專利名稱：從植物生物質(zhì)提取、純化和轉(zhuǎn)化類黃酮化合物的制作方法
參考文獻(xiàn)Abou-Karam，M.，和Shier，W.T.1992.從Waldsteinia fragarioides分離和表征抗病毒類黃酮化合物.J.Nat.Prod.551525-1527.
Agullo，G.，Gamet，L.，Besson，C.，Demigne，C.，和Remesy，C.1994.櫟精對(duì)活躍分裂的結(jié)腸癌HT29和CaCa-2細(xì)胞產(chǎn)生優(yōu)選的細(xì)胞毒性作用.Cancer Letters.8755-63.
Agullo，G.，Gamet-Payrastve，L.，Manenti，S.，Viala，C.，Remesy，C.，Chap，H.，和Payrastve，B.1997.類黃酮化合物結(jié)構(gòu)和磷脂酰肌醇3-激酶抑制之間的關(guān)系酪氨酸激酶和蛋白激酶C抑制的比較.Biochem.Pharmacology.531649-1657.
匿名.1990a.Hayashibara生物化學(xué)向樣品分配高濃度水溶性蕓香苷.New Technology Japan.2月.34頁(yè).
匿名.1990b.起到維生素P作用的水溶性蕓香苷.Japan ReportMedical Technology.二月.
Arata，A.1992.皮膚的外用劑.日本專利JP6128142(1994-05-10頒發(fā)).
Ashida，H.，F(xiàn)ukuda，I.，Yamashita，T.，和Kanazawa，K.2000.飲食水平的黃酮和類黃酮化合物抑制二氧芑誘導(dǎo)的芳基烴受體的轉(zhuǎn)化.FEBSLetters.476213-217.
Backhaus，E.1995a.使用生物類黃酮化合物如蕓香苷和櫟精抑制促進(jìn)衰老的蛋白酶.德國(guó)專利DE4339486(1995-07-05頒發(fā)).
Backhaus，E.1995b.生物類黃酮化合物，特別是蕓香苷用于逆轉(zhuǎn)錄病毒失活.德國(guó)專利DE4340438(1995-06-01頒發(fā)).
Balandina，I.A.，Glyzin，V.I.，Grinkevich，N.I.，Gorodetskii，L.S.，Kristall，Z.B.，Shemerenkin，B.V.1982.蕓香苷生產(chǎn).俄國(guó)專利SU904709(1982-02-15頒發(fā)).
Basarkar，P.W.1981.大鼠中類維生素P化合物的膽固醇降低活性.Indian J.Exp.Biol.19787-9.
Borrelli，F(xiàn).，和Izzo，A.A.2000.植物界作為抗?jié)兯幬锏膩?lái)源.Phytother.Res.14581-591.
Bors，W.，Heller，W.，和Saran，M.1990.類黃酮化合物作為確定自由基-清除效率的抗氧化劑.Methods Enzymol.186343-355.
Caltagiron，S.，Rossi，C.，Poggi，A.，Ranelletti，F(xiàn).O.，Natali，P.G.，Bruneti，M.，Aiello，F(xiàn).B.，Piantelli，M.2000.類黃酮化合物芹菜配基和櫟精抑制黑素瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移潛力.Int.J.Cancer.87595-600.
Crespy，V.Morand，C.，Besson，C.，Demigne，C.，和Remesy，C.1999.在小腸中被吸收的部分櫟精被綴合并進(jìn)一步在腸內(nèi)腔中分泌.Am.J.Physiol.277G120-126.
Deschner，E.E.1992.膳食櫟精和蕓香苷實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸瘤的抑制劑，265-268頁(yè).食物中的酚化合物和它們對(duì)健康的影響II抗氧化劑和癌癥預(yù)防；Huang，M-T，Ho，C-T.，Lee，C.Y.，編輯；美國(guó)化學(xué)協(xié)會(huì)Washingtong，D.C.
Ferry，D.R.Smith，A.，Malkhandi，J.，F(xiàn)yfe，D.W.，Detakats，P.G.，Anderson，D.，Baker，J.，和kerr，D.J.1996.類黃酮化合物櫟精的I期臨床試驗(yàn)藥物動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)酪氨酸激酶抑制的證據(jù).Clin.Cancer Res.4659-668.
Gee，J.M.，Dupont，M.S.，Day，A.J.，Plumb，G.W.，Williamson，G.，和Johnson，I.T.2000.大鼠中櫟精糖苷的腸轉(zhuǎn)運(yùn)包括去糖基化和與己糖轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的相互作用.J.Nut.1302765-2771.
Griffith，J.Q.，Couch，J.F.，Lindauer，M.A.1944.蕓香苷對(duì)人中增加的毛細(xì)管脆性的影響.Proc.Soc.Exptl.Biol.Med.55228-229.
Griffith，L.A.和Barrow，A.1972.無(wú)菌大鼠中類黃酮化合物的代謝.Biochem.J.1301161-2.
Harbone，J.B.1994.類黃酮化合物，1986年以來(lái)的研究進(jìn)展，Chapman和Hall，倫敦.676頁(yè).
Heywang，U.和Basedow，A.1992.用二噁烷從植物提取蕓香苷.德國(guó)專利DE4107079(1992-09-10頒發(fā)).
Humphreys，F(xiàn).R.1964.澳大利亞?wèn)|南部蕓香苷的發(fā)生和工業(yè)生產(chǎn).Economic Botany.18195-253.
Huo，X.1999.從Polygonum tataricum提取蕓香苷的生產(chǎn)方法.中國(guó)專利CN1217329(1999-05-06頒發(fā)).
Iwata，K.，Miwa，S.，Inayama，I.，Sasaki，H.，Soeda，K.，Sugahara，T.1990.Kangra蕎麥對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的影響.J.Kagawa Nutri.Coll.2155-61.
Ishige，K.，Schubert，D.，和Sagara，Y.2001.類黃酮化合物通過(guò)三種不同機(jī)制保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞免受氧化應(yīng)激.Free Radical Biology & Medicine.30(4)433-446.
Kato，N.，Tosu，N.，Doudou，T.，Imamura.T.1983.膳食櫟精對(duì)血清脂質(zhì)的影響.Agric.Biol.Chem.472119-20.
Kitabayashi，H.，Ujihara.A.，Hirose，T.，Minami，M.1995.普通蕎麥Fagopyrum esculentum Moench.中蕓香苷含量的品種差異和遺傳力.Jpn.J.Breed.4575-79.
Liu，C.1991.從Sophora Japonica芽提取治療性蕓香苷.中國(guó)專利CN1013579(1991-08-21頒發(fā)).
Lutterodt，G.D.，和Abu Raihan，S.M.1993.櫟精化合物的鈣調(diào)節(jié)和抗傷害效能.Asia Pacific J.of Pharmacology 8127-131.
Manach，C.，Morand，C.，Crespy，V.，Demigne，C.，Texier，O.，Regerat，F(xiàn).，Remesy，C.1998.櫟精在人血漿中以保留抗氧化性質(zhì)的綴合衍生物形式回收.FEBS Letter.426331-336.
Manach，C.，Morand，C.，Demigne，C.，Texier，O.，Regerat，F(xiàn).，和Remesy，C.1997.大鼠中蕓香苷和櫟精的生物利用度.FEBS Letters.40912-16.
Manach，C.，Regerat，F(xiàn).，Texier，O.Agullo，G.，Demigne，G.，和Remesy，C.1996.4-氧代-類黃酮化合物的生物利用度、代謝和生理學(xué)影響.Nutr.Research 16(3)517-544.
Matsubara，Y.，Kumamoto，H.，Iizuka，Y.，Murakami，T.，Okamoto，K.，Miyake，H.，Yokoi，K.1985.citrus unshiu皮中類黃酮化合物糖苷的結(jié)構(gòu)和降血壓作用.Agric.Biol.Chem.49909-914.
Matsumoto，T.和Hamamoto，T.1990.從植物提取物回收類黃酮化合物.日本專利JP02073079(1990-03-13頒發(fā)).
Middleton，E.Jr.和Kandaswami，C.1993.植物類黃酮化合物對(duì)哺乳動(dòng)物生物學(xué)的影響與免疫、炎癥和癌的關(guān)系?！额慄S酮化合物1986年來(lái)的研究進(jìn)展》.619-652頁(yè).編者J.H.Harborne，Alan R.Liss.紐約.
Midori，I.1994.促進(jìn)酒精代謝的健康飲料—含有櫟精糖苷、二價(jià)金屬離子和甘草提取物.日本專利JP06248267(1994-09-06頒發(fā)).
Minami，M.，Kitabayashi，H.，和Ujihara，A.1998.通過(guò)高效液相層析定量分析蕎麥(Fagopyrum sp.)中的蕓香苷.J.of the Faculty ofAgriculture Shinshu University.34(2)91-95.
Morand，C.，Crespy，V.，Manach，C.，Besson，C.，Demigne，C.，和Remesy，C.1998.櫟精的血漿代謝物和它們的抗氧化性質(zhì).Amer.J.Physiol.3275(1pt2)R212-219.
Morand，C.，Manach，C.，Crespy，V.，和Remesy，C.2000.櫟精3-o-β-葡葡糖苷比其他櫟精形式被更好地吸收并且不存在于大鼠血漿中.FreeRadical Research.33(5)667-676.
Nakayama，T.1994.櫟精、山奈素、兒茶素或黃杉素作為抗氧化劑-用于食品中或作為藥物，例如，用于治療局部缺血、風(fēng)濕病或糖尿病.日本專利JP06248267(1994-09-06頒發(fā)).
Narikawa，T.，Karaki，Y.，Shinoyama，H.，和Fuji，T.1998.來(lái)自Penicillia的培養(yǎng)物濾液對(duì)蕓香苷的降解.Nippon Nogeikagaku Kaishi 72(4)473-479.
Nishimura，M.，Horikawa，H.，Moriwaki，M.1992.用于將難溶于水的類黃酮化合物溶解的組合物和方法.美國(guó)專利5,122,381(1992-06-16頒發(fā)).
Noroozi，M.，Angerson，W.J.，和Lean，M.E.J.1998.類黃酮化合物和維生素C對(duì)人淋巴細(xì)胞的氧化性DNA損傷的影響.Am.J.Clinical Nutr.67(6)1210-1218.
Okuyama，T.，Sato，H.，Nomura，K.1996.從Alpinia urarensis草提取血小板凝集抑制櫟精或其糖苷.日本專利0734037(1992-12-12頒發(fā)).
Oomah，B.D.和Mazza，G.1996.蕎麥中類黃酮化合物和抗氧化活性.J.Agric.Food Chem.441745-1750.
Pisha，E.，Pezzuto，J.M.1994.含有在人體中表現(xiàn)出藥理學(xué)活性的化合物的水果和蔬菜.經(jīng)濟(jì)和藥用植物研究，6卷；Wagner，H.，Hikino，H.，F(xiàn)arnsworth，N.R.，編者；189-233頁(yè).Academic Press，倫敦，UK.
Prochazka，V.1985.野生蕎麥可以作為蕓香苷的商業(yè)來(lái)源嗎？NaseLiecive Rastliny 22(5)131-133.
Skibola，C.，和Smith，M.T.2000.過(guò)多類黃酮化合物攝入的潛在健康影響.Free Radical Biology & Medicine.29(3/4)375-383.
Sloley，B.D.，Urichuk，L.J.，Ling，L.，Gu，L.-D.，Coutts，R.T.，Pang，P.K.和Shan，J.J.2000.Hypericum perforatum提取物的化學(xué)和藥理學(xué)評(píng)價(jià).Acta Pharmacol.Sin.21(12)1145-1152.
Suzuki，Y.，Suzuki，K.，Yoneyama，M.，Hijiya，H.，Miyaka，T.1992a.α-糖基蕓香苷的制備和用途.美國(guó)專利5,145,781(1992-09-08頒發(fā)).
Suzuki，Y.，Suzuki，K.，Yoneyama，M.，Hijiya，H.，Miyaka，T.1992b.4-α-D-吡喃葡糖基蕓香苷及其制備和用途.美國(guó)專利5,171,573(1992-12-15頒發(fā)).
Suzuki，Y.，Suzuki，K.，Yoneyama，M.，Hijiya，H.1995.α-糖基蕓香苷的制備和用途.歐洲專利0387 042 B1(1995-02-15頒發(fā)).
Suzuki，Y.，Suzuki，K.，Yoneyama，M.，Miyaka，T.1996，4-α-D-吡喃葡糖基蕓香苷及其制備和用途.歐洲專利0420376 B1(1996-03-13頒發(fā)).
Uyeta，M.，Taue，S.，和Mazaki，M.1981.茶浸漬液水解產(chǎn)物的誘變性.Mutation Research.88233-240.
Valerio，L.G.，Kepa，J.K.，Pickwell，G.V.，和Quattrochi，L.C.2001.通過(guò)黃酮醇櫟精誘導(dǎo)人NAD(P)H醌氧化還原酶(NQO1)基因表達(dá).Toxicology Letters 11949-57.
Wang，H-K.2000.類黃酮化合物的治療潛力.Exp.Opin.Invest.Drugs9(9)2103-2119.
Washino，K.1992.用半乳糖苷酶和葡聚糖基轉(zhuǎn)移酶(glucanotransferase)生產(chǎn)水可溶的黃酮醇糖苷.日本專利04066098和04066096(1992-03-02頒發(fā)).
Watanabe，J.，Kawabata，J.，Kurihara，H.，和Niki，R.1997.從Tochu-cha(Eucommia ulmoides)分離和鑒定α-葡糖苷酶抑制劑.Biosci.Biotech.Biochem.61(1)177-178.
Yesilada，E.，Tsuchiya，K.，Takaishi，Y.和Kawazoo，K.2000，通過(guò)活性-引導(dǎo)的分級(jí)分離從Sparticm junceum的花分離和鑒定清除自由基的類黃酮化合物糖苷.J.of Ethnopharmacology.73471-478.
Yildzogle-Ari，N.，Altan，V.M.，Altinkurt，O.，Ozturk，Y.1991.蕓香苷的藥理學(xué)作用.Phytotherapy Res.59-23.
Yoneyama，M.，Iritani，S.，Miyake，T.1996.α-糖基-櫟精和其制備及用途.美國(guó)專利5,565,435(1996-10-15頒發(fā)).
Zhai，G.1997.通過(guò)連續(xù)提取制備蕓香苷.中國(guó)專利CN1160048(1999-09-24出版).
Zirlin，A.D.1974.防止食品系統(tǒng)中難溶性類黃酮化合物的結(jié)晶.美國(guó)專利3,832,475(1974-8-27出版).
從植物生物質(zhì)提取、純化和轉(zhuǎn)化類黃酮化合物發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及從植物生物質(zhì)制備的類黃酮化合物，尤其涉及富集蕓香苷的組合物，它們可以被酶促轉(zhuǎn)化成更有價(jià)值的類黃酮化合物異槲皮苷和櫟精。
背景技術(shù)：
植物類黃酮化合物通常在植物中以糖苷形式存在，但在一些情況中，它們作為自由的糖苷配基存在。多數(shù)糖苷為O-糖苷，最通常單糖苷在7-位。二糖苷通常在-7位和-3位及偶然地在-7和-4’位具有糖。存在其他組合和單-O-糖苷但是不多。C-糖苷以更嚴(yán)格的分布存在，C-6和C-8糖苷是最普遍的(Harbone，1994)。
植物類黃酮化合物具有抗氧化性質(zhì)(Bors等人，1990)、腫瘤發(fā)生中的細(xì)胞抑制作用，并且能夠抑制寬范圍的酶，如血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶(ACE)、蛋白質(zhì)激酶C、酪氨酸蛋白激酶，和拓?fù)洚悩?gòu)酶II。它們被認(rèn)為是潛在的癌預(yù)防劑和心臟保護(hù)劑(Manach等人，1996；Skibola和Smith，2000)。還研究了它們作為消炎或抗病毒劑的潛在用途(Middleton和Kandaswami，1993)。Backhaus(1995a)聲稱生物類黃酮化合物，特別是蕓香苷、檸檬素、櫟精、桔皮苷或者衍生物是蛋白質(zhì)切割酶(如透明質(zhì)酸酶和/或膠原酶)失活的原因，這些蛋白質(zhì)切割酶促進(jìn)皮膚老化過(guò)程。這些化合物可用于一般的皮膚護(hù)理或者美容手術(shù)。據(jù)報(bào)導(dǎo)蕓香苷、櫟精、異槲皮苷、兒茶素和其他化合物也防止和改善皮膚的老化現(xiàn)象(Arata，1992)。Midori(1994)聲稱，櫟精糖苷、二價(jià)金屬離子，和甘草提取物一起通過(guò)促進(jìn)人肝臟中的酒精代謝而防止中毒。
蕓香苷是由櫟精和蕓香糖組成的類黃酮化合物糖苷。已經(jīng)闡明了蕓香苷的許多有益的健康效果。這些效果歸因于蕓香苷的消炎、抗突變、抗腫瘤、抗致癌、平滑肌松弛，和雌激素受體結(jié)合活性(Pisha和Pezzuto，1994)。蕓香苷也正在被用于治療毛細(xì)血管脆性、腦血栓、視網(wǎng)膜炎和風(fēng)濕熱-相關(guān)的出血狀況(Griffith等人，1944；Matsubara等人，1985；Iwata等人，1990；Yildzogle-Ari等人，1991)。在低膳食脂肪攝入的情況下，已經(jīng)報(bào)導(dǎo)蕓香苷和櫟精顯著抑制結(jié)腸腫瘤的發(fā)生(Agullo等人，1994；Deschner，1992)。Backhaus(1995b)聲稱口服劑量形式和注射液或輸注液或者栓劑形式的蕓香苷及其衍生物將使逆轉(zhuǎn)錄病毒(例如，HIV)失活。蕓香苷可用作天然著色劑、氧化抑制劑、維生素、化妝品中的防曬物(蕓香苷將吸收紫外線)，和作為功能性食品應(yīng)用中的成分(匿名，1990a，b)。
可在許多植物中發(fā)現(xiàn)蕓香苷，這些植物包括蕎麥(葉子、花、莖、稈、殼和去殼麥粒)、日本槐樹(shù)(Sophora japonica)、番茄、三色堇(堇菜科，堇菜屬種，Viola sp.，Violaceae)、煙草、連翹、繡球、fava d′anta(Dimorphandragardnerina和Dimorphandra mollis)和桉樹(shù)(Humphreys，1964)。蕎麥被認(rèn)為能夠提供蕓香苷的主要膳食來(lái)源。Kitabayashi等人(1995)報(bào)導(dǎo)蕎麥種子的蕓香苷含量為0.126到0.359mg/g干重。Oomah和Mazza(1996)報(bào)導(dǎo)完整種子和麥殼中蕓香苷含量分別為0.47和0.77mg/g干重。他們還報(bào)導(dǎo)類黃酮化合物在麥殼中高度濃縮；蕎麥種子和麥殼的平均類黃酮化合物含量分別為3.87和13.14mg/g。Prochazka(1985)報(bào)導(dǎo)在小心干燥的、處于花期的Czechish蕎麥葉子中發(fā)現(xiàn)6％蕓香苷(wt/wt)。干草產(chǎn)率為600到1000kg/ha，其以4％(wt/wt)蕓香苷濃度，達(dá)到24-40kg蕓香苷/ha。
盡管蕓香苷的工業(yè)生產(chǎn)的多數(shù)細(xì)節(jié)是專利的并且不在公開(kāi)文獻(xiàn)中描述，但是我們知道Merck GmbH為了商業(yè)目的從fava d′anta提取蕓香苷。德國(guó)Merck GmbH的Heywang和Basedow(1992)用1，4-二噁烷在回流下從fava d′anta(Dimorphandra)的嫩枝(shoot)提取蕓香苷。通過(guò)室溫下結(jié)晶回收蕓香苷。然而，二噁烷被認(rèn)為是致癌的。
Huo(中國(guó)專利1217329，1999)描述了通過(guò)將苦蕎麥(tartary buckwheat)種子用水洗滌，粗磨，粗篩，浸入水中，空氣中干燥，細(xì)磨，浸入可食用醇，60℃以下提取，并過(guò)濾來(lái)提取蕓香苷。Balandina等人(1982)用熱水從蕎麥種子提取蕓香苷以便取出所希望的產(chǎn)物并將其結(jié)晶。
Zhai(中國(guó)專利CN 1160048，1997)描述了通過(guò)用含有1-10％硼砂的飽和石灰水浸泡，并通過(guò)加入HCl在pH 1-6下沉淀從槐米(Flos sophorae)提取蕓香苷。
Matsumoto和Hamamoto(1990)用甲醇提取，活性炭吸附，然后去吸附，用40％乙醇中的1％氨洗脫，并從20％乙醇重結(jié)晶，從Sophoraaugustifolia芽回收蕓香苷。
Liu(1991)描述了通過(guò)磨粉，石灰水中蒸煮，中和上清液，冷卻，過(guò)濾，洗滌，并干燥沉淀物從日本槐樹(shù)(Sophora japonica)芽提取蕓香苷的方法。產(chǎn)率為14.2％(wt/wt)，產(chǎn)物含有95.1％(wt/wt)蕓香苷。
Sloley等人(2000)報(bào)導(dǎo)，盡管金絲桃蒽酮被認(rèn)為是貫葉金絲桃(Hypericum perforatum)(St.John′s wort，金絲桃)的葉子和花的提取物的標(biāo)志性化學(xué)物，但是其他化合物如貫葉金絲桃素、金絲桃苷、蕓香苷和櫟精以高得多的濃度存在。他們還發(fā)現(xiàn)不同提取物的化學(xué)組分譜變化很大。然而，自由基清除能力與櫟精含量正相關(guān)。16個(gè)金絲桃提取物中平均蕓香苷和櫟精含量分別為2.0和0.3％(wt/wt)。
1克蕓香苷可溶解于室溫下約8L水中或者200ml沸水中。Zirlin(美國(guó)專利3,822,475，1974)公開(kāi)了防止難溶的類黃酮化合物在酸性軟飲料中結(jié)晶的方法。將類黃酮化合物與蔗糖混合并加熱到焦糖熔化階段(140-185℃)，溶于水性系統(tǒng)中，并蒸發(fā)掉水以得到干燥混合物。
用α-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.20)、環(huán)麥芽糊精葡聚糖基轉(zhuǎn)移酶(E.C.2.4.1.19)、α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)、葡糖淀粉酶(E.C.3.2.1.3)、β-淀粉酶(E.C.3.2.1.2)，和半乳糖-轉(zhuǎn)移酶(β-半乳糖苷酶)將櫟精苷改性成水可溶的黃酮醇苷，參見(jiàn)San-Ei化學(xué)工業(yè)公司(Chemical Industries Ltd.)和Hayashihara生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室公司(Biochemical Laboratory Inc.)(Nishimura等人，1992；Suzuki等人，1992a，b；Suzuki等人，1995；Suzuki等人，1996；Washino 1992；Yoneyama等人，1996)所描述的。Hayashihara生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室公司聲稱他們成功地產(chǎn)生了水可溶的蕓香苷，其水溶解度增加了5000倍以上(匿名，1990a)。
1990年前，櫟精被認(rèn)為是致突變的和致癌的(Manach等人，1996)。代謝動(dòng)物研究已經(jīng)表明櫟精可被快速轉(zhuǎn)化成非-誘變性的3’-O-甲基櫟精代謝物(Morand等人，1998；Skibola和Smith 2000)。更重要地，已報(bào)導(dǎo)櫟精具有抗細(xì)菌、抗病毒、抗氧化、抗增殖、消炎，和抗致癌效果(Crespy等人，1999；Skibola和Smith，2000)。
櫟精還對(duì)各種腫瘤細(xì)胞(Middleton和Kandaswami，1993；Caltagirone等人，2000)、結(jié)腸癌細(xì)胞(Agullo等人，1994；Deschner，1992)和潰瘍(Borrelli和Izzo，2000)表現(xiàn)出強(qiáng)抑制活性。櫟精已經(jīng)被鑒定為低濃度下強(qiáng)拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，類似于癌癥治療中廣泛使用的表鬼臼毒素的活性(Skibula和Smith，2000)。
Ishige等人(2001)表明許多類黃酮化合物和相關(guān)多酚化合物保護(hù)小鼠海馬細(xì)胞系HT-22和大鼠原代神經(jīng)元不受谷氨酸鹽導(dǎo)致的氧化應(yīng)激協(xié)迫。該發(fā)現(xiàn)是重要的，因?yàn)檠趸瘧?yīng)激造成的神經(jīng)細(xì)胞死亡與各種病理相關(guān)，包括中風(fēng)、動(dòng)脈硬化癥、創(chuàng)傷和阿爾茨海默氏和帕金森病。他們的數(shù)據(jù)表明一些類黃酮化合物(櫟精、山奈素和黃顏木素)具有相當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)性，而其他的(蕓香苷、白楊素，和芹菜配基)無(wú)活性。在氧化應(yīng)激的細(xì)胞培養(yǎng)物模型中櫟精改變谷胱甘肽(GSH)代謝并抑制活性氧種類(ROS)。其作用機(jī)理類似于沒(méi)食子酸丙酯和咖啡酸甲酯的作用機(jī)理，但是與維生素E的不同。Noroozi等人(1998)報(bào)導(dǎo)櫟精在抵抗氧化性DNA損傷方面比蕓香苷和維生素C更強(qiáng)。
Ashida等人(2000)報(bào)導(dǎo)飲食黃酮醇(櫟精和蕓香苷)和黃酮拮抗地抑制二氧芑誘導(dǎo)的芳基烴受體(AhR)的轉(zhuǎn)化。櫟精在抵消該環(huán)境污染物的毒性方面比蕓香苷更強(qiáng)。在抗致癌性方面，I期酶氧化、還原或水解致癌物，II期酶綴合或者影響致癌物。Valerio等人(2001)闡明櫟精是一種II期酶誘導(dǎo)劑，其刺激II期解毒活性。II期酶還可以清除強(qiáng)氧化劑，并且科學(xué)興趣指向應(yīng)用它們的活性作為降低癌癥危險(xiǎn)的方法。使用II期酶誘導(dǎo)劑(許多這些誘導(dǎo)劑在通常的食物中被發(fā)現(xiàn))是增加身體組織中II期酶活性的一種方法。
Agullo等人(1997)報(bào)導(dǎo)櫟精是磷脂酰肌醇3-激酶(PI 3-激酶；與細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化有關(guān)的一種酶)的有效抑制劑。毛地黃黃酮、芹菜配基和楊梅樹(shù)皮素也顯示出這種活性。PI 3-激酶的抑制可能與這些類黃酮化合物的抗腫瘤性質(zhì)有關(guān)。而且，據(jù)報(bào)導(dǎo)，櫟精抑制淋巴細(xì)胞酪氨酸激酶活性，并且在I期臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出抗腫瘤性質(zhì)(Ferry等人1996)。
Watanabe等人(1997)報(bào)導(dǎo)櫟精負(fù)責(zé)杜仲(Eucommia ulmoides)葉的α-葡糖苷酶抑制劑活性。因?yàn)棣?葡糖苷酶是催化糖類消化過(guò)程中最后一步的酶，所以，上面發(fā)現(xiàn)意味著櫟精可以抑制飯后高血糖并且可用于糖尿病的治療，潛在應(yīng)用于晚期糖尿病并發(fā)癥、肥胖和相關(guān)的失調(diào)。櫟精還阻斷導(dǎo)致山梨糖醇積累的酶，山梨糖醇與糖尿病患者中的神經(jīng)、眼睛和腎臟損傷有關(guān)。然而，還沒(méi)有人類研究以評(píng)估櫟精對(duì)糖尿病的可能的有益效果(Wang，2000)。
Kato等人(1983)證明在膳食中接受0.5％櫟精的小鼠或大鼠，其血清甘油三酯顯著降低。櫟精的補(bǔ)充也表現(xiàn)出可以有效地減弱食用高膽固醇食物的大鼠中血清和干臟膽固醇的上升(Basarkar，1981)。
從Alpinia urarensis Hay的葉子提取和純化的櫟精及其糖苷表現(xiàn)出血小板凝集-抑制活性。其活性大于作為對(duì)照血小板凝集抑制劑的阿司匹林和人參皂甙的活性(Okuyama等人，1996)。
在日本專利公開(kāi)號(hào)06248267中，Nakayama(1994)聲稱櫟精、山奈素、兒茶素或黃杉素可用于食品中或作為藥物以預(yù)防或治療由功能失?；蚯宄顒?dòng)導(dǎo)致的疾病、局部缺血性疾病、風(fēng)濕癥、糖尿病等。
Lutterodt和Abu Raihan(1993)報(bào)導(dǎo)櫟精具有類似麻醉劑的抗傷害活性，其干擾疼痛傳遞。50mg櫟精/kg體重的劑量將和2.5mg硫酸嗎啡/kg具有相同的效果。
可以從草棉(Gossypium herbaceum)、Waldsteinia fragarioides(Michx)、Tratt(薔薇科，Rosaceae)、鷹爪豆(Spartium junceum L.)(Fabaceae)(Yesilada等人，2000)和歐洲七葉樹(shù)(Aesculus hippocastanum)的花提取天然異槲皮苷(櫟精-3-O-β糖苷)。其還在芹菜種子、茴香種子、木賊、紅三葉草和金絲桃(St.John’s wort)中發(fā)現(xiàn)。異槲皮苷已經(jīng)被證明具有幾種生物學(xué)活性，包括抑制血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶(ACE)、抑制前列腺素合成，和抗病毒活性(Abou-Karam和Shier，1992)。
類黃酮化合物的消化吸收中細(xì)菌酶的作用是重要的，因?yàn)椴溉閯?dòng)物組織不能合成這些水解酶。Griffiths和Barrow(1972)已經(jīng)證明被無(wú)菌大鼠攝入的類黃酮化合物糖苷在糞便中以未被水解的形式回收。糖-糖苷配基鍵的水解在遠(yuǎn)端回腸和盲腸中發(fā)生。
在跨腸膜的吸收過(guò)程中，類黃酮化合物以糖苷配基和/或糖苷形式被吸收并被部分轉(zhuǎn)化成葡糖苷酸、硫酸鹽或甲氧基化物(Manach等人，1998)。在血漿中不能檢測(cè)到游離的櫟精。被吸收的小部分類黃酮化合物被肝臟酶代謝，導(dǎo)致極性綴合物在尿中被排泄或者通過(guò)膽囊返回到十二指腸。最大部分的被攝入的類黃酮化合物未被吸收，而是被腸內(nèi)微生物菌群降解。細(xì)菌的酶催化一些反應(yīng)，包括水解、雜環(huán)含氧環(huán)的切割、脫羥基作用和脫羧基作用。根據(jù)所涉及的類黃酮化合物的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生一些酚酸。然后酚酸可被吸收并在肝臟中綴合和O-甲基化，然后可以進(jìn)入循環(huán)(Manach等人，1996)。
Crespy等人(1999)闡明櫟精和異槲皮苷的生物利用度比蕓香苷的高得多。蕓香苷比櫟精、異槲皮苷和異鼠李黃素吸收得更慢，因?yàn)槠浔仨毐幻つc微生物菌群水解，而櫟精、異槲皮苷和異鼠李黃素從小腸被吸收(Manach等人，1997)。Morand等人(2000)還證明異槲皮苷比其他櫟精形式(櫟精、蕓香苷和槲皮苷)被更好地吸收。飯后四小時(shí)，不管消費(fèi)的是櫟精的哪種形式，在水解的血漿中鑒定到的代謝物都是3’-和4’-甲基櫟精。然而，血漿中代謝物的總濃度顯著不同對(duì)于異槲皮苷、櫟精和蕓香苷分別是33.2、11.2和2.5μM。槲皮苷(櫟精3-鼠李糖苷)消費(fèi)后，它們?cè)谘逯胁荒軝z測(cè)到任何代謝物。Gee等，2000表明異槲皮苷比游離的櫟精糖苷配基更快地穿過(guò)小腸上皮。這些數(shù)據(jù)建立了類黃酮化合物的生物利用度分級(jí)情況，即異槲皮苷＞櫟精＞蕓香苷。
柚苷酶是一種酶制品，其可以從Penicillium aspergillus、白腐墊殼孢(Coniella diplodiella)、宮部旋孢腔菌(Cochliobolus miyabeanus)、立枯絲核菌(Rhizoctoyaia solanii)、柑桔擬莖點(diǎn)霉(Phomopsis citri)、和斜臥青霉(Penicillium decumbens)的培養(yǎng)物生產(chǎn)。多數(shù)商業(yè)化柚苷酶制品從斜臥青霉生產(chǎn)。Narikawa等人(1998)推斷，斜臥青霉降解蕓香苷，但是他們的工作是定性的，并且他們沒(méi)有指出該降解的結(jié)果是什么。
柚苷酶被用于將柚皮苷(narigin)——4’，5，7-三羥基黃烷酮(flavonone)的7-(2-鼠李糖苷-β-葡糖苷)水解成柚皮素(narigenin)。柚苷酶在商業(yè)上被用于減弱柑橘果實(shí)或果汁中的苦味。Uyeta等人(1981)在茶浸液的研究中使用了柚苷酶。柚苷酶處理對(duì)茶浸液的致突變活性的影響類似于用酸或桔皮苷酶處理的效果。然而，他們既沒(méi)有表征也沒(méi)有鑒定水解產(chǎn)物。他們鑒定了山奈素、櫟精和楊梅樹(shù)皮素是用人糞便細(xì)菌處理的茶浸液中的主要致突變成分。
盡管異槲皮苷似乎是最希望的櫟精衍生物，但是市場(chǎng)上還沒(méi)有該化合物的濃縮或純的形式——除了非常小的量被用作分析標(biāo)準(zhǔn)。以前沒(méi)有公開(kāi)處理蕎麥葉材料以回收類黃酮化合物和進(jìn)一步將這些類黃酮化合物生物轉(zhuǎn)化成高生物可利用度的、性能增強(qiáng)的、高價(jià)值產(chǎn)物如異槲皮苷和櫟精的方法。以前公開(kāi)的僅僅是提取和純化蕓香苷的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)室方法。
通常，生物體系中發(fā)現(xiàn)的天然異槲皮苷和櫟精的濃度比蕓香苷的低得多。從生物體系提取的異槲皮苷和櫟精由于它們的稀有性和生物利用度而要求高得多的價(jià)格?，F(xiàn)今沒(méi)有商業(yè)上可行的技術(shù)將蕓香苷(不管來(lái)源)生物轉(zhuǎn)化成高生物可利用度的、性能增強(qiáng)的高價(jià)值產(chǎn)物如異槲皮苷和櫟精。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供自蕓香苷衍生的富含異槲皮苷的組合物，以及經(jīng)濟(jì)地提供商業(yè)上足夠量的該組合物以允許將它們用于功能食品、營(yíng)養(yǎng)藥(nutraceutical)、天然健康產(chǎn)品、化妝品和藥物應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供衍生自蕓香苷的組合物，其富含比例受控的異槲皮苷和櫟精，和提供商業(yè)上足夠量的這種組合物以允許將它們用于功能食品、營(yíng)養(yǎng)藥、天然健康產(chǎn)品、化妝品和藥物應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種方法，在該方法中通過(guò)抑制異槲皮苷向櫟精的轉(zhuǎn)化而最大化異槲皮苷的產(chǎn)率。在本發(fā)明中，這通過(guò)加入存在于柚苷酶制品中的β-D-葡糖苷酶活性的抑制劑而實(shí)現(xiàn)。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供從蕎麥得到蕓香苷的方法，尤其是提供從蕎麥種子收獲后殘留在大田中的蕎麥植物殘余物得到蕓香苷，從而將廉價(jià)的廢品轉(zhuǎn)化成更有價(jià)值的產(chǎn)品的這種方法。
在第一方面，本發(fā)明提供了從含有蕓香苷的生物質(zhì)制備富含蕓香苷的組合物的方法，該方法包括使用水性溶液對(duì)生物質(zhì)實(shí)施類黃酮化合物提取；過(guò)濾溶液得到提取液；讓提取液靜置以便形成沉淀；收集并干燥沉淀以形成富含蕓香苷的組合物。
提取過(guò)程中水性溶液優(yōu)選保持在高于30℃的溫度。水性溶液優(yōu)選為水性醇溶液，醇濃度按體積計(jì)大于20％醇，對(duì)于最佳結(jié)果，其為按體積計(jì)50％到100％醇。提取溶液優(yōu)選被濃縮到其原始體積的約1/5到1/10，然后靜置冷卻以促進(jìn)沉淀。
使用本發(fā)明的方法，通過(guò)相對(duì)簡(jiǎn)單的濕化學(xué)手段，無(wú)需層析，可以制備具有按重量計(jì)70％蕓香苷含量的富含蕓香苷的組合物。最經(jīng)濟(jì)地，使用種子從蕎麥地里收獲后剩下的作物殘余物提供含有蕓香苷的生物質(zhì)。該殘余物以前幾乎沒(méi)有任何價(jià)值。使用該作物殘余物比現(xiàn)有技術(shù)中使用處于花期的蕎麥具有優(yōu)勢(shì)，因?yàn)榭梢允斋@種子，從而從蕎麥作物得到第一級(jí)回報(bào)。在現(xiàn)有技術(shù)中，從蕎麥作物獲得的總回報(bào)來(lái)自購(gòu)買處于花期或者其他成熟前階段的蕎麥作為蕓香苷生產(chǎn)的原料。
在另一方面，本發(fā)明提供了通過(guò)如下方法制備的富含異槲皮苷的組合物，該方法包括提供處于適于酶溫育的條件下的其中懸浮有蕓香苷的溶液；將含有柚苷酶的酶制品加入該溶液；在溫育期間保持適于酶溫育的溶液條件；通過(guò)將溶液的條件改變成不適于酶活性的條件結(jié)束溫育期。這些改變包括降低pH和增加溶液的溫度。調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間以控制組合物中異槲皮苷的比例。
在本發(fā)明的第三方面提供了通過(guò)如下方法制備的富含異槲皮苷的組合物，該方法包括提供處于適于酶溫育的條件下的其中懸浮有蕓香苷的溶液；將含有柚苷酶或者α-L-鼠李糖苷酶的酶制品加到溶液中；在溫育期間保持適于酶溫育的溶液條件；通過(guò)將溶液的條件改變?yōu)椴贿m于酶溫育的條件終止溫育期。為了得到最佳產(chǎn)率，溫度應(yīng)該為50-55℃并且應(yīng)該不超過(guò)65℃。調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間以控制組合物中異槲皮苷的比例。溫育期最佳為1-48小時(shí)。降低pH和增加溶液的溫度可以通過(guò)使酶制品變性而終止溫育期。
組合物中異槲皮苷的比例可以高達(dá)約95％。使用含有α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡糖苷酶的酶制品進(jìn)行酶溫育也將蕓香苷轉(zhuǎn)化成櫟精。可以調(diào)節(jié)溫育期以提供富含不同比例的異槲皮苷和櫟精的組合物。
方便地且經(jīng)濟(jì)地，該酶制品可以是柚苷酶，其可通過(guò)商業(yè)途徑得到并且是經(jīng)濟(jì)的。出售的柚苷酶中有保證含量的β-D-葡糖苷酶用于各種商業(yè)用途。與Narikawa等人(1998)揭示的現(xiàn)有技術(shù)相反，發(fā)現(xiàn)來(lái)自斜臥青霉的柚苷酶能夠從蕓香苷切割糖。
酶α-L-鼠李糖苷酶與蕓香苷的溫育將蕓香苷轉(zhuǎn)化成異槲皮苷。酶β-D-葡糖苷酶與異槲皮苷的溫育將異槲皮苷轉(zhuǎn)化成櫟精。柚苷酶含有α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡糖苷酶兩者，并且可以以經(jīng)濟(jì)的量通過(guò)商業(yè)途徑得到。
可以實(shí)現(xiàn)有效的、經(jīng)濟(jì)的和商業(yè)上可行的生物轉(zhuǎn)化而不使用α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡糖苷酶的純化的或其他昂貴的形式。通過(guò)操縱生物轉(zhuǎn)化條件可以定制具有不同比例的蕓香苷/異槲皮苷/櫟精的組合物。本發(fā)明的方法產(chǎn)生具有高度濃縮的蕓香苷、異槲皮苷、櫟精或它們的混合物的產(chǎn)物，隨后可以使用標(biāo)準(zhǔn)生化純化技術(shù)純化該產(chǎn)物。
在本發(fā)明的第四方面，在加入柚苷酶之前向蕓香苷溶液加入β-D-葡糖苷酶抑制劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，β-D-葡糖苷酶抑制劑為D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯。通過(guò)抑制柚苷酶制品中的β-D-葡糖苷酶組分，異槲皮苷將不被轉(zhuǎn)化為櫟精；結(jié)果以高產(chǎn)率和大于80％的純度得到異槲皮苷。
本發(fā)明的方法可用于從各種植物生物質(zhì)來(lái)源產(chǎn)生具有高度濃縮的蕓香苷、異槲皮苷、櫟精或它們的混合物的產(chǎn)物，這些生物質(zhì)來(lái)源包括，但不限于蕎麥屬(Fargopyrum)成員，金絲桃的葉、銀杏(ginkgo)、biloba紫花苜蓿、桑樹(shù)、藻類、蘋(píng)果皮、梨子皮、洋蔥皮、蘆筍尖頭、薔薇果果皮。
通過(guò)本發(fā)明的方法產(chǎn)生的富含異槲皮苷的產(chǎn)物具有生物活性性質(zhì)，該生物活性性質(zhì)包括血管緊張肽-轉(zhuǎn)化酶抑制、消炎、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、自由基清除、癌癥預(yù)防、心臟保護(hù)、蛋白酶抑制、蛋白激酶C抑制、酪氨酸蛋白激酶抑制、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制和蛋白切割酶抑制性質(zhì)。
通過(guò)本發(fā)明的方法產(chǎn)生的富含異槲皮苷的產(chǎn)物的生物活性性質(zhì)將用作健康食品、藥品、營(yíng)養(yǎng)藥和化妝品中的添加劑。當(dāng)加到產(chǎn)品中時(shí)，這些生物活性性質(zhì)將可用于預(yù)防和治療疾病和健康問(wèn)題，其包括，但不限于心血管疾病、中風(fēng)、毛細(xì)血管脆性、動(dòng)脈硬化癥、創(chuàng)傷、氧化應(yīng)激、高血壓、升高的膽固醇、升高的甘油三酯、高血糖、II型糖尿病、肥胖和相關(guān)失調(diào)、阿爾茨海默氏病、帕金森病、哮喘和一些癌癥。
本發(fā)明還提供了使得能夠經(jīng)濟(jì)生產(chǎn)和滿足市場(chǎng)偏好的工藝和產(chǎn)品靈活性。
在本發(fā)明下面的詳細(xì)描述中，本發(fā)明的這些和其他目的、特征和優(yōu)點(diǎn)將變得更加明顯，該詳述通過(guò)實(shí)施例闡明了本發(fā)明的原理。
附圖簡(jiǎn)述盡管所要求的發(fā)明列于本發(fā)明的結(jié)論部分，但是在相伴的詳細(xì)描述中提供了優(yōu)選實(shí)施方案，它們可以參考附圖獲得最佳的理解，其中這些附圖的每一個(gè)圖中相似部分被相似數(shù)字標(biāo)記，并且其中

圖1A說(shuō)明蕓香苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)式；圖1B說(shuō)明異槲皮苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)式；圖1C說(shuō)明櫟精的化學(xué)結(jié)構(gòu)式；圖2A-2C顯示了如下各項(xiàng)的HPLC分析結(jié)果(2A)蕎麥葉的甲醇提取物(RT14.862＝蕓香苷，RT20.947＝櫟精)；(2B)從已經(jīng)被濃縮到水相并冷藏的蕎麥葉水性醇提取物得到的沉淀(RT14.785＝蕓香苷)。(2C)與柚苷酶溫育24小時(shí)后蕓香苷向異槲皮苷(RT15.181)和櫟精(RT20.372)的轉(zhuǎn)化。所有樣品都在C-18對(duì)稱柱上層析，用含有0.05％三氟乙酸的水∶乙腈梯度洗脫。在280nm監(jiān)視柱流出液并通過(guò)ELSD定量溶解的固體。
圖3A-3C顯示了如下蕓香苷樣品的HPLC分析結(jié)果(3A)商業(yè)蕓香苷樣品(Street Chemicals)(RT14.875＝蕓香苷，RT15.442＝異槲皮苷)；(3B)用柚苷酶處理蕓香苷后回收的沉淀(RT15.487＝異槲皮苷，RT20.843＝櫟精)；(3C)通過(guò)制備HPLC得到的純化的異槲皮苷(RT15.436＝異槲皮苷)。所有樣品都在C-18對(duì)稱柱上層析，用含有0.05％三氟乙酸的水∶乙腈梯度洗脫。在280nm監(jiān)視柱流出液并通過(guò)ELSD定量溶解的固體。
圖4為實(shí)施本發(fā)明的兩種方法的概述性流程圖。使用方法A，從植物生物質(zhì)回收蕓香苷，然后將其轉(zhuǎn)化成蕓香苷、異槲皮苷和櫟精的混合物。使用方法B，加入β-D-葡糖苷酶的抑制劑以防止異槲皮苷向櫟精的轉(zhuǎn)化。使用方法B，增加了本發(fā)明方法的異槲皮苷產(chǎn)率和純度。
具體實(shí)施方案的描述本發(fā)明提供了從植物生物質(zhì)產(chǎn)生高價(jià)值的生物可利用的類黃酮化合物的方法。如上述，類黃酮化合物已被證明具有一系列有用的生物活性性質(zhì)。類黃酮化合物用于治療性應(yīng)用中的問(wèn)題之一是它們?cè)谧匀恢型ǔＲ缘蜐舛却嬖凇榱藢㈩慄S酮化合物用作藥物、營(yíng)養(yǎng)藥或和其他健康產(chǎn)品的添加劑，需要純化類黃酮化合物的方法。
在本發(fā)明中，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)生物化學(xué)方法回收類黃酮化合物蕓香苷。然后通過(guò)酶制品柚苷酶將蕓香苷轉(zhuǎn)化成異槲皮苷和櫟精。本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)表明通過(guò)使用食品添加劑d-Δ-葡糖酸內(nèi)酯選擇性抑制柚苷酶制品中存在的β-D-葡糖苷酶活性，可以增加中間產(chǎn)物異槲皮苷的產(chǎn)率。
下面的實(shí)施例和附圖闡明了本發(fā)明的一些實(shí)施方案的操作，從而使其可以更容易地被理解。
雖然現(xiàn)在詳細(xì)地具體參考附圖，但是應(yīng)強(qiáng)調(diào)所顯示的細(xì)節(jié)僅作為實(shí)例并且僅僅用于本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案的舉例說(shuō)明性討論的目的，并且是提供其是因?yàn)檫@被認(rèn)為是最有用的并且容易理解本發(fā)明的原理和概念的描述。在這點(diǎn)上，如果對(duì)于本發(fā)明的基本理解無(wú)必要，則不再更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)，說(shuō)明書(shū)以及附圖將使得本領(lǐng)域技術(shù)人員明白本發(fā)明的幾種形式可以怎樣在實(shí)踐中實(shí)施。應(yīng)強(qiáng)調(diào)的是，所顯示的這些細(xì)節(jié)是實(shí)例并且用于舉例說(shuō)明性討論目的。
從植物生物質(zhì)提取蕓香苷下面的實(shí)施例1和2論證了通過(guò)涉及水溶液中提取、濃縮和沉淀的方法可以回收植物生物質(zhì)中的蕓香苷?？梢钥紤]省略濃縮提取液的步驟，然而，該相對(duì)簡(jiǎn)單和經(jīng)濟(jì)的步驟可以增加該方法的效率。
如實(shí)施例1中所示，所述的熱水中提取從葉子回收了36％可利用的蕓香苷。
如實(shí)施例2中所示，如所述的通過(guò)在含有50％(體積)甲醇的水性醇溶液中提取，從葉子回收了65％可利用的蕓香苷。
如實(shí)施例3中所示，通過(guò)簡(jiǎn)單的濕化學(xué)手段而不使用層析就可以將富含蕓香苷的組合物中蕓香苷的含量增加到約70％。
如實(shí)施例4中所示，本發(fā)明方法的提取效率隨著醇濃度、水性溶液的溫度、固體與溶劑的比，和提取時(shí)間而變。對(duì)于經(jīng)濟(jì)的商業(yè)方法，可以基于提供這些變量的經(jīng)濟(jì)性確定這些變量的適宜組合。
預(yù)期可以以序貫分批或者連續(xù)補(bǔ)料模式實(shí)施提取。通過(guò)將提取過(guò)的生物質(zhì)加入新鮮量的溶劑中并進(jìn)行第二次或額外的提取也可以提高該方法的提取回收比。
本領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)多數(shù)集中在類黃酮化合物的分析方法學(xué)、來(lái)自生物質(zhì)的類黃酮化合物的濃度和量。以前還沒(méi)有將來(lái)自沉淀的富含蕓香苷的級(jí)分描述為終產(chǎn)物。以前從未認(rèn)識(shí)到富含蕓香苷的組合物的價(jià)值。
實(shí)施例1從蕎麥葉材料水性提取、濃縮和沉淀蕓香苷收獲并干燥后，將蕎麥葉在Wiley磨機(jī)上碾磨以通過(guò)2mm篩，由此制備用于提取的蕎麥葉。將1kg磨過(guò)的蕎麥葉(蕓香苷含量3.74％，基于干重)在10L水中在90℃下連續(xù)攪拌1小時(shí)，進(jìn)行提取。過(guò)濾所得懸浮物，并將濾餅用300ml熱(95℃)水洗滌2次。將洗滌的濾液與提取物混合得到體積為8.6L的合并提取物。該水性提取方法從葉子回收了36％可利用的蕓香苷。
將提取物在減壓下濃縮到原來(lái)體積的約1/5和1/10。濃縮提取物保存在冰箱(4℃)中過(guò)夜，此時(shí)類黃酮化合物從溶液中沉淀出來(lái)。以7,000×g離心并過(guò)濾上清液后收集沉淀的物質(zhì)。將沉淀隨后冰凍干燥。通過(guò)將干燥產(chǎn)物的等分試樣溶于甲醇并通過(guò)RP-HPLC分析確定沉淀物中蕓香苷含量。從HPLC結(jié)果，我們得出結(jié)論在沉淀中可以回收濃縮的水性提取物(減小到其原始體積的1/5和1/10)中60％可得到的蕓香苷。
實(shí)施例2從蕎麥葉材料水性醇提取、濃縮和沉淀蕓香苷收獲并干燥后，將蕎麥葉在Wiley磨機(jī)上碾磨以通過(guò)2mm篩，由此制備用于提取的蕎麥葉。將1kg磨過(guò)的蕎麥葉(蕓香苷含量3.74％，基于干重)在10L 50％(v/v)水性甲醇中提取，具體地在40℃下連續(xù)攪拌3小時(shí)。過(guò)濾所得懸浮物，并將濾餅用溫(40％)50％(v/v)水性甲醇洗滌。將洗滌的濾液與提取物合并。該提取方法從葉子回收了65％可利用的蕓香苷。圖2A說(shuō)明了甲醇提取物中蕓香苷的濃度。將提取物在減壓下濃縮到原來(lái)體積的約1/5。濃縮提取物保存在冰箱(4℃)中過(guò)夜，此時(shí)類黃酮化合物從溶液中沉淀出來(lái)。以7,000×g離心并傾析上清液后收集沉淀的物質(zhì)。將沉淀隨后冰凍干燥。通過(guò)將干燥產(chǎn)物的等分試樣溶于甲醇并通過(guò)RP-HPLC分析確定沉淀物中蕓香苷含量。圖2B說(shuō)明了沉淀中類黃酮化合物的濃度。發(fā)現(xiàn)富含類黃酮化合物的產(chǎn)物含有64％蕓香苷和6.88％蛋白質(zhì)。在來(lái)自濃縮提取物的沉淀中證明了93-100％的蕓香苷回收。
實(shí)施例3從分離自蕎麥葉的富含類黃酮化合物的中間產(chǎn)物純化蕓香苷將來(lái)自實(shí)施例2的富含蕓香苷的產(chǎn)物溶于溫甲醇中，在磁力攪拌器上劇烈攪拌以促進(jìn)蕓香苷的完全溶解。使用真空過(guò)濾，從溶液除去任何不溶的物質(zhì)。將溶液在40℃減壓下蒸發(fā)至干。然后將殘?jiān)鼞腋≡跓?90℃)水中，持續(xù)攪拌直到大多數(shù)沉淀已經(jīng)溶解。讓?xiě)腋∥镌诒渲谐恋磉^(guò)夜。通過(guò)真空過(guò)濾取出沉淀，并將其冰凍干燥。純化的蕓香苷沉淀溶于甲醇，通過(guò)0.45μm尼龍注射濾器過(guò)濾，然后用RP-HPLC分析確定產(chǎn)物純度。重復(fù)溶解/結(jié)晶而不使用層析后，蕓香苷含量增加到約70％和更高。
實(shí)施例4從蕎麥葉材料提取蕓香苷的優(yōu)化將如實(shí)施例2中所述得到的蕎麥葉用下面溶劑以固體∶溶劑比為1∶20在60℃提取4小時(shí)水、30％(v/v)甲醇/70％(v/v)水、50％(v/v)甲醇、70％(v/v)甲醇/30％(v/v)水、85％(v/v)甲醇/15％(v/v)水、和100％甲醇。過(guò)濾所得提取物并通過(guò)RP-HPLC分析。提取溶劑中的甲醇含量對(duì)從蕎麥葉提取蕓香苷的效率有顯著影響(表1)。從一系列提取優(yōu)化研究確定了從蕎麥葉回收蕓香苷的最佳提取條件。改變提取溶劑的醇含量以及提取溫度、提取時(shí)間和固體與溶劑的比有顯著的影響。表1-3總結(jié)了這些結(jié)果中的一些。
表1使用1∶20固體∶溶劑比，并在60℃提取4小時(shí)的條件下，提取溶劑中甲醇的濃度對(duì)蕓香苷提取效率的影響

表2使用1∶10固體∶溶劑比、70％(v/v)甲醇提取溶劑、提取4小時(shí)的條件下提取溫度對(duì)蕓香苷提取效率的影響
表3使用70％(v/v)甲醇提取溶劑50℃條件下，提取時(shí)間和固體∶溶劑比對(duì)蕓香苷提取效率的影響
蕓香苷向異槲皮苷和櫟精的轉(zhuǎn)化圖1A說(shuō)明了蕓香苷的分子組成。酶α-L-鼠李糖苷酶的反應(yīng)通過(guò)除去底部右手邊的第一個(gè)糖導(dǎo)致蕓香苷向圖1B的異槲皮苷的生物轉(zhuǎn)化。為了說(shuō)明，α-L-鼠李糖苷酶基本上沿著圖1A中線A-A’進(jìn)行概念上的切割。
酶β-D-葡糖苷酶的反應(yīng)通過(guò)除去圖1B中底部右手邊上的糖導(dǎo)致圖1B的異槲皮苷向圖1C的櫟精的生物轉(zhuǎn)化。為了說(shuō)明，β-D-葡糖苷酶基本上沿著圖1B中線B-B’進(jìn)行概念上的切割。
如實(shí)施例5中所示，從上面的實(shí)施例2的富含蕓香苷的組合物制備富含異槲皮苷的組合物。該制備方法包括提供處于適于酶溫育的條件下的其中懸浮有蕓香苷的溶液。實(shí)施例5中的這些條件包括升高溶液的溫度到80℃，調(diào)節(jié)pH到4。向溶液中加入含有酶α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡糖苷酶的酶制品，即食品級(jí)柚苷酶粉末。在溫育期間，該溶液的條件保持在適于酶溫育的條件下，溶液的溫度為50℃，并且持續(xù)攪拌。
將溶液的條件改變?yōu)椴贿m于酶溫育的條件，終止溫育期。在實(shí)施例5中該改變包括持續(xù)攪拌下調(diào)節(jié)pH至2.5，然后加熱到80℃保持10分鐘。
如表4中所見(jiàn)，調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間可以控制富含異槲皮苷的組合物中異槲皮苷的比例。異槲皮苷的比例隨著溫育期的延長(zhǎng)而增加，8小時(shí)后蕓香苷/異槲皮苷/櫟精的重量比為1.71∶1∶0.06；16小時(shí)后為0.33∶1∶0.07；24小時(shí)后為痕量∶1∶0.46。
從而24小時(shí)后，基本上所有蕓香苷都已經(jīng)被轉(zhuǎn)化成異槲皮苷和櫟精。然而，24小時(shí)后，組合物含有的異槲皮苷僅為櫟精的約2倍。之前，例如16小時(shí)時(shí)，組合物中異槲皮苷為櫟精的約14倍，異槲皮苷為蕓香苷的約3倍。
隨著溫育期進(jìn)一步增加，可以看到異槲皮苷被進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成櫟精，櫟精與異槲皮苷的比例一直增加直到96小時(shí)，組合物中蕓香苷/異槲皮苷/櫟精的重量比為痕量∶1∶3.38，組合物含有的櫟精為異槲皮苷的三倍以上。
容易看出，通過(guò)調(diào)節(jié)溫育期可以調(diào)節(jié)蕓香苷、異槲皮苷和櫟精的比例。以小時(shí)測(cè)量溫育時(shí)間，從而可以得到相當(dāng)大的時(shí)間范圍以容許大規(guī)模地以商業(yè)上顯著的量實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。
如實(shí)施例6中所示，一天的酶促轉(zhuǎn)化后，商業(yè)來(lái)源的蕓香苷(按重量計(jì)純度為95％)被轉(zhuǎn)化成富含異槲皮苷的組合物，其蕓香苷/異槲皮苷/櫟精的重量比為0.1∶1.0∶0.2。
如實(shí)施例7中所示，商業(yè)蕓香苷從圖3A的高蕓香苷組合物被轉(zhuǎn)化成圖3B的高異槲皮苷和櫟精組合物。
如實(shí)施例8所示，通過(guò)Deltaprep C-18層析進(jìn)一步純化實(shí)施例7中產(chǎn)生的高異槲皮苷和櫟精組合物，得到高純度(95％+)異槲皮苷，產(chǎn)率為起始材料中75％的異槲皮苷。
如實(shí)施例10中所示，通過(guò)加入D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯，或者其他食品助劑可以抑制柚苷酶中β-葡糖苷酶，而不影響α-鼠李糖苷酶的活性。D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯已經(jīng)被多年用作食品添加劑，例如作為豆腐生產(chǎn)中的凝結(jié)劑。在本發(fā)明中D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯增加了靈活性并進(jìn)一步確保該方法將產(chǎn)生高異槲皮苷產(chǎn)率。為了產(chǎn)生異槲皮苷，選擇性抑制β-糖苷酶，或者從柚苷酶選擇性分離α-鼠李糖苷酶在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
如實(shí)施例11所示，中等規(guī)模的方法能夠從蕎麥葉產(chǎn)生高度富含異槲皮苷的產(chǎn)物。從而，可以從低價(jià)值的植物生物質(zhì)產(chǎn)生新產(chǎn)品。
這樣，一種商業(yè)可得到的酶混合物——柚苷酶可用于將蕓香苷轉(zhuǎn)化成有用的高價(jià)值類黃酮化合物櫟精和異槲皮苷。此處公開(kāi)的酶轉(zhuǎn)化是有效的并且比現(xiàn)有技術(shù)更廉價(jià)，并且不使用有毒和可能有害的溶劑。在從該研究產(chǎn)生的生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物之一中蕓香苷/異槲皮苷/櫟精重量比為痕量∶22.8∶7.3。其組成類似于銀杏(Ginkgo Biloba)提取物，該提取物典型地含有24.5％黃酮糖苷和6.3％櫟精。
連同混合在不同條件下加工的產(chǎn)物，可以定制具有不同化學(xué)譜的產(chǎn)物。該技術(shù)為制備“設(shè)計(jì)的營(yíng)養(yǎng)藥”提供了一定彈性。此外，使用層析或其他技術(shù)可將所轉(zhuǎn)化的混合物分級(jí)分離和純化成高純度化合物。
盡管在文獻(xiàn)中描述了分離類黃酮化合物的層析方法，但是它們主要為了分析目的而設(shè)計(jì)。以前還不知道使用Stack Pack柱純化酶-轉(zhuǎn)化的類黃酮化合物(蕓香苷、異槲皮苷和櫟精混合物)，該Stack Pack柱將處理5-50升提取物。
如實(shí)施例9中所示，本發(fā)明公開(kāi)的生物轉(zhuǎn)化技術(shù)還可以將金絲桃中的蕓香苷轉(zhuǎn)化成異槲皮苷和櫟精。各種其他生物質(zhì)如銀杏、苜蓿、桑樹(shù)葉等以及其他富含蕓香苷的農(nóng)業(yè)生物質(zhì)如薔薇果、蘋(píng)果皮、梨子皮、洋蔥皮和蘆筍尖也含有蕓香苷并且可用于產(chǎn)生富含異槲皮苷的組合物。
櫟精和異槲皮苷由于稀有性和生物利用度/生物效能而要求更高價(jià)格。心血管疾病和癌癥預(yù)防中櫟精和異槲皮苷增加的生物利用度暗示著轉(zhuǎn)化的類黃酮化合物產(chǎn)品在營(yíng)養(yǎng)藥和藥物市場(chǎng)中的光明前景。
實(shí)施例5使用酶水解將蕓香苷轉(zhuǎn)化成異槲皮苷和櫟精通過(guò)操縱生物轉(zhuǎn)化條件，我們能夠?qū)⒏缓慄S酮化合物的中間產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成含有不同組成的蕓香苷/異槲皮苷/櫟精的產(chǎn)物。
實(shí)施例2中產(chǎn)生的冷凍干燥的蕓香苷產(chǎn)物(約60％蕓香苷)被用于酶轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。將5g干燥蕓香苷產(chǎn)物分散于500ml水中(固體∶液體比＝1∶100)。將分散體加熱到80℃并調(diào)節(jié)pH至4。然后將分散體在50℃平衡，接著加入食品級(jí)柚苷酶粉(Amano Pharmaceutical Co.，Ltd；日本)。
如供應(yīng)商的說(shuō)明書(shū)中描述的，柚苷酶制品含有150單位β-葡糖苷酶或柚苷酶活性。在該試驗(yàn)中使用每克蕓香苷66mg Amano柚苷酶的劑量。酶溫育保持在50℃，持續(xù)攪拌適當(dāng)?shù)臅r(shí)間長(zhǎng)度。一旦溫育時(shí)間完成，通過(guò)調(diào)節(jié)溶液的pH至2.5然后持續(xù)攪拌下將溫度加熱到80℃10分鐘使酶失活。80℃10分鐘后，將溶液冷卻到室溫，并調(diào)節(jié)pH至7。通過(guò)噴霧干燥、冷凍干燥或其他適宜的方法將酶轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物干燥。
表4總結(jié)了制備含有各種蕓香苷/異槲皮苷/櫟精組成的產(chǎn)物所需的實(shí)驗(yàn)條件。為了方便的原因，此處描述的起始材料先前被冷凍干燥。實(shí)施例2中干燥步驟前回收的沉淀(小丸)也適于作為實(shí)施例5的起始材料?？稍诓煌A段，即，在類黃酮化合物提取前，水性提取后，預(yù)濃縮后，或者沉淀后，應(yīng)用酶轉(zhuǎn)化。實(shí)施與常規(guī)酶處理相同的方法之后，對(duì)照(沒(méi)有酶)中類黃酮化合物組成(蕓香苷/異槲皮苷/櫟精)保持不變。這表明轉(zhuǎn)化由柚苷酶的作用導(dǎo)致。
表4使用柚苷酶對(duì)類黃酮化合物的酶轉(zhuǎn)化

實(shí)施例6高純度商業(yè)蕓香苷轉(zhuǎn)化成異槲皮苷使用從Sigma化學(xué)公司購(gòu)買的商業(yè)蕓香苷(95％純度)，實(shí)施類似于實(shí)施例5中描述的酶溫育，以將蕓香苷轉(zhuǎn)化成異槲皮苷。將10.90g蕓香苷分散于1000ml水中。將該分散體加熱到80℃并調(diào)節(jié)pH到4。然后將分散體在55℃平衡，接著加入2.42g柚苷酶粉。酶溫育保持在55℃，持續(xù)攪拌24小時(shí)。一旦溫育時(shí)間完成，通過(guò)調(diào)節(jié)溶液的pH至2.5然后持續(xù)攪拌下將溫度加熱到80℃10分鐘使酶失活。80℃10分鐘后，將溶液冷卻到室溫，并調(diào)節(jié)pH至7。取出1.0ml提取物等分試樣用于終產(chǎn)物組成的RP-HPLC分析。冷凍干燥剩余的提取物。HPLC結(jié)果表明純蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)被轉(zhuǎn)化成含有0.12∶1∶0.21(重量比)的蕓香苷/異槲皮苷/櫟精組成的產(chǎn)物。
實(shí)施例7擴(kuò)大轉(zhuǎn)化從Street Chemicals購(gòu)買的商業(yè)蕓香苷用于類似于實(shí)施例6中描述的酶轉(zhuǎn)化。商業(yè)蕓香苷中蕓香苷和異槲皮苷的濃度在圖3A中顯示。將109克蕓香苷分散于4000ml水中。將該分散體加熱到80℃并調(diào)節(jié)pH到4。然后將分散體在55℃平衡，接著加入24.2g柚苷酶粉。酶溫育保持在55℃，持續(xù)攪拌24小時(shí)。一旦溫育時(shí)間完成，通過(guò)調(diào)節(jié)溶液的pH至2.5然后持續(xù)攪拌下將溫度加熱到80℃10分鐘使酶失活。80℃10分鐘后，將溶液冷卻到室溫，并調(diào)節(jié)pH至7。溶液保存在冰箱(4℃)過(guò)夜。將離心回收的固體冷凍干燥。得到61.8g干物質(zhì)。該產(chǎn)物的層析圖在圖3B中顯示。
實(shí)施例8異槲皮苷和櫟精的制備級(jí)分離將從實(shí)施例7的方法得到的固體(50gm)溶于70％甲醇中并過(guò)濾。所得提取物在Waters反相Bondapak C-18，40×310mm(15-20 125)柱上進(jìn)行制備級(jí)層析，柱子用甲醇1％乙酸梯度洗脫，流速為50ml/min，其中使用裝備有Millennium V 2.15軟件控制的486可變波長(zhǎng)UV-Vis檢測(cè)器的Waters Delta-Prep 4000系統(tǒng)。在280nm檢測(cè)目標(biāo)化合物。用實(shí)施例A中描述的分析型HPLC方法評(píng)價(jià)所收集的級(jí)分的純度。異槲皮苷的產(chǎn)率為起始材料的75％，純度為95％(圖3C)。還從一個(gè)制備性HPLC級(jí)分回收了少量純櫟精。可以通過(guò)從熱甲醇重結(jié)晶進(jìn)一步提高制備性HPLC級(jí)分的純度。
實(shí)施例9從金絲桃提取物轉(zhuǎn)化蕓香苷將幾個(gè)金絲桃朔果的內(nèi)容物合并，分散在水中，并實(shí)施類似于實(shí)施例5中描述的酶溫育。已知金絲桃含有蕓香苷。該實(shí)驗(yàn)的目的在于將金絲桃提取物中的蕓香苷轉(zhuǎn)化成異槲皮苷。將5.52g金絲桃提取物分散在500ml水中。加熱分散體到80℃并調(diào)節(jié)pH到4。然后將分散體在55℃平衡，接著加入0.60g柚苷酶粉。酶溫育保持在55℃，持續(xù)攪拌24小時(shí)。一旦溫育時(shí)間完成，通過(guò)調(diào)節(jié)溶液的pH至2.5然后持續(xù)攪拌下將溫度加熱到80℃10分鐘使酶失活。80℃10分鐘后，將溶液冷卻到室溫，并調(diào)節(jié)pH至7。然后冷凍干燥提取物。將干燥產(chǎn)物溶于甲醇，過(guò)濾并通過(guò)RP-HPLC分析以確定蕓香苷向異槲皮苷轉(zhuǎn)化的程度。初始金絲桃提取物的HPLC結(jié)果表明蕓香苷/異槲皮苷/櫟精組成為0.47∶1∶0.21(重量比)。發(fā)現(xiàn)酶轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物含有的蕓香苷/異槲皮苷/櫟精組成為痕量∶1∶0.18(重量比)，這表明初始提取物中存在的所有蕓香苷已經(jīng)被轉(zhuǎn)化成異槲皮苷和櫟精。
實(shí)施例10使用柚苷酶和D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯將蕓香苷大規(guī)模轉(zhuǎn)化成異槲皮苷將來(lái)自ICN的藥物級(jí)蕓香苷(38.15g)分散在3.5L去離子水中。制備柚苷酶(8.47g溶于100ml水)和D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯(6.23g溶于100ml水)溶液。將D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯溶液加到蕓香苷∶水混合物中。該混合物的pH為4.0。然后加熱混合物到80℃并溫育2小時(shí)。降溫到55℃并加入柚苷酶溶液。攪拌下55℃溫育混合物24小時(shí)。為了終止反應(yīng)，降低pH到2.5并加熱混合物到80℃10分鐘。讓混合物冷卻到室溫然后調(diào)節(jié)pH至7.0。然后過(guò)夜冷藏混合物以誘導(dǎo)沉淀形成，并讓沉淀沉降。離心收集沉淀并將其冷凍干燥(PPT1級(jí)分)。將上清液濃縮然后再次離心。所得沉淀也被冷凍干燥(PPT2級(jí)分)。以該方式制備三批。通過(guò)HPLC分析來(lái)自每批的不同級(jí)分中的蕓香苷、異槲皮苷和櫟精。數(shù)據(jù)在表5中給出。
表5中的數(shù)據(jù)表明蕓香苷和櫟精表現(xiàn)為次要組分，而異槲皮苷是酶轉(zhuǎn)化后所觀察到的主要產(chǎn)物。例如，從通過(guò)實(shí)施例10的方法處理的三批產(chǎn)生了共77.72g異槲皮苷和0.53g櫟精。異槲皮苷的大部分(61.8g)出現(xiàn)在PPT1級(jí)分中。該轉(zhuǎn)化方法非常有效，因?yàn)橥ㄟ^(guò)該方法僅剩下0.2009g蕓香苷未被轉(zhuǎn)化。該數(shù)據(jù)還表明將抑制劑D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯包含在反應(yīng)混合物中可以選擇性地導(dǎo)致主要產(chǎn)生一種類型的類黃酮化合物，即異槲皮苷。
PPT1級(jí)分中異槲皮苷濃度的平均值為85.2％(范圍為81.1-88.8％)。因此，該實(shí)施例還表明使用簡(jiǎn)單的生化純化技術(shù)可以得到高純度(＞80％)生物可利用的類黃酮化合物，而不需層析方法。上清液(SUP)級(jí)分也是有價(jià)值的，因?yàn)樗鼈兠?01.66g干物質(zhì)含有14.42g異槲皮苷。
表5使用柚苷酶和作為選擇性抑制劑的D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯對(duì)類黃酮化合物的酶轉(zhuǎn)化

實(shí)施例11從蕎麥葉材料提取、轉(zhuǎn)化和純化蕓香苷將1kg ManCan葉材料在10L 70％甲醇中50℃下提取3小時(shí)。3小時(shí)后，過(guò)濾混合物并用約4L熱70％甲醇洗滌植物材料。合并濾液并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減小體積直到體積為原來(lái)體積的1/5。冷藏濃縮的提取物并讓其過(guò)夜沉淀。攪拌混合物，然后將其離心以收集蕓香苷。
基于前面的分析，估計(jì)1kg起始葉材料中蕓香苷含量為33.66g。所用的酶和抑制劑的量基于這些估計(jì)，并且類似于前面的轉(zhuǎn)化(7.36g柚苷酶；6.23g D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯；3.5L水)。
將蕓香苷沉淀加入3.5L水，并加入D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯溶液?；旌衔锏膒H為4.0。然后將混合物加熱到80℃并溫育2小時(shí)。將混合物冷卻到55℃并加入柚苷酶溶液。然后在55℃溫育混合物24小時(shí)。降低pH到2.5并之后80℃溫育10分鐘以終止反應(yīng)。讓混合物冷卻到室溫然后調(diào)節(jié)pH至7.0。然后將混合物置于4℃過(guò)夜以容許沉淀形成。通過(guò)如實(shí)施例10中的離心收集沉淀。
攪拌下將沉淀溶于55℃甲醇。過(guò)濾溶液除去不溶物質(zhì)。然后盡可能地濃縮濾液，但不讓混合物在濃縮容器中產(chǎn)生氣泡。此時(shí)，將1.5L熱水加入混合物，通過(guò)在4℃溫育2天重新沉淀物質(zhì)，通過(guò)離心收集沉淀。然后將重新沉淀的物質(zhì)用熱水洗滌并第三次沉淀。將最終的沉淀物冷凍干燥形成終產(chǎn)物。
方法和實(shí)施例的注釋在Waters對(duì)稱C-18柱(3.0.×.150mm，5微米)上通過(guò)反相高效液相層析(RP-HPLC)，用水性0.05％v/v三氟乙酸(TFA)∶乙腈(T＝0min，％乙腈＝10；T＝20min，％乙腈＝40；T＝30min，％乙腈＝10)的線性梯度洗脫，流速0.4mL/min，使用光電二極管陣列(PDA)檢測(cè)器在350nm確定蕎麥類黃酮化合物含量。通過(guò)使用商業(yè)途徑購(gòu)買的蕓香苷、異槲皮苷和櫟精標(biāo)準(zhǔn)制作外標(biāo)準(zhǔn)曲線以定量類黃酮化合物。
通過(guò)Minami等人(1998)描述的方法，通過(guò)溶劑提取出生物質(zhì)中的蕓香苷并以HPLC方法測(cè)定蕓香苷。將1g生物質(zhì)(通過(guò)100目篩)用40ml甲醇在70℃下在Soxhelt提取裝置中提取60分鐘。離心后的上清液用于測(cè)定。
如圖4中概述，本發(fā)明提供了從含有蕓香苷的植物生物質(zhì)提取、濃縮和沉淀富含蕓香苷的組合物，和使用方法A將蕓香苷酶轉(zhuǎn)化成富含異槲皮苷/櫟精的組合物，或者備選地，產(chǎn)生富含異槲皮苷的產(chǎn)物。本發(fā)明的方法A和B的兩種產(chǎn)物都可以用作健康食品、營(yíng)養(yǎng)藥、藥物、化妝品和其他市場(chǎng)的添加劑。
前面的描述被考慮為僅用于舉例闡明本發(fā)明的原理。此外，由于本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易實(shí)施許多改變和修改，故不打算將本發(fā)明限制在所顯示和描述的精確結(jié)構(gòu)和實(shí)施方法中，因此，結(jié)構(gòu)或?qū)嵤┓椒ㄖ锌梢圆扇〉乃羞@些適宜的改變和修改都將落在所要求的本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.富含異槲皮苷的組合物，其通過(guò)包括如下步驟的方法制備提供處于適于酶溫育的條件下的其中懸浮有蕓香苷的溶液；將含有柚苷酶的酶制品加入溶液；在溫育期保持適于酶溫育的溶液條件；通過(guò)將溶液的條件改變?yōu)椴贿m于所述酶溫育的條件而終止溫育期；其中通過(guò)調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間控制組合物中的異槲皮苷的比例。
2.權(quán)利要求1的富含異槲皮苷的組合物，其中作為酶溫育的結(jié)果，該組合物還富含櫟精。
3.權(quán)利要求2的富含異槲皮苷的組合物，其中通過(guò)調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間控制櫟精和異槲皮苷的相對(duì)比例。
4.權(quán)利要求2的富含異槲皮苷的組合物，其中溫育期的持續(xù)時(shí)間取決于酶制品的活性。
5.權(quán)利要求2的富含異槲皮苷的組合物，其中溫育期的持續(xù)時(shí)間為1到48小時(shí)。
6.權(quán)利要求1的富含異槲皮苷的組合物，其中酶溫育過(guò)程中溶液的條件包括溫度和pH水平。
7.權(quán)利要求6的富含異槲皮苷的組合物，其中溫度為50-55℃。
8.權(quán)利要求6的富含異槲皮苷的組合物，其中pH為4-8。
9.權(quán)利要求1的富含異槲皮苷的組合物，其中溶液的條件為酸性pH和基本上80℃的溫度。
10.權(quán)利要求1的富含異槲皮苷的組合物，其中蕓香苷與異槲皮苷的比例按重量計(jì)小于20∶1。
11.權(quán)利要求2的富含異槲皮苷的組合物，其中櫟精與異槲皮苷的比例按重量計(jì)大于0.003∶1。
12.權(quán)利要求1的富含異槲皮苷的組合物，其中所述方法還包括在所述溫育期終止后純化所述溶液。
13.權(quán)利要求12的富含異槲皮苷的組合物，其中所述溫育期終止后所述溶液的純化使用常規(guī)生物化學(xué)純化法實(shí)施。
14.利用常規(guī)生物化學(xué)純化方法處理權(quán)利要求1的富含異槲皮苷的組合物制備的含有按重量計(jì)至少90％異槲皮苷的純化的異槲皮苷組合物。
15.權(quán)利要求1的富含異槲皮苷的組合物，其中從商業(yè)來(lái)源得到富集或純化形式的蕓香苷。
16.權(quán)利要求1的富含異槲皮苷的組合物，其中通過(guò)權(quán)利要求53的方法得到蕓香苷。
17.含有根據(jù)權(quán)利要求1的方法制備的異槲皮苷的富含異槲皮苷的組合物，所述組合物具有包括血管緊張肽-轉(zhuǎn)化酶抑制性質(zhì)、消炎性質(zhì)、抗腫瘤性質(zhì)、抗病毒性質(zhì)、抗氧化性質(zhì)、自由基清除性質(zhì)、癌癥預(yù)防性質(zhì)、心臟保護(hù)性質(zhì)、蛋白酶抑制性質(zhì)、蛋白激酶C抑制性質(zhì)、酪氨酸蛋白激酶抑制性質(zhì)、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制性質(zhì)和蛋白切割酶抑制性質(zhì)的生物活性性質(zhì)。
18.權(quán)利要求17的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物的生物活性性質(zhì)用于預(yù)防和治療疾病和健康問(wèn)題，所述疾病和健康問(wèn)題包括，但不限于心血管疾病、中風(fēng)、毛細(xì)血管脆性、動(dòng)脈硬化癥、創(chuàng)傷、氧化應(yīng)激、高血壓、升高的膽固醇、升高的甘油三酯、高血糖、II型糖尿病、肥胖和相關(guān)失調(diào)、阿爾茨海默氏病、帕金森病、哮喘和一些癌癥。
19.權(quán)利要求17的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于功能食品。
20.權(quán)利要求17的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于天然健康產(chǎn)品。
21.權(quán)利要求17的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于營(yíng)養(yǎng)藥產(chǎn)品。
22.權(quán)利要求17的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于藥品。
23.權(quán)利要求17的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于化妝品。
24.富含異槲皮苷的組合物，其通過(guò)包括如下步驟的方法制備提供處于適于酶溫育的條件下的其中懸浮有蕓香苷的溶液；將含有柚苷酶的酶制品加入溶液；在溫育期保持適于酶溫育的溶液條件；通過(guò)將溶液的條件改變?yōu)椴贿m于酶溫育的條件終止溫育期；其中通過(guò)調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間控制組合物中的異槲皮苷的比例。
24.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其中通過(guò)調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間控制異槲皮苷的產(chǎn)率。
25.權(quán)利要求24的方法，其中溫育期的持續(xù)時(shí)間為1-48小時(shí)。
26.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其中通過(guò)向溶液中加入β-D-葡糖苷酶抑制劑控制蕓香苷、櫟精和異槲皮苷的相對(duì)比例。
27.權(quán)利要求26的富含異槲皮苷的組合物，其中在將所述酶制品加入溶液之前將所述β-D-葡糖苷酶抑制劑加入溶液。
28.權(quán)利要求26的富含異槲皮苷的組合物，其中β-D-葡糖苷酶抑制劑具有D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯的性質(zhì)。
29.權(quán)利要求28的富含異槲皮苷的組合物，其中β-D-葡糖苷酶抑制劑為D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯。
30.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其中酶制品含有α-L-鼠李糖苷酶。
31.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其中酶溫育過(guò)程中溶液的條件包括溫度和pH水平。
32.權(quán)利要求31的富含異槲皮苷的組合物，其中溫度為50-55℃。
33.權(quán)利要求31的富含異槲皮苷的組合物，其中pH為4-8。
34.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其中酶溫育過(guò)程中溶液的條件包括加入β-D-葡糖苷酶抑制劑。
35.權(quán)利要求34的富含異槲皮苷的組合物，其中β-D-葡糖苷酶抑制劑具有D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯的性質(zhì)。
36.權(quán)利要求25的富含異槲皮苷的組合物，其中β-D-葡糖苷酶抑制劑為D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯。
37.權(quán)利要求35的方法，其中D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯的濃度大于1mM。
38.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其還包括通過(guò)變性酶α-L-鼠李糖苷酶終止溫育期。
39.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其中從商業(yè)來(lái)源得到富集的或純化形式的蕓香苷。
40.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其中通過(guò)權(quán)利要求53的方法得到蕓香苷。
41.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其中蕓香苷與異槲皮苷的比例按重量計(jì)小于20∶1。
42.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其中櫟精與異槲皮苷的比例按重量計(jì)大于0.003∶1。
43.權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物，其中所述方法還包括所述溫育期終止后純化所述溶液。
44.權(quán)利要求43的富含異槲皮苷的組合物，其中所述溫育期終止后所述溶液的純化使用常規(guī)生物化學(xué)純化法實(shí)施。
45.利用常規(guī)生物化學(xué)純化方法處理權(quán)利要求24的富含異槲皮苷的組合物制備的含有按重量計(jì)至少90％異槲皮苷的純化的異槲皮苷組合物。
47.含有根據(jù)權(quán)利要求1的方法制備的異槲皮苷的富含異槲皮苷的組合物，所述組合物具有包括血管緊張肽-轉(zhuǎn)化酶抑制性質(zhì)、消炎性質(zhì)、抗腫瘤性質(zhì)、抗病毒性質(zhì)、抗氧化性質(zhì)、自由基清除性質(zhì)、癌癥預(yù)防性質(zhì)、心臟保護(hù)性質(zhì)、蛋白酶抑制性質(zhì)、蛋白激酶C抑制性質(zhì)、酪氨酸蛋白激酶抑制性質(zhì)、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制性質(zhì)和蛋白切割酶抑制性質(zhì)的生物活性性質(zhì)。
47.權(quán)利要求46的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物的生物活性性質(zhì)用于預(yù)防和治療疾病和健康問(wèn)題，所述疾病和健康問(wèn)題包括，但不限于心血管疾病、中風(fēng)、毛細(xì)血管脆性、動(dòng)脈硬化、創(chuàng)傷、氧化應(yīng)激、高血壓、升高的膽固醇、升高的甘油三酯、高血糖、II型糖尿病、肥胖和相關(guān)失調(diào)、阿爾茨海默氏病、帕金森病、哮喘和一些癌癥。
48.權(quán)利要求46的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于功能食品。
49.權(quán)利要求46的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于天然健康產(chǎn)品。
50.權(quán)利要求46的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于營(yíng)養(yǎng)藥產(chǎn)品。
51.權(quán)利要求46的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于藥品。
52.權(quán)利要求46的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于化妝品。
53.從含有蕓香苷的生物質(zhì)制備富含蕓香苷的組合物的方法，該方法包括使用含有水或醇的水性溶液對(duì)生物質(zhì)實(shí)施類黃酮化合物提取步驟；過(guò)濾該溶液以產(chǎn)生提取溶液；容許提取溶液靜置從而形成沉淀；收集并干燥沉淀以形成富含蕓香苷的組合物。
54.權(quán)利要求53的方法，其中類黃酮化合物提取步驟包括打碎生物質(zhì)并在水性溶液中攪拌。
55.權(quán)利要求53的方法，其還包括在靜置提取溶液之前濃縮提取溶液以形成體積小于其原始體積的1/5的濃縮提取溶液。
56.權(quán)利要求55的方法，其中使?jié)饪s的提取溶液在低于10℃的溫度下靜置。
57.權(quán)利要求53的方法，其中水性溶液含有水并且保持在高于30℃的溫度。
58.權(quán)利要求53的方法，其中水性溶液含有醇。
59.權(quán)利要求58的方法，其中水性溶液具有按體積計(jì)濃度大于20％的醇，并且溶液的其余部分為水。
60.權(quán)利要求59的方法，其中水性溶液具有按體積計(jì)濃度50％到100％的醇，并且溶液的其余部分為水。
61.權(quán)利要求59的方法，其中提取過(guò)程中水性溶液的溫度保持在30℃到99℃。
62.權(quán)利要求53的方法，其中植物生物質(zhì)含有來(lái)自蕎麥屬成員的生物質(zhì)。
63.權(quán)利要求53的方法，其中生物質(zhì)含有金絲桃葉、銀杏、bilola、苜蓿、桑樹(shù)、藻類、蘋(píng)果皮、梨子皮、洋蔥皮、蘆筍尖及薔薇果果皮中的至少一種。
64.含有根據(jù)權(quán)利要求53的方法制備的蕓香苷的富含類黃酮化合物的組合物，所述組合物具有包括血管緊張肽-轉(zhuǎn)化酶抑制性質(zhì)、消炎性質(zhì)、抗腫瘤性質(zhì)、抗病毒性質(zhì)、抗氧化性質(zhì)、自由基清除性質(zhì)、癌癥預(yù)防性質(zhì)、心臟保護(hù)性質(zhì)、蛋白酶抑制性質(zhì)、蛋白激酶C抑制性質(zhì)、酪氨酸蛋白激酶抑制性質(zhì)、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制性質(zhì)和蛋白切割酶抑制性質(zhì)的生物活性性質(zhì)。
65.權(quán)利要求64的富含類黃酮化合物的組合物，其中所述組合物的生物活性性質(zhì)用于預(yù)防和治療疾病和健康問(wèn)題，所述疾病和健康問(wèn)題包括，但不限于心血管疾病、中風(fēng)、毛細(xì)血管脆性、動(dòng)脈硬化、創(chuàng)傷、氧化應(yīng)激、高血壓、升高的膽固醇、升高的甘油三酯、高血糖、II型糖尿病、肥胖和相關(guān)失調(diào)、阿爾茨海默氏病、帕金森病、哮喘和一些癌癥。
66.權(quán)利要求64的富含類黃酮化合物的組合物，其中所述組合物用于功能食品。
67.權(quán)利要求64的富含類黃酮化合物的組合物，其中所述組合物用于天然健康產(chǎn)品。
68.權(quán)利要求64的富含類黃酮化合物的組合物，其中所述組合物用于營(yíng)養(yǎng)藥產(chǎn)品。
69.權(quán)利要求64的富含類黃酮化合物的組合物，其中所述組合物用于藥品。
70.權(quán)利要求64的富含類黃酮化合物的組合物，其中所述組合物用于化妝品。
71.產(chǎn)生富含異槲皮苷的組合物的方法，所述方法包括提供處于適于酶溫育的條件下的其中懸浮有蕓香苷的溶液；將含有柚苷酶的酶制品加入溶液；在溫育期保持適于酶溫育的溶液條件；通過(guò)將溶液的條件改變?yōu)椴贿m于所述酶溫育的條件終止溫育期，所述溶液在此時(shí)為富含異槲皮苷的組合物；其中通過(guò)調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間控制組合物中異槲皮苷的比例。
72.權(quán)利要求71的方法，其中作為所述酶溫育的結(jié)果，所述組合物還含有櫟精。
73.權(quán)利要求72的方法，其中通過(guò)調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間控制櫟精和異槲皮苷的相對(duì)比例。
74.權(quán)利要求71的方法，其中溫育期的持續(xù)時(shí)間取決于酶制品的活性。
75.權(quán)利要求71的方法，其中溫育期的持續(xù)時(shí)間為1-48小時(shí)。
76.權(quán)利要求71的方法，其中酶溫育過(guò)程中溶液的條件包括溫度和pH水平。
77.權(quán)利要求76的方法，其中溫度為50-55℃。
78.權(quán)利要求76的方法，其中pH為4-8。
79.權(quán)利要求71的方法，其中溶液的條件為酸性pH和基本上80℃的溫度。
80.權(quán)利要求71的方法，其中蕓香苷與異槲皮苷的比例按重量計(jì)小于20∶1。
81.權(quán)利要求80的方法，其中櫟精與異槲皮苷的比例按重量計(jì)大于0.003∶1。
82.權(quán)利要求71的方法，其還包括終止所述溫育期后純化所述溶液。
83.權(quán)利要求82的方法，其中終止所述溫育期后所述溶液的純化使用常規(guī)生物化學(xué)純化法實(shí)施。
84.通過(guò)權(quán)利要求83的方法生產(chǎn)的產(chǎn)品，其為純化的異槲皮苷。
85.含有根據(jù)權(quán)利要求71的方法產(chǎn)生的異槲皮苷的富含異槲皮苷的組合物，所述組合物具有包括血管緊張肽-轉(zhuǎn)化酶抑制性質(zhì)、消炎性質(zhì)、抗腫瘤性質(zhì)、抗病毒性質(zhì)、抗氧化性質(zhì)、自由基清除性質(zhì)、癌癥預(yù)防性質(zhì)、心臟保護(hù)性質(zhì)、蛋白酶抑制性質(zhì)、蛋白激酶C抑制性質(zhì)、酪氨酸蛋白激酶抑制性質(zhì)、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制性質(zhì)和蛋白切割酶抑制性質(zhì)的生物活性性質(zhì)。
86.權(quán)利要求85的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物的生物活性性質(zhì)用于預(yù)防和治療疾病和健康問(wèn)題，所述疾病和健康問(wèn)題包括，但不限于心血管疾病、中風(fēng)、毛細(xì)血管脆性、動(dòng)脈硬化癥、創(chuàng)傷、氧化應(yīng)激、高血壓、升高的膽固醇、升高的甘油三酯、高血糖、II型糖尿病、肥胖和相關(guān)失調(diào)、阿爾茨海默氏病、帕金森病、哮喘和一些癌癥。
87.權(quán)利要求85的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于功能食品。
88.權(quán)利要求85的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于天然健康產(chǎn)品。
89.權(quán)利要求85的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于營(yíng)養(yǎng)藥產(chǎn)品。
90.權(quán)利要求85的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于藥品。
91.權(quán)利要求85的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于化妝品。
92.產(chǎn)生富含異槲皮苷的組合物的方法，所述方法包括提供處于適于酶溫育的條件下的其中懸浮有蕓香苷的溶液；將含有柚苷酶的酶制品加入溶液；在溫育期保持適于酶溫育的溶液條件；通過(guò)將溶液的條件改變?yōu)椴贿m于酶溫育的條件終止溫育期；其中通過(guò)調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間控制組合物中的異槲皮苷的比例。
93.權(quán)利要求92的方法，其中通過(guò)調(diào)節(jié)溫育期的持續(xù)時(shí)間控制異槲皮苷的產(chǎn)率。
94.權(quán)利要求92的方法，其中溫育期的持續(xù)時(shí)間為1到48小時(shí)。
95.權(quán)利要求92的方法，其還包括向溶液中加入β-D-葡糖苷酶抑制劑以控制溶液中蕓香苷、櫟精和異槲皮苷的相對(duì)比例。
96.權(quán)利要求95的方法，其中在將所述酶制品加入溶液之前將所述β-D-葡糖苷酶抑制劑加入溶液。
97.權(quán)利要求95的方法，其中β-D-葡糖苷酶抑制劑具有D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯的性質(zhì)。
98.權(quán)利要求97的方法，其中β-D-葡糖苷酶抑制劑為D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯。
99.權(quán)利要求92的方法，其中酶制品含有α-L-鼠李糖苷酶。
100.權(quán)利要求92的方法，其中酶溫育過(guò)程中溶液的條件包括溫度和pH水平。
101.權(quán)利要求100的方法，其中溫度為50-55℃。
102.權(quán)利要求100的方法，其中pH為4-8。
103.權(quán)利要求92的方法，其中酶溫育過(guò)程中溶液的條件包括加入β-D-葡糖苷酶抑制劑。
104.權(quán)利要求103的方法，其中β-D-葡糖苷酶抑制劑具有D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯的性質(zhì)。
105.權(quán)利要求104的方法，其中β-D-葡糖苷酶抑制劑為D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯。
106.權(quán)利要求105的方法，其中D-Δ-葡糖酸內(nèi)酯的濃度大于1mM。
107.權(quán)利要求92的方法，其還包括通過(guò)變性酶α-L-鼠李糖苷酶終止溫育期。
108.權(quán)利要求92的方法，其中蕓香苷與異槲皮苷的比例按重量計(jì)小于20∶1。
109.權(quán)利要求92的方法，其中櫟精與異槲皮苷的比例按重量計(jì)大于0.003∶1。
110.權(quán)利要求92的方法，其還包括終止所述溫育期后純化所述溶液。
111.權(quán)利要求110的方法，其中終止所述溫育期后所述溶液的純化使用常規(guī)生物化學(xué)純化法實(shí)施。
112.按照權(quán)利要求111的方法生產(chǎn)的產(chǎn)品，其為純化的異槲皮苷。
113.含有按照權(quán)利要求92的方法產(chǎn)生的異槲皮苷的富含異槲皮苷的組合物，所述組合物具有包括血管緊張肽-轉(zhuǎn)化酶抑制性質(zhì)、消炎性質(zhì)、抗腫瘤性質(zhì)、抗病毒性質(zhì)、抗氧化性質(zhì)、自由基清除性質(zhì)、癌癥預(yù)防性質(zhì)、心臟保護(hù)性質(zhì)、蛋白酶抑制性質(zhì)、蛋白激酶C抑制性質(zhì)、酪氨酸蛋白激酶抑制性質(zhì)、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制性質(zhì)和蛋白切割酶抑制性質(zhì)的生物活性性質(zhì)。
114.權(quán)利要求113的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物的生物活性性質(zhì)用于預(yù)防和治療疾病和健康問(wèn)題，這些疾病和健康問(wèn)題包括，但不限于心血管疾病、中風(fēng)、毛細(xì)血管脆性、動(dòng)脈硬化、創(chuàng)傷、氧化應(yīng)激、高血壓、升高的膽固醇、升高的甘油三酯、高血糖、II型糖尿病、肥胖和相關(guān)失調(diào)、阿爾茨海默氏病、帕金森病、哮喘和一些癌癥。
115.權(quán)利要求113的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于功能食品。
116.權(quán)利要求113的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于天然健康產(chǎn)品。
117.權(quán)利要求113的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于營(yíng)養(yǎng)藥產(chǎn)品。
118.權(quán)利要求113的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于藥品。
119.權(quán)利要求113的富含異槲皮苷的組合物，其中所述組合物用于化妝品。
全文摘要
從植物生物質(zhì)制備富含蕓香苷的組合物的方法包括用水性溶液提取，和沉淀。酶制品如柚苷酶被用于將蕓香苷轉(zhuǎn)化成具有更高價(jià)值的組合物，該組合物含有增加比例的異槲皮苷和櫟精。
文檔編號(hào)A61Q19/08GK1685053SQ03822616
公開(kāi)日2005年10月19日 申請(qǐng)日期2003年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月23日
發(fā)明者P·R·昌, A·繆爾 申請(qǐng)人:加拿大農(nóng)業(yè)部