專利名稱：作為vegf抑制劑的喹唑啉衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及喹唑啉衍生物、其制備方法、含有該化合物作為活性成分的藥物組合物、治療與血管生成和/或血管通透性增加有關(guān)的疾病狀態(tài)的方法、該化合物作為藥物的用途及其在生產(chǎn)用于在溫血動物例如人中產(chǎn)生抗血管生成和/或降低血管通透性作用的藥物中的用途。
正常的血管生成在許多過程，包括胚胎發(fā)育、傷口愈合以及女性生殖功能的多種成分中起重要作用。不希望的或病理性的血管生成與糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬、癌癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動脈粥樣化、卡波濟(jì)氏肉瘤和血管瘤等疾病狀態(tài)有關(guān)(Fan等，1995，TrendsPharmacol.Sci.1657-66；Folkman，1995，Nature Medicine 127-31)。血管通透性的改變被認(rèn)為在正常的和病理性的生理學(xué)過程中均起作用(Cullinan-Bove等，1993，Endocrinology 133829-837；Senger等，1993，Cancer and Metastasis Reviews，12303-324)。已經(jīng)確定了多種具有體外內(nèi)皮細(xì)胞生長促進(jìn)活性的多肽，包括酸性和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(aFGF & bFGF)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)。由于VEGF受體的限制性表達(dá)，VEGF的生長因子活性與FGF相比對內(nèi)皮細(xì)胞的特異性相對較強。最近的證據(jù)表明，VEGF是正常的以及病理性血管生成(Jakeman等，1993，Endocrinology，133848-859；Kolch等，1995，Breast Cancer Research and Treatment，36139-155)和血管通透性(Connolly等，1989，J.Biol.Chem.26420017-20024)的重要刺激物。通過用抗體隔離VEGF來拮抗VEGF的作用可以引起腫瘤生長抑制(Kim等，1993，Nature 362841-844)。
受體酪氨酸激酶(RTK)在生物化學(xué)信號的跨細(xì)胞質(zhì)膜傳導(dǎo)中是非常重要的。這些跨膜分子特征性地構(gòu)成了細(xì)胞外的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過質(zhì)膜內(nèi)的部分與細(xì)胞內(nèi)的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域相連。配體與受體的結(jié)合引起對受體相關(guān)性酪氨酸激酶活性的刺激，從而引起受體和其它細(xì)胞內(nèi)分子上的酪氨酸殘基的磷酸化。這些酪氨酸磷酸化的改變可以引發(fā)導(dǎo)致各種細(xì)胞應(yīng)答的信號級聯(lián)。迄今為止，已證實了至少19種不同的RTK亞族，這些亞族是根據(jù)氨基酸序列的同源性定義的。其中的一個亞族目前包括fms-類酪氨酸激酶受體Flt或Flt1、含有激酶插入結(jié)構(gòu)域的受體、KDR(也稱為Flk-1)和另一種fms-類酪氨酸激酶受體Flt4。這些相關(guān)的RTK，F(xiàn)lt和KDR中的兩種顯示出能夠以高親和性與VEGF結(jié)合(De Vries等，1992，Science 255989-991；Terman等，1992，Biochem.Biophys.Res.Comm.1992，1871579-1586)。VEGF與這些表達(dá)在異種細(xì)胞上的受體的結(jié)合與細(xì)胞蛋白的酪氨酸磷酸化狀態(tài)改變以及鈣流有關(guān)。
在國際專利申請公開號WO 97/30035和WO 98/13354中記載了是VEGF受體酪氨酸激酶抑制劑的喹唑啉衍生物。在WO 97/30035和WO98/13354中，記載了具有抗VEGF受體酪氨酸激酶活性并同時具有一定的抗EGF受體酪氨酸激酶活性的化合物。
本發(fā)明的化合物包括在WO 97/30035和WO 98/13354的一般性公開的寬范圍之內(nèi)。我們發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的化合物對VEGF受體酪氨酸激酶具有非常好的抑制活性。所測試的本發(fā)明化合物對小鼠的多種腫瘤異種移植物顯示出體內(nèi)活性。當(dāng)對大鼠進(jìn)行14天的測試時，本發(fā)明的化合物顯示出良好的毒理學(xué)特性。本發(fā)明的化合物對VEGF受體酪氨酸激酶具有非常好的抑制活性，對小鼠的多種腫瘤異種移植物顯示出體內(nèi)活性，并且當(dāng)對大鼠進(jìn)行14天的測試時，具有良好的毒理學(xué)特性。
本發(fā)明的化合物抑制VEGF的作用，該特性可用于治療與血管生成和/或血管通透性增加有關(guān)的疾病狀態(tài)，例如癌癥、糖尿病、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟(jì)氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、動脈粥樣化、動脈再狹窄、自身免疫疾病、急性炎癥、過度疤痕形成和粘連、子宮內(nèi)膜異位、機能障礙性子宮出血和存在視網(wǎng)膜血管增生的眼病。
本發(fā)明的化合物具有良好的抗VEGF受體酪氨酸激酶活性并同時具有一定的抗EGF受體酪氨酸激酶活性。
此外，某些本發(fā)明的化合物對VEGF受體酪氨酸激酶的效力明顯高于對EGF受體酪氨酸激酶或FGF R1受體酪氨酸激酶的效力。不希望受到理論的束縛，這些化合物可用于例如治療與VEGF有關(guān)的腫瘤，特別是那些在其生長中依賴VEGF的腫瘤。此外還確信，這些化合物可用于治療與VEGF和EGF均有關(guān)的腫瘤，特別是當(dāng)患者所患的腫瘤在其生長中同時依賴VEGF和EGF時。
一方面，本發(fā)明提供了式I的喹唑啉衍生物 其中m是1至3的整數(shù)；R1表示鹵素或C1-3烷基；X1表示-O-；R2選自如下三組之一1)C1-5烷基R3(其中R3是哌啶-4-基，其可以帶有一個或兩個選自羥基、鹵素、C1-4烷基、C1-4羥基烷基和C1-4烷氧基的取代基)；2)C2-5鏈烯基R3(其中R3如上所定義)；3)C2-5鏈炔基R3(其中R3如上所定義)；并且其中的烷基、鏈烯基或鏈炔基均可以帶有一個或多個選自羥基、鹵素和氨基的取代基；或其鹽或其前藥。
優(yōu)選m是2。
優(yōu)選帶有(R1)m的苯基選自2-氟-4-甲基苯基、4-氯-2，6-二氟苯基、4-溴-2，6-二氟苯基、4-氯-2-氟苯基和4-溴-2-氟苯基。
更優(yōu)選帶有(R1)m的苯基選自4-氯-2-氟苯基和4-溴-2-氟苯基。
首選帶有(R1)m的苯基是4-溴-2-氟苯基。
優(yōu)選R2是C1-5烷基R3(其中R3如上所定義)。
更優(yōu)選R2是C1-3烷基R3(其中R3如上所定義)。
具體地講，R2是哌啶-4-基甲基，其中的哌啶環(huán)可以帶有一個或兩個如上所定義的取代基。
更具體地講，R2是哌啶-4-基甲基，其中的哌啶環(huán)可以帶有一個或兩個選自C1-4烷基的取代基。特別優(yōu)選R2是1-甲基哌啶-4-基甲基。另一方面，本發(fā)明提供了式II的喹唑啉衍生物 其中ma是1至3的整數(shù)；R1a表示鹵素或C1-3烷基；X1a表示-O-；R2a選自如下三組之一1)C1-5烷基R3(其中R3如上所定義)；2)C2-5鏈烯基R3(其中R3如上所定義)；3)C2-5鏈炔基R3(其中R3如上所定義)；或其鹽或其前藥。
優(yōu)選ma是2。
優(yōu)選帶有(R1a)ma的苯基選自2-氟-4-甲基苯基、4-氯-2，6-二氟苯基、4-溴-2，6-二氟苯基、4-氯-2-氟苯基和4-溴-2-氟苯基。
更優(yōu)選帶有(R1a)ma的苯基選自4-氯-2-氟苯基和4-溴-2-氟苯基。
首選帶有(R1a)ma的苯基是4-溴-2-氟苯基。
優(yōu)選R2a是C1-5烷基R3(其中R3如上所定義)。
更優(yōu)選R2a是C1-3烷基R3(其中R3如上所定義)。
具體地講，R2a是哌啶-4-基甲基，其中的哌啶環(huán)可以帶有一個或兩個如上所定義的取代基。
更具體地講，R2a是哌啶-4-基甲基，其中的哌啶環(huán)可以帶有一個或兩個選自C1-4烷基的取代基。
特別優(yōu)選R2a是1-甲基哌啶-4-基甲基。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，和4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉及其鹽、特別是其鹽酸鹽。
更優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，和4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉及其鹽、特別是其鹽酸鹽。
特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，和4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉及其鹽、特別是其鹽酸鹽。
更特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉和4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉及其鹽、特別是其鹽酸鹽。
尤其優(yōu)選的本發(fā)明化合物是4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉及其鹽、特別是其鹽酸鹽。
為了避免誤解，應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)在本說明書中提到某個基團(tuán)“如上所定義”時，所述的基團(tuán)包括了首次出現(xiàn)的和最寬的定義以及對于該基團(tuán)的各個和所有的優(yōu)選定義。類似的規(guī)定也適用于“如下所定義的”。
在本說明書中，若無另外說明，術(shù)語“烷基”包括直鏈和支鏈的烷基，但對于單指的烷基例如“丙基”，則特指直鏈的形式。類似的規(guī)定還適用于其它類屬的術(shù)語。若無另外說明，術(shù)語“烷基”主要是指含有1-5個碳原子的烷基鏈，優(yōu)選1-3個碳原子。若無另外說明，文中所用的術(shù)語“烷氧基”包括“烷基”-O-基團(tuán)，其中的“烷基”如上所定義。若無另外說明，文中所用的術(shù)語“芳基”包括C6-10芳基，如需要，該基團(tuán)還可以帶有一個或多個選自鹵素、烷基、烷氧基、硝基、三氟甲基和氰基的取代基，其中的烷基和烷氧基如上所定義。若無另外說明，文中所用的術(shù)語“芳氧基”包括“芳基”-O-基團(tuán)，其中的“芳基”如上所定義。文中所用的術(shù)語“磺酰氧基”是指烷基磺酰氧基和芳基磺酰氧基，其中的“烷基”和“芳基”如上所定義。若無另外說明，文中所用的術(shù)語“鏈烷酰基”包括甲?；屯榛鵆＝O基團(tuán)，其中的“烷基”如上所定義，例如，C2鏈烷?；且阴；?，是指CH3C＝O，C1鏈烷?；羌柞；窩HO。在本說明書中，若無另外說明，術(shù)語“鏈烯基”包括直鏈和支鏈的鏈烯基，但對于單指的鏈烯基例如2-丁烯基，則特指直鏈的形式。若無另外說明，術(shù)語“鏈烯基”主要是指含有2-5個碳原子、優(yōu)選3-5個碳原子的鏈。在本說明書中，若無另外說明，術(shù)語“鏈炔基”包括直鏈和支鏈的鏈炔基，但對于單指的鏈炔基例如2-丁炔基，則特指直鏈的形式。若無另外說明，術(shù)語“鏈炔基”主要是指含有2-5個碳原子、優(yōu)選3-5個碳原子的鏈。
在以上定義的式I中，氫可以存在于喹唑啉基團(tuán)的2、5和8位。
在本發(fā)明中，應(yīng)當(dāng)理解，式I化合物或其鹽可以表現(xiàn)出互變異構(gòu)現(xiàn)象，在本說明書中所畫出的結(jié)構(gòu)式僅代表了其中一種可能的互變異構(gòu)體形式。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括所有可以抑制VEGF受體酪氨酸激酶活性的互變異構(gòu)體形式，并不僅限于結(jié)構(gòu)式圖中所采用的任何一種互變異構(gòu)體形式。
還應(yīng)當(dāng)理解，某些式I化合物及其鹽可以以溶劑化物以及非溶劑化物的形式、例如水合物的形式存在。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括所有可以抑制VEGF受體酪氨酸激酶活性的溶劑化物形式。
為了避免誤解，應(yīng)當(dāng)理解，在式I化合物中，當(dāng)R2是例如式C2-5鏈烯基R3的基團(tuán)時，是鏈烯基部分與X1相連，類似的規(guī)定也適用于其它基團(tuán)。當(dāng)R2是基團(tuán)1-R3丙-1-烯-3-基時，基團(tuán)R3與第一個碳相連，X1與第三個碳相連，同樣，當(dāng)R2是基團(tuán)2-R3戊-3-烯-5-基時，基團(tuán)R3與第二個碳相連，X1與第五個碳相連，類似的規(guī)定也適用于其它基團(tuán)。
式I化合物可以以前藥的形式給藥，所述前藥可以在人或動物體內(nèi)分解產(chǎn)生式I化合物。前藥的例子包括可以在體內(nèi)水解的式I化合物的酯。
各種形式的前藥是現(xiàn)有技術(shù)中已知的。所述前藥衍生物的例子可以參見a)Design of Prodrugs，H.Bundgaard編，(Elsevier，1985)和Methods in Enzymology，42卷，309-396頁，K.Widder等編(Academic Press，1985)；b)A Textbook of Drug Design and Development，Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard編，第5章“前藥的設(shè)計和應(yīng)用”，H.Bundgaard，113-191頁(1991)；c)H.Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews，8，1-38(1992)；d)H.Bundgaard等，Journal of Pharmaceutical Sciences，77，285(1988)；和e)N.Kakeya等，Chem Pharm Bull，32 692(1984)。
含羥基式I化合物的可以在體內(nèi)水解的酯包括無機酯例如磷酸酯(包括氨基磷酸的環(huán)狀酯)和a-酰氧基烷基醚以及可以由于酯在體內(nèi)的水解而分解產(chǎn)生母體羥基的相關(guān)化合物。a-酰氧基烷基醚的例子包括乙酰氧基甲氧基和2，2-二甲基丙酰氧基-甲氧基?？梢允沽u基形成可在體內(nèi)水解的酯的基團(tuán)包括鏈烷?；⒈郊柞；?、苯乙酰基和取代的苯甲?；捅揭阴；?、烷氧基羰基(生成烷基碳酸酯)、二烷基氨基甲?；蚇-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲酰基(生成氨基甲酸酯)、二烷基氨基乙酰基和羧基乙酰基。苯甲酰基上的取代基的例子包括由環(huán)氮原子通過亞甲基連接在苯甲?；h(huán)的3-或4-位上的嗎啉代和1-哌嗪基。
本發(fā)明涉及以上所定義的式I化合物及其鹽。用于藥物組合物的鹽應(yīng)是可藥用鹽，但其它的鹽可用于制備式I化合物及其可藥用鹽。本發(fā)明的可藥用鹽可以包括例如具有足夠的堿性以形成鹽的以上所定義的式I化合物的酸加成鹽。所述酸加成鹽包括例如與可以提供可藥用陰離子的無機或有機酸形成的鹽，例如與氫鹵酸(特別是鹽酸或氫溴酸，特別優(yōu)選鹽酸)、硫酸、磷酸、三氟乙酸、檸檬酸或馬來酸形成的鹽。此外，當(dāng)式I化合物具有足夠的酸性時，還可與可以提供可藥用陽離子的無機或有機堿形成鹽。與無機或有機堿形成的鹽包括，例如堿金屬鹽例如鈉或鉀鹽、堿土金屬鹽例如鈣或鎂鹽、銨鹽或例如與甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、嗎啉或三-(2-羥基乙基)胺形成的鹽。
式I化合物或其鹽以及本發(fā)明的其它化合物(如下所定義)可以通過已知可用于制備化學(xué)上相關(guān)的化合物的任何方法來制備。所述方法包括，例如歐洲專利申請公開號0520722、0566226、0602851和0635498以及國際專利申請公開號WO 97/22596、WO 97/30035、WO97/32856和WO 98/13354中描述的方法。這些方法構(gòu)成了本發(fā)明的另一個特點并且將在下文中進(jìn)行描述。所需的原料可以通過常規(guī)的有機化學(xué)方法得到。在所附的非限定性實施例中描述了所述原料的制備。其它所需的原料可以通過與所描述的方法類似的方法制得，這是一般的有機化學(xué)家所熟知的。
因此，如下方法(a)至(d)和(i)至(iv)構(gòu)成了本發(fā)明的另一個特點。式I化合物的合成(a)式I化合物及其鹽可以通過將式III化合物 (其中R2和X1如上所定義，和L1是可置換的部分)與式IV化合物V反應(yīng)制得 (其中R1和m如上所定義)，由此得到式I化合物及其鹽。適宜的可置換部分L1是例如鹵素、烷氧基(優(yōu)選C1-4烷氧基)、芳氧基或磺酰氧基，例如氯、溴、甲氧基、苯氧基、甲磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基。
該反應(yīng)優(yōu)選在酸或堿的存在下進(jìn)行。所述的酸是，例如無水的無機酸例如氯化氫。所述的堿是，例如有機胺堿，例如吡啶、2，6-二甲基吡啶、三甲吡啶、4-二甲基氨基吡啶、三乙胺、嗎啉、N-甲基嗎啉或二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯，或是例如堿金屬或堿土金屬碳酸鹽或氫氧化物，例如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鈣、氫氧化鈉或氫氧化鉀?；蛘?，所述的堿可以是例如堿金屬氫化物例如氫化鈉或堿金屬或堿土金屬氨化物例如氨基鈉或二(三甲基硅烷基)氨基鈉。反應(yīng)優(yōu)選在惰性溶劑或稀釋劑的存在下進(jìn)行，例如醇或酯例如甲醇、乙醇、2-丙醇或乙酸乙酯、鹵代溶劑例如二氯甲烷、氯仿或四氯化碳、醚例如四氫呋喃或1，4-二氧六環(huán)、芳香烴溶劑例如甲苯或極性非質(zhì)子溶劑例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮或二甲亞砜。反應(yīng)通常在例如10至150℃、優(yōu)選20至80℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
本發(fā)明的化合物可以通過該方法以游離堿的形式得到，或者可以以與H-L1的酸的鹽形式得到，其中的L1具有上述含義。如果需要從鹽制備游離堿，可將鹽用如上所定義的堿通過常規(guī)方法處理。
(b)式I化合物及其鹽可以通過將式V化合物 (其中m、X1和R1如上所定義)與式VI化合物在以上所定義的堿的存在下反應(yīng)方便地制備R2-L1(VI)(其中R2和L1如上所定義)；L1是可置換的部分例如鹵素或磺酰氧基例如溴或甲磺酰氧基。
L1可以是基團(tuán)O-+P(Y)3(其中Y是丁基或苯基)，在該情況下，式VI化合物通常可以就地形成。該反應(yīng)優(yōu)選在堿(如以上方法(a)中所定義)的存在下并且最好在惰性溶劑或稀釋劑(如以上方法(a)中所定義)的存在下、有利地在例如10至150℃的溫度范圍內(nèi)、通常在約50℃下進(jìn)行。
(c)式I化合物及其鹽可以通過將式VII化合物 與式VIII化合物反應(yīng)制得R2-X1-H(VIII)(其中L1、R1、R2、m和X1均如上所定義)。該反應(yīng)通常在堿(如以上方法(a)中所定義)的存在下并且最好在惰性溶劑或稀釋劑(如以上方法(a)中所定義)的存在下、在例如10至150℃的溫度范圍內(nèi)、通常在約100℃下進(jìn)行。
(d)式I化合物及其鹽可以通過將式IX化合物脫保護(hù)制得 其中R1、m和X1均如上所定義，R4表示保護(hù)了的R2基團(tuán)，其中R2如上所定義但另外帶有一個或多個保護(hù)基P2。對保護(hù)基P2的選擇是有機化學(xué)家的一般常識，例如在常規(guī)教科書例如“Protective Groups inOrganic Synthesis”T.W.Greene和R.G.M.Wuts，第2版，Wiley1991中所記載的。優(yōu)選P2是保護(hù)基例如氨基甲酸酯(烷氧基羰基)(例如，叔丁氧羰基、叔戊氧羰基、環(huán)丁氧羰基、丙氧羰基、甲氧羰基、乙氧羰基、異丙氧羰基、烯丙氧羰基或芐氧羰基)。更優(yōu)選P2是叔丁氧羰基。該反應(yīng)優(yōu)選在酸的存在下進(jìn)行。所述的酸是，例如無機酸，例如氯化氫、溴化氫或有機酸例如三氟乙酸、三氟甲磺酸。反應(yīng)可以在惰性溶劑例如二氯甲烷、氯仿以及痕量水的存在下進(jìn)行。反應(yīng)通常在例如10-100℃、優(yōu)選20-80℃的范圍內(nèi)進(jìn)行。中間體的合成(i)其中L1是鹵素的式III化合物及其鹽可以通過例如將式X化合物的鹵化來制備 (其中R2和X1如上所定義)。
常用的鹵化試劑包括無機酸鹵化物，例如亞硫酰氯、三氯化磷(III)、三氯氧磷(V)和五氯化磷(V)。鹵化反應(yīng)通常在惰性溶劑或稀釋劑例如鹵代溶劑如二氯甲烷、氯仿或四氯化碳或芳香烴溶劑例如苯或甲苯的存在下進(jìn)行。反應(yīng)通常在例如10至150℃、優(yōu)選40至100℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
式X化合物及其鹽可以通過例如將式XI化合物 (其中L1如上所定義)與以上所定義的式VIII化合物反應(yīng)制得。該反應(yīng)通常在堿(如以上方法(a)中所定義)的存在下并且最好在惰性溶劑或稀釋劑(如以上方法(a)中所定義)的存在下、在例如10至150℃的溫度范圍內(nèi)、通常在約100℃下進(jìn)行。
式X化合物及其鹽還可以通過將式XII的化合物環(huán)化制得 (其中R2和X1如上所定義，A1是羥基、烷氧基(優(yōu)選C1-4烷氧基)或氨基)，由此形成式X化合物或其鹽。環(huán)化反應(yīng)可以通過將其中A1是羥基或烷氧基的式XII化合物與甲酰胺或者可以引起環(huán)化從而得到式X化合物或其鹽的甲酰胺的等同物例如[3-(二甲基氨基)-2-氮雜亞丙-2-烯基]二甲基氯化銨反應(yīng)來進(jìn)行。環(huán)化反應(yīng)在存在甲酰胺作為溶劑或在惰性溶劑或稀釋劑例如醚，例如1，4-二氧六環(huán)的存在下進(jìn)行。環(huán)化反應(yīng)通常在升高的溫度下進(jìn)行，優(yōu)選在80至200℃之間。式X化合物還可以通過將其中A1是氨基的式XII化合物用甲酸或者可以引起環(huán)化從而得到式X化合物或其鹽的甲酸的等同物環(huán)化來制備?？梢砸瓠h(huán)化的甲酸的等同物包括例如三-C1-4烷氧基甲烷，例如三乙氧基甲烷和三甲氧基甲烷。環(huán)化反應(yīng)通常在催化量的無水酸例如磺酸如對甲苯磺酸和惰性溶劑或稀釋劑例如鹵代溶劑例如二氯甲烷、氯仿或四氯化碳、醚例如乙醚或四氫呋喃或芳香烴溶劑例如甲苯的存在下進(jìn)行。環(huán)化反應(yīng)通常在例如10至100℃、優(yōu)選20至50℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
式XII化合物及其鹽還可以通過例如將式XIII化合物中的硝基還原來制備 (其中R2、X1和A1如上所定義)，得到如上所定義的式XII化合物。硝基的還原可以通過已知用于該轉(zhuǎn)化的任何方法來進(jìn)行。例如，還原可以通過將硝基化合物的溶液在以上所定義的惰性溶劑或稀釋劑的存在下、在可以有效催化氫化反應(yīng)的金屬例如鈀或鉑的存在下氫化來進(jìn)行。另一種還原劑是活化的金屬例如活化的鐵(通過例如將鐵粉用酸例如鹽酸的稀溶液洗滌制得)。因此，還原反應(yīng)可以通過例如將硝基化合物和活化的金屬在溶劑或稀釋劑例如水和醇例如甲醇或乙醇的混合物的存在下加熱至例如50至150℃，通常是約70℃來進(jìn)行。
式XIII化合物及其鹽可以通過例如將式XIV化合物 (其中L1和A1如上所定義)與以上所定義的式VIII化合物反應(yīng)來制備，得到式XIII的化合物。式XIV化合物和式VIII化合物的反應(yīng)通常在以上方法(c)中所描述的條件下進(jìn)行。
式XIII化合物及其鹽還可以通過將式XV化合物 (其中X1和A1如上所定義)與以上所定義的式VI化合物反應(yīng)來制備，得到以上所定義的式XIII化合物。式XV和VI化合物的反應(yīng)通常在以上方法(b)中所描述的條件下進(jìn)行。
式III化合物及其鹽還可以通過將式XVI化合物 (其中X1如上所定義，L2表示可置換的保護(hù)基部分)與以上所定義的式VI化合物反應(yīng)來制備，由此得到式III化合物，其中L1是由L2表示。
可以使用其中L2表示苯氧基的式XVI化合物，如需要，所述苯氧基可以帶有最多5個、優(yōu)選最多2個選自鹵素、硝基和氰基的取代基。該反應(yīng)可以在以上方法(b)中所描述的條件下進(jìn)行。
以上所定義的式XVI化合物及其鹽可以通過例如將式XVII化合物脫保護(hù)制得 (其中X1和L2如上所定義，P1表示酚羥基保護(hù)基)。對酚羥基保護(hù)基P1的選擇是有機化學(xué)家的一般常識，例如在常規(guī)教科書例如“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”T.W.Greene和R.G.M.Wuts，第2版，Wiley 1991中所記載的，包括醚(例如甲基、甲氧基甲基、烯丙基和芐基以及被最多兩個選自C1-4烷氧基和硝基的取代基取代的芐基)、硅烷基醚(例如叔丁基二苯基硅烷基和叔丁基二甲基硅烷基)、酯(例如乙酸酯和苯甲酸酯)和碳酸酯(例如甲基、芐基和被最多兩個選自C1-4烷氧基和硝基的取代基取代的芐基)。脫保護(hù)可以通過文獻(xiàn)中已知的方法來進(jìn)行，例如，當(dāng)P1表示芐基時，脫保護(hù)可以通過氫解或用三氟乙酸處理來完成。
所述酚羥基保護(hù)基的脫除可以通過已知用于所述轉(zhuǎn)化的任何方法來進(jìn)行，包括在常規(guī)教科書例如上文中所給出的反應(yīng)條件，或者通過相關(guān)的方法來進(jìn)行。優(yōu)選的反應(yīng)條件可以產(chǎn)生羥基衍生物而不會在原料或產(chǎn)物化合物的其它部位發(fā)生不希望的反應(yīng)。例如，當(dāng)保護(hù)基P1是乙酸酯時，轉(zhuǎn)化可以通過將喹唑啉衍生物用以上所定義的堿，包括氨及其單和二烷基化的衍生物處理來完成，反應(yīng)優(yōu)選在質(zhì)子溶劑或助溶劑例如水或醇例如甲醇或乙醇的存在下進(jìn)行。該反應(yīng)可以在以上所定義的另外的惰性溶劑或稀釋的存在下、在0至50℃、通常在約20℃下進(jìn)行。
如需要，可將一種式III化合物轉(zhuǎn)化成另一種其中的L1部分不同的式III化合物。因此，例如，其中的L1不是鹵素(例如是任選取代的苯氧基)的式III化合物可以通過如下方法轉(zhuǎn)化成其中L1是鹵素的式III化合物將式III化合物(其中的L1不是鹵素)水解得到如上所定義的式X化合物，然后向所得到的如上所定義的式X化合物中引入鹵化物，得到其中L1表示鹵素的式III化合物。
(ii)如上所定義的式V化合物及其鹽可以通過將式XIII化合物用例如以上(i)中所描述的方法脫保護(hù)制得 (其中R1、P1、X1和m如上所定義)。
式XVIII化合物及其鹽可以通過將以上所定義的式XVII和IV化合物在以上(a)中所描述的條件下反應(yīng)進(jìn)行制備，得到式XVIII化合物或其鹽。
(iii)以上所定義的式VII化合物及其鹽可以通過將式XIX化合物 (其中L1如上所定義，并且在4-和7-位的L1可以相同或不同)與以上所定義的式IV化合物反應(yīng)制得，反應(yīng)通過以上(a)中描述的方法進(jìn)行。
(iv)式IX化合物可以通過將如上所定義的式V化合物與式XX化合物在以上(b)中描述的條件下反應(yīng)進(jìn)行制備R4-L1(XX)其中R4和L1如上所定義，得到式IX化合物或其鹽。該反應(yīng)優(yōu)選在堿(如以上方法(a)中所定義)的存在下、并且最好在惰性溶劑或稀釋劑(如以上方法(a)中所定義)的存在下、在例如10至150℃、通常是20-50℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
當(dāng)需要式I化合物的可藥用鹽時，該可藥用鹽可以通過將所述化合物與例如含有可藥用陰離子的酸用常規(guī)方法反應(yīng)制得，或者可以通過將所述化合物與堿通過常規(guī)方法反應(yīng)制得。
需要對可以有效抑制與VEGF受體例如Flt和/或KDR有關(guān)的酪氨酸激酶活性以及可以抑制血管生成和/或血管通透性增加的化合物進(jìn)行鑒定，這也是本發(fā)明的主題。這些性質(zhì)可以用例如以下提出的一種或多種方法進(jìn)行評估(a)體外受體酪氨酸激酶抑制試驗該試驗測定測試化合物抑制酪氨酸激酶活性的能力。編碼VEGF或表皮生長因子(EGF)受體細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的DNA可以通過全基因合成(Edwards M，International Biotechnology Lab 5(3)，19-25，1987)或通過克隆得到。然后可將其在適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)系統(tǒng)中表達(dá)以得到具有酪氨酸激酶活性的多肽。例如，發(fā)現(xiàn)通過在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)重組蛋白得到的VEGF和EGF受體細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域顯示固有的酪氨酸激酶活性。在VEGF受體Flt(基因庫登記號X51602)的情況下，從cDNA分離Shibuya等(Oncogene，1990，5519-524)所描述的編碼大部分細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域、從蛋氨酸783開始并且包含終止密碼子的1.7kb的DNA片段然后克隆到桿狀病毒置換型載體(例如pAcYM1(參見The BaculovirusExpression SystemA Laboratory Guide，L.A.King和R.D.Possee，Chapman和Hall，1992)或pAc 360或pBlueBacHis(可從Invitrogen Corporation得到))中。將該重組構(gòu)建體和病毒DNA(例如Pharmingen BaculoGold)共轉(zhuǎn)染到昆蟲細(xì)胞(例如草地夜蛾21(Sf21))內(nèi)以制備重組桿狀病毒。(關(guān)于裝配重組DNA分子以及制備和使用重組桿狀病毒的方法的詳細(xì)描述可以參見常規(guī)的教科書例如Sambrook等，1989，Molecular cloning-A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbour Laboratory Press，以及O＇Reilly等，1992，Baculovirus Expression Vectors-A Laboratory Manual，W.H.Freeman和Co，New York)。關(guān)于其它用于試驗的酪氨酸激酶，可以克隆從蛋氨酸806(KDR，基因庫登記號L04947)和蛋氨酸668(EGF受體，基因庫登記號X00588)開始的細(xì)胞質(zhì)片段并以類似的方式表達(dá)。
對于cFlt酪氨酸激酶活性的表達(dá)，將Sf21細(xì)胞用噬斑純的cFlt重組病毒感染，感染重復(fù)數(shù)為3，并在48小時后進(jìn)行收集。將收集的細(xì)胞用冰冷的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)(10mM磷酸鈉pH7.4，138mM氯化鈉，2.7mM氯化鉀)洗滌，然后用1ml HNTG/PMSF每1000萬個細(xì)胞重新懸浮在冰冷的HNTG/PMSF(20mM Hepes pH7.5，150mM氯化鈉，10％v/v甘油，1％v/v Triton X100，1.5mM氯化鎂，1mM乙二醇-二(β-氨基乙基醚)N，N，N＇，N＇-四乙酸(EGTA)，1mM PMSF(苯基甲磺酰氟)；PMSF在臨用前以新制備的100mM甲醇溶液的形式加入)中。將懸浮液以13,000rpm在4℃下離心10分鐘，取出上清液(酶儲備液)并以等分試樣的形式于-70℃下保存。通過用酶稀釋液(100mM Hepes pH7.4，0.2mM正釩酸鈉，0.1％v/v Triton X100，0.2mM二硫蘇糖醇)稀釋對每一批新的酶儲備液進(jìn)行滴定。對于一般的批次，將酶儲備液用酶稀釋液以1∶2000進(jìn)行稀釋，然后將50μl稀釋的酶用于各試驗孔。
用含有酪氨酸的無規(guī)共聚物例如聚(Glu，Ala，Tyr)6∶3∶1(Sigma P3899)制備底物溶液的儲備液，以1mg/ml在PBS中的儲備液的形式于-20℃下保存，然后用PBS以1比500進(jìn)行稀釋用于平板涂覆。
在試驗前一天，將100μl稀釋的底物溶液分別加入試驗平板(Nuncmaxisorp 96孔免疫平板)的所有的孔中，將孔密封然后于4℃放置過夜。
在試驗的當(dāng)天，棄去底物溶液并將試驗平板的孔用PBST(含有0.05％v/v Tween 20的PBS)洗滌一次，然后用50mM Hepes pH7.4洗滌一次。
將試驗化合物用10％二甲亞砜(DMSO)稀釋并將25μl稀釋了的化合物轉(zhuǎn)移到洗滌過的試驗平板的孔中?！翱偂睂φ湛缀?0％DMSO代替化合物。將25μl含有8μM腺苷-5＇-三磷酸(ATP)的40mM氯化錳(II)加入到所有的試驗孔中，“空白”對照孔除外，“空白”對照孔含有不含ATP的氯化錳(II)。為了開始反應(yīng)，將50μl新稀釋的酶加入各孔中并將平板在室溫下保溫20分鐘。然后除去液體并將各孔用PBST洗滌兩次。向各孔中加入100μl小鼠IgG抗-磷酸酪氨酸抗體(upstateBiotechnology Inc.產(chǎn)品05-321，以1比6000用含有0.5％w/v牛血清白蛋白(BSA)的PBST稀釋)并將平板在室溫下保溫1小時，然后除去液體并將各孔用PBST洗滌兩次。加入100μl辣根過氧化物酶(HRP)-鍵接的綿羊抗小鼠Ig抗體(Amersham產(chǎn)品NXA 931，以1比500用含有0.5％w/v BSA的PBST稀釋)并將平板在室溫下保溫1小時，然后除去液體并將各孔用PBST洗滌兩次。向各孔中加入100μl新制備的2，2＇-連氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)溶液(用一粒50mg的ABTS片(Boehringer 1204 521)在50ml新制備的50mM磷酸鹽-檸檬酸鹽緩沖液pH5.0+0.03％過硼酸鈉(用1粒含有過硼酸鈉的磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖(PCSB)膠囊(Sigma P4922)在100ml蒸餾水中制備)中制備)。然后將平板在室溫下保溫20-60分鐘，直至“總”對照孔的光密度值約為1.0(用平板讀數(shù)分光光度計在405nm下測定)。用“空白”(無ATP)和“總”(無化合物)對照值測定對酶的活性產(chǎn)生50％抑制的測試化合物的稀釋范圍。(b)體外HUVEC增殖試驗該試驗測定測試化合物抑制生長因子刺激的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)增殖的能力。
將HUVEC細(xì)胞分離于MCDB 131(Gibco BRL)+7.5％v/v胎牛血清(FCS)中然后以1000個細(xì)胞/孔的濃度在96孔板上在MCDB 131+2％v/v FCS+3μg/ml肝素+1μg/ml氫化可的松中鋪平板(2～8代)。最少在4小時后，向其中加入適宜的生長因子(即VEGF 3ng/ml、EGF3ng/ml或b-FGF 0.3ng/ml)和化合物。然后將培養(yǎng)物在37℃及7.5％二氧化碳下保溫4天。在第4天，將培養(yǎng)物用1μCi/孔的氚代-胸腺嘧啶核甙(Amersham產(chǎn)品TRA 61)刺激并保溫4小時。用96孔平板收集器(Tomtek)收集細(xì)胞然后用β平板計數(shù)器測定氚的摻入量。用摻入細(xì)胞的放射性(用cpm表示)測定化合物對生長因子刺激的細(xì)胞增殖的抑制作用。(c)體內(nèi)實體瘤疾病模型該試驗測定化合物抑制實體瘤生長的能力。
通過皮下注射在100μl 50％(v/v)Matrigel的無血清培養(yǎng)基溶液中的1×106CaLu-6細(xì)胞/小鼠在雌性無胸腺Swiss nu/nu小鼠的脅腹建立CaLu-6腫瘤異種移植。細(xì)胞移植10天后，將小鼠分成8-10組，以獲得可比較的組平均體積。用游標(biāo)卡尺測量腫瘤并按照如下方法計算體積(1×w)×√(1×w)×(π/6)，其中1是最長的直經(jīng)，w是與最長的直徑垂直的直徑。將測試化合物每天一次口服給藥至少21天，對照動物接受化合物的稀釋劑。每周測量腫瘤兩次。通過將對照組的平均腫瘤體積與治療組相比計算出生長抑制水平，并用學(xué)生t試驗和/或Mann-Whitney秩和試驗確定統(tǒng)計學(xué)顯著性。當(dāng)p＜0.05時，認(rèn)為化合物的抑制作用具有顯著性。
本發(fā)明化合物的毒理學(xué)特性可以用例如下文描述的大鼠14天研究來評估。(d)大鼠的14天毒性試驗該試驗測定化合物增加遠(yuǎn)側(cè)股骨和近側(cè)脛骨的股骨骺生長板的肥大區(qū)的活性，并評估其它組織的組織病理學(xué)改變。
血管生成是長骨伸長過程中軟骨骨化的必需事件，曾有人提出生長板的血管侵入依賴于肥大軟骨細(xì)胞生產(chǎn)VEGF。在用可以特異性結(jié)合VEGF的物質(zhì)治療后，例如，(i)用可溶性VEGF受體嵌合蛋白(Flt-(1-3)-IgG)在小鼠中(Gerber，H-P.，Vu，T.H.，Ryan，A.M.，Kowalski，J.，Werb，Z.和Ferrara，N.VEGF將軟骨成骨形成過程中的肥大軟骨改造、骨化和血管生成聯(lián)系起來，Nature Med.，5623-628，1999)和(ii)用重組人源化的抗-VEGF單克隆IgGI抗體在Cynomologus猴中(Ryan，A.M.，Eppler，D.B.，Hagler，K.E.，Bruner，R.H.，Thomford，P.J.，Hall，R.L.，Shopp，G.M.和O＇Niell，C.A.rhuMAbVEGF-一種抗血管生成的人源化單克隆抗體-的臨床前安全性評估，Tox.Path.，2778-86，1999)，證實了肥大軟骨細(xì)胞區(qū)的擴展和血管生成的抑制。
因此，VEGF受體酪氨酸激酶活性的抑制劑應(yīng)當(dāng)還可以抑制軟骨的血管侵入，并且在生長的動物中增加遠(yuǎn)側(cè)股骨和近側(cè)脛骨的股骨骺生長板的肥大區(qū)。
將化合物通過用球磨于4℃下研磨過夜(至少15小時)懸浮在1％(v/v)聚氧乙烯(20)脫水山梨醇一油酸酯的去離子水溶液中。在臨給藥前，通過攪拌使化合物重新懸浮。通過管飼法每日一次向幼小的Alderley Park大鼠(得自Wistar，體重135-150g，4至8周齡，每組5-6只)口服給藥化合物(0.25ml/100g體重)或賦形劑，連續(xù)給藥14天。在第15天，用高濃度的二氧化碳處死動物并進(jìn)行尸體剖檢。收集包括股脛關(guān)節(jié)的一系列組織，然后通過常規(guī)的組織學(xué)技術(shù)進(jìn)行加工以制備石蠟切片。將組織學(xué)切片用蘇木精和曙紅進(jìn)行染色并通過光學(xué)顯微鏡進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。用形態(tài)測定圖像分析測定股骨和脛骨切片中遠(yuǎn)側(cè)股骨和近側(cè)脛骨的股骨骺生長板面積。通過將對照組的平均骺生長板面積與治療組相比較確定出肥大區(qū)域的增加，并用單尾的學(xué)生t試驗確定統(tǒng)計學(xué)顯著性。當(dāng)p＜0.05時，認(rèn)為化合物的抑制作用具有顯著性。
雖然式I化合物的藥理學(xué)特性隨著結(jié)構(gòu)的改變而改變，但通?？梢栽谌缦聺舛然騽┝肯略谝粋€或多個以上的試驗(a)、(b)、(c)和(d)中證實式I化合物所具有的活性試驗(a)-IC50在例如＜5μM的范圍內(nèi)；試驗(b)-IC50在例如0.001-5μM的范圍內(nèi)；試驗(c)-活性在例如0.1-100mg/kg的范圍內(nèi)；試驗(d)-活性在例如0.1-100mg/kg的范圍內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，在大鼠的14天毒性試驗中評估時，式I化合物具有優(yōu)于國際專利申請公開號WO 98/13354范圍內(nèi)的其它化合物的毒理學(xué)特性。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，在大鼠的14天毒性試驗中評估時，式I化合物具有優(yōu)于國際專利申請公開號WO 97/30035范圍內(nèi)的其它化合物的毒理學(xué)特性。
雖然式I化合物的藥理學(xué)特性隨著結(jié)構(gòu)的改變而改變并且在不同物種之間有所不同，但在大鼠中，在可以使遠(yuǎn)側(cè)股骨和/或近側(cè)脛骨的股骨骺生長板面積產(chǎn)生具有統(tǒng)計學(xué)顯著性的增加的式I化合物的劑量下、優(yōu)選在小于或等于150mg/kg的劑量下、更優(yōu)選在小于或等于100mg/kg的劑量下、特別是在小于或等于50mg/kg劑量下，在我們所進(jìn)行的試驗(d)中，不會在其它組織中產(chǎn)生不可接受的組織病理學(xué)改變。
因此，例如，化合物4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(實施例2)，在按照上述(a)、(b)、(c)和(d)進(jìn)行試驗時，給出如下結(jié)果(a) Flt-IC50為1.6μMKDR-IC50為0.04μMEGFR-IC50為0.5μM(b) VEGF-IC50為0.06μMEGF-IC50為0.17μM基礎(chǔ)-IC50＞3μM(c) 在50mg/kg的劑量下，對腫瘤生長的抑制為78％；p＜0.001(Mann-Whitney秩和試驗)；(d) 在100mg/kg/天的劑量下，在雌性大鼠中引起骺生長板肥大增加了75％；p＜0.001(單尾的學(xué)生t試驗)。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明提供了含有如上所定義的式I化合物或其可藥用鹽以及可藥用賦形劑或載體的組合物。
該組合物可以是適于口服給藥的形式(例如片劑、錠劑、硬或軟膠囊、水或油混懸劑、乳劑、可分散的粉末或顆粒劑、糖漿或酏劑)、適于吸入給藥的形式(例如細(xì)分散的粉末或液體氣霧劑)、適于吹入給藥的形式(例如細(xì)分散的粉末)、適于胃腸外注射的形式(例如，用于靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、血管內(nèi)或輸注給藥的無菌溶液劑、混懸劑或乳劑)、適于局部給藥的形式(例如霜劑、軟膏、凝膠或水或油溶液或混懸液)或適于直腸給藥的形式(例如栓劑)。上述組合物可以用常規(guī)賦形劑以常規(guī)方式制得。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選以單位劑量形式存在。通常將化合物以5-5000mg/平方米動物體面積、即約0.1-100mg/kg范圍內(nèi)的單位劑量向溫血動物給藥?？梢圆捎美?-100mg/kg、優(yōu)選1-50mg/kg范圍內(nèi)的單位劑量，該單位劑量通?？梢蕴峁┲委熡行┝?。單位劑量形式例如片劑或膠囊通常含有例如1-250mg活性成分。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明提供了如上所定義的式I化合物或其可藥用鹽用于治療人或動物體的方法。
我們發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的化合物可以抑制VEGF受體酪氨酸激酶活性，因此，它們的抗血管生成作用和/或其引起血管通透性降低的能力是值得注意的。
本發(fā)明的另一個特點是式I化合物或其可藥用鹽用作藥物，優(yōu)選式I化合物或其可藥用鹽用作用于在溫血動物例如人中產(chǎn)生抗血管生成和/或降低血管通透性作用的藥物。
因此，根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用鹽在生產(chǎn)用于在溫血動物例如人中產(chǎn)生抗血管生成和/或降低血管通透性作用的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一個特點，本發(fā)明提供了在需要治療的溫血動物例如人中產(chǎn)生抗血管生成和/或降低血管通透性作用的方法，該方法包括，向所述動物施用有效量的上文中所定義的式I化合物或其可藥用鹽。
如上所述，治療或預(yù)防具體疾病所需的劑量的大小需要根據(jù)所治療的對象、給藥途徑和所治療疾病的嚴(yán)重程度而改變。優(yōu)選采用1-50mg/kg的每日劑量。但是，每日劑量需要根據(jù)所治療的對象、具體的給藥途徑和所治療疾病的嚴(yán)重程度而改變。因此，最佳的劑量應(yīng)由治療具體患者的醫(yī)生來確定。
以上所定義的抗血管生成和/或降低血管通透性的治療可以作為單一療法應(yīng)用，或者除了本發(fā)明的化合物外還可以涉及一種或多種其它物質(zhì)和/或療法。所述的聯(lián)合治療可以通過同時、順序或分別給藥單獨的治療成分來實現(xiàn)。在醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)領(lǐng)域，通常采用不同形式治療方法的聯(lián)合來治療癌癥患者。在醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)中，除上文中所定義的抗血管生成和/或降低血管通透性療法之外，所述聯(lián)合療法的其它內(nèi)容可以是手術(shù)、放療或化療。所述化療可以包括5種主要的治療劑(i)通過與以上定義不同的機制起作用的其它抗血管生成劑(例如linomide，整聯(lián)蛋白αvβ3功能的抑制劑、血管抑制素(angiostatin)、內(nèi)皮抑制素(endostatin)、razoxin、沙利度胺)，包括血管靶向劑(例如combretastatin磷酸酯和國際專利申請公開號WO 99/02166中記載的血管損傷劑(例如N-乙?；鵦olchinol-O-磷酸酯)，該專利申請所公開的內(nèi)容全文引入本文作為參考)；(ii)細(xì)胞抑制劑例如抗雌激素(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、艾多昔芬)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制劑(例如anastrozole、來曲唑、伏氯唑、依西美坦)、抗孕激素、抗雄激素(例如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、醋酸環(huán)丙孕酮)、LHRH激動劑和拮抗劑(例如醋酸戈舍瑞林、luprolide、abarelix)、睪酮5α-二氫還原酶抑制劑(例如非那雄胺)、抗侵入劑(例如金屬蛋白酶抑制劑例如marimastat和尿激酶纖溶酶原激活物受體功能抑制劑)以及生長因子功能抑制劑(所述生長因子包括例如血小板衍生的生長因子和肝細(xì)胞生長因子，所述抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體、酪氨酸激酶抑制劑和絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑)；(iii)生物學(xué)響應(yīng)調(diào)節(jié)劑(例如干擾素)；(iv)抗體(例如edrecolomab)；和(v)醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)中所用的抗增殖/抗腫瘤藥物及其聯(lián)合形式，例如抗代謝劑(例如抗葉酸劑例如甲氨蝶呤、氟嘧啶類例如5-氟尿嘧啶、嘌呤和腺苷類似物、阿糖胞苷)；抗腫瘤抗生素(例如蒽環(huán)類例如阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素和去甲氧柔紅霉素、絲裂霉素-C、放線菌素D、光輝霉素)；鉑衍生物(例如順鉑、碳鉑)；烷化劑(例如氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、亞硝脲類、噻替派)；抗有絲分裂劑(例如長春花屬生物堿例如長春新堿和紫杉生物堿(taxoids)例如紫杉酚、泰索帝)；酶(例如天冬酰胺酶)；胸苷酸合成酶抑制劑(例如raltitrexed)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如表鬼臼毒素類例如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替堪、伊立替康)。
例如，所述聯(lián)合療法可以通過同時、順序或分別給藥以上所定義的式I化合物例如4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉或其鹽、特別是其鹽酸鹽和WO 99/02166中所記載的血管靶向劑例如N-乙酰基colchinol-O-磷酸酯(WO 99/02166的實施例1)來實現(xiàn)。
如上所述，本發(fā)明所定義的化合物的價值在于其抗血管生成和/或降低血管通透性的作用。預(yù)期所述的本發(fā)明化合物可用于多種疾病狀態(tài)，包括癌癥、糖尿病、牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、卡波濟(jì)氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、動脈粥樣化、動脈再狹窄、自身免疫疾病、急性炎癥、過度疤痕形成和粘連、子宮內(nèi)膜異位、機能障礙性子宮出血和存在視網(wǎng)膜血管增生的眼病。具體地講，預(yù)期所述的本發(fā)明化合物可延緩原發(fā)和復(fù)發(fā)的結(jié)腸、乳腺、前列腺、肺和皮膚等的實體瘤的生長。更具體地講，預(yù)期所述的本發(fā)明化合物可以抑制與VEGF有關(guān)的原發(fā)和復(fù)發(fā)實體瘤的生長，特別是那些在其生長和擴散中明顯依賴于VEGF的腫瘤，包括例如某些結(jié)腸、乳腺、前列腺、肺、女陰和皮膚的腫瘤。
在本發(fā)明的另一方面，預(yù)期式I化合物可以抑制與EGF有關(guān)的原發(fā)和復(fù)發(fā)實體瘤的生長，特別是那些在其生長和擴散中明顯依賴于EGF的腫瘤。
在本發(fā)明的另一方面，預(yù)期式I化合物可以抑制與VEGF和EGF均有關(guān)的原發(fā)和復(fù)發(fā)實體瘤的生長，特別是那些在其生長和擴散中明顯依賴于VEGF和EGF的腫瘤。
除了在治療性藥物中的應(yīng)用外，式I化合物及其可藥用鹽還可在評估VEGF受體酪氨酸激酶活性的抑制劑在實驗室動物例如貓、狗、兔子、猴、大鼠和小鼠中的作用的體外和體內(nèi)試驗系統(tǒng)的開發(fā)和標(biāo)準(zhǔn)化中用作藥理學(xué)工具，作為尋找新的治療劑的一部分。
應(yīng)當(dāng)理解，本說明書中使用的術(shù)語“醚”特指乙醚。
通過如下實施例對本發(fā)明進(jìn)行舉例說明，但本發(fā)明并不受這些實施例的限定，其中，若無另外說明(i)蒸發(fā)通過真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)來完成并且在通過過濾除去殘余的固體例如干燥劑后進(jìn)行；(ii)操作在室溫(即18-25℃)下、在惰性氣氛例如氬氣氛下進(jìn)行；
(iii)柱色譜(通過快速色譜法)和中壓液相色譜(MPLC)在來自E.Merck，Darmstadt(德國)的Merck Kieselgel硅膠(Art.9385)或Merck Lichroprep RP-18(Art.9303)反相硅膠上進(jìn)行；(iv)給出的收率僅僅是說明性的，并不一定是可以達(dá)到的最大值；(v)熔點用Mettler SP62自動熔點儀、油浴裝置或Koffler熱板儀測定，未校正。
(vi)式I終產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)通過核(通常是質(zhì)子)磁共振(NMR)和質(zhì)譜技術(shù)來證實；質(zhì)子磁共振化學(xué)位移值用δ表示，峰的多重性用如下方式表示s，單峰；d，二重峰；t，三重峰；m，多重峰；br，寬峰；q，四重峰；NMR波譜在400MHz的儀器上于24℃下測定。
(vii)對中間體一般未進(jìn)行完全地鑒定，純度通過薄層色譜(TLC)、高效液相色譜(HPLC)、紅外(IR)或NMR分析來評估；(viii)使用了如下縮寫DMF N，N-二甲基甲酰胺DMSO 二甲亞砜THF 四氫呋喃TFA 三氟乙酸NMP 1-甲基-2-吡咯烷酮。實施例1將TFA(3ml)加入到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(673mg，1.2mmol)的二氯甲烷(10ml)懸浮液中。室溫下攪拌1小時后，真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物用水/乙醚的混合物研磨。分出有機層。將水層再次用乙醚洗滌。用2N氫氧化鈉水溶液將水層調(diào)至pH10。將水層用二氯甲烷萃取。將有機層干燥(硫酸鎂)然后真空蒸除溶劑。將固體用乙醚/石油醚(1/1)的混合物研磨，過濾，用乙醚洗滌然后真空干燥得到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(390mg，70.5％)。MS-ESI461-463[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.13-1.3(m，2H)，1.75(d，2H)，1.87-2.0(m，1H)，2.5(d，2H)，3.0(d，2H)，3.96(s，3H)，3.98(d，2H)，7.2 (s，1H)，7.5(dd，1H)，7.55(t，1H)，7.68(dd，1H)，7.80(s，1H)，8.36(s，1H)，9.55(br s，1H)元素分析 實測值C 54.5H 4.9N 12.1C21H22N4O2BrF 理論值C 54.7H 4.8N 12.1％原料的制備如下將7-芐氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(8.35g，27.8mmol)(按照例如WO 97/22596，實施例1的描述制備)和4-溴-2-氟苯胺(5.65g，29.7mmol)的2-丙醇(200ml)溶液加熱回流4小時。過濾收集形成的沉淀，依次用2-丙醇和乙醚洗滌然后真空干燥得到7-芐氧基-4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(9.46g，78％)。1H NMR波譜(DMSOd6；CD3COOD)4.0(s，3H)；5.37(s，2H)；7.35-7.5(m，4H)；7.52-7.62(m，4H)；7.8(d，1H)；8.14(s，1H)；8.79(s，1H)MS-ESI456[MH]+元素分析 實測值 C 54.0 H 3.7 N 8.7C22H17N3O2BrF0.9HCl理論值C 54.2 H 3.7 N 8.6％將7-芐氧基-4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(9.4g，19.1mmol)的TFA(90ml)溶液加熱回流50分鐘。將混合物冷卻然后倒在冰上。過濾收集形成的沉淀然后溶于甲醇(70ml)。用濃氨水將溶液調(diào)至pH9-10。將混合物通過蒸發(fā)濃縮至原體積的一半。過濾收集形成的沉淀，依次用水和乙醚洗滌然后真空干燥得到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(5.66g，82％)。1H NMR波譜(DMSOd6；CD3COOD)3.95(s，3H)；7.09(s，1H)；7.48(s，1H)；7.54(t，1H)；7.64(d，1H)；7.79(s，1H)；8.31(s，1H)MS-ESI366[MH]+元素分析 實測值 C 49.5 H 3.1N 11.3C15H11N3O2BrF理論值C 49.5 H 3.0N 11.5％將二碳酸二叔丁酯(41.7g，0.19mol)的乙酸乙酯(75ml)溶液分批加入到冷卻至5℃的4-哌啶甲酸乙酯(30g，0.19mol)的乙酸乙酯(150ml)溶液中，并保持溫度在0-5℃。室溫攪拌48小時后，將混合物倒入水(300ml)中。分出有機層，依次用水(200ml)、0.1N鹽酸(200ml)、飽和碳酸氫鈉(200ml)和鹽水(200ml)洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸發(fā)得到4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶)甲酸乙酯(48g，98％)。1H NMR波譜(CDCl3)1.25(t，3H)；1.45(s，9H)；1.55-1.70(m，2H)；1.8-2.0(d，2H)；2.35-2.5(m，1H)；2.7-2.95(t，2H)；3.9-4.1(br s，2H)；4.15(q，2H)將1M氫化鋰鋁的THF溶液(133ml，0.133mol)分批加入到冷卻至0℃的4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶)甲酸乙酯(48g，0.19mol)的干燥THF(180ml)溶液中。于0℃下攪拌2小時后，加入水(30ml)，然后加入2N氫氧化鈉(10ml)。用硅藻土過濾除去沉淀并用乙酸乙酯洗滌。將濾液用水、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸發(fā)得到1-(叔丁氧羰基)-4-羥基甲基哌啶(36.3g，89％)。MS(EI)215[M]+1H NMR波譜(CDCl3)1.05-1.2(m，2H)；1.35-1.55(m，10H)；1.6-1.8(m，2H)；2.6-2.8(t，2H)；3.4-3.6(t，2H)；4.0-4.2(brs，2H)將1，4-二氮雜二環(huán)[2.2.2]辛烷(42.4g，0.378mol)加入到1-(叔丁氧羰基)-4-羥基甲基哌啶(52.5g，0.244mol)的叔丁基甲基醚(525ml)溶液中。室溫攪拌15分鐘后，將混合物冷卻至5℃，在2小時時間分批加入甲苯磺酰氯(62.8g，0.33mmol)的叔丁基甲基醚(525ml)溶液，同時保持溫度在0℃。室溫攪拌1小時后，加入石油醚(1升)。過濾除去沉淀。將濾液蒸發(fā)得到固體。將固體溶于乙醚并依次用0.5N鹽酸(2×500ml)、水、飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸發(fā)得到1-(叔丁氧羰基)-4-(4-甲基苯基磺酰氧基甲基)哌啶(76.7g，85％)。MS(ESI)392[MNa]+1H NMR波譜(CDCl3)1.0-1.2(m，2H)；1.45(s，9H)；1.65(d，2H)；1.75-1.9(m，2H)；2.45(s，3H)；2.55-2.75(m，2H)；3.85(d，1H)；4.0-4.2(br s，2H)；7.35(d，2H)；7.8(d，2H)將碳酸鉀(414mg，3mmol)加入到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(546mg，1.5mmol)的DMF(5ml)懸浮液中。室溫攪拌10分鐘后，加入1-(叔丁氧羰基)-4-(4-甲基苯基磺酰氧基甲基)哌啶(636mg，1.72mmol)并將混合物于95℃加熱2小時。冷卻后，將混合物倒入冷水(20ml)中。過濾收集沉淀，用水洗滌然后真空干燥得到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(665mg，79％)。MS-ESI561-563[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.15-1.3(m，2H)，1.46(s，9H)，1.8(d，2H)，2.0-2.1(m，1H)，2.65-2.9(m，2H)，3.95(s，3H)，4.02(brs，2H)，4.05(d，2H)，7.2(s，1H)，7.48(d，1H)，7.55(t，1H)，7.65(d，1H)，7.8(s，1H)，8.35(s，1H)，9.55(br s，1H)實施例2a將37％的甲醛水溶液(50μl，0.6mmol)和氰基硼氫化鈉(23mg，0.36mmol)依次加入到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(139mg，0.3mmol)(按照實施例1中的描述制備)在THF/甲醇(1.4ml/1.4ml)混合物中的溶液中。室溫攪拌1小時后，加入水并真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物用水研磨，過濾，用水洗滌然后真空干燥。將固體通過中性氧化鋁色譜進(jìn)行純化，用二氯甲烷→二氯甲烷/乙酸乙酯(1/1)→二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇(50/45/5)洗脫。將含有預(yù)期產(chǎn)物的餾份真空蒸發(fā)。將得到的白色固體溶于二氯甲烷/甲醇(3ml/3ml)并加入3N氯化氫的乙醚溶液(0.5ml)。真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將固體用乙醚研磨，過濾，用乙醚洗滌然后真空干燥得到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽(120mg，69％)。MS-ESI475-477[MH]+4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽的質(zhì)子化形式的NMR波譜顯示存在A和B兩種形式，A∶B的比例約為9∶1。1H NMR波譜(DMSOd6；CF3COOD)1.55-1.7(m，A形式2H)；1.85-2.0(m，B形式4H)；2.03(d，A形式2H)；2.08-2.14(br s，A形式1H)；2.31-2.38(br s，B形式1H)；2.79(s，A形式3H)；2.82(s，B形式3H)；3.03(t，A形式2H)；3.21(br s，B形式2H)；3.30(br s，B形式2H)；3.52(d，A形式2H)；4.02(s，3H)；4.12(d，A形式2H)；4.30(d，B形式2H)；7.41(s，1H)；7.5-7.65(m，2H)；7.81(d，1H)；8.20(s，1H)；8.88(s，1H)元素分析 實測值C 46.0 H 5.2 N 9.6C22H24N4O2BrF0.3H2O2.65HCl 理論值C 45.8 H 4.8 N 9.7％實施例2b將37％的甲醛水溶液(3.5ml，42mmol)加入到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(3.49g，6.22mmol)(按照實施例1中關(guān)于原料的描述進(jìn)行制備)的甲酸(35ml)溶液中。于95℃加熱4小時后，真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物懸浮在水中并緩慢加入2N氫氧化鈉溶液將混合物調(diào)至pH10.5。將懸浮液用乙酸乙酯萃取。將有機層用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸發(fā)得到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(2.61g，88％)。MS-ESI475-477[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)，1.8(d，2H)，1.7-1.9(m，1H)，1.95(t，2H)，2.2(s，3H)，2.85(d，2H)，3.96(s，3H)，4.05(d，2H)，7.19(s，1H)，7.5(d，1H)，7.55(t，1H)，7.67(d，1H)，7.81(s，1H)，8.37(s，1H)，9.54(s，1H)元素分析 實測值C 55.4H 5.1N 11.6C22H24N4O2BrF理論值C 55.6H 5.1N 11.8％實施例2c將4-氯-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(200mg，0.62mmol)和4-溴-2-氟苯胺(142mg，0.74mmol)在含有6N氯化氫的異丙醇溶液(110μl，0.68ml)的異丙醇(3ml)中的懸浮液加熱回流1.5小時。冷卻后，過濾收集沉淀，依次用異丙醇和乙醚洗滌然后真空干燥得到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽(304mg，90％)。元素分析 實測值 C 47.9 H 4.9 N 10.0C22H22N4O2BrF0.5H2O 理論值 C 48.2 H 5.0 N 10.1％1.8HCl0.08異丙醇4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽的質(zhì)子化形式的NMR波譜顯示存在A和B兩種形式，A∶B的比例約為9∶1。1H NMR波譜(DMSOd6)1.6-1.78(m，A形式2H)；1.81-1.93(br s，B形式4H)；1.94-2.07(d，A形式2H)；2.08-2.23(br s，A形式1H)；2.29-2.37(br s，B形式1H)；2.73(d，A形式3H)；2.77(d，B形式3H)；2.93-3.10(q，A形式2H)；3.21(br s，B形式2H)；3.27(br s，B形式2H)；3.42-3.48(d，A形式2H)；4.04(s，3H)；4.10(d，A形式2H)；4.29(d，B形式2H)；7.49(s，1H)；7.53-7.61(m，2H)；7.78(d，1H)；8.47(s，1H)；8.81(s，1H)；10.48(br s，A形式1H)；10.79(br s，B形式1H)；11.90(br s，1H)對于其它NMR讀數(shù)，可向上述4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽的DMSO溶液中加入少量固體碳酸鉀以在NMR管中釋放出游離堿。然后再次記錄NMR波譜并且僅顯示出如下一種形式1H NMR波譜(DMSOd6；固體碳酸鉀)1.3-1.45(m，2H)；1.75(d，2H)；1.7-1.9(m，1H)；1.89(t，2H)；2.18(s，3H)；2.8(d，2H)；3.98(s，3H)；4.0(d，2H)；7.2(s，1H)；7.48(d，1H)；7.55(t，1H)；7.68(d，1H)；7.8(s，1H)；.35(s，1H)；9.75(s，1H)按照如下描述從4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽(按照以上描述制備)生成4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(游離堿)將4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽(50mg)懸浮在二氯甲烷(2ml)中并用飽和碳酸氫鈉洗滌。將二氯甲烷溶液干燥(硫酸鎂)然后通過蒸發(fā)除去揮發(fā)性物質(zhì)得到4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(游離堿)。所生成的游離堿的NMR僅顯示如下一種形式1H NMR波譜(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)；1.76(d，2H)；1.7-1.9(m，1H)；1.9(t，2H)；2.19(s，3H)；2.8(d，2H)；3.95(s，3H)；4.02(d，2H)；7.2(s，1H)；7.48(d，1H)；7.55(t，1H)；7.68(dd，1H)；7.8(s，1H)；8.38(s，1H)；9.55(br s，1H)對于其它NMR讀數(shù)，可向上述4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(游離堿)的NMR DMSO溶液中加入少量CF3COOD然后再次記錄NMR波譜。所得到的4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉三氟乙酸鹽的質(zhì)子化形式的波譜顯示存在A和B兩種形式，A∶B的比例約為9∶1。1H NMR波譜(DMSOd6；CF3COOD)1.5-1.7(m，A形式2H)；1.93(brs，B形式4H)；2.0-2.1(d，A形式2H)；2.17(br s，A形式1H)；2.35(br s，B形式1H)；2.71(s，A形式3H)；2.73(s，B形式3H)；2.97-3.09(t，A形式2H)；3.23(br s，B形式2H)；3.34(brs，B形式2H)；3.47-3.57(d，A形式2H)；4.02(s，3H)；4.15(d，A形式2H)；4.30(d，B形式2H)；7.2(s，1H)；7.3-7.5(m，2H)；7.6(d，1H)；7.9(s，1H)；8.7(s，1H)原料按照如下描述制備將1-(叔丁氧羰基)-4-(4-甲基苯基磺酰氧基甲基)哌啶(40g，0.11mol)(按照實施例1中關(guān)于原料的描述制備)加入到4-羥基-3-甲氧基苯甲酸乙酯(19.6g，0.1mol)和碳酸鉀(28g，0.2mol)的干燥DMF(200ml)懸浮液中。于95℃下攪拌2.5小時后，將混合物冷卻至室溫然后在水和乙酸乙酯/乙醚之間進(jìn)行分配。將有機層用水、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸發(fā)。將得到的油用石油醚結(jié)晶并將該懸浮液于5℃下存放過夜。過濾收集固體，用石油醚洗滌然后真空干燥得到4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯(35g，89％)。m.p.81-83℃MS(ESI)416[MNa]+1H NMR波譜(CDCl3)1.2-1.35(m，2H)；1.4(t，3H)；1.48(s，9H)；1.8-1.9(d，2H)；2.0-2.15(m，2H)；2.75(t，2H)；3.9(d，2H)；3.95(s，3H)；4.05-4.25(br s，2H)；4.35(q，2H)；6.85(d，1H)；7.55(s，1H)；7.65(d，1H)元素分析 實測值 C 63.4 H 8.0 N 3.5C21H31NO60.3H2O理論值 C 63.2 H 8.0 N 3.5％將甲醛(12M，37％水溶液，35ml，420mmol)加入到4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯(35g，89mmol)的甲酸(35ml)溶液中。于95℃下攪拌3小時后，通過蒸發(fā)除去揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物溶于二氯甲烷并加入3M氯化氫的乙醚溶液(40ml，120mmol)。用乙醚稀釋后，將混合物研磨直至有固體形成。過濾收集固體，用乙醚洗滌然后于50℃下真空干燥過夜得到3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)苯甲酸乙酯(30.6g，定量)。MS(ESI)308[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.29(t，3H)；1.5-1.7(m，2H)；1.95(d，2H)；2.0-2.15(br s，1H)；2.72(s，3H)；2.9-3.1(m，2H)；3.35-3.5(br s，2H)；3.85(s，3H)；3.9-4.05(br s，2H)；4.3(q，2H)；7.1(d，1H)；7.48(s，1H)；7.6(d，1H)將3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)苯甲酸乙酯(30.6g，89mmol)的二氯甲烷(75ml)溶液冷卻至0-5℃。加入TFA(37.5ml)，然后在15分鐘內(nèi)滴加24N發(fā)煙硝酸(7.42ml，178mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液。加料完成后，將溶液升溫至室溫并在室溫下攪拌2小時。真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)并將殘余物溶于二氯甲烷(50ml)。將溶液冷卻至0-5℃然后加入乙醚。過濾收集沉淀然后于50℃下真空干燥。將固體溶于二氯甲烷(500ml)，依次加入3M氯化氫的乙醚溶液(30ml)和乙醚(500ml)。過濾收集固體然后于50℃下真空干燥得到3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-6-硝基苯甲酸乙酯(28.4g，82％)。MS(ESI)353[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.3(t，3H)；1.45-1.65(m，2H)；1.75-2.1(m，3H)；2.75(s，3H)；2.9-3.05(m，2H)；3.4-3.5(d，2H)；3.95(s，3H)；4.05(d，2H)；4.3(q，2H)；7.32(s，1H)；7.66(s，1H)將3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-6-硝基苯甲酸乙酯(3.89g，10mmol)在含有10％鉑/活性炭(50％潤濕的)(389mg)的甲醇(80ml)中的溶液在1.8大氣壓下氫化直至氫氣的攝取停止。將混合物過濾并將濾液蒸發(fā)。將殘余物溶于水(30ml)并用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)至pH10。將混合物用乙酸乙酯/乙醚(1/1)稀釋然后分出有機層。將水層再次用乙酸乙酯/乙醚萃取并將有機層合并。將有機層用水、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)。過濾然后蒸發(fā)。將得到的固體在乙醚/石油醚的混合物中研磨，過濾，用石油醚洗滌然后于60℃下真空干燥得到6-氨基-3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)苯甲酸乙酯(2.58g，80％)。m.p.111-112℃MS(ESI)323[MH]+1H NMR波譜(CDCl3)1.35(t，3H)；1.4-1.5(m，2H)；1.85(m，3H)；1.95(t，2H)；2.29(s，3H)；2.9(d，2H)；3.8(s，3H)；3.85(d，2H)；4.3(q，2H)；5.55(br s，2H)；6.13(s，1H)；7.33(s，1H)元素分析 實測值C 62.8 H 8.5N 8.3C17H26N2O40.2H2O 理論值C 62.6 H 8.2N 8.6％將6-氨基-3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)苯甲酸乙酯(16.1g，50mmol)在含有乙酸甲脒(5.2g，50mmol)的2-甲氧基乙醇(160ml)中的溶液于115℃下加熱2小時。在4小時的時間內(nèi)分批加入乙酸甲脒(10.4g，100mmol)，每30分鐘加入一次。在最后一次加料后繼續(xù)加熱30分鐘。冷卻后，真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將固體溶于乙醇(100ml)和二氯甲烷(50ml)。過濾除去沉淀并將濾液濃縮至最終體積為100ml。將該懸浮液冷卻至5℃然后過濾收集固體，用冷的乙醇洗滌，然后用乙醚洗滌并于60℃下真空干燥過夜得到6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(12.7g，70％)。MS(ESI)304[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.25-1.4(m，2H)；1.75(d，2H)；1.9(t，1H)；1.9(s，3H)；2.16(s，2H)；2.8(d，2H)；3.9(s，3H)；4.0(d，2H)；7.11(s，1H)；7.44(s，1H)；7.97(s，1H)將6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(2.8g，9.24mmol)在含有DMF(280μl)的亞硫酰氯(28ml)中的溶液于85℃加熱回流1小時。冷卻后，蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將沉淀用乙醚研磨，過濾，用乙醚洗滌然后真空干燥。將固體溶于二氯甲烷然后加入飽和碳酸氫鈉水溶液。分出有機層，用水、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸發(fā)得到4-氯-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(2.9g，98％)。MS(ESI)322[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.3-1.5(m，2H)；1.75-1.9(m，3H)；2.0(t，1H)；2.25(s，3H)；2.85(d，2H)；4.02(s，3H)；4.12(d，2H)；7.41(s，1H)；7.46(s，1H)；8.9(s，1H)或者，6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮可以按照如下方法制備將氫化鈉(1.44g 60％礦物油懸浮體，36mmol)用20分鐘分批加入到7-芐氧基-6-甲氧基-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(8.46g，30mmol)(例如按照WO 97/22596中實施例1的描述制備)的DMF(70ml)溶液中并將該混合物攪拌1.5小時。分批加入新戊酸氯甲酯(5.65g，37.5mmol)并將混合物室溫攪拌2小時。將混合物用乙酸乙酯(100ml)稀釋然后倒入冰/水(400ml)和2N鹽酸(4ml)中。分出有機層并將水層用乙酸乙酯萃取，將合并的萃取液用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸除溶劑。將殘余物用乙醚和石油醚的混合物研磨，過濾收集固體然后真空干燥得到7-芐氧基-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(10g，84％)。1H NMR波譜(DMSOd6)1.11(S，9H)；3.89(S，3H)；5.3(S，2H)；5.9(s，2H)；7.27(s，1H)；7.35(m，1H)；7.47(t，2H)；7.49(d，2H)；7.51(s，1H)；8.34(s，1H)
將7-芐氧基-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(7g，17.7mmol)和10％鈀/炭催化劑(700mg)在乙酸乙酯(250ml)、DMF(50ml)、甲醇(50ml)和乙酸(0.7ml)中的混合物在常壓的氫氣下攪拌40分鐘。過濾除去催化劑并通過蒸發(fā)從濾液中除去溶劑。將殘余物用乙醚研磨，過濾收集固體然后真空干燥得到7-羥基-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(4.36g，80％)。1H NMR波譜(DMSOd6)1.1(s，9H)；3.89(s，3H)；5.89(s，2H)；7.0(s，1H)；7.48(s，1H)；8.5(s，1H)將三苯基膦(1.7g，6.5mmol)在氮氣氛下加入到7-羥基-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(1.53g，5mmol)的二氯甲烷(20ml)懸浮液中，然后加入1-(叔丁氧羰基)-4-(羥基甲基)哌啶(1.29g，6mmol)(按照實施例1中關(guān)于原料的描述進(jìn)行制備)和偶氮二甲酸二乙酯(1.13g，6.5mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液。室溫攪拌30分鐘后，將反應(yīng)混合物倒在硅膠柱上并用乙酸乙酯/石油醚洗脫(1/1，然后是6/5、6/4和7/3)。將含有預(yù)期產(chǎn)物的餾份蒸發(fā)得到油，其在用戊烷研磨后結(jié)晶。過濾收集固體然后真空干燥得到7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(232g，92％)。MS-ESI526[MNa]+1H NMR波譜(CDCl3)1.20(s，9H)，1.2-1.35(m，2H)，1.43(s，9H)，1.87(d，2H)，2.05-2.2(m，1H)，2.75(t，2H)，3.96(d，2H)，3.97(s，3H)，4.1-4.25(br s，2H)，5.95(s，2H)，7.07(s，1H)，7.63(s，1H)，8.17(s，1H)元素分析 實測值C 61.8 H 7.5N 8.3C26H37N3O7理論值C 62.0 H 7.4N 8.3％將7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(2.32g，4.6mmol)在含有TFA(5ml)的二氯甲烷(23ml)中的溶液室溫攪拌1小時。真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物在乙酸乙酯和碳酸氫鈉之間進(jìn)行分配。真空蒸除有機溶劑并將殘余物過濾。將沉淀用水洗滌然后真空干燥。將固體與甲苯共沸然后真空干燥得到6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(1.7g，92％)。MS-ESI404[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6；CF3COOD)1.15(s，9H)，1.45-1.6(m，2H)，1.95(d，2H)，2.1-2.25(m，1H)，2.95(t，2H)，3.35(d，2H)，3.95(s，3H)，4.1(d，2H)，5.95(s，2H)，7.23 s，1H)，7.54(s，1H)，8.45(s，1H)將37％的甲醛水溶液(501μl，6mmol)和氰基硼氫化鈉(228mg，3.6mmol)依次分批加入到6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(1.21g，3mmol)在THF/甲醇(10ml/10ml)的混合物中的溶液中。室溫攪拌30分鐘后，真空蒸除有機溶劑并將殘余物在二氯甲烷和水之間進(jìn)行分配。分出有機層，用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物用乙醚研磨并通過過濾收集形成的固體，用乙醚洗滌然后真空干燥得到6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(1.02g，82％)。MS-ESI418[MH]+1H NMR波譜(CDCl3)1.19(s，9H)，1.4-1.55(m，2H)，1.9(d，2H)，2.0(t，2H)，1.85-2.1(m，1H)，2.3(s，3H)，2.92(d，2H)，3.96(s，3H)，3.99(d，2H)，5.94(s，2H)，7.08(s，1H)，7.63(s，1H)，8.17(s，1H)將飽和的氨/甲醇溶液(14ml)加入到6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(1.38g，3.3mmol)的甲醇(5ml)溶液中。室溫下攪拌20小時后，將懸浮液用二氯甲烷(10ml)稀釋。將溶液過濾。將濾液真空蒸發(fā)并將殘余物用乙醚研磨，過濾收集固體，用乙醚洗滌然后真空干燥得到6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3，4-二氫喹唑啉-4-酮(910mg，83％)。MS-ESI304[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)，1.75(d，2H)，1.7-1.85(m，1H)，1.9(t，2H)，2.2(s，3H)，2.8(d，2H)，3.9(s，3H)，4.0(d，2H)，7.13(s，1H)，7.45(s，1H)，7.99(s，1H)實施例3a將3.5M氯化氫的乙醇溶液(75μl，0.26mmol)加入到4-氯-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(80mg，0.25mmol)(按照實施例2c中關(guān)于原料的描述制備)的異丙醇(3ml)懸浮液中，將混合物加熱至50℃并加入4-氯-2-氟苯胺(44mg，0.3mmol)。將混合物加熱回流30分鐘。冷卻后，將混合物用乙醚(3ml)稀釋。過濾收集沉淀，用乙醚洗滌然后真空干燥得到4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽(105mg，82％)。MS-ESI431-433[MH]+4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽的質(zhì)子化形式的NMR波譜顯示存在A和B兩種形式，A∶B的比例約為9∶1。1H NMR波譜(DMSOd6；CF3COOD)1.55-1.7(m，A形式2H)，1.85-2.0(m，B形式4H)，2.05(d，A形式2H)，2.1-2.2(m，A形式1H)，2.35(s，3H)；2.79(s，A形式3H)，2.82(s，B形式3H)，3.03(t，A形式2H)，3.2-3.3(m，B形式2H)；3.3-3.4(m，B形式2H)，3.52(d，A形式2H)，4.02(s，3H)，4.13(d，A形式2H)，4.3(d，B形式2H)，7.41(s，1H)，7.47(dd，1H)，7.63(t，1H)，7.69(dd，1H)，8.19(s，1H)，8.88(s，1H)元素分析 實測值 C 51.8 H 5.6 N 10.9C22H24N4O2ClF0.4H2O2HCl 理論值 C 51.7 H 5.3 N 11.0％實施例3b另一種制備方法如下將三苯基膦(615mg，2.3mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(369μl，2.3mmol)依次加入到4-羥基甲基-1-甲基哌啶(151mg，1.1mmol)(JMed.Chem 1973，16，156)和4-(4-氯-2-氟苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(250mg，0.78mmol)(按照實施例7中關(guān)于原料的描述進(jìn)行制備)的二氯甲烷(5ml)溶液中。室溫攪拌30分鐘后，加入4-羥基甲基-1-甲基哌啶(51mg，0.39mmol)、三苯基膦(102mg，0.39mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(61μl，0.39mmol)。攪拌15分鐘后，真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)并將殘余物通過柱色譜純化，用二氯甲烷/乙腈/甲醇洗脫(70/10/20，然后是75/5/20和80/0/20)。合并含有預(yù)期產(chǎn)物的餾份然后蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物溶于二氯甲烷和甲醇的混合物然后加入5M氯化氫的異丙醇溶液。將懸浮液濃縮，過濾收集固體，用乙醚洗滌然后真空干燥得到4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽(16mg，4％)。實施例4氬氣氛下，將氫化鈉(60％，372mg，9.3mmol)加入到4-溴-2，6-二氟苯胺(1.67g，8.08mmol)的DMF溶液中。室溫攪拌30分鐘后，加入4-氯-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(1.3g，4.04mmol)并繼續(xù)攪拌20小時。將混合物倒入水(130ml)中并用乙酸乙酯萃取。將有機層用水、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物通過硅膠柱色譜純化，依次用二氯甲烷/甲醇(95/5)和含有氨(1％)的二氯甲烷/甲醇(90/10)洗脫。合并含有預(yù)期產(chǎn)物的級份然后蒸發(fā)。將殘余物用乙醚研磨，通過過濾進(jìn)行收集，用乙醚洗滌然后于50℃下真空干燥得到4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(1.4g，70％)。MS-ESI493-495[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)，1.8(d，2H)，1.7-1.9(m，1H)，1.9(t，2H)，2.17(s，3H)，2.8(d，2H)，3.95(s，3H)，4.02(d，2H)，7.2(s，1H)，7.63(s，1H)，7.6(s，1H)，7.82(s，1H)，8.35(s，1H)元素分析 實測值 C 53.8 H 4.8 N 11.3C22H23N4O2BrF2理論值 C 53.6 H 4.7 N 11.4％實施例5采用與實施例4中所述類似的方法，將4-氯-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(246mg，0.764mmol)(按照實施例2c中關(guān)于原料的描述制備)與4-氯-2，6-二氟苯胺(250mg，1.53mmol)(參見WO 97/30035實施例15)在DMF(9ml)中、在氫化鈉(60％，76.5mg，1.9mmol)的存在下反應(yīng)得到4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(210mg，61％)。MS-ESI449-451[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)，1.8(d，2H)，1.7-1.9(m，1H)，1.9(t，2H)，2.2(s，3H)，2.8(d，2H)，3.96(s，3H)，4.02(d，2H)，7.21(s，1H)，7.52(s，1H)，7.54(s，1H)，7.82(s，1H)，8.35(s，1H)元素分析 實測值C 59.0 H 5.3N 12.5C22H23N4O2ClF2理論值C 58.9 H 5.2N 12.5％原料按照如下描述制備將4-氯-2，6-二氟苯胺鹽酸鹽(參見WO 97/30035實施例15)在二氯甲烷和水之間進(jìn)行分配并加入碳酸氫鈉水溶液直至水層的pH達(dá)到約9。分出有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸發(fā)得到4-氯-2，6二氟苯胺游離堿。實施例6將4-氯-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(200mg，0.622mmol)(按照實施例2c中關(guān)于原料的描述進(jìn)行制備)和2-氟-4-甲基苯胺(94mg，0.764mmol)在含有6.2M氯化氫的異丙醇溶液(110μl)的異丙醇(5ml)中的懸浮液于80℃下攪拌1.5小時。冷卻后，過濾收集沉淀，用異丙醇洗滌，然后用乙醚洗滌并真空干燥。將固體通過柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(90/10)洗脫，然后用5％氨的甲醇/二氯甲烷(10/90)溶液洗脫。將含有預(yù)期產(chǎn)物的級份蒸發(fā)得到4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(170mg，61％)。MS-ESI411[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)，1.8(d，2H)，1.7-1.9(m，1H)，1.9(t，2H)，2.2(s，3H)，2.3 5(s，3H)，2.8(d，2H)，3.95(s，3H)，4.01(d，2H)，7.1(d，1H)，7.13(d，1H)，7.16(s，1H)，7.4(t，1H)，7.81(s，1H)，8.32(s，1H)，9.4(s，1H)元素分析 實測值 C 66.5 H 6.7 N 13.7C23H27N4O2F0.3H2O理論值 C 66.4 H 6.7 N 13.5％實施例7將1-叔丁氧羰基-4-羥基甲基哌啶(590mg，2.75mmol)(按照實施例1中關(guān)于原料的描述進(jìn)行制備)、三苯基膦(1.2g，4.58mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.72ml，4.58mmol)依次加入到4-(4-氯-2-氟苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(585mg，1.83mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中。室溫攪拌1小時后，補加三苯基膦(239mg，0.91mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.14ml，0.91mmol)。攪拌1.5小時后，真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)并將殘余物通過柱色譜純化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1/1)洗脫。將粗產(chǎn)物直接用于下一步驟。
將粗產(chǎn)物在含有TFA(4.5ml)的二氯甲烷(15ml)中的溶液室溫攪拌1.5小時。真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物在水和乙酸乙酯之間進(jìn)行分配。將水層用2N氫氧化鈉調(diào)至pH9.5。分出有機層，依次用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸發(fā)得到4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉。MS-ESI417-419[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.1-1.3(m，2H)，1.75(d，2H)，1.85-2.0(br s，1H)，2.55(d，2H)，2.95(d，2H)，3.95(s，3H)，4.0(d，2H)，7.2(s，1H)，7.35(dd，1H)，7.55(dd，1H)，7.6(t，1H)，7.8(s，1H)，8.35(s，1H)，9.55(s，1H)鹽酸鹽按照如下描述制備將4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉溶于甲醇/二氯甲烷的混合物然后加入6M氯化氫的乙醚溶液。真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)，將殘余物用乙醚研磨，通過過濾進(jìn)行收集，用乙醚洗滌然后真空干燥得到4-(4-氯-2-氟)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉鹽酸鹽(390mg，2步的收率47％)。元素分析 實測值 C 50.4 H 5.2 N 11.0C21H22O2N4ClF2.25HCl 理論值 C 50.6 H 4.9 N 11.2％
原料按照如下描述制備將7-芐氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(1.2g，4mmol)(按照WO 97/22596實施例1中的描述制備)和4-氯-2-氟苯胺(444μl，4mmol)的2-丙醇(40ml)溶液加熱回流1.5小時。冷卻后，過濾收集沉淀，依次用2-丙醇和乙醚洗滌然后真空干燥得到7-芐氧基-4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(1.13g，64％)。m.p.239-242℃1H NMR波譜(DMSOd6)4.0(s，3H)；5.36(s，2H)；7.39-7.52(m，9H)；8.1(s，1H)；8.75(s，1H)MS-ESI410[MH]+元素分析 實測值 C 59.2 H 4.3 N 9.4C22H17N3O2ClF1HCl 理論值 C 59.2 H 4.1 N 9.4％將7-芐氧基-4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(892mg，2mmol)的TFA(10ml)溶液加熱回流50分鐘。冷卻后，將混合物倒在冰上。過濾收集沉淀，溶于甲醇(10ml)并用氨水堿化至pH11。通過蒸發(fā)濃縮后，過濾收集固體產(chǎn)物，依次用水和乙醚洗滌然后真空干燥得到黃色固體狀4-(4-氯-2-氟苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(460mg，72％)。m.p.141-143℃MS-ESI320-322[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)3.95(s，3H)；7.05(s，1H)；7.35(d，1H)；7.54-7.59(m，2H)；7.78(s，1H)；8.29(s，1H)實施例8將7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉(318mg，0.64mmol)在含有TFA(2.5ml)的二氯甲烷(5ml)中的溶液室溫攪拌2小時。真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)并將殘余物在二氯甲烷和水之間進(jìn)行分配。將水層調(diào)至pH10-11。分出有機層，用水、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸除揮發(fā)性物質(zhì)得到4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(220mg，87％)。MS-ESI397[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.15-1.3(m，2H)；1.75(d，2H)；1.85-2.0(m，1H)；2.4(s，3H)；3.0(d，2H)；3.3-3.4(d，2H)；3.95(s，3H)；4.0(d，2H)；7.04(d，1H)；7.15(d，1H)；7.17(s，1H)；7.4(t，1H)；7.8(s，1H)；8.3(s，1H)；9.4(s，1H)原料按照如下描述制備采用與實施例6所述類似的方法，將7-芐氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(1.55g，5.15mmol)(按照WO 97/22596實施例1的描述制備)與2-氟-4-甲基苯胺(700mg，5.67mmol)在含有6.2M氯化氫的異丙醇溶液(80μl，0.51mmol)的異丙醇(90ml)中反應(yīng)得到7-芐氧基-4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(2g，91％)。MS-ESI390[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)2.4(s，3H)，4.01(s，3H)，7.15(d，1H)，7.25(d，1H)，7.35-7.6(m，7H)，8.3(s，1H)，8.78(s，1H)將7-芐氧基-4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(2g，4.7mmol)的TFA(20ml)溶液于80℃加熱5小時然后室溫攪拌過夜。真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)并將殘余物懸浮在水(50ml)中。加入固體碳酸氫鈉直至pH達(dá)到7左右。過濾收集沉淀，用水洗滌然后真空干燥。將固體通過柱色譜純化，用甲醇/二氯甲烷(5/95)洗脫。蒸除溶劑后，將固體用乙醚研磨，過濾收集固體，用乙醚洗滌然后真空干燥得到4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(1.04g，74％)。MS-ESI300[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)2.4(s，3H)，4.0(s，3H)，7.15(d，1H)，7.22(s，1H)，7.25(d，1H)，7.41(t，1H)，8.05(s，1H)，8.7(s，1H)，11.0(s，1H)，11.5-11.8(br s，1H)將三苯基膦(2.19g，8.36mmol)加入到于0℃下冷卻的4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(1g，3.34mmol)的二氯甲烷(10ml)懸浮液中，然后加入1-(叔丁氧羰基)-4-羥基甲基哌啶(1.08g，5.01mmol)(按照實施例1中關(guān)于原料的描述進(jìn)行制備)和偶氮二甲酸二乙酯(1.31ml，8.36mmol)。室溫攪拌2小時后，真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物通過柱色譜純化，用二氯甲烷/甲醇(2/98)洗脫。蒸除溶劑后，將殘余物用乙醚研磨，過濾收集固體，用乙醚洗滌然后真空干燥得到7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉(327mg，20％)。MS-ESI497[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.15-1.3(m，2H)；1.45(s，9H)；1.8(d，2H)；2.0-2.1(m，1H)；2.4(s，3H)；2.75-2.9(br s，2H)；3.95(s，3H)；4.0(br s，2H)；4.05(d，2H)；7.1(d，1H)；7.15(d，1H)；7.2(s，1H)；7.4(t，1H)；7.85(t，1H)；8.32(s，1H)；9.45(s，1H)實施例9將4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(578mg，1mmol)在含有TFA(4ml)的二氯甲烷(10ml)中的溶液室溫攪拌2小時。真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)并將殘余物懸浮在水中。將水層調(diào)至約pH10并用二氯甲烷萃取。將有機層用水、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物用乙醚研磨然后真空干燥得到4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(10mg，23％)。MS-ESI479-481[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.15-1.3(m，2H)；1.75(d，2H)；1.85-2.0(br s，1H)；2.5(d，2H)；3.0(d，2H)；3.97(s，3H)；4.0(d，2H)；7.2(s，1H)；7.62(d，2H)；7.82(s，1H)；8.35(s，1H)1H NMR波譜(DMSOd6；CF3COOD)1.5-1.65(m，2H)；2.0(d，2H)；2.15-2.3(brs，1H)；3.0(t，2H)；3.4(d，2H)；4.02(s，3H)；4.15(d，2H)；7.4(s，1H)；7.75(d，2H)；8.1(s，1H)；8.92(s，1H)原料按照如下描述制備將氫化鈉(60％，612mg，15.3mmol)加入到4-溴-2，6-二氟苯胺(2.77g，6.65mmol)的DMF(80ml)溶液中。室溫攪拌30分鐘后，加入7-芐氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉(2g，6.65mmol)(按照WO97/22596實施例1的描述制備，但游離堿在臨用前生成)并繼續(xù)攪拌4小時。將混合物在乙酸乙酯和水(200ml)之間進(jìn)行分配。分出有機層，用水、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)然后蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物用異丙醇研磨，過濾收集固體，用乙醚洗滌然后真空干燥得到7-芐氧基-4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉(1.95g，62％)。MS-ESI472-474[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)3.94(s，3H)，5.3(s，2H)，7.3(s，1H)，7.4(d，1H)，7.45(t，2H)，7.5(s，1H)，7.55(d，1H)，7.65(d，2H)，7.85(s，1H)，8.35(s，1H)，9.4-9.6(br s，1H)采用與合成實施例8的原料所述類似的方法，將7-芐氧基-4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉(1.9g，4.02mmol)與TFA(20ml)反應(yīng)得到4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(1.5g，98％)。1H NMR波譜(DMSOd6)3.95(s，3H)，7.1(s，1H)，7.6(s，1H)，7.65(s，1H)，7.8(s，1H)，8.3(s，1H)，9.45(br s，1H)，10.5(br s，1H)采用與制備實施例8的原料所述類似的方法，將4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(1g，2.62mmol)與1-(叔丁氧羰基)-4-羥基甲基哌啶(845mg，3.93mmol)(按照實施例1中關(guān)于原料的描述進(jìn)行制備)反應(yīng)得到4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(620mg，41％)。MS-ESI579-581[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.15-1.3(m，2H)；1.45(s，9H)；1.8(d，2H)；2.0-2.1(m，1H)；2.7-2.9(m，2H)；3.95(s，3H)；4.0(brs，2H)；4.05(d，2H)；7.22(s，1H)；7.65(d，2H)；7.85(s，1H)；8.35(s，1H)；9.4-9.6(br s，1H)實施例10采用與實施例9所述類似的方法，將7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉(95mg，0.2mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液用TFA(800μl)處理得到4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(20mg，26％)。MS-ESI435-437[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.2-1.3(m，2H)；1.75(d，2H)；1.85-2.0(br s，1H)；2.5(d，2H)；3.0(d，2H)；3.97(s，3H)；4.0(d，2H)；7.2(s，1H)；7.52(d，2H)；7.85(s，1H)；8.35(s，1H)原料可以按照如下描述制備采用與制備實施例9的原料所述類似的方法，將7-芐氧基4-氯-6-甲氧基喹唑啉(184mg，0.61mmol)(按照WO 97/22596實施例1的描述制備，但游離堿在臨用前生成)與4-氯-2，6-二氟苯胺(200mg，1.22mmol)在氫化鈉(60％，87mg，1.4mmol)的存在下在DMF(8ml)中反應(yīng)得到7-芐氧基-4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉(212mg，74％)。MS-ESI428[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)3.96(s，3H)；5.31(s，2H)；7.32(s，1H)；7.4(d，1H)；7.45(t，2H)；7.5-7.6(m，4H)；7.85(s，1H)；8.35(br s，1H)；9.55(br s，1H)將7-芐氧基-4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉(200mg，0.47mmol)的TFA(3ml)溶液于80℃下攪拌3小時。冷卻后，真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)并將殘余物溶于含有5％甲醇的水中。用碳酸氫鈉將pH調(diào)至8，然后過濾收集固體并用水洗滌。將固體溶于乙酸乙酯/甲醇/二氯甲烷(47/6/47)的混合物。真空蒸除揮發(fā)性物質(zhì)得到4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(126mg，80％)。MS-ESI338[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)3.95(s，3H)；7.1(s，1H)；7.55(d，2H)；7.8(s，1H)；8.3(s，1H)；9.42(brs，1H)采用與制備實施例9的原料所述類似的方法，將4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(150mg，0.44mmol)與1-(叔丁氧羰基)-4-羥基甲基哌啶(150mg，0.88mmol)(按照實施例1中關(guān)于原料的描述進(jìn)行制備)反應(yīng)得到7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基喹唑啉(113mg，59％)。MS-ESI535[MH]+1H NMR波譜(DMSOd6)1.15-1.3(m，2H)；1.45(s，9H)；1.8(d，2H)；2.0-2.1(m，1H)；2.7-2.9(m，2H)；3.95(s，3H)；4.0(brs，2H)；4.05(d，2H)；7.2(s，1H)；7.6(m，2H)；7.8(s，1H)；8.35(s，1H)；9.4-9.6(br s，1H)實施例11以下舉例說明了用于人的治療或預(yù)防性應(yīng)用的含有式I化合物或其可藥用鹽(以下稱為化合物X)的代表性藥物劑型(a)片劑Img/片化合物X 100乳糖Ph.Eur 182.75交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 12.0玉米淀粉糊(5％w/v糊) 2.25硬脂酸鎂 3.0(b)片劑IImg/片化合物X 50乳糖Ph.Eur 223.75交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 6.0玉米淀粉 15.0聚乙烯吡咯烷酮(5％w/v糊) 2.25硬脂酸鎂 3.0(c)片劑IIImg/片化合物X 1.0乳糖Ph.Eur 93.25交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 4.0
玉米淀粉糊(5％w/v糊) 0.75硬脂酸鎂 1.0(d)膠囊mg/膠囊化合物X 10乳糖Ph.Eur488.5硬脂酸鎂 1.5(e)注射液I(50mg/ml)化合物X 5.0％w/v1M氫氧化鈉溶液15.0％v/v0.1M鹽酸(調(diào)節(jié)pH至7.6)聚乙二醇400 4.5％w/v注射用水至100％(f)注射液II(10mg/ml)化合物X 1.0％w/v磷酸鈉BP 3.6％w/v0.1M氫氧化鈉溶液 15.0％v/v注射用水至100％(g)注射液III(1mg/mL，緩沖至pH6)化合物X 0.1％w/v磷酸鈉BP 2.26％w/v檸檬酸0.38％w/v聚乙二醇400 3.5％w/v注射用水至100％注以上制劑可以通過制藥領(lǐng)域公知的常規(guī)方法制得。片劑(a)-(c)可以通過常規(guī)方法進(jìn)行腸溶包衣，例如提供乙酸鄰苯二甲酸纖維素包衣。
權(quán)利要求
1.式I的喹唑啉衍生物或其鹽 其中m是1至3的整數(shù)；R1表示鹵素或C1-3烷基；X1表示-O-；R2選自如下三組之一1)C1-5烷基R3(其中R3是哌啶-4-基，其可以帶有一個或兩個選自羥基、鹵素、C1-4烷基、C1-4羥基烷基和C1-4烷氧基的取代基)；2)C2-5鏈烯基R3(其中R3如上所定義)；3)C2-5鏈炔基R3(其中R3如上所定義)；并且其中的烷基、鏈烯基或鏈炔基均可以帶有一個或多個選自羥基、鹵素和氨基的取代基。
2.權(quán)利要求1所述的喹唑啉衍生物，其中帶有(R1)m的苯基選自2-氟-4-甲基苯基、4-氯-2，6-二氟苯基、4-溴-2，6-二氟苯基、4-氯-2-氟苯基和4-溴-2-氟苯基。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的喹唑啉衍生物，其中R2是C1-5烷基R3(其中R3如權(quán)利要求1中所定義)。
4.前述權(quán)利要求任意一項所述的喹唑啉衍生物，其中R2是哌啶-4-基甲基，其中的哌啶環(huán)可以帶有一個或兩個選自C1-4烷基的取代基。
5.式II的喹唑啉衍生物或其鹽 其中其中ma是1至3的整數(shù)；R1a表示鹵素或C1-3烷基；X1a表示-O-；R2a選自如下三組之一1)C1-5烷基R3(其中R3如權(quán)利要求1中所定義)；2)C2-5鏈烯基R3(其中R3如權(quán)利要求1中所定義)；3)C2-5鏈炔基R3(其中R3如權(quán)利要求1中所定義)。
6.喹唑啉衍生物，選自4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(2-氟-4-甲基苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，和4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉及其鹽。
7.喹唑啉衍生物，選自4-(4-氯-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉，和4-(4-溴-2，6-二氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉及其鹽。
8.喹唑啉衍生物，選自4-(4-溴-2-氟苯氨基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉及其鹽。
9.可藥用鹽形式的前述權(quán)利要求任意一項所述的喹唑啉衍生物。
10.權(quán)利要求1所定義的式I的喹唑啉衍生物或其鹽的制備方法，該方法包括(a)將式III化合物 其中R2和X1如權(quán)利要求1所定義，L1是可置換的部分，與式IV化合物反應(yīng) 其中R1和m如權(quán)利要求1所定義；(b)將式V化合物 其中m、X1和R1如權(quán)利要求1所定義，與式VI化合物反應(yīng)R2-L1(VI)其中R2如權(quán)利要求1所定義，L1如本文中所定義；(c)將式VII化合物 與式VIII化合物反應(yīng)R2-X1-H (VIII)其中R1、R2、m和X1如權(quán)利要求1所定義，L1如本文中所定義；或(d)將式IX化合物脫保護(hù) 其中R1、m和X1如權(quán)利要求1所定義，R4表示保護(hù)了的R2基團(tuán)，其中R2如權(quán)利要求1所定義但另外帶有一個或多個保護(hù)基P2；并且當(dāng)需要式I的喹唑啉衍生物的可藥用鹽時，將所得到的化合物與酸或堿反應(yīng)得到所需的可藥用鹽。
11.含有權(quán)利要求1所定義的式I化合物或其可藥用鹽作為活性成分以及可藥用賦形劑或載體的藥物組合物。
12.權(quán)利要求1所定義的式I化合物或其可藥用鹽在生產(chǎn)用于在溫血動物例如人中產(chǎn)生抗血管生成和/或降低血管通透性作用的藥物中的用途。
13.在需要治療的溫血動物中產(chǎn)生抗血管生成和/或降低血管通透性作用的方法，該方法包括，向所述動物施用有效量的權(quán)利要求1所定義的式I化合物或其可藥用鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的喹唑啉衍生物及其鹽,其中m是1至3的整數(shù);R
文檔編號C07D401/12GK1387527SQ00815310
公開日2002年12月25日 申請日期2000年11月1日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月5日
發(fā)明者L·F·A·亨尼奎恩, E·S·E·斯托克斯, A·P·托馬斯 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司