專利名稱：一種調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物，尤其涉及含有microRNA-218的調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物。
背景技術(shù)：
美白是一個(gè)永恒的話題，每個(gè)女性都渴求有一個(gè)白皙的肌膚和細(xì)嫩的臉龐。俗話說“一白遮百丑”，所以女性對于美白的追求就像人類對于光明的追求一樣從未停止，胭脂水粉幾乎是每個(gè)成年女性的必備品，到了現(xiàn)在，更是有遮瑕膏、粉底、散粉、定妝粉、粉餅等零零總總的粉飾家族，粉飾美白、粉飾太平。其實(shí)，美白就像是治病，治標(biāo)不如治本，只有把內(nèi)在膚質(zhì)調(diào)理好，根治影響美白的罪魁禍?zhǔn)住谏兀∧w才能展現(xiàn)真正由內(nèi)而外的自然美白光彩。黑色素是存在于每個(gè)人皮膚基底層的一種蛋白質(zhì)。紫外線的照射會令黑色素產(chǎn)生變化，生成一種保護(hù)皮膚的物質(zhì)，然后黑色素又經(jīng)由細(xì)胞代謝的層層移動，到了肌膚表皮層，形成了我們現(xiàn)在所看到的色斑和膚色不勻等皮膚問題。黑色素的生物合成是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，主要是通過黑色素細(xì)胞內(nèi)的酪氨酸酶催化反應(yīng)形成的。在這個(gè)過程中，有很多基因參與了調(diào)控。其中，被稱為“黑色素細(xì)胞主調(diào)節(jié)器”的MITF基因發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。MITF是于黑色素細(xì)胞中所發(fā)現(xiàn)的，且是黑色素細(xì)胞適當(dāng)成長及長期持續(xù)存活所不可或缺。MITF是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，激活黑色素生成的關(guān)鍵酶一酪氨酸酶的活性，參與調(diào)控黑色素的合成。因此，抑制MITF的表達(dá)和酪氨酸酶的活性，才能抑制黑色素的合成，達(dá)到美白的效果。

MicroRNA(miRNA)是長度為20 24個(gè)核苷酸的非編碼小RNA，可以通過與靶點(diǎn)的結(jié)合而特異性的抑制目標(biāo)基因的表達(dá)。近十年來，研究者發(fā)現(xiàn)microRNA在胚胎發(fā)育以及細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等生理過程中發(fā)揮著極其重要的功能。目前只有一小部分microRNAs生物學(xué)功能得到闡明。例如，microRNA-273和lys_6編碼的microRNA，參與線蟲的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程；micrORNA-430參與斑馬魚的大腦發(fā)育；micr0RNA-181控制哺乳動物血細(xì)胞分化為B細(xì)胞；micr0RNA-375調(diào)節(jié)哺乳動物胰島細(xì)胞發(fā)育和胰島素分泌；micr0RNA-143在脂肪細(xì)胞分化起作用；miCix)RNA-196參與了哺乳動物四肢形成，microRNA-1與心臟發(fā)育有關(guān)。但是對于microRNA在皮膚美白方面的相關(guān)研究很少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:一種調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物，所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物含有 microRNA-218。優(yōu)選地，所述microRNA-218抑制黑色素的合成。優(yōu)選地，所述microRNA-218通過抑制轉(zhuǎn)錄因子MITF的表達(dá)來抑制黑色素的合成。
進(jìn)一步優(yōu)選,所述microRNA-218的序列為SEQ ID N0.1所示的序列。更進(jìn)一步優(yōu)選，所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物是一種皮膚外用制劑。更進(jìn)一步優(yōu)選，所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物是化妝品或護(hù)膚品。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明一種調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物，microRNA-218通過抑制轉(zhuǎn)錄因子MITF的表達(dá)來抑制黑色素的合成，從根本上達(dá)到美白效果。而且，本發(fā)明調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物對曬斑、黃褐斑等色斑和黑變病也起到很好的美白效果。


圖1為microRNA-218對黑色素合成的抑制效果；圖1中A為microRNA-218對melan-a細(xì)胞的黑色素 合成的抑制效果圖，圖1中B為microRNA-218對酪氨酸酶活性的抑制效果圖，圖1中C為不同處理組酪氨酸酵素組織學(xué)染色結(jié)果圖，(“**”表示P < 0.01)。圖2為microRNA-218對MITF表達(dá)的抑制效果。圖3為microRNA-218在模擬人基地皮膚實(shí)驗(yàn)中對黑色素合成的抑制效果。上述附圖中，C代表空白對照，miR-218代表microRNA-218，Ant1-miR-218代表反義microRNA-218，NC代表陰性對照，Ant1-NC代表反義陰性對照。
具體實(shí)施例方式為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。本申請中未明確記載的實(shí)驗(yàn)步驟和條件，則采用常規(guī)的實(shí)驗(yàn)步驟和條件，因?yàn)檫@些實(shí)驗(yàn)步驟和條件是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的，因此，在本申請文件中未再贅述。在研究中發(fā)現(xiàn)一些mi croRNA能抑制黑色素的合成，從而起到皮膚美白的效果。MITF是黑色素合成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，以它為靶標(biāo)，通過生物信息學(xué)預(yù)測，確定了microRNA-218能與之配對，并且進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果證實(shí)microRNA-218能抑制MITF的表達(dá)，并且能明顯的在細(xì)胞模型上抑制黑色素的合成。在后續(xù)的模擬人基地皮膚色素形成實(shí)驗(yàn)(OTC)中也證實(shí)microRNA-218抑制MITF的表達(dá)，從而影響色黑色素的合成?；谝陨蠋c(diǎn)，我們可以推斷miciORNA-218在曬斑、黃褐斑、妊娠斑和黑變病等的美白方面具有一定的效果，它能通過抑制黑色素調(diào)節(jié)器MITF的表達(dá)來抑制黑色素的形成。實(shí)施例1 MicroRNA-218對黑色素合成的抑制實(shí)驗(yàn)MicroRNA-218由上海吉瑪公司合成，其序列為SEQ ID N0.1所示。另設(shè)隨機(jī)序列為陰性對照，其序列為SEQ ID N0.2所示。采用鼠源的melan-a作為細(xì)胞模型。Melan_a細(xì)胞采用RPMI1640培養(yǎng)基加入5%體積百分?jǐn)?shù)的FBS和I %體積百分?jǐn)?shù)的雙抗在5%體積百分?jǐn)?shù)的C02，370C培養(yǎng)。將細(xì)胞按5 X IO5/孔的密度種12孔板,24小時(shí)后，按照Invitrogen公司的Lipofectamine2000的使用說明書，將microRNA-218及陰性對照轉(zhuǎn)染至melan-a內(nèi)，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)72h，收集樣本，分別檢測黑色素(melanin)的表達(dá)(見圖1中A所示)，酪氨酸酶的活性(見圖1中B所示)及酪胺酸酵素的組織學(xué)染色(見圖1中C所示)。由圖1可知，microRNA-218組比其他對照組的黑色表達(dá)量低，酪氨酸酶的活性也低。
實(shí)施例2 MicroRNA-218對MITF表達(dá)的抑制實(shí)驗(yàn)采用了 Western Blotting法檢測microRNA-218在黑色素細(xì)胞中中對MITF表達(dá)的抑制。具體步驟如下:l)microRNA-218及陰性對照轉(zhuǎn)染后，繼續(xù)培養(yǎng)3天。去掉上清，用PBS洗3次，力口入IOOul細(xì)胞裂解液，冰上裂解15min。收集蛋白，1，2000rpm離心IOmin以去掉碎片；2)測定蛋白濃度，按照IOug的蛋白上樣后，SDS-PAGE跑膠，轉(zhuǎn)膜后，在4%脫脂奶粉中封閉后，加入兔源的MITF的抗體孵育過夜，然后加入羊抗兔的二抗后，ECL顯色，壓片，結(jié)果圖2。由圖2可知， microRNA-218組比其他對照組的MITF表達(dá)量低。實(shí)施例3 MicroRNA在模擬人基地皮膚實(shí)驗(yàn)中對黑色素合成的抑制實(shí)驗(yàn)以穩(wěn)定表達(dá)microRNA-218的人的原代的黑色素細(xì)胞模擬人的體內(nèi)的皮膚結(jié)構(gòu)進(jìn)行3-D培養(yǎng)一個(gè)月，經(jīng)4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，切成5um薄片，放在TESPA包被的玻片上，染色液染色后，顯微鏡下拍照。結(jié)果見圖3。由圖3可知，miciORNA-218組比其他對照組的黑色素合成少，皮膚顏色較淺。因π .0ΚΝΑ-218能抑制MITF的表達(dá)，并且能明顯的在細(xì)胞模型上抑制黑色素的合成。所以，我們可以推斷microRNA-218在由黑色素引起的曬斑、黃褐斑、妊娠斑和黑變病等皮膚問題或疾病的美白方面具有一定的效果。MicroRNA-218可以用于制備單獨(dú)具有美白作用的藥物，也可以與其他藥物組合制備具有多種功效的藥物，如同時(shí)具備保水和美白功效的藥物。所制備的藥物可以含有一般藥物所需的輔助成份；所述藥物包括外用制劑、化妝品和護(hù)膚品。本發(fā)明調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物的使用方式包括但不限于皮膚涂抹的方式。以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物，其特征在于，所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物含有microRNA-218。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物，其特征在于，所述microRNA-218抑制黑色素的合成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物，其特征在于，所述microRNA-218通過抑制轉(zhuǎn)錄因子MITF的表達(dá)來抑制黑色素的合成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物，其特征在于，所述microRNA-218的序列為SEQ ID N0.1所示的序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物，其特征在于，所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物是一種皮膚外用制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物，其特征在于，所述調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的 藥物是化妝品或護(hù)膚品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種調(diào)控黑色素合成改善皮膚美白的藥物，所述皮膚美白藥物含有microRNA-218，所述microRNA-218抑制黑色素的合成。microRNA-218通過抑制轉(zhuǎn)錄因子MITF的表達(dá)來抑制黑色素的合成，從根本上達(dá)到美白效果，對曬斑、黃褐斑等色斑和黑變病也起到很好的美白效果。
文檔編號A61Q19/02GK103169987SQ201310089348
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月19日
發(fā)明者付衛(wèi)明, 張錦芳, 郭佳, 梁巖 申請人:廣州中國科學(xué)院先進(jìn)技術(shù)研究所