專利名稱：用作肌苷－5'－一磷酸脫氫酶抑制劑的脲衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類新型的可抑制IMPDH的化合物。本發(fā)明還涉及含有這些化合物的藥物組合物。本發(fā)明的化合物和藥物組合物特別適用于抑制IMPDH酶的活性，因此可用作IMPDH介導(dǎo)的疾病的治療劑。本發(fā)明還涉及使用本發(fā)明的化合物及相關(guān)化合物抑制IMPDH活性的方法。
背景技術(shù)：
生物體內(nèi)核苷酸的合成是這些生物的細(xì)胞分裂和復(fù)制所必需的。哺乳動(dòng)物的核苷酸合成可通過兩種途徑從頭合成途徑或補(bǔ)救途徑。不同的細(xì)胞類型利用這些途徑的程度不同。
肌苷-5’-一磷酸脫氫酶(IMPDH；EC 1.1.1.205)是一種參與鳥嘌呤核苷酸的從頭合成途徑的酶。IMPDH催化肌苷-5’-一磷酸(IMP)向黃嘌呤核苷-5’-一磷酸(XMP)轉(zhuǎn)化的NAD-依賴型氧化反應(yīng)[Jackson R.C.等，自然(Nature),256,331-333頁，1975]。
IMPDH普遍存在于真核生物、細(xì)菌和原生動(dòng)物中[Y.Natsumeda&S.F.Carr,Ann.N.Y.Acad.,696,88-93頁(1993)]。原核生物形式與人類的酶有30-40％的序列是相同的。無論何種生物，該酶遵循有序的底物和輔因子結(jié)合和產(chǎn)物釋放的Bi-Bi反應(yīng)順序。首先，IMP與IMPDH結(jié)合。然后輔因子與NAD結(jié)合。接著還原的輔因子NADH從產(chǎn)物中釋放，然后釋放產(chǎn)物XMP[S.F.Carr等，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.),268,27286-90頁(1993)；E.W.Holmes等，生物化學(xué)生物物理學(xué)報(bào)(Biochim.Biophys.Acta),364,209-217頁(1974)]。該機(jī)制與其他大多數(shù)已知的NAD-依賴型脫氫酶不同，已知脫氫酶要么底物加入的順序是隨機(jī)的，要么需要在底物之前結(jié)合NAD。
已經(jīng)鑒定了兩種人IMPDH異構(gòu)體，命名為Ⅰ型和Ⅱ型，并已對(duì)其進(jìn)行了鑒定和測(cè)序[F.R.Collart和E.Huberman，生物化學(xué)雜志，263,15769-15772頁(1988)；Y.Natsumeda等，生物化學(xué)雜志，265,5292-5295頁(1990)]。每種均有514個(gè)氨基酸，它們有84％的序列是相同的。在溶液中，IMPDHⅠ型和Ⅱ型均形成活性四聚體，亞單位的分子量為56kDa[Y.Yamada等，生物化學(xué)(Biochemistry)，27,2737-2745(1988)]。
在B和T淋巴細(xì)胞中，鳥苷核苷酸的從頭合成特別重要，從而使IMPDH的活性特別重要。這些細(xì)胞依賴于從頭合成而不是補(bǔ)救途徑來合成啟動(dòng)應(yīng)答促細(xì)胞分裂素或抗原的增殖所必需的足夠水平的核苷酸[A.C.Allison等，柳葉刀(Lancet),Ⅱ,1179(1975)和A.C.Allison等，Ciba Found.Symp.,48,207(1977)]。因此，IMPDH是用于選擇性抑制免疫系統(tǒng)而不抑制其他細(xì)胞增殖的引人注目的靶點(diǎn)。
通過抑制各種酶包括例如鈣調(diào)磷酸酶(受環(huán)孢菌素和FK-506的抑制)；二氫乳清酸脫氫酶，與嘧啶生物合成有關(guān)的一種酶(受來氟米特和布喹那brequinar的抑制)；激酶FRAP(受雷怕霉素的抑制)；和熱休克蛋白hsp70(受脫氧精胍菌素的抑制)達(dá)到免疫抑制的目的。[參見B.D.Kahan,免疫學(xué)綜述(Immunological Reviews)，136,29-49頁(1993)；R.E.Morris,心肺移植雜志(The Journal of Heart andLung Transplantation)12(6)S275-S286(1993)]。
已知一些IMPDH抑制劑。美國(guó)專利5380879和5444072以及PCT公開WO 94/01105和WO 94/12184描述了麥考酚酸(MPA)和它的一些其衍生物可作為強(qiáng)的、非競(jìng)爭(zhēng)性的可逆的人Ⅰ型(Ki=33nM)和Ⅱ型(Ki=9nM)IMPDH抑制劑。已經(jīng)表明MPA可阻斷B和T細(xì)胞對(duì)促細(xì)胞分裂素或抗原的反應(yīng)[A.C.Allison等，Ann.N.Y.Acad.Sci.,696,63,(1993)]。

MPA
免疫抑制劑如MPA可用作治療移植排異和自身免疫性疾病的藥物。[R.E.Morris,Kidndy Intl.,49,Suppl.,53,S-26(1996)]。但是，MPA的藥理學(xué)特性不理想，例如胃腸道毒性和生物利用度差。[L.M.Shaw等，治療藥物監(jiān)測(cè)(Therapeutic Drug Monitoring),17,690-699頁(1995)]。
核苷類似物如噻唑呋林和利巴韋林以及咪唑立賓也抑制IMPDH[L.Hedstrom等，生物化學(xué)，29,849-854頁(1990)]。這些化合物是IMPDH的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，其缺點(diǎn)是對(duì)該酶沒有特異性。
最近發(fā)現(xiàn)麥考酚酸mofetil(在體內(nèi)快速釋放游離MPA的前藥)可在腎移植后抑制急性腎同種異體排異反應(yīng)。[L.M.Shaw等，治療藥物監(jiān)測(cè)，17,690-699頁(1995)；H.W.Sollinger,移植(Transplantation),60,225-232頁(1995)]。但是，一些臨床觀察結(jié)果限制了這種藥物的治療潛力。[L.M.Shaw等，治療藥物監(jiān)測(cè)，17,690-699頁(1995)]。MPA在體內(nèi)被迅速代謝為無活性的葡糖苷酸。[A.C,Allison和E.M.Eugui,免疫學(xué)綜述，136,5-28頁(1993)l。然后葡糖苷酸經(jīng)歷腸肝循環(huán)，造成MPA在胃腸道中的積累，在胃腸道中，MPA不能發(fā)揮其對(duì)免疫系統(tǒng)的IMPDH抑制活性。這樣大大降低了藥物的體內(nèi)效力，而增加了不利的胃腸副作用。
還知道IMPDH在其他代謝事件中也起作用。在快速增殖的人白血病細(xì)胞系和其他腫瘤細(xì)胞系中已經(jīng)觀察到IMPDH活性的增加，這表明IMPDH可以作為抗癌以及免疫抑制化療的靶點(diǎn)[M.Nagai等，癌癥研究(Cancer Res.),51,3886-3890頁(1991)]。還證實(shí)IMPDH在平滑肌細(xì)胞的增殖中也起作用，這說明IMPDH抑制劑如MPA或雷怕霉素也可用于抑制再狹窄或其他過度增殖性血管疾病[C.R.Gregory等，移植，59,655-61頁(1995)；PCT公開WO 94/12184和PCT公開WO94/01105]。
此外，已證實(shí)在某些病毒細(xì)胞系中，IMPDH在病毒的復(fù)制中起作用。[S.F.Carr，生物化學(xué)雜志，268,27286-27290(1993)]。與淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞系相似，這意味著對(duì)于病毒復(fù)制過程非常重要的是從頭途徑而不是補(bǔ)救途徑。
目前正在評(píng)估IMPDH抑制劑利巴韋林對(duì)于治療丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)感染和疾病的效果。利巴韋林可增強(qiáng)HCV和HBV治療中干擾素的持續(xù)效力。但是，由于利巴韋林在單獨(dú)治療中缺乏持續(xù)的效果及其廣泛的細(xì)胞毒性使其治療潛力受到了限制。
因此，仍需要藥理學(xué)特性改進(jìn)了的有效的IMPDH抑制劑。所述抑制劑應(yīng)具有作為免疫抑制劑、抗癌劑、抗血管過度增殖劑、抗炎劑、抗真菌劑、抗牛皮癬和抗病毒劑的治療潛力。
發(fā)明概述本發(fā)明提供可用作IMPDH抑制劑的化合物及其可藥用的衍生物。這些化合物可單獨(dú)使用或與其它治療或預(yù)防劑如抗病毒劑、抗炎劑、抗生素和免疫抑制劑聯(lián)用，以治療或預(yù)防移植排斥和自身免疫疾病。此外，當(dāng)這些化合物單獨(dú)使用或與其它藥物聯(lián)用時(shí)，還可用作抗病毒劑、抗腫瘤劑、抗癌劑、抗炎劑、抗真菌劑、抗牛皮癬免疫抑制化療劑和再狹窄治療劑。
本發(fā)明還提供含有本發(fā)明化合物的藥物組合物，以及含有IMPDH化合物和免疫抑制劑的多成分組合物。本發(fā)明還提供使用本發(fā)明的化合物以及其它相關(guān)化合物抑制IMPDH的方法。
本發(fā)明的化合物以及本發(fā)明方法中所用的化合物表現(xiàn)出與MPA及其衍生物不同的代謝方式。由于這種差異，所使用的本發(fā)明的方法及化合物在治療IMPDH介導(dǎo)的疾病時(shí)具有優(yōu)越之處。這些優(yōu)點(diǎn)包括，增加了總體治療效果而減少了不利的副作用。
發(fā)明詳述為了更全面地理解所述的本發(fā)明，提供如下詳細(xì)描述。在描述中，使用如下的縮寫符號(hào) 試劑或片段Ac乙?；鵐e甲基Et乙基Bn芐基CDI 羰基二咪唑DIEA 異丙基乙基胺DMAP 二甲氨基吡啶DMF 二甲基甲酰胺DMSO 二甲亞砜EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽EtOAc 酸乙酯THF 四氫呋喃文中使用如下術(shù)語若無相反說明，文中所用術(shù)語“-SO2-”和“-S(O)2-”是指砜或砜的衍生物(即兩個(gè)基團(tuán)均與S連接)，而不是亞磺酸酯。
術(shù)語“鹵素”指氟、氯、溴或碘基團(tuán)。
術(shù)語“免疫抑制劑”指具有免疫反應(yīng)抑制活性的化合物或藥物。所述試劑的例子包括環(huán)孢菌素A、FK506、雷怕霉素、來氟米特、脫氧精胍菌素、潑尼松、硫唑嘌呤、麥考酚酸mofetil、OKT3、ATAG、干擾素和咪唑立賓。
術(shù)語“干擾素”指干擾素的所有形式，包括但不僅限于α、β和γ型干擾素。
IMPDH介導(dǎo)的疾病是指IMPDH酶在該疾病的代謝途徑中起調(diào)節(jié)作用的所有疾病。IMPDH介導(dǎo)的疾病的例子包括移植排斥和自身免疫病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、少年糖尿病、哮喘和炎性腸疾病、以及炎癥性疾病、癌癥、病毒復(fù)制疾病和血管疾病。
例如，本發(fā)明的化合物、組合物和使用這些化合物和組合物的方法可用于治療移植排斥(例如，腎、肝、心臟、肺、胰(胰島細(xì)胞)、骨髓、角膜、小腸和皮膚同種異體移植物以及心臟瓣膜異種移植物)和自身免疫病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、少年糖尿病、哮喘、炎性腸疾病(節(jié)段性回腸炎、潰瘍結(jié)腸炎)、狼瘡、糖尿病、重癥肌無力、牛皮癬、皮炎、濕疹、皮脂溢、肺炎、眼色素層炎、肝炎、突眼性甲狀腺腫、慢性甲狀腺炎、貝切特氏或斯耶格倫氏綜合征(干眼/口)、惡性或免疫溶血性貧血、自發(fā)性腎上腺功能不足，多腺體自身免疫綜合征、腎小球腎炎、硬皮病、扁平苔癬、viteligo(皮膚失色素)、自身免疫甲狀腺炎、肺泡炎、炎癥性疾病如骨關(guān)節(jié)炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、哮喘和成人呼吸窘迫綜合征，以及用于治療癌癥和腫瘤如實(shí)體瘤、淋巴瘤和白血病，血管疾病如再狹窄、狹窄和動(dòng)脈粥樣硬化，DNA和RNA病毒復(fù)制疾病如逆轉(zhuǎn)錄病毒疾病和皰疹。
此外，已知IMPDH酶還存在于細(xì)菌中，從而可以調(diào)節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)。因此，將本文所述的IMPDH抑制劑化合物、組合物和方法單獨(dú)使用或與其它抗生素聯(lián)用可用于治療或預(yù)防細(xì)菌感染。
本文所用的術(shù)語“治療”是指減輕患者具體疾病的癥狀或改善與具體疾病有關(guān)的可確定量度。本文所用的術(shù)語“患者”指哺乳動(dòng)物，包括人。
術(shù)語“硫代氨基甲酸酯”指含有功能基N-SO2-O的化合物。
術(shù)語“HBV”、“HCV”和“HGV”分別指乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和庚型肝炎病毒。
根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供在哺乳動(dòng)物中抑制IMPDH活性的方法，包括向所述哺乳動(dòng)物施用下式化合物

其中A選自(C1-C6)直鏈或支鏈烷基，或(C2-C6)直鏈或支鏈鏈烯基或炔基；并且A可選擇性地帶有最多2個(gè)取代基，其中如果存在的話，第一種所述取代基選自R1或R3，如果存在的話，第二種所述取代基是R1；B是飽和、不飽和或部分飽和的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系，所述環(huán)系選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子并且選自如下結(jié)構(gòu)式

其中各X是滿足適宜價(jià)鍵所需的氫原子數(shù)；并且B選擇性地帶有最多3個(gè)取代基，其中如果存在的話，第一種所述取代基選自R1、R2、R4或R5，如果存在的話，第二種所述取代基選自R1或R4，如果存在的話，第三種所述取代基是R1；D選自C(O)、C(S)、或S(O)2；其中各R1彼此獨(dú)立地選自1,2-亞甲二氧基、1,2-亞乙二氧基、R6或(CH2)n-Y；其中n是0,1或2；Y選自鹵素、CN、NO2、CF3、OCF3、OH、SR6、S(O)R6、SO2R6、NH2、NHR6、N(R6)2、NR6R8、COOH、COOR6或OR6；各R2彼此獨(dú)立地選自(C1-C4)直鏈或支鏈烷基，或(C2-C4)直鏈或支鏈鏈烯基或炔基；并且R2可選擇性地帶有最多2個(gè)取代基，其中如果存在的話，第一種所述取代基選自R1、4和R5，如果存在的話，第二種所述取代基是R1；R3選自每個(gè)環(huán)由5-6個(gè)環(huán)原子組成的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系，其中所述環(huán)系選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子，其中與任何所述的N、O或S雜原子相鄰的CH2選擇性地被C(O)取代；并且各R3選擇性地帶有最多3個(gè)取代基，其中如果存在的話，第一種所述取代基選自R1、R2、R4或R5，如果存在的話，第二種所述取代基選自R1或R4，如果存在的話，第三種所述取代基是R1；各R4彼此獨(dú)立地選自O(shè)R5、OC(O)R6,OC(O)R5,OC(O)OR6,OC(O)OR5,OC(O)N(R6)2,OP(O)(OR6)2,SR6,SR5,S(O)R6,S(O)R5,SO2R6,SO2R5,SO2N(R6)2,SO2NR5R6,SO3R6,C(O)R5,C(O)OR5,C(O)R6,C(O)OR6,NC(O)C(O)R6,NC(O)C(O)R5,NC(O)C(O)OR6,NC(O)C(O)N(R6)2,C(O)N(R6)2,C(O)N(OR6)R6,C(O)N(OR6)R5,C(NOR6)R6,C(NOR6)R5,N(R6)2,NR6C(O)R1,NR6C(O)R6,NR6C(O)R5,NR6C(O)OR6,NR6C(O)OR5,NR6C(O)N(R6)2,NR6C(O)NR5R6,NR6SO2R6,NR6SO2R5,NR6SO2N(R6)2,NR6SO2NR5R6,N(OR6)R6,N(OR6)R5,P(O)(OR6)N(R6)2,和P(O)(OR6)2；各R5是每個(gè)環(huán)由5-6個(gè)環(huán)原子組成的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系，其中所述環(huán)系選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子，其中與所述N、O或S相鄰的CH2可被C(O)取代；各R5選擇性地帶有最多3個(gè)取代基，如果存在的話，各取代基均是R1；各R6彼此獨(dú)立地選自H、(C1-C4)直鏈或支鏈烷基，或(C2-C4)直鏈或支鏈鏈烯基；并且各R6可選擇性地帶有取代基R7；R7是每個(gè)環(huán)由5-6個(gè)環(huán)原子組成的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系，其中所述環(huán)系選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子，其中與所述N、O或S相鄰的CH2可被C(O)取代；各R7選擇性地帶有最多2個(gè)取代基，所述取代基彼此獨(dú)立地選自H、(C1-C4)直鏈或支鏈烷基，或(C2-C4)直鏈或支鏈鏈烯基、1,2-亞甲二氧基、1,2-亞乙二氧基或(CH2)n-Z；其中n是0,1或2；Z選自鹵素、CN、NO2、CF3、OCF3、OH、S(C1-C4)-烷基、SO(C1-C4)-烷基、SO2(C1-C4)-烷基、NH2、NH(C1-C4)-烷基、N((C1-C4)-烷基)2、N((C1-C4)-烷基)R8、COOH、C(O)O(C1-C4)-烷基或O(C1-C4)-烷基；并且R8是氨基保護(hù)基；其中所有A、R2或R6中的所有碳原子均可選擇性地被O、S、SO、SO2、NH或N(C1-C4)-烷基代替。
術(shù)語“取代的”指將給定結(jié)構(gòu)中的一個(gè)或多個(gè)氫用選自特定組的基團(tuán)代替。當(dāng)有一個(gè)以上的氫可被選自相同特定組的取代基代替時(shí)，這些取代基在每一位置上均可以相同或不同。
術(shù)語“每個(gè)環(huán)由5-6個(gè)環(huán)原子組成的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系”指5或6元的單環(huán)和8、9和10元的雙環(huán)結(jié)構(gòu)，其中，各環(huán)上的每個(gè)鍵均可具有化學(xué)上可行的任何程度的飽和度。當(dāng)這些結(jié)構(gòu)含有取代基時(shí)，除非另有說明，這些取代基可位于環(huán)系的任何位置上。
如上所述，所述環(huán)系可選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子。這些雜原子可代替這些環(huán)系中的任何碳原子，只要形成的化合物是化學(xué)穩(wěn)定的即可。
術(shù)語“其中各X是滿足適宜價(jià)鍵所需的氫原子數(shù)”是指X是0、1或2個(gè)氫原子，這取決于X所鍵合的環(huán)原子(C、N、O或S)的特性、兩個(gè)相鄰環(huán)原子的特性以及X所鍵合的環(huán)原子和兩個(gè)相鄰環(huán)原子之間的鍵的性質(zhì)(單鍵、雙鍵或三鍵)。事實(shí)上，該定義從X中排除了任何不是氫的取代基。
術(shù)語“氨基保護(hù)基”是指可連接到氮原子上的適宜化學(xué)基團(tuán)。術(shù)語“保護(hù)的”是指指定的功能基與適宜的化學(xué)基團(tuán)(保護(hù)基)連接時(shí)的情況。適宜的氨基保護(hù)基和保護(hù)基的例子記載于T.W.Greene和P.G.M.Wuts,有機(jī)合成中的保護(hù)基，第2版(John Wiley and Sons(1991))；L.Fieser和M.Fieser,有機(jī)合成中的Fieser Fieser’s試劑(John Wileyand Sons(1994))；L.Paquette編，有機(jī)合成試劑大全(John Wiley andSons(1995))并在本發(fā)明所用的某些具體化合物中做了舉例說明。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了在哺乳動(dòng)物中抑制IMPDH的方法，該方法包括施用式(Ⅱ)的化合物

其中的B和D如上所定義。
更優(yōu)選在使用式(Ⅰ)或(Ⅱ)化合物的方法中，組分B帶有0-2個(gè)取代基。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了使用式(Ⅰ)或(Ⅱ)化合物在哺乳動(dòng)物中抑制IMPDH的方法，其中的B帶有至少一個(gè)選自由R5所定義的基團(tuán)的取代基。優(yōu)選在該實(shí)施方案中，B是單環(huán)芳環(huán)并且?guī)в兄辽僖粋€(gè)同樣也是單環(huán)芳環(huán)的取代基。
本發(fā)明還提供可用于抑制IMPDH的化合物。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，IMPDH抑制劑化合物具有結(jié)構(gòu)式(Ⅲ)

A、D和B如上所定義；E是O或S；G和G’彼此獨(dú)立地選自R1或H。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供結(jié)構(gòu)式(Ⅳ)的化合物

其中B、D、E、G和G’如上所定義，B’是飽和、不飽和或部分飽和的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系，所述環(huán)系選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子并且選自如下結(jié)構(gòu)式

其中各X是滿足適宜價(jià)鍵所需的氫原子數(shù)；并且B’選擇性地帶有最多3個(gè)取代基，其中如果存在的話，第一種所述取代基選自R1、R2、R4或R5，如果存在的話，第二種所述取代基選自R1或R4，如果存在的話，第三種所述取代基是R1；其中，X、R1、R4、R4和R5如上所定義。
不包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的是其中的B和B’同時(shí)為未取代苯基的式(Ⅳ)化合物和其中的B是未取代的苯基并且B’是三氯-、三溴或三碘-苯基的化合物。
優(yōu)選在式(Ⅳ)化合物中，B和B’是各帶有至少一個(gè)取代基的苯基。這些化合物可用結(jié)構(gòu)式(Ⅴ)表示

其中的K選自R1或R4；J選自R1、R2或R4。
優(yōu)選的式(Ⅴ)化合物是，其中D是-C(O)-的化合物、其中的E是氧的化合物；其中的J是NR6C(O)R5或NR6C(O)R6、優(yōu)選NR6C(O)R6、更優(yōu)選N(CH3)C(O)R6的化合物；其中的K是(CH2)n-Y、優(yōu)選OCH3(即n是0,Y是OR6,R6是CH3)的化合物；以及其中的G是氫的化合物。更優(yōu)選如下式(Ⅴ)化合物，其中E是氧；J是NR6C(O)R5或NR6C(O)R6；K是(CH2)n-Y；G是氫。更加優(yōu)選如下式(Ⅴ)化合物，其中D是-C(O)-；E是氧；J是NR6C(O)R6；K是OCH3；G是氫。更優(yōu)選在這些化合物中，J是N(CH3)C(O)R6。
另外優(yōu)選的化合物是如下式Ⅴ化合物，其中的J是R2的化合物、其中的D是-C(O)-的化合物、其中的E是氧的化合物、其中的J是被R4取代的R2的化合物，優(yōu)選其中的R4是NR6C(O)OR5或NR6C(O)OR6，更優(yōu)選其中的R4是NR6C(O)OR5，更優(yōu)選其中的R4是NHC(O)OR5，首選其中的R4是NHC(O)O-3-四氫呋喃基；其中的K是(CH2)n-Y的化合物，優(yōu)選其中的K是OCH3；其中的G是氫的化合物；以及其中D是-C(O)-；E是氧；
K是OCH3；G是氫的化合物?；蛘?，其它優(yōu)選的化合物包括式Ⅵ的化合物

其中的K是OCH3的式Ⅵ化合物，以及其中的G是氫的式Ⅵ化合物。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是式Ⅴ化合物，其中的K選自R1或R4；J選自R1、R2、R4和R9，其中R1、R2和R4如上所定義，R9彼此獨(dú)立地選自(C1-C4)直鏈或支鏈烷基，或(C2-C4)直鏈或支鏈鏈烯基；并且各R9選擇性地帶有最多2個(gè)選自NR6C(O)OR10的取代基，其中的R6如上所定義，R10選自(C1-C5)直鏈或支鏈烷基并且?guī)в凶疃?個(gè)選自NR6R8、SR6、SO2R6、-(CH2)n-SR6、-(CH2)n-OR6和OR6的取代基，其中n,R6和R8如上所定義。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，優(yōu)選的化合物是式Ⅶ化合物

其中的K選自R1和R4；A、D、R1和R4彼此獨(dú)立地如權(quán)利要求1所定義。
更優(yōu)選的式Ⅶ化合物是，其中D是-C(O)-的化合物；其中的A是被1-2個(gè)選自NR6C(O)R6、NR6C(O)R5、CH2NR6C(O)R6和CH2NR6C(O)R5的取代基取代的單環(huán)芳環(huán)的化合物；其中的A是被1-2個(gè)選自CH2NR6C(O)OR6和CH2NR6C(O)OR5的取代基取代的單環(huán)芳環(huán)的化合物；其中的A是被CH2NR6C(O)OR5取代的單環(huán)芳環(huán)的化合物；其中的A是被CH2NHC(O)OR5取代的單環(huán)芳環(huán)的化合物；其中的A是被CH2NHC(O)O-3-四氫呋喃基取代的單環(huán)芳環(huán)的化合物；其中的K是(CH2)n-Y的化合物；其中的K是OCH3的化合物；以及其中的A是被CH2NHC(O)O-3-四氫呋喃基取代的單環(huán)芳環(huán)并且K是OCH3的化合物。
或者，本發(fā)明其它優(yōu)選的化合物包括式Ⅷ化合物

其中D和K如權(quán)利要求1所定義。
另一個(gè)實(shí)施方案是式Ⅸ的化合物

其中D選自C(O)、C(S)和S(O)2；K選自R1和R4；J選自R1、R2和R4。
更優(yōu)選的式Ⅸ化合物包括，其中D是-C(O)-的化合物；其中的J是NR6C(O)R5或NR6C(O)R6的化合物；其中的J是NR6C(O)R6的化合物；其中的J是N(CH3)C(O)R6的化合物；其中的J是N(CH3)C(O)CH3的化合物；其中的K是(CH2)n-Y的化合物；其中的K是OCH3的化合物；以及其中的K是OCH3并且J是N(CH3)C(O)CH3的化合物。
表ⅠA、ⅠB和ⅡB列出了本發(fā)明的各種優(yōu)選的化合物和用于本發(fā)明的組合物和方法的優(yōu)選化合物。表ⅡA列出了用于本發(fā)明方法的優(yōu)選化合物。
表ⅠA


表ⅠB






表ⅠC

<



表ⅡA


<p>表ⅡB


表ⅡA中的化合物相當(dāng)于所述B部分之一是帶有兩個(gè)取代基Q1和Q2的苯基的式(Ⅱ)化合物。根據(jù)式(Ⅱ):
Q1選自R1、R2、R4或R5；Q2選自R1或R4。
本發(fā)明的化合物可含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱碳原子，因此可以是外消旋體和外消旋混合物、單一的對(duì)映體、非對(duì)映體混合物和單一的非對(duì)映體。這些化合物的所有這些異構(gòu)體形式均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。每個(gè)手性碳原子均可以是R或S構(gòu)型。
本發(fā)明所預(yù)期的取代基和變量的組合僅限于可形成穩(wěn)定化合物的那些。本文所用的術(shù)語“穩(wěn)定”是指該化合物具有足夠的穩(wěn)定性，從而可以進(jìn)行生產(chǎn)并且能夠使化合物的完整性保持足夠長(zhǎng)的時(shí)間以用于本文所述的目的(例如向哺乳動(dòng)物進(jìn)行治療或預(yù)防性給藥或用于親和色譜)。通常，所述化合物在40℃或更低的溫度下、在不存在水分或其它化學(xué)反應(yīng)性條件下可以穩(wěn)定至少一周。
本文所用的本發(fā)明的化合物、包括式Ⅰ-Ⅸ的化合物，定義為包括該化合物的可藥用衍生物或前藥?！翱伤幱醚苌锘蚯八帯笔侵冈谙蚴┯脤?duì)象給藥時(shí)能夠提供(直接或間接地)本發(fā)明化合物的所有可藥用的鹽、酯、酯的鹽或本發(fā)明化合物的其它衍生物。特別適宜的衍生物和前藥是，相對(duì)于母體物質(zhì)而言，當(dāng)向哺乳動(dòng)物給藥時(shí)可以增加本發(fā)明化合物的生物利用度的那些(例如，可以使口服給藥的化合物更容易被吸收到血液中)，或可以促進(jìn)母體化合物進(jìn)入生物學(xué)區(qū)室(如大腦或淋巴系統(tǒng))的那些。優(yōu)選的前藥包括在式Ⅰ-Ⅸ的結(jié)構(gòu)上帶有可增加水溶性或促進(jìn)經(jīng)腸膜主動(dòng)運(yùn)輸?shù)幕鶊F(tuán)的衍生物。
本發(fā)明化合物的可藥用鹽包括從可藥用無機(jī)和有機(jī)酸和堿衍生的鹽。適宜的酸加成鹽的例子包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、甘醇酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。其它酸，例如草酸，盡管它們本身不是可藥用的，但可用于制備可在制備本發(fā)明的化合物及其可藥用酸加成鹽中用作中間體的鹽。
從適宜的堿衍生的鹽包括堿金屬(例如鈉)、堿土金屬(例如鎂)、銨和N-(C1-C4烷基)4+鹽。本發(fā)明還包括本文所公開化合物的所有含堿性氮的基團(tuán)的季銨化。
本發(fā)明的化合物可通過常規(guī)技術(shù)合成。有利的是，可以從易得的原料方便地合成這些化合物。
通常，式(Ⅰ)-(Ⅸ)化合物可通過總合成流程

圖1-3中所述的方法方便地制得。
在總合成流程圖1(見下)中，將X-取代的苯胺與Y-取代的異氰酸苯酯在常規(guī)條件下反應(yīng)生產(chǎn)所需的脲。在該方法中，X和Y可以是位于芳環(huán)任何位置上的一個(gè)或多個(gè)彼此獨(dú)立的取代基(或其適當(dāng)保護(hù)了的改變形式)，所述取代基是例如上述式Ⅰ-Ⅸ的化合物中列舉的環(huán)取代基?？偤铣闪鞒虉D1

總合成流程圖2

總合成流程圖3

在總合成流程圖2(見上)中，將取代的苯甲醛(此處為2-甲氧基-4-硝基取代的)用甲苯磺?；谆惽杌?tosylmethylisocyanide)處理生成噁唑，然后將得到的噁唑通過催化氫化還原得到所需的苯胺。將該苯胺與異氰酸酯(此處為異氰酸間甲苯酯)在常規(guī)條件下反應(yīng)生成所需的脲。
總合成流程圖3(見上)描述了另一種合成途徑。將取代的苯甲醛(此處為4-硝基取代的)如總合成流程圖2中所示轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的噁唑基苯胺。將該苯胺用取代的苯甲酸(此處為3-甲基取代的)和羧酸活化試劑如二苯基膦酰基疊氮化物在常規(guī)條件下處理生成所需的脲。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，上述合成流程圖并非想要列舉可以合成本申請(qǐng)所描述和所要求化合物的所有方法。其它方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。此外，可將上述各種合成步驟以不同的順序進(jìn)行得到所需的化合物。
可通過引入適宜的功能基對(duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)行修飾，以增強(qiáng)選擇性的生物活性。所述修飾是本領(lǐng)域已知的，包括促進(jìn)向給定生物學(xué)區(qū)室(例如血液、淋巴系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng))內(nèi)的生物學(xué)滲透、增加口服利用度、增加溶解度從而可以注射給藥、改變代謝和改變排泄速率。
本發(fā)明的新化合物是極佳的IMPDH配體。因此，這些化合物能夠靶向并抑制IMPDH酶?？赏ㄟ^各種方法測(cè)定抑制作用，所述方法包括，例如IMP脫氫酶HPLC試驗(yàn)(測(cè)定酶催化的從IMP和NAD生成XMP和NADH的量)和IMP脫氫酶分光光度分析(測(cè)定酶催化的從NAD生成NADH的量)。[參見C.Montero等，Clinica Chimica Acta,238,169-178頁(1995)]。
本發(fā)明的藥物組合物含有式(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅶ)化合物或其可藥用鹽；另一種選自免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、抗炎劑、抗真菌劑、抗生素或抗血管過度增殖化合物的藥物；和可藥用載體、輔劑或賦形劑。本發(fā)明的另一種組合物含有式(Ⅲ)-(Ⅸ)化合物或其可藥用鹽；可藥用載體、輔劑或賦形劑。該組合物可選擇性地含有一種選自免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、抗炎劑、抗真菌劑、抗生素或抗血管過度增殖化合物的藥物。
術(shù)語“可藥用載體或輔劑”指可與本發(fā)明的化合物一起施用給患者的載體或輔劑，所述載體或輔劑不會(huì)破壞本發(fā)明化合物的藥理學(xué)活性并且當(dāng)以足以傳遞治療量的化合物的劑量施用時(shí)是無毒的。
可用于本發(fā)明藥物組合物的可藥用載體、輔劑和賦形劑包括但不限于，離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、自乳化藥物釋放系統(tǒng)(SEDDS)如dα-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯、用于藥物劑型的表面活性劑如吐溫或其它類似的聚合物給藥基質(zhì)、血清蛋白如人血清白蛋白、緩沖物質(zhì)如磷酸鹽、甘油、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)，例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態(tài)二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素衍生物、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。還優(yōu)選使用環(huán)糊精如α-、β-和γ-環(huán)糊精或化學(xué)修飾的衍生物如羥烷基環(huán)糊精、包括2-和3-羥丙基-β-環(huán)糊精或其它增溶的衍生物，以促進(jìn)式Ⅰ-Ⅸ混合物的傳遞。
本發(fā)明的藥物組合物可通過口服、胃腸外、吸入噴霧、局部、直腸、鼻內(nèi)、頰部、陰道內(nèi)給藥或通過植入藥物儲(chǔ)庫進(jìn)行給藥。優(yōu)選通過口服或注射給藥。本發(fā)明的藥物組合物可含有常規(guī)的無毒可藥用載體、輔劑或賦形劑。在某些情況下，可用可藥用的酸、堿或緩沖劑調(diào)節(jié)制劑的pH值以提高所配制化合物或其給藥形式的溶解度。本文所用的術(shù)語“胃腸外”包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、損害部位內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸液的方法。
該藥物組合物可以是無菌可注射制劑的形式，例如無菌可注射含水或含油混懸液。所述混懸液可根據(jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)用適宜的分散劑或濕潤(rùn)劑(例如吐溫80)和懸浮劑進(jìn)行配制。無菌可注射制劑還可以是在無毒、可胃腸外用的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或混懸液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可接受的賦形劑和溶劑中，可以使用的是甘露醇、水、Ringer氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，還常用無菌的固定油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可使用任何品牌的固定油，包括合成的甘油單酯或二酯。在制備可注射制劑時(shí)，可使用脂肪酸例如油酸及其甘油酯衍生物作為天然的可藥用油，例如橄欖油或蓖麻油，特別是其聚氧乙基化的形式。這些油溶液或混懸液中還可含有長(zhǎng)鏈醇稀釋劑或分散劑(例如Pharmacopeia Helvetica,Ph.Helv.中所記載的那些)或類似的醇，或羧甲基纖維素或在配制可藥用劑型如乳液或混懸液中常用的類似分散劑。為了配制制劑，還可使用其它常用的表面活性劑如吐溫或Spans和/或在生產(chǎn)固體、液體或其它劑型中常用的其它類似的乳化劑或生物利用度促進(jìn)劑。
可將本發(fā)明的藥物組合物以任何可以口服的劑型進(jìn)行口服給藥，所述劑型包括但不限于，膠囊、片劑、乳劑和含水混懸液、分散體和溶液。就口服使用的片劑而言，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還加入潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂。對(duì)于口服給藥的膠囊形式，常用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)使用含水混懸液和/或乳液進(jìn)行口服給藥時(shí)，可將活性成分同乳化劑和/或懸浮劑混合懸浮或溶解在油相中。如需要，還可加入甜味劑和/或矯味劑和/或著色劑。
還可以將本發(fā)明的藥物組合物以栓劑的形式進(jìn)行直腸給藥?？赏ㄟ^將本發(fā)明的化合物與適宜的無刺激性賦形劑混合來這些組合物，所述賦形劑在室溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，從而可以在直腸內(nèi)融化釋放出活性成分。所述材料包括但不限于，可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。
本發(fā)明藥物組合物的局部給藥特別適用于當(dāng)所需治療涉及易于通過局部給藥的部位或器官時(shí)的情況。為了對(duì)皮膚局部應(yīng)用，應(yīng)用含有懸浮或溶解于載體中的活性成分的適宜軟膏配制藥物組合物。用于本發(fā)明化合物局部給藥的載體包括但不限于，礦物油、液體石蠟、白蠟、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水?；蛘?，可用含有懸浮或溶解于載體中的活性成分的適宜洗劑或霜?jiǎng)┖瓦m宜的乳化劑來配制藥物組合物。適宜的載體包括但不限于，礦物油、脫水山梨醇單硬脂酸酯、多乙氧基醚60、鯨蠟基酯類的蠟、鯨蠟基硬脂基(cetearyl)醇、2-辛基十二烷醇、芐醇和水。本發(fā)明的藥物組合物還可以通過直腸栓劑或以適宜的灌腸制劑的形式局部施用到下部腸道中。本發(fā)明還包括局部透皮貼劑。
本發(fā)明的藥物組合物可通過鼻內(nèi)氣霧劑或通過吸入給藥。這些制劑可根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域熟知的方法制備，并可制成在鹽水中的溶液的形式，制備時(shí)使用芐醇或其它適宜的防腐劑、提高生物利用度的吸收促進(jìn)劑、氟化碳和/或其它本領(lǐng)域已知的增溶劑或分散劑。
在對(duì)IMPDH介導(dǎo)的疾病進(jìn)行預(yù)防和治療的單獨(dú)治療和/或聯(lián)合治療中，本文所述的IMPDH抑制劑化合物的劑量為約0.01-約100mg/kg體重/天，優(yōu)選約0.5-75mg/kg體重/天。通常，本發(fā)明的藥物組合物可以每日給藥約1至約5次，或者以連續(xù)輸注的形式給藥。所述給藥可用作慢性或急性治療。可與載體材料混合以生產(chǎn)單劑量形式的活性成分的量取決于所治療的宿主和具體的給藥方式。一般的制劑含有約5％至約95％活性化合物(w/w)。這些制劑優(yōu)選含有約20％至約80％活性化合物。
當(dāng)本發(fā)明的組合物包括式(Ⅰ)-(Ⅸ)的IMPDH抑制劑與一種或多種其它治療或預(yù)防劑聯(lián)合時(shí)，IMPDH抑制劑和聯(lián)用藥物的劑量水平均應(yīng)在單獨(dú)治療方案所用的正常給藥劑量的約10-100％之間，更優(yōu)選在約10-80％之間。聯(lián)用的藥物可作為多劑量方案的一部分與本發(fā)明的化合物分別進(jìn)行給藥?；蛘?，可將這些藥物作為單劑量形式的一部分，與本發(fā)明的化合物混合成單一的組合物。
根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的藥物組合物還含有另外的免疫抑制劑。所述免疫抑制劑的例子包括但不限于，環(huán)孢菌素A、FK506、雷怕霉素、來氟米特、脫氧精胍菌素、潑尼松、硫唑嘌呤、麥考酚酸mofetil、OKT3、ATAG、干擾素和咪唑立賓。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的藥物組合物還含有抗癌劑。所述抗癌劑的例子包括但不限于，順鉑、放線菌素D、阿霉素、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、鬼臼乙叉苷、安吖啶、米托蒽醌、鬼臼噻吩苷、紫杉醇、秋水仙素、環(huán)孢菌素A、吩噻嗪、干擾素和噻噸。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的藥物組合物還含有抗病毒劑。所述抗病毒劑的例子包括但不限于，Cytovene、更昔洛韋、膦甲酸三鈉、利巴韋林、d4T、ddI、AZT和阿昔洛韋。
根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的藥物組合物還含有抗血管過度增殖劑。所述抗血管過度增殖劑的例子包括但不限于，HMG Co-A還原酶抑制劑如洛伐他丁、血栓烷A2合成酶抑制劑、二十碳五烯酸、西前列烯、曲匹地爾、ACE抑制劑、低分子量肝素、麥考酚酸、雷怕霉素和5-(3’-吡啶基甲基)苯并呋喃-2-甲酸。
隨著患者病情的好轉(zhuǎn)，如需要，可使用本發(fā)明化合物、組合物或聯(lián)合給藥的維持劑量。隨后，隨著癥狀的變化，將給藥的劑量或頻率分別或同時(shí)減少到使改善的癥狀得以保持的水平，當(dāng)癥狀減輕到所需的水平時(shí)，應(yīng)停止治療。但在長(zhǎng)期治療中，患者可能會(huì)在疾病癥狀復(fù)發(fā)的時(shí)候需要間歇治療。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，可能需要比上述劑量更低或更高的劑量。對(duì)于任何具體患者的具體劑量和治療方案取決于各種因素，包括所用具體化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄速率、藥物聯(lián)用、感染的嚴(yán)重程度和進(jìn)程、患者對(duì)感染的易感性和治療醫(yī)生的判斷。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在哺乳動(dòng)物中治療或預(yù)防IMPDH介導(dǎo)的疾病的方法，所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用上述的任意一種藥物組合物和藥物聯(lián)用形式。如果該藥物組合物僅含有本發(fā)明的IMPDH抑制劑作為活性成分，所述方法還可包括向所述哺乳動(dòng)物施用選自抗炎劑、免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑或抗生素或抗血管過度增殖劑的藥物的步驟。可在IMPDH抑制劑組合物給藥前、給藥的同時(shí)或給藥后向哺乳動(dòng)物施用這些附加的藥物。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這些方法可用于抑制哺乳動(dòng)物的免疫反應(yīng)。該方法可用于治療和預(yù)防如下疾病，包括移植排斥(例如，腎、肝、心臟、肺、胰(胰島細(xì)胞)、骨髓、角膜、小腸和皮膚同種異體移植物以及心臟瓣膜異種移植物)、移植物抗宿主病、自身免疫病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、少年糖尿病、哮喘、炎性腸疾病(節(jié)段性回腸炎、潰瘍結(jié)腸炎)、狼瘡、糖尿病、重癥肌無力、牛皮癬、皮膚病、濕疹、皮脂溢、肺炎、眼色素層炎、肝炎、突眼性甲狀腺腫、慢性甲狀腺炎、貝切特氏或斯耶格倫氏綜合征(干眼/口)、惡性或免疫溶血性貧血、自發(fā)性腎上腺功能不足，多腺體自身免疫綜合征、腎小球腎炎、硬皮病、扁平苔癬、viteligo(皮膚失色素)、自身免疫甲狀腺炎和肺泡炎。
這些方法包括向哺乳動(dòng)物施用含有式Ⅰ-Ⅸ的任意一種化合物和可藥用輔劑的組合物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，該方法還包括向所述哺乳動(dòng)物另外施用含有其它免疫抑制劑和可藥用輔劑的組合物。
或者，該方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用含有式Ⅰ-Ⅸ的化合物、其它免疫抑制劑和可藥用輔劑的組合物。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，這些方法可用于在哺乳動(dòng)物中抑制病毒的復(fù)制。所述方法可用于治療或預(yù)防DNA和RNA病毒性疾病，所述疾病由例如HTLV-1和HTLV-2、HIV-1和HIV-2、鼻咽癌病毒、HBV、HCV、HGV、黃熱病病毒、登革熱病毒、流行性乙型腦炎病毒、人乳頭瘤病毒、鼻病毒和皰疹病毒，例如Epstein-Barr病毒、巨細(xì)胞病毒和單純性皰疹病毒、1型和2型或6型病毒。[參見美國(guó)專利5380879]。
這些方法包括向哺乳動(dòng)物施用含有式Ⅰ-Ⅸ的任意一種化合物和可藥用輔劑的組合物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，該方法還包括向所述哺乳動(dòng)物另外施用含有其它抗病毒劑和可藥用輔劑的組合物。
或者，該方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用含有式Ⅰ-Ⅸ的化合物、其它抗病毒劑和可藥用輔劑的組合物。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，這些方法可用于在哺乳動(dòng)物中抑制血管的過度增殖。所述方法可用于治療或預(yù)防如下疾病，包括再狹窄、狹窄、動(dòng)脈粥樣硬化和其它過度增殖性血管疾病。
這些方法包括向哺乳動(dòng)物施用含有式Ⅰ-Ⅸ的任意一種化合物和可藥用輔劑的組合物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，該方法還包括向所述哺乳動(dòng)物另外施用含有其它抗血管過度增殖劑和可藥用輔劑的組合物。
或者，該方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用含有式Ⅰ-Ⅸ的化合物、其它抗血管過度增殖劑和可藥用輔劑的組合物。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，這些方法可用于在哺乳動(dòng)物中抑制腫瘤和癌癥。所述方法可用于治療或預(yù)防如下疾病，包括腫瘤和惡性腫瘤，例如淋巴瘤、白血病及其它腫瘤和癌癥。
這些方法包括向哺乳動(dòng)物施用含有式Ⅰ-Ⅸ的任意一種化合物和可藥用輔劑的組合物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，該方法還包括向所述哺乳動(dòng)物另外施用含有其它抗腫瘤或抗癌劑和可藥用輔劑的組合物。
或者，該方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用含有式Ⅰ-Ⅸ的化合物、其它抗腫瘤或抗癌劑和可藥用輔劑的組合物。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，這些方法可用于在哺乳動(dòng)物中抑制炎癥和炎癥性疾病。所述方法可用于治療或預(yù)防如下疾病，包括骨關(guān)節(jié)炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、哮喘和成人呼吸窘迫綜合征。
這些方法包括向哺乳動(dòng)物施用含有式Ⅰ-Ⅸ的任意一種化合物和可藥用輔劑的組合物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，該方法還包括向所述哺乳動(dòng)物另外施用含有抗炎劑和可藥用輔劑的組合物。
為了更全面地理解本發(fā)明，提供如下實(shí)施例。這些實(shí)施例僅僅是為了達(dá)到說明的目的，并不以任何方式對(duì)發(fā)明的范圍構(gòu)成限制。一般材料和方法用攝氏溫度記錄所有溫度。用0.25mm E.Merch硅膠60 F254板進(jìn)行薄層色譜(TLC)，用注明的溶劑系統(tǒng)洗脫。通過用適宜的顯色劑如10％磷鉬酸的乙醇溶液或0.1％茚三酮乙醇溶液處理所述板，然后加熱，和/或在需要時(shí)暴露于UV光或碘蒸汽中來檢測(cè)所述化合物。用如下條件進(jìn)行分析性HPLC:Rainin Mycrosorb-MV,5μCyano反相柱，3.9mm×150mm，流速1.0mL/分鐘，5-100％乙腈(0.1％TFA)的水(0.1％TFA)溶液的溶劑梯度。用分鐘來記錄HPLC的保留時(shí)間。用Bruker AMX500在注明的溶劑中獲得NMR譜數(shù)據(jù)。
IMP脫氫酶HPLC檢測(cè)按照我們用于從IMP和NAD酶催化生產(chǎn)XMP和NADH的標(biāo)準(zhǔn)條件進(jìn)行，但利用高壓液相色譜用含離子對(duì)的試劑在C18柱上分離所有四種組分。然后從得到的產(chǎn)物峰面積確定反應(yīng)程度。該檢測(cè)特別適用于測(cè)定在290和340nm UV-可見區(qū)域內(nèi)有顯著吸收的化合物的抑制圖譜。
反應(yīng)混合物通常含有0.1M KPi；pH8.0,0.1M KCl,0.5mM EDTA,2mM DTT和各0.2mM的IMP和NAD。將該溶液在37℃保溫10分鐘。通過將酶加至20-100nM的終濃度來啟動(dòng)反應(yīng)，然后使反應(yīng)進(jìn)行10分鐘。在規(guī)定的時(shí)間后，通過加入麥考酚酸至0.01mM的終濃度來終止反應(yīng)。
用4.6×10mm的Rainin Microsorb ODS柱C18-200和含四丁基硫酸銨(5mM)的0.1M KPi(pH6.0)溶液的溶劑系統(tǒng)，以在15分鐘內(nèi)0-30％甲醇的梯度通過HPLC來檢測(cè)轉(zhuǎn)化的程度。以前曾用相似的溶劑系統(tǒng)純化鹵代-IMP衍生物。[L.C.Antionio和J.C.Wu，生物化學(xué)，33,1753-1759(1994)]。用設(shè)置在254nM的UV監(jiān)測(cè)器檢測(cè)4種組分，將產(chǎn)物峰積分以確定底物的轉(zhuǎn)化程度。
為了分析抑制劑，將所述化合物以20mM的終濃度溶于DMSO中，然后以2-5％(v/v)的體積，以所需濃度加到初始檢測(cè)混合物中。通過加入所述酶來啟動(dòng)反應(yīng)，10分鐘后如上所述終止反應(yīng)。HPLC分析后，用產(chǎn)物面積來確定相對(duì)于僅含DMSO、不含待測(cè)化合物的對(duì)照試驗(yàn)的轉(zhuǎn)化程度。用非線性最小二乘法將轉(zhuǎn)化度-濃度曲線與Henderson緊密結(jié)合(tight-binding)方程擬合來確定IC50或Ki值。[P.J.F.Henderson,生物化學(xué)雜志(Biochem.J.),127,321(1972)]。
根據(jù)改良的首先由Magasanik報(bào)道的方法，我們測(cè)量了各化合物對(duì)IMPDH的抑制常數(shù)。[B.Magasanik,H.S.Moyed,和L.B.Gehring，生物化學(xué)雜志，226,339頁(1957)]。
由于式Ⅰ-Ⅸ的化合物能夠抑制IMPDH，因此對(duì)于治療IMPDH介導(dǎo)的疾病，它們有顯著的臨床實(shí)用性。這些試驗(yàn)預(yù)示化合物在體內(nèi)抑制IMPDH的能力。
實(shí)驗(yàn)部分合成的代表性實(shí)施例實(shí)施例1化合物1的合成

室溫下，向25mg(156μmol)4-(5-噁唑基)-苯胺的250μL二氯甲烷溶液中加入50μL(400μmol)異氰酸芐酯。攪拌過夜后，過濾并用3∶1己烷/二氯甲烷沖洗得到純凈的1，產(chǎn)量21mg(46％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.86(s),7.55(d),7.38(d),7.22-7.35(m),6.39(s),5.0(brs),4.43(s).Rf0.30(5％MeOH/CH2Cl2)實(shí)施例2化合物43的合成

0℃下，向冰乙酸(46mL)、乙酸酐(46mL,485mmol)和2-氯-4-硝基甲苯(5g,29.1mmol)的溶液中滴加濃硫酸(6.9mL)。加料結(jié)束后，于60分鐘內(nèi)分批加入CrO3(8.08g,80.8mmol)。0℃下繼續(xù)攪拌15分鐘后，將反應(yīng)混合物倒在冰上，過濾分離所形成的沉淀，用冷水沖洗。通過快速色譜進(jìn)行純化，用梯度為15-50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到2.02g(24％,以回收的原料計(jì)，為40％)白色固體狀BI。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將化合物B1溶于1∶1乙醇/水(20mL)，用濃硫酸(2mL)處理并回流1小時(shí)。冷卻至室溫后，將反應(yīng)液用乙醚萃取3次。將乙醚溶液用水洗滌2次，用硫酸鈉干燥并真空濃縮得到黃色固體。用熱的乙醚/己烷重結(jié)晶兩次得到純化的產(chǎn)物，得到620mg(47.6％)淡黃色結(jié)晶固體狀B2。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將B2(200mg,1.2mmol)、甲苯磺?；谆惽杌?236mg,1.2mmol)和粉末狀碳酸鉀(172mg,1.2mmol)的混合物的甲醇(13mL)溶液加熱回流90分鐘，然后室溫下攪拌過夜。濃縮至干后，將混合物在二氯甲烷和水之間進(jìn)行分配。分出有機(jī)層，用0.5N鹽酸、水和鹽水洗滌，然后用硫酸鈉干燥。真空蒸除溶劑得到黃色固體粗品。通過快速色譜進(jìn)行純化，用梯度為0-2.5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，然后重結(jié)晶(二氯甲烷/己烷)得到純化的產(chǎn)物B3，產(chǎn)量3.3g(68％)，為淡黃色結(jié)晶狀固體。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將B3(150mg,0.67mmol)的乙醇(7.5mL)溶液用SnCl2·H2O(過量；約5當(dāng)量)處理并加熱回流30分鐘。將混合物冷卻至室溫，用乙醚稀釋并用2N氫氧化鈉萃取。分出有機(jī)層，用水和鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并真空濃縮。通過快速色譜進(jìn)行純化，用梯度為0-0.5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫得到純化的產(chǎn)物B4，產(chǎn)量54mg(41.5％)，為淡黃色油。1HNMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

室溫下，向20mg(103μmol)B4的1mL二氯甲烷溶液中加入20μL異氰酸間甲苯酯。攪拌過夜后，過濾并用乙酸乙酯/己烷沖洗，以純凈的形式得到25mg(74％)43。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ9.06(s),8.73(s),8.50(s),7.89(s),7.73(d),7.67(s),7.42(d),7.31(s),7.23(d),7.18(t),6.82(d),2.27(s).Rf0.28(5％ MeOH/CH2Cl2).實(shí)施例3化合物56的合成

按照與上述制備B1類似的方式，從2-甲基-5-硝基苯甲醚(10.0g,60mmol)制得C1(8.14g,51％)。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將攪拌下的C1(81.94g,307mmol)的二氧六環(huán)(100mL)懸浮液用濃鹽酸(20mL)處理并加熱回流過夜。冷卻至室溫后，產(chǎn)物C2以淡黃色結(jié)晶狀固體的形式析出沉淀，產(chǎn)量40.65g(73.1％)。將濾液體積濃縮至約80mL，加入己烷從溶液中析出第二批產(chǎn)物結(jié)晶，產(chǎn)量8.91g(16.0％)。兩批產(chǎn)物的1H NMR和TLC分析完全相同并與所需物質(zhì)的相一致。C2的總產(chǎn)量為49.56g(89.1％)。

將C2(456mg,2.51mmol)、甲苯磺酰基甲基異氰化物(490mg,2.51mmol)和碳酸鉀(347mg,251mmol)溶于甲醇并加熱回流1.5小時(shí)。然后將產(chǎn)物混合物真空濃縮，重新溶于二氯甲烷，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并再次真空濃縮。經(jīng)重結(jié)晶(乙醚/己烷)得到純化的產(chǎn)物C3，產(chǎn)量375mg(68％)。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將C3(4.214g,19.1mmol)的乙酸乙酯(150mL)溶液用10％Pd/C(1.05g,C3重量的25％)處理并在40磅/平方英寸氫氣下氫化(Parr氫化裝置)過夜。將反應(yīng)混合物過濾并真空濃縮。通過快速色譜進(jìn)行純化，用梯度為30-40％的乙酸乙酯/己烷洗脫得到純化的產(chǎn)物C4，產(chǎn)量3.4g(93％)。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

室溫下，向C4(25mg,0.131mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入異氰酸甲苯酯(25μL,0.197mmol)。攪拌過夜后，過濾并用二氯甲烷沖洗，以純凈的形式分離得到42mg(74％)56。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ8.87(s),8.64(s),8.37(s),7.60(d),7.46(d),7.42(s),7.33(s),7.23(d),7.16-7.19(t),7.05(dd),6.80(d),3.92(s),2.2 8(s).Rf0.46(5％ MeOH/CH2Cl2).
實(shí)施例4化合物59的合成

室溫下，向C4(75mg,0.394mmol)的二氯乙烷(5mL)溶液中加入異氰酸3-硝基苯基酯(97mg,0.591mmol)。攪拌過夜后，過濾并用二氯甲烷沖洗，以純凈的形式分離得到D1，產(chǎn)量110.3mg(79％)。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

向攪拌下的D1(95mg,0.268mmol)的乙醇(20mL)懸浮液中加入SnCl2·2H2O(302mg；1.34mmol)。將反應(yīng)混合物加熱至回流(此刻開始溶解)1.5小時(shí)。將溶液冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用2N氫氧化鈉和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。通過快速色譜進(jìn)行純化(用梯度為2.5-5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)，隨后從略微不純的餾份中選擇性地結(jié)晶所需物質(zhì)，以15.7mg(18％)的產(chǎn)量得到純凈的產(chǎn)物59。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ8.83(s),8.44(s),8.35(s),7.59(d),7.48(d),7.40(s),6.97-7.04(dd),6.86-6.92(t),6.83(d),6.54(dd),6.20(dd),5.05(brs),3.92(s).Rf0.20(5％ MeOH/CH2Cl2).
實(shí)施例5化合物113的合成

將3-氨基芐胺(826mg,6.87mmol)和三乙胺(2.39mL,17.18mmol)的溶液用碳酸二叔丁酯(1.50g,6.87mmol)處理并將混合物室溫下攪拌2小時(shí)。然后將反應(yīng)液用二氯甲烷稀釋，用碳酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。通過快速色譜進(jìn)行純化，用25％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫得到200mg(46％)純凈的產(chǎn)物E1。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將C4(150mg,0.789mmol)和1,1-二羰基咪唑(160mg,0.986mmol)的溶液在THF(5mL)中混合并在室溫下攪拌6小時(shí)。可觀察到有咪唑沉淀形成。向其中加入E1(351mg,1.58mmol)和N,N-二甲氨基吡啶(97mg,0.789mmol)并將該混合物回流過夜，形成均勻的溶液。冷卻至室溫后，將反應(yīng)液用乙酸乙酯(20mL)稀釋，用硫酸氫鉀水溶液、水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮。通過快速色譜進(jìn)行純化，用梯度為20-30-35％丙酮的己烷溶液洗脫得到164mg(47％)純凈的產(chǎn)物113。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ8.90(s),8.75(s),8.38(s),7.60(d),7.51(5),7.3-7.46(m),7.21-7.27(t),7.05(dd),6.87(d),4.12(d),3.93(s),1.44(s).Rf0.21(5％ MeOH/CH2Cl2).
實(shí)施例6化合物70的合成

將3-氯-4-氰基苯胺(500mg,7.76mmol)和異氰酸間甲苯酯的二氯甲烷(3mL)溶液室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物濃縮并通過MPLC(用1％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)得到純凈的70，產(chǎn)量285mg(31％)。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ9.36(s),8.88(s),7.94(s),7.83(d),7.44(d),7.30(s),7.24(d),7.15-7.20(t),6.82(d),2.29(s).Rf0.36(5％ MeOH/CH2Cl2).
實(shí)施例7化合物108的合成

向3,4,5-三甲氧基苯乙酮(9.2g,43.4mmol)的吡啶(35mL)溶液中加入二氧化硒(6.3g,56.7mmol)并將得到的溶液加熱回流過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用硅藻土過濾并濃縮得到深棕色的油，將其溶于乙酸乙酯中并依次用1.0N鹽酸和不含碳酸氫鈉溶液洗滌。將堿性含水層用乙醚稀釋并用濃鹽酸酸化。分層，將有機(jī)相用鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鈉)得到8.4g深黃色固體。將該物質(zhì)用乙酸乙酯-己烷重結(jié)晶得到淺黃色固體狀G1(6.8g)。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將59(64mg,0.20mmol)、G1(300mg,1.20mmol)和EDC(300mg,1.6mmol)的THF(5mL)溶液室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)液用乙酸乙酯(150mL)稀釋，用水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮。經(jīng)MPLC(用0-1％甲醇二氯甲烷溶液的梯度系統(tǒng)洗脫)得到純凈的108，產(chǎn)量37.4mg(35％)。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ9.83(s),8.23(s),8.18(s),7.65(s),7.61(s),7.35(d),7.33(s),7.29(s),7.27(s),7.11(s),7.06-7.10(t),6.94-6.99(t),6.52(d)3.68(s),3.63(s),3.61(s).Rf0.26(5％MeOH/CH2Cl2).
實(shí)施例8化合物115的合成

將59(300mmg,1.58mmol)和異氰酸間甲苯酯(2.0mL,14.7mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液室溫?cái)嚢柽^夜。為使反應(yīng)完全，再次加入異氰酸間甲苯酯(1.0mL,7.4mmol)并將混合物加熱回流3小時(shí)。將反應(yīng)液真空濃縮，經(jīng)MPLC(用0-5％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脫)得到純凈的115，產(chǎn)量210mg(39％)。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ7.90(s),7.89(s),7.82(s),7.75(d),7.64(s)7.44(s),7.32-7.37(t),7.27(s),7.1 3-7.21(m),6.91(dd),3.98(s),2.40(s).Rf0.36(5％ MeOH/CH2Cl2).
實(shí)施例9化合物97的合成

將硝基苯胺(1.0g,7.13mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液用吡啶(2.9mL,36mmol)和三氟乙酸酐(5mL,36mmol)處理并室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)液用二氯甲烷稀釋，用1N鹽酸和鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮得到白色固體狀I(lǐng)1(1.61g,95％)。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相-致。

0℃下，向氫化鈉(60％的油分散體；34mg,1.42mmol)的THF(10mL)漿液中加入I1(200mg,0.85mmol)的THF(10mL)溶液并將該混合物攪拌1小時(shí)。向其中加入碘甲烷(100μL,1.7mmol)并將該混合物室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)液倒入水中并用乙酸乙酯萃取。分出有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮。通過快速色譜(用5％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫)得到純凈的I2，產(chǎn)量163mg(66％)，為黃色固體。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將I2(163mg,0.66mmol)的乙醇(5mL)溶液用Pd/C(20mg)處理并在氫氣(1大氣壓)下氫化3小時(shí)。將反應(yīng)液過濾并真空濃縮得到蠟狀固體狀的I3(120mg,84％)。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

向三光氣(31mg,0.104mmol)的二氯乙烷(1mL)溶液中滴加B4(50mg,0.260mmol)和二異丙基乙胺(67mg,518mmol)的二氯乙烷(5mL)溶液。將反應(yīng)混合物繼續(xù)在室溫下攪拌1小時(shí)，用I3(50mg,0.230mmol)處理并攪拌過夜。將整個(gè)反應(yīng)混合物進(jìn)行快速色譜，用1％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫得到8mg(7％)純凈的97。1HNMR(500MHz,d6-DMSO)δ9.20(s),8.98(s),8.39(s),7.67(s),7.63(d),7.4 8(s),7.38-7.45(m),7.04-7.10(t),3.95(s),3.31(s).Rf0.37(5％ MeOH/CH2Cl2).
實(shí)施例10化合物111的合成

向59(50mg,0.154mmol)和三乙胺(31mg,0.308mmol)的DMF(0.5mL)溶液中滴加苯乙酰氯(25mg,0.169mmol)并將反應(yīng)液室溫?cái)嚢柽^夜。將混合物用二氯甲烷稀釋，用碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，用硫酸鎂干燥并真空濃縮。經(jīng)快速色譜(用2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)分離得到42mg(62％)純凈的111。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ10.20(s),8.90(s),8.79(s),8.39(s),7.88(s),7.63(d),7.53(d),7.44(s),7.25-7.40(m),7.22(t),7.14(d),7.05(dd),3.96(s),3.66(s).RfO.31(5％MeOH/CH2Cl2).
實(shí)施例11化合物102的合成

將2-甲基-5-硝基苯甲酸(15g,82.8mmol)的DMF(75mL)溶液依次用碘甲烷(6.7mL,107.64mmol)和碳酸鉀粉末(17.2g,124.2mmol)處理(劇烈放熱)并將該懸浮液室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間進(jìn)行分配，分出有機(jī)層并用水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮得到灰白色固體狀的純凈K1(15.86g,98％)。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

按照與上述制備B1類似的方式，從K1(15.86g,81.3mmol)制得K2(4.09g,16.2％)。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將K2(2.5g,8.03mmol)的二氧六環(huán)(10mL)溶液用濃鹽酸(0.5mL)處理并將該混合物加熱回流2小時(shí)。再次加入濃鹽酸(0.5mL)并將反應(yīng)液繼續(xù)回流3小時(shí)。將混合物用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。經(jīng)快速色譜(用梯度為20-30-50％乙醚的己烷溶液洗脫)得到1.14g(68％)純凈的K3。還分離得到215mg(11.8％)水合的醛。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將K3(300mg,1.43mmol)的苯(5mL)溶液用1,3-丙二醇(114μL,1.573mmol)和p-TsOH·H2O(27mg,0.14mmol)處理并將該混合物回流，用Dean-Stark除水4.5小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻至室溫，在乙酸乙酯和稀碳酸氫鈉之間進(jìn)行分配，分出有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。經(jīng)快速色譜(用梯度為20-25％乙醚的己烷溶液洗脫)得到324mg(84.5％)灰白色結(jié)晶固體狀純凈的K4。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

0℃下，向K4(289mg,1.08mmol)的THF(5mL)溶液中滴加DIBAL(1.0M的二氯甲烷溶液；2.7mL,2.7mmol)并攪拌40分鐘。加入飽和Rochelle氏鹽溶液(10mL)終止反應(yīng)，用乙酸乙酯稀釋并攪拌30分鐘。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮得到250mg(97％)白色結(jié)晶固體狀K5。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

0℃下，將K5(250mg,1.05mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液用吡啶(110μL,1.37mmol)、苯甲酰氯(146μL,1.26mmol)和4-DMAP(催化量)處理并室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋，用0.5N鹽酸、水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。經(jīng)快速色譜(用10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫)得到340mg(99％)白色固體狀純凈的K6。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將K6(326mg,0.99mmol)的二氧六環(huán)(7mL)溶液用2.0N鹽酸(5mL)處理并將該混合物于80℃加熱過夜。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋并用飽和碳酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。經(jīng)快速色譜(用30％乙醚的己烷溶液洗脫)得到208mg(77.5％)白色固體狀純凈的K7。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將K7(208mg,0.729mmol)的甲醇(6mL)溶液用碳酸鉀(101mg,0.765mmol)和TosMIC(149mg,0.765mmol)處理并將該溶液于60℃下加熱1小時(shí)。將反應(yīng)液真空濃縮,重新溶于二氯甲烷并用1.0N氫氧化鈉(用飽和碳酸氫鈉溶液稀釋)洗滌。將含水部分用二氯甲烷反萃取，合并有機(jī)相并用水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。經(jīng)快速色譜(用梯度為10-50％丙酮的己烷溶液洗脫)得到70mg(44％)純凈的K8。1HNMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將K8(70mg,0.318mmol)在乙酸酐(1.5mL)和吡啶(1.0mL)中的溶液用4-DMAP(催化量)處理并室溫?cái)嚢?小時(shí)。將混合物用二氯甲烷稀釋，用1.0N鹽水、水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮得到82mg(98％)淺黃色固體狀K9。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將K9(80mg,0.305mmol)的無水乙醇(4mL)溶液用SnCl2·2H2O(241mg,1.07mmol)處理并將混合物于60℃下加熱50分鐘。將反應(yīng)液用乙酸乙酯稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液、水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。經(jīng)快速色譜(用梯度為20-30％丙酮的己烷溶液洗脫)得到52mg(73.4％)淺黃色油狀純凈的K10。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將K10(52mg,0.224mmol)的二氯乙烷(2mL)溶液用異氰酸間甲苯酯(43μL,0.336mmol)處理并室溫?cái)嚢柽^夜。將混合物用二氯甲烷∶己烷(2∶1)稀釋，過濾并用相同的溶劑系統(tǒng)沖洗得到白色固體狀K11(67mg,82％)。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。

將K11(33mg,0.09mmol)的甲醇(2mL)溶液用1.0N氫氧化鈉(135μL,0.135mmol)處理并室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。加入1.0N鹽酸(135μL)將反應(yīng)液中和并真空濃縮。將白色固體用水和二氯甲烷∶己烷(2∶1)沖洗并真空干燥得到白色固體狀102(20mg,68％)。1HNMR(500MHz,d6-DMSO)δ9.2 9(s),9.00(s),8.42(s),7.69(s),7.55(m),7.37(s),7.33(s),7.27(d),7.16(t),6.80(d),5.39(t),4.58(s),2.28(s).Rf=0.13(1∶1己烷/丙酮)。
實(shí)施例12化合物106的合成

將C4(50mg,0.263mmol)的THF(2mL)溶液用CDI(53mg,0.330mmol)處理并室溫?cái)嚢?小時(shí)。向其中加入1-乙酰基-6-氨基吲哚(93mg,0.526mmol,Sigma Chemical Co.)和4-DMAP(35mg,0.289mmol)并將該混合物回流過夜。用乙酸乙酯(100mL)稀釋，用5％硫酸氫鉀、水和鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮。重新溶于乙酸乙酯并濾除不溶物，然后再次真空濃縮。經(jīng)快速色譜(用梯度為50-60％丙酮的己烷溶液洗脫)得到37mg(36％)白色固體狀純凈的106。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)δ8.79(s),8.74(s),8.37(s),8.1l(s),7.62(d),7.47(s),7.43(s),7.30(d),7.13(d),7.14(d),4.11(t),3.94(s),3.07(t),2.17(s).Rf=0.14(1∶1己烷/丙酮)。
實(shí)施例13

室溫下，向113(來自實(shí)施例5)(250mg,5.76mmol)的二氯甲烷(1mL)懸浮液中滴加數(shù)當(dāng)量的三氟乙酸并攪拌90分鐘。將得到的溶液真空濃縮并與二氯甲烷和甲醇一起研制。過濾得到258mg(99％)純凈的產(chǎn)物168。1H NMR與所需產(chǎn)物的相一致。

將168(250mg,0.55mmol)的21mL二氯甲烷/DMF(20∶1，體積比)懸浮液用三乙胺(193μL,1.38mmol)處理并室溫下攪拌至形成均相。將溶液冷卻至0℃，用(S)-3-四氫呋喃基-N-氧基琥珀酰亞氨基碳酸酯(635mg,0.608mmol)處理，升至室溫后攪拌過夜。將該混合物倒入乙酸乙酯(500mL)中，用碳酸氫鈉水溶液(2次)、水(2次)和鹽水(1次)洗滌，用硫酸鈉干燥并真空濃縮。研制后(30mL二氯甲烷，100mL乙醚)得到212mg(85％)純凈產(chǎn)物120。1H NMR與所需結(jié)構(gòu)的相一致。
實(shí)施例14IMPDH活性抑制試驗(yàn)我們使用如下方法測(cè)定了表Ⅲ所列化合物的抑制常數(shù)根據(jù)改良的首先由Magasanik報(bào)道的方法[Magasanik,B.Moyed,H.S.和Gehring L.B.(1957)生物化學(xué)雜志，226,339]檢測(cè)IMP脫氫酶的活性。用分光光度法，通過監(jiān)測(cè)由于形成NADH(ε340=6220M-1cm-1)所引起的在340nm吸收值的增加來測(cè)定酶的活性。反應(yīng)混合物含有0.1M Tris pH8.0,0.1M KCl,3mM EDTA,2mM DTT,0.1MIMP和濃度為15-50nM的酶(Ⅱ型人IMPDH)。將該溶液于37℃保溫10分鐘。加入NAD(最終濃度為0.1M)啟動(dòng)反應(yīng)，通過監(jiān)測(cè)340nm吸收值的線性增加10分鐘來測(cè)定初始速率。為了在標(biāo)準(zhǔn)分光光度計(jì)(光程長(zhǎng)度1cm)中讀數(shù)，比色杯中最終體積為1.0mL。還可以將該試驗(yàn)在96孔微滴定板中進(jìn)行，在該情況下，所有試劑的濃度均與上相同，但最終體積減少為200μL。
為了對(duì)抑制劑進(jìn)行分析，將上述化合物以20mM的最終濃度溶于DMSO并以2-5％的最終體積(v/v)加入到與酶預(yù)保溫的初始檢測(cè)混合物中。通過加入NAD啟動(dòng)反應(yīng)，如上所述測(cè)定初始速率。通過測(cè)定在各種含量的抑制劑存在下的初始速率并將數(shù)據(jù)用Henderson的緊密結(jié)合方程[Henderson,P.J.F.(1972)，生物化學(xué)雜志,127,321]擬合來確定Ki值。
結(jié)果列于表Ⅲ。Ki值以nM表示。“A”表示0.01-50nm活性，“B”表示51-1000nm活性，“C”表示1001-10,000nm活性，“D”表示大于10,000nm活性。符號(hào)“ND”用于表示未測(cè)試的化合物。表Ⅲ化合物 Ki化合物Ki化合物 Ki# (nM) #(nM) #(nM)1C40C78B2C41C79B3B42B80C4D43B81C5C44-- 82C6C45C83B7B46B84B8C47B85B9C48C86C10 C49C87D11 C50D88C12 C51D89C13 C52C90C14 C53C91C15 C54C92C16 C55A93A17 B56B94B18 C57B95C19 C58C96B20 C59A97A21 C60B98B22 C61D99A23 C62C100 B24 B63C101 C25 C64B102 C26 C65B103 C27 C66C104 C28 C67C105 B29 D68B106 B30 C69B107 A31 D70C108 B32 D71C109 B33 D72C110 B34 C73B111 A35 C74B112 B36 C75B113 A37 C76C114 B38 D77B115 B化合物 Ki化合物 Ki化合物 Ki化合物 Ki# (nM) #(nM) #(nM) #(nM)116A129A142A155A117B130A143B156A118C131A144B157B119A132A145A158B120A133A146A159A121A134A147A160A122A135A148A161A123A136A149A162A124A137B150A163B125A138A151B164B126A139B152B165A127A140A153A166D128A141A154A167B168B實(shí)施例15抗病毒試驗(yàn)可在各種體外和體內(nèi)試驗(yàn)中評(píng)估化合物的抗病毒效力。例如，可在體外病毒復(fù)制試驗(yàn)中測(cè)試化合物。體外試驗(yàn)可采用完整的細(xì)胞或分離的細(xì)胞成分。體內(nèi)試驗(yàn)包括用于病毒性疾病的動(dòng)物模型。所述動(dòng)物模型的例子包括但不僅限于，用于HBV或HCV感染的嚙齒類模型、用于HBV感染的Woodchuck模型和用于HCV感染的黑猩猩模型。
盡管我們對(duì)本發(fā)明的大量實(shí)施方案進(jìn)行了描述，但很明顯，可以對(duì)我們的基本結(jié)構(gòu)進(jìn)行改變以提供使用本發(fā)明產(chǎn)物和方法的其它實(shí)施方案。因此，可以理解，本發(fā)明的范圍是由所附的權(quán)利要求而不是以實(shí)施例的方式給出的具體實(shí)施方案限定的。
權(quán)利要求
1．在哺乳動(dòng)物中抑制IMPDH活性的方法，包括向所述哺乳動(dòng)物施用下式化合物
其中A選自(C1-C6)直鏈或支鏈烷基，或(C2-C6)直鏈或支鏈鏈烯基或炔基；并且A可選擇性地帶有最多2個(gè)取代基，其中如果存在的話，第一種所述取代基選自R1或R3，如果存在的話，第二種所述取代基是R1；B是飽和、不飽和或部分飽和的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系，所述環(huán)系選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子并且選自如下結(jié)構(gòu)式
其中各X是滿足適宜價(jià)鍵所需的氫原子數(shù)；并且B選擇性地帶有最多3個(gè)取代基，其中如果存在的話，第一種所述取代基選自R1、R2、R4或R5，如果存在的話，第二種所述取代基選自R1或R4，如果存在的話，第三種所述取代基是R1；D選自C(O)、C(S)、或S(O)2；其中各R1彼此獨(dú)立地選自1,2-亞甲二氧基、1,2-亞乙二氧基、R6或(CH2)n-Y；其中n是0,1或2；Y選自鹵素、CN、NO2、CF3、OCF3、OH、SR6、S(O)R6、SO2R6、NH2、NHR6、N(R6)2、NR6R8、COOH、COOR6或OR6；各R2彼此獨(dú)立地選自(C1-C4)直鏈或支鏈烷基，或(C2-C4)直鏈或支鏈鏈烯基或炔基；并且R2可選擇性地帶有最多2個(gè)取代基，其中如果存在的話，第一種所述取代基選自R1、R4和R5，如果存在的話，第二種所述取代基是R1；R3選自每個(gè)環(huán)由5-6個(gè)環(huán)原子組成的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系，其中所述環(huán)系選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子，其中與任何所述的N、O或S雜原子相鄰的CH2選擇性地被C(O)取代；并且各R3選擇性地帶有最多3個(gè)取代基，其中如果存在的話，第一種所述取代基選自R1、R2、R4或R5，如果存在的話，第二種所述取代基選自R1或R4，如果存在的話，第三種所述取代基是R1；各R4彼此獨(dú)立地選自O(shè)R5、OC(O)R6,OC(O)R5,OC(O)OR6,OC(O)OR5,OC(O)N(R6)2,OP(O)(OR6)2,SR6,SR5,S(O)R6,S(O)R5,SO2R6,SO2R5,SO2N(R6)2,SO2NR5R6,SO3R6,C(O)R5,C(O)OR5,C(O)R6,C(O)OR6,NC(O)C(O)R6,NC(O)C(O)R5,NC(O)C(O)OR6,NC(O)C(O)N(R6)2,C(O)N(R6)2,C(O)N(OR6)R6,C(O)N(OR6)R5,C(NOR6)R6,C(NOR6)R5,N(R6)2,NR6C(O)R1,NR6C(O)R6,NR6C(O)R5,NR6C(O)OR6,NR6C(O)OR5,NR6C(O)N(R6)2,NR6C(O)NR5R6,NR6SO2R6,NR6SO2R5,NR6SO2N(R6)2,NR6SO2NR5R6,N(OR6)R6,N(OR6)R5,P(O)(OR6)N(R6)2，和P(O)(OR6)2；各R5是每個(gè)環(huán)由5-6個(gè)環(huán)原子組成的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系，其中所述環(huán)系選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子，其中與所述N、O或S相鄰的CH2可被C(O)取代；各R5選擇性地帶有最多3個(gè)取代基，如果存在的話，各取代基均是R1；各R6彼此獨(dú)立地選自H、(C1-C4)直鏈或支鏈烷基，或(C2-C4)直鏈或支鏈鏈烯基；并且各R6可選擇性地帶有取代基R7；R7是每個(gè)環(huán)由5-6個(gè)環(huán)原子組成的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系，其中所述環(huán)系選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子，其中與所述N、O或S相鄰的CH2可被C(O)取代；各R7選擇性地帶有最多2個(gè)取代基，所述取代基彼此獨(dú)立地選自H、(C1-C4)直鏈或支鏈烷基，或(C2-C4)直鏈或支鏈鏈烯基、1,2-亞甲二氧基、1,2-亞乙二氧基或(CH2)n-Z；其中n是0,1或2；Z選自鹵素、CN、NO2、CF3、OCF3、OH、S(C1-C4)-烷基、SO(C1-C4)-烷基、SO2(C1-C4)-烷基、NH2、NH(C1-C4)-烷基、N((C1-C4)-烷基)2、N((C1-C4)-烷基)R8、COOH、C(O)O(C1-C4)-烷基或O(C1-C4)-烷基；并且R8是氨基保護(hù)基；其中所有A、R2或R6中的所有碳原子均可選擇性地被O、S、SO、SO2、NH或N(C1-C4)-烷基代替。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中，在所述化合物中，B帶有0-2個(gè)取代基。
3．根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中，在所述化合物中，B帶有至少一個(gè)第一種取代基并且所述第一種取代基是R5。
4．根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中，在所述化合物中，B是單環(huán)芳環(huán)并且B上的所述第一種取代基是單環(huán)芳環(huán)。
5．在哺乳動(dòng)物中抑制IMPDH活性的方法，包括向所述哺乳動(dòng)物施用下式化合物
其中D和各B如權(quán)利要求1所定義。
6．根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中，在所述化合物中，至少有一個(gè)B帶有0-2個(gè)取代基。
7．根據(jù)權(quán)利要求5或6的方法，其中，在所述化合物中，所述B帶有至少一個(gè)第一種取代基并且所述第一種取代基是R5。
8．根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中，在所述化合物中，B是單環(huán)芳環(huán)并且B的所述第一種取代基是單環(huán)芳環(huán)。
9．下式化合物其中
A、D和B如權(quán)利要求1所定義；E是O或S；G和G’彼此獨(dú)立地選自R1或H。
10．下式化合物
其中B和D如權(quán)利要求5所定義；E、G和G’如權(quán)利要求9所定義；B’是飽和、不飽和或部分飽和的單環(huán)或雙環(huán)環(huán)系，所述環(huán)系選擇性地含有最多4個(gè)選自N、O或S的雜原子并且選自如下結(jié)構(gòu)式
并且B’選擇性地帶有最多3個(gè)取代基，其中如果存在的話，第一種所述取代基選自R1、R2、R4或R5，如果存在的話，第二種所述取代基選自R1或R4，如果存在的話，第三種所述取代基是R1；其中，X、R1、R2、R4和R5如權(quán)利要求5所定義；其中，如果B是未取代的苯基并且所有的所述取代基均在B’上并且是R1，則至少有一個(gè)所述R1取代基不是氯、溴或碘；并且其中的B和B’不同時(shí)為未取代的苯基。
11．權(quán)利要求10的化合物，具有如下結(jié)構(gòu)式
其中K選自R1和R4；J選自R1、R2和R4。
12．權(quán)利要求11的化合物，其中的D是-C(O)-。
13．權(quán)利要求11的化合物，其中的E是氧。
14．權(quán)利要求11的化合物，其中的J是NR6C(O)R5或NR6C(O)R6。
15．權(quán)利要求14的化合物，其中的J是NR6C(O)R6。
16．權(quán)利要求15的化合物，其中的J是N(CH3)C(O)R6。
17．權(quán)利要求11的化合物，其中的K是(CH2)n-Y。
18．權(quán)利要求17的化合物，其中的K是OCH3。
19．權(quán)利要求11的化合物，其中的G是氫。
20．權(quán)利要求16的化合物，其中D是-C(O)-；E是氧；K是OCH3；G是氫。
21．權(quán)利要求11的化合物，其中的J是R2。
22．權(quán)利要求21的化合物，其中的E是氧。
23．權(quán)利要求21的化合物，其中的J是被R4取代的R2。
24．權(quán)利要求23的化合物，其中的R4是NR6C(O)OR5或NR6C(O)OR6。
25．權(quán)利要求21的化合物，其中的K是(CH2)n-Y。
26．權(quán)利要求25的化合物，其中的K是OCH3。
27．權(quán)利要求21的化合物，其中D是-C(O)-；E是氧；K是OCH3；G是氫。
28．下式化合物
其中K選自R1和R4；A、D、R1和R4彼此獨(dú)立地如權(quán)利要求1所定義。
29．權(quán)利要求28的化合物，其中D是-C(O)-。
30．權(quán)利要求28的化合物，其中的A是被1-2個(gè)選自NR6C(O)R6、NR6C(O)R5、CH2NR6C(O)OR6和CH2NR6C(O)OR5的取代基取代的單環(huán)芳環(huán)。
31．權(quán)利要求30的化合物，其中的A是被1-2個(gè)選自CH2NR6C(O)OR6和CH2NR6C(O)OR5的取代基取代的單環(huán)芳環(huán)。
32．權(quán)利要求28的化合物，其中的K是(CH2)n-Y。
33．權(quán)利要求32的化合物，其中的K是OCH3。
34．下式化合物
D選自C(O)、C(S)和S(O)2；K選自R1和R4；J選自R1、R2和R4。
35．權(quán)利要求34的化合物，其中D是-C(O)-。
36．權(quán)利要求34的化合物，其中的J是NR6C(O)R5或NR6C(O)R6。
37．權(quán)利要求34的化合物，其中的K是(CH2)n-Y。
38．權(quán)利要求37的化合物，其中的K是OCH3。
39．權(quán)利要求10的化合物，該化合物選自表ⅠA、ⅠB和ⅠC中的化合物1-27,29-31,39-51,53-69,71-86,88-89,91-102和104-162。
40．權(quán)利要求28的化合物，該化合物選自表ⅡB中的化合物163-168。
41．藥物組合物，含有a．抑制IMPDH活性有效量的下式化合物
或
其中的A、B和D如權(quán)利要求1所定義；b．另一種選自免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、抗炎劑、抗真菌劑、抗生素或抗血管過度增殖劑的藥物；c．可藥用輔劑。
42．權(quán)利要求41的組合物，其中，在所述化合物中，至少有一個(gè)B帶有至少一個(gè)第一種取代基并且所述第一種取代基是R5。
43．藥物組合物，含有a．抑制IMPDH活性有效量的權(quán)利要求9-40中任意一項(xiàng)的化合物；和b．可藥用輔劑。
44．權(quán)利要求43的藥物組合物，還含有另一種選自免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、抗炎劑、抗真菌劑、抗生素或抗血管過度增殖劑的藥物。
45．在哺乳動(dòng)物中治療或預(yù)防IMPDH介導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用權(quán)利要求41的組合物。
46．在哺乳動(dòng)物中治療或預(yù)防IMPDH介導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用權(quán)利要求43的組合物。
47．權(quán)利要求46的方法，其中所述組合物中還另外含有一種選自免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、抗炎劑、抗真菌劑、抗生素或抗血管過度增殖劑的藥物。
48．根據(jù)權(quán)利要求45至47中任意一項(xiàng)的方法，其中，所述方法用于抑制免疫反應(yīng)，并且如果其中存在另外的藥物，該藥物是免疫抑制劑。49．根據(jù)權(quán)利要求48的方法，其中所述IMPDH介導(dǎo)的疾病是自身免疫病。
50．根據(jù)權(quán)利要求45至47中任意一項(xiàng)的方法，其中所述IMPDH介導(dǎo)的疾病是病毒性疾病，并且如果其中存在另外的藥物，所述藥物是抗病毒劑。
51．根據(jù)權(quán)利要求45至47中任意一項(xiàng)的方法，其中所述IMPDH介導(dǎo)的疾病是血管疾病，并且如果其中存在另外的藥物，所述藥物是抗血管過度增殖劑。
52．根據(jù)權(quán)利要求45至47中任意一項(xiàng)的方法，其中所述IMPDH介導(dǎo)的疾病是癌癥，并且如果其中存在另外的藥物，所述藥物是抗癌劑。
53．根據(jù)權(quán)利要求45至47中任意一項(xiàng)的方法，其中所述IMPDH介導(dǎo)的疾病是炎癥疾病，并且如果其中存在另外的藥物，所述藥物是抗炎劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型的IMPDH抑制劑化合物。本發(fā)明還涉及含有這些化合物的藥物組合物。本發(fā)明的化合物和藥物組合物特別適用于抑制IMPDH酶的活性,因此可用作IMPDH介導(dǎo)的疾病的治療劑。本發(fā)明還涉及使用本發(fā)明的化合物及相關(guān)化合物抑制IMPDH活性的方法。
文檔編號(hào)C07D263/32GK1219929SQ97194856
公開日1999年6月16日 申請(qǐng)日期1997年4月21日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月23日
發(fā)明者D·M·阿米斯泰德, M·C·巴迪阿, G·W·比米斯, R·S·伯希爾, C·A·法蘭克, P·M·諾瓦克, S·M·隆金, J·O·桑德斯 申請(qǐng)人:沃泰克斯藥物股份有限公司