一種活細(xì)胞精華液的制備方法及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種活細(xì)胞精華液的制備方法及其應(yīng)用，所述活細(xì)胞精華液的制備方法，包括步驟：A）使用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基對臍帶組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞或胎盤組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞進行培養(yǎng)，收集細(xì)胞培養(yǎng)液；B）向步驟A）所得細(xì)胞培養(yǎng)液中加入純玫瑰花露，即得活細(xì)胞混合液。本發(fā)明所述的活細(xì)胞精華液的制備方法擺脫了傳統(tǒng)的植物成分萃取和精細(xì)化工生產(chǎn)工藝，采用細(xì)胞工程的方法、通過培養(yǎng)人臍帶組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞獲得含有親人體皮膚的有益活性蛋白分子的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液，將所得細(xì)胞培養(yǎng)液作為整個產(chǎn)品充質(zhì)干細(xì)胞混合液的基礎(chǔ)配方，而且間充質(zhì)干細(xì)胞混合液中不添加化工添加物，最大程度保證了產(chǎn)品持續(xù)使用的安全性。
【專利說明】
一種活細(xì)胞精華液的制備方法及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種活細(xì)胞精華液的制備方法及其應(yīng)用。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003] 皮膚衰老的主要原因是皮膚失水和皮脂過氧化。隨著年齡的增加，皮脂腺分泌逐 漸減少，加上日曬和游離基的不良作用，表皮逐漸變薄，表皮隆起，乳頭體扁平，蛋白質(zhì)生成 降低，皮下脂肪減少，容易造成下垂或皺紋，膚色晦暗；另一方面，皮膚的血流流通衰退，血 管抵抗力變?nèi)酰饾u生成斑，導(dǎo)致皮膚的衰老。
[0004] 隨著生活水平的提高，人民對美的追求，尤其是女性對日常生活護膚愈加重視。從 最初清潔和保護皮膚的功效，到現(xiàn)在帶有生理功效甚至特別定制的化妝品，高安全性及更 科學(xué)性，將是未來的發(fā)展趨勢。
[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種活細(xì)胞混合液及其制備方法、美 容制劑，該美容制劑效果較好。
[0007] 本發(fā)明提供了一種抗衰美白的活細(xì)胞精華液，由有效成分和美容領(lǐng)域可接受的輔 料組成，所述有效成分包括人間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞因子，所述輔料包括熊果苷、海藻糖、維生 素 E和甘油，步驟如下： (1)使用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基對臍帶組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞進行培養(yǎng)，收集細(xì)胞培 養(yǎng)液； (2 )向步驟(1)所得細(xì)胞培養(yǎng)液中加入體積比為20%--40%的純玫瑰花露(純玫瑰花露來 自廣州市綠香島日用品有限公司，批號N020160418)，即得活細(xì)胞混合液。
[0008] 所述人干細(xì)胞生長因子為分泌型人干細(xì)胞生長因子，包括堿性成纖維細(xì)胞生長因 子(bFGF)，角質(zhì)細(xì)胞生長因子(KGF)，轉(zhuǎn)化生長因子-m(TGF-m)，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF) 和胰島素樣生長因子(IGH中的至少兩種。
[0009] 人干細(xì)胞生長因子濃度為1~40mg/ml。
[0010] 其中優(yōu)選方案為：角質(zhì)細(xì)胞生長因子的濃度為l〇mg/ml，堿性成纖維細(xì)胞生長因子 的濃度為8mg/ml，轉(zhuǎn)化生長因子-β?的濃度為7mg/ml，血管內(nèi)皮生長因子的濃度為10mg/ml， 胰島素樣生長因子的濃度為5mg/ml; 進一步的:還向步驟(2)所得細(xì)胞培養(yǎng)液中加入熊果苷、海藻糖、維生素 E和甘油。
[0011] 在所述間充質(zhì)干細(xì)胞混合液中：熊果苷的濃度為l-5mg/ml;海藻糖的濃度為1-5mg/ml;維生素 E的濃度為l-5mg/ml，甘油的濃度為5-10mg/ml。
[0012 ]其中活細(xì)胞混合液的制備，更為具體的步驟為： (1)采集并獲取新生兒臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞：用含有青鏈霉素的生理鹽水沖洗新生兒臍 帶組織，剪成小塊后鋪在細(xì)胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)； (2 )細(xì)胞培養(yǎng)皿用多聚賴氨酸包被，自然晾干后使用； (3) 用原代培養(yǎng)基對將貼壁的干細(xì)胞進行原代培養(yǎng)，每三天更換一次細(xì)胞培養(yǎng)液，消化 細(xì)胞，消化結(jié)束后傳代培養(yǎng)基進行終止消化，按貼壁面積1:3比例進行傳代； (4) 收集細(xì)胞培養(yǎng)液，收集傳代前的細(xì)胞培養(yǎng)上清液，得到細(xì)胞培養(yǎng)液； (5) 收集的細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)過過濾系統(tǒng)，濾去細(xì)胞碎片及微生物； (6) 所得培養(yǎng)液與玫瑰純露混合，即得到所述的活細(xì)胞混合液;置于0-8 °C儲存。
[0013] 由上述方法制備的間充質(zhì)干細(xì)胞混合液，可以廣泛應(yīng)用于化妝品中。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果： 細(xì)胞生長因子對多種細(xì)胞生理功能和代謝活動發(fā)揮生理調(diào)節(jié)作用，它們在體內(nèi)含量極 微，但生物活性極高。在美容護膚、整形外科、燒傷潰瘍以及各種皮膚病的傷口修復(fù)與愈合 中有重要作用。 細(xì)胞因子中富含堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)，角質(zhì)細(xì)胞生長因子(KGF)，轉(zhuǎn)化生長 因子-m(TGF-m)，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和胰島素樣生長因子(IGF)及其它多種營養(yǎng)物 質(zhì)，作用是： 1、 提供營養(yǎng):精華中含有皮膚日常需要的、足夠的營養(yǎng)成分，給肌膚補充足夠滋潤； 2、 表皮生長因子與角質(zhì)細(xì)胞因子、胰島素樣生長因子聯(lián)合熊果苷促進皮膚的表皮層及 角質(zhì)層增生分化，增強皮膚的厚度及彈性； 3、 血管內(nèi)皮生長因子會促進表皮毛細(xì)血管的血供，調(diào)節(jié)淺表層的平衡狀態(tài)，改善肌膚 缺水情況，起到鎖水保濕的作用； 4、 成纖維細(xì)胞生長因子促進肌膚纖維的形成及膠原蛋白的填充，讓肌膚更有光澤； 5、 有效抑制黑色素的形成，減淡瘢痕，延緩皮膚衰老。
[0014] 本產(chǎn)品不添加香精，因大部分含細(xì)胞因子的護膚品有輕微的血腥味，使用玫瑰純 露可以遮蓋血腥味，還有美白作用。
[0015] 本發(fā)明所述各原料的用量和理化性質(zhì)產(chǎn)生協(xié)調(diào)作用，積極效果在于:修復(fù)細(xì)胞，美 白養(yǎng)顏。PH值與人體皮膚的PH值接近，對皮膚無刺激作用。使用后明顯感到滋潤、柔軟，無油 膩感。對皮膚具有明顯的美白滋潤，護膚美容的效果。
[0016] 本發(fā)明間充質(zhì)干細(xì)胞混合液擺脫了傳統(tǒng)的植物成分萃取和精細(xì)化工生產(chǎn)工藝，采 用細(xì)胞工程的方法、通過培養(yǎng)人臍帶組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞獲得含有親人體皮膚的有益 活性蛋白分子的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液，將所得細(xì)胞培養(yǎng)液作為整個產(chǎn)品充質(zhì)干細(xì)胞混合液 的基礎(chǔ)配方，而且間充質(zhì)干細(xì)胞混合液中不添加化工添加物，如：乙醇、鉛汞、著色劑、礦物 油等致敏毒素，最大程度保證了產(chǎn)品持續(xù)使用的安全性。
[0017] 本發(fā)明在間充質(zhì)干細(xì)胞混合液中加入熊果苷與維生素 E，微量熊果苷能刺激細(xì)胞 生長速度增快，提高皮膚真皮層組織細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的分裂增殖力;維生素 E能讓熊果苷 在精華液中更穩(wěn)定，還有抗皺、抗老化作用;本發(fā)明在間充質(zhì)干細(xì)胞混合液中含有堿性成纖 維細(xì)胞生長因子、角質(zhì)細(xì)胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-m，這幾種生長因子具有強化皮膚屏 障防御機能、對抗自由基抗氧化的功效;其中的活性因子包括血管內(nèi)皮生長因子、胰島素樣 生長因子，對于皮膚的美白補水修復(fù)具有更好的效果。本發(fā)明還特別添加海藻糖，其能夠促 進皮膚內(nèi)在膠原及彈性纖維產(chǎn)生、加強皮膚角質(zhì)層細(xì)胞對外界環(huán)境的防御機能;本發(fā)明間 充質(zhì)干細(xì)胞混合液中的各種配方成分互相協(xié)同，得以實現(xiàn)其最佳的皮膚保養(yǎng)效果。
[0018] 本發(fā)明間充質(zhì)干細(xì)胞混合液的制備方法簡單，可以進行大規(guī)模推廣形成產(chǎn)業(yè)化生 產(chǎn)加工。
【具體實施方式】
[0019] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細(xì)說明： (1)使用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基對臍帶組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞進行培養(yǎng)，收集細(xì)胞培 養(yǎng)液； (2 )向步驟（1)所得細(xì)胞培養(yǎng)液中加入加入體積比為30%的純玫瑰花露(純玫瑰花露來 自廣州市綠香島日用品有限公司，批號N020160418)，即得活細(xì)胞混合液。
[0020] 進一步的:還向步驟(2)所得細(xì)胞培養(yǎng)液中加入熊果苷、海藻糖、維生素 E和甘油。
[0021] 步驟一:將熊果苷、維生素 E均勻分散在甘油中，然后將該混合物加熱至50°C，全部 溶解； 步驟二:將干細(xì)胞混合液加熱至37 °C解凍； 將步驟一物料緩慢加入至步驟二中的物料中，攪拌均勻后冷卻出料。
[0022] 所述的活細(xì)胞精華液，其配方中的原料及重量比分別是：人干細(xì)胞生長因子濃度 為40mg/ml;熊果苷的濃度為5mg/ml;海藻糖的濃度為5mg/ml;維生素 E的濃度為5mg/ml，甘 油的濃度為l〇mg/ml。
[0023] 對比試驗 選取30位25-55歲身體健康、無皮膚病的女性，隨機分為實驗組和對照組;試驗前使試 驗組和對照組的志愿者在室溫20-25Γ，濕度40-60%的條件下，提前1小時進入測試環(huán)境中 安靜待測，在測試對象的左右前手臂確定測試區(qū)域并提前20分鐘暴露，面積大約30mmX 30mm； 使用TMT210TeWameter皮膚水分散失測試儀進行電容及水分經(jīng)皮膚散失率測試，使用 SEM575型皮膚彈性檢測儀進行皮膚彈性及緊實性檢測，測試結(jié)果為初始值； 試驗組使用活細(xì)胞精華液，對照組使用10%透明質(zhì)酸鈉溶液;使用方法分為早晚各涂 抹同一區(qū)域一次，連續(xù)使用28天。在試驗第28天當(dāng)天最后一次使用試驗樣品和對照品后，使 試驗組和對照組的志愿者在室溫20-25°C，濕度40-60%的環(huán)境中保持1小時，測定前20分鐘 暴露受試驗區(qū)域測試，測試結(jié)果為試驗值； 對照組試驗值與初始值進行比較，對照組的皮膚水分散失率增加了 14.29%;平均電容 增加了 1.8%;皮膚彈性增加6.3%;皮膚平均緊實性增加0.2%; 試驗組試驗值與初始值進行比較，試驗組的皮膚水分散失率增加了 50%;平均電容增加 了 11%;皮膚彈性增加〇. 4%;皮膚平均緊實性增加4.5%。
[0024] 對照組試驗結(jié)果：
試驗組試驗結(jié)果：
上述結(jié)果表明，活細(xì)胞精華液具有明顯促進角質(zhì)形成細(xì)胞生長繁殖的生理活性，能夠 修復(fù)皮膚，增強皮膚的緊實性和彈性，可以產(chǎn)生抵抗皮膚衰老的效果。同時，活細(xì)胞精華液 中的細(xì)胞因子含有大量的極性基團，可以作為保濕因子，因而又具有阻止皮膚中的酪氨酸 轉(zhuǎn)化為黑色素的作用，使皮膚保濕美白。
【主權(quán)項】
1. 一種活細(xì)胞精華液的制備方法，其特征是:包括以下步驟： A) 使用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基對臍帶組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞或胎盤組織來源的間充 質(zhì)干細(xì)胞進行培養(yǎng)，收集細(xì)胞培養(yǎng)液； B) 向步驟A)所得細(xì)胞培養(yǎng)液中加入加入體積比為20%-40%的純玫瑰花露，即得活細(xì)胞 混合液。2. 如要求1所述的活細(xì)胞精華液的制備方法，其特征是:所述干細(xì)胞培養(yǎng)基中的干細(xì)胞 生長因子為分泌型干細(xì)胞生長因子，為堿性成纖維細(xì)胞生長因子，角質(zhì)細(xì)胞生長因子，轉(zhuǎn)化 生長因子-m，血管內(nèi)皮生長因子和胰島素樣生長因子中的至少兩種。3. 如權(quán)利要求2所述的活細(xì)胞精華液的制備方法，其特征是:干細(xì)胞生長因子濃度為1 ~40mg/ml〇4. 如權(quán)利要求3所述的活細(xì)胞精華液的制備方法，其特征是:所述干細(xì)胞生長因子包括 5種，其中角質(zhì)細(xì)胞生長因子的濃度為10mg/ml，堿性成纖維細(xì)胞生長因子的濃度為8mg/ml， 轉(zhuǎn)化生長因子-β?的濃度為7mg/ml，血管內(nèi)皮生長因子的濃度為10mg/ml，胰島素樣生長因 子的濃度為5mg/ml。5. 如權(quán)利要求1所述的活細(xì)胞精華液的制備方法，其特征是:還包括步驟： C) 向步驟B)所得細(xì)胞培養(yǎng)液中加入熊果苷、海藻糖、維生素 E和甘油。6. 如權(quán)利要求5所述的活細(xì)胞精華液的制備方法，其特征是：所述熊果苷的濃度為1-5mg/ml，海藻糖的濃度為l-5mg/ml，維生素 E的濃度為l-5mg/ml，甘油的濃度為5-10mg/ml。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種活細(xì)胞混合液的制備方法，其特征在于： 所述A)步驟包括： A1)采集并獲取新生兒臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞：用含有青鏈霉素的生理鹽水沖洗新生兒臍 帶組織，剪成小塊后鋪在細(xì)胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)； A2)細(xì)胞培養(yǎng)皿用多聚賴氨酸包被，自然晾干后使用； A3)用原代培養(yǎng)基對將貼壁的干細(xì)胞進行原代培養(yǎng)，每三天更換一次細(xì)胞培養(yǎng)液，消化 細(xì)胞，消化結(jié)束后傳代培養(yǎng)基進行終止消化，按貼壁面積1:3比例進行傳代； A4)收集細(xì)胞培養(yǎng)液，收集傳代前的細(xì)胞培養(yǎng)上清液，得到細(xì)胞培養(yǎng)液； A5)收集的細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)過過濾系統(tǒng)，濾去細(xì)胞碎片及微生物。8. -種美容制劑，其特征是，所述美容制劑包括權(quán)利要求1-7任一項所述制備方法制備 而來的活細(xì)胞混合液。
【文檔編號】A61K8/97GK106074356SQ201610633526
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年8月4日 公開號201610633526.2, CN 106074356 A, CN 106074356A, CN 201610633526, CN-A-106074356, CN106074356 A, CN106074356A, CN201610633526, CN201610633526.2
【發(fā)明人】方珍, 王宇環(huán), 羅曉玲
【申請人】深圳市合一康生物科技股份有限公司