一種gc-ei-ms測(cè)定果蔬中氟唑菌酰胺殘留的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種GC-EI-MS測(cè)定果蔬中氟唑菌酰胺殘留的方法，更具體地說(shuō)是采用 氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性定量測(cè)定蔬菜和水果中殘留的氟唑菌酰 胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氟唑菌酰胺(fluxapyroxad)是由巴斯夫公司開(kāi)發(fā)的琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌 劑?；瘜W(xué)名稱:3_二氟甲基-1-甲基-N-(3'，4'，5'_三氟聯(lián)苯-2-基)-1Η-吡唑-4-甲酰胺;分 子式:C18H12F5N30;相對(duì)分子質(zhì)量:381.3;恪點(diǎn)：157 °C ;相對(duì)密度：1.42。溶劑中的溶解度 (g/L，20°C):丙酮>250、乙腈168、乙酸乙酯123、甲醇53.4、甲苯20.0。氟唑菌酰胺的化學(xué)結(jié) 構(gòu)式如下：
[0003] 氟唑菌酰胺具有高效、廣譜、持效、優(yōu)異的內(nèi)吸傳導(dǎo)性、同時(shí)具有預(yù)防和治療作用 等優(yōu)點(diǎn)。它能抑制孢子發(fā)芽、芽孢管伸長(zhǎng)、菌絲體生長(zhǎng)和孢子形成，可有效防治谷物、大豆、 玉米、油菜和特種作物等的主要病害。該產(chǎn)品通過(guò)葉面和種子處理來(lái)防治一系列真菌病害， 如谷物、大豆、果樹(shù)和蔬菜上由殼針孢菌（Septoria)、灰葡萄孢菌（Botrytis)、白粉菌 (Erysiphe)、尾抱菌（Cercospora)、柄銹菌（Puccinia)、絲核菌（Rhizoctonia)、核腔菌 (Pyrenophora spp ·)等引起的病害。其特別適用于豆類植物，防治由鏈格孢菌(Alternaria spp.)引起的灰霉病(Botrytis cinerea)、銹病、白粉病和殼針孢菌引起的病害，大豆銹病 (Phakopsora)，棉花上由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)引起的病害以及向日葵和油籽 菜上由鏈格孢菌引起的病害等。在所有試驗(yàn)劑量下，對(duì)所有作物非常安全。氟唑菌酰胺適配 性強(qiáng)，可與吡唑醚菌酯、三唑類殺菌劑和巴斯夫其他產(chǎn)品復(fù)配使用。研究表明，氟唑菌酰胺 比市售的酰胺類殺菌劑具有更好的活性，該產(chǎn)品無(wú)論在活性、多功能性，還是在內(nèi)吸性和耐 雨水沖刷性等方面都為現(xiàn)代殺菌劑建立了新標(biāo)桿。巴斯夫打算將氟唑菌酰胺引入世界上50 多個(gè)國(guó)家，用于100多種作物上。2011年，氟唑菌酰胺首先在英國(guó)登記和上市，現(xiàn)登記和上市 的國(guó)家包括澳大利亞、美國(guó)、加拿大、歐盟13國(guó)、巴西和中國(guó)等。公司預(yù)測(cè)，該產(chǎn)品的年峰值 銷售額可達(dá)6億歐元。這是所有SDHI類殺菌劑中，開(kāi)發(fā)公司寄予的期望值最高的產(chǎn)品。
[0004] 隨著氟唑菌酰胺的登記、推廣和使用，作為我國(guó)主要出口市場(chǎng)的美國(guó)、加拿大等國(guó) 家制定了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(MRL)，如美國(guó) 規(guī)定氟唑菌酰胺在果蔬中的MRL為0.5~30mg/kg，在畜產(chǎn)品及水產(chǎn)品等動(dòng)物源性食品中MRL 為Ο . Olmg/kg，在堅(jiān)果及糧谷中MRL為0.06~15mg/kg;加拿大規(guī)定氟唑菌酰胺在果蔬中的 MRL為0.02~2mg/kg，在畜產(chǎn)品及水產(chǎn)品等動(dòng)物源性食品中MRL為0.01~0.05mg/kg，在堅(jiān)果 及糧谷中MRL為0.01~3mg/kg;歐盟、日本等國(guó)家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒(méi)有在該國(guó)家登記， 沒(méi)有制定相應(yīng)的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國(guó)家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動(dòng)物源性食品 中殘留限量均實(shí)行〇.〇lmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對(duì)氟唑菌酰胺殘留量測(cè)定方法的研究較少，報(bào)道的檢測(cè)方法主要為蔬菜 和水果中氟唑菌酰胺殘留檢測(cè)方法，這些檢測(cè)方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測(cè) 定蔬菜和水果中氟唑菌酰胺殘留量的檢測(cè)方法，使用LC-MS/MS測(cè)定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測(cè)機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺(tái)數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測(cè)時(shí)，需使用不同的流動(dòng) 相或色譜柱，這樣需要不斷更換色譜柱、流動(dòng)相并耗費(fèi)比較長(zhǎng)的時(shí)間對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行平衡，這一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。配備電子轟擊電離源的氣相色譜質(zhì)譜(GC-EI-MS)分析食 品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有很大優(yōu)勢(shì)，由于電子轟擊電離源質(zhì)譜為通用性檢測(cè)器，可實(shí)現(xiàn)幾 百種農(nóng)藥的多殘留分析，可同時(shí)定性和定量，價(jià)格適中，因此現(xiàn)各種檢測(cè)機(jī)構(gòu)和企業(yè)均配備 氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜儀(GC-EI-MS)對(duì)食品農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，但迄 今為止未見(jiàn)食品農(nóng)產(chǎn)品中氟唑菌酰胺殘留量的GC-EI-MS檢測(cè)方法的報(bào)道，建立氣相色譜_ 電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性和定量分析糧谷和動(dòng)物源性食品中氟唑菌酰胺殘留 量的檢測(cè)方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種GC-EI-MS測(cè)定果蔬中氟唑菌酰胺殘留的方法。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種GC-EI-MS測(cè)定果蔬中氟唑菌 酰胺殘留的方法，包括如下步驟：
[0008] (1)提取 稱取樣品于具塞離心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取lmin，加入氯化 鈉或乙酸鈉中的一種和無(wú)水硫酸鎂，振蕩后離心。
[0009] (2)凈化 移取樣品提取液上清液于離心管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，渦旋振蕩，離心，吸取 一定量?jī)艋旱獨(dú)獯蹈珊?，用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑溶解定容，過(guò)膜后，待氣 相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)檢測(cè)。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含氟唑菌酰胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時(shí)，得樣品提取凈 化殘?jiān)尤脒m量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的氟唑菌酰胺系列混合 標(biāo)準(zhǔn)工作液。
[0011] (4)氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜法(GC-EI-MS)測(cè)定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-EI-MS測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-EI-MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中氟唑菌酰胺的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線，得到樣品液中氟唑菌酰胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中氟 唑菌酰胺殘留量;若上機(jī)溶液中氟唑菌酰胺殘留量超過(guò)線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為脫水蔬菜和水果，需降低稱樣量，并加適量水充分浸潤(rùn)。
[0013] 步驟（1)中采用乙腈提取時(shí)加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時(shí)加 入乙酸鈉鹽析;含水量較少的樣品鹽析時(shí)需加入一定量的水。
[0014] 步驟(2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由無(wú)水硫酸鎂、C18和PSA組成，每毫升提取液中無(wú) 水硫酸鎂、C 18和PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25μπι;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：lyL;恒流模式，流速 1. OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分鐘2 °C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0016] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式：電子轟擊 電離，即EI模式，能量70eV;掃描方式：選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM)模式，監(jiān)測(cè)的離子為：159.0、 160.0、381.1、382.1。
[0017] 步驟(4)中測(cè)定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在這種農(nóng)藥;若 上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡(jiǎn)便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-EI-MS應(yīng)用于蔬菜和水果中氟唑菌酰胺定性確 證和定量檢測(cè)，平均回收率為88.2 %~97.9 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.5 %~7.8%， 檢出限低于1.14yg/kg，具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。能滿足美 國(guó)、歐盟、日本等國(guó)家對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的技術(shù)要求，為保障我國(guó)人民食品安全及對(duì)外出 口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為添加在空白蘋果基質(zhì)中的氟唑菌酰胺標(biāo)液的選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含氟唑菌酰胺的蘋果空白樣品的選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為以不含氟唑菌酰胺的蘋果空白樣品為基質(zhì)配制的氟唑菌酰胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線。
【具體實(shí)施方式】
[0023]現(xiàn)以以下實(shí)施實(shí)例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024]實(shí)施例中使用的儀器與試劑
[0025] T18Basic均質(zhì)器（IKA，Germany); 5810R離心機(jī)（Eppendorf，Germany) ;MS3基本型 旋渦混合器（1以，66^&即）；789(^氣相色譜-5977(：質(zhì)譜儀以8丨161^，1^4) ;乙二胺-1丙基 硅烷(PSA)吸附劑(40~60μπι)、十八烷基硅烷鍵合相(C18)凈化劑(40~60μπι)均購(gòu)于美國(guó)安 捷倫科技有限公司。
[0026] 試劑：乙腈、丙酮、正己燒(HPLC級(jí)，Merke，Germany);乙酸（HPLC級(jí)，CNW，Germany); 無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉和乙酸鈉為分析純，均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0027] 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度99.5%，購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司。
[0028] 實(shí)施例1:蘋果中氟唑菌酰胺殘留量的檢測(cè)
[0029] (1)樣品前處理 稱取經(jīng)充分混勾的蘋果10. 〇g于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入20mL乙腈，均質(zhì)提取lmin，加 入3g無(wú)水硫酸鎂和2g氯化鈉，禍旋lmin后，7000r/min離心5min。離心后，取6mL乙腈提取液 轉(zhuǎn)移至裝有900mg無(wú)水硫酸鎂、300mg Cis和150mg PSA的離心管中，禍旋lmin，5000r/min離 心5min。取4mL上清液于氮吹管中，于40°C氮?dú)獯蹈桑尤塍w積比為1/1的丙酮/正己烷混合 溶劑溶解殘?jiān)?，渦旋混勻過(guò)膜后，移入進(jìn)樣瓶中待GC-EI-MS測(cè)定。
[0030] (2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 準(zhǔn)確稱取25±0. lmg標(biāo)準(zhǔn)品于25mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容得1000.Oyg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ) 備液