Ab-8大孔樹脂對花生殼黃酮粗提液動態(tài)吸附工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化合物技術(shù)領(lǐng)域，涉及AB-8大孔樹脂對花生殼黃酮粗提液動態(tài)吸附 工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國是農(nóng)業(yè)大國，盛產(chǎn)花生，在加工的過程中產(chǎn)生大量的花生殼，大部分作為燃料 燃燒處理，不僅造成了資源浪費，還產(chǎn)生了嚴重的環(huán)境污染問題?，F(xiàn)代研宄表明，花生殼中 含有木犀草素等黃酮類物質(zhì)，具有多種生物活性，在體內(nèi)具有改善微循環(huán)、改變體內(nèi)酶活 性、降血脂、降低膽固醇含量、抗自由基、抗氧化、增強免疫功能、抗菌抗炎等藥理作用。近幾 年來，從花生殼中提取的黃酮類化合物應用于保健食品或藥品行業(yè)，前景良好?；ㄉ鷼べY源 的深度開發(fā)利用，既解決了環(huán)境污染的問題，又提高了經(jīng)濟效益。
[0003] 花生屬豆科一年生草本科植物，果實外皮粗糙，呈黃色或褐色，多數(shù)帶有方格花 紋，在我國各省區(qū)均有種植，近年來總產(chǎn)量達到14, 500kt以上，已成為我國重要的經(jīng)濟作 物。花生脂肪含量在50%左右，蛋白質(zhì)含量達30%左右，是我國重要的油料作物，也是重要 的植物蛋白資源，經(jīng)過簡單加工投入使用，在加工過程中每年產(chǎn)生花生殼約4, 500kt。研宄 表明，花生殼主要成分是碳水化合物和粗纖維，以及，還含有少量的黃酮類化合物，以木犀 草素含量較高，是主要有效成分。
[0004] 目前對于花生的利用還不夠充分，其花生仁主要用來榨取食用油或者加工成副食 品，而花生殼的傳統(tǒng)處理方法是少部分用制作牲畜飼料和食用菌培養(yǎng)基，大部分當作燃料 或者直接作為廢棄物丟掉，造成了資源的閑置和浪費。隨著科技的進步，花生殼的利用也進 入到一個新的階段，有關(guān)研宄表明，花生殼具有較好的抗氧化、降血壓、降低膽固醇含量等 作用，以花生殼為原料生產(chǎn)的純中藥制劑"脈舒膠囊"已被用于治療高血脂癥。花生殼還可 以用來提取木犀草素等黃酮類物質(zhì)，作為純天然無污染的染色劑和抗氧化劑，已被廣泛用 于食品行業(yè)和保健品行業(yè)中。
[0005] 黃酮類化合物（flavonoids compound)是由植物光合作用產(chǎn)生的，廣泛存在于然 植物的根、莖、花、果實等中，是植物次生代謝產(chǎn)物，泛指兩個苯環(huán)通過中央三碳鏈相互連結(jié) 而成的一系列化合物，以黃酮（2-苯基色原酮）為母核，連有羥基、甲氧基、黃烷醇基等取代 基，常以與糖結(jié)合為苷的形式存在，有的以游離態(tài)形式存在。黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)復雜多 樣，數(shù)目種類繁多，表現(xiàn)出多種多樣的藥理活性，按結(jié)構(gòu)可分為黃酮類（Flavone)、黃烷醇類 (Flavanol)、黃燒酮類（Flavanone)、花色素類（Anthocynidia)等。黃酮類化合物存在形 式多為結(jié)晶性固體，少數(shù)為無定形粉末，由于分子中存在的交叉共軛體系以及助色團類型、 數(shù)目的不同，一般呈黃色或淺黃色。多數(shù)游離苷元難溶或不溶于水，易溶于乙醇、乙酸乙酯 等有機溶劑中及堿液中，由于分子中多有酚羥基，故一般顯酸性。常見的黃酮類化合物有蘆 丁、兒茶素、木犀草素、白藜蘆醇及其衍生物等。
[0006] 近年來隨著純化技術(shù)的發(fā)展，純度較高的黃酮物質(zhì)在醫(yī)藥、食品等行業(yè)中得到越 來越多的應用，開發(fā)了多種以黃酮類物質(zhì)為主要成分的產(chǎn)品。
[0007] (1)黃酮類化合物在醫(yī)藥行業(yè)中的應用
[0008] 在醫(yī)藥方面，根據(jù)其藥理作用，花生殼在民間被當作中草藥煎服用于治療哮喘、痰 多、肥胖等，其單方制劑"脈舒膠囊"用于治療高血脂癥。
[0009] (2)黃酮類化合物在食品工業(yè)中的應用
[0010] 黃酮類化合物因其天然無污染、色調(diào)鮮艷純正等特性已廣泛應用于食品行業(yè)中， 有關(guān)文獻表明，黃酮類化合物是一種天然抗氧化劑，可以防止食品的氧化變質(zhì)，在某些物質(zhì) 體系中其抗氧化效果優(yōu)于維生素 E ;同時也是一種天然色素，用作一些食品的著色劑。
[0011] (3)黃酮類化合物在化妝品行業(yè)中的應用
[0012] 黃酮類化合物具有美容、保濕、增白等功效，廣泛應用于化妝品行業(yè)中，作為天然 防曬劑、增白劑、皮膚調(diào)理劑、天然無毒染發(fā)劑和發(fā)用調(diào)理劑等已投產(chǎn)使用。皮膚中黑色素 含量是影響膚色的重要物質(zhì)，由酪氨酸酶催化產(chǎn)生，當黑色素含量足夠高時可產(chǎn)生黃褐斑。 而黃酮類物質(zhì)既能消除自由基又能抑制酪氨酸酶的活性，可減少黑色素的產(chǎn)生，使皮膚變 白。黃酮物質(zhì)具有生物活性，與皮膚中物質(zhì)相近，不同于化學制品，會大大減小對人體的刺 激，皮膚不易發(fā)生過敏反應。
[0013] 花生殼黃酮粗提液雜質(zhì)多、成分復雜，不符合醫(yī)學和食品行業(yè)標準，需要進一步精 制。目前國內(nèi)外關(guān)于花生殼黃酮純化工藝的研宄報道還相對較少，缺乏系統(tǒng)性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明的目的在于提供AB-8大孔樹脂對花生殼黃酮粗提液動態(tài)吸附工藝，解決 了現(xiàn)有方法純化黃酮提取物純化率低的問題。
[0015] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是按照以下步驟進行：
[0016] 步驟1 :將潔凈干燥的花生殼利用高效粉碎機進行粉碎，稱量25g花生殼粉放于三 角燒瓶內(nèi)；
[0017] 步驟2 :按料液比為1 : 30加入75 %乙醇750mL，然后放置于溫度為75 °C恒溫振 蕩器內(nèi)浸取2h;
[0018] 步驟3 :振蕩后將溶液進行真空抽濾，濾液放于離心機內(nèi)在1500r/min的條件下離 心 30min ;
[0019] 步驟4:取出離心后的上清液于燒杯內(nèi)，用保鮮膜封存，放置于冰箱內(nèi)進行冷藏沉 淀 24h ;
[0020] 步驟5 :冷藏沉淀后取出再放置于離心機內(nèi)在4000r/min的條件下離心30min ;
[0021] 步驟6 :離心后取出上清液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的旋轉(zhuǎn)瓶內(nèi)并加入蒸餾水，進行減壓加 熱蒸餾，直到乙醇全部蒸餾出來，將得到的黃酮提取液稀釋成上柱液所需濃度2. 0862mg/ ml ；
[0022] 步驟7 :AB-8大孔樹脂使用前的預處理：
[0023] (1)活化處理：先取適量的樹脂于三角燒瓶內(nèi)，加入95%乙醇進行浸泡，浸泡24h 后用蒸餾水在耐酸堿漏斗內(nèi)進行抽濾淋洗，并用蒸餾水進行清洗，洗至無乙醇味為止，再放 入三角燒瓶內(nèi)加入5%鹽酸進行浸泡，浸泡4h后再用耐酸漏斗進行抽濾清洗至中性，清洗 使用蒸餾水，酸洗后重新放入三角燒瓶內(nèi)加入5%的氫氧化鈉進行浸泡，浸泡4h后取出用 耐酸堿漏斗進行抽濾清洗，清洗同樣用蒸餾水，清洗至至中性后便完成了樹脂的活化；
[0024] (2)使用后的再生處理：將已經(jīng)使用過的樹脂放于在耐酸堿漏斗內(nèi)進行抽濾并用 用蒸餾水進行淋洗，洗至抽濾液為無色，取出樹脂至三角燒瓶內(nèi)，加70 %的乙醇進行45°C 恒溫振蕩2h，振蕩后進行過濾，將樹脂重新放置三角燒瓶內(nèi)重復上述步驟幾次，直至樹脂恢 復原來的顏色，然后進行蒸餾水淋洗，洗至無乙醇味為止，將樹脂重新放入三角燒瓶內(nèi)再加 5%鹽酸進行浸泡4h后再用蒸餾水淋洗至中性，然后再用5%的氫氧化鈉進行浸泡，浸泡4h 后取出使用蒸餾水淋洗至中性，完成樹脂的再生；
[0025] (3)裝柱：安裝好鐵架臺，將層析柱豎直固定，將活化或再生后的AB-8樹脂緩慢注 入層析柱內(nèi)，使用少量蒸餾水通柱，然后靜置一段時間使樹脂晾干；
[0026] 步驟8 :AB-8大孔樹脂對黃酮提取液進行吸附；吸附條件：上柱液濃度2. 0862mg/ ml，上柱液流速 100. 1907r/min，上柱液 ρΗ5· 0105。
[0027] 本發(fā)明的有益效果是提供了 ΑΒ-8大孔樹脂純化黃酮的最佳工藝，工藝吸附選擇 性好、洗脫率高、純化率高。
【附圖說明】
[0028] 圖1是蘆丁標準曲線示意圖；
[0029] 圖2是Box-Behnken試驗第2次結(jié)果示意圖；
[0030] 圖3是Box-Behnken試驗第3次結(jié)果示意圖；
[0031] 圖4是Box-Behnken試驗第4次結(jié)果示意圖；
[0032] 圖5是Box-Behnken試驗第5次結(jié)果示意圖；
[0033] 圖6是Box-Behnken試驗第6次結(jié)果示意圖；
[0034] 圖7是Box-Behnken試驗第7次結(jié)果示意圖；
[0035] 圖8是Box-Behnken試驗第8次結(jié)果示意圖；
[0036] 圖9是Box-Behnken試驗第9次結(jié)果示意圖；
[0037] 圖10是Box-Behnken試驗第10次結(jié)果示意圖；
[0038] 圖11是Box-Behnken試驗第11次結(jié)果示意圖；
[0039] 圖12是Box-Behnken試驗第12