng)歸20g、白芍30g、丹參20g、川芎 30g、熟地黃25g、延胡索15g、香附10g、狗脊15g、桑寄生15g、續(xù)斷10g、秦艽15g、刺五加25g、 三棱20g、莪術(shù)25g、斑蜜10g、地龍15g、全蝎20g、海藻15g、生牡_15g、夏枯草20g、王不留行 25g〇
[0013] 本發(fā)明還提供一種聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的藥物，其由活性成分和藥學(xué)上可接受 的賦形劑或載體組成，所述活性成分為上述中藥復(fù)方組合物的提取物。
[0014] 其中，所述藥學(xué)上可接受的賦形劑包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、載體、填充劑、粘 合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體和潤(rùn)滑劑等。
[0015] 其中，所述中藥復(fù)方組合物的劑型為口服劑型，包括煎煮劑、膠囊劑、片劑、散劑、 顆粒劑、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑或酊劑。
[0016] 本發(fā)明還提供了上述中藥復(fù)方組合物的提取方法，其包括：
[0017] 第一步，按重量配比取法半夏、當(dāng)歸、白芍、丹參、川芎、熟地黃、延胡索、狗脊、桑寄 生、續(xù)斷、秦艽、刺五加、三棱、莪術(shù)、斑蝥、地龍、全蝎、海藻、生牡蠣和王不留行藥材，粉碎， 混合在一起，用相對(duì)于混合物質(zhì)量8~12倍量醇濃度50~80%乙醇滲漉提取，滲漉液濃縮至 無(wú)醇味，上大孔吸附樹脂吸附，樹脂用量為該步使用藥材總量的0.5~3倍，2~4倍樹脂體積 的純水洗脫雜質(zhì)，先用4倍樹脂體積的醇濃度70%的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體積的醇濃度 80 %的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體積的醇濃度90 %的乙醇洗脫，洗脫液合并并濃縮，干燥粉 碎，得第一細(xì)粉；
[0018] 第二步，按重量配比取余下原料藥組分，粉碎，混合在一起，加相對(duì)于混合物質(zhì)量6 ~10倍量水，100 °C提取2~4次，每次0.5~2小時(shí)，水煎液合并，濾液減壓濃縮至相當(dāng)于該步 藥材0.5-2g/mL，加2-5倍量醇濃度95%乙醇沉淀，上清液濃縮至無(wú)醇味，用鹽酸調(diào)節(jié)pHl~ 3，乙酸乙酯萃取2~5次，萃取液減壓濃縮，干燥粉碎，得第二細(xì)粉；
[0019] 第三步，將第一細(xì)粉和第二細(xì)粉混合均勻，得到中藥復(fù)方組合物提取細(xì)粉。
[0020] 本發(fā)明還提供一種藥物口服液，取300g中藥復(fù)方組合物提取細(xì)粉，加入300ml水?dāng)?拌均勻，2-4°C冷藏12h，濾過(guò)，濾液加入適宜的防腐劑和矯味劑，加水調(diào)至1000ml，即得口服 液。
[0021] 有益的技術(shù)效果
[0022] 本發(fā)明提供的中藥復(fù)方組合物聯(lián)合化藥，具有很好的治療骨肉瘤的作用，并且改 善患者帶瘤生存質(zhì)量，適用于臨床推廣。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 本發(fā)明提供了一種聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合物，其原料藥包括黨 參、炒白術(shù)、炙黃苗、茯苳、生甘草、法半夏、陳皮、木香、當(dāng)歸、白茍、丹參、川考、熟地黃、延胡 索、香附、狗脊、桑寄生、續(xù)斷、秦艽、刺五加、三棱、莪術(shù)、斑蝥、地龍、全蝎、海藻、生牡蠣、夏 枯草和王不留行。
[0024] 骨肉瘤同其他惡性腫瘤一樣，是一種嚴(yán)重影響身體健康。它是最常見(jiàn)的惡性、原發(fā) 性骨腫瘤，其惡性程度高、發(fā)展迅速，如未經(jīng)正規(guī)治療，半年至一年內(nèi)腫瘤就會(huì)發(fā)生肺轉(zhuǎn)移， 導(dǎo)致患者死亡。骨肉瘤主要發(fā)病部位在下肢，尤其是膝關(guān)節(jié)周圍會(huì)出現(xiàn)無(wú)原因的關(guān)節(jié)疼痛， 表現(xiàn)為關(guān)節(jié)周圍間歇性疼痛、酸痛、鈍痛，服止疼藥有效。臨床上治療骨肉瘤往往受技術(shù)限 制，多采用化療，然而化療作用的不確定，化療藥物所導(dǎo)致的毒副作用十分顯著，因此近年 來(lái)多采取中藥聯(lián)合化療藥進(jìn)行治療。
[0025] 本發(fā)明中藥復(fù)方組合物，根據(jù)臨床中對(duì)于骨肉瘤的病因病機(jī)進(jìn)行綜合分析，結(jié)合 現(xiàn)有的治療手段，按照補(bǔ)腎健脾、軟堅(jiān)散結(jié)、祛痰破瘀、扶正固本的原則進(jìn)行組方用藥，其組 方思路如下：
[0026] 骨肉瘤的發(fā)病機(jī)理是腎氣虧虛，腎精虧損，勞倦內(nèi)傷，骨髓空虛，毒邪乘虛而入，因 此補(bǔ)腎健脾是要?jiǎng)?wù)，本發(fā)明中藥復(fù)方組合物使用大劑量的生地黃補(bǔ)益肝腎，炒白術(shù)健脾益 氣，兩藥合用為君藥對(duì)，生地黃滋補(bǔ)肝腎、炒白術(shù)健脾助運(yùn)，化生氣血，兩藥合用，肝脾腎同 補(bǔ)，輔助正氣，抗邪外出；用狗脊、桑寄生、續(xù)斷、秦艽配合生地黃補(bǔ)益肝腎，腎主骨生髓，肝 腎得補(bǔ)，則骨髓得充，扶正祛邪，加入黨參、炙黃芪、茯苓、生甘草、法半夏、陳皮、木香健脾助 運(yùn)，以補(bǔ)后天脾胃養(yǎng)先天肝腎，其中黨參、炙黃芪健脾補(bǔ)氣力強(qiáng)，茯苓、法半夏、陳皮、木香有 燥濕健脾功效，健脾助運(yùn)力強(qiáng)，諸藥合用，配合君藥，共為臣藥組;此外，使用當(dāng)歸、白芍、丹 參、川芎、熟地黃、延胡索、香附，諸藥合用，補(bǔ)氣養(yǎng)血，養(yǎng)肝健脾，氣血得以生化，脾氣得健， 全身氣血充盈，當(dāng)歸、白芍養(yǎng)血力強(qiáng)，丹參、川芎活血功效，熟地滋補(bǔ)肝腎之功顯著，延胡索、 香附具有行氣活血，化瘀止痛的功效，延胡索、白芍、生甘草活血行氣，酸酐化陰，可以起到 很好的緩解疼痛的作用，有效改善癌痛，中焦得樞，肝體得養(yǎng)，則疏泄正常，骨肉瘤，本是毒 邪、熱邪侵襲人體骨骼，因此加入刺五加、三棱、莪術(shù)、斑蝥、地龍、全蝎、海藻、生牡蠣、夏枯 草、王不留行，清熱解毒，軟堅(jiān)散結(jié)，以達(dá)到祛邪目的，其中刺五加有很好的扶正祛邪的功 效，三棱、莪術(shù)具有很好的活血化瘀，散瘀結(jié)的功效，斑蝥是癌癥的特效藥物，對(duì)于各種腫瘤 都有很好的散瘀除結(jié)的功效，地龍、全蝎有很好的通絡(luò)止痛、解毒的功效，海藻、夏枯草、王 不留行、生牡蠣都有很好的散瘀結(jié)的功效，此外，骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率極高，因此使用三棱、 莪術(shù)、全蝎等藥物，有很好的截?cái)喁熜?，減少腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生，提高患者生存率。
[0027] 黨參:味甘，性平，歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣益脾，養(yǎng)血生津的功效，主治脾肺氣虛或氣 血兩虛之倦怠乏力、氣短，咳嗽自汗等癥狀，黨參長(zhǎng)于補(bǔ)脾養(yǎng)胃，調(diào)理中焦，兼有養(yǎng)血的作 用，其性平，健脾運(yùn)而不燥;滋味陰而不濕，能夠改善機(jī)體的免疫狀態(tài)，提高抗病能力，促進(jìn) 消化吸收，提高新陳代謝，促進(jìn)腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。
[0028] 炒白術(shù)：拉丁名atractylodis macrocephalae rhizoma，味甘、苦，性溫，入脾、胃 經(jīng)，有補(bǔ)脾利氣，燥濕利水，固表止汗，運(yùn)脾潤(rùn)燥的作用，主要用于脾失健運(yùn)、氣不化水所致 之痞滿腹瀉，痰飲水腫；中氣不足之心煩懶言，崩中漏下，久痢脫肛;脾虛氣弱之奏里不固、 虛汗自汗等證。
[0029] 炙黃苗:拉丁名Astragali Radix，味甘，性溫，入脾、肺經(jīng)，有補(bǔ)益脾土，升舉陽(yáng)氣、 固表止汗，托瘡生肌的功效，主治脾肺氣虛所致之乏力食少便溏，心悸氣短，中氣下陷之臟 器下垂，氣不攝血之崩漏便血，久瀉脫肛;表虛不固之自汗盜汗，氣血不足等證。
[0030] 茯苓:味甘、淡，性平，入脾、肺、膀胱、心經(jīng)，有滲濕利水、健脾寧心的作用，主要用 于水濕停滯之水腫，小便不利;濕熱蘊(yùn)結(jié)之熱淋，脾虛濕困之食少便溏、痰飲停滯、癲癇等 證。
[0031] 生甘草:味甘，性平，入十二經(jīng)，有清熱解毒，調(diào)和藥性，祛痰止咳的作用，并能健脾 和中，緩急止痛，主要用于脾胃虛弱之腹脹納呆，乏力;能緩解腹中拘攣性疼痛，緩和某些藥 物的烈性和毒性，減輕藥物對(duì)機(jī)體的毒副作用或?qū)ξ改c道的刺激。
[0032] 法半夏:味辛、性溫，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有燥濕化痰的功效，主治痰多咳嗽，風(fēng)痰眩 暈，痰厥頭痛等證。
[0033]陳皮:味辛、苦，性溫，歸脾、肺經(jīng)，具有理氣健脾，燥濕化痰的功效，主治脾胃氣滯， 濕濁中阻所致之脘腹脹滿，惡心嘔吐，食少納呆，胃寒氣逆或胃有虛熱之嘔逆少食等證。
[0034] 木香:味辛，苦，性溫，歸脾，胃，肝，肺經(jīng)，具有行氣止痛，健脾消食的功效，主治胸 脅、玩腹脹痛、瀉痢后重，食積不消，不思飲食等證。
[0035] 當(dāng)歸：拉丁名angelicae sinensis radix，味甘、辛，性溫，入肝、心、脾經(jīng)，有補(bǔ)血 活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤(rùn)腸通便的作用，主要用于心血不足之頭暈?zāi)垦?，倦怠乏力，心悸氣短，?其他血虛證;血?？仗?，沖任虛寒或淤血阻滯之月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)痛，產(chǎn)或腹痛，及其他血瘀作痛 及陰虛血少腸燥之便秘等癥狀。
[0036] 白芍:味苦、酸，性涼，入肝、脾經(jīng)，具有養(yǎng)血柔肝，緩中止痛，斂陰收汗的作用，主治 胸腹脅肋疼痛，瀉痢腹痛，自汗盜汗，陰虛發(fā)熱，月經(jīng)不調(diào)，崩漏，帶下等證。
[0037] 丹參：味苦、性寒，入心、肝經(jīng)，有活血化瘀、祛瘀生新、涼血寧心的作用，主要用于 血瘀氣滯之心胸，胸脅刺痛，胸悶氣短，腹脹；婦女氣血不和之月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)痛經(jīng)閉；氣血瘀 滯，心腹疼痛等癥狀。
[0038]川考：味辛，性溫，歸肝、膽、心、包經(jīng)，具有活血行氣，祛風(fēng)止痛的功效，主治月經(jīng)不 調(diào);經(jīng)閉痛經(jīng);產(chǎn)后瘀滯腥痛;癥瘕腫塊;胸脅疼痛;頭痛眩暈;風(fēng)寒濕痹;跌打損傷；癰疽瘡 瘍等證。
[0039]熟地黃:又名熟地，味甘，性微溫，入肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)血滋陰，益精填髓的作用，用 于血虛萎黃;眩暈，心悸，失眠，月經(jīng)不調(diào)，崩不止;肝腎陰虧，盜汗，足膝疼痛，腰膝酸軟，耳 鳴耳聾，頭目昏花;遺精陽(yáng)痿;不育不孕；月經(jīng)不調(diào)；崩漏下血;須發(fā)早白；消渴;便秘;腎虛喘 促等證。
[0040] 延胡索：味苦、辛，性溫，歸肝、心、胃經(jīng)，具有善行走散，可升可降，具有活血散瘀， 行氣止痛的功效，主治胸痹心痛，脅肋、脘腹諸痛，頭痛、腰痛、疝氣痛、筋骨痛、痛經(jīng)、經(jīng)閉， 產(chǎn)后瘀腹痛，跌打損傷等證。
[0041] 香附：味辛、甘、微苦，性平，歸肝、三焦經(jīng)，具有理氣解郁，調(diào)經(jīng)止痛的功效，主治肝 郁氣滯，胸、脅、脘腹脹痛，消化不良，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，寒疝腹痛，乳房脹痛等證。
[0042] 狗脊:味苦、甘，性溫，入肝、腎經(jīng)，具有祛風(fēng)濕，補(bǔ)肝腎，強(qiáng)腰膝的作用，用于腰膝酸 軟，關(guān)節(jié)疼痛，屈利不利，腎陽(yáng)不足、尿頻遺尿，遺精滑精，白帶過(guò)多等證。
[0043] 桑寄生:味苦，甘，性平，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕、安胎元的功效， 主治肝腎不足所致的腰酸疼痛，筋骨痿軟，足膝無(wú)力，肝腎不足，精血虛虧，胎元不固之胎動(dòng) 不安，腰腹疼痛等證。
[0044] 續(xù)斷:味辛，性微溫，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)肝腎;強(qiáng)筋骨;調(diào)血脈;續(xù)折傷;止崩漏的功 效，主治腰背酸痛;肢節(jié)痿痹;跌撲創(chuàng)傷、損筋折骨、胎動(dòng)漏紅、血崩、遺精、帶下、癰疽瘡腫等 證。
[0045] 秦艽：味辛、苦，性微寒，歸胃經(jīng)、肝經(jīng)、膽經(jīng)，具有祛風(fēng)濕，舒筋絡(luò)，清虛熱的功效， 主治風(fēng)濕痹痛，筋脈拘攣，骨節(jié)酸痛，日晡潮熱，小兒疳積發(fā)熱等證。
[0046] 刺五加：拉丁名Acanthopanacis Senticosi Radix et Rhizomaseu Caulis，味 辛、苦、微甘，性溫，入脾、腎、心經(jīng)，具有益氣健脾，補(bǔ)腎安神，祛風(fēng)除濕的功效，用于風(fēng)寒濕 痹、腰膝疼痛、筋骨痿軟、行動(dòng)遲緩、體虛羸弱、跌打損傷、骨折、水腫、腳氣、陰下濕癢等證。 [0047]三棱:味苦、辛，性平，入肝、脾經(jīng)，具有破血行氣，消積止痛的功效，用于血淤閉經(jīng)， 痛經(jīng)，產(chǎn)后瘀滯腹痛，腹中癥瘕痞塊，食積氣滯，脘腹脹痛等證。
[0048] 莪術(shù):味辛、苦，性溫，入肝、脾經(jīng)，具有破血行氣，消積止痛的功效，用于氣滯血瘀 所致的癥瘕痞塊，胸腹瘀痛，閉經(jīng)，痛經(jīng)，脘腹脹痛，跌打損傷，血瘀腫痛等證。
[0049] 斑蜜:拉丁名Lytta vesicatoria，味辛，性熱，歸胃經(jīng)、肝經(jīng)、腎經(jīng)，具有破血逐瘀 消漱，攻毒散結(jié)的功效，用于癥瘕腫塊，積年頑癬，瘰疬，贅疣，癰疽不潰，惡瘡死肌。
[0050] 地龍:味咸，性寒，歸肝、脾、膀胱經(jīng)，具有清熱定驚，通絡(luò)平喘，利尿的功效，主治高 熱神昏、關(guān)節(jié)痹痛，肢體麻木，半身不遂，肺熱咳喘，水腫尿少的功效。
[0051 ]全蝎:味辛，性平，歸肝經(jīng)，具有息風(fēng)鎮(zhèn)痙，攻毒散結(jié)，通絡(luò)止痛的功效，主治小兒驚 風(fēng)，抽搐痙攣，中風(fēng)口歪，半身不遂，破傷風(fēng)，風(fēng)濕頑痹，偏正頭痛，瘡瘍，瘰疬等證。
[0052]海藻:味苦、咸，性寒，歸肝、胃、腎經(jīng)，具有消痰軟堅(jiān)散結(jié)，利水消腫的功效，主治甲 狀腺腫大，項(xiàng)下淋巴結(jié)結(jié)核。散結(jié)氣癰腫，腹內(nèi)積塊、脹痛、腹中空鳴。還可下十二種水腫，療 皮間積聚暴潰，留氣結(jié)熱，利小便。
[0053]生牡蠣:味咸，性微寒，入肝、膽、腎經(jīng)，具有平肝潛陽(yáng)，鎮(zhèn)驚安神，軟堅(jiān)散結(jié)，收斂固 澀的功效，主治眩暈耳鳴，手足振顫，心悸失眠，煩躁不安，驚癇癲狂，瘰疬癭瘤，乳房結(jié)塊， 自汗盜汗，遺精尿頻，崩漏帶下，吞酸胃痛，濕疹瘡瘍等證。
[0054]夏枯草:味苦、辛，性寒，入肝、膽經(jīng)，具有清火，明目，散結(jié)，消腫的功效，主治目赤 腫痛，目珠夜痛，頭痛眩暈，瘰疬，癭瘤，腫痛；甲狀腺腫大，淋巴結(jié)結(jié)核，乳腺增生，高血壓、 尚血糖、尚血脂和尚血粘等證。
[0055] 王不留行:拉丁名Vaccaria segetalis，為石竹科植物麥藍(lán)菜的干燥成熟種子，味 苦，性平，入肝，胃經(jīng)，具有活血通經(jīng)，下乳消癰，利尿通淋的作用，主治血瘀經(jīng)閉，痛經(jīng)，難 產(chǎn);產(chǎn)后乳汁不下，乳癰腫痛;熱淋，血淋，石淋等證。
[0056] 進(jìn)一步優(yōu)選，所述治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合物僅由上述原料藥制備而成。
[0057]所述中藥復(fù)方組合物中各原料藥的重量分別為黨參35g~50g、炒白術(shù)20g~30g、 炙黃苗25g~40g、茯苳15g~25g、生甘草10g~20g、法半夏15g~25g、陳皮10g~20g、木香 15g~25g、當(dāng)歸10g~30g、白茍25g~30g、丹參15g~20g、川考25g~35g、熟地黃20g~30g、 延胡索l〇g~20g、香附5g~15g、狗脊10g~20g、桑寄生10g~20g、續(xù)斷5g~15g、秦充10g~ 20區(qū)、刺五加20〖~30〖、三棱15〖~25〖、莪術(shù)20〖~30〖、斑蜜5〖~15〖、地龍10〖~20〖、全蝎5區(qū) ~15g、海藻10g~20g、生牡^lOg~20g、夏枯草15g~25g、王不留行20g~30g。
[0058]進(jìn)一步優(yōu)選，所述中藥復(fù)方組合物中各原料藥的重量分別為黨參40g~45g、炒白 術(shù)25g~30g、炙黃苗30g~35g、茯苳20g~25g、生甘草10g~15g、法半夏20g~25g、陳皮15g ~20g、木香15g~20g、當(dāng)歸20g~25g、白茍25g~30g、丹參15g~20g、川考30g~35g、熟地黃 20g~25g、延胡索10g~15g、香附5g~10g、狗脊15g~20g、桑寄生10g~15g、續(xù)斷5g~10g、 秦充l〇g~15g、刺五加25g~30g、三棱15g~20g、莪術(shù)25g~30g、斑蜜5g~10g、地龍10g~ 15區(qū)、全蝎158~2(^、海藻1(^~158、生牡_1(^~158、夏枯草158~2(^、王不留行2(^~25區(qū)。 [0059]最優(yōu)選，所述中藥復(fù)方組合物中各原料藥的重量分別為黨參45g、炒白術(shù)25g、炙黃 芪35g、茯苓20g、生甘草15g、法半夏20g、陳皮15g、木香20g、當(dāng)歸20g、白芍30g、丹參20g、川 芎30g、熟地黃25g、延胡索15g、香附10g、狗脊15g、桑寄生15g、續(xù)斷10g、秦艽15g、刺五加 25區(qū)、三棱2(^、莪術(shù)258、斑蜜1(^、地龍158、全蝎1(^、海藻158、生牡_158、夏枯草2(^、王不 留tl25g。
[0060] 本發(fā)明提供的中藥復(fù)方組合物是通過(guò)將上述原料藥提取后，搭配藥學(xué)上可接受的 賦形劑獲得各種需要的藥物劑型。可用的藥學(xué)上可接受的賦形劑可以是藥物制劑領(lǐng)域中任 何常規(guī)的賦形劑，特定賦形劑的選擇將取決于用于治療特定患者的給藥方式或疾病類型和 狀態(tài)。用于特定給藥模式的合適藥物組合物的制備方法完全在藥物領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)范 圍內(nèi)。例如，可以作為藥學(xué)上可接受的賦形劑包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、載體、填充劑、粘 合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體和潤(rùn)滑劑等。必要時(shí)，還可以在藥 物組合物中加入香味劑、防腐劑和甜味劑等。
[0061] 本發(fā)明還提供一種聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的藥物，其由活性成分和藥學(xué)上可接受 的賦形劑或載體組成，所述活性成分為上述中藥復(fù)方組合物的提取物。
[0062] 所述藥學(xué)上可接受的賦形劑包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、載體、填充劑、粘合劑、 濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體和潤(rùn)滑劑等。
[0063] 所述中藥復(fù)方組合物的劑型為口服劑型，包括煎煮劑、膠囊劑、片劑、散劑、顆粒 劑、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑或酊劑，優(yōu)選為口服液。
[0064] 本發(fā)明還提供了上述中藥復(fù)方組合物的提取方法，其包括：
[0065] 第一步，按重量配比取法半夏、當(dāng)歸、白芍、丹參、川芎、熟地黃、延胡索、狗脊、桑寄 生、續(xù)斷、秦艽、刺五加、三棱、莪術(shù)、斑蝥、地龍、全蝎、海藻、生牡蠣和王不留行藥材，粉碎， 混合在一起，用相對(duì)于混合物質(zhì)量8~12倍量醇濃度50~80%乙醇滲漉提取，滲漉液濃縮至 無(wú)醇味，上大孔吸附樹脂吸附，樹脂用量為該步使用藥材總量的0.5~3倍，2~4倍樹脂體積 的純水洗脫雜質(zhì)，先用4倍樹脂體積的醇濃度70%的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體積的醇濃度 80 %的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體積的醇濃度90 %的乙醇洗脫，洗脫液合并并濃縮，干燥粉 碎，得第一細(xì)粉；
[0066]第二步，按重量配比取余下原料藥組分，粉碎，混合在一起，加相對(duì)于混合物質(zhì)量6 ~10倍量水，100 °C提取2~4次，每次0.5~2小時(shí)，水煎液合并，濾液減壓濃縮至相當(dāng)于該步 藥材0.5-2g/mL，加2-5倍量醇濃度95%乙醇沉淀，上清液濃縮至無(wú)醇味，用鹽酸調(diào)節(jié)pHl~ 3，乙酸乙酯萃取2~5次，萃取液減壓濃縮，干燥粉碎，得第二細(xì)粉；
[0067]第三步，將第一細(xì)粉和第二細(xì)粉混合均勻，得到中藥復(fù)方組合物提取細(xì)粉。
[0068]本發(fā)明還提供一種藥物口服液，取300g中藥復(fù)方組合物提取細(xì)粉，加入300ml水?dāng)?拌均勻，2-4°C冷藏12h，濾過(guò)，濾液加入適宜的防腐劑和矯味劑，加水調(diào)至1000ml，即得口服 液。
[0069] 以下采用實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，借此對(duì)本發(fā)明如何應(yīng)用技術(shù)手段 來(lái)解決技術(shù)問(wèn)題，并達(dá)成技術(shù)效果的實(shí)現(xiàn)過(guò)程能充分理解并據(jù)以實(shí)施。
[0070] 實(shí)施例1 口服液1
[0071] 稱取法半夏20g、當(dāng)歸20g、白芍30g、丹參20g、川芎30g、熟地黃25g、延胡索15g、狗 脊15g、桑寄生15g、續(xù)斷10g、秦艽15g、刺五加25g、三棱20g、莪術(shù)25g、斑蝥10g、地龍15g、全 蝎l〇g、海藻15g、生牡蠣15g和王不留行25g，粉碎，混合在一起，用4kg醇濃度為70%乙醇滲 漉提取，滲漉液濃縮至無(wú)醇味，上大孔吸附樹脂吸附，樹脂用量為該步使用藥材總量的2倍， 3倍樹脂體積的純水洗脫雜質(zhì)，先用4倍樹脂體積的醇濃度70%的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體 積的醇濃度80 %的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體積的醇濃度90 %的乙醇洗脫，洗脫液合并并濃 縮，干燥粉碎，得第一細(xì)粉，稱取黨參45g、炒白術(shù)25g、炙黃芪35g、茯苓20g、生甘草15g、陳皮 15g、木香20g、香附10g、夏枯草20g，粉碎，混合在一起，加1.6kg水，100°C提取3次，每次1小 時(shí)，水煎液合并，濾液減壓濃縮至相當(dāng)于該步藥材2g/mL，加3倍量醇濃度95 %乙醇沉淀，上 清液濃縮至無(wú)醇味，用鹽酸調(diào)節(jié)PH1~3,乙酸乙酯萃取3次，萃取液減壓濃縮，干燥粉碎，得 第二細(xì)粉;取300g中藥復(fù)方組合物提取細(xì)粉，加入300ml水?dāng)嚢杈鶆颍?-4 °C冷藏12h，濾過(guò)， 濾液加入矯味劑甜蜜素1.2g、防腐劑山梨酸溶液10ml，加水調(diào)至1000ml，即得口服液。
[0072]實(shí)施例2 口服液2
[0073]稱取法半夏20g、當(dāng)歸20g、白芍25g、丹參15g、川芎30g、熟地黃25g、延胡索15g、狗 脊20g、桑寄生15g、續(xù)斷10g、秦艽15g、刺五加30g、三棱20g、莪術(shù)30g、斑蝥10g、地龍15g、全 蝎l〇g、海藻15g、生牡蠣15g和王不留行25g，粉碎，混合在一起，用4kg醇濃度為70%乙醇滲 漉提取，滲漉液濃縮至無(wú)醇味，上大孔吸附樹脂吸附，樹脂用量為該步使用藥材總量的2倍， 3倍樹脂體積的純水洗脫雜質(zhì)，先用4倍樹脂體積的醇濃度70%的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體 積的醇濃度80 %的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體積的醇濃度90 %的乙醇洗脫，洗脫液合并并濃 縮，干燥粉碎，得第一細(xì)粉，稱取黨參40g~45g、炒白術(shù)25g~30g、炙黃芪30g~35g、茯苓20g ~25g、生甘草10g~15g、陳皮15g~20g、木香15g~20g、香附5g~10g、夏枯草15g~20g，粉 碎，混合在一起，加1.6kg水，100 °C提取3次，每次1小時(shí)，水煎液合并，濾液減壓濃縮至相當(dāng) 于該步藥材2g/mL，加3倍量醇濃度95 %乙醇沉淀，上清液濃縮至無(wú)醇味，用鹽酸調(diào)節(jié)pHl~ 3,乙酸乙酯萃取3次，萃取液減壓濃縮，干燥粉碎，得第二細(xì)粉;取300g中藥復(fù)方組合物提取 細(xì)粉，加入300ml水?dāng)嚢杈鶆颍?-4 °C冷藏12h，濾過(guò)，濾液加入矯味劑甜蜜素1.2g、防腐劑山 梨酸溶液10ml，加水調(diào)至1000ml，即得口服液。
[0074]實(shí)施例3 口服液3
[0075]稱取法半夏25g、當(dāng)歸25g、白芍30g、丹參20g、川芎35g、熟地黃25g、延胡索15g、狗 脊20g、桑寄生15g、續(xù)斷10g、秦艽15g、刺五加30g、三棱20g、莪術(shù)30g、斑蝥9g、地龍15g、全蝎 5g、海藻15g、生牡蠣15g和王不留行25g，粉碎，混合在一起，用4kg醇濃度為70%乙醇滲漉提 取，滲漉液濃縮至無(wú)醇味，上大孔吸附樹脂吸附，樹脂用量為該步使用藥材總量的2倍，3倍 樹脂體積的純水洗脫雜質(zhì)，先用4倍樹脂體積的醇濃度70%的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體積 的醇濃度80 %的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體積的醇濃度90 %的乙醇洗脫，洗脫液合并并濃 縮，干燥粉碎，得第一細(xì)粉，稱取黨參45g、炒白術(shù)30g、炙黃芪35g、茯苓25g、生甘草15g、陳皮 20g、木香20g、香附10g、夏枯草20g，粉碎，混合在一起，加1.6kg水，100 °C提取3次，每次1小 時(shí)，水煎液合并，濾液減壓濃縮至相當(dāng)于該步藥材2g/mL，加3倍量醇濃度95 %乙醇沉淀，上 清液濃縮至無(wú)醇味，用鹽酸調(diào)節(jié)PH1~3,乙酸乙酯萃取3次，萃取液減壓濃縮，干燥粉碎，得 第二細(xì)粉;取300g中藥復(fù)方組合物提取細(xì)粉，加入300ml水?dāng)嚢杈鶆颍?-4 °C冷藏12h，濾過(guò)， 濾液加入矯味劑甜蜜素1.2g、防腐劑山梨酸溶液10ml，加水調(diào)至1000ml，即得口服液。
[0076] 實(shí)施例4藥物毒理學(xué)試驗(yàn)
[0077]本發(fā)明中藥制劑使用黨參、炒白術(shù)、炙黃芪、茯苓、生甘草、法半夏、陳皮、木香、當(dāng) 歸、白芍、丹參、川芎、熟地黃、延胡索、香附、狗脊、桑寄生、續(xù)斷、秦艽、刺五加、三棱、莪術(shù)、 斑蝥、地龍、全蝎、海藻、生牡蠣、夏枯草和王不留行等藥物，其中藥典標(biāo)注，可能存在毒性或 者副作用的藥物有斑蝥、地龍、全蝎，但是根據(jù)其最優(yōu)組合用量，斑蝥9g、地龍15g、全蝎5g， 每次攝入量為斑蝥4.5g、地龍7.5g、全蝎2.5g，其用量均小于藥典規(guī)定的最大用量，而且，經(jīng) 過(guò)臨床藥物目錄檢索，斑蝥、地龍、全蝎用于多個(gè)中成藥組方，且用量均大于藥典規(guī)定用量 且無(wú)毒副作用，因此，將全方配伍進(jìn)行急毒性和長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)估。
[0078] 藥物急毒性試驗(yàn)
[0079] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SD大鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，40只，體重200 ± 20g。
[0080] 實(shí)驗(yàn)藥物:本發(fā)明實(shí)施例1制備的口服液1，濃縮成生藥濃度1.20g/ml，備用。
[0081] 動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境條件:青島大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障系統(tǒng)，溫度20 ~26 °C，濕度40~70 %。
[0082]給藥途徑:灌胃，給藥體積40ml/kg，給藥3次，間隔8h。
[0083]動(dòng)物分組:取檢疫合格的SD大鼠稱重，按體重隨機(jī)分為2組，每組動(dòng)物20只，雌雄各 半。
[0084]給藥:各鼠禁食不禁水，12小時(shí)后，給藥組按40ml/kg體重灌胃給予1.20g/ml的本 發(fā)明口服液1，給藥3次，間隔8h，然后連續(xù)觀察14天。
[0085] -般癥狀觀察:觀察內(nèi)容包括飲水、進(jìn)食，外觀體征、一般行為活動(dòng)。
[0086] 觀察時(shí)間:連續(xù)給藥7天，停藥觀察7天，共觀察14天。
[0087] 觀察頻率:給藥期間，每天給藥后l/2、l、2、3、4、6、8h。試驗(yàn)第2天至第14天，每日上 午、下午各觀察一次。
[0088] 觀察記錄:記錄毒性反應(yīng)癥狀出現(xiàn)、加重、減輕和死亡的時(shí)間。
[0089]體重:給藥后第2天起隔日稱量SD大鼠體重。
[0090]解剖觀察:給藥第14天，處死并大體解剖動(dòng)物，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟 器有無(wú)病變，有病變臟器進(jìn)行病理檢查。
[0091 ]統(tǒng)計(jì)方法:使用SPSS13.0軟件，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法為t檢驗(yàn)。
[0092]實(shí)驗(yàn)結(jié)果 [0093] 一般癥狀觀察結(jié)果
[0094]連續(xù)給藥本發(fā)明中藥復(fù)方組合物濃縮煎煮液后，無(wú) SD大鼠死亡，SD大鼠飲水、進(jìn) 食、外觀體征、一般行為活動(dòng)均正常，停藥觀察期間，亦未見(jiàn)SD大鼠死亡。
[0095] 體重觀察結(jié)果
[0096] 連續(xù)觀察14日內(nèi)，一般狀況良好，飲食、二便正常，且外觀、皮毛、行為、呼吸均正 常，鼻、眼、口腔無(wú)異常分泌物。
[0097]解剖觀察結(jié)果
[0098] 觀察結(jié)束后處死SD大鼠，大體解剖肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等各主要臟器色澤、 形狀、大小等未見(jiàn)異常。
[0099]最大給藥量計(jì)算
[0100] 本發(fā)明中藥復(fù)方組合物濃縮煎煮液SD大鼠灌胃給藥的最大給藥量為93.91g/kg， 該劑量以臨床成人(體重按60kg計(jì)）日用劑量為30g折算，相當(dāng)于臨床成人用量(0.5g/kg)的 180倍，現(xiàn)代藥理學(xué)認(rèn)為，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)給藥為人體給藥量的100倍以上，而無(wú)明顯毒副作用且無(wú) 遲發(fā)毒性反應(yīng)，即可認(rèn)為該藥無(wú)明顯毒副作用，因此通過(guò)本發(fā)明中藥復(fù)方組合物急性毒性 實(shí)驗(yàn)研究，其給藥劑量為人體給藥劑量的187.82倍，可以認(rèn)為其具有很好的安全性。
[0101] 本發(fā)明長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究
[0102] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:同急毒性實(shí)驗(yàn)。
[0103]實(shí)驗(yàn)藥物:制備方法同急毒性實(shí)驗(yàn)，其生藥濃度分別0.60g/ml、0.30g/ml，4°C保存 備用。
[0104] 動(dòng)物飼養(yǎng)與管理:同急毒性實(shí)驗(yàn)。
[0105] 給藥途徑:灌胃，給藥體積40ml/kg，每日給藥2次，連續(xù)給藥30天。
[0106]動(dòng)物分組:取檢疫合格的SD大鼠稱重，按體重隨機(jī)分為3組，每組動(dòng)物20只，雌雄各 半。
[0107] 給藥：各鼠禁食不禁水，給藥組按40ml/kg體重灌胃給予生藥濃度0.805g/ml、 0.5635g/kg的實(shí)施例1制備的口服液1，每日給藥2次，然后連續(xù)觀察30天。
[0108] 觀察項(xiàng)目與指標(biāo):同急毒性實(shí)驗(yàn)。
[0109] 統(tǒng)計(jì)方法:使用SPSS13.0軟件，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法為t檢驗(yàn)。
[0110] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0111] -般癥狀觀察結(jié)果:每日2次灌胃本發(fā)明實(shí)施例1制備的口服液1后，SD大鼠飲水、 進(jìn)食、外觀體征、一般行為活動(dòng)均正常，連續(xù)觀察30天未見(jiàn)SD大鼠死亡。
[0112] 體重觀察結(jié)果：給藥后SD大鼠活動(dòng)正常。觀察30日內(nèi)，動(dòng)物未見(jiàn)死亡，一般狀況良 好，飲食、二便正常，且外觀、皮毛、行為、呼吸均正常，鼻、眼、口腔無(wú)異常分泌物，與對(duì)照組 比較，未見(jiàn)明顯異常反應(yīng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05)。
[0113] 解剖觀察結(jié)果:觀察結(jié)束后處死SD大鼠，大體解剖肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等各 主要臟器色澤、形狀、大小等未見(jiàn)異常。
[0114]最大給藥量計(jì)算：本發(fā)明口服液SD大鼠灌胃給藥的最大給藥量為64.4g/kg、 45.08g/kg，該劑量以臨床成人(體重按60kg計(jì)）日用劑量為30g折算，相當(dāng)于臨床成人用量 (0.5g/kg)的128.8倍、90.16倍，現(xiàn)代藥理學(xué)認(rèn)為，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)給藥連續(xù)給藥30天，動(dòng)物無(wú)明顯 毒副作用，亦無(wú)明顯的蓄積毒性，可以認(rèn)為其具有很好的安全性。
[0115] 實(shí)施例5臨床實(shí)驗(yàn)研究
[0116] 一般資料：193例患者隨機(jī)分為兩組，治療組119例，男75例，女44例；其中術(shù)后11 例;年齡12-38歲，平均20.2歲。對(duì)照組74例，男43例，女31例;其中術(shù)后10例;年齡9-32歲，平 均20.3歲。
[0117]納入標(biāo)準(zhǔn)，所選病例均有活檢病理證實(shí)，心、肝、腎功能正常，預(yù)計(jì)生存期大于3月， 簽署知情同意書。
[0118] 治療方法:對(duì)照組采用常規(guī)靜脈化療滴注及對(duì)癥支持治療，化療方案為:奧沙利鉑 130mg/m2,靜滴，第1天;阿霉素30mg/m 2,靜注，第1-2天；甲氨喋呤針12g/m2,靜滴，第15天、第 22天，甲氨喋呤靜滴6h，結(jié)束后6h開始口服亞葉酸鈣片15mg，每6h給藥1次，共12次，結(jié)束后 休息1-2周重復(fù)?；煹耐瑫r(shí)常規(guī)抑酸、止吐及保肝，所有病例均化療4個(gè)周期以上，治療組 在此基礎(chǔ)上服用本發(fā)明實(shí)施例1制備的口服液1，每日3次，每次50ml。
[0119] 療效判定標(biāo)準(zhǔn):所有病例均完成4個(gè)周期化療，參照WHO療效標(biāo)準(zhǔn)，分為完全緩解 (CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)和進(jìn)展(PD)。毒性反應(yīng)按WHO抗癌藥物毒性標(biāo)準(zhǔn)分為0-IV度。
[0120] 結(jié)果
[0121] 腫瘤緩解情況
[0122] 4個(gè)周期化療后，治療組死亡5例，對(duì)照組死亡9例，治療組和對(duì)照組均無(wú) CR病例，PR 病例治療組18例，對(duì)照組4例；SD病例治療組86例，對(duì)照組40例;PD病例，治療組20例，對(duì)照組 21例;PR+SD治療組為91.23%，對(duì)照組為67.69%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (見(jiàn)表1)
[0123] 表1腫瘤緩解情況
[0125] 治療組的PR、SD、H)與對(duì)照組相比有明顯差異(P<0.05)
[0126] 化療不良反應(yīng)，見(jiàn)表2。
[0127] 表2化療藥不良反應(yīng)
[0129] 治療組的不良反應(yīng)發(fā)生率與對(duì)照組相比有明顯差異(P<0.05)。
[0130] 骨肉瘤的治療方法有手術(shù)、放療、化療、中藥治療及免疫治療等，單純化療易損傷 人體正氣，對(duì)消化道系統(tǒng)及造血系統(tǒng)有影響，致患者納差、乏力、貧血、白細(xì)胞及血小板下降 等。配合中藥治療，既能減輕化療副作用，又能增強(qiáng)療效，改善癥狀，緩解痛苦。中藥治療組 與單純化療組比較，患者的胃腸反應(yīng)及骨髓抑制大大降低，化療結(jié)束后患者體質(zhì)恢復(fù)較快， 抗病能力增強(qiáng)，提高了生活質(zhì)量
[0131] 實(shí)施例6動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0132] 材料:骨肉瘤0S-732細(xì)胞株購(gòu)自北京積水潭醫(yī)院;RPMI-1640干粉及TRIzol購(gòu)自美 國(guó)Gibco公司；胰蛋白酶、MTT及RnaseA均購(gòu)自華美生物工程公司；實(shí)施例1制備的口服液1; 順鉑由齊魯制藥廠提供;Fas多克隆抗體購(gòu)自福州邁新生物有限公司;B-actin及Fas引物由 上海生工生物有限公司合成;PCR試劑購(gòu)自TAKARA公司。
[0133] 儀器：IT-61型二氧化碳培養(yǎng)箱（日本ΥΑΜΑ-Τ0公司）；LH50A型倒置相差顯微鏡 (OLYMPUS);MKASENI 1酶標(biāo)分析儀(LABSYSTEMS生產(chǎn)）；H-600型透射電子顯微鏡（日立公司）； JSM-7300型掃描電子顯微鏡（日立公司）。
[0134] 細(xì)胞培養(yǎng)及給藥方法:0S-732細(xì)胞株按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁 后給藥，具體分組方法見(jiàn)表3所示。
[0135] 免疫組化方法檢測(cè)Fas表達(dá)
[0136] 調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至2 X105/ml后，分別加入不同濃度的本發(fā)明實(shí)施例1制備的口服液 1，繼續(xù)培養(yǎng)24h，對(duì)照組則只加入培養(yǎng)液。取出蓋玻片，以4°C丙酮固定lOmin。使用SP法進(jìn)行 免疫組化染色，染色過(guò)程按說(shuō)明書進(jìn)行。以胞漿呈棕黃色為陽(yáng)性，利用顯微圖像分析系統(tǒng)得 出平均灰度值，來(lái)反映 Fas表達(dá)強(qiáng)度。
[0137] 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)Fas表達(dá)
[0138] 收集腫瘤細(xì)胞，按試劑盒說(shuō)明書提取總RNA后，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，再行Fas的PCR擴(kuò) 增，擴(kuò)增產(chǎn)物為513bp。取10μ1擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后，B-actin基因表達(dá)為參照，用凝膠分析儀比 較Fas在不同組間表達(dá)水平的差異。
[0139] MTT法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞抑制率
[0140] 5X105/ml細(xì)胞接種于96孔板，每孔100μΙ，貼壁后加入不同濃度口服液1或?qū)φ?PBS的細(xì)胞培養(yǎng)基，每孔100μΙ，每種濃度平行4孔，培養(yǎng)24h后，加入5mg/ml的ΜΤΤ20μ1，37°C 孵育4h，棄上清加150ylDMS0溶解，540nm測(cè)定吸光度。細(xì)胞抑制率（％) = (1-實(shí)驗(yàn)組吸光度 值/對(duì)照組吸光度值）X 100%。
[0141] 腫瘤細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察
[0142] 于倒置相差顯微鏡下直接觀察腫瘤細(xì)胞形態(tài)及貼壁情況。另取蓋玻片置入6孔板 內(nèi)，待細(xì)胞凋亡后，固定l〇min，加入0.5ml染色液，染5min后，將蓋玻片蓋在滴有抗熒光淬滅 封片液的載玻片上，熒光顯微鏡下照片。
[0143] 掃描電鏡及透射電鏡下腫瘤細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)觀察
[0144] 0S-732細(xì)胞經(jīng)2.5%戊二醛固定后，按常規(guī)掃描電鏡及透射電鏡的操作程序制備 電鏡標(biāo)本，并分別拍攝下電鏡照片。
[0145] 流式細(xì)胞儀測(cè)定凋亡細(xì)胞所占比例將細(xì)胞加入70%冷乙醇固定48h。離心棄上清 后，加入 10g/LRNase200yl，37°C 水浴30min后，洗去RNase，100ylPI染液4°C避光染色lh。 FAC-SCAN流式細(xì)胞儀測(cè)定熒光強(qiáng)度，激發(fā)光波長(zhǎng)488nm，Cel-lQuest分析軟件測(cè)定細(xì)胞凋亡 率。
[0146] 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0147] 應(yīng)用SPSS13.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異用 兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。
[0148] 結(jié)果
[0149] 本發(fā)明口服液1與順鉑對(duì)骨肉瘤0S-732細(xì)胞的抑制作用
[0150] 本發(fā)明口服液1可抑制0S-732細(xì)胞增殖，并呈濃度依賴性。除25μg/ml組與125yg/ ml組比較抑制率無(wú)明顯改變外，其余各組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，可見(jiàn)本發(fā)明口服 液1濃度增加到25μg/ml以上，對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用已不再明顯提升。并且此時(shí)的促凋亡 作用也未見(jiàn)明顯增加。順鉑對(duì)0S-732細(xì)胞的抑制率及誘導(dǎo)凋亡率的影響，均具有濃度依賴 性，不同濃度組間比較差異有顯著性意義(P<〇.01)，見(jiàn)表3。
[0151] 表3中藥、順鉑作用下的骨肉瘤0S-732細(xì)胞的增殖抑制率及誘導(dǎo)凋亡率)
[0153] 本發(fā)明口服液對(duì)骨肉瘤細(xì)胞表面Fas受體表達(dá)的影響
[0154] 表4不同濃度口服液作用下的骨肉瘤0S-732細(xì)胞的Fas的表達(dá)< )
[0156] 低濃度口服液與低濃度順鉑聯(lián)用對(duì)OS-732細(xì)胞的抑制作用。
[0157] ①0S-732細(xì)胞凋亡的形態(tài)改變:相差顯微鏡下見(jiàn)單用順鉑（lμg/ml)時(shí)僅部分細(xì)胞 變小，變圓；與25μg/ml本發(fā)明口服液1合用時(shí)可見(jiàn)染色質(zhì)及細(xì)胞質(zhì)濃縮，大量細(xì)胞脫落而懸 浮于培養(yǎng)液中。熒光顯微鏡下見(jiàn)單用順鉑（lμg/ml)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)熒光呈均勻分布，以淡染的正 常細(xì)胞為主;合用時(shí)可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)濃集、發(fā)亮的熒光顯色，表明有大量凋亡細(xì)胞存在。
[0158] ②0S-732細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變:單用順鉑（lμg/ml)時(shí)，于掃描電鏡下見(jiàn)細(xì)胞表面 微絨毛比較豐富且向周圍擴(kuò)展;透射電鏡下僅見(jiàn)細(xì)胞核畸形。順鉑（lμg/ml)與25μ1/πι1本發(fā) 明口服液1合用時(shí)，于掃描電鏡下見(jiàn)凋亡細(xì)胞表面微絨毛減少且擴(kuò)展程度縮小，細(xì)胞輪廓變 模糊；透射電鏡下見(jiàn)核固縮，染色質(zhì)濃縮于核膜，細(xì)胞皺縮，胞漿空泡化明顯，可見(jiàn)凋亡小 體。25μg/ml的本發(fā)明口服液與lμg/ml順鉑合用于0S-732細(xì)胞24h，細(xì)胞抑制率及誘導(dǎo)凋亡 率與單用相比，差異有顯著性意義(P<〇.01)，見(jiàn)表4。
[0159] 本發(fā)明口服液具有誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生白介素、干擾素、腫瘤壞死因子及增強(qiáng)LAK細(xì)胞、 NK細(xì)胞活性等免疫調(diào)節(jié)作用具有誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生白介素、干擾素、腫瘤壞死因子及增強(qiáng)LAK細(xì) 胞、NK細(xì)胞活性等免疫調(diào)節(jié)作用。本研究發(fā)現(xiàn)本發(fā)明中藥復(fù)方組合物與順鉑合用，極大地提 升了骨肉瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，表明本發(fā)明口服液是一種很理想的化療增敏劑。
[0160]所有上述的首要實(shí)施這一知識(shí)產(chǎn)權(quán)，并沒(méi)有設(shè)定限制其他形式的實(shí)施這種新產(chǎn)品 和/或新方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員將利用這一重要信息，上述內(nèi)容修改，以實(shí)現(xiàn)類似的執(zhí)行情 況。但是，所有修改或改造基于本發(fā)明新產(chǎn)品屬于保留的權(quán)利。
[0161]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任 何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等 效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所 作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合物，其特征在于:原料藥包括黨參、炒白 術(shù)、炙黃芪、茯苓、生甘草、法半夏、陳皮、木香、當(dāng)歸、白芍、丹參、川芎、熟地黃、延胡索、香 附、狗脊、桑寄生、續(xù)斷、秦艽、刺五加、三棱、莪術(shù)、斑蝥、地龍、全蝎、海藻、生牡蠣、夏枯草和 王不留行。2. 如權(quán)利要求1所述的聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合物，其特征在于:各原料 藥的重量分別為黨參35g~50g、炒白術(shù)20g~30g、炙黃苗25g~40g、茯苳15g~25g、生甘草 IOg~20g、法半夏15g~25g、陳皮IOg~20g、木香15g~25g、當(dāng)歸IOg~30g、白茍25g~30g、 丹參15g~20g、川考25g~35g、熟地黃20g~30g、延胡索IOg~20g、香附5g~15g、狗脊IOg~ 20區(qū)、桑寄生1(^~2(^、續(xù)斷58~158、秦充1(^~2(^、刺五加2(^~3(^、三棱158~258、莪術(shù) 20g~30g、斑蜜5g~15g、地龍IOg~20g、全蝎15g~25g、海藻IOg~20g、生牡^SlOg~20g、夏 枯草15g~25g、王不留行20g~30g。3. 如權(quán)利要求1或2所述的聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合物，其特征在于：各 原料藥的重量分別為黨參40g~45g、炒白術(shù)25g~30g、炙黃苗30g~35g、茯苳20g~25g、生 甘草IOg~15g、法半夏20g~25g、陳皮15g~20g、木香15g~20g、當(dāng)歸20g~25g、白茍25g~ 30區(qū)、丹參158~2(^、川考3(^~358、熟地黃2(^~258、延胡索1(^~158、香附58~1(^、狗脊 15區(qū)~2(^、桑寄生1(^~158、續(xù)斷58~1(^、秦充1(^~158、刺五加258~3(^、三棱158~2(^、 莪術(shù)25g~30g、斑蜜5g~10g、地龍IOg~15g、全蝎15g~20g、海藻IOg~15g、生牡^SlOg~ 15g、夏枯草15g~20g、王不留行20g~25g。4. 如權(quán)利要求1至3所述的聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的中藥復(fù)方組合物，其特征在于：各 原料藥的重量分別為黨參45g、炒白術(shù)25g、炙黃芪35g、茯苓20g、生甘草15g、法半夏20g、陳 皮15g、木香20g、當(dāng)歸20g、白芍30g、丹參20g、川芎30g、熟地黃25g、延胡索15g、香附10g、狗 脊15g、桑寄生15g、續(xù)斷10g、秦艽15g、刺五加25g、三棱20g、莪術(shù)25g、斑蝥10g、地龍15g、全 蝎20g、海藻15g、生牡蠣15g、夏枯草20g、王不留行25g。5. -種聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的藥物，其特征在于：由活性成分和藥學(xué)上可接受的賦 形劑或載體組成，所述活性成分為權(quán)利要求1至4所述中藥復(fù)方組合物的提取物。6. 如權(quán)利要求5所述的聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的藥物，其特征在于:所述藥學(xué)上可接受 的賦形劑包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、載體、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、 表面活性劑、吸附載體和潤(rùn)滑劑等。7. 如權(quán)利要求5或6所述的聯(lián)合化療藥治療骨肉瘤的藥物，其特征在于:所述藥物為口 服劑型，包括煎煮劑、膠囊劑、片劑、散劑、顆粒劑、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑或酊劑。8. 權(quán)利要求1至4所述中藥復(fù)方組合物的提取方法，其特征在于，包括： 第一步，按重量配比取法半夏、當(dāng)歸、白芍、丹參、川芎、熟地黃、延胡索、狗脊、桑寄生、 續(xù)斷、秦艽、刺五加、三棱、莪術(shù)、斑蝥、地龍、全蝎、海藻、生牡蠣和王不留行藥材，粉碎，混合 在一起，用相對(duì)于混合物質(zhì)量8~12倍量醇濃度50~80 %乙醇滲漉提取，滲漉液濃縮至無(wú)醇 味，上大孔吸附樹脂吸附，樹脂用量為該步使用藥材總量的0.5~3倍，2~4倍樹脂體積的純 水洗脫雜質(zhì)，先用4倍樹脂體積的醇濃度70 %的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體積的醇濃度80 % 的乙醇洗脫，在用3倍樹脂體積的醇濃度90 %的乙醇洗脫，洗脫液合并并濃縮，干燥粉碎，得 第一細(xì)粉； 第二步，按重量配比取余下原料藥組分，粉碎，混合在一起，加相對(duì)于混合物質(zhì)量6~10 倍量水，100 °C提取2~4次，每次0.5~2小時(shí)，水煎液合并，濾液減壓濃縮至相當(dāng)于該步藥材 0.5-2g/mL，加2-5倍量醇濃度95 %乙醇沉淀，上清液濃縮至無(wú)醇味，用鹽酸調(diào)節(jié)pHl~3，乙 酸乙酯萃取2~5次，萃取液減壓濃縮，干燥粉碎，得第二細(xì)粉； 第三步，將第一細(xì)粉和第二細(xì)粉混合均勻，得到中藥復(fù)方組合物提取細(xì)粉。9. 一種藥物口服液，其特征在于：由權(quán)利要求1至4所述中藥復(fù)方組合物的提取物和藥 學(xué)上可接受的賦形劑或載體組成。
【文檔編號(hào)】A61K35/646GK105902951SQ201610285595
【公開日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年5月3日
【發(fā)明人】張緒偉
【申請(qǐng)人】張緒偉