一種含溶原性噬菌體抗病毒尿素及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)用服料及生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種抗病毒尿素，具體涉及一種含溶 原性瞻菌體抗病毒尿素及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 由于我國傳統(tǒng)的農(nóng)耕方式，作物重巷種植，致使±壤中積累大量病毒，影響農(nóng)作物 產(chǎn)量。
[0003] 近幾年研究的各種緩控釋服新型服料起到了減緩尿素分解延長服效的作用，均不 具有殺菌抗病毒的作用。
[0004] 瞻菌體廣泛分布在±壤、空氣、水和動物腸道中，溶原性瞻菌體亦稱溫和瞻菌體， 是原瞻菌體感染大腸桿等宿主菌將其自身的基因組整合進宿主菌的基因組，將該種溶原性 瞻菌體細胞放入培養(yǎng)基中厭氧培養(yǎng)，被感染的宿主菌細胞即溶原性瞻菌體細胞生長繁殖， 寄宿在細胞內(nèi)的原瞻菌體基因組不變。
[0005] 穩(wěn)定條件下，原瞻菌體不會產(chǎn)生許多子代瞻菌體，宿主菌宿主細胞也不會破裂死 亡，當(dāng)把該種溶原性瞻菌體細胞放入±壤樣本中并暴露在空氣中，在光學(xué)顯微鏡下觀察，溶 原性瞻菌體細胞破裂，釋放出許多原瞻菌體子代顆粒，并迅速增殖感染±壤中的病原菌致 其死亡。
[0006] 中國專利CN201110173808.6 "-種含芽抱菌尿素及制備方法"將芽抱菌應(yīng)用于尿 素生產(chǎn)，制備得到的抗病毒尿素可消除因作物重巷而引起的爛根、莖葉枯萎等現(xiàn)象，得明顯 的增產(chǎn)效果。根據(jù)市場需求和已具備的研究成果，根據(jù)溶原性瞻菌體獨有的殺菌特性，將溶 原性瞻菌體應(yīng)用于尿素生產(chǎn)，制備一種含溶原性瞻菌體的殺菌抗病尿素是可行且十分必要 的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，通過大量的研究和實驗，提供一種 含溶原性瞻菌體抗病毒尿素，同時，本發(fā)明還提供了含溶原性瞻菌體抗病毒尿素的制備方 法。
[0008] -種含溶原性瞻菌體抗病毒尿素，成分包括溶原性瞻菌體0. 25~0. 5wt%和尿素 99~99. 5wt% ;所述的尿素含氮量45~46. 5wt%，含亞甲基二脈0. 2~0. 5wt% (W肥冊 計）；其中，尿素含氮量優(yōu)選46~46. 5wt%。
[0009] 所述的溶原性瞻菌體包括溶原性大腸桿菌瞻菌體、溶原性綠賊桿菌瞻菌體和溶原 性葡萄球菌瞻菌體等。
[0010] 上述含溶原性瞻菌體抗病毒尿素的制備方法，包括W下步驟： (1)制備溶原性瞻菌體發(fā)酵液 在動物的排泄物中篩選出被瞻菌體感染的宿主菌，即溶原性瞻菌體，將得到的溶原性 瞻菌體放入培養(yǎng)基中，搖床內(nèi)37C恒溫培養(yǎng)2化，得培養(yǎng)液；將得到的培養(yǎng)液用接種環(huán)涂于 瓊脂平板上，網(wǎng)狀劃線后，置于保溫箱內(nèi)，恒溫37°C放置2化，挑選出生長粗壯的溶原性瞻 菌體重新放入培養(yǎng)基中，在搖床中37C繼續(xù)培養(yǎng)2化，如此重復(fù)5次，得單菌落的溶原性瞻 菌體種子液，然后放入裝有培養(yǎng)基的反應(yīng)罐內(nèi)，37C厭氧培養(yǎng)30h，過濾，得到溶原性瞻菌體 發(fā)酵液； 步驟（1)中所述的溶原性瞻菌體，可通過光學(xué)顯微鏡篩選，其形態(tài)為瞻菌體頭部和尾部 吸附在宿主菌細胞壁上，此時瞻菌體的基因組已經(jīng)整合進宿主菌的基因組；本發(fā)明溶原性 瞻菌體也可通過市場購買直接得到； 步驟（1)所述的培養(yǎng)基制備方法是；分別稱取W下重量份的原料：葡萄糖20、牛肉蛋白 腺5、酵母粉5、磯酸二氨鐘2、磯酸氨二鐘2、氯化巧1、硫酸鎮(zhèn)1和純凈水64,混合，攬拌溶 解即可； 步驟（1)中溶原性瞻菌體接種量為培養(yǎng)基質(zhì)量的3% ; 步驟（1)中反應(yīng)罐選取帶攬拌的不鎊鋼反應(yīng)蓋，裝料前需做無菌處理，裝料后進行實罐 滅菌，冷卻后，再移入種子液；具體方法為；首先用水清洗干凈，進行空罐滅菌，用15CTC的 水蒸氣蒸煮20min，冷卻至37C，然后將預(yù)先制備的培養(yǎng)基裝入經(jīng)滅菌處理的生化反應(yīng)器 內(nèi)，進行實罐滅菌溫度11(TC，時間15min，滅菌后在反應(yīng)器夾套內(nèi)通水降溫至37C ; 步驟（1)中厭氧培養(yǎng)條件為，在PH為7,溫度為37~37. 5°C，攬拌轉(zhuǎn)速為l(K)r/min ; 步驟（1)中溶原性瞻菌體發(fā)酵液經(jīng)液相色譜儀測定生物量達到120~125g/l，即每升 發(fā)酵液中含120~125g溶原性瞻菌體； (2)高培噴霧造粒制備含溶原性瞻菌體的尿素 用高壓烙融粟將烙融狀態(tài)的尿素，即尿液打入造粒培頂部的尿液噴射器，將尿液噴灑 為細霧狀，同時將步驟（1)得到的溶原性瞻菌體發(fā)酵液打入尿素造粒培頂部的旋流式噴射 器，溶原性瞻菌體發(fā)酵液噴灑為細霧狀，上述兩種細霧狀的微滴在降落過程中均勻混合，逐 步聚集形成顆粒，溶原性瞻菌體發(fā)酵液被包含在尿素顆粒中，即得本發(fā)明含溶原性瞻菌體 抗病毒尿素。 步驟（2)中溶原性瞻菌體發(fā)酵液粟流量為16L/min，尿液噴射粟流量為65化/min,每噸 尿液加入20L溶原性瞻菌體發(fā)酵液。
[0011] 本發(fā)明含溶原性瞻菌體抗病毒尿素，可有效殺滅根腫菌屬、粉麻菌屬、霜霉屬、盤 梗菌屬、擔(dān)子菌亞口中的粉菌和鎊菌。
[0012] 本發(fā)明含溶原性瞻菌體抗病毒尿素，廣泛適用于小麥、玉米、水稻、棉花、蔬菜、水 果等農(nóng)作物的追服和基服。采集常年種植玉米、小麥、地瓜、棉花作物的大田±壤樣本，慘入 本發(fā)明含溶原性瞻菌體的尿素與慘普通尿素的樣本比較，6化后在高倍光學(xué)顯微鏡下觀察， 慘入含溶原性瞻菌體尿素的±壤樣本中所含細菌活體，為慘普通尿素的±壤樣本中所含菌 活體的25%左右。
[0013] 本發(fā)明一種含溶原性瞻菌體抗病毒尿素及其制備方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益 效果為；采用高培噴霧融合造粒工藝，將篩選培育的溶原性瞻菌體包含在尿素顆粒中，當(dāng)尿 素施入±壤中被水分溶解，條件變化至適合菌體的生長繁殖時，宿主菌細胞破裂，寄宿在宿 主菌內(nèi)的原瞻菌體在±壤中迅速繁殖侵染周圍的細菌、真菌、放線菌、酶菌及螺旋體等微生 物，致其死亡，消除±壤中不利于作物生長的病毒細菌，同時抑制了脈酶、硝化酶對尿素的 分解，達到延長服效的作用。
【附圖說明】
[0014] 圖1為本發(fā)明含溶原性瞻菌體抗病毒尿素制備方法的工藝流程簡圖。 具體實施方案
[0015] 下面通過實施例詳細的說明本發(fā)明有益效果。
[001引 實施例1 (1) 制備溶原性瞻菌體發(fā)酵液 采集動物大便樣本，濾除固體雜質(zhì)，將濾液均勻涂布在鏡片上，放置在高倍光學(xué)顯微 鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)若干被入瞻菌體頭部和尾部嵌入的大腸桿菌等宿主菌細胞，將其選出，此 時瞻菌體已將自身的基因整合到大腸桿菌的細胞基因組內(nèi)，即為溶原性瞻菌體；將采集的 溶原性瞻菌體放入裝有培養(yǎng)基的搖瓶內(nèi)，然后放入搖床內(nèi)，37C恒溫培養(yǎng)2化，得到的培養(yǎng) 液用接種環(huán)涂布在3~5只瓊脂平板盒上W網(wǎng)狀方式劃線，放在恒溫箱內(nèi)，于37C靜止培 養(yǎng)2化，在顯微鏡下挑選出生長粗壯的溶原性瞻菌體細胞，放入裝有重新配制的培養(yǎng)基搖瓶 內(nèi)，在搖床中37C繼續(xù)培養(yǎng)2化，如此重復(fù)5次，得到單菌落的溶原性瞻菌體種子液，然后放 入裝有