專利名稱：乙酰膽堿酯酶抑制劑石杉?jí)A甲的提取新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種乙酰膽堿酯酶抑制劑石杉?jí)A甲的提取新方法。
石杉?jí)A甲(簡(jiǎn)稱Hup A，結(jié)構(gòu)式如下)又名福定堿，是從石杉科石杉屬蛇足杉(千層塔)中分離得到的一種天然生物堿，是強(qiáng)效的可逆性乙酰膽堿酯酶(Ach E)抑制劑，對(duì)早老性癡呆癥、單純記憶障礙以及重癥肌無(wú)力癥治療有顯著療效，且藥效持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)，是目前國(guó)內(nèi)外上述病癥最有效的藥物，深受關(guān)注。由于它的治療指數(shù)高，且作用時(shí)間長(zhǎng)，在國(guó)際上已被列為第二代乙酰膽堿酯酶的抑制劑之一。但Hup A在自然界中存在量極低，與之共存有大量雜質(zhì)，雖有人曾試圖利用人工合成的辦法獲得，但因合成產(chǎn)品明顯無(wú)上述生物學(xué)活性而放棄，至今國(guó)內(nèi)外有大量研究人員為尋找較理想的提取分離方法不斷在進(jìn)行探討。 分子式C15H18N2O分子量242.32迄今為止，能勉強(qiáng)用于石杉?jí)A甲的生產(chǎn)工藝是酸液充分浸泡千層塔干燥粉→堿酸處理氯仿反復(fù)萃取→濃縮成流浸膏→硅膠柱層析→多相溶劑洗脫并收集餾分→濃縮至干→反復(fù)重結(jié)晶直至得到合格產(chǎn)品止。
工藝特點(diǎn)①大量使用有毒有機(jī)溶劑甲醇和氯仿；②費(fèi)時(shí)(一個(gè)周期約需1個(gè)月)；③得率低(小于百萬(wàn)分之五)；④不能工廠化生產(chǎn)。
本發(fā)明的目的是提供一種乙酰膽堿酯酶抑制劑石杉?jí)A甲的提取新方法。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取下列措施乙酰膽堿酯酶抑制劑石杉?jí)A甲的提取步驟如下①藥材稀酸加熱浸泡50～60℃下0.5～1.5％酒石酸充分浸泡千層塔干粉12～18小時(shí)，離心分離得上清液；②稀酸堿處理氯仿萃取用稀堿氨水調(diào)pH值，氯仿反復(fù)萃取三次，濃縮回收氯仿，濃縮液應(yīng)為原體積的1/10～1/15，再用0.5～1.5％NaOH反萃取，合并萃取液后用氨水調(diào)堿，氯仿再萃取三次；③濃縮40℃～50℃左右真空濃縮回收氯仿，成浸膏；④稀堿萃取除雜用pH8.0～8.2的稀氨水溶液等比例萃取濃縮液二次，棄水層；⑤稀酸反萃取用0.2～0.5N的HCl水溶液等比例萃取上述④的氯仿層，除去與石杉?jí)A甲共存的色素雜質(zhì)，棄氯仿層；⑥活性炭脫色取酸水萃取液，用水稀釋10～20倍，HCl調(diào)至pH1～2，活性炭用量為稀釋前體積的10～20％，攪拌脫色5～10分鐘，過(guò)濾得無(wú)色透明液體；⑦堿調(diào)、氯仿萃取并濃縮至干脫色液用濃氨水調(diào)pH9～10，以等體積氯仿萃取一次，真空濃縮回收氯仿至干，得微紅色固體；⑧丙酮重結(jié)晶加適量丙酮于上述紅色固體中，加熱回流使溶解，冷卻至室溫后，于0～10℃下結(jié)晶，得類白色固體，純度＞90％，再加少量氯仿溶解后，同法丙酮重結(jié)晶，得白色固體，純度＞97％，同法三次結(jié)晶后產(chǎn)品純度＞99％。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)①大大減少了有毒有機(jī)溶劑的使用；②周期短(一般為3～4天)；③得率高(大于十萬(wàn)分之五)；④易于工廠化生產(chǎn)。
下面結(jié)合實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明石杉?jí)A甲的生產(chǎn)工藝流程稀酸加熱充分浸泡千層塔干燥粉→稀堿酸處理氯仿萃取→濃縮→稀堿萃取除雜→稀酸反萃取→活性炭脫色→堿調(diào)、氯仿萃取并濃縮至干→丙酮重結(jié)晶→純品。
實(shí)施例1石杉?jí)A甲的提取步驟如下①藥材稀酸加熱浸泡50℃下0.5％酒石酸充分浸泡千層塔干粉12小時(shí)，離心分離得上清液。傳統(tǒng)工藝通常室溫浸提36小時(shí)以上，費(fèi)時(shí)。
②稀酸堿處理氯仿萃取用稀堿氨水調(diào)pH值，氯仿反復(fù)萃取三次，濃縮回收氯仿，濃縮液應(yīng)為原體積的1/10，再用0.5％NaOH反萃取，合并萃取液后用氨水調(diào)堿，氯仿再萃取三次。
③濃縮40℃左右真空濃縮回收氯仿，成浸膏。
④稀堿萃取除雜用pH8.0的稀氨水溶液等比例萃取濃縮液二次，棄水層。
⑤稀酸反萃取用0.2N的HCl水溶液等比例萃取上述④的氯仿層，除去與石杉?jí)A甲共存的色素雜質(zhì)，棄氯仿層。此步為本專利的關(guān)鍵技術(shù)之一。
⑥活性炭脫色取酸水萃取液，用水稀釋10倍，HCl調(diào)至pH1.0，活性炭用量為稀釋前體積的10％。攪拌脫色5分鐘，過(guò)濾得無(wú)色透明液體。
⑦堿調(diào)、氯仿萃取并濃縮至干脫色液用濃氨水調(diào)pH9.0，以等體積氯仿萃取一次，真空濃縮回收氯仿至干，得微紅色固體。
⑧丙酮重結(jié)晶加適量丙酮于上述紅色固體中，加熱回流使溶解，冷卻至室溫后，于0℃下結(jié)晶，得類白色固體，純度＞90％。再加少量氯仿溶解后，同法丙酮重結(jié)晶，得白色固體，純度＞97％。同法三次結(jié)晶后產(chǎn)品純度＞99％。完成上述全過(guò)程一般需要3～4天，由藥材計(jì)算收得率為十萬(wàn)分之五左右。
實(shí)施例2石杉?jí)A甲提取步驟如下①藥材稀酸加熱浸泡55℃下1％酒石酸充分浸泡千層塔干粉15小時(shí)，離心分離得上清液；②稀酸堿處理氯仿萃取用稀堿氨水調(diào)pH值，氯仿反復(fù)萃取三次，濃縮回收氯仿，濃縮液應(yīng)為原體積的1/12，再用1％NaOH反萃取，合并萃取液后用氨水調(diào)堿，氯仿再萃取三次；③濃縮45℃左右真空濃縮回收氯仿，成浸膏；④稀堿萃取除雜用pH8.0的稀氨水溶液等比例萃取濃縮液二次，棄水層；⑤稀酸反萃取用0.2N的HCl水溶液等比例萃取上述④的氯仿層，除去與石杉?jí)A甲共存的色素雜質(zhì)，棄氯仿層；⑥活性炭脫色取酸水萃取液，用水稀釋15倍，HCl調(diào)至pH1.5，活性炭用量為稀釋前體積的15％。攪拌脫色8分鐘，過(guò)濾得無(wú)色透明液體；⑦堿調(diào)、氯仿萃取并濃縮至干脫色液用濃氨水調(diào)pH9.5，以等體積氯仿萃取一次，真空濃縮回收氯仿至干，得微紅色固體；⑧丙酮重結(jié)晶加適量丙酮于上述微紅色固體中，加熱回流使溶解，冷卻至室溫后，于5℃下結(jié)晶，得類白色固體，純度＞90％，再加少量氯仿溶解后，同法丙酮重結(jié)晶，得白色固體，純度＞97％，同法三次結(jié)晶后產(chǎn)品純度＞99％；
實(shí)施例3石杉?jí)A甲的提取步驟如下①藥材稀酸加熱浸泡60℃下1.5％酒石酸充分浸泡千層塔干粉18小時(shí)，離心分離得上清液。傳統(tǒng)工藝通常室溫浸提36小時(shí)以上，費(fèi)時(shí)。
②稀酸堿處理氯仿萃取用稀堿氨水調(diào)pH值，氯仿反復(fù)萃取三次，濃縮回收氯仿，濃縮液應(yīng)為原體積的1/15，再用1.5％NaOH反萃取，合并萃取液后用氨水調(diào)堿，氯仿再萃取三次。
③濃縮50℃左右真空濃縮回收氯仿，成浸膏。
④稀堿萃取除雜用pH8.2的稀氨水溶液等比例萃取濃縮液二次，棄水層。
⑤稀酸反萃取用0.5N的HCl水溶液等比例萃取上述④的氯仿層，除去與石杉?jí)A甲共存的色素雜質(zhì)，棄氯仿層。此步為本專利的關(guān)鍵技術(shù)之一。
⑥活性炭脫色取酸水萃取液，用水稀釋20倍，HCl調(diào)至pH2，活性炭用量為稀釋前體積的20％。攪拌脫色10分鐘，過(guò)濾得無(wú)色透明液體。
⑦堿調(diào)、氯仿萃取并濃縮至干脫色液用濃氨水調(diào)pH10，以等體積氯仿萃取一次，真空濃縮回收氯仿至干，得微紅色固體。
⑧丙酮重結(jié)晶加適量丙酮于上述微紅色固體中，加熱回流使溶解，冷卻至室溫后，于10℃下結(jié)晶，得類白色固體，純度＞90％。再加少量氯仿溶解后，同法丙酮重結(jié)晶，得白色固體，純度＞97％。同法三次結(jié)晶后產(chǎn)品純度＞99％。完成上述全過(guò)程一般需要3～4天，由藥材計(jì)算收得率為十萬(wàn)分之五左右。
產(chǎn)品質(zhì)量分析(1)高效液相色譜(HPLC)分析日本島津LC-10A型HPLC儀，流動(dòng)相甲醇∶蒸餾水∶三乙醇胺=500∶500∶1，等比例洗脫，流量為0.8ml/min；柱溫35℃；色譜柱為ODS-C18(150mm×6mmid.)；靈敏度為0.01aufs；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm；參照對(duì)照品保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。HPLC分析結(jié)果，所得產(chǎn)品純度＞99％。
(2)紫外掃描采用日本島津UV-2110型可見紫外掃描儀，200～400范圍內(nèi)掃描，兩個(gè)吸收峰分別為231nm和313nm。
(3)熔點(diǎn)測(cè)定采用藥典規(guī)定方法，得產(chǎn)品熔點(diǎn)為229℃。
權(quán)利要求
1．一種乙酰膽堿酯酶抑制劑石杉?jí)A甲的提取新方法，其特征在于它的步驟如下①藥材稀酸加熱浸泡50～60℃下0.5～1.5％酒石酸充分浸泡千層塔干粉12～18小時(shí)，離心分離得上清液；②稀酸堿處理氯仿萃取用稀堿氨水調(diào)pH值，氯仿反復(fù)萃取三次，濃縮回收氯仿，濃縮液應(yīng)為原體積的1/10～1/15，再用0.5～1.5％NaOH反萃取，合并萃取液后用氨水調(diào)堿，氯仿再萃取三次；③濃縮40℃～50℃左右真空濃縮回收氯仿，成浸膏；④稀堿萃取除雜用pHg.0～8.2的稀氨水溶液等比例萃取濃縮液二次，棄水層；⑤稀酸反萃取用0.2～0.5N的HCl水溶液等比例萃取上述④的氯仿層，除去與石杉?jí)A甲共存的色素雜質(zhì)，棄氯仿層；⑥活性炭脫色取酸水萃取液，用水稀釋10～20倍，HCl調(diào)至pH1～2，活性炭用量為稀釋前體積的10～20％，攪拌脫色5～10分鐘，過(guò)濾得無(wú)色透明液體；⑦堿調(diào)、氯仿萃取并濃縮至干脫色液用濃氨水調(diào)pH9～10，以等體積氯仿萃取一次，真空濃縮回收氯仿至干，得微紅色固體；⑧丙酮重結(jié)晶加適量丙酮于上述微紅色固體中，加熱回流使溶解，冷卻至室溫后，于0～10℃下結(jié)晶，得類白色固體，純度＞90％，再加少量氯仿溶解后，同法丙酮重結(jié)晶，得白色固體，純度＞97％，同法三次結(jié)晶后產(chǎn)品純度＞99％。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乙酰膽堿酯酶抑制劑石杉?jí)A甲的提取新方法，其特征在于它的步驟如下①藥材稀酸加熱浸泡55℃下1％酒石酸充分浸泡千層塔干粉15小時(shí)，離心分離得上清液；②稀酸堿處理氯仿萃取用稀堿氨水調(diào)pH值，氯仿反復(fù)萃取三次，濃縮回收氯仿，濃縮液應(yīng)為原體積的1/12，再用1％NaOH反萃取，合并萃取液后用氨水調(diào)堿，氯仿再萃取三次；③濃縮45℃左右真空濃縮回收氯仿，成浸膏；④稀堿萃取除雜用pH8.0的稀氨水溶液等比例萃取濃縮液二次，棄水層；⑤稀酸反萃取用0.2N的HCl水溶液等比例萃取上述④的氯仿層，除去⑤稀酸反萃取用0.2N的HCl水溶液等比例萃取上述④的氯仿層，除去與石杉?jí)A甲共存的色素雜質(zhì)，棄氯仿層；⑥活性炭脫色取酸水萃取液，用水稀釋15倍，HCl調(diào)至pH1.5，活性炭用量為稀釋前體積的15％。攪拌脫色8分鐘，過(guò)濾得無(wú)色透明液體；⑦堿調(diào)、氯仿萃取并濃縮至干脫色液用濃氨水調(diào)pH9.5，以等體積氯仿萃取一次，真空濃縮回收氯仿至干，得微紅色固體；⑧丙酮重結(jié)晶加適量丙酮于上述微紅色固體中，加熱回流使溶解，冷卻至室溫后，于5℃下結(jié)晶，得類白色固體，純度＞90％，再加少量氯仿溶解后，同法丙酮重結(jié)晶，得白色固體，純度＞97％，同法三次結(jié)晶后產(chǎn)品純度＞99％；
全文摘要
本發(fā)明公開了一種乙酰膽堿酯梅抑制劑石杉?jí)A甲的提取新方法。它的步驟為:①藥材稀酸加熱浸泡,②稀酸堿處理氯仿萃取,③濃縮,④稀堿萃取除雜,⑤稀酸反萃取,⑥活性炭脫色,⑦堿調(diào)、氯仿萃取并濃縮至干,⑧丙酮重結(jié)晶。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:①大大減少了有毒有機(jī)溶劑的使用,②周期短(一般為3～4天),③得率高(大于十萬(wàn)分之五),④易于工廠化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07D221/06GK1306960SQ00101469
公開日2001年8月8日 申請(qǐng)日期2000年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2000年1月21日
發(fā)明者沈生榮, 徐月榮, 金超芳, 沈杰 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)