專利名稱：：具負(fù)性激素和/或拮抗劑活性視黃醛衍生物的用途的制作方法本申請(qǐng)是1996年8月23日提交的、發(fā)明名稱為“具負(fù)性激素和/或拮抗劑活性視黃醛衍生物的合成和用途”的96197896.1號(hào)專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。本發(fā)明的范圍本發(fā)明涉及具有視黃醛衍生物負(fù)性激素(retinoidnegativehormone)和/或視黃醛衍生物拮抗劑樣生物活性的新的化合物。更準(zhǔn)確地說，本發(fā)明涉及4-芳基取代苯并吡喃、4-芳基取代苯并噻喃、4-芳基取代1，2-二氫喹啉和8-芳基取代5，6-二氫萘衍生物(它們也可以被取代的3-氧代-1-丙烯基基團(tuán)所取代)。這些新的化合物具有視黃醛衍生物拮抗劑樣的活性，用于治療或預(yù)防視黃醛衍生物和維生素A及維生素A的前體在哺乳動(dòng)物中引起的毒性，并作為使用視黃醛衍生物治療哺乳動(dòng)物的輔助劑，以便預(yù)防或改善不需要的副作用。本發(fā)明還涉及視黃醛衍生物負(fù)性激素用于增加其它視黃醛衍生物和甾體激素的生物活性并抑制非配體結(jié)合視黃酸受體基礎(chǔ)活性的用途。本發(fā)明的背景具有視黃醛衍生物樣活性的化合物在本領(lǐng)域內(nèi)為眾所周知的，并在許多美國的和其它國家的專利中和科學(xué)出版物中已有描述。視黃醛衍生物樣活性用于治療哺乳動(dòng)物包括人類，以便治愈或減輕與許多疾病有關(guān)的癥狀為本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知和普遍接受。已知視黃醛衍生物(維生素A及其衍生物)具有廣泛的活性，包括在不同的生物系統(tǒng)中對(duì)于細(xì)胞增生和分化的作用。該活性已經(jīng)使得視黃醛衍生物用于治療各種疾病，包括皮膚病和癌癥?，F(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)開發(fā)了大量的具有視黃醛衍生物樣生物活性的化合物，大量的專利和化學(xué)文獻(xiàn)介紹了這類化合物。相關(guān)的專利文獻(xiàn)包括美國專利號(hào)4980369，5006550，5015658，5045551，5089509，5134159，5162546，5234926，5248777，5264578，5272156，5278318，5324744，5346895，5346915，5348972，5348975，5380877，5399561，5407937(轉(zhuǎn)讓給本申請(qǐng)的同一受讓人)，和其中所引用的專利和出版物，它們尤其介紹或涉及具有視黃醛衍生物樣生物活性的苯并二氫吡喃、二氫苯并噻喃和1，2，3，4-四氫喹啉衍生物。此外，幾個(gè)申請(qǐng)是懸而未決的，它們轉(zhuǎn)讓給本申請(qǐng)的受讓人，它們涉及具有視黃醛衍生物樣活性的其它化合物。美國專利號(hào)4740519(Shrootetal.)，4826969(Maignanetal.)，4326055(Loeligeretal.)，5130335(Chandraratnaetal.)，5037825(Klausetal.)，5231113(Chandraratnaetal.)，5324840(Chandraratna)，5344959(Chandraratna)，5130335(Chandraratnaetal.)，公開的歐洲專利申請(qǐng)?zhí)?176034A(Wuestetal.)，0350846A(Klausetal.)，0176032A(Frickeletal.)，0176033A(Frickeletal.)，0253302A(Klausetal.)，0303915A(Bryceetal.)，英國專利申請(qǐng)GB2190378A(Klausetal.)，德國專利申請(qǐng)?zhí)朌E3715955A1(Klausetal.)，DE3602473A1(Wuestetal.)和下列文章J.Amer.Acad.Derm.15756-764(1986)(Spornetal.)，Chem.Pharm.Bull.33404-407(1985)(Shudoetal.)，J.MedChem.312182-2192(1988)(Kagechikaetal.)，ChemistryandBiologyofSyntheticRetinoidsCRCPressInc.1990pp.334-335，354(Dawsonetal.)中介紹或涉及包括四氫萘基部分和具有視黃醛衍生物樣的或有關(guān)的生物活性的化合物。美國專利號(hào)4391731(Bolleretal.)介紹了用于液晶組成中的四氫化萘衍生物。Kagechika等人在J.Med.Chem32834(1989)中的文章介紹了某些具有視黃醛衍生物樣活性的6-(3-氧代-1-丙烯基)-1，2，3，4-四甲基-1，2，3，4-四氫化萘衍生物和相關(guān)的黃酮化合物。Shudo等人在Chem.Pharm.Bull.33404(1985)和Jetten等人在CancerResearch473523(1987)中的文章介紹或涉及其它的3-氧代-1-丙烯基衍生物(查耳酮化合物)和它們的視黃醛衍生物樣的或相關(guān)的生物活性。不幸的是，具有視黃醛衍生物樣活性的化合物(視黃醛衍生物)在治療劑量水平下，也引起一些不需要的副作用，包括頭痛、畸形發(fā)生、粘膜與皮膚的毒性、肌與骨骼的毒性、異常脂質(zhì)血癥(dyslipidemias)、皮膚刺激、頭痛和對(duì)肝的毒性。這些副作用限制了視黃醛衍生物用于治療疾病的可接受性和實(shí)用性。在本領(lǐng)域內(nèi)現(xiàn)在普遍認(rèn)為在哺乳動(dòng)物(和其它生物)中存在兩種主要類型的視黃醛衍生物受體。這兩種主要類型或家族(family)的受體分別稱作RARs和RXRs。在每類型內(nèi)有亞型在RAR家族內(nèi)，其亞型稱作RAR-α、RAR-β和RAR-γ，在RXR中，其亞型為RXR-α、RXR-β和RXRR-γ。這兩家族受體為轉(zhuǎn)錄因子，根據(jù)它們的配體結(jié)合特異性可以將其彼此區(qū)分開。全反式-RA(ATRA)結(jié)合并激活一類視黃酸受體(RARs)包括RAR-α、RAR-β和RAR-γ。不同的配體9-順式-RA(9C-RA)結(jié)合并激活RARs和視黃醛衍生物X受體(RXR)家族的成員。在本領(lǐng)域中也已經(jīng)確定兩種主要的視黃醛衍生物受體類型和幾種亞型的分布在哺乳動(dòng)物的各類組織和器官中是不均勻的。此外，在本領(lǐng)域內(nèi)已經(jīng)普遍認(rèn)為視黃醛衍生物的許多不需要的副作用是受一種或多種RAR受體亞型介導(dǎo)的。因此，在視黃醛衍生物受體上具有興奮劑樣活性的化合物中，對(duì)于主要類型或家族之一的特異性或選擇性及甚至對(duì)于一個(gè)受體家族中的一種或多種亞型的特異性或選擇性被認(rèn)為是所需要的藥理學(xué)性質(zhì)。最近，在本領(lǐng)域已經(jīng)開發(fā)與RAR受體結(jié)合，而不引起所述應(yīng)答即由相同受體的興奮劑引起應(yīng)答的化合物。因而，結(jié)合RAR受體而不引起“視黃醛衍生物”應(yīng)答的化合物或藥物為在生物測(cè)定和系統(tǒng)中能夠(在某種程度上或多或少地)阻滯RAR興奮劑的活性。更具體地說，就本領(lǐng)域內(nèi)的科學(xué)和專利文獻(xiàn)而言，公開的PCT申請(qǐng)WO94/14777介紹了某些與RAR視黃醛衍生物受體結(jié)合的雜環(huán)羧酸衍生物，在該申請(qǐng)中，據(jù)說用于治療某些疾病例如痤瘡、牛皮癬、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和病毒性感染。在Yoshimura等人的文章[JMed.Chem.383163-3173(1995)]中公開了類似的內(nèi)容。Kaneko等人在Med.ChemRes.1220-225(1991)；Apfel等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA897129-7133Augusty1992CellBiology；Eckhardt等人在ToxicologyLetters70299-308(1994)；Keidel等人在MolecularandCellularBiology14287-298(1994)；和Eyrolles等人在J.Med.Chem.371508-1517(1994)中介紹了對(duì)一個(gè)或多個(gè)RAR視黃醛衍生物亞型上具有拮抗劑樣活性的化合物。除了使用視黃醛衍生物治療的不需要的副作用外，偶爾也會(huì)出現(xiàn)由維生素A或維生素A前體過量引起的嚴(yán)重的疾病，它或者由于服用過量的維生素補(bǔ)劑或者由于攝入含有高含量的所述維生素的某些魚和動(dòng)物的肝臟所造成的。具有維生素A過多綜合征的慢性或急性毒性包括頭痛、脫皮、骨的毒性、異常脂質(zhì)血癥等。近年來，使用維生素A類似物即視黃醛衍生物所引起的毒性已經(jīng)顯而易見，基本概括為維生素A過多綜合征的毒性，提示一種常見的生物誘因即RAR激活。這些毒性目前主要通過支持性的方法來治療并避免進(jìn)一步與成因因子接觸，無論它是肝臟、維生素補(bǔ)劑還是視黃醛衍生物。盡管部分毒性可以隨著時(shí)間的推移而解除，其它一些(例如早熟性骺板閉合)為永久性的。一般而言，特定的解毒藥為通過藥劑用于中毒的最好治療，然而，在成千上萬個(gè)化合物中只有大約24個(gè)化合物或化合物類型為已知的特異性解毒藥。顯然，特異性解毒藥在治療維生素A過多癥和視黃醛衍生物毒性方面是有價(jià)值的。確實(shí)隨著不斷增加的有效力的視黃醛衍生物在臨床上使用，用于視黃醛衍生物中毒的特異性解毒藥可以挽救許多生命。本發(fā)明概述本發(fā)明包括式I化合物式1其中X為S、O、NR’，其中R’為H或1-6個(gè)碳原子的烷基，或X為[C(R1)2]n其中R1獨(dú)立為H或1-6個(gè)碳原子的烷基，及n為0-2之間的整數(shù)；R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I、CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；Z為-C≡C-，-N＝N-，-N＝CR1-，-CR1＝N，-(CR1＝CR1)n’-其中n’為0-5的整數(shù)，-CO-NR1-，-CS-NR1-，-NR1-CO，-NR1-CS，-COO-，-OCO-，-CSO-，-OCS-；Y是苯基或萘基或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，所述苯基和雜芳基可選被一個(gè)或兩個(gè)R2基團(tuán)取代，或當(dāng)Z為-(CR1＝CR1)n’-和n’為3、4或5時(shí)，則Y代表在該(CR1＝CR1)n’基團(tuán)和B之間的直接價(jià)鍵；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基，和R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，N(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。本發(fā)明還包括式101化合物式101其中X為S、O、NR’，其中R’為H或1-6個(gè)碳原子的烷基，或X為[C(R1)2]n其中R1獨(dú)立為H或1-6個(gè)碳原子的烷基，及n為0-2之間的整數(shù)；R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I、CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；Y是苯基或萘基或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，所述苯基和雜芳基可選被一個(gè)或兩個(gè)R2基團(tuán)取代；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基，和R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，N(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子；R16為H、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基；R17為H、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、OH或OCOR11，和p為0或1，假如當(dāng)p為1時(shí)，則沒有R17取代基，m為0-2的整數(shù)。本發(fā)明的化合物用于預(yù)防給予視黃醛衍生物以便治療或預(yù)防某些疾病時(shí)視黃醛衍生物的某些不需要的副作用。為此，本發(fā)明的化合物可以與視黃醛衍生物共同給藥。本發(fā)明的化合物也用于治療由于過量服用視黃醛衍生物藥物或維生素A或這類藥物中毒導(dǎo)致的急性或慢性毒性。本發(fā)明另外涉及在生物系統(tǒng)中(包括哺乳動(dòng)物)RAR拮抗劑用于阻滯所有或部分RAR受體位點(diǎn)，以便預(yù)防或降低在這類受體位點(diǎn)上RAR興奮劑的作用的用途。更具體地說，本發(fā)明涉及用于(a)預(yù)防和(b)治療視黃醛衍生物(包括維生素A或維生素A前體)慢性或急性毒性和視黃醛衍生物治療中的副作用的RAR拮抗劑的用途。本發(fā)明的一個(gè)具體方面，提供治療哺乳動(dòng)物病理癥狀的方法。所治療的疾病與視黃酸受體活性有關(guān)。該方法包括給予哺乳動(dòng)物能與下列視黃酸受體亞型RARα、RARβ和RARγ之一結(jié)合的視黃醛衍生物拮抗劑或負(fù)性激素。以藥學(xué)有效量給予所述拮抗劑或負(fù)性激素，以便提供對(duì)抗哺乳動(dòng)物病理癥狀的有益的治療作用。作為急性或慢性視黃醛衍生物或維生素A中毒的解毒藥，可以經(jīng)腸道即胃插管或食物/水混合物，或胃腸外例如腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下或皮膚局部等給予RAR拮抗劑。對(duì)于給藥途徑的唯一的要求是它必須能夠傳遞所述拮抗劑到靶組織。可以單獨(dú)或與賦形劑混合配制RAR拮抗劑。在經(jīng)腸道給藥的情況下，RAR拮抗劑不必配制成溶液。作為使用視黃醛衍生物治療的輔助劑，并且為了預(yù)防給予視黃醛衍生物藥物的一種或多種副作用，可以類似地經(jīng)腸道或胃腸外給予RAR拮抗劑。不必以相同的給藥途徑給予RAR拮抗劑和RAR興奮劑。其關(guān)鍵是在接觸RAR興奮劑時(shí)，足夠量的RAR拮抗劑持續(xù)地存在于有關(guān)組織中。為了預(yù)防視黃醛衍生物的毒性，最好在用RAR興奮劑治療的同時(shí)或預(yù)先給予RAR拮抗劑。在許多情況下，將通過不同于興奮劑的途徑給予RAR拮抗劑。例如，通過皮膚局部給予RAR拮抗劑可以預(yù)防或改善經(jīng)腸道給予視黃醛衍生物的不需要的皮膚作用。本發(fā)明的另一個(gè)方面是鑒定視黃醛衍生物負(fù)性激素的方法。該方法包括下列步驟獲得含有對(duì)于結(jié)合重組視黃醛衍生物受體轉(zhuǎn)錄應(yīng)答的報(bào)告基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，所述重組視黃醛衍生物受體至少具有位于完整的視黃醛衍生物受體的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域C-端的蛋白結(jié)構(gòu)域，測(cè)定在未處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞中報(bào)告基因表達(dá)的基礎(chǔ)水平，使所述未處理的轉(zhuǎn)染細(xì)胞在不加入視黃醛衍生物的條件下繁殖，用待檢驗(yàn)負(fù)性激素活性的視黃醛衍生物處理該轉(zhuǎn)染細(xì)胞，測(cè)定在處理細(xì)胞中報(bào)告基因表達(dá)的水平，比較處理細(xì)胞和未處理細(xì)胞中測(cè)定的報(bào)告基因表達(dá)的水平，并鑒定作為視黃醛衍生物負(fù)性激素的那些與未處理細(xì)胞中測(cè)得的報(bào)告基因表達(dá)的基礎(chǔ)水平相比處理細(xì)胞中產(chǎn)生的降低水平的報(bào)告基因表達(dá)的視黃醛衍生物。在本方法一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述完整的受體為RAR-α、RAR-β和RAR-γ亞型。在另一些實(shí)施方案中，所述完整的受體為RXR-α、RXR-β和RXR-γ亞型。所述重組受體也可以是重組RAR或RXR受體。在某些實(shí)施方案中，所述重組受體為具有組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)域嵌合體(chimeric)的視黃醛衍生物受體。該組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域可以包括具有一個(gè)凈負(fù)電荷的許多氨基酸或具有病毒轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域例如單純性皰疹病毒VP-16轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。在其中所述組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域具有一個(gè)凈負(fù)電荷的實(shí)施方案中，所述視黃醛衍生物受體可以是重組體并從中缺失DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，例如對(duì)于除了視黃酸應(yīng)答元件外的順式-調(diào)控元件特異性的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。這些元件包括雌激素應(yīng)答元件。優(yōu)選使所述轉(zhuǎn)染細(xì)胞在基本上缺失內(nèi)源性視黃醛衍生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基例如包含活性炭提取血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中繁殖。在該方法中，所述報(bào)告基因可以是熒光素酶基因，在此情況下，所述測(cè)定步驟可以包括發(fā)光法(luminometry)。所述報(bào)告基因也可以是β-半乳糖苷酶基因，在此情況下，所述測(cè)定步驟將包括β-半乳糖苷酶測(cè)定法。所述轉(zhuǎn)染細(xì)胞可以是轉(zhuǎn)染的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如綠猴細(xì)胞或人細(xì)胞。本發(fā)明的另一個(gè)方面為加強(qiáng)給予哺乳動(dòng)物的甾族化合物超家族受體興奮劑的藥理活性的方法。該方法包括與甾體化合物超家族受體興奮劑一起給哺乳動(dòng)物共服包含藥學(xué)有效劑量的視黃醛衍生物負(fù)性激素，以加強(qiáng)所述甾體化合物超家族受體激動(dòng)劑的藥理活性。該藥理活性在體外報(bào)告基因反式激活測(cè)試中例如通過測(cè)試抗-AP-1活性是可測(cè)定的。所述待加強(qiáng)的藥理活性可以是抗增生活性，例如在視網(wǎng)膜色素沉著上皮細(xì)胞(retinalpigmentepithelium)中可測(cè)定的活性類型。所述甾體化合物超家族受體興奮劑可以是下列任何興奮劑視黃醛衍生物受體興奮劑、維生素D受體興奮劑、糖皮質(zhì)激素受體興奮劑、甲狀腺激素受體興奮劑、過氧化物酶體激活增生劑受體興奮劑或雌激素受體興奮劑。所述視黃醛衍生物受體興奮劑可以是RAR興奮劑例如全-反式-視黃酸或13-順式視黃酸。所述視黃醛衍生物受體興奮劑也可以是RXR興奮劑。優(yōu)選的維生素D受體興奮劑為1，25-二羥基維生素D3。優(yōu)選的糖皮質(zhì)激素受體興奮劑為地塞米松。優(yōu)選的甲狀腺激素受體興奮劑為3，3’，5-三碘甲狀腺氨酸。所述視黃醛衍生物負(fù)性激素為RAR-特異性視黃醛衍生物負(fù)性激素，它優(yōu)選具有低于或約等于30nM的離解常數(shù)。所述RAR-特異性視黃醛衍生物負(fù)性激素的實(shí)例包括AGN193109，AGN193385，AGN193389和AGN193871。含有藥學(xué)上有效劑量的視黃醛衍生物負(fù)性激素的組合物可以同時(shí)作為甾體化合物超家族興奮劑共服，并且在共服前混合。它們也可以作為分開的成分共服。附圖簡(jiǎn)介圖1顯示AGN193109的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖2A-2F為顯示AGN139109在RARs上抑制ATRA依賴性反式激活作用的系列線圖。圖2A和2B代表在RAR-α受體上的活性；圖2C和2D代表在RAR-β受體上的活性；圖2E和2F代表在RAR-γ受體上的活性。在圖2A、2C和2E中，空心方形代表視黃酸處理而實(shí)心圓形代表AGN193109處理。在圖2B、2D和2F中，單獨(dú)的線代表用10-8MATRA和改變濃度的AGN193109處理后所測(cè)定的熒光素酶活性，。圖3A和3B代表用報(bào)告質(zhì)粒ERE-tk-Luc和表達(dá)質(zhì)粒ER-RAR-α轉(zhuǎn)染的和用不同濃度的ATRA(圖3A)或AGN193109(圖3B)刺激的CV-1細(xì)胞中測(cè)定的熒光素酶活性的線圖。取值點(diǎn)代表三個(gè)獨(dú)立熒光素酶測(cè)定的均數(shù)±SEM。使用不同量的共轉(zhuǎn)染ER-RAR-α(0.05，0.1和0.2μg/孔)進(jìn)行轉(zhuǎn)染的結(jié)果在每一個(gè)圖形中表示。圖4A和4B代表用報(bào)告質(zhì)粒ERE-tk-Luc和表達(dá)質(zhì)粒ER-RAR-β轉(zhuǎn)染的和用不同濃度的ATRA(圖4A)或AGN193109(圖4B)刺激的CV-1細(xì)胞中熒光素酶活性的線圖。取值點(diǎn)代表三個(gè)獨(dú)立熒光素酶測(cè)定的均數(shù)±SEM。使用不同量的共轉(zhuǎn)染ER-RAR-β(0.05，0.1和0.2μg/孔)進(jìn)行轉(zhuǎn)染的結(jié)果在每一個(gè)圖形中表示。圖5A和5B代表用報(bào)告質(zhì)粒ERE-tk-Luc和表達(dá)質(zhì)粒ER-RAR-γ轉(zhuǎn)染的和用不同濃度的ATRA(圖5A)或AGN193109(圖5B)刺激的CV-1細(xì)胞中測(cè)定的熒光素酶活性的線圖。取值點(diǎn)代表三個(gè)獨(dú)立熒光素酶測(cè)定的均數(shù)±SEM。使用不同量的共轉(zhuǎn)染ER-RAR-γ(0.05，0.1和0.2μg/孔)進(jìn)行轉(zhuǎn)染的結(jié)果在每一個(gè)圖形中表示。圖6顯示用ERE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒及單獨(dú)的ER-RXR-α嵌合體受體表達(dá)質(zhì)?；蚺cRAR-γ-VP-16表達(dá)質(zhì)粒一起共轉(zhuǎn)染CV-1細(xì)胞的ATRA和AGN193109劑量應(yīng)答。用ATRA(方形)和AGN193109(菱形)處理ER-RXR-α共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。用ATRA(圓形)或AGN193109(三角形)處理合用ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。圖7顯示代表用ERE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒和ER-RAR-γ表達(dá)構(gòu)成物轉(zhuǎn)染的，然后用10-8M的ATRA和表示在橫軸上的不同濃度試驗(yàn)化合物處理的CV-1細(xì)胞的溶解產(chǎn)物中記錄的熒光素酶活性測(cè)定值的線圖。所述試驗(yàn)化合物為AGN193109(方形)、AGN193357(空心菱形)、AGN193385(圓形)、AGN193389(三角形)、AGN193840(實(shí)心方形)和AGN192870(實(shí)心菱形)。圖8顯示代表用ERE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒和RAR-γ-VP-16及ER-RXR-α表達(dá)構(gòu)成物轉(zhuǎn)染的，然后用表示在橫軸上的不同濃度試驗(yàn)化合物處理的CV-1細(xì)胞的溶解產(chǎn)物中記錄的熒光素酶活性測(cè)定值的線圖。所述試驗(yàn)化合物為ATRA(空心方形)、AGN193109(空心圓形)、AGN193174(空心三角形)、AGN193199(實(shí)心方形)、AGN193385(實(shí)心圓形)、AGN193389(倒三角形)、AGN193840(斜的實(shí)心方形)和AGN193871(半實(shí)心菱形)。圖9A、9B和9C用圖解法表示利用AGN193109可以調(diào)節(jié)RAR(陰影部分)和在反式激活測(cè)試的內(nèi)容中所述負(fù)性共激活因子蛋白(-)之間的相互作用的機(jī)理。圖9A顯示負(fù)性共激活因子蛋白和正性共激活因子蛋白(+)與RAR的結(jié)合平衡。在無配體的情況下，產(chǎn)生報(bào)告基因的基礎(chǔ)水平的轉(zhuǎn)錄。如圖9B中所述，加入RAR興奮劑促進(jìn)正性其激活因子蛋白與RAR的結(jié)合并導(dǎo)致上行調(diào)節(jié)(upregulated)的報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄。如圖9C中所述，加入AGN193109促進(jìn)負(fù)性共激活因子蛋白與RAR的結(jié)合并阻止報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。圖10為顯示用濃度保持在10-8M的AGN193109抑制作為AGN191183濃度(10-10-10-12M)的函數(shù)的TPA誘導(dǎo)的Str-AP1-CAT表達(dá)的條形圖。將單獨(dú)使用AGN191183進(jìn)行的試驗(yàn)所獲結(jié)果以陰影線條表示，而帶條紋線條代表合用AGN193109和AGN191183處理的結(jié)果。圖11用圖解法表示利用AGN193109可以加強(qiáng)RARs和其它核受體家族成員活性的機(jī)理。如該圖解所述，誘導(dǎo)的RARs(具有AB-C-DEF結(jié)構(gòu)域空心長(zhǎng)方形)已經(jīng)增加了在抗-AP1測(cè)試中對(duì)RAR配體的敏感性，因?yàn)榇嬖谟谟邢薜墓┙o物中的負(fù)性共激活因子蛋白(ncp)被分離成(sequester)RARs，從而導(dǎo)致兩個(gè)族群RAR+ncp和RAR-ncp。RAR-ncp已經(jīng)增加了對(duì)配體的敏感性。非RAR核因子(具有AB-C-DEF結(jié)構(gòu)域的帶陰影的長(zhǎng)方形)已經(jīng)增加了對(duì)同族配體的敏感性，因?yàn)橥ㄟ^AGN193109的活性已經(jīng)將ncp分離成RAR。使用標(biāo)準(zhǔn)名稱如“AB”(不依賴配體的反式激活結(jié)構(gòu)域)、“C”(DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域)和“DEF”(配體調(diào)節(jié)的反式激活結(jié)構(gòu)域和二聚結(jié)構(gòu)域)指定所述核受體的模式結(jié)構(gòu)域。圖12為顯示AGN193109對(duì)于在使用MTV-DR3-Luc報(bào)告質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的CV-1細(xì)胞中1，25-二羥基維生素D3劑量應(yīng)答作用的線圖。用1，25-二羥基維生素D3(實(shí)心方形)、1，25-二羥基維生素D3和10-8MAGN193109(實(shí)心三角形)、1，25-二羥基維生素D3和10-7MAGN193109(實(shí)心圓形)處理轉(zhuǎn)染子。圖13為顯示AGN193109(10nM)共服對(duì)于1，25-二羥基維生素D3-介導(dǎo)的對(duì)TPA誘導(dǎo)的Str-AP1-CAT活性抑制的作用條形圖。實(shí)心條代表對(duì)于單獨(dú)用1，25-二羥基維生素D3處理的轉(zhuǎn)染細(xì)胞中CAT活性的抑制作用。空心條代表對(duì)于用混合的1，25-二羥基維生素D3和AGN193109處理的轉(zhuǎn)染細(xì)胞中CAT活性的抑制作用。如14為顯示單獨(dú)的AGN193109和與AGN191183的混合物形式對(duì)于用RAR-γ和RAR應(yīng)答MTV-TREp-Luc報(bào)告構(gòu)成物共轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞的作用線圖。在該圖中介紹的藥物處理為單獨(dú)的AGN193109(方形)、與10-10MAGN191183合用的AGN193109(菱形)和與10-9MAGN191183合用的AGN193109。圖15為顯示作為EGF(實(shí)心方形)的應(yīng)答，但不作為對(duì)單獨(dú)的限定的培養(yǎng)基應(yīng)答(空心圓形)的增生的ECE16-1細(xì)胞的線圖。用實(shí)心三角形代表單獨(dú)用AGN193109處理的細(xì)胞。實(shí)心圓形代表用10nMAGN191183和0-1000nMAGN193109處理細(xì)胞所獲得的結(jié)果。圖16為顯示存在或不存在AGN191183視黃醛衍生物興奮劑的情況下，AGN193109對(duì)于CaSki細(xì)胞增生的作用的條形圖。除了在單獨(dú)限定培養(yǎng)基(DM)中繁殖的樣品(空心條)外，所有的樣品組接受20ng/ml的表皮生長(zhǎng)因子(EGF)。帶條紋條形代表在沒有AGN193109情況下繁殖的樣品。實(shí)心條形代表在1000nMAGN193109存在的情況下繁殖的樣品。用在該過程中的AGN191183的濃度被表示在橫軸上。圖17為顯示AGN193109加強(qiáng)在視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞上ATRA抗增生活性的劑量應(yīng)答曲線。用實(shí)心方形代表單獨(dú)用ATRA處理的樣品。用實(shí)心圓形代表用合用的ATRA和AGN193109(10-7M)處理的樣品。用于處理不同樣品的ATRA的濃度在橫軸上給出。圖18為顯示13-順式-RA和ATRA抑制RPE細(xì)胞生長(zhǎng)和AGN193109加強(qiáng)13-順式-RA的抗增生活性的劑量應(yīng)答曲線。顯示在所述劑量應(yīng)答中的不同樣品處理包括單獨(dú)的13-順式-RA(實(shí)心方形)、與AGN193109(10-6M)混合的13-順式-RA(實(shí)心圓形)、與AGN193109(10-8M)混合的13-順式-RA(實(shí)心三角形)和ATRA(實(shí)心菱形)。用于所述樣品處理中的13-順式-RA和ATRA濃度表示于橫軸上。圖19為顯示AGN193109增強(qiáng)在原始RPE細(xì)胞培養(yǎng)物中地塞米松的抗增生活性的劑量應(yīng)答曲線。顯示在所述劑量應(yīng)答中的不同樣品處理包括ATRA(實(shí)心方形)、單獨(dú)的地塞米松(實(shí)心圓形)、與AGN193109(10-8M)合用的地塞米松(實(shí)心三角形)和與AGN193109(10-6M)合用的地塞米松(實(shí)心菱形)。用于所述樣品處理中的地塞米松和ATRA濃度表示于橫軸上。圖20為顯示AGN193109增強(qiáng)在原始RPE細(xì)胞培養(yǎng)物中甲狀腺激素(T3)的抗增生活性的劑量應(yīng)答曲線。顯示在所述劑量應(yīng)答中的不同樣品處理包括ATRA(實(shí)心方形)、單獨(dú)的T3(實(shí)心圓形)、與AGN193109(10-8M)合用的T3(實(shí)心三角形)、與AGN193109(10-6M)合用的T3(實(shí)心菱形)。用于所述樣品處理中的T3和ATRA濃度表示于橫軸上。本發(fā)明的詳細(xì)介紹定義就本發(fā)明而言，RAR拮抗劑定義為結(jié)合一個(gè)或多個(gè)具有Kd低于1微摩爾(Kd＜1μM)的RAR亞型的化合物，然而，它不引起在受體共轉(zhuǎn)染測(cè)試中RAR亞型調(diào)節(jié)基因的顯著的轉(zhuǎn)錄激活作用。拮抗劑一般為抑制興奮劑活性的化學(xué)試劑。從而，受體拮抗劑的活性一般通過其抑制興奮劑活性的能力來測(cè)定。RAR興奮劑定義為結(jié)合一個(gè)或多個(gè)具有Kd低于1微摩爾(Kd＜1μM)的RAR受體亞型并引起在受體共轉(zhuǎn)染測(cè)試中RAR亞型調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄激活作用的化合物。術(shù)語“RAR興奮劑”包括可以結(jié)合和/或激活除了RARs外，含有其它受體例如RXR受體的化合物。在此，負(fù)性激素或反興奮劑為使得所述受體采取相對(duì)于不存在任何受體情況下基礎(chǔ)狀態(tài)的非活動(dòng)性狀態(tài)的受體配體。從而，盡管拮抗劑可以抑制興奮劑的活性，負(fù)性激素為可以在無興奮劑的情況下改變所述受體構(gòu)象的配體。Bond等人[Nature374272(1995)]已經(jīng)研究了負(fù)性激素或反興奮劑的概念。更準(zhǔn)確地說，Bond等人已經(jīng)提出在非活性構(gòu)象和自發(fā)的活性構(gòu)象之間的平衡中存在非配體結(jié)合的β2-腎上腺素能受體。提出興奮劑使活性構(gòu)象中的受體穩(wěn)定。相反，認(rèn)為反興奮劑穩(wěn)定非活性受體構(gòu)象。從而，盡管拮抗劑通過抑制興奮劑顯示其活性，另外，負(fù)性激素可以在無興奮劑存在的情況下，通過抑制非配體結(jié)合受體向活性構(gòu)象自發(fā)性轉(zhuǎn)化顯示其活性。只有一類拮抗劑將作為負(fù)性激素發(fā)揮作用。如在此所述，AGN193109為拮抗劑和負(fù)性激素。迄今為止，還沒有其它的視黃醛衍生物顯示出具有負(fù)性激素活性。在此，共同給予兩種藥理活性化合物指的是或者體外或者體內(nèi)給予兩種單獨(dú)的化學(xué)實(shí)體。共同給予指的是同時(shí)給予獨(dú)立的制劑；同時(shí)給予制劑的混合物；以及給予一種制劑后再給予第二種制劑。在所有情況下，共同給予的制劑將彼此結(jié)合發(fā)揮作用。術(shù)語烷基指的是(包括)任何(所有)已知的一般烷基、支鏈烷基和環(huán)烷基。術(shù)語鏈烯基指的是(包括)具有一個(gè)或多個(gè)不飽和位置的一般的鏈烯基、支鏈鏈烯基和環(huán)鏈烯基。類似，術(shù)語炔基指的是(包括)具有一個(gè)或多個(gè)三鍵的一般炔基和支鏈炔基。低級(jí)烷基指的是在一般的低級(jí)烷基的情況下，以上確定的廣泛定義的具有1-6個(gè)碳原子的烷基，及適用于3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈和環(huán)烷基。類似地低級(jí)鏈烯基定義為具有2-6個(gè)碳原子的一般的低級(jí)鏈烯基，和3-6個(gè)碳原子的支鏈和環(huán)狀的低級(jí)鏈烯基。類似地，低級(jí)炔基也定義為具有2-6個(gè)碳原子的一般的低級(jí)炔基和4-6個(gè)碳原子的支鏈低級(jí)炔基。在此所用術(shù)語“酯”指的是(包括)在一般用于有機(jī)化學(xué)術(shù)語所定義范圍內(nèi)的任何化合物。它包括有機(jī)酯和無機(jī)酯。當(dāng)B(式1或式101中的)為-COOH時(shí)，該術(shù)語包括用醇或硫醇(優(yōu)選使用具有1-6個(gè)碳原子的脂肪族醇)處理該官能度衍生的產(chǎn)物。當(dāng)所述酯衍生自其中B為-CH2OH的化合物時(shí)，該術(shù)語包括衍生自能夠形成酯的有機(jī)酸包括磷基酸和硫基酸的化合物或具有式-CH2OCOR11的化合物，其中R11為任何取代或未取代的脂肪族、芳香族、雜芳族或脂肪族芳基(優(yōu)選在脂肪族部分具有1-6個(gè)碳原子)。在本申請(qǐng)中除非另外指明，優(yōu)選的酯衍生自10個(gè)或少于10個(gè)碳原子的飽和脂肪族醇或酸或5-10個(gè)碳原子的環(huán)狀或飽和脂肪族環(huán)狀醇和酸。特別優(yōu)選的脂肪族酯為衍生自低級(jí)烷酸和醇的酯。也優(yōu)選苯基或低級(jí)烷基苯基酯。酰胺具有一般有機(jī)化學(xué)中術(shù)語的定義。在此，它包括未取代的酰胺和所有脂肪族和芳族的一取代和二取代的酰胺。在本申請(qǐng)中除非另外指明，優(yōu)選的酰胺為由10個(gè)或少于10個(gè)碳原子的飽和脂肪基衍生的一取代和二取代酰胺或5-10個(gè)碳原子的環(huán)狀或飽和脂肪族環(huán)狀基衍生的一或二取代酰胺。特別優(yōu)選的酰胺為由取代和未取代低級(jí)烷基胺衍生的酰胺。也優(yōu)選取代和未取代苯基或低級(jí)烷基苯基胺衍生的一或二取代酰胺。也優(yōu)選未取代的酰胺?？s醛和縮酮包括式-CK的基團(tuán)，其中K為(-OR)2。在此，R為低級(jí)烷基。K也可以是-OR7O-，其中R7為2-5個(gè)碳原子的低級(jí)烷基，直鏈或支鏈?？梢灾苽淙魏尉哂心苄纬甥}的官能度，例如酸官能度的本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽為保留母體化合物的活性，并不產(chǎn)生對(duì)于接受給藥受試者的任何有害的或不適當(dāng)作用的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽可以來自于有機(jī)或無機(jī)堿。該鹽可以是單價(jià)或多價(jià)離子。特別感興趣的是無機(jī)離子，鈉、鉀、鈣和鎂。使用胺可以制備有機(jī)鹽，特別是銨鹽，例如一-、二-和三-烷基胺或乙醇胺。使用咖啡堿、三甲醇氨基甲烷和類似分子也可以形成鹽。其中有足夠堿性的氮原予以便能形成酸的加成鹽，它可以使用任何無機(jī)或有機(jī)酸或烷基化劑例如碘甲烷來形成。優(yōu)選的鹽為使用無機(jī)酸例如鹽酸、硫酸或磷酸形成的鹽。也可以使用任何簡(jiǎn)單有機(jī)酸例如一-、二-或三-酸中的任何一種。本發(fā)明的一些化合物可以具有反式和順式(E和Z)異構(gòu)體。此外，本發(fā)明的化合物可以包括一個(gè)或多個(gè)手性中性，從而，可以以對(duì)映體或非對(duì)映體的形式存在。本發(fā)明的范圍準(zhǔn)備包括所有的這類異構(gòu)體本身以及順式和反式異構(gòu)體的混合物，也包括非對(duì)映體混合物和對(duì)映體(光學(xué)異構(gòu)體)的外消旋的混合物。在本申請(qǐng)中，當(dāng)沒有特別提及化合物(或不對(duì)稱碳原子)的構(gòu)型(順式、反式或R或S)時(shí)，則指的是這類異構(gòu)體的混合物或其中任何一種異構(gòu)體。具有視黃醛衍生物拮抗劑樣生物活性的芳基取代的苯并吡喃、苯并噻喃、1，2-二氫喹啉和5，6-二氫萘的衍生物對(duì)于式1中的符號(hào)Y而言，優(yōu)選的本發(fā)明化合物為其中Y是苯基、吡啶基、噻吩基或呋喃基的化合物。更優(yōu)選的化合物是其中Y是苯基或吡啶基的化合物，最好是Y為苯基的化合物。對(duì)于所述Y(苯基)和Y(吡啶基)上的取代基而言，優(yōu)選的化合物為其中所述苯基被Z和A-B基團(tuán)1，4(對(duì)位)取代的化合物和其中吡啶環(huán)被Z和A-B基團(tuán)2，5取代的化合物。(在“吡啶”命名法中2，5位取代相當(dāng)于“煙酸”命名法中6位取代。)在本發(fā)明優(yōu)選的化合物中，或者在Y基團(tuán)上沒有可選的R2取代基或者所述可選的R2取代基為氟(F)。優(yōu)選化合物的A-B基團(tuán)為(CH2)n-COOH或(CH2)n-COOR8，其中n和R8如上所定義。最好n為零和R8為低級(jí)烷基，或n為零及B為COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽。在大部分本發(fā)明化合物的優(yōu)選實(shí)施例中，X為[C(R1)2]n，其中n為1。此外，也優(yōu)選其中n為零(茚衍生物)和其中X為S或O(苯并噻喃和苯并吡喃衍生物)的化合物。當(dāng)X為[C(R1)2]n和n為1時(shí)，則R1優(yōu)選為1-6個(gè)碳原子的烷基，更優(yōu)選甲基。優(yōu)選連接到式1化合物的四氫萘、苯并吡喃、苯并噻喃或二氫喹啉部分的芳族部分上的R2基團(tuán)為H、F或CF3。R3優(yōu)選為氫或甲基，更優(yōu)選為氫。涉及在本發(fā)明化合物中的和在式1中所表示的基團(tuán)Z，在大多數(shù)優(yōu)選的實(shí)施例中，Z代表炔鍵(Z＝-C≡C-)。然而，“連接基團(tuán)”Z也優(yōu)選為重氮基(Z＝-N＝N-)，優(yōu)選為烯或多烯基團(tuán)(Z＝-(CR1＝CR1)n’-)，優(yōu)選為酯基(Z＝-COO-)，酰胺(Z＝-CO-NR2-)或硫代酰胺(Z＝-CS-NR2-)鍵。涉及R14基團(tuán)，優(yōu)選其中R14為苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、2-噻吩基和2-噻唑基的化合物。優(yōu)選R15基團(tuán)(R14上的取代基)為氫、低級(jí)烷基、三氟甲基、氯、低級(jí)烷氧基或羥基。涉及式2、式3、式4、式5和式5a的本發(fā)明最優(yōu)選化合物示于表1中。式2式3，式4式5式5a表1化合物式R14*ZR2*R8*#124-甲基苯基-C≡C-HEt1a2苯基-C≡C-HEt223-甲基苯基-C≡C-HEt322-甲基苯基-C≡C-HEt423，5-二甲基苯基-C≡C-HEt524-乙基苯基-C≡C-HEt624-丁基苯基-C≡C-HEt724-氯代苯基-C≡C-HEt824-甲氧基苯基-C≡C-HEt924-三氟甲基苯基-C≡C-HEt1022-吡啶基-C≡C-HEt1123-吡啶基-C≡C-HEt1222-甲基-5-吡啶基-C≡C-HEt1323-羥基苯基-C≡C-HEt1424-羥基苯基-C≡C-HEt1525-甲基-2-噻唑基-C≡C-HEt15a22-噻唑基-C≡C-HEt1624-甲基-2-噻唑基-C≡C-HEt1724，5-二甲基-2-噻唑基-C≡C-HEt1822-甲基-5-吡啶基-C≡C-HH1922-吡啶基-C≡C-HH2023-甲基苯基-C≡C-HH2124-乙基苯基-C≡C-HH2224-甲氧基苯基-C≡C-HH2324-三氟甲基苯基-C≡C-HH2423，5-二甲基苯基-C≡C-HH2524-氯代苯基-C≡C-HH2623-吡啶基-C≡C-HH2722-甲基苯基-C≡C-HH2823-羥基苯基-C≡C-HH2924-羥基苯基-C≡C-HH3025-甲基-2-噻唑基-C≡C-HH30a22-噻唑基-C≡C-HH3124-甲基-2-噻唑基-C≡C-HH3224，5-二甲基-2-噻唑基-C≡C-HH3325-甲基-2-噻吩基-C≡C-HEt33a22-噻吩基-C≡C-HEt3425-甲基-2-噻吩基-C≡C-HH34a22-噻吩基-C≡C-HH3524-甲基苯基-CONH-HEt3624-甲基苯基-CONH-HH3724-甲基苯基-COO-HEt3824-甲基苯基-COO-H(CH2)2Si(CH3)3924-甲基苯基-COO-HH4024-甲基苯基-CONH-FEt4124-甲基苯基-CONHFH4224-甲基苯基-CSNH-HEt4324-甲基苯基-CSNH-HH4424-甲基苯基-CH＝CH-HEt4524-甲基苯基-CH＝CH-HH46a24-甲基苯基-N＝N-HEt46b24-甲基苯基-N＝N-HH4734-甲基苯基-C≡C-HEt4834-甲基苯基-C≡C-HH4944-甲基苯基-C≡C-HEt5044-甲基苯基-C≡C-HH5154-甲基苯基--Et5254-甲基苯基--H6024-甲基苯基-C≡C-HH60a2苯基-C≡C-HH6124-t-丁基苯基-C≡C-HH6224-甲基苯基-CSNHFEt6324-甲基苯基-CSNHFH645a4-甲基苯基-----Et655a4-甲基苯基-----H6622-呋喃基-C≡C-HEt6722-呋喃基-C≡C-HH具有視黃醛衍生物拮抗劑樣生物活性的芳基和(3-氧代-1-丙烯基)取代的苯并吡喃、苯并噻喃、1，2-二氫喹啉和5，6-二氫萘的衍生物參照式101中的符號(hào)Y，優(yōu)選的本發(fā)明化合物為其中Y是苯基、吡啶基、噻吩基或呋喃基的化合物。更優(yōu)選的化合物為其中Y是苯基或吡啶基的化合物，最優(yōu)選的化合物為其中Y是苯基的化合物。就所述Y(苯基)和Y(吡啶基)上的取代基而言，優(yōu)選的化合物為其中所述苯基被-CR16＝CR17-和A-B基團(tuán)1，4(對(duì)位)取代的化合物和其中吡啶環(huán)被-CR16＝CR17-和A-B基團(tuán)2，5取代的化合物。(在“吡啶”命名法中2，5位取代相當(dāng)于“煙酸”命名法中6位取代。)在本發(fā)明優(yōu)選的化合物中，在Y基團(tuán)上沒有可選的R2取代基。優(yōu)選化合物的A-B基團(tuán)為(CH2)n-COOH或(CH2)n-COOR8，其中n和R8如上所定義。最好n為零和R8為低級(jí)烷基，或n為零及B為COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明化合物的優(yōu)選實(shí)施例中，X為[C(R1)2]n，其中n為1。此外，也優(yōu)選其中X為S或O(苯并噻喃和苯并吡喃衍生物)的化合物。當(dāng)X為[C(R1)2]n和n為1時(shí)，則R1優(yōu)選為1-6個(gè)碳原子的烷基，更優(yōu)選甲基。優(yōu)選連接到式101化合物的四氫萘、苯并吡喃、苯并噻喃或二氫喹啉部分的芳族部分上的R2基團(tuán)為H、F或CF3。R3優(yōu)選為氫或甲基，更優(yōu)選為氫。涉及R14基團(tuán)，優(yōu)選其中R14為苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、2-噻吩基和2-噻唑基的化合物。優(yōu)選R15基團(tuán)(R14基團(tuán)的取代基)為氫、低級(jí)烷基、三氟甲基、氯、低級(jí)烷氧基或羥基。涉及式102的本發(fā)明優(yōu)選化合物示于表2中。式102表2化合物R15*R8*101CH3H102CH3Et103HH104HEt生物活性，給藥形式如上所述，本發(fā)明的化合物為一種或多種RAR受體亞型的拮抗劑。這意味著本發(fā)明化合物與一種或多種的RAR受體亞型結(jié)合，然而不觸發(fā)由相同受體的興奮劑觸發(fā)的應(yīng)答。部分本發(fā)明的化合物為所有三種RAR受體亞型(RAR-α、RAR-β和RAR-γ)的拮抗劑，并稱為“RAR全拮抗劑”。其它的部分化合物僅為一種或兩種RAR受體亞型的拮抗劑。在本發(fā)明范圍內(nèi)的部分化合物為一種或兩種RAR受體亞型的部分興奮劑和其余亞型的拮抗劑。本發(fā)明化合物不與RXR受體結(jié)合，從而它們既不是RXR的興奮劑也不是RXR的拮抗劑。根據(jù)位點(diǎn)和需要抑制或改善的不需要的副作用的性質(zhì)，根據(jù)本發(fā)明使用的化合物可以僅是一種或兩種RAR受體亞型的拮抗劑。根據(jù)本發(fā)明所用的部分化合物可以是一種或兩種RAR受體亞型的部分興奮劑和其余亞型的拮抗劑。一般而言，如果所述拮抗劑是作用在RAR受體一種或多種亞型上(它或它們是造成食用過量中毒或不需要的副作用的主要原因)，根據(jù)本發(fā)明這類化合物是有用的。在此關(guān)系中注意到，一般而言，如果在下述共轉(zhuǎn)染測(cè)試中所述化合物不引起受體調(diào)節(jié)報(bào)告基因顯著的轉(zhuǎn)錄激活作用，然而與具有Kd值低于約1μM的受體結(jié)合，則認(rèn)為該化合物是某一給定受體亞型的拮抗劑。是否化合物為RAR拮抗劑，從而根據(jù)本發(fā)明可以使用，在以下的測(cè)試中可以檢驗(yàn)。在公開的PCT申請(qǐng)?zhí)朩O94/17796中(在1994年8月18日公開)詳細(xì)介紹了嵌合體受體反式激活測(cè)試，它檢驗(yàn)在RAR-α、RAR-β和RAR-γ、RXR-α受體亞型中興奮劑樣活性，它是基于FeignerP.L.和HolmM.的工作[FocusVol11，No.2(1989)]。所述公開是美國申請(qǐng)系列號(hào)08/016404(在1993年2月11日申請(qǐng)，以美國專利5455265授權(quán))的PCT的相應(yīng)部分。在該測(cè)試中，化合物應(yīng)不引起通過特定受體亞型(RAR-α、RAR-β和RAR-γ)報(bào)告基因的顯著激活作用，以便作為RAR的合格拮抗劑用于本發(fā)明中。在公開的PCT申請(qǐng)?zhí)朩O93/11755(尤其在30-33頁和37-41頁中，在1993年6月24日公開)中分別介紹了測(cè)定本發(fā)明化合物的拮抗劑/興奮劑樣活性或其與幾種視黃醛衍生物受體亞型的結(jié)合能力的全受體反式激活測(cè)定和配體結(jié)合測(cè)定。以下也提供全受體反式激活測(cè)定的介紹。全受體反式激活測(cè)定使用RAR報(bào)告質(zhì)粒MTV-TREp-LUC(50ng)，以及通過Heyman等人(Cell68397-406)的磷酸鈣方法，在自動(dòng)96孔格式(format)中的RAR表達(dá)媒介物(10ng)之一未轉(zhuǎn)染CV1細(xì)胞(5000細(xì)胞/孔)。就RXR-α和RXR-γ的反式激活測(cè)定而言，基本按照Heyman等人(上述)和Allegretto等人(J.Biol.Chem.26826625-26633)所述方法，使用RXR-應(yīng)答報(bào)告質(zhì)粒CRBPII-tk-LUC(50ng)以及合適的RXR表達(dá)媒介物(10ng)。就RXR-β反式激活測(cè)定而言，如上所述使用RXR-應(yīng)答報(bào)告質(zhì)粒CPRE-tk-LUC(50mg)以及RXR-β表達(dá)媒介物(10mg)。這些報(bào)告質(zhì)粒分別含有來自人CRBPII的DRI元件和來自啟動(dòng)子的某些DRI元件(見Mangelsdorfetal.TheRetinoids；Biology，ChemistryandMedicine，pp.319-349，RavenPressLtd.，NewYork和Heymanetal.，上述)。使用β-半乳糖苷酶(50ng)表達(dá)媒介物作為在轉(zhuǎn)染中的內(nèi)對(duì)照物以便使轉(zhuǎn)染效率方面的變異標(biāo)準(zhǔn)化。將所述細(xì)胞一式三份轉(zhuǎn)染6小時(shí)，然后用視黃醛衍生物孵化36小時(shí)，并測(cè)定其提取物的熒光素酶和β-半乳糖苷酶的活性。Heyman等人(上述)和Allegretto等人(上述)已經(jīng)介紹了用于全受體反式激活的詳細(xì)的試驗(yàn)過程。在該測(cè)定中得到的結(jié)果以EC50數(shù)值表示，同樣在嵌合體受體反式激活測(cè)定中也以EC50數(shù)值表示。配體結(jié)合測(cè)定的結(jié)果以Kd數(shù)值表示。見Chengetal.BiochemicalPharmacology223099-3108。化合物不應(yīng)該通過在全受體反式激活測(cè)定中某一受體亞型(RAR-α、RAR-β或RAR-γ)，引起受體基因的顯著激活，以作為合格的用于本發(fā)明中的RAR拮抗劑。最后但一樣重要，化合物應(yīng)該在Kd低于約1微摩爾(Kd＜1μM)的配體結(jié)合測(cè)定中與至少一個(gè)RAR受體亞型結(jié)合，以便能夠作為所述結(jié)合的受體亞型的拮抗劑發(fā)揮功能，假定同一受體亞型不被所述化合物顯著激活。就本發(fā)明的某些實(shí)例性化合物而言，下表3顯示全受體反式激活測(cè)定的結(jié)果，表4中介紹了與所有反式視黃酸有關(guān)的試驗(yàn)化合物測(cè)定中的效率(以百分率表示)。表5顯示了對(duì)本發(fā)明的某些實(shí)例性化合物的配體結(jié)合測(cè)定的結(jié)果。表3全受體反式激活測(cè)定化合物#EC50(nM)RARαRARβRARγRXRαRXRβRXRγ180.000.000.000.000.000.00190.000.000.000.000.000.00200.000.000.000.000.000.00210.000.000.000.000.000.00220.000.000.000.000.000.00230.000.000.000.000.000.00240.000.000.000.000.000.00250.000.000.000.000.000.00260.000.000.000.000.000.00270.000.000.000.000.000.00280.000.000.000.000.000.00290.000.000.000.000.000.00300.000.000.000.000.000.00310.000.000.000.000.000.00320.000.000.000.000.000.00340.000.000.000.000.000.00360.000.000.000.000.000.00390.000.000.000.000.000.00410.000.000.000.000.000.00450.000.000.000.000.000.0046b0.000.000.000.000.000.00520.000.000.000.000.000.00600.000.000.000.000.000.00610.000.000.000.000.000.00630.000.000.000.000.000.001010.000.000.000.000.000.001030.000.000.000.000.000.00在表3中0.0表示所述化合物在該測(cè)定中的活性(有效性)比所有反式視黃酸活性低20％。表4全反式激活測(cè)定效率(相當(dāng)RA活性的％)化合物#RARαRARβRARγRXRαRXRβRXRγ184.001.000.002.0010.001.0190.005.03.00.09.04.0203.04.00.004.000.003.0212.002.002.003.000.003.00220.000.002.001.000.002.00230.006.003.001.000.004.00243.007.004.001.000.003.00252.003.003.005.000.003.00261.006.000.002.000.003.00279.0014.006.002.000.004.00282.0010.002.002.000.003.00290.006.0011.000.006.002.00303.005.001.000.009.003.00314.0014.002.001.008.006.00320.002.002.001.000.002.00343.005.002.001.000.003.00361.005.000.001.007.002.00391.007.009.002.000.001.00413.005.006.001.000.003.00452.000.007.003.008.000.0046b4.005.003.002.000.004.00520.0015.003.000.000.0010.00600.001.004.003.000.003.00612.002.000.001.000.003.00632.002.007.001.000.001.001010.004.002.001.000.003.01034.0012.07.00.000.02.0表5配體結(jié)合測(cè)定化合物#Kd(nM)RARαRARβRARγRXRαRXRβRXRγ1824.0011.0024.000.000.000.00195652106590.000.000.0020130.0022.034.000.000.000.0021169130.000.000.002224.017.027.00.000.000.002332.0025.0031.000.000.000.00246992352860.000.000.00255017200.000.000.002640.0031.0036.000.000.000.002769.0014.0026.000.000.000.0028669772360.000.000.002923448800.000.000.00306831412190.000.000.003137052.00100.000.000.000.00320.0089.00169.000.000.000.003452.0030.0017.000.000.000.003613.00550.000.000.000.000.003967.0038.00113.000.000.000.00415.14917250.000.000.004512.02.8017.00.000.000.0046b2503.705.800.000.000.005260.0063.0056.000.000.000.00601.51.93.30.000.000.00619615160.000.000.006313332190.000.000.000.001017501436370.000.000.001033012732610.000.000.00表5中0.0表示大于1000nM的值。正如從歸結(jié)于表3、4和5中的試驗(yàn)結(jié)果可見，其中顯示的本發(fā)明的實(shí)例性化合物為RAR受體亞型的拮抗劑，然而不具有對(duì)于RXR受體亞型的親和力。(本發(fā)明的其它化合物可以是部分然而不是所有RAR受體亞型的拮抗劑并且是其余RAR亞型的興奮劑。)由于這一性質(zhì)，本發(fā)明的化合物可以在生物測(cè)定中用于阻滯RAR興奮劑的活性。在哺乳動(dòng)物包括人類中，可以與RAR興奮劑一起共同給予本發(fā)明的化合物，通過藥理選擇性或位點(diǎn)特異性傳遞，優(yōu)選防止RAR興奮劑的不需要的副作用。本發(fā)明的化合物也可以用于治療由于過量服用維生素A補(bǔ)劑或攝入含有高含量維生素A的某些魚和動(dòng)物的肝臟導(dǎo)致的慢性或急性維生素A過量。此外，本發(fā)明的化合物也可以用于由視黃醛衍生物藥物引起的急性或慢性毒性。在本領(lǐng)域內(nèi)已知觀察到的維生素A過多綜合癥(頭痛、脫皮、骨毒性、異常脂質(zhì)血癥)的毒性與使用其它視黃醛衍生物觀察到的毒性類似或相同，提示共同的生物學(xué)因素，即RAR激活。因?yàn)楸景l(fā)明的化合物阻滯RAR激活，所以它們適用于治療上述毒性。當(dāng)將本發(fā)明的化合物局部共同給藥于皮膚上時(shí)，本發(fā)明的化合物基本上能夠防止由RAR興奮劑視黃醛衍生物所誘導(dǎo)的皮膚刺激。類似，可以將本發(fā)明的化合物局部用藥給予皮膚，以便在全身性給予RAR興奮劑化合物的患者或動(dòng)物中阻滯皮膚刺激。本發(fā)明的化合物可以加速自預(yù)先存在的視黃醛衍生物毒性的恢復(fù)，可以阻滯由共同給予視黃醛衍生物所引起的血甘油三酯過多和可以阻滯由RAR興奮劑(視黃醛衍生物)引起的骨毒性。一般而言，作為根據(jù)本發(fā)明在哺乳動(dòng)物中的治療用法，可以經(jīng)腸道或皮膚表面給予所述拮抗劑化合物，作為已經(jīng)不再繼續(xù)服用致病因子(維生素A前體或其它視黃醛衍生物)后的維生素A、維生素A前體的解毒劑或由于過量服用或長(zhǎng)期接觸導(dǎo)致的視黃醛衍生物毒性的解毒劑?？蛇x將所述拮抗劑化合物與根據(jù)本發(fā)明的視黃醛衍生物藥物一起共同給藥，在此情況下，所述視黃醛衍生物提供有益的治療作用，而所述共同給予的拮抗劑改善或除去所述視黃醛衍生物的一種或多種不需要的副作用。就這種類型用法而言，可以在特定部位給予所述拮抗劑，例如作為皮膚表面涂抹的乳膏或洗劑，而所述共給予的視黃醛衍生物可以經(jīng)腸道給藥。就根據(jù)本發(fā)明的治療用法而言，將所述拮抗劑化合物摻入藥用組合物中例如片劑、丸劑、膠囊、溶液劑、懸浮液、乳膏、軟膏、凝膠、油膏、洗劑等，使用本身為本領(lǐng)域內(nèi)熟知的藥學(xué)上可接受的賦形劑和載體。例如在Remington’sPharmaceuticalScience(Edition17，MackPublishingCompany，Easton，Pennsylvania)中詳細(xì)介紹了皮膚表面制劑的制備。就皮膚表面用法而言，也可以以粉末或噴霧劑尤其氣溶膠形式給予拮抗劑化合物。如果全身性給予該藥物，可以將其配制成粉末、丸劑、片劑等或適合口服的糖漿劑或酏劑。就靜脈或腹膜內(nèi)注射而言，將所述拮抗劑化合物制成能夠注射給藥的溶液或懸浮液。在某些情況下，配制注射用拮抗劑化合物是有用的。在某些情況下，配制所述拮抗劑化合物為栓劑或置于皮下或肌肉注射的緩釋制劑是有用的。以根據(jù)本發(fā)明的有效治療劑量給予所述拮抗劑化合物。治療濃度為使具體病癥(例如由于接觸視黃醛衍生物或維生素A引起的毒性或視黃醛衍生物藥物的副作用)減輕或阻止其擴(kuò)張的濃度?？梢岳斫?，當(dāng)共同給予所述拮抗劑化合物以便阻滯視黃醛衍生物誘導(dǎo)的毒性或根據(jù)本發(fā)明的副作用時(shí)，以預(yù)防方式使用所述拮抗劑化合物以便防止具體病癥例如皮膚刺激的發(fā)生。有用的治療或預(yù)防濃度隨著病癥的不同而變化，在某些情況下，隨著所治療疾病的嚴(yán)重性和患者對(duì)于治療的敏感性可以改變所用濃度。因此，沒有一種濃度可以一成不變地使用，而是根據(jù)慢性或急性視黃醛衍生物毒性的特殊性或治療的有關(guān)癥狀需要加以改變。通過常規(guī)試驗(yàn)可以得到所需濃度。然而，預(yù)期每毫升制劑含有0.01-1.0毫克的拮抗劑化合物的制劑為皮膚表面使用的有效治療濃度。如果需要全身性給藥，預(yù)期每日每公斤體重0.01-5毫克的用量可以達(dá)到治療效果。利用RAR拮抗劑以便預(yù)防或治療RAR興奮劑誘導(dǎo)的毒性的基礎(chǔ)是競(jìng)爭(zhēng)性抑制由RAR興奮劑激活RAR受體。RAR拮抗劑的這兩種用途的主要差別在于有或沒有先前存在的視黃醛衍生物毒性。以下將介紹的大部分的實(shí)施例涉及用于防止視黃醛衍生物毒性的視黃醛衍生物的用途，然而，在此所述的一般的方法也用于治療先前存在的視黃醛衍生物毒性。顯示用于預(yù)防或治療視黃醛衍生物毒性和/或視黃醛衍生物藥物的副作用的RAR用途的試驗(yàn)介紹實(shí)施例1皮膚表面使用的拮抗劑治療由局部皮膚使用興奮劑誘導(dǎo)的皮膚刺激化合物4-[(E)-2-(5，6，7，8-四氫-5，5，8，8-四甲基萘-2-基)丙烯-1-基]苯甲酸(稱為AGN191183)在現(xiàn)有技術(shù)中被認(rèn)為是有效的RAR興奮劑(例如見美國專利5324840的說明書部分和圖2b)。(“AGN”數(shù)字為本發(fā)明的合作受讓人所使用的任意指定的參考數(shù)字，目的是識(shí)別化合物)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(AGN192869也稱作化合物60a)為以下介紹的制備過程中的化合物。該化合物為RAR拮抗劑。也通過在裸鼠皮膚表面給予RAR拮抗劑AGN192869可以阻滯由皮膚表面給予RAR興奮劑劑AGN191183誘導(dǎo)的皮膚刺激。更具體地說，通過日常主觀評(píng)價(jià)脫皮和擦傷，在半定量級(jí)別上測(cè)定皮膚刺激。一個(gè)單一數(shù)字(皮膚表面刺激指數(shù))概括了在試驗(yàn)過程中在動(dòng)物體上產(chǎn)生的皮膚刺激。皮膚刺激指數(shù)如下計(jì)算。所述皮膚表面刺激指數(shù)為綜合脫皮指數(shù)和綜合擦傷指數(shù)的代數(shù)和。對(duì)于脫皮和擦傷的綜合指數(shù)分別在0-9和0-8的范圍內(nèi)，并且考慮所述觀察脫皮和擦傷的最大嚴(yán)重性、發(fā)作時(shí)間和平均嚴(yán)重性。按5分級(jí)給脫皮的嚴(yán)重性評(píng)分，按4分級(jí)給擦傷的嚴(yán)重性評(píng)分，較高的指數(shù)反映較大的嚴(yán)重性。綜合指數(shù)的最高嚴(yán)重分值為在觀察過程中給某一動(dòng)物打的最高日常嚴(yán)重性指數(shù)。就綜合指數(shù)的開始發(fā)作分值而言，所指定的0-4范圍的指數(shù)如下表6嚴(yán)重性2或2以上的外觀脫皮或擦傷次數(shù)(天)發(fā)作指數(shù)的次數(shù)806-71523-431-24綜合指數(shù)的平均嚴(yán)重性分值為日常脫皮或擦傷指數(shù)的總合除以觀察的天數(shù)。治療的第一天不計(jì)算在內(nèi)，因?yàn)樗鏊幬镌诘谝淮沃委煏r(shí)還沒有發(fā)揮作用。為了計(jì)算綜合脫皮和擦傷指數(shù)，將平均嚴(yán)重性和發(fā)作指數(shù)的次數(shù)加和并除以2。將該結(jié)果加到最高嚴(yán)重性指數(shù)中。然后將綜合脫皮和擦傷指數(shù)加和以便給出總的皮膚表面刺激指數(shù)。每個(gè)動(dòng)物有其皮膚表面刺激指數(shù)，其值被表示為每組動(dòng)物的單獨(dú)指數(shù)的均值±SD。該值近似成整數(shù)。用丙酮、AGN191183、AGN192869或AGN192869和AGN191183的某種混合物連續(xù)5天皮膚表面處理雌性裸鼠[CrlSKH1-hrBR](8-12周齡，n＝6)。各個(gè)化合物的劑量示于表7中。以總體積為4ml/kg(約0.1ml)將所述治療劑涂抹到動(dòng)物的背側(cè)皮膚上。每天觀察小鼠并就脫皮和擦傷進(jìn)行評(píng)分直到最后一次治療后3天，即第8天為止。表7實(shí)施例1的試驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果劑量劑量摩爾比AGN191183AGN192869(192869皮膚表面組(mg/kg/d)(mg/kg/d)(191183刺激指數(shù)A00--0±0B0.0250--8±2C0.0250.062∶15±2D0.0250.3010∶12±1E0.0251.550∶11±0F01.5--0±0在表7中給出了實(shí)施例1的皮膚表面刺激評(píng)分。在劑量為1.5mg/kg/d(組F)下，丙酮(溶媒)或AGN192869(拮抗劑)不引起可觀察到的皮膚表面刺激。在劑量為0.025mg/kg/d情況下，AGN191183(RAR興奮劑)引起適度的皮膚表面刺激。然而，使用AGN192869以劑量依賴形式抑制AGN191183誘導(dǎo)的皮膚表面刺激，在50倍摩爾過量的AGN192869的存在下，幾乎完全消除刺激作用。這表明皮膚表面RAR拮抗劑阻滯由皮膚表面RAR興奮劑引起的皮膚刺激。當(dāng)所述RAR拮抗劑更有效時(shí)，例如化合物4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(AGN193109在本申請(qǐng)中也稱作化合物60)，使用較低的拮抗劑與興奮劑的摩爾比可以達(dá)到對(duì)RAR興奮劑誘導(dǎo)的皮膚刺激的完全阻滯。實(shí)施例2通過皮膚表面使用拮抗劑來阻滯由口服興奮劑所誘導(dǎo)的皮膚刺激在該實(shí)施例中使用有效力的RAR興奮劑AGN191183(4-[(E)-2-(5，6，7，8-四氫-5，5，8，8-四甲基萘-2-基)丙烯-1-基]苯甲酸)和有效力的RAR拮抗劑4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(AGN193109，化合物60)并利用試驗(yàn)動(dòng)物(小鼠)的體重作為全身性RAR興奮劑接觸的標(biāo)志。使用玉米油或懸浮在玉米油(5ml/kg)中的AGN191183(0.26mg/kg)通過胃內(nèi)插管給予各組中的雌性裸鼠(8-12周齡，n＝6)。同時(shí)在小鼠的背側(cè)皮膚上表面給予溶媒(97.6％丙酮/2.4％二甲亞砜)或AGN193109在溶媒中的溶液(6ml/kg)。用于不同組的特定劑量示于表8中。連續(xù)4天每日給藥。將小鼠稱重并按照實(shí)施例1中所述給每日的皮膚表面刺激評(píng)分，直到最后一次試驗(yàn)后1天為止。通過由最初體重(第一天)減去最終體重(第五天)，除以最初體重并乘以100％，計(jì)算體重變化的百分比。如實(shí)施例1中所述計(jì)算皮膚表面刺激指數(shù)。對(duì)于不同組的表面刺激指數(shù)和失去體重示于表8中。分別通過皮膚表面和口服給予溶媒即丙酮和玉米油的聯(lián)合治療不引起皮膚表面刺激或失去體重。類似，利用口服溶媒和皮膚表面給予拮抗劑AGN193109聯(lián)合治療不產(chǎn)生皮膚表面刺激或失去體重。單獨(dú)口服AGN191183導(dǎo)致顯著失去體重和皮膚刺激。當(dāng)與較低劑量的AGN193109一起使用時(shí)，AGN191183誘導(dǎo)的皮膚刺激被顯著地降低，而在較高劑量的AGN193109下可以完全阻滯。通過皮膚表面給予AGN193109，以與劑量相關(guān)的方式也阻滯AGN191183誘導(dǎo)的失去體重，然而該阻滯不完全。因而，皮膚表面給予AGN193109優(yōu)選阻滯AGN191183的皮膚毒性。假定低劑量的AGN193109被全身性吸收，從而部分阻滯由AGN191183誘導(dǎo)的失去體重。然而，這種吸收在具有較低滲透性皮膚的動(dòng)物例如人類中可能較低。另外，AGN193109對(duì)于失去體重的抑制作用可能是由于改善了AGN191183誘導(dǎo)的皮膚刺激的結(jié)果。表8實(shí)施例2的試驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果皮膚表面使用口服AGN191183增加或失去的AGN193109的量的劑量體重％皮膚表面組(mg/kg/d)(mg/kg/d)刺激指數(shù)A001±20±0B00.26(21±6)8±1C0.120.26(9±5)1±1D0.470.26(3±5)0±1E0.4703±30±0從而，實(shí)施例2顯示皮膚表面給予RAR拮抗劑可用于優(yōu)選阻滯由口服給予RAR興奮劑誘導(dǎo)的皮膚刺激。實(shí)施例3皮膚表面使用拮抗劑加速自預(yù)先存在的視黃醛衍生物毒性的恢復(fù)在該實(shí)施例中，通過皮膚表面給予RAR興奮劑AGN191183誘導(dǎo)失去體重，然后經(jīng)皮膚表面給予溶媒或RAR拮抗劑AGN193109治療所述試驗(yàn)動(dòng)物。連續(xù)2天，每天用在溶媒(97.6％丙酮/2.4％DMSO，4ml/kg)中的AGN191183(0.13mg/kg/d)經(jīng)皮膚表面處理雌性裸鼠(8-12周齡，n＝5)。然后，從第三天開始，連續(xù)3天，每天用溶媒或在溶媒中的AGN193109(4mg/kg)經(jīng)皮膚表面處理各組中相同的小鼠(n＝5)。在1-5天和第8天稱量小鼠。體重表示為均值±SD。使用未配對(duì)的、二-尾部t-檢驗(yàn)(two-tailedt-test)從統(tǒng)計(jì)學(xué)上比較均值。當(dāng)P＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異顯著。表9實(shí)施例3的結(jié)果治療體重(g)(3-5天)第1天第2天第3天第4天第5天第8天溶媒24.6±1.523.9±1.221.4±1.220.3±1.721.0±1.424.7±1.0AGN19310923.9±1.023.5±1.221.4±0.622.2±0.722.8±0.825.0±1.1實(shí)施例3中體重隨時(shí)間的變化過程示于表9中。由于在第一天和第二天AGN191183處理的結(jié)果，兩組小鼠的體重在第二天和第三天平行下降。然而，AGN193109處理與溶媒處理相比在第四天和第五天顯著增加體重。這些數(shù)據(jù)顯示通過其后使用AGN193109的處理加速自AGN191183誘導(dǎo)的失去體重的恢復(fù)。在第八天，兩組小鼠之間體重沒有顯著差異，顯示在給定的足夠時(shí)間內(nèi)，可達(dá)到完全恢復(fù)。從而，RAR拮抗劑可以有效地減輕RAR興奮劑誘導(dǎo)的毒性，即使RAR興奮劑誘導(dǎo)的毒性在RAR拮抗劑處理之前，即在所述RAR興奮劑毒性方案中。實(shí)施例4口服給予拮抗劑阻滯由口服共同給予視黃醛衍生物興奮劑誘導(dǎo)的血甘油三酯過多癥5-[(E)-2-(5，6，7，8-四氫-3，5，5，8，8-五甲基萘-2-基)丙烯-1-基]-2-噻吩羧酸為已知的RAR/RXR全-興奮劑(見美國專利5324840，表32)并稱為AGN191659。該化合物口服用于在大鼠中誘導(dǎo)急性血甘油三酯過多癥，口服共同給予AGN193109(化合物60)以便阻滯AGN191659誘導(dǎo)的血甘油三酯過多癥。使用玉米油(溶媒)、AGN191659、AGN193109或AGN191659和AGN193109的混合物，經(jīng)胃管給予雄性Fescher大鼠(6-7周齡，n＝5)。給予在玉米油中的微細(xì)懸浮液形式的AGN191659和AGN193109。所述試驗(yàn)設(shè)計(jì)，包括所用劑量示于表10中。在二氧化碳麻醉下，自下靜脈腔中抽取血樣。通過低速離心將血清自血液中分出。利用市場(chǎng)上可買到成套儀器并適用于96-孔接種板格的標(biāo)準(zhǔn)分光光度終點(diǎn)測(cè)定法測(cè)定總的血清甘油三酯(甘油三酯加甘油)。血清甘油三酯的水平表示為均值±SD。通過單向方差分析從統(tǒng)計(jì)學(xué)上比較均值，如果發(fā)現(xiàn)顯著性差異，然后進(jìn)行Dunnett’s檢驗(yàn)。當(dāng)P＜0.05時(shí)認(rèn)為差異顯著。如在表10中所示，AGN191659本身引起相對(duì)溶媒處理血清甘油三酯的顯著升高。AGN193109本身不顯著增加血清甘油三酯。AGN193109和AGN191659的摩爾比為1∶1和5∶1的混合物顯著降低血清甘油三酯到與對(duì)照沒有顯著區(qū)別的水平。表10實(shí)施例4的試驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果組治療(劑量)血清甘油三酯(mg/dl)A溶媒55.0±3.1BAGN193109(19.6mg/kg)52.4±6.3CAGN191659(3.7mg/kg)122.5±27.6DAGN193109(3.9mg/kg)55.7±14.7+AGN191659(3.7mg/kg)EAGN193109(19.6mg/kg)72.7±8.9+AGN191659(3.7mg/kg)實(shí)施例4顯示可以使用RAR拮抗劑阻滯由共同給予的視黃醛衍生物誘導(dǎo)的血甘油三酯過多癥。實(shí)施例5胃腸外使用拮抗劑阻滯由胃腸外共同給予視黃醛衍生物興奮劑誘導(dǎo)的骨毒性實(shí)施例5顯示RAR拮抗劑可以阻滯由RAR興奮劑誘導(dǎo)的骨毒性。在該實(shí)施例中，使用AGN193109以便在豚鼠中阻滯由共同給予RAR興奮劑AGN191183引起的早熟性骺板閉合。將含有溶媒(20％二甲亞砜/80％聚乙二醇-300)、AGN191183(0.06mg/ml)或與AGN193109(0.34mg/ml)結(jié)合的AGN191183(0.06mg/ml)的滲透泵腹膜內(nèi)移植入各組的雄性Hartley豚鼠(約3周齡，n＝4)體內(nèi)。由制造商設(shè)計(jì)的滲透泵可每小時(shí)傳遞約5μl溶液，連續(xù)14天。在移植14天后通過二氧化碳窒息處死動(dòng)物。取出左脛骨并置于10％的緩沖福爾馬林中。通過與甲酸/福爾馬林溶液接觸3-4天使該脛骨脫鈣，并制備石蠟切片。通過標(biāo)準(zhǔn)方法，用蘇木素和曙紅使切片染色。檢查近端脛骨骺板并根據(jù)閉合或未閉合評(píng)分。為此，將骺板閉合規(guī)定為所示骺生長(zhǎng)板軟骨連續(xù)性中斷，即被骨和/或成纖維細(xì)胞組織所代替。四只用溶媒處理的豚鼠沒有一只在所示試驗(yàn)結(jié)束時(shí)顯示骺板閉合。這是預(yù)料之中的，因?yàn)殡嗍竺劰墙索堪逡话阒钡剿鰟?dòng)物至少10月齡才閉合。所有四只AGN191183處理的豚鼠顯示部分或完全骺板閉合。然而，用AGN191183和AGN193109的混合物處理任何一只豚鼠均未顯示骺板閉合。從而，當(dāng)胃腸外共同給予這些化合物時(shí)，以5倍摩爾過量的AGN193109完全阻滯AGN191183誘導(dǎo)的骨毒性。RAR拮抗劑化合物化合物4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(AGN193109，化合物60)和4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(AGN192869，化合物60a)為RAR拮抗劑的實(shí)例，將它們用于上述動(dòng)物試驗(yàn)以便阻滯根據(jù)本發(fā)明的RAR受體。下式(式1)化合物作為根據(jù)本發(fā)明使用的其它RAR拮抗劑化合物其它的和一般的實(shí)例。式1在式1中，X為S、O、NR’，其中R’為H或1-6個(gè)碳原子的烷基，或X為[C(R1)2]n其中R1為H或1-6個(gè)碳原子的烷基，及n為0或1的整數(shù)；R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；Z為-C≡C-，-N＝N-，-N＝CR1-，-CR1＝N，-(CR1＝CR1)n’-其中n’為0-5的整數(shù)，-CO-NR1-，-CS-NR1-，-NR1-CO，-NR1-CS，-COO-，-OCO-，-CSO-，-OCS-；Y是苯基或萘基或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，所述苯基和雜芳基可選被一個(gè)或兩個(gè)R2基團(tuán)取代，或當(dāng)Z為-(CR1＝CR1)n’-和n’為3、4或5時(shí)，則Y代表在該(CR1＝CR1)n’基團(tuán)和B之間的直接價(jià)鍵；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為含有1-5個(gè)碳原子的烷基、環(huán)烷基或鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基，和R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，N(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。芳基取代化合物的合成方法通過在此介紹的合成化學(xué)途徑可以制備式1實(shí)例性RAR拮抗劑化合物。合成化學(xué)家將容易贊同在此所設(shè)立的反應(yīng)條件為可以一般化到任何及所有由式1所代表的化合物的特定實(shí)施方案。反應(yīng)圖式1反應(yīng)圖式1(續(xù))反應(yīng)圖式1顯示式1化合物的合成，其中Z基團(tuán)為乙炔基(-C≡C-)和X為[C(R1)2]n，其中n為1。換句話說，反應(yīng)圖式1顯示本發(fā)明的乙炔基取代的二氫萘衍生物的合成。根據(jù)該圖式，使式6四氫萘-1-酮化合物溴化以提供式7溴代衍生物。所述式6化合物已經(jīng)帶有所需的R1、R2和R3取代基(它們根據(jù)以上式1所定義)。式6化合物的優(yōu)選實(shí)例為3，4-二氫-4，4-二甲基-1(2H)-萘，它在化學(xué)文獻(xiàn)中被介紹[Arnoldetal.J.Am.Chem.Soc.692322-2325(1947)]。自1-溴-3-苯基丙烷合成該化合物的優(yōu)選的途徑也在本申請(qǐng)的實(shí)驗(yàn)部分被介紹。然后，使式7化合物與(三甲基甲硅烷基)乙炔反應(yīng)，提供式8(三甲基甲硅烷基)乙炔基取代-3，4-二氫-萘-1(2H)-酮。與(三甲基甲硅烷基)乙炔的反應(yīng)一般在碘化亞酮、合適的催化劑[一般具有式Pd(PPh3)2Cl2]、酸性受體(例如三乙胺)的存在下，在惰性氣體(氬氣)中，加熱(約100℃)進(jìn)行。一般反應(yīng)時(shí)間為約24小時(shí)。然后，使式8(三甲基甲硅烷基)乙炔基取代-3，4-二氫-萘-1(2H)-酮與堿(氫氧化鉀或碳酸鉀)在醇溶劑例如甲醇中反應(yīng)，提供式9乙炔基取代-3，4-二氫-1-萘-1(2H)-酮。然后，使式9化合物與芳族或雜芳族試劑X1-Y(R2)-A-B’(式10)在碘化亞酮、合適的催化劑(一般為Pd(PPh3)2Cl2)、酸性受體(例如三乙胺)的存在下，在惰性氣體(氬氣)中偶合?？蛇x將式9化合物的鋅鹽(或其它合適的金屬鹽)與式10反應(yīng)劑在Pd(PPh3)4或類似的復(fù)合物存在下偶合。一般與試劑X1-Y(R2)-A-B’(式10)的偶合反應(yīng)在室溫或適度升高的溫度下進(jìn)行。一般而言，在乙炔基芳基衍生物或其鋅鹽和鹵素取代芳基或雜芳基化合物(例如式10試劑)之間的偶合過程在美國專利5264456中被介紹。式11化合物為本發(fā)明實(shí)例性化合物或其在B’基團(tuán)中保護(hù)的衍生物(通過本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的反應(yīng)可以容易地將該保護(hù)基除去)的前體，。通過本領(lǐng)域內(nèi)熟知的這類反應(yīng)和轉(zhuǎn)化，可以將所述式11化合物轉(zhuǎn)變成所述實(shí)例性化合物的其它前體。通過轉(zhuǎn)化為“同系物和衍生物”的這類反應(yīng)在反應(yīng)圖式1中被說明。用于幾個(gè)實(shí)例性化合物合成的這類轉(zhuǎn)變之一為酯基(當(dāng)B或B’為酯基時(shí))的皂化以便提供游離羧酸或其鹽。一般而言，通過本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的反應(yīng)可以獲得式10鹵素取代芳基或雜芳基化合物。這類化合物的實(shí)例為4-碘代苯甲酸乙酯，例如它可以通過4-碘代苯甲酸的酯化而得到。另一實(shí)例為6-碘代煙酸乙酯(ethyl6-iodonicotinoate)，它可以通過在6-氯煙酸上進(jìn)行鹵素交換反應(yīng)，然后酯化而得。一般而言，關(guān)于式11化合物的衍生化和/或式10的芳基和雜芳基化合物(它們?nèi)缓罂梢耘c式9化合物反應(yīng))的合成，可以利用下列眾所周知和公開的一般原理和工藝。一般通過在酸性催化劑例如氯化氫或亞硫酰氯的存在下，在合適的醇的溶液中，回流所述酸將羧酸酯化。可選將所述羧酸與合適的醇在二環(huán)己基碳二亞胺和二甲氨基吡啶存在下縮合。用常規(guī)方法回收和純化所述酯。通過March所述方法(AdvancedOrganicChemistry，2ndEdition，McGraw-HillBookCompany，p.810)可以容易地制備縮醛和縮酮。醇、醛和酮均可以通過例如在McOmie(PlenumPublishingPress，1973)和ProtectingGroups(Ed.Greene，JohmWiley&Sons，1981)中所介紹的已知方法分別形成醚和酯、縮醛或縮酮來保護(hù)。為了在進(jìn)行反應(yīng)圖式1的偶合反應(yīng)(其中相當(dāng)于式10的所述化合物不能從市場(chǎng)上買到)之前，增加式10化合物中n的值，通過在Amdt-Eistert條件或其它容許的反應(yīng)過程下連續(xù)地處理，使芳族或雜芳族羧酸符合要求(homologation)。也可選通過合適的方法，使不是羧酸的衍生物符合要求。然后，通過以上所述的通法使符合要求的酸酯化。例如通過為具有實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的有機(jī)化學(xué)家所熟知的合成圖式，可以制備其中A為具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的鏈烯基的式10化合物(或其它中間體或?qū)嵗衔?；例如通過Wittig等反應(yīng)或通過自α-鹵代芳基烷基羧酸、酯或類似的羧基醛(carboxaldehyde)中除去鹵素導(dǎo)入雙鍵。通過相應(yīng)的芳基甲基酮與強(qiáng)堿例如二異丙基氨基鋰反應(yīng)(與氯代磷酸二乙酯反應(yīng)，然后加入二異丙基氨基鋰)可以制備其中A基團(tuán)具有三鍵(乙炔基)的式10化合物(或其它中間體或?qū)嵗衔?。由相應(yīng)的酯可以容易地獲得由式11化合物(或其它中間體或?qū)嵗衔?衍生的酸和鹽。使用堿金屬堿的堿性皂化將提供所述酸。例如可以將式11酯(或其它中間體或?qū)嵗衔?溶解在極性溶劑例如鏈烷醇中，優(yōu)選在惰性氣體中，在室溫下，使用約3摩爾過量的堿例如氫氧化鋰或氫氧化鉀。將所述溶液攪拌一定時(shí)間，15-20小時(shí)，冷卻，酸化并通過常規(guī)方法回收其水解產(chǎn)物。通過本領(lǐng)域內(nèi)任何已知的、合適的酰胺化方法由相應(yīng)的酯或羧酸可以形成酰胺。制備這類化合物的一個(gè)方法為轉(zhuǎn)變羧酸為酰氯，然后用氫氧化銨或適合的胺處理該化合物。通過使用亞硫酰氯或其它的方法(J.March，AdvancedOrganicChemistry，2ndEdition，McGram-HillBookCompany)將相應(yīng)的酸轉(zhuǎn)化為酰氯，然后用硼氫化鈉(March，lbid，p.1124)還原所述酰氯，產(chǎn)生相應(yīng)的醇來制備醇?？蛇x使用氫化鋰鋁在低溫下還原酯。在Williamson反應(yīng)條件下(March，Ibid，p.357)使用合適的鹵化烷使這些醇烷基化，產(chǎn)生相應(yīng)的醚。通過使所述醇與合適的酸在酸性催化劑或二環(huán)己基碳二亞胺和二甲氨基吡啶的存在下反應(yīng)，可以將所述醇轉(zhuǎn)化為酯。使用溫和的氧化劑例如二氯甲烷中的重鉻酸吡啶鎓(Corey，E.J.，Schmidt，G.，Tet.Lett.399，1979)或二氯甲烷中的二甲亞砜/草酰氯(Omura，K.，Swern，D.，Tetrahedron341651(1978))可以由相應(yīng)的一級(jí)醇制備醛。通過用烷基Grignard試劑或類似的試劑處理所述醛，然后氧化可以由合適的醛制備酮。通過在March，Ibid，p.810中所述方法，由相應(yīng)的醛或酮制備縮醛或縮酮。由相應(yīng)的鹵化芳族或雜芳族化合物(優(yōu)選其中所述鹵素為碘)可以制備其中B是氫的式10化合物(或其它中間體或?qū)嵗曰衔?。再次參考反應(yīng)圖式1，使式11化合物與雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉和2-[N，N-雙(三氟甲基磺?；?氨基]-5-氯代吡啶在惰性醚類溶劑例如四氫呋喃中，于低溫(-78℃和0℃)下反應(yīng)。所述內(nèi)容被顯示在反應(yīng)圖式1中，其中通常將未分離的鈉鹽中間體表示在括號(hào)中，如式12。所述反應(yīng)產(chǎn)生式13所代表的三氟甲基磺酰氧基衍生物。(Tf＝SO2CF3)。然后，通過與由所述芳基或雜芳基化合物R14H所衍生有機(jī)金屬衍生物反應(yīng)，將式13化合物轉(zhuǎn)變成為以式14所表示的本發(fā)明的實(shí)例性化合物，所述有機(jī)金屬衍生物的分子式為R14Met(Met代表一價(jià)金屬)，優(yōu)選R14Li(R14如式1中所定義)。所述與有機(jī)金屬衍生物(優(yōu)選分子式R14Li的鋰衍生物)的反應(yīng)一般在惰性醚類溶劑(例如四氫呋喃)中，在氯化鋅(ZnCl2)和四(三苯基磷)-鈀(0)(Pd(PPh3)4)的存在下進(jìn)行。如果所述有機(jī)鋰試劑R14Li市場(chǎng)上不能買到，可以由所述化合物R14H(或其鹵素衍生物R14-X1其中X1為鹵素)在本領(lǐng)域內(nèi)已知的醚類溶劑中制備。所述試劑R14Li和式13化合物之間反應(yīng)的溫度范圍一般而言在約-78℃-50℃內(nèi)。根據(jù)以上所討論的反應(yīng)，可以將式14化合物轉(zhuǎn)變成其它同系物和衍生物。也可以將反應(yīng)圖式1中所示的式7中間體7-溴-四氫萘-1-酮化合物與具有式R14MgBr(R14如式1中所定義)的Grignard試劑發(fā)生轉(zhuǎn)化產(chǎn)生式15叔醇。通過用酸處理使所述叔醇脫水提供式16的3，4-二氫-7-溴代萘衍生物，它作為合成本發(fā)明的其它化合物的中間體(見反應(yīng)圖式6、7和8)。反應(yīng)圖式2參照反應(yīng)圖式2，介紹了上述化合物的合成途徑，其中對(duì)于式1而言，X為S、O或NR’，及Z為乙炔基(-C≡C-)。在該反應(yīng)序列中的原料為具有式17所示結(jié)構(gòu)的溴代苯酚、溴代硫酚或溴代苯胺。為了簡(jiǎn)化本說明書，在其后的介紹中，可以認(rèn)為X主要是硫，用于制備苯并噻喃衍生物。然而，應(yīng)記住的是在此所述的圖式(包括對(duì)于本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員是顯而易見的改進(jìn))也適用于制備本發(fā)明的苯并吡喃(X＝O)和二氫喹啉(X＝NR’)化合物。因而，使式17化合物優(yōu)選對(duì)溴硫酚、對(duì)溴苯酚或?qū)︿灞桨吩趬A性條件下與式18的3-溴羧酸反應(yīng)。在該反應(yīng)圖式中，所述符號(hào)具有式1中所述的定義。作為式18反應(yīng)劑的實(shí)例(其中R3為氫)為3-溴丙酸。與式18的3-溴羧酸反應(yīng)產(chǎn)生式19化合物。通過用酸處理使后者環(huán)合產(chǎn)生具有式20的6-溴二氫苯并噻喃-4-酮衍生物(當(dāng)X為S時(shí))或6-溴苯并二氫吡喃衍生物(當(dāng)X為O時(shí))。然后使式20溴代化合物在反應(yīng)圖式1中所述的用于轉(zhuǎn)化式7溴代化合物成為本發(fā)明的化合物的類似條件下，經(jīng)過基本相同的反應(yīng)順序。從而，簡(jiǎn)單概括如下使式20溴代化合物與(三甲基甲硅烷基)乙炔反應(yīng)提供式21的6-(三甲基甲硅烷基)乙炔基取代二氫苯并噻喃-4-酮或苯并二氫噻喃-4-酮化合物。然后，使式21的6-(三甲基甲硅烷基)乙炔基取代二氫苯并噻喃-4-酮化合物與堿(氫氧化鉀或碳酸鉀)反應(yīng)提供式22的乙炔基取代6-乙炔基取代二氫苯并噻喃-4-酮化合物。然后，使式22化合物與芳族或雜芳族試劑X1-Y(R2)-A-B’(式10)在反應(yīng)圖式1類似反應(yīng)中所述相似條件下偶合產(chǎn)生式23化合物。然后，使式23化合物在反應(yīng)圖式1中所述類似反應(yīng)中相似條件下與雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉和2-[N，N-雙(三氟甲基磺?；?氨基]-5-氯吡啶反應(yīng)產(chǎn)生式24所代表的4-三氟甲基磺酰氧基苯并噻喃或苯并吡喃衍生物。然后，通過與衍生自如反應(yīng)圖式1中所述的芳基或雜芳基化合物R14H的有機(jī)金屬衍生物反應(yīng)，使式24化合物轉(zhuǎn)變成式25所示的化合物。類似于反應(yīng)圖式1的式7中間體7-溴-四氫萘-1-酮化合物的用途，式20中間體6-溴二氫苯并噻喃-4-酮化合物也可以用于本發(fā)明范圍內(nèi)的其它化合物的制備(如以下反應(yīng)圖式6、7和8中所述)。在類似于反應(yīng)圖式1中所述的反應(yīng)中，也可以將式25化合物轉(zhuǎn)變成其它同系物和衍生物。反應(yīng)圖式3反應(yīng)圖式3介紹其中對(duì)于式1而言，X為[C(R1)2]n，n為0及Z為乙炔官能團(tuán)(-C≡C-)的化合物的合成途徑。根據(jù)該反應(yīng)圖式，按照類似于以上圖式1和2中所述反應(yīng)的反應(yīng)順序(由三甲基甲硅烷基乙炔開始反應(yīng))，使式26的6-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-酮衍生物反應(yīng)，經(jīng)過式27-30的中間體提供式31茚衍生物。在反應(yīng)圖式3范圍內(nèi)的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述原料為6-溴-2，3-二氫-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮，根據(jù)化學(xué)文獻(xiàn)它可以得到(見Smitheral.Org.Prep.Proced.Iht.1978，10，123-131)。如下所述，式26化合物例如6-溴-2，3-二氫-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮也可以用于本發(fā)明中所用的其它實(shí)例性化合物的合成中。反應(yīng)圖式4參照反應(yīng)圖式4，介紹實(shí)例性化合物的合成途徑，其中對(duì)于式1而言，Z為-(CR1＝CR1)n’-，n’為3、4或5，及Y代表在(CR1＝CR1)n’基團(tuán)和B之間的直接結(jié)合鍵。介紹了例如其中X基團(tuán)為[C(R1)2]n及n為1(二氫萘衍生物)的合成途徑。此外，應(yīng)該理解在反應(yīng)圖式4和其后其它圖式中介紹的反應(yīng)和合成工藝(包括對(duì)于本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員是顯而易見的改進(jìn))也適用于其中X為S、O或NR’(苯并噻喃、苯并吡喃或二氫喹啉衍生物)或[C(R1)2]n及n為0(茚衍生物)的衍生物。根據(jù)反應(yīng)圖式4，使式32的1，2，3，4-四氫萘衍生物與酰氯(R1COCl)在FriedelCrafts條件下反應(yīng)，并在例如Jones氧化反應(yīng)中使所生成的乙酰化產(chǎn)物氧化，產(chǎn)生式33的異構(gòu)的6-和7-乙酰基-1(2H)-萘酮衍生物的混合物。在該反應(yīng)的特別優(yōu)選的實(shí)施例中，所述式32原料為1，2，3，4-四氫-1，1-二甲基萘(已知化合物)，它可以根據(jù)在本申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)部分中所述的方法制備。使式33的7-乙?；?1(2H)-萘酮衍生物與乙二醇在酸的存在下反應(yīng)，以式34的縮酮衍生物形式保護(hù)外向環(huán)酮部分的氧代官能團(tuán)。然后，使式34的縮酮與式R14MgBr(符號(hào)如式1中所定義)的Grignard試劑反應(yīng)，產(chǎn)生式35的叔醇。然后，除去二氧戊環(huán)保護(hù)基并通過用酸處理所述叔醇脫水提供式36的3，4-二氫-7-乙?；裂苌?。使式36化合物的酮官能團(tuán)經(jīng)過在強(qiáng)堿條件下與使用式37膦酸酯(phosphonate)試劑的HomerEmmons(或類似的)反應(yīng)，在還原后產(chǎn)生式38醛化合物。另一個(gè)在強(qiáng)堿條件下使用式39試劑的HomerEmmons(或類似的)反應(yīng)提供式40化合物。根據(jù)上述反應(yīng)，后者可以轉(zhuǎn)變成其它的同系物和衍些物。用于制備優(yōu)選化合物的式37HomerEmmons試劑的特定實(shí)例為氰基甲基膦酸二乙酯；式39的HomerEmmons試劑的實(shí)例為(E)-3-乙氧基羰基-2-甲基烯丙基膦酸二乙酯。反應(yīng)圖式5反應(yīng)圖式5介紹用于制備其中Z基團(tuán)為偶氮基(-N＝N-)的化合物的合成方法。如同反應(yīng)圖式4，介紹了例如其中X基團(tuán)為[C(R1)2]n及n為1(二氫萘衍生物)的合成途徑。此外，應(yīng)該理解所述合成工藝(包括對(duì)于本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員是顯而易見的改進(jìn))也適用于用于本發(fā)明中的所有偶氮化合物，即其中X為S、O或NR’(苯并噻喃、苯并吡喃或二氫喹啉衍生物)或[C(R1)2]n及n為0(茚衍生物)的衍生物。從而，在基本為標(biāo)準(zhǔn)的硝化條件下，將硝基引入式6起始化合物中產(chǎn)生式41的3，4-二氫-7-硝基-1(2H)-萘酮衍生物。使后者還原成式42的3，4-二氫-7-氨基-1(2H)-萘酮衍生物，然后與式ON-Y(R2)-A-B(式43)的亞硝基化合物在一般用于制備偶氮化合物的條件(冰乙酸)下反應(yīng)。根據(jù)本領(lǐng)域內(nèi)已知的反應(yīng)可以獲得式43亞硝基化合物。用于合成優(yōu)選化合物的該化合物的特定實(shí)例為4-亞硝基苯甲酸乙酯。然后，使式44的偶氮化合物與雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉和2-[N，N-雙(三氟甲基磺?；?氨基]-5-氯吡啶反應(yīng)產(chǎn)生式45所代表的4-三氟甲基磺酰氧基衍生物。然后，通過與衍生自芳基或雜芳基化合物R14H的有機(jī)金屬衍生物反應(yīng)，將式45化合物轉(zhuǎn)變成式46中所示的偶氮化合物。這后兩個(gè)反應(yīng)即轉(zhuǎn)變4-三氟甲基磺酰氧基衍生物和其后與有機(jī)金屬衍生物的反應(yīng)在上述反應(yīng)圖式1、2和3中已經(jīng)被介紹，并用于產(chǎn)生實(shí)例性RAR拮抗劑化合物的幾種優(yōu)選的合成方法中。反應(yīng)圖式6式16式47式49反應(yīng)圖式6介紹了用于制備其中對(duì)于式1而言，Z基團(tuán)為COO-或CONR1(R1優(yōu)選為H)化合物的優(yōu)選合成方法。這些酯和酰胺衍生物由式16的3，4-二氫-7-溴代萘衍生物(它可以按照反應(yīng)圖式1中所述獲得)制備。從而，使式16化合物與強(qiáng)堿例如叔丁基鋰在惰性醚類溶劑例如四氫呋喃中，在低溫下反應(yīng)，并加入二氧化碳(CO2)提供式47的5，6-二氫-2-萘羧酸衍生物。然后，使式47化合物與式X2-Y(R2)-A-B(式48)的化合物反應(yīng)，其中X2代表OH或NR1基團(tuán)，R1優(yōu)選為氫。本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員將理解式48化合物為根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)可以得到的芳基或雜芳基羥基或氨基衍生物。式47和式48化合物之間的反應(yīng)可以在各種已知的酯或酰胺形成條件下進(jìn)行，例如二者在1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和4-二甲氨基吡啶存在下偶合。可選將式47化合物轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的酰氯以便在堿存在下與式48化合物偶合。如上所述，可以將式49的酰胺或酯化合物轉(zhuǎn)變成其它的同系物和衍生物。盡管作為其中式1的X基團(tuán)為[C(R1)2]n和n為1(二氫萘衍生物)的實(shí)例介紹和顯示了反應(yīng)圖式6，在此所述方法可適用于制備苯并吡喃、苯并噻喃、二氫喹啉以及茚的衍生物。根據(jù)美國專利號(hào)5324744所述內(nèi)容，其中對(duì)于式1而言，Z為-OCO-、NR1CO的本發(fā)明化合物以及相應(yīng)的硫酯和硫代酰胺同系物可以由衍生自式16化合物(其中所述溴官能團(tuán)用氨基或羥基取代)的中間體制備。反應(yīng)圖式7反應(yīng)圖式7介紹用于制備其中對(duì)于式1而言，Z為-(CR1＝CR1)n’-和n’為0化合物的優(yōu)選的合成方法。在式16化合物和由式10鹵代化合物衍生的Grignard試劑之間的偶合反應(yīng)中可以得到所述式50化合物。所述偶合反應(yīng)一般在鋅鹽和鎳(Ni(O))催化劑存在下，在惰性醚類溶劑例如四氫呋喃中進(jìn)行。如上所述，可以將式50化合物轉(zhuǎn)變成其它同系物和衍生物。反應(yīng)圖式8參考反應(yīng)圖式8介紹了用于制備其中Z為-(CR1＝CR1)n’-和n’為1化合物的優(yōu)選合成方法。更準(zhǔn)確地說，反應(yīng)圖式8介紹用于制備那些為二氫萘衍生物及其中Z基團(tuán)代表乙烯基(-CH＝CH-)官能團(tuán)的化合物的優(yōu)選的方法。然而，在此所述的一般工藝(包括對(duì)于本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員是顯而易見的改進(jìn))可適用于類似的苯并吡喃、苯并噻喃、二氫喹啉化合物和適用于其中乙烯基被取代的化合物。從而，根據(jù)反應(yīng)圖式8，在合適的催化劑[一般具有式Pd(PPh3)]、酸性受體(例如三乙胺)存在下，在惰性氣體(氬氣)中，使式7的7-溴-1(2H)-萘酮衍生物與結(jié)構(gòu)為-CH2＝CH-Y(R2)-A-B(式51)的乙烯基衍生物反應(yīng)。該反應(yīng)的條件類似于式9乙炔基衍生物與式10試劑(例如見反應(yīng)圖式1)的偶合過程的條件，并且這類反應(yīng)一般在本領(lǐng)域內(nèi)稱為Heck反應(yīng)。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)可以得到式51乙烯基衍生物，用于本發(fā)明中優(yōu)選化合物合成的這類試劑的實(shí)例為4-乙烯基苯甲酸乙酯。所述Heck偶合反應(yīng)的產(chǎn)物為式52乙烯基衍生物，然后通過用雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉和2-[N，N-雙(三氟甲基磺?；?氨基]-5-氯吡啶處理產(chǎn)生式53的4-三氟甲基磺酰氧基衍生物，其后如上所述，與衍生自芳基或雜芳基化合物R14H的有機(jī)金屬衍生物反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為用于本發(fā)明中的化合物?？梢詫a(chǎn)生的式54化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌耐滴锖脱苌铩Ｍㄟ^使用Wittig或HomerEmmons反應(yīng)的合成圖式，也可以得到式54化合物。例如，可以使式33(見反應(yīng)圖式4)中間體與溴化三苯基磷(Wittig)試劑或更優(yōu)選與具有結(jié)構(gòu)式(EtO)2PO-CH2-Y(R2)-A-B的膦酸二乙酯(HornerEmmons)試劑反應(yīng)(如類似于美國專利5324840中所述的HornerEmmons反應(yīng))。所述HornerEmmons反應(yīng)提供在結(jié)構(gòu)上類似于式52的中間體化合物，并通過在反應(yīng)圖式8中所述用于式52化合物的反應(yīng)順序?qū)⒃撝虚g體轉(zhuǎn)變成為式54化合物。芳基和(3-氧代-1-丙烯基)-取代化合物的合成方法通過在此所述的合成化學(xué)途徑可以制備具有式101的實(shí)例性RAR拮抗劑化合物。合成化學(xué)家容易理解在此所設(shè)立的條件為可以一般化到任何及全部由式101所代表的化合物的特定實(shí)施方案。反應(yīng)圖式101反應(yīng)圖式101(續(xù))反應(yīng)圖式101介紹式101化合物的合成，其中X為[C(R1)2]n，n為1，p為零及R17為H或低級(jí)烷基。換句話說，反應(yīng)圖式101介紹本發(fā)明化合物的合成，它們?yōu)?，4-二氫萘的衍生物。根據(jù)該圖式，被R3和R2基團(tuán)(如同式101中所定義)適當(dāng)取代的式103四氫萘化合物作為原料。式103化合物優(yōu)選的實(shí)例為1，3，3，4-四氫-1，1-二甲基-萘，它在化學(xué)文獻(xiàn)(Mathuretal.Tetrahedron，1985，411509)中被介紹。在本申請(qǐng)的實(shí)驗(yàn)部分中也介紹了自1-溴-3-苯基丙烷合成該化合物的優(yōu)選的途徑。在FriedelCrafts類型的反應(yīng)中，使式103化合物與具有結(jié)構(gòu)為R16CH2COCl(R16如同式101中所定義)的酰氯反應(yīng)，然后，用三氧化鉻在乙酸中氧化提供異構(gòu)的6和7乙酰基-3，4-二氫-1(2H)-萘酮衍生物。在反應(yīng)圖式101中只顯示了從本發(fā)明角度出發(fā)是重要的6-?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)式(式104)。在本發(fā)明優(yōu)選的化合物的制備過程中，R1基團(tuán)代表甲基，R2、R3和R16為H，從而，相應(yīng)于式104的優(yōu)選中間體為3，4-二氫-4，4-二甲基-6-乙?；?1(2H)-萘酮。然后，例如通過用酸中的乙二醇處理，將式104化合物的外向環(huán)酮官能團(tuán)作為縮酮保護(hù)，提供式105的1，3-二氧戊環(huán)基衍生物。然后，使式105化合物與式R14MgBr(R14如同式101中的定義)的Grignard試劑反應(yīng)產(chǎn)生式106的1，2，3，4-四氫-1-羥基-萘衍生物。然后，通過用酸處理和脫水使式106化合物的外向環(huán)酮官能團(tuán)去保護(hù)，產(chǎn)生式107化合物。用于從式105化合物獲得式107化合物的另一種方法為使式105化合物與雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉和2-[N，N-雙(三氟甲基磺?；?氨基]-5-氯吡啶(Tf＝SO2CF3)在惰性醚類溶劑例如四氫呋喃，在低溫下(-78℃-0℃)反應(yīng)。該反應(yīng)通過鈉鹽中間體進(jìn)行，該中間體一般不分離，在反應(yīng)圖式101中不表示。總的反應(yīng)產(chǎn)生三氟甲基磺酰氧基衍生物，然后，使其與衍生自芳基或雜芳基化合物R14H的有機(jī)金屬衍生物反應(yīng)，如此所述有機(jī)金屬衍生物的分子式為R14Met(Met代表一價(jià)金屬)，優(yōu)選R14Li(R14如同式101中的定義)。所述與有機(jī)金屬衍生物優(yōu)選式R14Li的鋰衍生物的反應(yīng)一般在惰性醚類溶劑中(例如四氫呋喃)，在氯化鋅(ZnCl2)和四(三苯基磷)-鈀(0)(Pd(PPh3)4)存在下進(jìn)行。如果不能從市場(chǎng)上買到，可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的已知的方法從化合物R14H(或其鹵素衍生物R14-X1，其中X1為鹵素)，在醚類溶劑中制備有機(jī)金屬試劑R14Li。一般而言，試劑R14Li和三氟甲基磺酰氧基衍生物間反應(yīng)的溫度范圍在約-78℃-50℃內(nèi)。式107酮化合物和式108醛或酮之間縮合的結(jié)果形成本發(fā)明化合物。在制備本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)例性化合物的過程中，式108試劑為4-羧基苯甲醛(R17-H)。在式108范圍內(nèi)的并適合于縮合反應(yīng)及用于本發(fā)明范圍內(nèi)化合物(式101)合成的其它試劑的實(shí)例為5-羧基-吡啶-2-醛、4-羧基-吡啶-2-醛、4-羧基-噻吩-2-醛、5-羧基-噻吩-2-醛、4-羧基-呋喃-2-醛、5-羧基-呋喃-2-醛、4-羧基苯乙酮、2-乙?；?吡啶-5-甲酸、2-乙?；?吡啶-4-甲酸、2-乙?；?噻吩-4-甲酸、2-乙?；?噻吩-5-甲酸、2-乙酰基-呋喃-4-甲酸和2-乙?；?呋喃-5-甲酸。根據(jù)化學(xué)文獻(xiàn)可以得到后面的化合物；例如見Decroixetal.，J.Chem.Res.(S)，4134(1978)；Dawsonetal.，J.Med.Chem.291282(1983)；andQueguineretal.，BullSoc.ChimiquedeFranceNo.10，pp.3678-3683(1969)。所述式107和式108化合物之間的縮合反應(yīng)在堿存在下，在醇溶劑中進(jìn)行。優(yōu)選所述反應(yīng)在乙醇中，在氫氧化鈉存在下進(jìn)行。本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)熟練人員將該縮合反應(yīng)稱為醛醇縮合，在此所述的優(yōu)選實(shí)施例中(式107酮與式108醛的縮合)稱為Claisen-Schmidt反應(yīng)。[見MarchAdvancedOrganicChemistryReactions，Mechanisms，andStructure，pp.694-695，McGrawHill(1968)]。式109化合物在本發(fā)明的范圍內(nèi)，也可以經(jīng)過進(jìn)一步轉(zhuǎn)化產(chǎn)生本發(fā)明的其它化合物。另外，式108的A-B基團(tuán)只有在經(jīng)過一種或多種其性質(zhì)為眾所周知和在有經(jīng)驗(yàn)化學(xué)家的技術(shù)范圍內(nèi)的合成轉(zhuǎn)變后，可以是本發(fā)明范圍內(nèi)如式101所定義的基團(tuán)。例如，在所述A-B基團(tuán)上進(jìn)行的反應(yīng)可以是去保護(hù)、容許反應(yīng)(homologation)、酯化、皂化、酰胺形成等反應(yīng)。一般而言，就式109化合物的衍生化和/或式108芳基和雜芳基化合物的合成(然后，它們可以與式107化合物反應(yīng))而言，可以使用下列眾所周知的和公開的一般性原理和合成工藝。如上所述，一般通過使所述酸在合適的醇溶液中，在酸性催化劑例如鹽酸或亞硫酰氯的存在下回流將所述羧酸酯化。另外，可以使所述羧酸與合適的醇在二環(huán)己基碳二亞胺和二甲氨基吡啶存在下縮合?？捎贸Ｒ?guī)方法回收和提純酯。通過在March，AdvancedOrganicChemistry(2ndEdition，McGraw-HillBookCompany，p.810)中所述方法可以容易地制備縮醛和縮酮。通過已知的方法(例如在McOmie，PlenumPublishingPress，1973和ProtectingGroups，Ed.Greene，JohnWiley&Sons，1981中所述方法)通過分別形成相應(yīng)的醚和酯、縮醛或縮酮，可以保護(hù)所有的醇、醛和酮。為了在進(jìn)行反應(yīng)圖式101的縮合反應(yīng)(其中相當(dāng)于式108的所述化合物不能從市場(chǎng)上買到)之前，增加式108化合物中n的值，通過在Arndt-Eistert條件或其它容許反應(yīng)過程下連續(xù)地處理，使芳族或雜芳族羧酸符合要求(同時(shí)將所述醛基保護(hù))。也可選通過合適的方法，使不是羧酸的衍生物符合要求。然后，通過以上所述的通法使符合要求的酸酯化。例如通過為具有實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的有機(jī)化學(xué)家所熟知的合成圖式，例如通過Wittig等反應(yīng)或通過自α-鹵代芳基烷基羧酸、酯或類似的羧基醛中除去鹵素導(dǎo)入雙鍵，可以制備其中A為具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的鏈烯基的式108化合物(或本發(fā)明的其它中間體，當(dāng)適用時(shí))。通過相應(yīng)的芳基甲基酮與強(qiáng)堿例如二異丙基氨基鋰反應(yīng)(與氯代磷酸二乙酯反應(yīng)，然后加入二異丙基氨基鋰)可以制備其中A基團(tuán)具有一個(gè)三鍵(乙炔基)的式108化合物(或本發(fā)明的其它中間體，當(dāng)適用時(shí))。作為所述縮合反應(yīng)的結(jié)果或由相應(yīng)的酯可以容易地直接獲得由式109化合物(或本發(fā)明的其它中間體或化合物，當(dāng)適用時(shí))衍生的酸和鹽。使用堿金屬堿的堿性皂化將提供所述酸。例如可以將式109酯(或本發(fā)明的其它中間體或化合物，當(dāng)適用時(shí))溶解在極性溶劑例如鏈烷醇中，優(yōu)選在惰性氣體中，在室溫下，使用約3摩爾過量的堿例如氫氧化鋰或氫氧化鉀。將所述溶液攪拌一定時(shí)間，15-20小時(shí)，冷卻，酸化并通過常規(guī)方法回收其水解產(chǎn)物。通過本領(lǐng)域內(nèi)任何已知的、合適的酰胺化方法由相應(yīng)的酯或羧酸可以形成酰胺。制備這類化合物的一個(gè)方法為轉(zhuǎn)變酸為酰氯，然后用氫氧化銨或適合的胺處理該化合物。通過使用亞硫酰氯或其它的方法(J.March，AdvancedOrganicChemistry，2ndEdition，McGram-HillBookCompany)將相應(yīng)的酸轉(zhuǎn)化為酰氯，然后用硼氫化鈉(March，lbid，p.1124)還原所述酰氯，產(chǎn)生相應(yīng)的醇來制備醇?？蛇x使用氫化鋰鋁在低溫下還原酯。在Williamson反應(yīng)條件下(March，Ibid，p.357)使用合適的鹵化烷使這些醇烷基化，產(chǎn)生相應(yīng)的醚。通過使所述醇與合適的酸在酸性催化劑或二環(huán)己基碳二亞胺和二甲氨基吡啶的存在下反應(yīng)，可以將所述醇轉(zhuǎn)化為酯。使用溫和的氧化劑例如二氯甲烷中的重鉻酸吡啶鎓(Corey，E.J.，Schmidt，G.，Tet.Lett.399，1979)或二氯甲烷中的二甲亞砜/草酰氯(Omura，K.，Swern，D.，Tetrahedron341651(1978))可以由相應(yīng)的一級(jí)醇制備醛。通過用烷基Grignard試劑或類似的試劑處理所述醛，然后氧化可以由合適的醛制備酮。通過在March，Ibid，p.810中所述方法，由相應(yīng)的醛或酮可以制備縮醛或縮酮。反應(yīng)圖式102反應(yīng)圖式102(續(xù))參照反應(yīng)圖式102，介紹其中對(duì)于式101而言，p為零，在所述縮合環(huán)結(jié)構(gòu)的芳基部分中R2為OH及R17為OH的那些本發(fā)明化合物的合成途徑。本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)熟練人員容易理解這些化合物為以烯醇形式的β-二酮。反應(yīng)圖式102也介紹其中p為1的那些本發(fā)明化合物的合成途徑。本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)熟練人員容易理解后面的化合物為黃酮。從而，根據(jù)該反應(yīng)圖式，使式110的1，2，3，4-四氫-6-甲氧基萘-1-酮衍生物與二烴基鋅(R1Zn)在四氯化鈦存在下，在合適的溶劑例如二氯甲烷中反應(yīng)，用偕位的二烴基R1R1代替氧代官能團(tuán)，產(chǎn)生其中R1為低級(jí)烷基的式111化合物。在根據(jù)反應(yīng)圖式102制備的本發(fā)明化合物的優(yōu)選實(shí)例中，R3基團(tuán)為氫及R1為甲基。因此，所述二烴基鋅為二甲基鋅，及優(yōu)選的式110原料為1，2，3，4-四氫-6-甲氧基萘-1-酮。后一化合物可從市場(chǎng)上買到，例如從AldrichChemicalCompany買到。然后，用三氧化鉻在乙酸和乙酸酐中氧化式111的1，2，3，4-四氫-1，2-二烷基-6-甲氧基萘衍生物產(chǎn)生式112的1，2，3，4-四氫-3，4-二烷基-7-甲氧基萘-1-酮衍生物。使式112酮化合物與Grignard試劑(R14MgBr，R14如式101中所定義)反應(yīng)產(chǎn)生式113的1-羥基-1-芳基-3，4-二氫-3，4-二烷基-7-甲氧基萘衍生物。通過加熱，優(yōu)選在酸中加熱，使式113的羥基化合物經(jīng)過消除過程，產(chǎn)生式114的二氫萘化合物。通過用三溴化硼在合適的溶劑例如二氯甲烷中處理，從式114的化合物的酚甲醚官能團(tuán)中除去甲基，然后用引入R16CH2CO基團(tuán)的酰化劑使所述酚羥基?；?，產(chǎn)生式115化合物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R16為H，從而所述酰化劑為乙酰氯或乙酸酐。使所述酰化反應(yīng)在堿性溶劑例如吡啶中進(jìn)行。使式115酰基化酚化合物與三氯化鋁在高溫下反應(yīng)，使其經(jīng)過Fries重排并產(chǎn)生式116的1-芳基-3，4-二烷基-3，4-二氫-6-乙?；?7-羥基-萘化合物。用引入CO-Y(R2)-A-B基團(tuán)的酰化劑(例如酰氯)使式116化合物的酚羥基?；a(chǎn)生式117化合物。在所述酰氯試劑Cl-CO-Y(R2)-A-B(或類似的?；瘎?中，符號(hào)Y、R2和A-B具有式101中的定義。在制備根據(jù)本反應(yīng)圖式的本發(fā)明的優(yōu)選化合物的過程中，該試劑為ClCOC6H4COOEt(對(duì)苯二甲酸的半乙酯半酰氯)。使式117化合物與強(qiáng)堿例如吡啶中的氫氧化鉀反應(yīng)，作為分子內(nèi)Claisen縮合反應(yīng)的結(jié)果產(chǎn)生式118化合物。式118化合物在本發(fā)明和式101范圍內(nèi)，其中在縮合環(huán)部分的芳族部分中具有羥基作為R2取代基，及R17為羥基。根據(jù)前述反應(yīng)(分子內(nèi)Claisen縮合)和以前提及的Fries重排，注意到在本說明書中提及可能的反應(yīng)機(jī)理，以便全面地解釋在此所述的反應(yīng)并有助于本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員完成在此所述反應(yīng)和制備本發(fā)明的化合物的工作。此外，本發(fā)明人不希望受到反應(yīng)機(jī)理和理論的約束，從而在此介紹的本發(fā)明不應(yīng)該受到限制。使式118化合物與強(qiáng)酸例如硫酸在合適的質(zhì)子溶劑例如乙酸中反應(yīng)產(chǎn)生式119黃酮化合物。式119化合物也是在式101范圍內(nèi)(其中p為1)的本發(fā)明化合物?？梢允故?18和式119化合物經(jīng)過進(jìn)一步反應(yīng)和轉(zhuǎn)化過程，提供如以上反應(yīng)圖式101中所述的其它同系物和衍生物。反應(yīng)圖式102中表明轉(zhuǎn)化為同系物和衍生物的過程。反應(yīng)圖式103參考反應(yīng)圖式103，顯示產(chǎn)生其中對(duì)于式101而言，X為S、O或NR’，p為零及R17為H或低級(jí)烷基的那些本發(fā)明化合物的合成途徑。然而，利用在反應(yīng)圖式102中所示的一般合成原理，本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)熟練人員可以對(duì)所示的合成方法加以改進(jìn)，也可以得到其中X為S、O或NR’及p為1或其中X為S、O或NR’及p為零，在所述縮合環(huán)部分的芳族部分中R2基團(tuán)為OH和R17為OH的本發(fā)明化合物。反應(yīng)圖式103的原料為式120的苯酚、苯硫酚或苯胺衍生物。在本發(fā)明的優(yōu)選化合物中，R2和R16基團(tuán)均為氫，式120的優(yōu)選原料為3-乙烯基-苯硫酚或3-乙烯基-苯酚，它們?yōu)榛瘜W(xué)文獻(xiàn)中已知的化合物[Nuyken，etal.Polym.Bull(Berlin)11165(1984)]。為了簡(jiǎn)化說明，在其后的介紹中，可以認(rèn)為X主要是硫，用于制備本發(fā)明的苯并噻喃衍生物。然而，應(yīng)記住的是在此所述的圖式(包括對(duì)于本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員是顯而易見的改進(jìn))也適用于制備本發(fā)明范圍內(nèi)的苯并吡喃(X＝O)和二氫喹啉(X＝NR’)化合物。因而，使式120化合物在堿性條件下與式121的3-溴羧酸反應(yīng)。在該反應(yīng)圖式中，所述符號(hào)具有式101中所述的定義。作為式121試劑的實(shí)例(其中R3為氫)為3-溴丙酸。與式121的3-溴羧酸反應(yīng)產(chǎn)生式122化合物。通過用酸處理使后者環(huán)合產(chǎn)生具有式123的7-乙烯基-二氫苯并噻喃-4-酮衍生物(當(dāng)X為S時(shí))或7-乙烯基-苯并二氫吡喃衍生物(當(dāng)X為O時(shí))。然后使式123的7-乙烯基-二氫苯并噻喃-4-酮衍生物或7-乙烯基-苯并二氫吡喃-4-酮衍生物在Pd(II)Cl2和CuCl2催化劑存在下氧化提供式124的相應(yīng)7-酰基(酮)化合物。本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)熟練人員稱后一反應(yīng)為Wacker氧化。例如通過用酸中的乙二醇處理，將式124化合物的外向環(huán)酮基以縮酮的形式保護(hù)，提供式125的1，3-二氧戊環(huán)基衍生物。然后，使式125化合物經(jīng)過類似于在反應(yīng)圖式101中式105化合物的反應(yīng)順序。從而，使式125的1，3-二氧戊環(huán)基衍生物與式R14MgBr的Grignard試劑反應(yīng)，產(chǎn)生式126叔醇，然后在酸中使其脫水提供式127的苯并噻喃(X為S)、苯并吡喃(X為O)或二氫喹啉衍生物(X為NR’)。然后，使式127酮化合物在堿存在下，在醛醇縮合(ClaisenSchmidt)反應(yīng)中與式108試劑反應(yīng)，提供式128的本發(fā)明化合物。如以上反應(yīng)圖式101和102中所述可以將式128化合物進(jìn)一步轉(zhuǎn)變成同系物和衍生物。特定實(shí)施例2-羥基-2-甲基-5-苯基戊烷將100.0g(0.492mol)的1-溴-3-苯基丙烷的100ml乙醚溶液加入13.16g(0.541mol)鎂屑在200ml無水乙醚的混合物中，加入5-10ml的所述溶液后，停止加料直到所述Grignard試劑形成開始進(jìn)行為止。然后用1小時(shí)加入剩余的溴化物。于35℃下，攪拌該Grignard試劑20分鐘，然后用45分鐘加入31.64g(0.541mol)的丙酮。在冷卻到0℃以前，于室溫下攪拌該反應(yīng)物過夜，并小心加入20％鹽酸酸化。用乙醚(3×200ml)提取其水層，在用硫酸鎂干燥前用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層。減壓除去溶劑，并蒸餾其殘余物，得到63.0g(72％)淡黃色油狀產(chǎn)物bp99-102℃/0.5mmHg.1HNMR(CDCl3)δ7.28-7.18(5H，m)，2.63(2H，t，J＝7.5Hz)，1.68(2H，m)，1.52(2H，m)，1.20(6H，s).1，2，3，4-四氫-1，1-二甲基萘將五氧化二磷(55.3g，0.390mol)在400ml甲磺酸中的混合物在氬氣下于105℃加熱直到所述固體溶解為止。將所形成的溶液冷卻到室溫并在攪拌下緩慢地加入2-羥基-2-甲基-5-苯基戊烷(63.0g，0.354mol)。4小時(shí)后，小心地將該溶液倒入1升冰中使反應(yīng)物驟冷。用乙醚(4×125ml)提取所形成的混合物，并在用硫酸鎂干燥前用水、飽和碳酸氫鈉水溶液、水和飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層。減壓濃縮該溶液，然后蒸餾產(chǎn)生51.0g(90％)澄清無色油狀物bp.65-67℃/1.1mmHg.1HNMR(CDCl3)δ7.32(1H，d，J＝7.4Hz)，7.16-7.05(3H，m)，2.77(2H，t，J＝6.3Hz)，1.80(2H，m)，1.66(2H，m)，1.28(6H，s).3，4-二氫-4，4-二甲基-1(2H)-萘酮(化合物A)將350ml冰乙酸和170ml乙酸酐的溶液冷卻到0℃，并分小批量小心加入25.0g(0.25mol)三氧化鉻。在加入120ml苯以前，攪拌所形成的混合物30分鐘。緩慢加入在30ml苯溶液中的1，2，3，4-四氫-1，1-二甲基萘。在加料結(jié)束后，將反應(yīng)物于0℃下攪拌4小時(shí)。用水(200ml)稀釋該溶液并用乙醚(5×50ml)提取。在用硫酸鎂干燥前用水、飽和碳酸鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層。減壓除去溶劑，并蒸餾產(chǎn)生16.0g(74％)的淡黃色油狀產(chǎn)物bp93-96℃/0.3mmHg1HNMR(CDCl3)δ8.02(1H，dd，J＝1.3，7.8Hz)，7.53(1H，m)，7.42(1H，d，J＝7.9Hz)，7.29(1H，m)，2.74(2H，t，J＝6.8Hz)，2.02(2H，t，J＝6.8Hz)，1.40(6H，s).3，4-二氫-4，4-二甲基-7-溴-1(2H)-萘酮(化合物B)將9.5g(71.4mmol)三氯化鋁和3ml二氯甲烷的混合物加入帶有高效回流冷凝器、干燥管和加料漏斗的100ml三頸燒瓶中。于室溫，攪拌下滴加3，4-二氫-4，4-二甲基-1(2H)-萘酮(5.0g，28.7mmol)(注意放熱反應(yīng)！)到該混合物中。然后，非常緩慢地加入5.5g(34.5mmol)溴，然后于室溫?cái)嚢杷纬傻幕旌衔?小時(shí)。(注意如果攪拌停止，所述混合物溫度會(huì)升到70℃，直到再次開始攪拌。)然后，通過緩慢加入冰冷卻的6M鹽酸使反應(yīng)驟冷。用乙醚提取該混合物，并在用硫酸鎂干燥前，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉洗滌合并后的有機(jī)層。減壓除去溶劑，并蒸餾其殘留物，提供5.8g(80％)淡黃色油狀產(chǎn)物(放置后固化)bp140℃/0.4mmHg.1HNMR(CDCl3)δ8.11(1H，d，J＝3.0Hz)，7.61(1H，dd，J＝3.0，9.0Hz)，7.31(1H，d，J＝9.0Hz)，2.72(2H，t，J＝6.0Hz)，2.01(2H，t，J＝6.0Hz)，1.28(6H，s).1，2，3，4-四氫-1-羥基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-溴萘(化合物C)分兩份將4-溴甲苯(5.40g，31.8mmol)在10mlTHF中的溶液加入鎂屑(648.0mg，27.0mmol)在25mlTHF中的混合物中。通過加入2ml所述溶液使反應(yīng)開始，然后通過加料漏斗緩慢加入其余溶液。于室溫下攪拌所述混合物1小時(shí)，然后用套管將該溶液轉(zhuǎn)移到第二個(gè)燒瓶中。將4.0g(15.9mmol)的3，4-二氫-4，4-二甲基-7-溴-1(2H)-萘酮(化合物B)的15mlTHF溶液加入到所形成的Grignard試劑中。將所形成的溶液加熱到回流過夜，冷卻到室溫，通過小心加入冰冷卻的10％鹽酸使反應(yīng)物驟冷。用乙醚提取然后用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，然后經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑提供油狀產(chǎn)物，經(jīng)拄層析純化(己烷/乙酸乙酯，96∶4)提供無色產(chǎn)物1HNMR(CDCl3)δ7.36(1H，dd，J＝2.1，7.6Hz)，7.26(3H，m)，7.12(3H，s)，2.34(3H，s)，2.24-2.04(2H，m)，1.81(1H，m)，1.55(1H，m)，1.35(3H，s)，1.30(3H，s)。3，4-二氫-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-溴萘(化合物D)將3.4g(9.85mmol)的1，2，3，4-四氫-1-羥基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-溴萘(化合物C)和40ml的苯加入帶有Dean-Stark分水器的燒瓶?jī)?nèi)。加入催化量的對(duì)甲基苯磺酸一水合物并將所形成的溶液加熱到回流達(dá)2小時(shí)。冷卻到室溫后，加入乙醚并用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌該溶液，然后經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑，拄層析純化(100％己烷/硅膠)提供無色固體狀目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.32(1H，dd，J＝2.1，8.2Hz)，7.21(5H，m)，7.15(1H，d，J＝2.1Hz)，5.98(1H，t，J＝4.7Hz)，2.40(3H，s)，2.32(2H，d，J＝4.7Hz)，1.30(6H，s).7-乙炔基-3，4-二氫-4，4-二甲基萘-1(2H)-酮(化合物E)將0.97g(1.3mmol)氯化雙(三苯基磷)鈀(II)和0.26g(1.3mmol)的碘化亞銅加入7g(27.6mmol)的3，4-二氫-4，4-二甲基-7-溴-1(2H)-萘酮(化合物B)在150ml三乙胺的溶液中(通入氬氣流15分鐘)。將氬氣通入所述反應(yīng)混合物中達(dá)5分鐘，然后加入39ml(36.6mmol)的(三甲基甲硅烷基)乙炔。將所述反應(yīng)混合物密封在壓力管中并置于預(yù)熱的油浴中(100℃)達(dá)24小時(shí)。然后，經(jīng)硅藻土(Celite)過濾所述反應(yīng)混合物，用乙醚洗滌并在真空濃縮該濾液產(chǎn)生粗品7-(三甲基甲硅烷基)乙炔基-3，4-二氫-4，4-二甲基萘-1(2H)-酮。將0.6g(4.3mmol)的碳酸鉀加入所述粗品TMS-乙炔基化合物的50ml甲醇溶液中。將該混合物在室溫下攪拌8小時(shí)然后過濾。真空濃縮其濾液，用乙醚稀釋，用水、10％鹽酸和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。經(jīng)拄層析純化(硅膠，10％乙酸乙酯-己烷)，產(chǎn)生白色固體狀的目的化合物PMR(CDCl3)δ1.39(6H，s)，2.02(2H，t，J＝7.0Hz)，2.73(2H，t，J＝7.0Hz)，3.08(1H，s)，7.39(1H，d，J＝8.2Hz)，7.61(1H，dd，J＝1.8，8.2Hz)，8.14(1H，d，J＝91.8Hz).4-碘代苯甲酸乙酯將2ml亞硫酰氯加入10g(40.32mmol)4-碘代苯甲酸在100ml無水乙醇的懸浮液中，然后在回流狀態(tài)下加熱該混合物3小時(shí)。真空除去溶劑并將其殘留物溶解在100ml乙醚中。用飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉溶液洗滌該醚溶液并經(jīng)硫酸鎂干燥。然后，真空除去溶劑，使其殘留物經(jīng)Kugelrohr蒸餾(100℃，0.55mm)產(chǎn)生無色油狀的目的化合物PMR(CDCl3)δ1.42(3H，t，J～7Hz)，4.4(2H，q，J～7Hz)，7.8(4H).6-碘代煙酸將碘化鈉(20.59g，137.40mmol)在氫氣下冷卻到-78℃，然后加入氫碘酸(97.13g，759.34mmol)。移去制冷浴，并攪拌該懸浮液5分鐘。將6-氯煙酸(22.09g，140.20mmol)加入該混合物中并將所形成的混合物緩慢溫?zé)岬绞覝夭嚢?。?25℃加熱該混合物至回流達(dá)24小時(shí)，冷卻到室溫并倒入0℃的丙酮(500ml)中。過濾收集黃色的固體，用200ml1N的硫酸氫鈉水溶液洗滌。經(jīng)甲醇重結(jié)晶(用乙醚洗滌結(jié)晶)提供白色結(jié)晶狀的目的化合物mp177.179℃[lit.mp187-192，Newkomeetal.＂ReductiveDehalogenationofElectron-PoorHeterocyclesNicotinicAcidDerivatives＂J.Org，Chem.51953-954(1986).1HNMR(DMSO-d6)δ8.81(1H，dd，J＝0.8，2.4Hz)，8.01(1H，dd，J＝0.8，8.2Hz)，7.91(1H，dd，J＝2.4，8.2Hz)，6-碘代煙酸乙酯將1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(19.86g，103.6mmol)在二氯甲烷(250ml)中的溶液加入6-碘代煙酸(23.38g，94.20mmol)在二氯甲烷(100ml)的懸浮液中。將乙醇(12.40g，269.27mmol)，然后二甲氨基吡啶(1.15g，9.41mmol)加入該混合物中。將該混合物于50℃下加熱24.5小時(shí)，真空濃縮，并用水(200ml)稀釋，然后用乙醚(550ml)提取。用飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)并濃縮成黃色固體。經(jīng)快速層析純化(硅膠，10％乙酸乙酯-己烷)提供白色針晶狀目的化合物aswhiteneedlesmp48-49℃；1HNMR(CDCl3)δ8.94(1H，d，J＝2.1Hz).7.91(1H，dd，J＝2.1，8.2Hz)，7.85(1H，d，J＝8.2Hz)，4.41(2H，q，J＝7.1Hz)，1.41(3H，t，J＝7.1Hz).4-[(5，6，7，8-四氫-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物F)將5g(7.2mmol)雙(三苯基磷)氯化鈀(II)和1.4g(7.2mmol)碘化亞銅加入4g(21.7mmol)的7-乙炔基-3，4-二氫-4，4-二甲基萘-1(2H)-酮(化合物E)(通入氬氣流15分鐘)和6g(21.7mmol)4-碘代苯甲酸乙酯在100ml三乙胺的溶液中。向該混合物中通入氬氣5分鐘，然后于室溫下攪拌18小時(shí)。使該反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土過濾并真空濃縮其濾液。經(jīng)快速層析純化(硅膠，10％乙酸乙酯-己烷)產(chǎn)生白色固體狀的目的化合物PMR(CDCl3)δ1.41(3H，t，J＝7.2Hz)，1.41(6H，s)，2.04(2H，t，J＝6.5Hz)，2.76(2H，t，J＝6.5Hz)，4.40(2H，q，J＝7.2Hz)，7.44(1H，d，J＝8.2Hz)，7.59(2H，d，J＝8.4Hz)，7.68(1H，dd，J＝1.8，8.2Hz)，8.04(2H，d，J＝8.4Hz)，8.15(1H，d，J＝1.8Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)將500.0mg(1.44mmol)4-[(5，6，7，8-四氫-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物F)在4.0mlTHF中的溶液加入291.6mg(1.59mmol)雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉在5.6mlTHF中的冷溶液(-78℃)中。將該反應(yīng)混合物于-78℃攪拌35分鐘，然后加入601.2mg(1.59mmol)5-氯(2-雙-三氟甲基磺?；?酰亞胺在4.0mlTHF中的溶液。于-78℃攪拌1小時(shí)后，將該溶液溫?zé)岬?℃并攪拌2小時(shí)。通過加入飽和氯化銨水溶液使反應(yīng)物驟冷。用乙酸乙酯(50ml)提取該混合物并用5％氫氧化鈉水溶液、水和鹽水洗滌合并的有機(jī)層。使該有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，然后真空濃縮為黃色油狀物。經(jīng)柱層析純化(硅膠，7％乙酸乙酯-己烷)產(chǎn)生無色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.04(2H，dd，J＝1.8，8.4Hz)，7.60(2H，dd，J＝1.8，8.4Hz)，7.51(2H，m)，7.32(1H，d，J＝8.0Hz)，4.40(2H，q，J＝7.1Hz)，6.02(1H，t，J＝5.0Hz)，2.44(2H，d，J＝5.0Hz)，1.43(3H，t，J＝7.1Hz)，1.33(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)通過加入189.9mg(1.74ml，2.96mmol)的叔丁基鋰(1.7M的己烷溶液)到253.6mg(1.482mmol)的4-溴代甲苯在2.0mlTHF的冷溶液(-78℃)中制備4-甲苯基鋰(lithiototulene)溶液。攪拌30分鐘后，加入269.4mg(1.977mmol)的氯化鋅在3.0mlTHF中的溶液。將所形成的溶液溫?zé)岬绞覝?，攪?0分鐘，并經(jīng)套管加入到472.9mg(0.988mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)和50mg(0.04mmol)的四(三苯基磷)鈀(O)在4.0mlTHF的溶液中。將所形成的溶液于50℃加熱45分鐘，冷卻到室溫，并用飽和氯化銨水溶液稀釋。用乙酸乙酯(40ml)提取該混合物并用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)層。使其有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮到黃色油狀物。經(jīng)柱層析純化(硅膠，5％乙酸乙酯-己烷)產(chǎn)生無色固體狀的目的化合物。1HNMR(d6-丙酮)δ1.35(6H，s)，1.40(3H，t，J＝7.1Hz)，2.36(2H，d，J＝4.7Hz)，2.42(3H，s)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，5.99(1H，t，J＝4.7Hz)，7.25(5H，m)，7.35(2H，m)，7.52(2H，d，J＝8.5Hz)，7.98(2H，d，J＝8.5Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-苯基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1a)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用58.2mg(0.36ml，0.69mmol)苯基鋰(在環(huán)己烷/乙醚中的1.8M溶液)、116.1mg(0.85mmol)氯化鋅和13.8mg(0.01mmol)四(三苯基磷)鈀(O)將203.8mg(0.43mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)PMR(CDCl3)δ1.36(6H，s)，1.40(3H，t，J＝7.1Hz)，2.37(2H，d，J＝4.7Hz)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，6.02(1H，t，J＝4.7Hz)，7.20(1H，d，J＝1.5Hz)，7.27(1H，m)，7.39(6H，m)，7.52(2H，d，J＝8.2Hz)，7.98(2H，d，J＝8.2Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物2)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0mlTHF中的284.8mg(2.090mmol)氯化鋅、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和3-甲苯基鋰[通過加入201.2mg(1.86ml，3.14mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.7M溶液)到274.0mg(1.568mmol)的3-甲基溴代苯在2.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.99(2H，d，J＝8.4Hz)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz)，7.39-7.14(7H，m)，5.99(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.60(3H，s)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物3)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在4.0mlTHF中的199.4mg(1.463mmol)氯化鋅、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和2-甲苯基鋰[通過加入133.9mg(1.23ml，2.09mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.7M溶液)到178.7mg(1.045mmol)的2-甲基溴代苯在2.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將200.0mg(0.418mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.97(2H，d，J＝8.4Hz)，7.50(2H，d，J＝8.4Hz)，7.49-7.19(6H，m)，6.81(1H，d，J＝1.6Hz)，5.89(1H，t，J＝4.5Hz)，4.36(2H，q，J＝7.1Hz)，2.43-2.14(2H，dq，J＝3.7，5.4Hz)，2.15(3H，s)，1.39-1.34(9H，m).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3，5-二甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物4)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0mlTHF中的249.0mg(1.827mmol)氯化鋅、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和3，5-二甲基苯基鋰[通過加入167.7mg(1.54ml，2.62mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.7M溶液)到249.0mg(1.305mmol)的3，5-二甲基溴代苯在2.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.98(2H，d，J＝8.4Hz)，7.52(2H，d，J＝8.4Hz)，7.40-7.33(2H，m)，7.20(1H，d，J＝1.6Hz)，7.00(1H，s)，6.97(2H，s)，5.97(1H，t，J＝4.8Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.36(6H，s)，2.34(2H，d，J＝4.8Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.37(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-乙基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物5)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0mlTHF中的249.0mg(1.827mmol)氯化鋅、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和4-乙苯基鋰[通過加入167.7mg(1.54ml，2.62mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.7M溶液)到244.0mg(1.305mmol)的4-乙基溴代苯在2.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.99(2H，d，J＝8.4Hz)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz)，7.42-7.24(7H，m)，5.99(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.71(2H，q，J＝7.6Hz)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-(1，1-二甲基乙基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物6)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用142.4mg(1.045mmol)氯化鋅和4-叔丁基苯基鋰[通過加入100.6mg(0.97ml，1.57mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.5M溶液)到167.0mg(0.78mmol)的4-叔丁基溴代苯在1.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.52mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.99(2H，d，J＝8.4Hz)，7.55(2H，d，J＝8.4Hz)，7.28-7.45(7H，m)，6.02(1H，t，J＝4.9Hz)，4.38(2H，q，J＝7.2Hz)，2.36(2H，d，J＝4.9Hz)，1.59(3H，s)，1.40(3H，t，J＝7.2Hz)，1.39(9H，s)，1.35(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-氯苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物7)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0mlTHF中的249.0mg(1.827mmol)氯化鋅、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和4-氯苯基鋰[通過加入167.7mg(1.54ml，2.62mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.7M溶液)到252.4mg(1.305mmol)的4-氯-1-溴代苯在2.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.98(2H，d，J＝8.4Hz)，7.53(2H，d，J＝8.4Hz)，7.49-7.27(6H，m)，7.12(1H，d，J＝1.6Hz)，6.00(1H，t，J＝4.8Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.35(2H，d，J＝4.8Hz)，1.40(2H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲氧基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物8)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0mlTHF中的249.0mg(1.827mmol)氯化鋅、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和4-甲氧基苯基鋰[通過加入167.7mg(1.54ml，2.62mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.7M溶液)到244.1mg(1.305mmol)的4-甲氧基-1-溴代苯在2.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.98(2H，d，J＝8.5Hz)，7.52(2H，d，J＝8.6Hz)，7.4(0-7.21(5H，m)，6.95(2H，d，J＝8.7Hz)，5.97(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，4.34(3H，s)，2.34(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-三氟甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物9)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0mlTHF中的249.0mg(1.827mmol)氯化鋅、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和4-三氟甲基苯基鋰[通過加入167.7mg(1.54ml，2.62mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.7M溶液)到296.6mg(1.305mmol)的4-三氟甲基溴代苯在2.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.98(2H，d，J＝8.5Hz)，7.67(2H，d，J＝8.3Hz)，7.54-7.36(6H，m)，7.10(1H，d，J＝1.6Hz)，6.06(1H，t，J＝4.8Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.38(2H，d，J＝4.8Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.35(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物10)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用142.4mg(1.045mmol)氯化鋅和2-吡啶鋰(lithiopyridine)[通過加入100.6mg(0.97ml，1.57mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.5M溶液)到123.8mg(0.784mmol)的2-溴吡啶在1.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.52mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(d6-丙酮)[δ8.64(1H，m)，7.99(2H，d，J＝8.5Hz)，7.85(1H，ddd，J＝1.8，7.7，9.5Hz)，7.58(2H，d，J＝8.4Hz)，7.50(1H.d，J＝7.7Hz)，7.47(2H，d，J＝1.1Hz)，7.35(2H，m)，6.32(1H，t，J＝4.8Hz)，4.34(2H，q，J＝7.2Hz)，2.42(2H，d，J＝7.4Hz)，1.35(3H，t，J＝7.0hz)，1.35(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物11)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用142.4mg(1.045mmol)氯化鋅和3-吡啶鋰[通過加入100.2mg(0.92ml，1.56mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.5M溶液)到123.8mg(0.784mmol)的3-溴吡啶在1.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將170.0mg(0.35mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ8.63-8.61(2H，dd，J＝1.7Hz)，7.992H，d，J＝8.4Hz)，7.67(1H，dt，J＝7.9Hz)，7.52(2H，d，J＝8.4Hz)，7.43-7.34(3H，m)，7.10(1H，d，J＝1.6Hz)，6.07(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.40(2H，d，J＝4.7Hz)，1.390(3H，t，J＝7.1Hz)，1.36(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-甲基-5-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物12)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用142.4mg(1.045mmol)氯化鋅和2-甲基-5-吡啶鋰[通過加入100.5mg(0.92ml，1.57mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.7M溶液)到134.8mg(0.784mmol)的2-甲基-5-溴吡啶在1.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.522mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ8.50(1H，d，J＝2.2Hz)，7.99(2H，d，J＝8.3Hz)，7.56(1H，dd，J＝2.3，8.0Hz)，7.53(2H，d，J＝8.4Hz)，7.43(1H，dd，J＝2.3，8.0Hz)，7.37(2H，d，J＝8.0Hz)，7.21(1H，d，J＝8.1Hz)，7.11(1H，d，J＝1.5Hz)，6.04(1H，t，J＝4.7Hz)，4.38(2H，q，J＝7.2Hz)，2.63(3H，s)，2.38(2H，d，J＝4.6Hz)，1.40(3H，t，J＝7.1Hz)，1.35(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物H)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)相同的通用方法，使用在2.0mlTHF中的150.0mg(1.10mmol)氯化鋅、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和3-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基鋰[通過加入100.2mg(0.92ml，1.564mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.7M溶液)到226.0mg(0.787mmol)的3-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)溴代苯在2.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將150.0mg(0.314mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.98(2H，d，J＝8.4Hz)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz)，7.40-7.22(4H，m)，6.95(1H，d，J＝7.6Hz)，6.84-6.82(2H，m)，6.00(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(3H，s)，0.99(9H，s)，0.23(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氫基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物I)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0mlTHF中的209.0mg(1.53mmol)氯化鋅、24mg(0.02mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和4-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基鋰[通過加入140.3mg(1.30ml，2.19mmol)的叔丁基鋰(在戊烷中的1.7M溶液)到315.0mg(1.09mmol)的4-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)溴代苯在2.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將210.0mg(0.439mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.98(2H，d，J＝8.4Hz)，7.51(2H，d，J＝8.4Hz)，7.39-7.25(3H，m)，7.21(2H，d，J＝8.5Hz)，5.87(2H，d，J＝8.5Hz)，5.96(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.33(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.33(6H，s)，1.01(9H，s)，0.25(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-羥基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物13)于室溫下，將91.5mg(0.35ml，0.35mmol)的氟化四丁基銨(在THF中的1M溶液)加入60.0mg(0.114mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)-苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物H)在1.0mlTHF的溶液中。攪拌過夜后，用乙酸乙酯稀釋該溶液，在經(jīng)硫酸鎂干燥之前，用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌。減壓除去溶劑，然后經(jīng)柱層析純化(4∶1，己烷∶乙酸乙酯)提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.98(2H，d，J＝7.8Hz)，7.52(2H，d，J＝8.3Hz)，7.39-7.21(4H，m)，6.93(1H，d，J＝7.5Hz)，6.84(1H，d，7.1Hz)，6.83(1H，s)，6.011H，t，J＝4.7Hz)，4.91(1H，s)，4.39(2H，q，J＝7.1Hz)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-羥基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物14)于室溫下，將73.2mg(0.29ml，0.29mmol)的氟化四丁基銨(在THF中的1M溶液)加入50.0mg(0.095mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物I)在1.0mlTHF的溶液中。攪拌過夜后，用乙酸乙酯稀釋該溶液，在經(jīng)硫酸鎂干燥之前，用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌。減壓除去溶劑，然后經(jīng)柱層析純化(4∶1，己烷∶乙酸乙酯)提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.98(2H，d，J＝8.2Hz)，7.52(2H，d，J＝8.3Hz)，7.41-7.20(5H，m)，6.88(2H，d，J＝8.4Hz)，5.96(1H，t，J＝4.5Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.34(2H，d，J＝4.5Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(5-甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物15)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在4.0mlTHF中的150.0mg(1.10mmol)氯化鋅、14mg(0.012mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和5-甲基噻唑-2-基鋰[通過加入53.2mg(0.53ml，0.83mmol)的正丁基鋰(在戊烷中的1.55M溶液)到82.0mg(0.83mmol)的5-甲基噻唑在5.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將264.0mg(0.552mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ7.99(2H，d，J＝7.8Hz)，7.88(1H，d，J＝1.5Hz)，7.55(2H，d，J＝7.8Hz)，7.54(1H，s)，7.45(1H，dd，J＝1.5，8.0Hz)，7.35(1H，d，J＝7.9Hz)，6.48(1H，t，J＝4.8Hz)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，2.51(3H，s)，2.38(2H，d，J＝4.8Hz)，1.40(3H，s)，1.32(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物15a)通過將41.2mg(0.42ml，0.63mmol)的正丁基鋰(在己烷中的1.5M溶液)加入53.4mg(0.63mmol)噻唑在1.0mlTHF的冷卻溶液(-78℃)中制備2-噻唑鋰(2-lithiothiazole)溶液。攪拌該溶液30分鐘，然后加入113.9mg(0.84mmol)氯化鋅在1.5mlTHF中的溶液。將所形成的溶液溫?zé)岬绞覝?，攪?0分鐘，然后經(jīng)套管將該有機(jī)鋅加入200.0mg(0.42mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)和12.4mg(0.01mmol)的四(三苯基磷)鈀(O)在1.5mlTHF的溶液中。將所形成的溶液在50℃下加熱45分鐘，冷卻到室溫并用飽和氯化銨水溶液稀釋。用乙酸乙酯(40ml)提取該混合物，并用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)層。使該有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，并真空濃縮到黃色油狀物。經(jīng)柱層析純化(硅膠，20％乙酸乙酯-己烷)產(chǎn)生無色油狀的目的化合物PMR(CDCl3)δ1.35(6H，s)，1.40(3H，t，J＝7.1Hz)，2.42(2H，d，J＝4.8Hz)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，6.57(1H，t，J＝4.8Hz)，7.33(1H，d，J＝3.3Hz)，7.36(1H，d，J＝8.0Hz)，7.46(1H，dd，J＝1.7，8.1Hz)，7.55(2H，d，J＝8.4Hz)，7.87(1H，d，J＝1.7Hz)，7.92(1H，d，J＝3.3Hz)，8.00(2H，d，J＝8.4Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物16)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在6.0mlTHF中的168.0mg(1.23mmol)氯化鋅、16mg(0.014mmol)的四(三苯基磷)鈀(O)和4-甲基噻唑-2-基鋰[通過加入59.6mg(0.60ml，0.93mmol)的正丁基鋰(在己烷中的1.55M溶液)到92.0mg(0.93mmol)的4-甲基噻唑在6.0mlTHF的冷溶液(-78℃)中制備]將295.0mg(0.617mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ8.00(2H，d，J＝8.4Hz)，7.80(1H，d，J＝1.7Hz)，7.55(2H，d，J＝8.4Hz)，7.45(1H，dd，J＝1.7，8.0Hz)，7.35(1H，d，J＝8.0Hz)，6.87(1H，s)，6.52(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.2Hz)，2.54(3H，s)，2.39(2H，d，J＝4.7Hz)，1.40(3H，t，J＝7.2Hz)，1.33(3H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物17)使用與制備4-((5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0mlTHF中的110.0mg(0.84mmol)氯化鋅、12mg(0.011mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和4，5-二甲基噻唑-2-基鋰[通過加入40.2mg(0.39ml，0.63mmol)的正丁基鋰(在己烷中的1.55M溶液)到71.0mg(0.63mmol)的4，5-二甲基噻唑在2.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將200.0mg(0.418mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ8.00(2H，d，J＝8.4Hz)，7.82(1H，d，J＝1.7Hz)，7.54(2H，d，J＝8.4Hz)，7.43(1H，dd，J＝1.7，8.0Hz)，7.3391H，d，J＝8.0Hz)，6.45(1H，t，J＝4.9Hz)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，2.41(3H，s)，2.40(3H，s)，2.37(2H，d，J＝4.9Hz)，1.40(3H，t，J＝7.1Hz)，1.32(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-甲基-5-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物18)于室溫下，攪拌81.7mg(0.194mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-甲基-5-吡定基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物12)和40.7mg(0.969mmol)的LiOH-H2O在3mlTHF/水(3∶1，v/v)中的溶液過夜。通過加入飽和氯化銨水溶液抑制該反應(yīng)，并用乙酸乙酯提取。用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥，真空濃縮產(chǎn)生無色固體狀目的化合物1HNMR(d6-DMSO)δ8.41(1H，d，J＝1.9Hz)，7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.63(1H，dd，J＝2.3，7.9Hz)，7.59(2H，d，J＝8.3Hz)，7.49(2H，m)，7.33(1H，d，J＝7.8Hz)，6.95(1H，s)，6.11(1H，t，J＝4.5Hz)，2.52(3H，s)，2.37(2H，d，J-4.6Hz)，1.31(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物19)于室溫下，攪拌80.0mg(0.196mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物10)和20.6mg(0.491mmol)的LiOH-H2O在3mlTHF/水(3∶1，v/v)中的溶液過夜。通過加入飽和氯化銨水溶液抑制該反應(yīng)，并用乙酸乙酯提取。用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥，真空濃縮產(chǎn)生無色固體狀目的化合物1HNMR(d6-DMSO)δ8.64(1H，m)，7.94(2H，d，J＝8.3Hz)，7.87(1H，dt，J＝1.7，7.8Hz)，7.58(2H，d，J＝8.3Hz)，7.50(1H，d，J＝8.2Hz)，7.47(2H，s)，7.37(1H，m)，7.25(1H，s)，6.30(1H，t，J＝4.6Hz)，2.39(2H，d，J＝4.6Hz)，1.31(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物20)將28.0mg(0.70mmol，0.7ml)的氫氧化鈉(1M水溶液)加入30.0mg(0.071mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物2)在3ml乙醇和2mlTHF的溶液中。將該溶液在50℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫并用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(DMSO)δ7.90(2H，d，J＝8.5Hz)，7.59(2H，d，J＝8.5Hz)，7.46(2H，s)，7.32-7.13(4H，m)，7.10(1H，s)，6.98(1H，t，J＝4.5Hz)，2.34(3H，s)，2.31(2H，d，J＝4.5Hz)，1.30(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-乙基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物21)將28.0mg(0.70mmol，0.7ml)的氫氧化鈉(1M水溶液)加入47.0mg(0.108mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-乙基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物5)在3ml乙醇和2mlTHF的溶液中。將該溶液在50℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫并用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(DMSO)δ7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.59(2H，d，J＝8.3Hz)，7.46(2H，s)，7.29-7.21(4H，m)，7.02(1H，s)，6.01(1H，t，J＝4.5Hz)，2.64(2H，q，J＝7.5Hz)，2.33(2H，d，J＝4.5Hz)，1.29(6H，s)，1.22(3H，t，J＝7.5Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲氧基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物22)將40.0mg(1.00mmol，1.0ml)的氫氧化鈉(1M水溶液)加入80.0mg(0.183mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲氧基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物8)在3ml乙醇和2mlTHF的溶液中。將該溶液在50℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫并用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(DMSO)δ7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.60(2H，d，J＝8.3Hz)，7.45(2H，s)，7.24(2H，d，J＝8.6Hz)，7.02-6.89(3H，m)，5.98(1H，t，J＝4.4Hz)，3.79(3H，s)，2.31(2H，d，J＝4.7Hz)，1.29(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-三氟甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物23)將60.0mg(1.50mmol，1.50ml)的氫氧化鈉(1.0M水溶液)加入70.0mg(0.148mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-三氟甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物9)在3ml乙醇和2mlTHF的溶液中。將該溶液在50℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫并用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(DMSO)δ7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.80(2H，d，J＝8.1Hz)，7.61-7.47(6H，m)，6.97(2H，s)，6.16(1H，t，J＝4.5Hz)，2.37(2H，d，J＝4.6Hz)，1.30(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3，5-二甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物24)將48.0mg(1.20mmol，1.20ml)的氫氧化鈉(1.0M水溶液)加入90.0mg(0.207mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3，5-二甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物4)在3ml乙醇和2mlTHF的溶液中。將該溶液在50℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫并用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(DMSO)δ7.90(2H，d，J＝8.2Hz)，7.59(2H，d，J＝8.2Hz)，7.45(2H，s)，7.00(1H，s)，6.97(1H，s)，5.97(1H，t，J＝4.5Hz)，2.31(2H，d，J＝4.5Hz)，2.30(6H，s)，1.29(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-氯苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物25)將48.0mg(1.20mmol，1.20ml)的氫氧化鈉(1.0M水溶液)加入80.0mg(0.181mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-氯苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物7)在3ml乙醇和2mlTHF的溶液中。將該溶液在50℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫并用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(DMSO)δ7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.60(2H，d，J＝8.3Hz)，7.51-7.48(4H，m)，7.34(2H，d，J＝8.4Hz)，6.97(1H，s)，6.07(1H，t，J＝4.5Hz)，2.34(2H，d，J＝4.6Hz)，1.29(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物26)將48.0mg(1.20mmol，1.20ml)的氫氧化鈉(1.0M水溶液)加入45.0mg(0.110mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-吡啶基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物11)在3ml乙醇和2mlTHF的溶液中。將該溶液在50℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫并用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(DMSO)δ8.60(1H，d，J＝4.6Hz)，8.55(1H，s)，7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.76(1H，d，J＝7.5Hz)，7.60(2H，d，J＝8.3Hz)，7.51-7.45(3H，m)，6.94(1H，s)，6.14(1H，t，J＝4.5Hz)，2.37(2H，d，J＝4.5Hz)，1.31(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物27)將60.0mg(1.50mmol，1.50ml)的氫氧化鈉(1.0M水溶液)加入80.0mg(0.190mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物3)在3ml乙醇和2mlTHF的溶液中。將該溶液在50℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫并用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(DMSO)δ7.89(2H，d，J＝8.4Hz)，7.57(2H，d，J＝8.4Hz)，7.46(2H，s)，7.29-7.14(4H，m)，6.59(1H，s)，5.90(1H，t，J＝4.7Hz)，2.39(2H，m)，2.60(3H，s)，1.39(3H，s)，1.29(3H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-羥基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物28)將40.0mg(1.00mmol，1.00ml)的氫氧化鈉(1.0M水溶液)加入40.0mg(0.076mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(3-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物H)在3ml乙醇和2mlTHF的溶液中。將該溶液在50℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫并用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-丙酮)δ7.90(2H，d，J＝8.3Hz)，7.49(2H，d，J＝8.4Hz)，7.35(2H，s)，7.15-7.07(2H，m)，6.77-6.69(3H，m)，5.92(1H，t，J＝4.7Hz)，2.25(2H，d，J＝4.7Hz)，1.23(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-羥基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物29)將60.0mg(1.50mmol，1.50ml)的氫氧化鈉(1.0M水溶液)加入75.0mg(0.143mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-((2，2-二甲基乙基)-二甲基硅氧基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物I)在3ml乙醇和2mlTHF的溶液中。將該溶液在50℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫并用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-丙酮)δ8.01(2H，d，J＝8.3Hz)，7.59(2H，d，J＝8.4Hz)，7.45(2H，s)，7.20-7.17(3H，m)，6.92-6.89(2H，m)，5.97(1H，t，J＝4.7Hz)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.34(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(5-甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物30)于室溫下，將氫氧化鈉水溶液(1ml，1M，1mmol)加入100mg(0.23mmol)4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(5-甲基噻唑-2-基)-2-萘基]乙炔基苯甲酸乙酯(化合物15)和4ml乙醇的溶液中。將該形成的溶液在50℃下加熱1小時(shí)并真空濃縮。使其殘留物懸浮在二氯甲烷和醚(5∶1)溶液中，用1M鹽酸水溶液酸化到pH為5。使其分層，并用鹽水洗滌其有機(jī)層，干燥(硫酸鈉)，過濾并減壓除去溶劑，產(chǎn)生白色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-DMSO)δ7.96(1H，d，J＝1.7Hz)，7.95(2H，d，J＝8.0Hz)，7.65(2H，d，J＝8.0Hz)，7.64(1H，s)，7.53(1H，dd，J＝1.7，8.0Hz)，7.46(1H，d，J＝8.0Hz)，6.59(1H，t，J＝4.5Hz)，2.50(3H，s)，239(2H，d，J＝4.5Hz)，1.27(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物30a)于室溫下，攪拌33.9mg(0.08mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物15a)和8.5mg(0.20mmol)的LiOH-H2O在3mlTHF/水(3∶1，v/v)中的溶液過夜。通過加入飽和氯化銨水溶液抑制該反應(yīng)，并用乙酸乙酯提取。用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥，真空濃縮產(chǎn)生無色固體狀目的化合物PMR(d6-DMSO)δ1.29(6H，s)，2.42(2H，d，J＝4.6Hz)，6.68(1H，t，J＝4.6Hz)，7.51(2H，m)，7.62(2H，d，J＝8.2Hz)，7.77(1H，d，J＝3.3Hz)，7.93(2H，d，J＝8.2Hz)，7.98(1H，d，J＝3.3Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物31)于室溫下，將氫氧化鈉水溶液(1ml，1M，1mmol)加入4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基噻唑-2-基)-2-萘基]乙炔基苯甲酸乙酯(化合物16)(145.0mg，0.34mmol)和4ml乙醇的溶液中。將所形成的溶液在50℃下加熱1小時(shí)并真空濃縮。使其殘留物懸浮在二氯甲烷和醚(5∶1)溶液中，用1M鹽酸水溶液酸化到pH為5。使其分層，并用鹽水洗滌其有機(jī)層，干燥(硫酸鈉)，過濾并減壓除去溶劑，產(chǎn)生白色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-DMSO)δ7.94(2H，d，J＝8.1Hz)，7.87(1H，d，J＝1.6Hz)，7.63(2H，d，J＝8.3Hz)，7.50(1H，dd，J＝1.6，8.1Hz)，7.45(1H，d，J＝8.1Hz)，7.27(1H，s)，6.58(1H，t，J＝4.8Hz)，2.43(3H，s)，2.37(2H，d，J＝4.8Hz)，1.26(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物32)于室溫下，將氫氧化鈉水溶液(1ml，1M，1mmol)加入4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2-萘基]乙炔基苯甲酸乙酯(化合物17)(58.0mg，0.13mmol)和4ml乙醇的溶液中。將所形成的溶液在50℃下加熱1小時(shí)并真空濃縮。使其殘留物懸浮在二氯甲烷和醚(5∶1)溶液中，用1M鹽酸水溶液酸化到pH為5。使其分層，并用鹽水洗滌其有機(jī)層，干燥(硫酸鈉)，過濾并減壓除去溶劑，產(chǎn)生白色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-DMSO)δ7.94(2H，d，J＝8.4Hz)，7.86(1H，d，J＝1.6Hz)，7.61(2H，d，J＝8.3Hz)，7.50(1H，dd，J＝1.6，8.0Hz)，7.45(1H，d，J＝8.0Hz)，6.51(1H，t，J＝4.9Hz)，2.37(3H，s)，2.36(2H，d，J＝4.6Hz)，2.32(3H，s)，1.26(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(5-甲基-2-噻吩基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物33)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用在2.0mlTHF中的202.0mg(1.48mmol)氯化鋅、24mg(0.022mmol)四(三苯基磷)鈀(0)和5-甲基-2-噻吩鋰[通過加入58.6mg(0.36ml，0.915mmol)的正丁基鋰(在己烷中的2.5M溶液)到89.8mg(0.915mmol)的2-甲基噻吩在2.0mlTHF的冷溶液(-78℃)中制備]將170.0mg(0.366mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)1HNMR(CDCl3)δ8.00(2H，d，J＝8.3Hz)，7.59(1H，d，J＝1.7Hz)，7.55(2H，d，J＝8.2Hz)，7.43(1H，dd，J＝1.7，8.0Hz)，7.35(1H，d，J＝8.0Hz)，6.87(1H，d，J＝3.5Hz)，6.74(1H，d，J＝2.8Hz)，6.15(1H，t，J＝4.8Hz)，4.38(2H，q，J＝7.1Hz)，2.52(3H，s)，2.32(2H，d，J＝4.8Hz).1.40(3H，t，7.1Hz)，1.32(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-噻吩基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物33a)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用186.8mg(1.37mmol)氯化鋅、37.1mg(0.03mmol)四(三苯基磷)鈀(O)和2-噻吩鋰[通過加入65.9mg(0.69ml，1.03mmol)的正丁基鋰(在己烷中的1.5M溶液)到86.5mg(1.03mmol)的噻吩在1.0mlTHF的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.52mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)PMR(CDCl3)δ1.33(6H，s)，1.36(3H，t，J＝7.1Hz)，2.38(2H，d，J＝4.7Hz)，4.34(2H，q，J＝7.2Hz)，6.25(1H，t，J＝4.7Hz)，7.13(2H，m)，7.47(4H，m)，7.62(2H，d，J＝8.5Hz)，8.00(2H，d，J＝8.5Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(5-甲基-2-噻吩基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物34)于室溫下，將氫氧化鈉水溶液(1ml，1M，1mmol)加入4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(5-甲基-2-噻吩基)-2-萘基]乙炔基苯甲酸乙酯(化合物33)(35.0mg，0.082mmol)在2ml乙醇和1mlTHF的溶液中。將所形成的溶液在室溫下攪拌過夜，然后用10％鹽酸酸化。用乙酸乙酯提取，然后經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-丙酮)δ8.03(2H，d，J＝8.6Hz)，7.63(2H，d，J＝8.6Hz)，7.54-7.48(3H，m)，6.89(1H，m)，6.18(1H，t，J＝4.7Hz)，2.49(3H，s)，2.35(2H，d，J＝4.7Hz)，1.32(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-噻吩基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物34a)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物30a)相同的方法，使用在水中的17.8mg(0.42mmol)LiOH，將70.0mg(0.17mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-噻吩基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物33a)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)PMR(d6-DMSO)δ1.27(6H，s)，2.33(2H，d，J＝4.9Hz)，6.23(1H，t，J＝4.9Hz)，7.14(2H，m)，7.38-7.56(4H，m)，7.61(2H，d，J＝8.3Hz)，7.92(2H，d，J＝8.3Hz).5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘甲酸(化合物K)將3，4-二氫-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-溴萘(化合物D)(250.0mg，0.764mmol)在2.0mlTHF中的溶液冷卻到-78℃，并緩慢加入1.0ml的叔丁基鋰(1.68mmol，1.7M戊烷溶液)。于-78℃攪拌1小時(shí)后，將氣體二氧化碳(通過干冰的蒸發(fā)而產(chǎn)生，經(jīng)過干燥管)鼓泡通入反應(yīng)物中達(dá)1小時(shí)。然后，使該反應(yīng)液溫?zé)岬绞覝?，通過加入10％鹽酸抑制反應(yīng)。用乙酸乙酯提取，然后用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑，并用己烷洗滌該固體提供無色固體目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.94(1H，dd，J＝1.8，8.1Hz)，7.76(1H，d，J＝1.8Hz)，7.45(1H，d，J＝8.1Hz)，7.24(4H，m)，6.01(H，t，J＝4.7Hz)，2.40(3H，s)，2.36(2H，d，J＝4.7Hz)，1.35(6H，s).4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物35)于室溫下，將170.0mg(0.58mmol)的5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘甲酸(化合物K)、115.0mg(0.70mmol)的4-氨基苯甲酸乙酯、145.0mg(0.76mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和92.4mg(0.76mmol)的4-二甲氨基吡啶在6.0mlDMF中的溶液攪拌過夜。加入乙酸乙酯，并用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌所形成的溶液，然后經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑后，通過柱層析(10-15％乙酸乙酯/己烷)分離無色固體狀的產(chǎn)物1HNMR(CDCl3)δ8.02(2H，d，J＝8.7Hz)，7.72(2H，m)，7.65(2H，d，J＝8.7Hz)，7.52(1H，d，J＝1.8Hz)，7.48(1H，d，J＝8.0Hz)，7.25(4H，m)，6.15(1H，t，J＝4.9Hz)，4.36(2H，q，J＝7.1Hz)，2.40(3H，s)，2.38(2H，d，J＝4.9Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.37(6H，s).4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸(化合物36)將240.1mg氫氧化鈉(6.00mmol，3.0ml2M的水溶液)加入26.5mg(0.06mmol)的4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物35)在3.0ml乙醇和4.0mlTHF中的溶液中。于室溫下攪拌72小時(shí)后，通過加入10％鹽酸抑制該反應(yīng)。用乙酸乙酯提取，經(jīng)硫酸鎂干燥有機(jī)層，在減壓除去溶劑后提供固體。經(jīng)乙腈結(jié)晶提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-DMS0)δ10.4(1H，s)，7.91-7.81(5H，m)，7.54(1H，d，J＝8.1Hz)，7.45(1H，d，J＝1.7Hz)，7.23(4H，s)，6.04(1H，t，J＝4.7Hz)，2.35(5H，s)，1.33(6H，s).4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氧基]苯甲酸乙酯(化合物37)于室溫下，將25.0mg(0.086mmol)的5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘甲酸(化合物K)、17.5mg(0.103mmol)的4-羥基苯甲酸乙酯、21.4mg(0.112mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和12.6mg(0.103mmol)的4-二甲氨基吡啶在2.0mlDMF中的溶液攪拌過夜。加入乙酸乙酯，并在用硫酸鎂干燥以前，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌所形成的溶液。減壓除去溶劑后，通過柱層析(10％乙酸乙酯/己烷)分離淡黃色固體狀的產(chǎn)物1HNMR(CDCl3)δ8.08(2H，d，J＝8.1Hz)，8.05(1H，dd，J＝1.8，8.1Hz)，7.89(1H，d，J＝1.8Hz)，7.50(2H，d，J＝8.1Hz)，7.22(5H，m)，6.05(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.39(2H，d，J＝4.7Hz)，2.38(3H.s)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.37(6H，s).4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氫基]苯甲酸2-三甲硅基乙酯(化合物38)于室溫下，將93.5mg(0.320mmol)的5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘甲酸(化合物K)、76.0mg(0.319mmol)的4-羥基苯甲酸2-三甲硅基乙酯、80.0mg(0.417mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和51.0mg(0.417mmol)的4-二甲氨基吡啶在4.0mlDMF中的溶液攪拌過夜。加入乙酸乙酯，并在用硫酸鎂干燥以前，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌所形成的溶液。減壓除去溶劑后，通過柱層析(5％乙酸乙酯/己烷)分離無色固體狀的產(chǎn)物1HNMR(CDCl3)δ8.08(2H，d，J＝8.8Hz)，8.05(1H，dd，J＝1.8，8.1Hz)，7.50(1H，d，J＝8.1Hz)，7.26-7.18(6H，m)，6.05(1H，t，J＝4,7Hz)，4.42(2H，t，J＝8.4Hz)，2.40(2H，d，J＝4.7Hz)，2.39(3H，s)，1.38(6H，s)，0.09(9H，s).4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氧基]苯甲酸(化合物39)于室溫下，將110.0mg(0.213mmol)的4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氧基]苯甲酸2-三甲硅基乙酯(化合物38)和167.3mg氟化四丁基銨(0.640mmol，0.64ml在THF中的1M溶液)在2.0mlTHF中的溶液攪拌22小時(shí)。加入乙酸乙酯，用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌所形成的溶液，然后經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑并用乙酸乙酯和乙腈洗滌殘留固體提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-丙酮)δ8.10(2H，d，J＝8.8Hz)，8.06(1H，dd，J＝2.0，8.1Hz)，7.82(1H，d，J＝1.9Hz)，7.64(1H，d，J＝8.1Hz)，7.35(2H，d，J＝8.6Hz)，7.25(4H，m)，6.08(1H，t，J＝4.7Hz)，2.42(2H，d，J＝4.7Hz)，2.35(3H，s)，1.39(6H，s).2-氟-4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物40)將115.0mg(0.41mmol)的5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘甲酸(化合物K)、89.0mg(0.49mmol)的2-氟-4-氨基苯甲酸乙酯、102.0mg(0.53mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和65.0mg(0.53mmol)的4-二甲氨基吡啶在5.0mlDMF中的溶液于50℃下攪拌1小時(shí)，然后于室溫下攪拌過夜。加入乙酸乙酯，并在用硫酸鎂干燥以前，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌所形成的溶液。減壓除去溶劑后，通過柱層析(20％乙酸乙酯/己烷)分離無色固體狀的產(chǎn)物1HNMR(CDCl3)δ7.96(1H，s)，7.89(1H，t，J＝8.4Hz)，7.70(2H，m)，7.52(1H，d，J＝1.9Hz)，7.45(1H，d，J＝8.1Hz)，7.23(5H，m)，6.04(1H，t，J＝4.8Hz)，4.36(2H，q，J＝7.1Hz)2.38(3H，s)，2.35(2H，d，J＝4.8Hz)，1.39(3H，t，J＝7.1Hz)，1.36(6H，s).2-氟-4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸(化合物41)將40.0mg氫氧化鈉(1.00mmol，1.0ml1M的水溶液)加入41.6mg(0.091mmol)的2-氟-4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物40)在2.0ml乙醇和2.0mlTHF中的溶液中。于室溫下攪拌過夜后，通過加入10％鹽酸抑制該反應(yīng)。用乙酸乙酯提取，經(jīng)硫酸鎂干燥有機(jī)層，在減壓除去溶劑后提供固體。經(jīng)乙腈結(jié)晶提供淡黃色固體狀的目的化合物1HNMR(d6丙酮)δ9.84(1H，s)，7.94-7.83(3H，m)，7.64(1H，dd，J＝2.0Hz)，7.53(2H，d，J＝8.1Hz)，7.23(4H，s)，6.04(1H，t，J＝4.7Hz)，2.38(2H，d，J＝4.7Hz)，2.36(3H，s)，1.35(6H，s).4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物42)將110.0mg(0.25mmol)的4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物35)和121.0mg(0.30mmol)的[2，4-雙(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫代-2，4-diphosphetane-2，4-二硫醚](Lawesson’s試劑)在12.0ml苯中的溶液回流過夜。在冷卻到室溫后，將所述混合物過濾并減壓濃縮其濾液。經(jīng)柱層析(10-25％乙酸乙酯/己烷)分離黃色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.92(1H，s)，8.06(2H，t，J＝8.5Hz)，7.88-7.70(3H，m)，7.42(2H，d，J＝8.1Hz)，7.18(4H，m)，6.03(1H，t，J＝4.7Hz)，4.37(2H，q，J＝7.1Hz)，2.38(3H，s)，2,36(2H，d，J＝4.7Hz)，1.56(3H，t，J＝7.1Hz)，1.35(6H，s).4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基]苯甲酸(化合物43)將60.0mg氫氧化鈉(1.50mmol，1.5ml1M的水溶液)加入84.0mg(0.184mmol)的4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物42)在2.0ml乙醇和2.0mlTHF中的溶液中。于室溫下攪拌過夜后，通過加入10％鹽酸抑制該反應(yīng)。用乙酸乙酯提取，經(jīng)硫酸鎂干燥有機(jī)層，在減壓除去溶劑后提供固體。經(jīng)乙腈結(jié)晶提供黃色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-丙酮)δ10.96(1H，s)，8.05(4H，m)，7.72(1H，dd，J＝2.0，8.0Hz)，7.54(1H，s)，7.46(1H，d，J＝8.1Hz)，7.20(4H，m)，6.04(1H，t，J＝4.7Hz)，2.38(2H，d，J＝4.7Hz)，2.33(3H，s)，1.35(6H，s).2-乙?；?6-溴代萘(化合物L(fēng))將21.0g(267mmol)乙酰氯加入44.0g(0.212mol)2-溴代萘和34.0g(0.255mol)的三氯化鋁在400ml硝基苯的冷的(10℃)混合物中。將該機(jī)械攪拌下的反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝?，?0℃下加熱18小時(shí)。在冰浴中冷卻到0℃后，通過加入12M鹽酸(70ml))抑制反應(yīng)。使其分層，并用水和稀的碳酸氫鈉水溶液洗滌其有機(jī)相。Kugelrohr蒸餾，然后經(jīng)10％乙酸乙酯-己烷重結(jié)晶產(chǎn)生23g黃褐色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.44(1H，brs)，8.04-8.10(2H，m)，7.85(1H，d，J＝8.5Hz)，7.82(1H，d，J＝8.8Hz)，7.64(1H，d，J＝8.8Hz)，2.73(3H，s).6-溴-2-萘甲酸(化合物M)將4g(16.06mmol)2-乙?；?6-溴代萘(化合物L(fēng))在50ml1，4-二氧六環(huán)中的溶液加入次氯酸鈉(62ml，5.25％的水溶液(w/w)，3.6g，48.18mmol)和氫氧化鈉(6.4g，160.6mmol)在50ml水的溶液中。將該黃色溶液在油浴中于70℃下加熱2小時(shí)，冷卻到室溫，用乙醚(2×50ml)提取。用亞硫酸氫鈉溶液稀釋其水層(直到碘化鉀指示液保持無色為止)，然后用1N硫酸酸化(pH＜2)產(chǎn)生白色沉淀。用乙醚提取該混合物，并用飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)相，干燥(硫酸鎂)和濃縮產(chǎn)生3.54g(88％)固體狀的目的化合物1HNMR(DMSO-d6)δ8.63(1H，brs)，8.32(1H，d，J＝2.0Hz)，8.10(1H，d，J＝8.8Hz)，8.00-8.05(2H，m)，7.74(1H，dd，J＝2.0，8.8Hz).6-溴-2-萘甲酸乙酯(化合物N)18M硫酸(2ml)加入3.1g(12.43mmol)的6-溴-2-萘甲酸(化合物M)在乙醇(30ml，23.55g，511.0mmol)的溶液中。將該溶液回流30分鐘，冷卻到室溫，在戊烷(100ml)和水(100ml)之間分配該反應(yīng)混合物。用戊烷(100ml)提取其水相，用飽和氯化鈉水溶液(100ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)并濃縮產(chǎn)生灰白色的固體。經(jīng)快速層析純化(硅膠，10％乙酸乙酯∶己烷)提供白色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.58(1H，brs)，8.10(1H，dd，J＝1.7，9Hz)，8.06(1H，d，J＝2Hz)，7.83(1H，d，J＝9Hz)，7.80(1H，d，J＝9Hz)，7.62(1H，dd，J＝2,9Hz).(E)-4-[2-(5，6，7，8-四氫-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸乙酯(化合物O)將124.0mg(0.40mmol)的三(2-甲基苯基)磷，然后44.0mg(0.20mmol)的乙酸鈀(II)加入520.0mg(2.00mmol)的3，4-二氫-4，4-二甲基-7-溴-1(2H)-萘酮(化合物B)和510.0mg(2.90mmol)的4-乙烯基苯甲酸乙酯在4.0ml三乙胺(通入氫氣25分鐘脫氣)的溶液中。將所形成的溶液于95℃加熱2.5小時(shí)，冷卻到室溫，減壓濃縮。經(jīng)柱層析純化(10％乙酸乙酯/己烷)提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.19(1H，d，J＝2.0Hz)，8.03(2H，d，J＝8.4Hz)，7.69(1H，dd，J＝2.0，8.2Hz)，7.57(2H，d，J＝8.4Hz)，7.45(1H，d，J＝8.2Hz)，7.20(2H，s)，4.39(2H，q，J＝7.1Hz)，2.76(2H，t，J＝6.5Hz)，2.04(2H，t，J＝6.5Hz)，1.41(3H，t，J＝7.1Hz，and6H，s).(E)-4-[2-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)乙炔基]-苯甲酸乙酯(化合物P)將700.0mg(2.00mmol)的(E)-4-[2-(5，6，7，8-四氫-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸乙酯(化合物O)在25.0mlTHF中的溶液加入440.0mg(2.40mmol)的雙(三甲基硅基)氨化鈉在10.0mlTHF的冷的(-78℃)溶液中。于-78℃攪拌1.5小時(shí)后，一次性加入960.0mg(2.40mmol)的2[N，N-雙(三氟甲基磺?；?氨基]-5-氯吡啶。30分鐘后，將該溶液溫?zé)岬?℃并攪拌3小時(shí)。通過加入飽和氯化銨水溶液抑制該反應(yīng)，用乙酸乙酯提取。用5％氫氧化鈉水溶液洗滌合并的提取物，干燥(硫酸鈉)，減壓除去溶劑。經(jīng)柱層析(7％乙酸乙酯/己烷)分離無色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.04(1H，d，J＝8.4Hz)，7.57(2H，d，J＝8.4Hz)，7.52(1H，s)，7.49(1H，d，J＝8.0Hz)，7.33(1H，d，J＝8.0Hz)，7.20(1H，d，J＝16.4Hz)，7.10(1H，d，J＝16.4Hz)，6.00(1H，t，J＝4.9Hz)，4.39(2H，q，J＝7.1Hz)，2.43(2H，d，J＝4.9Hz)，1.41(3H，t，J＝7.1Hz)，1.32(6H，s).(E)-4-[2-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸乙酯(化合物44)于-78℃，通過將130.7mg的叔丁基鋰(2.04mmol，1.20ml1.7M的戊烷溶液)加入374.5mg(2.20mmol)的4-溴甲苯在2.5mlTHF的溶液中制備4-甲苯鋰溶液。30分鐘后，加入313.4mg(2.30mmol)氯化鋅在2.0mlTHF中的溶液。將所形成的溶液溫?zé)岬绞覝?，攪?.25小時(shí)，然后經(jīng)套管加到285.0mg(0.590mmol)的(E)-4-[2-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸乙酯(化合物P)和29.0mg(0.025mmol)的四(三苯基磷)鈀(O)在2.0mlTHF的溶液中。于室溫下，攪拌所形成的溶液1小時(shí)，然后于55℃攪拌2小時(shí)。冷卻到室溫后，通過加入飽和氯化銨水溶液抑制該反應(yīng)。用乙酸乙酯提取該混合物，并用5％氫氧化鈉水溶液、飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的提取物，在減壓濃縮以前經(jīng)硫酸鈉干燥。經(jīng)柱層析(10％乙酸乙酯/己烷)分離無色固體狀目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.96(2H，d，J＝8.1Hz)，7.47(2H，d，J＝8.1Hz)，7.43-7.16(7H，m)，7.07(1H，d，J＝16.3Hz)，6.93(1H，d，J＝16.3Hz)，5.97(1H，t，J＝4.7Hz)，4.39(2H，q，J＝7.0Hz)，2.41(3H，s)，2.33(1H，d，J＝4.7Hz)，1.38(3H，t，J＝7.0Hz)，1.33(6H，s).(E)-4-[2-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸(化合物45)將30.0mg的氫氧化鋰(0.909mmol，1.0ml1.1M溶液)和1.0ml甲醇加入65.0mg(0.190mmol)的(E)-4-[2-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙烯基]-苯甲酸乙酯(化合物44)在4.0mlTHF的溶液中。將該溶液于55℃下加熱3小時(shí)，冷卻到室溫，并減壓濃縮。將其殘留物溶于水中并用己烷提取。用10％鹽酸酸化其水層到pH1，并用乙醚提取。用飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，用乙酸乙酯稀釋，產(chǎn)生澄清的溶液，并經(jīng)硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑產(chǎn)生無色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-DMSO)δ7.86(2H，d，J＝8.4Hz)，7.66(2H，d，J＝8.4Hz)，7.58(1H，dd，J＝1.7，8.1Hz)，7.41(1H，d，J＝8.1Hz)，7.28(1H，d，J＝16.5Hz)，7.23(4H，s)，7.08(1H，d，J＝1.7Hz)，7.07(1H，d，J＝16.5Hz)，5.97(1H，t，J＝4.6Hz)，2.35(3H，s)，2.31(1H，d，J＝4.6Hz)，1.29(6H，s).4-[2-(1，1-二甲基-3-(4-甲基苯基)-5-茚基)乙炔基]-苯甲酸乙酯(化合物47)將32.0mg(0.187mmol)的4-溴甲苯在1.0mlTHF中的溶液冷卻到-78℃并緩慢地加入24.0mg叔丁基鋰(0.375mmol，0.22ml在戊烷中的1.7M溶液)。將該黃色溶液攪拌30分鐘，同時(shí)加入29.8mg(0.219mmol)的氯化鋅的1mlTHF溶液。將所形成的溶液溫?zé)岬绞覝兀?0分鐘后加到含有在1mlTHF中的29.0mg(0.062mmol)4-[2-(1，1-二甲基-3-(三氟甲基磺?；?氧基-5-茚基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物FF)和2.9mg(0.003mmol)的四(三苯基磷)鈀(O)的第二個(gè)燒瓶中。將所形成的溶液在50℃下加熱1小時(shí)，然后于室溫下攪拌4小時(shí)。通過加入飽和氫化銨水溶液抑制該反應(yīng)，然后用乙醚提取。用水、飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，在減壓濃縮以前經(jīng)硫酸鎂干燥。經(jīng)柱層析(10％乙醚/己烷)分離無色油狀目的化合物1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.03(2H，d，J＝8.5Hz)，7.66(1H，s)，7.58(2H，d，J＝8.5Hz)，7.50(2H，d，J＝8.0Hz)，7.46(1H，d，J＝7.9Hz)，7.38(1H，d，J＝7.7Hz)，7.28(2H，d，J＝9Hz)，6.43(1H，s)，4.40(2H，q，J＝7.2Hz)，2.43(3H，s)，141(3H，t；+6H，s).4-[2-(1，1-二甲基-3-(4-甲基苯基)-5-茚基)乙炔基]-苯甲酸(化合物48)將5.2mg(0.12mmol)LiOH.H2O加入10.0mg(0.025mmol)的4-[2-(1，1-二甲基-3-(4-甲基苯基)-5-茚基)乙炔基]-苯甲酸乙酯(化合物47)在0.5mlTHF/H2O(3∶1v/v)的溶液中。在室溫下攪拌48小時(shí)后，用己烷提取該溶液并用飽和氯化銨水溶液酸化其水層。加入固體氯化鈉并用乙酸乙酯提取所形成的混合物。干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)層并減壓濃縮產(chǎn)生無色固體狀的目的化合物1HNMR(300MHz，d6-DMSO)δ7.95(2H，d，J＝8.3Hz)，7.65(2H，d，J＝8.3Hz)，7.57(2H，m)，7.49(3H，m)，7.30(2H，d，J＝7.9Hz)，6.61(1H，s)，2.36(3H，s)，1.36(6H，s).3-(4-溴代苯硫基氧基)丙酸將6.79g(35.7mmol)4-溴代苯硫酚加入1.44g(35.7mmol)氫氧化鈉在20.0ml脫氣水(通入氬氣)的溶液中。將所形成的混合物于室溫下攪拌30分鐘。將2.26g(16.3mmol)的碳酸鉀和15ml脫氣的水加入第二個(gè)燒瓶中。將5.00g(32.7mmol)的3-溴代丙酸(分批)加入該溶液中。將所形成的羧酸鉀溶液加入所述硫醇鈉溶液中，于室溫下攪拌所形成的混合物48小時(shí)。將該混合物過濾，并用苯提取其濾液，棄去合并的有機(jī)層。用10％鹽酸酸化含水層并用乙酸乙酯提取。用飽和氯化鈉水溶液洗滌該合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂干燥，減壓濃縮。經(jīng)乙醚-己烷重結(jié)晶所形成的固體產(chǎn)生灰白色結(jié)晶狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.43(2H，d，J＝8.4Hz)，7.25(2H，d，J＝8.4Hz)，3.15(2H，t，J＝7.3Hz)，2.68(2H，t，J＝7.3Hz).2，3-二氫-6-溴-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮將3.63g(13.9mmol)的3-(4-溴代苯硫氧基)丙酸在60ml甲磺酸中的溶液于75℃下加熱1.5小時(shí)。冷卻到室溫后，用水稀釋該溶液并用乙酸乙酯提取。用2N氫氧化鈉水溶液、水和飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，然后經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑后提供黃色固體，從中經(jīng)柱層析(3％乙酸乙酯-己烷)分離淡黃色固體狀的產(chǎn)物1HNMR(CDCl3)δ8.22(1H，d，J＝2.1Hz)，7.481H，dd，J＝2.1，8.3Hz)，7.17(1H，d，J＝8.5Hz)，3.24(2H，t，J＝6.4Hz)，2.98(2H，t，J＝6.7Hz).2，3-二氫-6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮將1.00g(4.11mmol)的2，3-二氫-6-溴-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮和78.3mg(0.41mmol)的CuI在15.0mlTHF和6.0mlEt2NH中的溶液通入氬氣5分鐘。將2.0ml(1.39g，14.2mmol)的(三甲基甲硅烷基)乙炔，然后288.5mg(0.41mmol)的氯化雙(三苯基磷)鈀(II)加入該溶液中。于室溫下，攪拌所形成的黑暗色溶液3天，然后經(jīng)硅藻土墊過濾，用乙酸乙酯洗滌。在經(jīng)硫酸鎂干燥以前用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌該濾液。經(jīng)柱層析(4％乙酸乙酯-己烷)分離橙色油狀物的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.13(1H，d，J＝1.9Hz)，7.36(1H，dd，J＝2.1，8.2Hz)，7.14(1H，d，J＝8.2Hz)，3.19(2H，d，J＝6.3Hz)，2.91(2H，d，J＝6.3Hz)，0.21(9H，s).2，3-二氫-6-乙炔基-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮于室溫下，攪拌含有600.0mg(2.25mmoL)的2，3-二氫-6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮和100.0mg(0.72mmol)碳酸鉀在15ml甲醇中的溶液20小時(shí)。用水稀釋該溶液并用乙醚提取。在經(jīng)硫酸鎂干燥以前用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層。減壓除去溶劑提供橙色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCL3)δ8.17(1H，d，J＝1.8Hz)，7.40(1H，dd，J＝1.8，8.2Hz)，7.19(1H，d，J＝8.2Hz)，3.22(2H，t，J＝6.3Hz)，3.08(1H，s)2.94(2H，t，J＝6.3Hz).4-[2-(6-(2，3-二氫-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮基))乙炔基]苯甲酸乙酯將氬氣通入405.0mg(2.15mmol)2，3-二氫-6-乙炔基-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮和594.0mg(2.15mmol)的4-碘代苯甲酸乙酯在15ml三乙胺和3mlTHF中的溶液達(dá)15分鐘。將503.0mg(0.72mmol)的氯化雙(三苯基磷)鈀(II)和137.0mg(0.72mmol)的CuI加入該溶液中。于室溫下攪拌該溶液20小時(shí)，然后經(jīng)硅藻土墊過濾，用乙酸乙酯洗滌。減壓除去溶劑提供棕色固體。柱層析純化(3％乙酸乙酯∶己烷)提供橙色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-丙酮)δ8.15(1H，d，J＝2.0Hz)，8.02(2H，d，J＝8.5Hz)，7.69(2H，d，J＝8.5Hz)，7.61(1H，dd，J＝2.1，8.3Hz)，7.40(1H，d，J＝8.2Hz)，4.35(2H，q，J＝7.1Hz)，3.40(2H，t，J＝6.3Hz)，2.96(2H，t，J＝6.3Hz)，1.37(3H，t，J＝7.1Hz).4-[2-(6-(4-(三氟甲基磺?；?氧基-(2H)-1-苯并噻喃基))乙炔基]苯甲酸乙酯將370.0mg(1.10mmol)的4-[2-(6-(2，3-二氫-(4H)-1-苯并噻喃-4-酮基))乙炔基]苯甲酸乙酯在4.0mlTHF中的溶液加入冷卻到-78℃的221.9mg(1.21mmol)的雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉在3.0mlTHF中的溶液中。30分鐘后，緩慢加入2-[N，N-雙(三氟甲基磺?；?氨基]-5-氯吡啶在4.0mlTHF的溶液中。將該反應(yīng)物緩慢地溫?zé)岬绞覝兀?小時(shí)后通過加入飽和氯化銨水溶液抑制反應(yīng)。用乙酸乙酯提取該混合物，并在用硫酸鎂干燥以前，用5％氫氧化鈉水溶液、水和飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層。減壓除去溶劑，然后經(jīng)柱層析(4％乙酸乙酯-己烷)提供淡黃色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-丙酮)δ8.12(2H，d，J＝8.5Hz)，7.66(2H，d，J＝8.5Hz)，7.56(1H，d，J＝1.7Hz)，7.49(1H，dd，J＝1.7，8,1Hz)，7.40(1H，d，J＝8.1Hz)，6.33(1H，t，J＝5.7Hz)，4.35(2H，q，J＝7.1Hz)，3.82(2H，d，J＝5.7Hz)，1.37(3H，t，J＝7.1Hz).4-[2-(6-(4-(4-甲基苯基)-(2H)-1-苯并噻喃基))乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物49)于-78℃下，將88.4mg(1.38mmol，0.81ml的1.7M戊烷溶液)的叔丁基鋰加入120.8mg(0.70mmol)的4-溴甲苯在2.0mlTHF的溶液中。30分鐘后，加入131.6mg(0.97mmol)的氯化鋅在2.0mlTHF中的溶液，使形成的淡黃色溶液溫?zé)岬绞覝?。攪?0分鐘，然后將該溶液加入含有129.2mg(0.28mmol)的4-[2-(6-(4-(三氟甲基磺?；?氧基-(2H)-1-苯并噻喃基))乙炔基]苯甲酸乙酯、14.0mg(0.012mmol)的四(三苯基磷)鈀(O)和2.0mlTHF的第二個(gè)燒瓶中。將所形成的溶液于50℃下加熱5小時(shí)，冷卻到室溫，通過加入飽和的氯化銨溶液抑制該反應(yīng)。用乙酸乙酯提取該混合物，用水和飽和的氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，然后干燥(硫酸鎂)并濃縮成為橙色油狀物。經(jīng)柱層析(3-5％乙酸乙酯-己烷)分離無色固體狀的目的化合物1HNMR(d6丙酮)δ7.98(2H，d，J＝8.3Hz)，7.58(2H，d，J＝8.2Hz)，7.44-7.38(2H，m)，7.26-7.15(5H，m)，6.14(1H，t，J＝5.8Hz)，4.34(2H，q，J＝7.1Hz)，3.53(2H，d，J＝5.8Hz)，2.37(2H，s)，1.35(3H，t，J＝7.1Hz).4-[2-(6-(4-(4-甲基苯基)-(2H)-1-苯并噻喃基))乙炔基]苯甲酸(化合物50)將160.0mg(4.00mmol，2.0ml2M的水溶液)加入29.0mg(0,07mmol)的4-[2-(6-(4-(4-甲基苯基)-(2H)-1-苯并噻喃基))乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物49)在2.0mlTHF和2.0ml乙醇的溶液中。將所形成的溶液在35℃下攪拌2小時(shí)，然后冷卻到室溫并再攪拌2小時(shí)。通過加入10％鹽酸水溶液抑制該反應(yīng)并用乙酸乙酯提取。用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑，提供固體，用乙腈洗滌，高真空干燥產(chǎn)生淡黃色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-DMSO)δ7.90(2H，d，J＝8.4Hz)，7.59(2H，d，J＝8.4Hz)，7.40(4H，m)，7.25-7.13(4H，m)，7.02(1H，d，J＝1.7Hz)，6.11(1H，t，J＝5.7Hz)，3.54(2H，d，J＝5.7Hz)，2.34(3H，s).3，4-二氫-4，4-二甲基-7-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物R)；3，4-二氫-4，4-二甲基-6-乙?；?1(2H)-萘酮(化合物S)用20分鐘將在二氯甲烷(20ml)中的乙酰氯(15g，192mmol)和1，2，3，4-四氫-1，1-二甲基萘(24.4g，152mmol)加入三氯化鋁(26.3g，199.0mmol)在二氨甲烷(55ml)中的冷卻(0℃)混合物中。將該反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝夭嚢?小時(shí)。將冰(200g)加入所述反應(yīng)燒瓶中，用醚(400ml)稀釋該混合物。使其分層，用硫酸鎂干燥以前，用10％鹽酸(50ml)、水(50ml)、10％碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液(50ml)洗滌有機(jī)相。蒸餾除去溶劑提供溶于苯(50ml)中的黃色油狀物。在氬氣下，用20分鐘分小批量將三氧化鉻(50g，503mmol)加入乙酸(240ml)和乙酸酐(120ml)的冷(0℃)溶液中。于0℃下攪拌該混合物30分鐘，用苯(120ml)稀釋。在攪拌下，用20分鐘，通過加料漏斗加入以上制備的苯溶液。8小時(shí)后，通過于0℃下仔細(xì)加入異丙醇(50ml)，然后水(100ml)抑制該反應(yīng)。15分鐘后，用醚(1100ml)和水(200ml)稀釋該反應(yīng)混合物，然后用固體碳酸氫鈉(200g)中和。用水(100ml)和飽和氯化鈉水溶液(2×100ml)洗滌該醚層，經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑提供異構(gòu)體二酮的混合物，經(jīng)層析(5％乙酸乙酯/己烷)可將其分離。(化合物R)1HNMR(CDCl3)δ8.55(1H，d，J＝2.0Hz)，8.13(1H，dd，J＝2.0，8.3Hz)，7.53(1H，d，J＝8.3Hz)，2.77(2H，t，J＝6.6Hz)，2.62(3H，s)，2.05(2H，t，J＝6.6Hz)，1.41(6H，s).(化合物S)1HNMR(CDCl3)δ8.10(1H，d，J＝8.1Hz)，8.02(1H，d，J＝1.6Hz)，7.82(1H，dd，J＝1.6，8.1Hz)，2.77(2H，t，J＝7.1Hz)，2.64(3H，s)，2.05(2H，t，J＝7.1Hz)，1.44(6H，s).3，4-二氫-4，4-二甲基-7-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊環(huán)基))-1(2H)-萘酮(化合物T)使用Dean-Stark儀將3，4-二氫-4，4-二甲基-7-乙?；?1(2H)-萘酮(化合物R)(140.0mg，0.60mmol)、乙二醇(55.0mg，0.90mmol)、對(duì)-甲苯磺酸一水合物(4mg)和苯(25ml)混合物回流12小時(shí)。通過加入10％碳酸氫鈉水溶液抑制該反應(yīng)，用醚(2×75ml)提取。用水(5ml)和飽和氯化鈉水溶液(5ml)洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑提供油狀目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.13(1H，d，J＝2.0Hz)，7.64(1H，dd，J＝2.0，8.2Hz)，7.40(1H，d，J＝8.2Hz)，3.97-4.10(2H，m)，3.70-3.83(2H，m)，2.73(2H，t，J＝6.5Hz)，2.01(2H，t，J＝6.5Hz)，1.64(3H，s)，1.39(6H，s)，1，2，3，4-四氫-1-羥基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊環(huán)基))萘(化合物U)將3，4-二氫-4，4-二甲基-7-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊環(huán)基))-1(2H)-萘酮(化合物T)(135.0mg，0.52mmol)在5mlTHF中的溶液加入195.4mg(1.00mmol)的對(duì)-甲苯甲酰溴化鎂(1.0ml，1M醚溶液)在2mlTHF的溶液中。使該溶液回流16小時(shí)，冷卻到室溫，并用醚(50ml)稀釋。用水(5ml)和飽和氯化銨水溶液(5ml)洗滌該溶液，經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑，柱層析(5％乙酸乙酯/己烷)提供固體狀目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.37(2H，d)，7.21(1H，s)，7.13(2H，d，J＝8.5Hz)，7.08(2H，d，J＝8.5Hz)，3.88-3.99(2H，m)，3.58-3.75(2H，m)，2.34(3H，s)，2.12-2.30(2H，m)，1.79-1.90(1H，m)，1.57(3H，s)，1.48-1.58(1H，m)，1.38(3H，s)，1.31(3H，s).3，4-二氫-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-乙?；?化合物V)將130.0mg(0.38mmol)的1，2，3，4-四氫-1-羥基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊環(huán)基))萘(化合物U)、對(duì)-甲苯磺酸一水合物(4mg)和苯(5ml)的混合物回流16小時(shí)。在冷卻到室溫后，用醚(100ml)稀釋該反應(yīng)混合物并用10％碳酸氫鈉水溶液、水和飽和氯化鈉溶液洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥其有機(jī)層，減壓除去溶劑產(chǎn)生固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.83(1H，dd，J＝1.8，8.0Hz)，7.66(1H，d，J＝1.8Hz)，7.45(1H，d，J＝8.0Hz)，7.25(2H，d，J＝8.5Hz)，7.22(2H，d，J＝8.5Hz)，6.03(1H，t，J＝6.3Hz)，2.47(3H，s)，2.41(3H，s)，2.37(2H，d，J＝6.3Hz)，1.36(6H，s).(E)-3-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2-丁烯腈(化合物W)將氰基甲基磷酸二乙酯(450.0mg，2.50mmol)加入氫化鈉(48.0mg，2.00mmol)在THF(6ml)的淤漿中。40分鐘后，加入95.0mg(0.33mmol)的3，4-二氫-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-乙?；?化合物V)在THF(4ml)的溶液中。將該混合物攪拌16小時(shí)，用醚(100ml)稀釋，在經(jīng)硫酸鎂干燥前用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌。減壓除去溶劑，柱層析(3％乙酸乙酯∶己烷)純化提供固體目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.39(1H，d，J＝1H)，7.32(1H，dd，J＝2.0，8.1Hz)，7.20-7.25(4H，brs)，7.15(1H，d，J＝2.0Hz)，6.03(1H，t，J＝6.0Hz)，5.44(1H，s)，2.42(3H，s)，2.36(2H，d，J＝6.0Hz)，2.35(3H，s)，1.35(6H，s).(E)-3-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2-丁烯醛(化合物X)將0.50ml(0.50mmol)的氫化二異丁基鋁(1M的二氯甲烷溶液)加入84.0mg(0.29mmol)的(E)-3-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2-丁烯腈(化合物W)在二氯甲烷(4ml)的冷的(-78℃)溶液中。攪拌1小時(shí)后，通過加入用醚(100ml)稀釋的2-丙醇(1ml)于-78℃抑制反應(yīng)。溫?zé)岬绞覝睾?，用水?0％鹽酸和飽和氯化鈉水溶液洗滌該溶液。經(jīng)硫酸鎂干燥其有機(jī)層，減壓除去溶劑產(chǎn)生油狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ10.12(1H，d，J＝7.9Hz)，7.43(2H，s)，7.19-7.28(5H，m)，6.27(1H，d，J＝7.9Hz)，6.03(1H，t，J＝4.8Hz)，2.47(3H，s)，2.42(3H，s)，2.37(2H，d，J＝4.8Hz)，1.37(6H，s).(E，E，E)-3-甲基-7-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2，4，6-辛三烯酸乙酯(化合物51)將在己烷中的26.0mg(0.41mmol，0.65ml)正丁基鋰(1.6M溶液)加入264.0mg(1.00mmol)的(E)-3-乙氧基羰基-2-甲基烯丙基磷酸二乙酯[根據(jù)J.Org.Chem.39821(1974)制備]在THF(2ml)的冷卻(-78℃)溶液中，然后立即加入在THF(3ml)中的82.0mg(0.26mmol)的(E)-3-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2-丁烯醛(化合物X)。1小時(shí)后，用醚(60ml)稀釋該反應(yīng)混合物，用水(5ml)、飽和氯化鈉水溶液(5ml)洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑后，經(jīng)柱層析純化(5％乙酸乙酯/己烷，然后經(jīng)HPLC使用1％乙酸乙酯/己烷)分離油狀的目的化合物1HNMR(丙酮-d6)δ7.36-7.43(2H，m)，7.18-7.27(4H，m)，7.17(1H，d，J＝1.7Hz)，7.08(1H，dd，J＝11.2，15.2Hz)，6.46(1H，d，J＝11.2Hz)，6.38(1H，d，J＝15.2Hz)，5.98(1H，t，J＝4.7Hz)，5.78(1H，s)，4.10(2H，q，J＝7.1Hz)，2.35(3H，s)，2.33(3H，s)，2.32(2H，d，J＝4.7Hz)，2.12(3H，s)，1.31(6H，s)，1.22(3H，t，J＝7.1Hz).(E，E，E)-3-甲基-7-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2，4，6-辛三烯酸(化合物52)將12.0mg(0.50mmol)的LiOH(0.5ml，1M溶液)加入在THF(1ml)和甲醇(1ml)中的85.0mg(0.20mmol)的(E，E，E)-3-甲基-7-(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)-2，4，6-辛三烯酸乙酯(化合物51)的溶液中。將該混合物攪拌6小時(shí)，用醚(60ml)稀釋，用10％鹽酸(1ml)酸化。在經(jīng)硫酸鎂干燥以前，用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌該溶液。減壓除去溶劑提供固體狀的目的化合物，使其經(jīng)丙酮重結(jié)晶純化1HNMR(丙酮-d6)δ7.35-7.45(2H，m)，7.19-7.28(4H，m)，7.17(1H，d，J＝1.8Hz)，7.09(1H，dd，J＝11.5，15.1Hz)，6.48(1H，d，J＝11.5Hz)，6.42(1H，d，J＝15.1Hz)，5.99(1H，t，J＝4.7Hz)，5.82(1H，s)，2.36(3H，s)，2.33(2H，d，J＝4.7Hz)，2.32(3H，s)，2.13(3H，s)，1.32(6H，s).3，4-二氫-4，4-二甲基-7-硝基-1(2H)-萘酮(化合物Y)將783.0mg(4.49mmol)3，4-二氫-4，4-二甲基-1(2H)-萘酮緩慢加入在-5℃(冰氯化鈉浴)中的1.7ml(3.0g，30.6mmol，18M)的硫酸中。緩慢加入426.7mg(6.88mmol，0.43ml，16M)的硝酸和1.31g(0.013mol，0.74ml，18M)硫酸的溶液。20分鐘后，加入冰，用乙酸乙酯提取所形成的混合物。減壓濃縮合并的提取物，產(chǎn)生殘留物，從中經(jīng)柱層析(10％乙酸乙酯∶己烷)分離淡黃色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.83(1H，d，J＝2.6Hz)，8.31(1H，dd，J＝2.8，8.9Hz)，7.62(1H，d，J＝8.7Hz)，2.81(2H，t，J＝6.5Hz)，2.08(2H，t，J＝6.5Hz)，1.45(6H，s).3，4-二氫-4，4-二甲基-7-氨基-1(2H)-萘酮(化合物Z)在1個(gè)大氣壓氫氣下，使用催化量的10％鈀炭，于室溫下攪拌230.0mg(1.05mmol)3，4-二氫-4，4-二甲基-7-硝基-1(2H)-萘酮(化合物Y)在5.0ml乙酸乙酯中的溶液達(dá)24小時(shí)。經(jīng)硅藻土墊過濾除去所述催化劑，減壓濃縮其濾液產(chǎn)生暗綠色油狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.30(1H，d，J＝2.7Hz)，7.22(1H，d，J＝8.4Hz)，6.88(1H，dd，J＝2.7，8.5Hz)，2.70(2H，t，J＝6.6Hz)，1.97(2H，t，J＝6.6HZ)，1.34(6H，s).4-[(5，6，7，8-四氫-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)偶氮]苯甲酸乙酯(化合物AA)將180.0mg(1.00mmol)的4-亞硝基苯甲酸乙酯加入198.7mg(1.05mmol)的3，4-二氫-4，4-二甲基-7-氨基-1(2H)-萘酮(化合物Z)在5.0ml冰乙酸的溶液中。于室溫下，將所形成的溶液攪拌過夜，然后減壓濃縮。經(jīng)柱層析(15％乙酸乙酯∶己烷)自其殘留油狀物中分離出紅色固體狀的產(chǎn)物1HNMR(CDCl3)δ8.57(1H，d，J＝2.0Hz)，8.19(2H，d，J＝8.4Hz)，8.07(1H，d，J＝8.0Hz)，7.94(2H，d，J＝8.4Hz)，7.58(1H，d，J＝8.6Hz)，4.41(2H，q，J＝7.1Hz)，2.79(2H，t，J＝6.6Hz)，2.07(2H，t，J＝7.02Hz)，1.44(6H，s)，1.42(3H，t，J＝7.1Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)偶氮]-苯甲酸乙酯(化合物BB)將在2mlTHF中的153.0mg(0.437mmol)的4-[(5，6，7，8-四氫-5，5-二甲基-8-氧代-2-萘基)偶氮]苯甲酸乙酯(化合物AA)于-78℃加入90.4mg雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉(0.48mmol，0.48ml的1.0MTHF溶液)在2.0mlTHF的溶液中。于-78℃攪拌所述暗紅色的溶液30分鐘，然后加入204.0mg(0.520mmol)的2-[N，N-雙(三氟甲基磺?；?氨基]-5-氯吡啶在2.0mlTHF中的溶液。使所述反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝兀?小時(shí)后，通過加入水抑制該反應(yīng)。減壓將其有機(jī)層濃縮為紅色油狀物，經(jīng)柱層析(25％乙酸乙酯∶己烷)分離出紅色油狀的產(chǎn)物1HNMR(CDCl3)δ8.21(2H，d，J＝8.6Hz)，7.96(2H，d，J＝8.6Hz)，7.94(2H，m)，7.49(1H，d，J＝8.2Hz)，6.08(1H，t，J＝2.5Hz)，4.42(2H，q，J＝7.1Hz)，2.49(2H，d，J＝4.8Hz)，1.44(3H，t，J＝7.1Hz)，1.38(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)偶氮]苯甲酸乙酯(化合物46a)通過加入62.9mg(0.58ml，0.98mmol)的叔丁基鋰(1.7M的戊烷溶液)到84.0mg(0.491mmol)的4-溴甲苯在1.0mlTHF的冷溶液(-78℃)中制備4-甲苯鋰溶液。攪拌30分鐘后，加入107.0mg(0.785mmol)的氯化鋅在2.0mlTHF中的溶液。將所形成的溶液溫?zé)岬绞覝兀瑪嚢?0分鐘，通過套管加到94.7mg(0.196mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺酰基)氧基-2-萘基)偶氮]-苯甲酸乙酯(化合物BB)和25mg(0.02mmol)的四(三苯基磷)鈀(O)在2.0mlTHF的溶液中。于50℃下，將所形成的溶液加熱1.5小時(shí)，冷卻到室溫，用飽和氯化銨水溶液稀釋。用乙酸乙酯(40ml)提取該混合物，并用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)層。將該有機(jī)相用硫酸鈉干燥，真空濃縮，經(jīng)柱層析(25％乙酸乙酯∶己烷)分離紅色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.21(2H，d，J＝8.6Hz)7.96(2H，d，J＝8.6Hz)，7.94(2H，m)，7.49(1H，d，J＝8.2Hz)，6.08(1H，t，J＝2.5Hz)，4.42(2H，q，J＝7.1Hz)，2.49(2H，d，J＝4.8Hz)，1.44(3H，t，J＝7.1Hz)，1.38(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)偶氮]苯甲酸(化合物46b)將80.0mg(2.00mmol)氫氧化鈉(2.0ml，1M水溶液)加入16.5mg(0.042mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)偶氮]苯甲酸乙酯(化合物46a)在THF(2ml)和乙醇(1ml)的溶液中。于室溫下，將所述混合物攪拌12小時(shí)，用10％鹽酸酸化并用乙酸乙酯提取。用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，然后經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑后，經(jīng)乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶其殘留物，提供紅色固體狀的目的化合物1HNMR(丙酮-d6)δ8.19(2H，d，J＝8.4Hz)，7.92(2H，d，J＝8.5hz)，7.88(2H，dd，J＝2.1，6.1Hz)，7.66(1H，s)，7.64(2H，d，J＝2.3Hz)，7.28(4H，d，J＝3.0Hz)，6.09(1H，t，J＝2.5Hz)，2.42(2H，d，J＝4.8Hz)，2.39(3H，s)，1.40(6H，s).6-(2-三甲基甲硅烷基)乙炔基-2，3-二氫-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮(化合物CC)將259.6mg(1.363mmol)的碘化亞酮(I)、956.9mg(1.363mmol)的氯化雙(三苯基磷)鈀(II)和3.14g(34.08mmol)的(三甲基甲硅烷基)乙炔加入815.0mg(3.41mmol)的6-溴-2，3-二氫-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮(見Smithetal.Org.Prep.Proced.Int.197810123-131)在100ml脫氣三乙胺(通入氬氣20分鐘)的溶液中。于70℃下加熱該混合物42小時(shí)，冷卻到室溫，經(jīng)硅膠濾墊過濾，并用醚洗滌。在經(jīng)硫酸鎂干燥以前，用水、1M鹽酸、水，最終用飽和氯化鈉水溶液洗滌該濾液。減壓濃縮該溶液，然后經(jīng)柱層析(硅膠，10％乙醚-己烷)純化提供棕色油狀的目的化合物1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.79(1H，d，J＝1.4Hz)，7.69(1H，dd，J＝1.6，8.3Hz)，7.42(1H，d，J＝8.5Hz)，2.60(2H，s)，1.41(6H，s)，0.26(9H，s).6-乙炔基-2，3-二氫-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮(化合物DD)將197.3mg(1.43mmol)的碳酸鉀一次性加入875.0mg(3.41mmol)的6-(2-三甲基甲硅烷基)乙炔基-2，3-二氫-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮(化合物CC)在28ml甲醇的溶液中。于室溫下攪拌6小時(shí)后，使所述混合物通過硅藻土濾墊并減壓濃縮其濾液。將其殘留油狀物置于硅膠柱上并用5％乙酸乙酯-己烷洗脫產(chǎn)生無色油狀的目的產(chǎn)物1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.82(1H，s)，7.72(1H，dd，J＝1.6，7.8Hz)，7.47(1H，d，J＝8.4Hz)，3.11(1H，s)，2.61(2H，s)，1.43(6H，s).4-[2-(5，6-二氫-5，5-二甲基-7-氧代-2-茚基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物EE)在280.0mg(1.520mmol)的6-乙炔基-2，3-二氫-3，3-二甲基-1H-茚-1-酮(化合物DD)和419.6mg(1.520mmol)的4-碘代苯甲酸乙酯在5ml三乙胺的溶液中通入氬氣40分鐘。將271.0mg(1.033mmol)的三苯基磷、53.5mg(0.281mmol)的碘化亞酮(I)和53.5mg(0.076mmol)的氯化雙(三苯基磷)鈀(II)加入該溶液中。將所形成的混合物在回流狀態(tài)下加熱2.5小時(shí)，冷卻到室溫，用乙醚稀釋。經(jīng)硅藻土濾墊過濾后，用水、1M鹽酸和飽和氯化鈉水溶液洗滌濾液，然后經(jīng)硫酸鎂干燥，減壓濃縮。經(jīng)柱層析(15％乙酸乙酯-己烷)分離淡黃色固體狀的目的化合物1HNMR(300MHz，d6-丙酮)δ8.05(2H，d，J＝8.6Hz)，7.87(1H，dd，J＝1.4，8.1Hz)，7.75(2H，m)，7.70(2H，d，J＝8.5Hz)，4.36(2H，q，J＝7.1Hz)，2.60(2H，s)，1.45(6H，s)，1.37(3H，t，J＝7.1Hz).4-[2-(1，1-二甲基-3-(三氟甲基-磺?；?氧基-5-茚基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物FF)將88.0mg(0.48mmol)的雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉在0.5mlTHF中的溶液冷卻到-78℃，并加入145.0mg(0.436mmol)的4-[2-(5，6-二氫-5，5-二甲基-7-氧代-2-茚基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物EE)在1.0mlTHF中的溶液。30分鐘后，加入181.7mg(0.480mmol)的2-[N，N-雙(三氟甲磺?；?氨基]-5-氯吡啶在1.0mlTHF中的溶液。使所述反應(yīng)物緩慢溫?zé)岬绞覝?，?小時(shí)后，通過加入飽和的氯化銨水溶液抑制反應(yīng)。用乙酸乙酯提取該混合物，用5％氫氧化鈉水溶液、水和飽和的氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，然后干燥(硫酸鎂)并減壓濃縮。經(jīng)柱層析(10％乙醚-己烷)分離無色固體狀的產(chǎn)物1HNMR(300MHz，d6-丙酮)δ8.05(2H，d，J＝8.3Hz)，7.69(2H，d，J＝8.4Hz)，7.63(2H，s)，7.55(1H，s)，4.36(2H，q，J＝7.1Hz)，1.44(6H，s)，1.37(3H，t，J＝7.1Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物60)于室溫下攪拌142.6mg(0.339mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)和35.6mg(0.848mmol)的LiOH-H2O在12mlTHF/水(4∶1，v/v)中的溶液過夜。用己烷提取該反應(yīng)混合物，并用5％的氫氧化鈉水溶液提取己烷部分。合并水層并用1M鹽酸酸化，然后用乙酸乙酯和乙醚提取。經(jīng)硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，真空濃縮產(chǎn)生無色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-DMSO)δ7.91(2H，d，J＝8.4Hz)，7.60(2H，d，J＝8.4Hz)，7.47(2H，s)，7.23(4H，q，J＝8.1Hz)，7.01(1H，s)，6.01(1H，t，J＝4.6Hz)，2.35(3H，s)，2.33(2H，d，J＝4.8Hz)，1.30(6H，s).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-苯基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物60a)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物30a)相同的通用方法，使用5.9mg(0.14mmol)在水中的LiOH將27.0mg(0.07mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-苯基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1a)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)PMR(d6-DMSO)δ1.31(6H，s)，2.35(2H，d，J＝4.5Hz)，6.05(1H，t，J＝J＝J＝4.5Hz)，7.00(1H，s)，7.33(2H，d，J＝6.2Hz)，7.44(4H，m)，7.59(2H，d，J＝8.1Hz)，7.90(2H，d，J＝8.1Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-(1，1-二甲基乙基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物61)于室溫下攪拌80.0mg(0.173mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-(1，1-二甲基乙基)苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物6)和18.1mg(0.432mmol)的LiOH-H2O在6mlTHF/水(3∶1，v/v)中的溶液過夜。用己烷提取該反應(yīng)混合物，并用1M鹽酸酸化剩余的水層，然后用乙酸乙酯提取。經(jīng)硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，真空濃縮產(chǎn)生無色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-DMSO)δ7.82(2H，d，J＝8.2Hz)，7.44(6H，m)，7.25(2H，d，J＝8.3Hz)，7.02(1H，s)，6.01(1H，t，J＝4.6Hz)，2.32(2H，d，J＝4.7Hz)，1.32(9H，s)，1.29(6H，s).2-氟-4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物62)將54.4mg(0.119mmol)的2-氟-4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物40)和57.7mg(0.143mmol)的[2，4-雙(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫代-2，4-diphosphetane-2，4-二硫醚](Lawesson’s試劑)在12.0ml苯中的溶液回流過夜。在冷卻到室溫后，將所述混合物過濾并減壓濃縮其濾液。經(jīng)柱層析(10-25％乙酸乙酯/己烷)分離黃色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ9.08(1H，s)，7.92(1H，brs)，7.90(1H，t，J＝8.2Hz)，7.66(1H，dd，J＝2.0，6.0Hz)，7.38(3H，m)，7.18(4H，m)，6.01(1H，t，J＝4.7Hz)，4.35(2H，q，J＝7.1Hz)，2.36(3H，s)，2.33(2H，d，J＝4.7Hz)，1.38(3H，t，J＝7.1Hz)，1.33(6H，s)2-氟-4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基]苯甲酸(化合物63)將55mg氫氧化鈉(1.4mmol)和1.0ml水加入46.5mg(0.098mmol)的2-氟-4-[[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)硫代羰基]氨基]苯甲酸乙酯(化合物62)在1.0ml乙醇和1.0mlTHF的溶液中。于室溫下攪拌過夜后，加入乙酸乙酯，通過加入10％的鹽酸抑制該反應(yīng)。用乙酸乙酯提取，然后用水、飽和的氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑提供固體，使其經(jīng)乙腈結(jié)晶提供淡黃色固體狀的目的化合物1HNMR(d6-丙酮)δ11.05(1H，s)，8.02(1H，m)，7.99(1H，t，J＝8.3Hz)，7.75(1H，m)，7.69(1H，dd，J＝2.0，6.1Hz)，7.52(1H，s)，7.46(1H，d，J＝8.1Hz)，7.21(4H，m)，6.04(1H，t，J＝4.8Hz)，2.37(2H，d，J＝4.8Hz)，2.33(3H，s)，1.36(6H，s).5’，6’-二氫-5’，5’-二甲基-8’-(4-甲基苯基)-[2，2’-聯(lián)萘]-6-甲酸乙酯(化合物64)于室溫，在氬氣下將鎂屑(0.044g，1.82mmol)加入3，4-二氫-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-7-溴代萘(化合物D)(0.45g，1.40mmol)和THF(2.1ml)的溶液中。加入兩滴二溴乙烷，將該溶液(緩慢變渾濁和黃色)于回流狀態(tài)加熱1.5小時(shí)。在第二個(gè)燒瓶中，加入氯化鋅(0.210g，1.54mmol)，它在高真空下融化，冷卻到室溫并溶于THF(3ml)中。將所述Grignard試劑加入第二個(gè)燒瓶中，30分鐘后，在室溫下，加入0.293g(1.05mmol)的6-溴-2-萘甲酸乙酯(化合物N)和THF(2ml)的溶液。在第三個(gè)燒瓶中，制備Ni(PPh3)4和THF的溶液如下將1M的氫化二異丁基鋁溶液和己烷(2.5ml，2.5mmol)加入NiCl2(PPh3)2(0.82g，1.25mmol)和PPh3(0.66g，2.5mmol)在THF(3.5ml)的溶液中，用THF稀釋所形成的溶液到總體積為15ml并于室溫下攪拌15分鐘。以15分鐘的間隔將三份0.60ml等份的Ni(PPh3)4溶液加入第二個(gè)燒瓶中。于室溫下攪拌所形成的懸浮液2小時(shí)。通過加入5ml1N的鹽酸水溶液抑制反應(yīng)，并在用乙酸乙酯提取其產(chǎn)物以前攪拌1小時(shí)。合并其有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，過濾并真空除去溶劑。其殘留物經(jīng)己烷結(jié)晶產(chǎn)生130mg純物質(zhì)。減壓濃縮其母液，并經(jīng)硅膠層析(95∶5己烷∶乙酸乙酯)純化其殘留物產(chǎn)生另外170mg無色固體狀的目的化合物(總收率＝300mg，64％)1HNMR(CDCl3)δ8.57(s，1H)，8.05(dd，1H，J＝1.7，8.0Hz)，7.84-7.95(重迭d′s，3H)，7.66(dd，1H，J＝1.7，8.5Hz)，7.58(dd，1H，J＝2.0，8.0Hz)，7.48(d，1H，J＝8.0Hz)，7.43(d，1H，J＝2.0Hz)，7.32(d，2H，J＝8.0Hz)，7.21(d，2H，J＝8.0Hz)，6.04(t，1H，J＝4.8Hz)，4.44(q，2H，J＝7.1Hz)，2.40(s，3H)，2.39(d，2H，J＝4.8Hz)，1.45(t，3H，J＝7.1Hz)，1.39(s，6H).5’，6’-二氫-5’，5’-二甲基-8’-(4-甲基苯基)-[2，2’-聯(lián)萘]-6-甲酸(化合物65)將5’，6’-二氫-5’，5’-二甲基-8’-(4-甲基苯基)-[2，2’-聯(lián)萘]-6-甲酸乙酯(化合物64)(0.19g，0.43mmol)、乙醇(8ml)和1N氫氧化鈉水溶液(2ml)的溶液于60℃加熱3小時(shí)。將該溶液冷卻到0℃并用1N的鹽酸水溶液酸化。用乙酸乙酯提取其產(chǎn)物，合并有機(jī)層，用水、鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，過濾并真空除去溶劑。將其殘留物于0℃經(jīng)THF/乙酸乙酯重結(jié)晶產(chǎn)生35mg的純物質(zhì)。減壓濃縮其母液，使其殘留物經(jīng)硅膠層析純化(100％乙酸乙酯)產(chǎn)生另外125mg無色固體狀的目的化合物(總收率＝160mg，90％)1HNMR(DMSO-d6)δ8.57(s，1H)，8.11(d，1H，J＝8.7Hz)，7.96-7.82(重迭d′s，3H)，7.65(d，2H，J＝7.6Hz)，7.50(d，1H，J＝7.9Hz)，7.28(s，1H)，7.26(d，2H，J＝8.3Hz)，7.21(d，2H，J＝8.3Hz)，6.01(t，1H，J＝4.5Hz)，3.34(brs，1H)，2.31(s，3H)，2.31(d，2H，J＝4.5Hz)，1.31(s，6H).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-呋喃基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物66)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(4-甲基苯基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物1)相同的通用方法，使用142.4mg(1.045mmol)氯化鋅、24.1mg(0.02mmol)四(三苯基磷)鈀(0)和2-呋喃基鋰[通過加入53.4mg(0.52ml，0.78mmol)的正丁基鋰(在己烷中的1.5M溶液)到53.4mg(0.784mmol)的呋喃在1.0mlTHF中的冷溶液(-78℃)中制備]將250.0mg(0.52mmol)的4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(三氟甲基磺?；?氧基-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物G)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)PMR(CDCl3)δ1.32(6H，s)，1.41(3H，t，J＝7.1Hz)，2.35(2H，d，J＝5.0Hz)，4.39(2H，q，J＝7.1Hz)，6.41(1H，t，J＝5.0Hz)，6.50(2H，s)，7.36(1H，d，J＝8.0Hz)，7.45(1H，dd，J＝1.7，8.0Hz)，7.49(1H，s)，7.57(2H，d，J＝8.2Hz)，7.63(1H，d，J＝1.7Hz)，8.02(2H，d，J＝8.2Hz).4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-呋喃基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物67)使用與制備4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-噻唑基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸(化合物30a)相同的通用方法，使用16.0mg(0.38mmol)在水中的LiOH將4-[(5，6-二氫-5，5-二甲基-8-(2-呋喃基)-2-萘基)乙炔基]苯甲酸乙酯(化合物66)轉(zhuǎn)變成目的化合物(無色固體)PMR(d6-DMSO)δ1.26(6H，s)，2.33(2H，d，J＝4.9Hz)，6.41(1H，t，J＝4.9Hz)，6.60(2H，m)，7.45-7.53(3H，m)，7.64(2H，d，J＝8.3Hz)，7.75(1H，d，J＝1.6Hz)，7.93(2H，d，J＝8.3Hz).3，4-二氫-4，4-二甲基-7-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物100C)和3，4-二氫-4，4-二甲基-6-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物100D)用20分鐘，將在二氯甲烷(20ml)中的乙酰氯(15g，192mmol)和1，2，3，4-四氫-1，1-二甲基萘(24.4g，152mmol)加入三氯化鋁(26.3g，199.0mmol)在二氯甲烷(55ml)中的冷的(0℃)混合物中。將該反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝夭嚢?小時(shí)。將冰(200g)加入所述反應(yīng)燒瓶中，并用醚(400ml)稀釋該混合物.分離水層和有機(jī)層，用10％鹽酸(50ml)、水(50ml)、10％碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液(50ml)洗滌該有機(jī)相，然后干燥(硫酸鎂)。蒸餾除去溶劑提供溶于苯(50ml)中的黃色油狀物。在氫氣下，用20分鐘分小批量將三氧化鉻(50g，503mmol)加入乙酸(240ml)和乙酸酐(120ml)的冷溶液(0℃)中。于0℃下，攪拌該混合物30分鐘并用苯(120ml)稀釋。攪拌下，用20分鐘，通過加料漏斗加入以上制備的苯溶液。8小時(shí)后，通過于0℃小心加入異丙醇(50ml)然后加入水(100ml)抑制反應(yīng)。15分鐘后，用醚(1100ml)和水(200ml)稀釋該反應(yīng)混合物，然后用固體碳酸氫鈉(200g)中和。用水(100ml)，然后用飽和氯化鈉水溶液(2×100ml)洗滌其醚層并經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑，提供異構(gòu)體二酮的混合物，它們可以經(jīng)層析(5％乙酸乙酯/己烷)分離。(化合物100C)1HNMR(CDCl3)δ8.55(1H，d，J＝2.0Hz)，8.13(1H，dd，J＝2.0，8.3Hz)，7.53(1H，d，J＝8.3Hz)，2.77(2H，t，J＝6.6Hz)，2.62(3H，s)，2.05(2H，t，J＝6.6Hz)，1.41(6H，s).(化合物100D)1HNMR(CDCl3)δ8.10(1H，d，J＝8.1Hz)，8.02(1H，d，J＝1.6Hz)，7.82(1H，dd，J＝1.6，8.1Hz)，2.77(2H，t，J＝7.1Hz)，2.64(3H，s)，2.05(2H，t，J＝7.1Hz)，1.44(6H，s).3，4-二氫-4，4-二甲基-6-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊環(huán)基))-1(2H)-萘酮(化合物100E)將1.80g(8.34mmol)3，4-二氫-4，4-二甲基-7-乙酰基-1(2H)-萘酮(化合物100C)和3，4-二氫-4，4-二甲基-6-乙?；?1(2H)-萘酮(化合物100D)的1∶5混合物在50ml苯中的溶液與517.7mg(8.34mmol)的乙二醇和20.0mg(0.11mmol)的對(duì)-甲苯磺酸一水合物混合。將所形成的溶液在回流狀態(tài)下加熱18小時(shí)，冷卻到室溫，并減壓濃縮。通過柱層析(10％乙酸乙酯-己烷)分離無色油狀的目的化合物。1HNMR(CDCl3)δ8.01(1H，d，J＝8.2Hz)，7.51(1H，s)，7.43(1H，dd，J＝1.7，6.4Hz)，4.07(2H，m)，3.79(2H，m)，2.74(2H，t，J＝6.5Hz)，2.04(2H，t，J＝7.1Hz)，1.67(3H，s)，1.46(6H，s).1，2，3，4-四氫-1-羥基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-6-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊環(huán)基))萘(化合物100F)將3，4-二氫-4，4-二甲基-6-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊環(huán)基))-1(2H)-萘酮(化合物100E，200.0mg，0.769mmol)在THF(5ml)中的溶液加入496.2mg(2.54mmol)對(duì)-甲苯基溴化鎂在20mlTHF中的溶液(2.54ml，1M醚溶液)中。將該溶液回流16小時(shí)，冷卻到室溫，用水、飽和氯化銨水溶液洗滌，并經(jīng)硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑，經(jīng)柱層析純化(10％乙酸乙酯/己烷)提供無色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.49(1H，d，J＝1.7Hz)，7.19(2H，m)，7.10(2H，d，J＝7.9Hz)，7.04(1H，d，J＝8.2Hz)，4.05(2H，m)，3.80(2H，m)，2.34(3H，s)，2.21(1H，m)，2.10(1H，m)，1.88(1H，m)，1.65(3H，s)，1.54(1H，m)，1.39(3H，s)，1.33(3H，s).3，4-二氫-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-6-乙酰基萘(化合物100G)將1，2，3，4-四氫-1-羥基-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-6-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊環(huán)基))萘(化合物100F，160.0mg，0.52mmol)、對(duì)-甲苯磺酸一水合物(4mg)和30ml苯的溶液回流12小時(shí)。冷卻到室溫后，將該反應(yīng)混合物用醚(100ml)稀釋并用10％碳酸氫鈉水溶液、水和飽和氯化鈉水溶液洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥有機(jī)層，減壓除去溶劑產(chǎn)生目的化合物，將其經(jīng)柱層析(10％乙酸乙酯-己烷)分離產(chǎn)生黃色油狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.97(1H，d，J＝1.8Hz)，7.67(1H，dd，J＝1.7，6.4Hz)，7.22(4H，s)，7.13(1H，d，J＝8.1Hz)，6.10(1H，t，J＝4.5Hz)，2.59(3H，s)，2.40(3H，s)，2.38(2H，d，J＝4.7Hz)，1.38(6H，s).4-[3-氧代-3-(7，8-二氫-5-(4-甲基苯基)-8，8-二甲基-2-萘基)-1-丙烯基]-苯甲酸(化合物101)將53.1mg(0.354mmol)4-羧基苯甲醛和80mg(2.00mmol，2.0ml1M氫氧化鈉水溶液)加入78.7mg(0.272mmol)的3，4-二氫-1-(4-甲基苯基)-4，4-二甲基-6-乙酰基萘(化合物100G)在4.0ml甲醇的溶液中。將所形成的溶液于室溫下攪拌12小時(shí)，減壓濃縮，并將殘留的油狀物溶于乙酸乙酯中。用10％鹽酸處理該溶液，用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌其有機(jī)層，然后經(jīng)硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑產(chǎn)生無色固體狀的目的化合物，使其經(jīng)乙腈重結(jié)晶純化1HNMR(丙酮-d6)δ8.00(7H，m)，7.83(1H，d，J＝15.6Hz)，7.24(4H，s)，7.13(1H，d，J＝8.1Hz)，6.12(1H，t，J＝4.5Hz)，2.42(2H，d，J＝4.8Hz)，2.38(3H，s)，1.41(6H，s).3，4-二氫-1-苯基-4，4-二甲基-6-乙?；?化合物100H)將496.2mg的苯基溴化鎂(2.54mmol，2.54ml1M的乙醚溶液)加入508.0mg(1.95mmol)的3，4-二氫-4，4-二甲基-6-(2-(2-甲基-1，3-二氧戊環(huán)基))-1(2H)-萘酮(化合物100E)在10mlTHF的溶液中。將所形成的溶液在回流狀態(tài)下加熱8小時(shí)，加入水，并繼續(xù)加熱30分鐘。減壓除去THF并用乙酸乙酯提取其含水的殘留物。使合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，減壓濃縮，經(jīng)柱層析(10％乙酸乙酯-己烷)自該殘留物中分離無色油狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ7.97(1H，d，J＝1.8Hz)，7.67(1H，dd，J＝2.1，8.0Hz)，7.34(5H，m)，7.10(1H，d，J＝8.1Hz)，6.12(1H，d，J＝4.6Hz)，2.59(3H，s)，2.39(2H，d，J＝4.8Hz)，1.38(6H，s).4-[3-氧代-3-(7，8-二氫-5-苯基-8，8-二甲基-2-萘基)-1-丙烯基]-苯甲酸(化合物103)將120.0mg的氫氧化鈉(3.00mmol，3.0ml1M水溶液)加入115.0mg(0.42mmol)3，4-二氫-1-苯基-4，4-二甲基-6-乙?；?化合物100H)和65.0mg(0.43mmol)的4-甲?；?苯甲酸在5.0ml乙醇和1.0mlTHF的溶液中。于室溫下攪拌所形成的黃色溶液12小時(shí)。用6％鹽酸水溶液酸化該溶液并用乙酸乙酯提取。使合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，減壓濃縮，經(jīng)柱層析(50％乙酸乙酯-己烷)分離出淡黃色固體狀的目的化合物1HNMR(CDCl3)δ8.13(2H，d，J＝7.7Hz)，8.04(1H，s)，7.81(1H，d，J＝15.5Hz)，7.75(3H，m)，7.60(1H，d.J＝15.5Hz)，7.35(5H，m)，7.14(1H，d，J＝8.1Hz)，6.15(1H，t，J＝4.2Hz)，2.41(2H，d，J＝4.2Hz)，1.41(6H，s).增強(qiáng)核受體興奮劑的方法概述和介紹已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，顯示負(fù)性激素活性的作為子集的視黃醛衍生物拮抗劑可用于增強(qiáng)其它視黃醛衍生物和甾體受體超家族激素的生物活性。所述的其它視黃醛衍生物和甾體受體超家族激素可以是內(nèi)源性激素或藥物制劑。從而，例如當(dāng)與視黃醛衍生物負(fù)性激素一起使用時(shí)，在引起特異的生物作用方面，藥用視黃醛衍生物興奮劑的某些活性得到加強(qiáng)。這種聯(lián)合給藥的方法有利于最大限度地降低藥用視黃醛衍生物的不需要的副作用，因?yàn)榭梢允褂幂^低劑量的藥用視黃醛衍生物以改善療效。更具體地說，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)AGN193109(具有圖1所示結(jié)構(gòu)的合成視黃醛衍生物)顯示獨(dú)特的和未預(yù)料到的藥理活性。AGN193109顯示對(duì)于RAR亞型核受體的高親合力而不激活這些受體或刺激視黃醛衍生物應(yīng)答基因的轉(zhuǎn)錄。而AGN193109抑制由視黃醛衍生物興奮劑激活的RARs，從而作為視黃醛衍生物拮抗劑發(fā)揮作用。另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以使用視黃醛衍生物負(fù)性激素而不與視黃醛衍生物興奮劑或甾體激素共同給藥，以便控制某些疾病癥狀。更準(zhǔn)確地說，在此所公開的視黃醛衍生物負(fù)性激素可以下行調(diào)節(jié)對(duì)于未與配體結(jié)合的RARs的應(yīng)答基因的高水平基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄。例如，如果未控制的細(xì)胞增生起因于作為對(duì)于未與配體結(jié)合的RARs應(yīng)答的基因的活性，則通過給予使RARs滅活的視黃醛衍生物負(fù)性激素可以降低基因活性。結(jié)果，依賴于未與配體結(jié)合的RARs的活性的細(xì)胞增生可以被所述負(fù)性激素抑制。使用常規(guī)的拮抗劑不能達(dá)到抑制未與配體結(jié)合的RARs的作用。重要的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)AGN193109既可以抑制RAR的基礎(chǔ)活性，有時(shí)又可以增強(qiáng)其它視黃醛衍生物和甾體受體超家族激素興奮劑的活性。在本發(fā)明的上下文中，如果在所述負(fù)性激素的存在下，降低濃度的興奮劑引起與單獨(dú)使用所述興奮劑所能得到基本上相同的定量應(yīng)答，則認(rèn)為負(fù)性激素例如AGN193109增強(qiáng)激素興奮劑。所述定量應(yīng)答例如可以在體外報(bào)告基因測(cè)定法中測(cè)定。從而，如果與AGN193109一起使用，當(dāng)以特定劑量和濃度使用時(shí)，AGN193109可以增強(qiáng)引起所需應(yīng)答的治療性視黃醛衍生物，較低劑量或濃度的所述治療性視黃醛衍生物可以用于產(chǎn)生與單獨(dú)使用所述治療性的視黃醛衍生物時(shí)較高劑量或濃度的所述治療性視黃醛衍生物基本相同的效果?？梢酝ㄟ^共同給予AGN193109所增強(qiáng)的興奮劑包括RAR興奮劑、維生素D受體興奮劑、糖皮質(zhì)激素受體興奮劑和甲狀腺激素受體興奮劑。更具體地說，可以通過共同給藥所增強(qiáng)的特異性興奮劑包括ATRA、13-順式視黃酸、合成的RAR興奮劑AGN191183、1，25-二羥基維生素D3、地塞米松和甲狀腺激素(3，3’，5-三碘代甲狀腺氨酸)。在此也公開可以用于鑒定可以通過與AGN193109共同給藥所增強(qiáng)的其它激素的方法。從而，從某種意義上并未期望AGN193109作為簡(jiǎn)單的視黃醛衍生物拮抗劑，而是作為可以增強(qiáng)核受體家族不同成員活性的負(fù)性激素。我們也公開了可以解釋負(fù)性激素活性和AGN193109增強(qiáng)其它核受體配體活性能力的可能的機(jī)理。該機(jī)理結(jié)合了已知參與視黃醛衍生物依賴性信息傳遞通道的元件(elements)和另外結(jié)合了新的負(fù)性調(diào)節(jié)組分。本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員可以理解作為AGN193109結(jié)合的高親和力靶的RARs為調(diào)節(jié)各種視黃醛衍生物應(yīng)答基因的表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。已經(jīng)鑒定了作為RARs的順式-調(diào)控DNA的結(jié)合位點(diǎn)為以視黃醛衍生物依賴性方式被轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的鄰近基因。已經(jīng)詳細(xì)定義了稱為視黃酸應(yīng)答元件(RAREs)的結(jié)合所述DNA位點(diǎn)的RAR。重要的是所述RAREs與由一個(gè)RAR和一個(gè)RXR組成的異質(zhì)二聚體結(jié)合。所述異質(zhì)二聚體的RXR組分的功能為促進(jìn)RAR/RXR異質(zhì)二聚體和RARE之間高親合力的相互作用(Mangelsdorfetal.TheRetinoidReceptorsinTheRetinoidsBiology，ChemistrvandMedicine，2ndedition，eds.Spornetal.，RavenPress，Ltd.，NewYork1994)。如以下所詳細(xì)介紹的內(nèi)容，涉及AGN193109負(fù)性激素活性的發(fā)現(xiàn)與涉及假定的負(fù)性共激活因子蛋白(NCP)與RAR的相互作用的機(jī)理一致。根據(jù)該提出的機(jī)理，這種相互作用被AGN193109所穩(wěn)定化。我們的結(jié)果進(jìn)一步顯示AGN193109可以調(diào)節(jié)作為與除了為AGN193109所占據(jù)的RARs以外的核受體相互作用的NCP的細(xì)胞內(nèi)的有效性。其次，AGN193109可以增強(qiáng)包括與所述RARs分享有結(jié)合NCP能力的核受體的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)遞通道。在這一點(diǎn)上，AGN193109顯示調(diào)節(jié)不同的核受體轉(zhuǎn)遞通道的能力和調(diào)節(jié)對(duì)于常規(guī)視黃醛衍生物拮抗劑而言所不能期待的活性的能力。因此，AGN193109用作增強(qiáng)核受體配體活性的藥劑，包括內(nèi)源性激素和處方藥。該特異性的實(shí)例說明更加普遍的原理，即任何核受體負(fù)性激素將增強(qiáng)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合NCP的其它核受體的活性。盡管其它與在此所述類似或等同的物質(zhì)和方法可以用于本發(fā)明的實(shí)施和驗(yàn)證，現(xiàn)介紹優(yōu)選的方法和物質(zhì)?？梢杂糜谕瓿稍诖怂霾煌暮怂崽幚砗瓦^程的方法的一般參考可見MolecularCloningALaboratoryManual(Sambrooketal.eds.ColdSpringHarborLabPubl.1989)和CurrentProtocolsinMolecularBiology(Ausubeletal.eds.，GreenePublishingAssociatesandWiley-Interscience1987)。以下為導(dǎo)致本發(fā)明形成的實(shí)驗(yàn)和結(jié)果的介紹。實(shí)施例6介紹用于證明AGN193109具有高的親合力與三種RARs中的每一種結(jié)合而不激活視黃醛衍生物依賴性基因表達(dá)的方法。實(shí)施例6AGN193109具有高的親合力與RARs結(jié)合而不反式激活視黃醛衍生物依賴性基因表達(dá)使用基本根據(jù)Allegretto等人[J.Biol.Chem.26826625(1993)]所述方法采用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，將人類RAR-α、RAR-β和RAR-γ受體分別表達(dá)為重組蛋白。分別使用所述重組受體蛋白以利用Heyman等人[Cell68397(1992)]所述[3H]-ATRA置換測(cè)定法測(cè)定AGN193109結(jié)合的親合力。根據(jù)Cheng等人[BiochemicalPharmacology223099(1973)]所述方法測(cè)定離解常數(shù)(Kds)。也檢驗(yàn)AGN193109在用RAR表達(dá)型載體和視黃醛衍生物應(yīng)答報(bào)告基因構(gòu)成物短暫共轉(zhuǎn)染的CV-1細(xì)胞中反式激活RARs的能力。用ΔMTV-TREp-Luc報(bào)告質(zhì)粒將受體表達(dá)型載體pRShRAR-α[Giguereetal.Nature330624(1987)]、pRShRAR-β[Benbrooketal.Nature333669(1988)]和pRShRAR-γ[Ishikawaetal.Mol.Endocrinol.4837(1990)]分別共轉(zhuǎn)染。所述ΔMTV-TREp-Luc質(zhì)粒與Umesono等人[Nature336262(1988)]所述ΔMTV-TREp-CAT報(bào)告構(gòu)成物基本相同，除了所述氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶(CAT)報(bào)告基因被多核苷酸序列編碼的螢火蟲熒光素酶取代。使用MolecularCloningALaboratoryManual(Sambrooketal.eds.ColdSpringHarborLabPubl.1989)中所述磷酸鈣共沉淀方法完成綠猴CV-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程。以密度為4×104/孔，將CV-1細(xì)胞平面接種到12孔的多孔平面接種板上，并用含有0.7μg報(bào)告質(zhì)粒和0.1μg根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法的受體質(zhì)粒的磷酸鈣沉淀短暫轉(zhuǎn)染。18小時(shí)后，洗滌細(xì)胞以便轉(zhuǎn)移該沉淀物并再加入含有10％的活性炭提取的牛胚胎血清(GeminiBio-Products)的Dulbecco’s改進(jìn)Eagle’s培養(yǎng)基(DMEM)(Gibco)。單獨(dú)用溶媒(乙醇)或AGN193109(10-9-10-6M)處理細(xì)胞18小時(shí)。制備在0.1MKPO4(pH7.8)、1.0％TTRIONX-100、1.0mMDTT、2mMEDTA中的細(xì)胞溶解產(chǎn)物。按照deWet等人[Mol.Cell.Biol.7725(1987)]所述方法，使用螢火蟲熒光素(AnalyticalLuminescenceLaboratory)和EG&GBerthold96孔平面接種板式發(fā)光計(jì)測(cè)定熒光素酶的活性。所報(bào)道的熒光素酶值用一式三份測(cè)定值的均值±SEM表示。表11中的結(jié)果表明AGN193109具有高的親合力與RAR-α、RAR-β和RAR-γ的每一種結(jié)合而不激活視黃醛衍生物依賴性基因表達(dá)。更準(zhǔn)確地說，AGN193109與具有的Kd值在2-3nM范圍內(nèi)的三種受體中的每一種結(jié)合。盡管存在這種緊密的結(jié)合，當(dāng)與由ATRA刺激的誘導(dǎo)相比，AGN193109不激活基因表達(dá)。因此，AGN193109的最大有效濃度的一半(EC50)不能測(cè)定。盡管未示于表中，也發(fā)現(xiàn)AGN具有不可測(cè)定的對(duì)于RXRs的親合力。表11AGN193109結(jié)合和RARs的反式激活實(shí)施例7介紹用于證明AGN193109為ATRA依賴性基因表達(dá)的拮抗劑的方法。實(shí)施例7對(duì)由ATRA引起的RAR反式激活的AGN193109依賴性抑制在通過Sambrook等人(MolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarborLabPubl.1989)的磷酸鈣共沉淀方法共轉(zhuǎn)染CV-1細(xì)胞中，研究了AGN193109拮抗ATRA介導(dǎo)的RAR激活的能力。用Hollenberg等人[Cell55899(1988)]所述ΔMTV-Luc報(bào)告質(zhì)粒將真核細(xì)胞表達(dá)型載體pRShRAR-α[Giguereetal.Nature330624(1987)]、pRShRAR-β[Benbrooketal.Nature333669(1988)]和pRShRAR-γ[Ishikawaetal.Mol.Endocrmol.4837(1990)]共轉(zhuǎn)染。所述報(bào)告質(zhì)粒引人注目地含有兩個(gè)復(fù)制的TRE-復(fù)發(fā)的應(yīng)答元件。磷酸鈣轉(zhuǎn)染過程完全按照實(shí)施例6中所述進(jìn)行。用單獨(dú)溶媒(乙醇)、ATRA(10-9-10-6M)AGN193109(10-9-10-6M)或與AGN193109(10-9-10-6M)混合的10-8MATRA處理細(xì)胞達(dá)18小時(shí)。也按照實(shí)施例6中所述進(jìn)行細(xì)胞溶解產(chǎn)物和熒光素酶活性的測(cè)定。這些過程的結(jié)果表示于圖2A-圖2F中，其中熒光素酶值用一式三份測(cè)定值的均值±SEM表示。更準(zhǔn)確地說，在示于圖2A、2C和2E中的結(jié)果表明用ATRA刺激轉(zhuǎn)染細(xì)胞導(dǎo)致熒光素酶活性上的劑量應(yīng)答增加。這證實(shí)在所述實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中ATRA激活三種RARs中的每一種，并提供作為測(cè)定拮抗劑活性的比較的基礎(chǔ)。示于圖2B、2D和2F中的繪圖結(jié)果顯示用10nMATRA共處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞和增加AGN193109的濃度導(dǎo)致抑制熒光素酶的活性。尤其同樣劑量的AGN193109和ATRA相對(duì)單獨(dú)使用ATRA產(chǎn)生對(duì)于所有三種RAR亞型大于50％的抑制。比較在不同濃度AGN193109存在下的ATRA劑量應(yīng)答顯示ATRA受到AGN193109的競(jìng)爭(zhēng)性的抑制。顯而易見，在圖2中所示所有圖形上的橫軸代表視黃醛衍生物濃度的log值。這些結(jié)果證明AGN193109是有效力的RAR拮抗劑。其次，我們進(jìn)行闡明以下AGN193109拮抗劑活性機(jī)理的實(shí)驗(yàn)。本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員可以理解核受體激活被認(rèn)為涉及為配體結(jié)合所誘導(dǎo)的受體的構(gòu)象變化。蛋白酶保護(hù)測(cè)試的結(jié)果確實(shí)已經(jīng)證實(shí)核激素興奮劑和拮抗劑使得受體蛋白采取不同的構(gòu)象形式[Keideletal.Mol.Cell.Biol.14287(1994)；Allanetal.J.Biol.Chem.26719513(1992)]。我們利用這種測(cè)試方法以便確定是否AGN193109和ATRA使得RAR-α采取不同的構(gòu)象。將AGN193583(RAR-α選擇性拮抗劑)作為陽性對(duì)照，已知它可作為蛋白酶敏感性的拮抗劑特異性模型。實(shí)施例8介紹用于檢測(cè)由AGN193109的結(jié)合所產(chǎn)生的RAR-α構(gòu)象變化一種方法。如下所示，該過程結(jié)果出人預(yù)料地顯示AGN193109導(dǎo)致胰蛋白酶敏感性模型，它與ATRA(RAR興奮劑)誘導(dǎo)的模型基本相同，而不同于模式RAR拮抗劑誘導(dǎo)的模型。這一發(fā)現(xiàn)提示AGN193109具有不同于其它視黃醛衍生物拮抗劑的性質(zhì)。實(shí)施例8蛋白酶保護(hù)分析構(gòu)成于載體pGEM3Z(Pharmacia)中并含有RAR-αcDNA[Giguereetal.Nature330624(1987)]的質(zhì)粒與TNT-偶聯(lián)的網(wǎng)狀細(xì)胞溶解產(chǎn)物體外轉(zhuǎn)錄-翻譯系統(tǒng)(Promega)結(jié)合使用以便制備[35S]-蛋氨酸標(biāo)記RAR-α。所標(biāo)記蛋白R(shí)AR-α的有限的蛋白水解消化根據(jù)Keidel等人[Mol.Cell.Biol.14287(1994)]所述的方法進(jìn)行。將等份含有[35S]-蛋氨酸標(biāo)記RAR-α的網(wǎng)狀細(xì)胞溶解產(chǎn)物用ATRA、AGN193583或AGN193109以總體積為9μl，在冰凍下，孵育45分鐘。對(duì)于所有實(shí)驗(yàn)而言，視黃醛衍生物的最終濃度對(duì)于ATRA和AGN193109為100nM，對(duì)于AGN193583為1000nM。在所述視黃醛衍生物最終濃度間的差異為基于ATRA和AGN193109(在RAR-α上具有的Kd分別為2和10nM)和AGN193583(在RAR-α上具有的Kd≥100nM)的相對(duì)親合力上的差異的大約10倍。在配體結(jié)合后，將1μl適當(dāng)濃度的胰蛋白酶加入該混合物中產(chǎn)生為25、50或100μg/ml的終濃度。于室溫下孵化樣品10分鐘，并加入SDS-樣品緩沖液終止胰蛋白酶消化。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法，使樣品經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳和放射自顯影。所述興奮劑和拮抗劑均產(chǎn)生胰蛋白酶敏感性的不同模型，它們不同于未與配基結(jié)合受體的消化所得的結(jié)果。放射自顯影的結(jié)果顯示在不加入視黃醛衍生物的情況下，25、50或100μg/ml濃度的胰蛋白酶于室溫下，在10分鐘內(nèi)完全消化放射性標(biāo)記的RAR-α。ATRA的預(yù)先結(jié)合產(chǎn)生兩種主要的耐蛋白酶種的表象。RAR-α選擇性拮抗劑AGN193583的預(yù)先結(jié)合產(chǎn)生耐蛋白酶種，其分子量低于由ATRA預(yù)先結(jié)合所產(chǎn)生的種的分子量。該結(jié)果顯示視黃醛衍生物興奮劑和拮抗劑導(dǎo)致通過改變的胰蛋白酶敏感性可檢測(cè)到的構(gòu)象變化。令人感到吃驚的是，AGN193109預(yù)先結(jié)合產(chǎn)生蛋白酶保護(hù)模式，它與ATRA預(yù)先結(jié)合產(chǎn)生的模式很難區(qū)分。以上結(jié)果證實(shí)AGN193109與RAR-α結(jié)合并改變其構(gòu)象。令人感興趣的是，與拮抗劑(AGN193583)結(jié)合產(chǎn)生的變化比較，這種構(gòu)象變化的性質(zhì)與興奮劑(ATRA)結(jié)合產(chǎn)生的構(gòu)象變化更為相似。顯然，AGN193109依賴性拮抗作用機(jī)理是獨(dú)特的。我們考慮了能夠解釋AGN193109拮抗劑活性的可能的機(jī)理。尤其，我們使用標(biāo)準(zhǔn)凝膠位移測(cè)定法以便檢驗(yàn)是否AGN193109干擾RAR/RXR異質(zhì)二聚體的形成或抑制RAR和其同族DNA結(jié)合位點(diǎn)間的相互作用。實(shí)施例9介紹用于證明AGN193109既不抑制RAR/RXR二聚合作用又不抑制二聚體與靶向DNA結(jié)合的凝膠電泳移動(dòng)性位移測(cè)定法。實(shí)施例9凝膠位移分析除了省去35S標(biāo)記的蛋氨酸外，基本按照實(shí)施例8中所述產(chǎn)生體外翻譯的RAR-α。使用含有Mangelsdorf等人[Nature345224-229(1990)]所述RXR-αcDNA的基于pBluescript(II)(SK)的載體作為產(chǎn)生體外轉(zhuǎn)錄本的模板類似地產(chǎn)生體外翻譯的RXR-α。使所述標(biāo)記的RAR-α和RXR-α(單獨(dú)或混合)或與AGN193109(10-6M)預(yù)先結(jié)合(單獨(dú)或混合)與具有序列5’-TCAGGTCACCAGGAGGTCAGA-3’(SEQIDNO1)的末端標(biāo)記DR-5RARE雙鏈探針相互作用。按照標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室方法，將所述結(jié)合混合物在非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳和放射自顯影。出現(xiàn)在放射自顯影譜上對(duì)于該凝膠上所有路徑為常見的單獨(dú)延遲種(species)代表在網(wǎng)狀細(xì)胞溶解產(chǎn)物中存在的未定義的結(jié)合探子因子。只有RAR/RXR組合產(chǎn)生視黃醛衍生物受體特異性延遲種。單獨(dú)的RAR或單獨(dú)與所述探子結(jié)合的RXR均不產(chǎn)生這種位移種。AGN193109的存在不減少這種相互作用。這些結(jié)果顯示AGN193109基本不改變RAR-α的同質(zhì)或異質(zhì)二聚性質(zhì)。另外，AGN193109不抑制受體二聚體與含有關(guān)連結(jié)合位點(diǎn)的DNA片段的相互作用?？紤]到表現(xiàn)AGN193109特征的獨(dú)特的性質(zhì)，我們繼續(xù)研究是否該拮抗劑另外抑制未與配體結(jié)合的RARs的活性。用于進(jìn)行該檢測(cè)的受體/報(bào)告質(zhì)粒體系有利地顯示不加入視黃醛衍生物興奮劑下高水平的組成活性。更準(zhǔn)確地說，這些方法使用ER-RAR嵌合受體和ERE-tk-Luc報(bào)告系統(tǒng)。所述ERE-tk-Luc質(zhì)粒包括連接HSV胸苷激酶啟動(dòng)子和熒光素報(bào)告基因的質(zhì)粒tk-Luc上游的XenopusvitellogeninA2基因5’-旁側(cè)區(qū)的雌激素應(yīng)答的-397至-87區(qū)[如Klein-Hitpass等人所述，Cell461053-1061(1986)]。所述ER-RAR嵌合受體由融合所述RARs的“D-E-F”結(jié)構(gòu)域的雌激素受體DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域所組成。本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員可以理解該“D-E-F”結(jié)構(gòu)域起著與視黃醛衍生物結(jié)合的功能，以便提供視黃醛衍生物誘導(dǎo)的反式激活功能及提供用于與RXR異質(zhì)二聚作用的接觸位點(diǎn)。從而，在該報(bào)告系統(tǒng)中熒光素酶的表達(dá)取決于所述轉(zhuǎn)染嵌合受體構(gòu)成物的激活作用。實(shí)施例10介紹了用于證明AGN193109抑制起因于未與配體結(jié)合的RARs的基礎(chǔ)基因活性的方法。在不加入視黃醛衍生物興奮劑情況下進(jìn)行這些過程。以下表示的結(jié)果提供AGN193109顯示負(fù)性激素活性的首次證明。實(shí)施例10對(duì)于視黃醛衍生物調(diào)節(jié)的報(bào)告質(zhì)粒在短暫共轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中的基礎(chǔ)基因活性的阻遏作用用ERE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒和ER-RAR-α、ER-RAR-β或ER-RAR-γ表達(dá)質(zhì)粒使CV-1細(xì)胞共轉(zhuǎn)染。所述ERE-tk-Luc質(zhì)粒含有XenopuslaevisvitellogeninA2基因的雌激素應(yīng)答啟動(dòng)子元件并與Klein-Hitpass等人所述[Cell461053(1986)]的報(bào)告質(zhì)粒基本相同，除了該CAT報(bào)告基因被多核苷酸序列編碼的熒光素酶取代。Graupner等人[Biochem.Biophys.Res.Comm.1791554(1991)]已經(jīng)介紹了用于所述共轉(zhuǎn)染的ER-RAR-α、ER-RAR-β或ER-RAR-γ嵌合受體編碼的多核苷酸。使這些多核苷酸與Ellis等人[Cell45721(1986)]所述的pECE表達(dá)載體連接并在SV-40啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄控制下被表達(dá)。完全按照實(shí)施例6中所述的方法，使用0.5μg/孔的報(bào)告質(zhì)粒及0.05μg、0.10μg或0.2μg/孔的受體質(zhì)粒進(jìn)行磷酸鈣轉(zhuǎn)染過程。用單獨(dú)溶媒(乙醇)、ATRA(10-9-10-6M)或AGN193109(10-9-10-6M)處理細(xì)胞達(dá)18小時(shí)。如實(shí)施例6中所述進(jìn)行細(xì)胞溶解產(chǎn)物和熒光素酶活性的測(cè)定。在圖3A、4A和5A中所示的結(jié)果證實(shí)ATRA很強(qiáng)地誘導(dǎo)在所有轉(zhuǎn)染子中熒光素酶的表達(dá)。作為這三種轉(zhuǎn)染嵌合RAR異構(gòu)體的熒光素酶的基礎(chǔ)水平表達(dá)范圍在約7000-40000相對(duì)光單位(lightunits)(rlu)并在某種程度上取決于用在所述轉(zhuǎn)染中的受體質(zhì)粒的量。從而，如所預(yù)期的一樣，這三種嵌合受體可為ATRA激活。更準(zhǔn)確地說，所有這三種受體與ATRA結(jié)合并激活暫居于ERE-tk-Luc質(zhì)粒上的熒光素酶報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。圖3B、4B和5B表示在沒有任何外源性視黃醛衍生物興奮劑的情況下獲得的AGN193109劑量應(yīng)答曲線。令人感興趣的是，ER-RAR-α(圖3B)基本不受AGN193109的影響，而ER-RAR-β和ER-RAR-γ嵌合受體(分別為圖4B和5B)顯示AGN193109劑量應(yīng)答的熒光素酶報(bào)告質(zhì)?；钚缘慕档?。我們另外通過檢驗(yàn)AGN193109抑制由設(shè)計(jì)具有組成轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域的嵌合RAR-γ受體介導(dǎo)基因表達(dá)的能力，研究了其負(fù)性激素活性。更準(zhǔn)確地說，我們?cè)趦煞N類型的熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)中使用融合HSVVP-16(稱為RAR-γ-VP-16)的酸性激活因子結(jié)構(gòu)域的組成活性RAR-γ嵌合受體。第一種由用ER-RARs和ER-RXR-α共轉(zhuǎn)染的ERE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒所組成。第二種利用ΔMTV-TREp-Luc報(bào)告質(zhì)粒代替ERE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒。實(shí)施例11介紹用于證明AGN193109可以抑制RAR的轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域活性的方法。以下所示的結(jié)果證明AGN193109可以抑制在沒有興奮劑情況下的RAR依賴性基因表達(dá)并證實(shí)AGN193109顯示負(fù)性激素活性。實(shí)施例11對(duì)在短暫轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中RAR-VP-16活性的阻遏作用根據(jù)實(shí)施例6中所述的磷酸鈣共沉淀技術(shù)，用0.5μg/孔的ERE-tk-Luc熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒、0.1μg/孔的ER-RXR-α嵌合受體表達(dá)質(zhì)粒及0μg或0.1μg/孔的RAR-γ-VP-16表達(dá)質(zhì)粒使CV-1細(xì)胞短暫共轉(zhuǎn)染。所述嵌合受體ER-RXR-α由融合雌激素受體DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域[Graupneretal.Biochem.Biophys.Res.Comm.1791554(1991)]的RXR-α[Mangelsdorf，etal.Nature345224-229(1990)]激素結(jié)合結(jié)構(gòu)域(氨基酸181-458)所組成并由基于Ellis等人[Cell45721(1986)]所述表達(dá)載體pECE的SV-40所表達(dá)。RAR-γ-VP-16與Nagpal等人[EMBOJ.122349(1993)]所述VP16RAR-γ1表達(dá)質(zhì)粒相同，并給具有與全長(zhǎng)度RAR-γ的氨基端融合的HSV的VP-16蛋白的激活結(jié)構(gòu)域的嵌合蛋白編碼。轉(zhuǎn)染后18小時(shí)，用磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗細(xì)胞并加入含有已經(jīng)用炭提取除去視黃醛衍生物的10％FBS(GeminiBio-Products)的DMEM(Gibco-BRL)。用適當(dāng)稀釋的AGN193109或在乙醇溶媒中的ATRA或單獨(dú)的乙醇處理細(xì)胞達(dá)18小時(shí)，然后用PBS漂洗并用0.1MKPO4(pH7.8)、1.0％TRITONX-100、1.0nMDTT、2nMEDTA溶解。根據(jù)deWet等人[Mol.Cell.Biol.7725(1987)]所述方法，使用螢火蟲熒光素(AnalyticalLuminescenceLaboratory)和EG&GBerthold96孔平面接種發(fā)光計(jì)測(cè)定熒光素酶活性。熒光素酶值用一式三份測(cè)定值的均值±SEM表示。如圖6中所示，用ERE-tk-Luc報(bào)告構(gòu)成物使CV-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染，所述ER-RAR-α嵌合表達(dá)質(zhì)粒顯示由ATRA引起的弱的激活熒光素酶活性，可能是由于ATRA異構(gòu)化為9C-RA，即對(duì)于RXRs而言的天然配體[Heymanetal.Cell68397(1992)]。用報(bào)告質(zhì)粒和嵌合受體質(zhì)粒的相同混合物轉(zhuǎn)染，但經(jīng)AGN193109處理的細(xì)胞并不對(duì)熒光素酶活性顯示出任何作用。因?yàn)锳GN193109不與RXRs結(jié)合，該后一結(jié)果是預(yù)料到的。類似地用ERE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CV-1細(xì)胞，然而用ER-RAR嵌合受體表達(dá)質(zhì)粒代替在ATRA處理后顯示極強(qiáng)的熒光素酶活性誘導(dǎo)作用的ER-RXR-α。相反，在所述轉(zhuǎn)染混合物中RAR-γ-VP-16表達(dá)質(zhì)粒與ER-RXR-α和ERE-tk-Luc質(zhì)粒的包涵物導(dǎo)致在沒有任何加入視黃醛衍生物的情況下測(cè)定時(shí)，基礎(chǔ)熒光素酶活性的顯著的增加。當(dāng)與單獨(dú)使用ER-RXR-α轉(zhuǎn)染的細(xì)胞所得結(jié)果相比時(shí)，對(duì)于ER-RXR-α/RAR-γ-VP-16共轉(zhuǎn)染子而言，所觀測(cè)到的基礎(chǔ)熒光素酶活性上的增加顯示重組ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16蛋白可以異質(zhì)二聚合。該異質(zhì)二聚體與所述順式調(diào)節(jié)雌激素應(yīng)答元件的相互作用導(dǎo)致所述VP-16激活結(jié)構(gòu)域?qū)τ贓RE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒的啟動(dòng)子區(qū)的靶向性。用ATRA處理該三重轉(zhuǎn)染細(xì)胞導(dǎo)致超過高的基礎(chǔ)水平的熒光素酶活性的適度增加。然而，用AGN193109處理該三重轉(zhuǎn)染子導(dǎo)致熒光素酶活性上劑量依賴性降低。重要的是，圖6顯示AGN193109處理用ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞導(dǎo)致在約10-8MAGN193109下出現(xiàn)具有最大抑制的對(duì)熒光素酶活性的阻遏作用。通過其中使AGN193109與RAR結(jié)合導(dǎo)致RAR中構(gòu)象變化(它使促進(jìn)反式-作用負(fù)性共激活因子蛋白的結(jié)合的負(fù)性構(gòu)象穩(wěn)定化)的模型，解釋了我們的觀察結(jié)果即AGN193109阻遏在RXR存在下的RAR-γ-VP-16的組成轉(zhuǎn)錄激活功能。當(dāng)通過NCP使AGN193109/RAR復(fù)合物結(jié)合時(shí)，RAR能夠上行調(diào)節(jié)對(duì)激活的RARs為一般應(yīng)答的基因的轉(zhuǎn)錄。我們的模型進(jìn)一步提出細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)備的NCP在某些方面濃度為有限的，并可以通過AGN193109刺激于RARs的絡(luò)合而將其耗竭。在圖6中表示的結(jié)果另外顯示甚至在10-6MAGN193109下，ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16蛋白可以相互作用形成能夠激活所述報(bào)告基因轉(zhuǎn)染的異質(zhì)二聚體。更準(zhǔn)確地說，用ER-RXR-α和RAR-γ-VP-16轉(zhuǎn)染并以足以提供最大抑制的濃度(10-8-10-6M)的AGN193109處理的細(xì)胞產(chǎn)生示數(shù)為約16000rlu的熒光素酶活性。相反，只用ER-RXR-α轉(zhuǎn)染，然后以濃度高達(dá)10-6M的AGN193109處理的細(xì)胞顯示熒光素酶表達(dá)的水平只有約8000rlu。甚至在10-6M的AGN193109存在下，在表達(dá)ER-RXR-α和RALR-γ-VP-16的細(xì)胞中得到較高水平的熒光素酶活性的事實(shí)顯示在這兩種重組受體間存在持續(xù)的相互作用。由AGN193109對(duì)RAR-γ-VP-16活性的阻遏作用提示用VP-16激活作用可以共同控制(codominate)NCP相互作用的調(diào)節(jié)。因此，我們認(rèn)識(shí)到調(diào)節(jié)一般不被AGN193109依賴性方式的視黃醛衍生物所調(diào)節(jié)的基因的表達(dá)是可能的。作為AGN193109可調(diào)節(jié)基因的候選者包括那些被轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物激活的可調(diào)節(jié)基因，它們由于RARs結(jié)合或異質(zhì)二聚的非RAR因子所組成，其中所述非RAR因子不要求RAR興奮劑激活。而用RAR興奮劑的刺激可以基本對(duì)該基因的表達(dá)沒有影響，給予AGN193109可以促進(jìn)含有AGN193109/RAR/NCP的非活性轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的形成。其次，加入AGN193109視黃醛衍生物負(fù)性激素可以下行調(diào)節(jié)其它視黃醛衍生物不敏感基因轉(zhuǎn)錄。相同的機(jī)理可以解釋AGN193109可以阻遏在HL-60細(xì)胞中的組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(TGase)基因活性。由三個(gè)被5和7個(gè)堿對(duì)隔開的典型的視黃醛衍生物的半位點(diǎn)組成的視黃醛衍生物應(yīng)答元件在該基因的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)中一直為相同的。盡管TGase可以被RXR選擇性興奮劑誘導(dǎo)，它對(duì)RAR選擇性興奮劑不應(yīng)答。通過RAR/RXR異質(zhì)二聚體使TGase視黃醛衍生物應(yīng)答元件結(jié)合(Daviesetal.inPress)。令人感興趣的是，AGN193109能夠阻遏由RXR興奮劑誘導(dǎo)的TGase活性。通過該負(fù)性激素使NCPs與所述異質(zhì)二聚體的RAR組分分離，從而阻遏有關(guān)RXR的活性的能力可以解釋該AGN193109介導(dǎo)的阻遏作用。通過使用RAR-γ-VP-16和表達(dá)構(gòu)成物及使用所述AMTV-TREp-Luc報(bào)告質(zhì)粒取代RAR-γ-VP-16和ER-RXR-α表達(dá)構(gòu)成物與ERE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒結(jié)合，我們也獲得了支持與實(shí)施例11所述內(nèi)容一致結(jié)論的結(jié)果。于上述結(jié)果一致，我們發(fā)現(xiàn)AGN193109抑制在ΔMTV-TREp-Luc報(bào)告質(zhì)粒上的RAR-γ-VP-16的活性。從而，當(dāng)該嵌合受體直接與視黃酸受體應(yīng)答元件結(jié)合，代替間接與在報(bào)告質(zhì)粒的啟動(dòng)子區(qū)中雌激素應(yīng)答元件結(jié)合時(shí)，AGN193109阻遏RAR-γ-VP-16的活性。這些發(fā)現(xiàn)證明用于鑒定具有負(fù)性激素活性試劑的測(cè)定不必限于使用特定的報(bào)告質(zhì)粒。代之，用于鑒定視黃醛衍生物負(fù)性激素的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)所包括的重要特征涉及檢測(cè)化合物阻遏設(shè)計(jì)含有組成性轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域的RAR的活性的能力。一般而言，可以確定視黃醛衍生物負(fù)性激素為視黃醛類化合物的子集，它們?cè)谵D(zhuǎn)染細(xì)胞中阻遏報(bào)告基因的基本水平的表達(dá)，所述報(bào)告基因?yàn)閷?duì)于包括至少位于受體的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的C端的視黃醛衍生物受體結(jié)構(gòu)域的視黃醛衍生物受體或嵌合受體的直接或間接結(jié)合的轉(zhuǎn)錄應(yīng)答。該方法已經(jīng)被采用作為用于鑒定視黃醛衍生物負(fù)性激素的篩選方法。在本發(fā)明篩選方法的不同實(shí)施方案中，用于尋找負(fù)性激素的受體結(jié)構(gòu)為可變的。更準(zhǔn)確地說，所述視黃醛衍生物受體可以是RAR或RXR的亞型。可選設(shè)計(jì)所述受體包括組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域。用于篩選負(fù)性激素的視黃醛衍生物受體可選含有作為對(duì)于所述天然受體為內(nèi)源性的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的替代物的異質(zhì)的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。然而，當(dāng)在篩選方法中使用第二種受體時(shí)，其中第二種受體可以與用于尋找負(fù)性激素的視黃醛衍生物受體二聚合，然后該視黃醛衍生物受體可以不需要DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，因?yàn)樗g接通過與本身結(jié)合在轉(zhuǎn)錄控制區(qū)的第二種受體的二聚合可以被連接到所述受體基因的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)上。在所述篩選方法的實(shí)施中，在體外檢測(cè)方法中，一般測(cè)定化合物阻遏報(bào)告質(zhì)粒的基礎(chǔ)表達(dá)的能力。基礎(chǔ)表達(dá)代表在沒有外源性加入的視黃醛衍生物興奮劑存在的條件下，在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中報(bào)告質(zhì)粒表達(dá)的基線水平?？蛇x采取步驟，通過例如活性炭提取用于體外培養(yǎng)細(xì)胞的血清的方法自所述轉(zhuǎn)染細(xì)胞的周圍除去內(nèi)源性視黃醛衍生物配體。用于所述篩選方法中的報(bào)告基因的實(shí)例包括那些編碼的熒光素酶、β半乳糖甙酶、氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶或者能通過免疫化學(xué)方法檢測(cè)的細(xì)胞表面抗原。實(shí)際上，沒有預(yù)期報(bào)告基因的性質(zhì)對(duì)于方法的可操作性是至關(guān)重要的。然而，所述報(bào)告基因的構(gòu)成物的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)必須包括一個(gè)或多個(gè)順式調(diào)控元件，它們?yōu)橛糜趯ふ邑?fù)性激素的轉(zhuǎn)錄因子的靶子。例如，如果一個(gè)人想要鑒定RAR負(fù)性激素，那么所述報(bào)告因子構(gòu)成物轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)可以含有可為含RAR蛋白結(jié)合的順式調(diào)控元件。在該實(shí)例中，在RAR的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域與所述報(bào)告因子構(gòu)成物的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的順式調(diào)控元件之間應(yīng)該具有相應(yīng)關(guān)系。從而，如果具有組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域和DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(它們可以結(jié)合順式調(diào)控雌激素應(yīng)答元件)的嵌合RAR用于所述篩選方法中，則所述報(bào)告因子構(gòu)成物的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)應(yīng)該含有雌激素應(yīng)答元件。Mangelsdorf等人[TheRetinoidReceptorsinTheRetinoidsBiology，ChmistryandMedicine，2ndedition，eds.Spornetal.，RavenPress，Ltd.，NewYork(1994)]公開了用于報(bào)告基因測(cè)試中的直接結(jié)合視黃醛衍生物受體(RAREs)的順式調(diào)控元件的實(shí)例。間接結(jié)合嵌合受體的順式調(diào)控元件的實(shí)例包括對(duì)于任何DNA結(jié)合蛋白而言的DNA結(jié)合位點(diǎn)，其中所述蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以被加入由連接視黃醛衍生物受體的該DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域組成的嵌合受體中。可以被設(shè)計(jì)進(jìn)入嵌合受體并將識(shí)別異質(zhì)順式調(diào)控元件的異質(zhì)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的特定實(shí)例包括那些識(shí)別雌激素應(yīng)答元件。從而，用于所述識(shí)別方法中的嵌合受體的視黃醛衍生物受體部分不必含有視黃醛衍生物受體的DNA結(jié)合，然而至少必須含有視黃醛衍生物受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。結(jié)合所述順式調(diào)控元件的間接視黃醛衍生物受體的其它實(shí)例包括能結(jié)合所述順式調(diào)控元件和與視黃醛衍生物受體二聚合的蛋白的用途。在該情況下，所述視黃醛衍生物受體只通過與負(fù)責(zé)DNA結(jié)合的蛋白結(jié)合而與所述順式調(diào)控元件結(jié)合。該系統(tǒng)的實(shí)例將包括由融合RXR的異質(zhì)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域組成的并含有至少與負(fù)責(zé)與RARs二聚合的RXR的結(jié)構(gòu)域的融合蛋白的用途。共誘導(dǎo)的RARs可以與該結(jié)合順式調(diào)控元件的融合蛋白二聚合。我們認(rèn)為任何與RARs二聚合導(dǎo)致所述RAR與所述順式調(diào)控元件的間接結(jié)合的順式調(diào)控元件結(jié)合蛋白也將適用于負(fù)性激素篩選方法。在所述篩選方法的優(yōu)選方案中，視黃醛衍生物負(fù)性激素被鑒定為可以阻遏已經(jīng)增加了基礎(chǔ)活性的設(shè)計(jì)RAR轉(zhuǎn)錄因子的基礎(chǔ)表達(dá)的視黃醛衍生物。盡管對(duì)于所述篩選方法的可操作性而言不是必需的，然而用于下列實(shí)施例中的設(shè)計(jì)RAR包括組成性轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域。在沒有任何視黃醛衍生物的情況下，采用嵌合受體很好地提供了一種升高報(bào)告基因的基礎(chǔ)表達(dá)的方法。盡管在以上詳述的方法中已經(jīng)使用短暫轉(zhuǎn)染，組成性表達(dá)嵌合受體的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系也用于所述篩選方法中。如下列實(shí)施例中所公開的，對(duì)于設(shè)計(jì)含有對(duì)雌激素應(yīng)答順式調(diào)控元件特異性的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的第二受體而言，具有組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域的嵌合視黃醛衍生物受體為可異質(zhì)二聚的。在該情況下，具有組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域的嵌合視黃醛衍生物受體，間接經(jīng)過與結(jié)合DNA靶向序列的第二受體結(jié)合，與順式調(diào)控區(qū)控制報(bào)告基因表達(dá)關(guān)聯(lián)。更具體地說，第二受體被設(shè)計(jì)含有識(shí)別雌激素應(yīng)答元件的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在上游啟動(dòng)子區(qū)中具有雌激素應(yīng)答元件的報(bào)告基因?qū)]有具組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)染嵌合受體情況下的視黃醛衍生物興奮劑不應(yīng)答更為有利。因此，所有報(bào)告基因活性起因于所述轉(zhuǎn)染受體。雌激素應(yīng)答元件DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和雌激素應(yīng)答元件順式調(diào)控元件的聯(lián)合使用目的僅為說明。本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員將理解對(duì)于非RARE順式調(diào)控元件具有特異性的工程(engineered)受體的其它聯(lián)合形式也用于本發(fā)明篩選方法的實(shí)施中。用于所述篩選方法中的細(xì)胞為可以被轉(zhuǎn)染的真核細(xì)胞。這些細(xì)胞可以為動(dòng)物細(xì)胞例如人類、靈長(zhǎng)類或嚙齒動(dòng)物細(xì)胞。我們使用CV-1細(xì)胞已經(jīng)取得了非常好的結(jié)果，然而，適當(dāng)?shù)仄诖渌囵B(yǎng)細(xì)胞系也可以成功地使用。任何本領(lǐng)域內(nèi)已知的常規(guī)轉(zhuǎn)染方法可以用于誘導(dǎo)編碼具有組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域的嵌合視黃醛衍生物受體的表達(dá)構(gòu)成物。所述組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域由大部分氨基酸組成，它們可能具有通過在中性pH條件下一個(gè)負(fù)電荷所表示的整體酸性。例如，所述組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域可以具有也在病毒轉(zhuǎn)錄因子中發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列。具有組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域的病毒轉(zhuǎn)錄因子的一個(gè)實(shí)例為單純性皰疹病毒16。然而，其它病毒或合成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域也可以用于編碼具有組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域的嵌合視黃醛衍生物受體的表達(dá)構(gòu)成物的構(gòu)成中。如下所述，我們已經(jīng)開發(fā)了用于鑒定視黃醛衍生物負(fù)性激素的一般化的篩選方法。該篩選方法提供將簡(jiǎn)單的拮抗劑與負(fù)性激素區(qū)分開的方法。表12列出顯示對(duì)于RAR-γ有效親合力的幾種視黃醛衍生物化合物，只對(duì)ATRA例外，在短暫共轉(zhuǎn)染反式激活測(cè)試中它們不反式激活該受體。從而，我們檢測(cè)了這些化合物是否哪些為RAR-γ拮抗劑，即使有的話，這些拮抗劑中那些顯示負(fù)性激素活性。實(shí)施例12對(duì)于視黃醛衍生物負(fù)性激素的測(cè)試通過在MolecularCloningALaboratoryManual(Sambrooketal.eds.ColdSpringHarborLabPubl.1989)中所述磷酸鈣共沉淀方法，用0.5μgERE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒和0.1μgER-RAR-γ[Graupneretal.Biochem.Biophys.Res.Comm.1791554(1991)]嵌合表達(dá)質(zhì)粒使4×104CV-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染。18小時(shí)后，用PBS漂洗細(xì)胞并加入含有10％活性炭提取的FBS(GeminiBio-Products)的DMEM(Gibco-BRL)。用在乙醇中的10-8MATRA或單獨(dú)用乙醇處理細(xì)胞。此外，用10-9、10-8、10-7或10-6M表12中所列的化合物處理經(jīng)ATRA處理的細(xì)胞。18小時(shí)后，將細(xì)胞在PBS中漂洗并溶解在0.1MKPO4(pH7.8)、1.0％TRITONX-100、1.0mMDTT、2mMEDTA中。根據(jù)deWet等人[Mol.Cell.Biol.7725(1987)]所述方法測(cè)定熒光素酶活性。表12化合物Kd(nM)@RAR-γaEC50(nM)@RAR-γbATRA1217AGN1931096na(化合物60)AGN19317452na(化合物34a)AGN19319930naAGN19338525na(化合物23)AGN19338913na(化合物25)AGN19384040naAGN19387130na(化合物50)a通過3H-ATRA競(jìng)爭(zhēng)性的與桿狀病毒表達(dá)的RAR-γ的結(jié)合和應(yīng)用Cheng-Prussof方程測(cè)定的相對(duì)親合力(Kd)。b用ΔMTV-TREp-Luc和RS-RAR-γ短暫共轉(zhuǎn)染的CV-1細(xì)胞中測(cè)定的EC50?！皀a”代表無活性。如部分在圖7和表12中所示結(jié)果表明的，ATRA例外，表12中所列的所有化合物在RAR-γ上為視黃醛衍生物拮抗劑。其次，篩選表2中鑒定的RAR-γ拮抗劑以便確定即使有的話那些也是視黃醛衍生物負(fù)性激素。根據(jù)在MolecularCloningALaboratoryManual(Sambrooketal.eds.ColdSpringHarborLabPubl.1989)中所述磷酸鈣方法，用0.5μgERE-tk-Luc報(bào)告質(zhì)粒和0.1μgER-RXR-α[Graupneretal.Biochem.Biophys.Res.Comm.1791554(1991)]和0.2μgRAR-γ-VP-16[Nagpaletal.EMBOJ.122349(1993)]嵌合表達(dá)質(zhì)粒使4×104CV-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染。18小時(shí)后，用PBS漂洗細(xì)胞并加入含有10％活性炭提取的FBS(GeminiBio-Products)的DMEM(Gibco-BRL)。用10-9、10-8、10-7或10-6M表12中所列的每種化合物處理細(xì)胞。用作為陰性對(duì)照的單獨(dú)的乙醇溶媒處理細(xì)胞。18小時(shí)后，將細(xì)胞在PBS中漂洗并溶解在0.1MKPO4(pH7.8)、1.0％TRITONX-100、1.0mMDTT、2mMEDTA中。根據(jù)deWet等人[Mol.Cell.Biol.7725(1987)]前述方法測(cè)定熒光素酶活性。如圖8中所示，根據(jù)其對(duì)于RAR-γ-VP-16嵌合視黃醛衍生物受體的組成性轉(zhuǎn)染激活功能的作用可以將表12中的視黃醛衍生物拮抗劑分成兩類。一類(包括AGN193174、AGN193199和AGN193840)盡管它們?yōu)锳TRA拮抗劑，不阻遏RAR-γ-VP-16活性。相反，AGN193109、AGN193385、AGN193389和AGN193871顯示劑量依賴性阻遏RAR-γ-VP-16組成性活性。從而，盡管兩組化合物均為RAR-γ拮抗劑，只有第二組化合物顯示負(fù)性激素活性。該測(cè)試方法可以有利地將視黃醛衍生物負(fù)性激素與簡(jiǎn)單的視黃醛衍生物拮抗劑區(qū)分開。前述試驗(yàn)結(jié)果表明AGN193109滿足定義負(fù)性激素的標(biāo)準(zhǔn)。更準(zhǔn)確地說，在實(shí)施例11中所示的結(jié)果證明AGN193109甚至在沒有外源性加入的視黃醛衍生物配體的情況下，仍具有在RARs上施加抑制活性的能力。如此，該具有生物活性的化合物不取決于RARs和興奮劑例如ATRA和AGN191183之間相互作用的阻滯。這些發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致得出結(jié)論AGN193109穩(wěn)定RARs和NCPs之間的相互作用。如圖9中所示，NCP/PAR/PCP的相互作用以平衡狀態(tài)存在。興奮劑的作用為增加PCP的相互作用并降低NCP的相互作用。如前文所述，我們的試驗(yàn)結(jié)果揭示通過給予AGN193109可以調(diào)節(jié)對(duì)于其它受體而言NCP的細(xì)胞內(nèi)有效性。更準(zhǔn)確地說，我們發(fā)現(xiàn)AGN193109可以促進(jìn)NCP與RARs的復(fù)合作用，從而降低可用于與除RARs外的轉(zhuǎn)錄因子相互作用的NCP的細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)存。其次，我們檢驗(yàn)了AGN193109對(duì)于興奮劑介導(dǎo)的AP-1依賴性基因表達(dá)抑制的作用。在Endocr.Rev.14651(1993)中，Pfhal公開了視黃醛衍生物通過包括抑制AP-1活性的機(jī)理可以下行調(diào)節(jié)基因表達(dá)。我們假定當(dāng)與指定測(cè)定AP-1活性的模型系統(tǒng)中的視黃醛衍生物興奮劑結(jié)合使用時(shí)，AGN193109可以具有兩種作用之一。首先，可以認(rèn)為AGN193109已經(jīng)拮抗所述興奮劑的作用，從而緩解對(duì)于AP-1活性的興奮劑依賴性抑制。此外，AGN193109可能已經(jīng)增強(qiáng)了所述興奮劑的活性，從而夸大對(duì)于AP-1活性的興奮劑依賴性抑制作用。實(shí)施例13介紹用于證明AGN193109增強(qiáng)視黃醛衍生物興奮劑的抗AP-1活性的方法。如下所述，AGN191183視黃醛衍生物興奮劑微弱地抑制AP-1依賴性基因表達(dá)。AGN193109和視黃醛衍生物興奮劑聯(lián)合使用強(qiáng)烈抑制AP-1依賴性基因表達(dá)。AGN193109本身基本上沒有抗AP-1的活性。實(shí)施例13AGN193109增強(qiáng)視黃醛衍生物興奮劑的抗AP-1活性如Giguere等人[Nature33624(1987)]所述，利用LIPOFECTAMINE(LifeTechnologies，Inc.)，使用1μg的Str-AP1-CAT報(bào)告基因構(gòu)成物和0.2μg的質(zhì)粒pRS-hRARα使HeLa細(xì)胞轉(zhuǎn)染。通過克隆相應(yīng)于大鼠pBLCAT3的HindIII-BamHI位點(diǎn)[Luckowetal.，Nucl.AcidsRes.155490(1987)]之間stromelysin-1啟動(dòng)子[Matrisianetal.，Mol.Cell.Biol.61679(1986)]的-84至+1位的DNA片段制備Str-AP1-CAT。所述stromelysin-1啟動(dòng)子的序列含有AP1結(jié)構(gòu)域單元作為其唯一的增強(qiáng)子元件[Nicholsonetal.，EMBOJ.94443(1990)]。使具有如下序列的兩種合成的低聚核苷酸退火制備所述啟動(dòng)子序列5′-AGAAGCTTATGGAAGCAATTATGAGTCAGTTTGCGGGTGACTCTGCAAATACTGCCACTCTATAAAAGTTGGGCTCAGAAAGGTGGACCTCGAGGATCCAG-3′(SEQIDNO2)和5′-CTGGATCCTCGAGGTCCACCTTTCTGAGCCCAACTTTTATAGAGTGGCAGTATTTGCAGAGTCACCCGCAAACTGACTCATAATTGCTTCCATAAGCTTCT-3′(SEQIDNO3).如Nagpal等人[J.Biol.Chem.270923(1995)]所述，完成包括轉(zhuǎn)染、用合適的化合物處理和測(cè)定CAT活性的過程。這些過程的結(jié)果表明AGN193109加強(qiáng)所述視黃醛衍生物興奮劑AGN191183的抗AP-1活性。更準(zhǔn)確地說，在濃度為10-12-10-10M的范圍內(nèi)，AGN191183不抑制TPA誘導(dǎo)的Str-AP1-CAT表達(dá)。用AGN193109在濃度為10-10-10-8M范圍內(nèi)處理基本不抑制AP-1介導(dǎo)的報(bào)告基因的活性。然而，在圖10中所示的結(jié)果表明以濃度為10-12-10-10M的范圍內(nèi)，使用AGN193109(10-8M)和AGN191183聯(lián)合刺激所述轉(zhuǎn)染子基本上抑制TPA誘導(dǎo)的Str-AP1-CAT表達(dá)的12％-21％的量。因而，在AGN191183這一視黃醛衍生物興奮劑一般不抑制AP-1活性的條件下，AGN193109加強(qiáng)AGN191183抗AP-1活性。我們認(rèn)為，通過可能涉及NCPs到RARs的AGN193109依賴性受體內(nèi)聚的機(jī)理，AGN193109加強(qiáng)所述興奮劑介導(dǎo)的對(duì)AP-1活性的阻遏作用。RARs屬于超家族的核受體，它也包括作為1，25-二羥基維生素D3、糖皮質(zhì)激素、甲狀腺激素、雌激素和黃體酮的受體。假定結(jié)合NCPs的能力可為核受體超家族的不同成員所分享是合理的。這使我們推測(cè)AGN193109可以加強(qiáng)與該超家族核受體相互作用的一種或多種配體的抗AP-1活性。在先實(shí)施例中所述的結(jié)果清楚地表明AGN193109加強(qiáng)視黃醛衍生物興奮劑的抗AP-1活性。更準(zhǔn)確地說，AGN193109降低可以檢測(cè)到AGN191183的抗AP-1活性的閾劑量。因?yàn)锳GN193109本身基本沒有抗AP-1活性，其對(duì)于核受體興奮劑的作用為協(xié)同作用。我們也發(fā)現(xiàn)AGN193109負(fù)性激素加強(qiáng)作為維生素D3受體的天然配體的1，25-二羥基維生素D3的抗AP-1活性。在先實(shí)施例中觀察到的AGN193109和AGN191183之間的協(xié)同作用必然意味著所述視黃醛衍生物興奮劑的抗AP-1活性和AGN193109介導(dǎo)的加強(qiáng)該活性必定根據(jù)不同的機(jī)理。如果這兩種制劑的作用機(jī)理為相同的，從而導(dǎo)致AGN193109和所述興奮劑的聯(lián)合作用的效果是相加的。然而，聯(lián)合的結(jié)果顯示比單獨(dú)使用任何一種制劑均更有效，其效果在該發(fā)現(xiàn)之前是沒有預(yù)料到的。使用比所述視黃醛衍生物興奮劑約100倍摩爾過量的AGN193109，有效地完成所述RAR興奮劑的AGN193109介導(dǎo)的加強(qiáng)作用。因此，大部分的RARs應(yīng)該被AGN193109所結(jié)合，只留下非常少的RARs供興奮劑結(jié)合。盡管存在這一事實(shí)，未與AGN193109結(jié)合的RARs群能夠結(jié)合視黃醛衍生物興奮劑并有力地刺激作為抑制報(bào)告基因表達(dá)可測(cè)的興奮劑依賴性應(yīng)答。從而，我們的數(shù)據(jù)提示為AGN193109所誘導(dǎo)的RARs的可能的異質(zhì)性。AGN193109的負(fù)性激素活性起因于其促進(jìn)RARs和NCPs相互作用的能力，提供理解AGN193109和視黃醛衍生物興奮劑之間協(xié)同作用的基礎(chǔ)。我們的結(jié)果與其中AGN193109處理細(xì)胞促進(jìn)RARs和NCPs的結(jié)合，從而降低所述細(xì)胞外游離NCP和游離RAR的數(shù)量的模型完全一致。這導(dǎo)致產(chǎn)生功能上有差異的兩個(gè)RARs群。第一群由與NCPs結(jié)合的RARs所代表。該AGN193109/RAR/NCP復(fù)合物不能為視黃醛衍生物興奮劑所激活。第二群由RARs組成，它們不為NCP所結(jié)合并保留與興奮劑的相互作用。后一細(xì)胞群稱為“RAR”，表明在基本耗盡NCP的環(huán)境中的游離RARs。RAR*s已經(jīng)降低了通過平衡結(jié)合與NCP關(guān)聯(lián)的可能性并具有增加了的對(duì)于可測(cè)的視黃醛衍生物興奮劑的敏感性，例如作為抗AP-1活性的敏感性。所以如此是因?yàn)楸M管通過給予AGN193109耗竭細(xì)胞內(nèi)的NCP的儲(chǔ)存，然而還未耗盡PCP的儲(chǔ)存。因此，游離RAR*s可以與視黃醛衍生物興奮劑結(jié)合并在基本耗盡NCP的環(huán)境下與PCP因子相互作用。AGN193109增加其它核受體對(duì)于其各自的興奮劑的敏感性的能力可以歸因于這些不同的核受體與相同的NCPs(它們與AGN193109/RAR復(fù)合物相互作用)相互作用的能力。這種AGN193109介導(dǎo)可用于核受體家族成員的NCP的調(diào)節(jié)的模型用圖解形式表示于圖11中。該圖解模型使我們能預(yù)測(cè)AGN193109可以調(diào)節(jié)除了視黃醛衍生物興奮劑以外的核受體配體的活性。如在下列實(shí)施例中所述，我們證實(shí)AGN193109在體外反式激活測(cè)試中加強(qiáng)1，25-二羥基維生素D3的活性。實(shí)施例14介紹用于證明AGN193109在反式激活測(cè)試中提高1，25-二羥基維生素D3活性的方法。實(shí)施例14AGN193109加強(qiáng)1，25-二羥基維生素D3的活性使用Felgner等人[Proc.Natl.Acad.Sci.USA847413(1987)]所述的陽離子質(zhì)脂體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞。將5×104細(xì)胞平面接種在12孔的多孔接種板上并在加入10％FBS的DMEM中生長(zhǎng)。使用2μg/孔的LIPOFECTAMINE試劑(LifeTechnologies，Inc.)，用含有來自連接報(bào)告質(zhì)粒ΔMTV-Luc[Heymanetal.inCell68397(1992)]的小鼠osteopontin基因的兩個(gè)復(fù)制的1，25-二羥基維生素D3應(yīng)答元件5’-GTACAAGGTTCACGAGGTTCACGTCTTA-3’(SEQIDNO4)[Ferraraetal.J.Biol.Chem.2692971(1994)]和0.3c的質(zhì)粒pGEM3Z(Pharmacia，Inc.)作為載體DNA，以使DNA的最終濃度為1.0μg/孔，在無血清的培養(yǎng)基中使細(xì)胞共轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后6小時(shí)，供給細(xì)胞終濃度為10％的含有活性炭提取的FBS的的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染后18小時(shí)，用單獨(dú)溶媒(乙醇)或以終濃度為10-8或10-7M的AGN193109的乙醇溶液處理細(xì)胞。6小時(shí)后，加入乙醇中的1，25-二羥基維生素D3到終濃度為10-10-10-7M。用1，25-二羥基維生素D3處理后18小時(shí)溶解并收獲細(xì)胞。如上所述，測(cè)定熒光素酶活性。該實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)可以使用監(jiān)視和使1，25-二-羥基維生素D3依賴性基因表達(dá)定量化的方便的方法。圖12中所示結(jié)果表明，當(dāng)與單獨(dú)使用1，25-二羥基維生素D3所獲結(jié)果相比時(shí)，與1，25-二羥基維生素D3共同給予AGN193109使其劑量應(yīng)答曲線向左位移。這證實(shí)在體外反式激活測(cè)試中AGN193109加強(qiáng)1，25-二羥基維生素D3的效力。更準(zhǔn)確地說，圖12以圖解的方式介紹了濃度低至10-100nM的AGN193109使得1，25-二羥基維生素D3的活性大約增加10倍。需要10-8M濃度的1，25-二羥基維生素D3以便產(chǎn)生約2000rlu的熒光素酶表達(dá)，而當(dāng)將該維生素與濃度為10-8-10-7M的AGN193109共同給予時(shí)，產(chǎn)生同樣的熒光素酶量只需要1，25-二羥基維生素D3濃度1/10的量。盡管在圖12中的圖中未顯示，使用濃度為10-9-10-8M的AGN193109可以獲得基本相同的結(jié)果。因而，共同給予AGN193109基本降低在沒有所述負(fù)性激素的情況下，產(chǎn)生類似的效果所需1，25-二羥基維生素D3的量。令人感興趣的是，當(dāng)用共同轉(zhuǎn)染的維生素D受體(VDR)表達(dá)質(zhì)粒重復(fù)以上過程時(shí)，在AGN193109加強(qiáng)1，25-二羥基維生素D3活性的能力上有一致的降低。我們對(duì)于該結(jié)果的解釋為VDRs的過量表達(dá)可以影響AGN193109加強(qiáng)1，25-二羥基維生素D3活性的能力。從而，配體受體的細(xì)胞內(nèi)濃度(在組織特異性方式上可以不同)可以影響AGN193109加強(qiáng)與該受體結(jié)合的配體活性的能力。這又與模型一致，其中titratableNCPs有助于調(diào)節(jié)所述維生素D3的應(yīng)答并支持以上提出的模型。如下列實(shí)施例中所述，我們也證實(shí)AGN193109也加強(qiáng)1，25-二羥基維生素D3的抗AP-1活性。我們的用于AGN193109作用活性的模型通過在該藥物的存在下引起NCPs與RARs迫切結(jié)合解釋了這一觀察結(jié)果。存在于Hela細(xì)胞中的內(nèi)源性維生素D受體可能被給予更多的對(duì)于1，25-二羥基維生素D3配體的敏感性，其結(jié)果為夸大了該配體抑制來自Str-AP1-CAT報(bào)告因子的表達(dá)。實(shí)施例15介紹了用于證明AGN193109加強(qiáng)1，25-二羥基維生素D3的抗AP-1活性的方法。實(shí)施例15AGN193109加強(qiáng)1，25-二羥基維生素D3的抗AP-1活性根據(jù)Nagpal等人[J.Biol.Chem.270923(1995)]所述方法，使用LIPOFECTAMINE，用1μg的Str-AP1-CAT使Lela細(xì)胞轉(zhuǎn)染。用單獨(dú)的AGN193109(10-9-10-7M)、單獨(dú)的1，25-二羥基維生素D3(10-12-10-7M)或在10-8M的AGN193109存在下的1，25-二羥基維生素D3(10-12-10-7M)處理轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。這些過程的結(jié)果表明AGN193109加強(qiáng)1，25-二羥基維生素D3抑制TPA誘導(dǎo)的AP-1活性的能力。當(dāng)以10-9-10-7M的濃度范圍單獨(dú)使用時(shí)，AGN193109無可檢測(cè)到的抗AP-1活性。在圖13中所示的結(jié)果顯示1，25-二羥基維生素D3只有在10-8-10-7M的濃度范圍內(nèi)才阻遏TPA刺激的活性。分析在10-8MAGN193109存在下，1，25-二羥基維生素D3介導(dǎo)對(duì)TPA刺激的CAT活性的阻遏作用表明抗AP-1活性在10-10-10-9M的1，25-二羥基維生素D3下為可檢測(cè)到的，并且與單獨(dú)用1，25-二羥基維生素D3治療相比，在10-8-10-7M劑量下活性增加。該AGN193109依賴性調(diào)節(jié)1，25-二羥基維生素D3介導(dǎo)的抗AP-1活性與其中NCP對(duì)RARs的螯合作用使得該NCP不能用于與其它核受體家族成員相互作用的模型一致。因而，使該受體對(duì)于1，25-二羥基維生素D3治療更敏感。以下RAR介導(dǎo)反式激活和抗AP-1活性的機(jī)理可能不同。該結(jié)論基于我們的觀察即高劑量的AGN193109完全抑制反式激活而基本不抑制抗AP-1活性。因而，希望獲得其它的證據(jù)以便支持作為由AGN193109治療介導(dǎo)的RAR*形成的模型。為此，我們研究是否AGN193109可以加強(qiáng)RAR特異性興奮劑AGN191183在體外反式激活測(cè)試中的活性。實(shí)施例16介紹用于證明193109加強(qiáng)RAR特異性興奮劑AGN191183活性的方法。該過程的結(jié)果顯示在特定情況下，AGN193109提高RAR特異性視黃醛衍生物的效力并提供AGN193109促進(jìn)RAR*形成的強(qiáng)有力的證據(jù)。實(shí)施例16通過共同給予AGN193109加強(qiáng)視黃醛衍生物的效力使用Felgner等人[Proc.Natl.Acad.Sci.USA847413(1987)]所述的陽離子質(zhì)脂體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞。將5×104細(xì)胞平面接種在12孔的多孔接種板上并在加入10％FBS的DMEM中生長(zhǎng)。使用LIPOFECTAMINE試劑(2μg/孔，LifeTechnologies，Inc.)，用含有插入報(bào)告質(zhì)粒ΔMTV-Luc[Heymanetal.inCell68397(1992)]中的兩個(gè)復(fù)制TREpal應(yīng)答元件5’-TCAGGTCATGACCTGA-3’(SEQIDNO5)的0.7μg的報(bào)告質(zhì)粒MTV-TREp-Luc和0.1μg的RAR-γ表達(dá)質(zhì)粒pRShRAR-γ(Ishikawaetal.Mol.Endocrinol.4837(1990))在不含血清培養(yǎng)基中使細(xì)胞共轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后6小時(shí)，供給細(xì)胞終濃度為10％的含有活性炭提取的FBS的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染后18小時(shí)，用單獨(dú)溶媒(乙醇)或以終濃度為10-11-10-8M的AGN193109的乙醇溶液處理細(xì)胞。6小時(shí)后，加入乙醇中的AGN191183到終濃度為0、10-10或10-9M。用AGN191183處理后18小時(shí)收獲細(xì)胞并如上所述，測(cè)定熒光素酶活性。初步實(shí)驗(yàn)表明10-9M的AGN193109在抑制對(duì)于10-9M的AGN191183在Hela細(xì)胞中的應(yīng)答相對(duì)無效。這與10-9M的AGN193109抑制在CV-1細(xì)胞中的10-8MATRA(圖2)形成對(duì)照。在圖14中所示的結(jié)果支持AGN193109刺激RAR*形成的預(yù)測(cè)。與AGN193109的拮抗劑和負(fù)性激素活性的鑒定一致，用AGN193109處理導(dǎo)致兩相性的劑量應(yīng)答曲線。AGN193109的最低劑量(10-11-10-10M)導(dǎo)致超過單獨(dú)AGN191183的對(duì)熒光素酶活性的刺激。該作用提示RAR*s由AGN193109所產(chǎn)生。令人好奇的是，該結(jié)果從AGN193109的單獨(dú)治療中也可見，提示RAR*’s可以對(duì)內(nèi)源性配體產(chǎn)生應(yīng)答。AGN191183為合成的視黃醛衍生物興奮劑，與ATRA類似，通過RARs激活轉(zhuǎn)錄。AGN191183代替實(shí)施例7中的ATRA將給出定量的類似結(jié)果(即AGN193109將拮抗10nMAGN191183的作用)。實(shí)施例16說明盡管AGN193109可以作為RAR興奮劑的拮抗劑發(fā)揮作用，劑量給藥條件可以容易地識(shí)別，其中AGN193109共同給藥加強(qiáng)了由RAR興奮劑介導(dǎo)的激活作用。注意到用于實(shí)施例16中化合物的劑量基本低于在實(shí)施例7所述方法中使用的劑量是重要的。我們認(rèn)為AGN193109治療可以導(dǎo)致RAR異質(zhì)性RARs對(duì)于RAR*s。表觀異質(zhì)性(即加強(qiáng)的能力)似乎在對(duì)于AP-1阻遏的反式激活中具有不同的窗口。所述曲線為雙相的原因?yàn)殡S著AGN193109量的增加，可以用于與所述興奮劑結(jié)合的RAR成比例地降低。這對(duì)于AP-1阻遏情況似乎不是這樣，我們?nèi)匀煌茰y(cè)這種差異必然反映通過相同受體物種反式激活和AP-1阻遏的兩種不同的機(jī)理。臨床結(jié)果已經(jīng)證實(shí)一些視黃醛衍生物用于抑制惡化前和惡化的頸損害部分的生長(zhǎng)。用于支持該結(jié)論的實(shí)例性研究已由Graham等人在WestJ.Med.145192(1986)，由Lippman等人在J.Natl.CancerInst.84241(1992)和由Weiner等人在Invest.NewDrugs4241(1986)上發(fā)表。類似的結(jié)論得到用于培養(yǎng)細(xì)胞以使不同的視黃醛衍生物的抗增生作用定量的體外研究結(jié)果的支持。更準(zhǔn)確地說，Agarwal等人在CancerRes.513982(1991)中使用ECE16-1細(xì)胞系于頸發(fā)育不良的早期階段的模型并證明視黃酸可以抑制表皮生長(zhǎng)因子(EGF)依賴性細(xì)胞增生。實(shí)施例17介紹用于證明AGN193109可以拮抗AGN191183視黃醛衍生物興奮劑的活性(它可以抑制ECE16-1細(xì)胞系的增生)的方法。實(shí)施例17AGN193109拮抗視黃醛衍生物在ECE16-1細(xì)胞中的抗增生作用在含有DMEMF12(3∶1)、非必需氨基酸、5％FBS、5μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白、2nM的3，3’，5-三碘甲狀腺氨酸(甲狀腺激素或“T3”)、0.1nM的霍亂毒素、2nM的L-谷氨酰胺、1.8×10-4M的腺嘌呤和10ng/mlEGF的全培養(yǎng)基中，以密度為1×104細(xì)胞/cm2接種ECE16-1細(xì)胞。使細(xì)胞附在接種平面上過夜，然后轉(zhuǎn)移到含有DMEMF12(3∶1)、2mML-谷氨酰胺、非必需氨基酸、0.1％牛血清白蛋白、1.8×10-4M的腺嘌呤、5μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白、2nM的T3、50μg/ml抗壞血酸、100μg/ml鏈霉素、100單位/ml的青霉素和50μg/ml慶大霉素的限定的培養(yǎng)基中。補(bǔ)充10ng/mlEGF到限定的培養(yǎng)基(DM)中。EGF處理的細(xì)胞接受10nM的AGN191183視黃醛衍生物興奮劑結(jié)合0、0.1、1.0、10、100或1000nMAGN193109，或者單獨(dú)1000nM的AGN193109。處理3天后，如Hembree等人[CancerRes.543160(1994)]所述收獲細(xì)胞并用COULTER計(jì)數(shù)器測(cè)細(xì)胞數(shù)目。圖15中所示結(jié)果證明作為對(duì)EGF的應(yīng)答但不在單獨(dú)的限定培養(yǎng)基中ECE16-1細(xì)胞增生。這證實(shí)了由Andreatta-vanLeyen等人[J.Cell.Physio.160265(1994)]和由Hembress等人[CancerRes.543160(1994)]所公開的發(fā)現(xiàn)結(jié)果。加入10nMAGN191183和0nM的AGN193109完全抑制EGF介導(dǎo)的增生。因而，AGN191183為有效的抗增生視黃醛衍生物。增加AGN193109濃度由0nM-10nM拮抗AGN191183介導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制達(dá)約50％。10倍摩爾過量的AGN193109完全逆轉(zhuǎn)AGN191183的抗增生作用。用1000nM193109單獨(dú)處理細(xì)胞對(duì)于EGF介導(dǎo)的增生增加沒有作用。這些結(jié)果證明AGN193109拮抗視黃醛衍生物的抗增生作用，然而當(dāng)用于處理代表頸上皮的細(xì)胞(它對(duì)視黃醛衍生物例如AGN191183的生長(zhǎng)抑制敏感)時(shí)，其本身基本上沒有抗增生的作用。引人注意的是，沒有證據(jù)表明使用ECE16-1模式系統(tǒng)，AGN193109加強(qiáng)AGN191183興奮劑的抗增生作用。與ECE16-1細(xì)胞系所代表的模式系統(tǒng)相比，有其它實(shí)施例，其中與頸發(fā)育不良有關(guān)的細(xì)胞增生不能被視黃醛衍生物興奮劑所抑制。例如，Agarwal等人[CancerRes.542108(1994)]介紹CaSki細(xì)胞作為頸腫瘤模型的用途，它們對(duì)于視黃醛衍生物治療無應(yīng)答。如下所述，除了抑制細(xì)胞增生外，視黃醛衍生物治療對(duì)于CaSki細(xì)胞的生長(zhǎng)速率基本沒有影響。以下實(shí)施例強(qiáng)調(diào)AGN193109負(fù)性激素對(duì)于該細(xì)胞系增生速率的作用。其結(jié)果出人預(yù)料地證明AGN193109可以抑制頸腫瘤細(xì)胞(它們對(duì)于視黃醛衍生物興奮劑的抗增生作用無應(yīng)答)的增生。實(shí)施例18介紹用于證明AGN193109對(duì)于其它視黃醛衍生物例如AGN191183的抗增生作用無應(yīng)答的頸腫瘤細(xì)胞系生長(zhǎng)的抑制作用的方法。AGN193109在無加入的視黃醛衍生物存在下明顯地顯示抗增生的活性。實(shí)施例18AGN193109抑制來自CaSki頸癌細(xì)胞系的增生速率我們檢驗(yàn)了EGF以10-6M濃度單獨(dú)或與AGN191183視黃醛衍生物興奮劑和/或AGN193109負(fù)性激素結(jié)合對(duì)于CaSki細(xì)胞增生的作用。如上所述涉及ECE16-1細(xì)胞的研究的方法進(jìn)行細(xì)胞增生測(cè)試。將EGF加入所述視黃醛衍生物處理培養(yǎng)物中，以便產(chǎn)生終濃度20ng/ml。在存在或不存在10-6M的AGF193109的情況下，用AGN191183(10-10-10-6M)處理細(xì)胞總共3天。如合適，每天用新的培養(yǎng)基和兩種視黃醛衍生物中的每一種替換所述培養(yǎng)基。如上所述，用COULTOER計(jì)數(shù)器測(cè)定細(xì)胞數(shù)量。圖16的所示結(jié)果表明CaSki細(xì)胞對(duì)于視黃醛衍生物興奮劑的作用基本不應(yīng)和AGN193109顯示在無加入的視黃醛衍生物存在下抗增生活性。在所述培養(yǎng)基中EGF的存在刺激CaSki細(xì)胞生長(zhǎng)。該結(jié)論是基于代表無AGN191183的斜線條和代表單獨(dú)限定的生長(zhǎng)培養(yǎng)基(“DM”)的空心條的比較。AGN191183處理對(duì)于CaSki腫瘤細(xì)胞系沒有抗增生的作用。我們忽視與視黃醛衍生物興奮劑有關(guān)的細(xì)胞增生速率中任何微小的增加，因?yàn)樵谒鲆朁S醛衍生物濃度上1萬倍的增加與在增生速率上只大約增加20％相關(guān)聯(lián)。從而，AGN191183興奮劑對(duì)于CaSki細(xì)胞的增生速率基本沒有作用。在圖16中所示結(jié)果也表明AGN193109抑制CaSki頸表皮細(xì)胞系的增生。該結(jié)論基于作為“0”AGN191183黑色條和“0”AGN191183斜線條的測(cè)定結(jié)果的比較。從而，AGN193109當(dāng)用于處理由視黃醛衍生物興奮劑例如AGN191183抑制不生長(zhǎng)的頸腫瘤細(xì)胞時(shí)，能夠刺激無加入的視黃醛衍生物存在下的生物應(yīng)答。我們的發(fā)現(xiàn)即AGN193109負(fù)性激素能夠抑制細(xì)胞增生與其中未與配體結(jié)合的RAR介導(dǎo)的為增生所需要的基因表達(dá)的模型一致。盡管RAR興奮劑例如AGN191183基本對(duì)于細(xì)胞增生沒有作用或略微有促進(jìn)作用，AGN193109具有抗增生作用。所述AGN193109負(fù)性激素可能與RARs結(jié)合，從而促進(jìn)NCP結(jié)合和使得RARs采用非活性構(gòu)象。根據(jù)我們的模型，它阻遏受未與配體結(jié)合的RARs正性調(diào)節(jié)的基因活性。所述AGN193109下型調(diào)節(jié)未與配體結(jié)合的RARs的活性的能力可能產(chǎn)生于其促進(jìn)RARs與NCPs結(jié)合的能力。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將理解某些視黃醛衍生物興奮劑用于控制視網(wǎng)膜脫離后細(xì)胞生長(zhǎng)的不需要的結(jié)果。在視網(wǎng)膜脫離后，視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)間變、增生和遷移到視網(wǎng)膜下空間中。該過程對(duì)于針對(duì)視網(wǎng)膜再附著的外科手術(shù)的成功具有不利的影響。Campochiaro等人[Invest.Opthal&Vis.Sci.3265(1991)]已經(jīng)證明RAR興奮劑例如ATRA顯示對(duì)于初級(jí)的人RPE培養(yǎng)物的生長(zhǎng)的抗增生作用。視黃醛衍生物興奮劑也已經(jīng)顯示降低視網(wǎng)膜再附著手術(shù)后視網(wǎng)膜脫離的機(jī)會(huì)[Fekratetal.Opthamology102412(1994)]。如下列實(shí)施例中所公開的內(nèi)容，我們分析了AGN193109負(fù)性激素抑制在初級(jí)人RPE培養(yǎng)物中生長(zhǎng)的能力。實(shí)施例19介紹了用于證明AGN193109加強(qiáng)在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的初級(jí)培養(yǎng)物中的視黃醛衍生物拮抗劑的抗增生作用。實(shí)施例19AGN193109加強(qiáng)ATRA的抗增生活性根據(jù)Campochiaro等人[Invest.Opthal&Vis.Sci.3265(1991)]中所述方法確立人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)的初級(jí)培養(yǎng)物。將5×104細(xì)胞平面接種到在24孔多孔接種板的16-mm孔的含有5％FBS的DMEM(Gibco)中。細(xì)胞模擬用單獨(dú)的乙醇溶媒、乙醇中的ATRA(10-10-10-6M)、乙醇中的AGN193109(10-10-10-6M)或ATRA(10-10-10-6M)和10-6M的AGN193109處理。給細(xì)胞提供含有合適濃度的這些化合物的新的培養(yǎng)基，每?jī)商煲淮危偣蔡幚?天。通過用胰蛋白酶溫和消化自所述接種板上轉(zhuǎn)移細(xì)胞，用電子細(xì)胞計(jì)數(shù)器記錄細(xì)胞數(shù)量。在圖17中所示的結(jié)果顯示AGN193109令人注目地加強(qiáng)ATRA對(duì)于RPE細(xì)胞的抗增生活性。用ATRA處理初級(jí)RPE細(xì)胞導(dǎo)致在RPE細(xì)胞增生方面劑量依賴性降低，與對(duì)照培養(yǎng)物相比在10-6MATRA下降低約40％。在所述過程中任何檢測(cè)濃度下，AGN193109處理基本不改變RPE細(xì)胞的生長(zhǎng)速度。出乎意料的是，ATRA(10-11-10-6M)和10-6M的AGN193109的聯(lián)合使用具有比單獨(dú)的ATRA更強(qiáng)的抗增生活性。從而，AGN193109共處理加強(qiáng)ATRA的抗增生作用。更準(zhǔn)確地說，在所述圖中所示的結(jié)果表明只使用10-10MATRA結(jié)合10-7MAGN193109可以獲得10-8MATRA的抗增生作用。從而，AGN193109負(fù)性激素可有利地提高ATRA的抗增生活性約100倍。在獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中，比較ATRA(10-11-10-6M)與ATRA和10-6M的AGN193109的抗增生作用再次表明在AGN193109在存在下，初級(jí)RPE細(xì)胞對(duì)于ATRA的敏感性明顯增加。在該系統(tǒng)中，AGN193109當(dāng)單獨(dú)適用時(shí)，既不作為視黃醛衍生物拮抗劑發(fā)揮作用，也不顯示抗增生作用。然而，共同給予AGN193109加強(qiáng)所述視黃醛衍生物興奮劑的抗增生作用。使用上述測(cè)定RPE細(xì)胞增生的條件和技術(shù)，檢驗(yàn)AGN193109在初級(jí)RPE培養(yǎng)物中加強(qiáng)13-順式視黃酸(13-順式PA)的抗增生作用。引人注目的是，13-順式RA在臨床上是重要的化合物。更具體地說，13-順式RA結(jié)合干擾素2α[Lippmanetal.J.Natl.CancerInst.84241(1992)；Mooreetal.SeminarsinHematology3131(1994)]用于治療幾種疾病，包括痤瘡[Pecketal.N.Engl.J.Med.300329(1977)；Jonesetal.Br.J.Dermatol.108333(1980)]和皮膚和子宮頸鱗狀細(xì)胞癌。在圖18中所示結(jié)果顯示13-順式RA(10-12-10-6M)和ATRA(10-12-10-6M)均可以有效地抑制RPE細(xì)胞生長(zhǎng)。引人注目的是，13-順式異構(gòu)體當(dāng)與ATRA比較在該測(cè)試中效力約低兩個(gè)數(shù)量級(jí)。與使用AGN193109和ATRA(上述)共同給藥獲得的結(jié)果類似，共同給予AGN193109(10-8或10-6M)及13-順式PA(10-12-10-6M)在RPE細(xì)胞增生的調(diào)節(jié)表達(dá)中顯著地增加13-順式RA的效力。與單獨(dú)用13-順式RA處理相比，共同給予AGN193109提高了13-順式PA的效力。從而，AGN193109加強(qiáng)13-順式RA的抗增生活性。其次，我們檢驗(yàn)了AGN193109加強(qiáng)初級(jí)RPE細(xì)胞培養(yǎng)物中其它核受體激素的活性的能力。地塞米松(合成糖皮質(zhì)激素受體興奮劑)為一類因其有效的抗炎和免疫抑制性質(zhì)臨床上已經(jīng)使用的化合物的一個(gè)成員。甲狀腺激素(T3；3，3’，5’-三碘代甲狀腺氨酸)為主要用于在治療甲狀腺機(jī)能減退的激素替代療法中的天然甲狀腺激素受體興奮劑。用于這些實(shí)驗(yàn)中的方法與上述用于使用ATPA和13-順式PA過程中所述方法一致。這些方法的結(jié)果顯示共同給予AGN193109和所述核受體興奮劑加強(qiáng)所述核受體興奮劑的抗增生活性。更準(zhǔn)確地說，在圖19中所示結(jié)果顯示用地塞米松(10-11-10-6M)或ATRA(10-12-10-6M)單一藥物處理RPE細(xì)胞基本不能夠抑制RPE細(xì)胞的增生。然而，用地塞米松(10-11-10-6M)和10-8或10-6M的AGN193109處理RPE細(xì)胞阻遏RPE細(xì)胞增生到大約為用ATRA處理所引起的抑制的程度。類似地，圖20中所示結(jié)果顯示AGN193109加強(qiáng)甲狀腺激素的抗增生活性。與使用地塞米松所得結(jié)果類似，RPE細(xì)胞的增生對(duì)于使用甲狀腺激素(10-11-10-6M)單獨(dú)藥物處理為不應(yīng)的。然而，使用甲狀腺激素(10-11-10-6M)和AGN193109(10-8或10-6M)共同處理RPE細(xì)胞，以甲狀腺激素依賴性方式抑制RPE細(xì)胞的增生。我們得出結(jié)論AGN193109使得初級(jí)RPE培養(yǎng)物對(duì)于這些核受體興奮劑的抗增生作用敏感。AGN193109介導(dǎo)這些作用的機(jī)理可能涉及調(diào)節(jié)NCP/RAR的相互作用。此外，我們檢驗(yàn)了對(duì)于視黃醛衍生物興奮劑敏感的其它實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中AGN193109對(duì)于標(biāo)記基因表達(dá)的作用。已知MRP8和stromelysin基因在各種生物系統(tǒng)中受到視黃醛衍生物興奮劑的抑制作用。例如，Wilkinson等人[JCellSci.91221(1988)]和Madsen等人[J.Invest.Dermatol.99299(1992)]已經(jīng)公開在牛皮癬中MRP8基因的表達(dá)被提高。相反，在人的牛皮癬皮膚(Nagpaletal.，submitted1995)、在人的角化細(xì)胞培養(yǎng)物[Chandraratnaetal.J.Invest.Dermatol.102625(1994)]和在培養(yǎng)的人的新生包皮角化細(xì)胞[Thacheretal.J.Invest.Dermatol.104594(1995)]中視黃醛衍生物興奮劑AGN190168阻遏MRP8基因的表達(dá)。Nagpal等人[J.Biol.Chem.270923(1995)]已經(jīng)公開了在培養(yǎng)的人的新生包皮角化細(xì)胞中，視黃醛衍生物興奮劑例如AGN190168阻遏stromelysinmRNA的水平。我們分析了在用AGN191183興奮劑或AGN193109處理培養(yǎng)的人的新生包皮角化細(xì)胞后，這些基因調(diào)節(jié)的表達(dá)。實(shí)施例20介紹用于顯示AGN193109抑制在培養(yǎng)的角化細(xì)胞中的MRP-8的表達(dá)。實(shí)施例20AGN193109抑制在角化細(xì)胞中的MRP-8的表達(dá)根據(jù)Nagpal等人[J.Biol.Chem.270923(1995)]所述方法將初期的包皮角化細(xì)胞分離并在購自Clonetics的角化細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(KGM)中培養(yǎng)。用AGN191183(10-7M)或AGN193109(10-6M)處理3天后，按照標(biāo)準(zhǔn)方法，自處理和對(duì)照角化細(xì)胞中分離總的細(xì)胞RNA。使用作為甘油醛磷酸鹽脫氫酶(GAPDH)看家基因或MRP-8特異的引物將其mRNA逆轉(zhuǎn)錄成為cDNA，它然后在擴(kuò)增記錄中作為模板。所述GAPDH引物具有以下序列5’-CCACCCATGGCAAATTCCATGGCA-3’(SEQIDNO6)和5’-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC-3’(SEQIDNO7)。所述MRP-8引物具有的序列為5’-ACGCGTCCGGAAGACCTGGT-3’(SEQIDNO8)和5’-ATTCTGCAGGTACATGTCCA-3’(SEQIDNO9)。從12個(gè)循環(huán)開始到21個(gè)循環(huán)結(jié)束的每一個(gè)循環(huán)PCR擴(kuò)增后，轉(zhuǎn)移來自MRP-8擴(kuò)增反應(yīng)的等份試樣(10μl)。類似地，從15個(gè)循環(huán)開始到24個(gè)循環(huán)結(jié)束的每一個(gè)PCR循環(huán)后，轉(zhuǎn)移GAPDH擴(kuò)增反應(yīng)的等份試樣。將樣品在2％瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳并通過溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶嗡染色檢測(cè)所分離的擴(kuò)增產(chǎn)物。所述擴(kuò)增產(chǎn)物的染色強(qiáng)度作為對(duì)于給定的引物系列特異性的起始mRNA的定量測(cè)定。該過程的結(jié)果顯示AGN191183和AGN193109獨(dú)立地抑制MRP-8在角化細(xì)胞中的表達(dá)。所述染色GAPDH擴(kuò)增產(chǎn)物的強(qiáng)度在代表自對(duì)照物、AGN191183就AGN193109處理的角化細(xì)胞中分離的起始物質(zhì)的凝膠的流道中基本為相等的。代表GAPDH擴(kuò)增產(chǎn)物的弱帶為在相應(yīng)在18個(gè)循環(huán)的PCR擴(kuò)增后轉(zhuǎn)移的樣品的流道中首先可檢測(cè)到的。在凝膠的不同流道中等量染色強(qiáng)度表明等量的起始物質(zhì)用于所有樣品中。因此，在代表MRP-8擴(kuò)增產(chǎn)物的染色帶的強(qiáng)度中的差異表示在不同的起始樣品中MRP-8mRNA表達(dá)中的差異。如同所預(yù)料的，與未處理的對(duì)照相比，在AGN191183(10-7M)處理的培養(yǎng)基中使MRP-8擴(kuò)增信號(hào)被抑制。如通過染色擴(kuò)增產(chǎn)物的較低強(qiáng)度所判斷的，AGN193109(10-6M)處理培養(yǎng)的角化細(xì)胞也阻遏MRP8的表達(dá)。如下列實(shí)施例中所述，AGN193109也抑制在角化細(xì)胞中第二標(biāo)記基因的表達(dá)。Nagpal等人[J.Biol.Chem.270923(1995)]公開了stromelysinmRNA表達(dá)在培養(yǎng)的人的新生包皮角化細(xì)胞中受RAR特異性興奮劑的下行調(diào)節(jié)。Nicholson等人[EMBOJ.94443(1990)]公開AP-1啟動(dòng)子元件在stromelysin-1基因的視黃醛衍生物依賴性負(fù)性調(diào)節(jié)中起著重要的作用。從而，確定AGN193109是否可以改變?cè)摶虻谋磉_(dá)是重要的。實(shí)施例21介紹用于證明AGN193109在無外源性加入的視黃醛衍生物興奮劑存在的情況下抑制stromelysin-1基因的表達(dá)。實(shí)施例21AGN193109抑制在培養(yǎng)的角化細(xì)胞中的stromelysin-1的表達(dá)用RAR興奮劑AGN191183(10-7M)或AGN193109(10-6M)將初期包皮角化細(xì)胞模式處理或處理24小時(shí)。由模式處理和視黃醛衍生物處理的角化細(xì)胞制備的總的RNA反式轉(zhuǎn)錄并完全按照Nagpal等人[J.Biol.Chem.270923(1995)]所述方法，使用β-肌動(dòng)蛋白或stromelysin-1寡引物使所形成的cDNAPCR擴(kuò)增。從PCR擴(kuò)增的18個(gè)循環(huán)開始的每3個(gè)循環(huán)后，自所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)轉(zhuǎn)移樣品(10μl)。將該樣品在2％瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳并在溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶鎓染色后進(jìn)行檢測(cè)。這些過程的結(jié)果表明AGN193109在沒有外源性加入的視黃醛衍生物興奮劑的情況下抑制stromelysin基因表達(dá)。更準(zhǔn)確地說，代表β-肌動(dòng)蛋白擴(kuò)增產(chǎn)物的溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶鎓染色帶在PCR的18個(gè)循環(huán)后的瓊脂糖凝膠中是容易檢測(cè)的。盡管所有帶強(qiáng)度隨著所述擴(kuò)增作用循環(huán)的增加而增加，代表AGN191183處理細(xì)胞的樣品中染色帶強(qiáng)度略有降低。這表明稍降低量的RNA必定已經(jīng)存在于相應(yīng)用AGN191183處理的細(xì)胞的起始樣品中。該結(jié)果也表明stromelysin-1mRNA在PCR擴(kuò)增的33個(gè)循環(huán)開始的模式處理的角化細(xì)胞中是可檢測(cè)的。如所期待的，如通過與來自模式處理樣品的樣品相比的較弱的帶的強(qiáng)度所判斷的，AGN191183(10-7M)處理后，stromelysin-1mRNA的表達(dá)受到抑制。當(dāng)使常態(tài)化到β-肌動(dòng)蛋白擴(kuò)增產(chǎn)物的強(qiáng)度并與在MRP-8表達(dá)測(cè)定中所獲得的結(jié)果一致時(shí)，角化細(xì)胞的AGN193109(10-6M)處理導(dǎo)致下行調(diào)節(jié)stromelysin-1mRNA的水平。實(shí)際上，由AGN193109處理刺激的下行調(diào)節(jié)與用RAR興奮劑AGN191183處理角化細(xì)胞引起的下行調(diào)節(jié)無區(qū)別。正如在此所公開的，AGN193109可以具有調(diào)節(jié)共同給予的甾體超家族興奮劑活性的三種可能作用中的任何一種。首先，AGN193109可以沒有作用。其次，AGN193109可以拮抗所述興奮劑的作用，從而導(dǎo)致所述興奮劑活性的降低。最后，AGN193109可以加強(qiáng)所述興奮劑的活性，從而導(dǎo)致由所述興奮劑產(chǎn)生的測(cè)定的效果的刺激作用。具有可以被AGN193109所調(diào)節(jié)的活性的化合物包括視黃醛衍生物受體興奮劑和與甾體受體超家族的其它成員結(jié)合的興奮劑。后一類型的興奮劑包括維生素D受體興奮劑、糖皮質(zhì)激素受體興奮劑和甲狀腺激素受體興奮劑。具有目前未知配體的過氧化物酶增生劑-激活受體、雌激素受體和孤兒受體也可以被AGN193109加強(qiáng)。其中所述甾體超家族興奮劑為RAR興奮劑的情況下，AGN193109可以拮抗或加強(qiáng)該興奮劑的活性。其中與AGN193109結(jié)合使用的興奮劑為可以與除了RAR外的核受體結(jié)合的化合物的情況下，共同給予AGN193109將沒有作用或?qū)υ撆d奮劑系統(tǒng)變得敏感，以至使該興奮劑的活性得到加強(qiáng)。用于檢測(cè)在具體系統(tǒng)中AGN193109將具有三種可能活性中的哪一種的一般化實(shí)例性方法如下。本說明書介紹AGN193109與甾體受體超家族興奮劑共同給藥的每種可能的結(jié)果。用于評(píng)價(jià)AGN193109調(diào)節(jié)核受體興奮劑活性的能力的生物學(xué)系統(tǒng)包括(但不限于)已建立組織培養(yǎng)細(xì)胞系、病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞系、體外-體內(nèi)初級(jí)培養(yǎng)細(xì)胞和利用活體的體內(nèi)研究。在這類系統(tǒng)中，AGN193109生物作用的測(cè)定可以包括測(cè)定各種生物學(xué)端點(diǎn)(endpoint)的任何一個(gè)。這些端點(diǎn)包括細(xì)胞增生分析、程序化細(xì)胞死亡分析(apoptosis)、通過基因表達(dá)測(cè)試的細(xì)胞差異狀態(tài)分析、細(xì)胞在裸鼠中形成腫瘤能力的分析和短暫和穩(wěn)定的引種報(bào)告基因構(gòu)成物后基因表達(dá)的分析。為了說明，指定為mRNA“X”的mRNA種在自器官“Z”分離的初級(jí)培養(yǎng)的“Y”細(xì)胞中由基因“X”表達(dá)。在標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)條件下，其中保留幾個(gè)“Y”細(xì)胞遺傳標(biāo)記，包括基因“X”的表達(dá)，加入視黃醛衍生物興奮劑導(dǎo)致“X”mRNA富余性的降低。通過分離細(xì)胞mRNA和通過聚合酶鏈反應(yīng)、核糖核酸酶保護(hù)或RNA印跡方法例如Northern分析測(cè)定XmRNA富余性水平可以評(píng)價(jià)基因X的表達(dá)的分析。在分離器官Z后，在合適的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)初級(jí)Y細(xì)胞。然后，將該初級(jí)培養(yǎng)物接種到用于放大細(xì)胞群的組織培養(yǎng)接種板中。該步驟有助于將所述細(xì)胞分離成4個(gè)樣品組，以便可以使用各種劑量的視黃醛衍生物興奮劑和AGN193109。第一組為對(duì)照組，只接受溶媒。第二組以足以提供最終濃度為10-11-10-6M的量接受RAR興奮劑、視黃酸(在乙醇中給予)。最低劑量可以根據(jù)所述系統(tǒng)的敏感性由經(jīng)驗(yàn)確定。該確定方法在本領(lǐng)域內(nèi)普通技術(shù)人員所知的一般實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)。第三組將以處理第二組細(xì)胞所用的相同劑量接受所述核受體興奮劑和接受常量的AGN193109。用于處理第三組細(xì)胞的AGN193109的劑量將由經(jīng)驗(yàn)確定，但應(yīng)該接近于AGN193109對(duì)于RAR亞型的親合力常數(shù)(Kd)(即至少10-8M)。第四組接受最低劑量的AGN193109，包括用于在第三組中興奮劑共同給藥。作為該劑量制度的改變將用AGN193109代替上述實(shí)施例中所述的視黃醛衍生物興奮劑，具體在第二組中，并用常量的視黃醛衍生物興奮劑代替AGN193109，具體在第三和第四組中。在合適的孵育期后，以適于檢測(cè)作為興奮劑活性的指示器測(cè)定的生物學(xué)端點(diǎn)的方式收獲細(xì)胞。例如，分析AGN193109對(duì)于基因表達(dá)的視黃酸依賴性調(diào)節(jié)的作用包括在自根據(jù)上述四種方案中每一種處理的細(xì)胞收獲的mRNA儲(chǔ)備中，比較mRNA種X的富余性。來自所述對(duì)照細(xì)胞的RNA將用作測(cè)定XmRNA的基線表達(dá)并代表相應(yīng)于不阻遏的條件。將該水平與用視黃酸處理的細(xì)胞衍生的mRNA的儲(chǔ)備中測(cè)定的水平相比較可以測(cè)定該興奮劑對(duì)于基因表達(dá)的作用。然后，可以將定量水平的產(chǎn)生于視黃酸處理的特異性mRNAs表達(dá)與來自用單獨(dú)的AGN193109或與視黃酸結(jié)合的AGN193109平行處理細(xì)胞的mRNA富余性相比較。該一般化的實(shí)例介紹了共同給予AGN193109對(duì)于由視黃醛衍生物興奮劑阻遏的基因表達(dá)作用的分析的同時(shí)，該實(shí)例另外也介紹了共同給予AGN193109對(duì)于由視黃醛衍生物興奮劑所誘導(dǎo)的基因的作用的分析。用于確定是否AGN193109將作為興奮劑、作為負(fù)性激素發(fā)揮作用或在特定系統(tǒng)中無作用的重要特征包括定量地比較存在和不存在AGN193109情況下所述作用的大小。其中AGN193109加強(qiáng)共同給予的興奮劑的活性的實(shí)例為與視黃酸共同給予AGN193109產(chǎn)生相對(duì)單獨(dú)用視黃酸處理的細(xì)胞所測(cè)水平的被進(jìn)一步阻遏的XmRNA表達(dá)的水平的情況。更準(zhǔn)確地說，比較在Y軸上的生物作用(即對(duì)XmRNA富余性的阻遏作用)對(duì)于X軸上的興奮劑的劑量(對(duì)數(shù)尺度)的劑量應(yīng)答曲線，能夠比較存在和不存在AGN193109共同給藥的情況下，興奮劑介導(dǎo)對(duì)XmRNA富余性的阻遏作用。通過在所述劑量應(yīng)答曲線中向左位移而表明AGN193109使對(duì)于所述興奮劑的生物應(yīng)答敏感化，從而加強(qiáng)所述興奮劑活性的能力。更準(zhǔn)確地說，在存在AGN193109的情況下，將需要較少的興奮劑以便獲得與單獨(dú)使用所述興奮劑所獲得的相同的生物學(xué)作用。共同給予興奮劑的AGN193109介導(dǎo)的拮抗作用的實(shí)例為其中與視黃酸共同給予AGN193109產(chǎn)生與單獨(dú)用視黃酸處理的細(xì)胞中所測(cè)水平相比被阻遏較低的XmRNA表達(dá)的水平的情況。比較在存在和不存在AGN193109情況下，XmRNA阻遏對(duì)于興奮劑劑量的log值的劑量應(yīng)答曲線表明在所述劑量應(yīng)答曲線中向右位移。更準(zhǔn)確地說，在存在AGN193109的情況下，需要更多的興奮劑以便獲得與單獨(dú)使用所述興奮劑所獲得的相同的生物學(xué)作用。其中AGN193109介導(dǎo)拮抗作用或加強(qiáng)作用的上述實(shí)例介紹AGN193109與視黃醛衍生物興奮劑共同給藥的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。然而，如果與AGN193109共同給予的所述興奮劑為能夠與除了RAR之外的甾體受體超家族成員結(jié)合并激活，則不是拮抗該興奮劑，AGN193109可能對(duì)于所述興奮劑的活性沒有作用。如果AGN193109與這類興奮劑共同處理產(chǎn)生與單獨(dú)使用興奮劑處理細(xì)胞所測(cè)水平相同的mRNA表達(dá)的水平，則AGN193109通過促進(jìn)RARNCP結(jié)合影響NCPs的有效性的能力在該系統(tǒng)中不顯示。這是AGN193109對(duì)于共同給予的興奮劑沒有作用的實(shí)例。拮抗作用實(shí)例在實(shí)施例7中所述方法中例舉了用于測(cè)定AGN193109與視黃醛衍生物興奮劑共同給藥作用的一般化的實(shí)例中所介紹的方法。使用乙醇(對(duì)照，組1)、最終濃度為10-9-10-6M的AGN193109(組2)、與10-8M的視黃酸共同給藥的終濃度為10-9-10-6M的AGN193109(組3)或視黃酸(10-8M，組4)處理與三種視黃酸受體之一共轉(zhuǎn)染的CV-1細(xì)胞和所述視黃醛衍生物興奮劑誘導(dǎo)的MTV-TREp-Luc受體構(gòu)成物。將組1的熒光素酶活性與組4的熒光素酶活性相比能夠測(cè)定在無加入的AGN193109存在下測(cè)定視黃醛衍生物興奮劑誘導(dǎo)的熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá)。將在組3細(xì)胞中熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)與在組4細(xì)胞中測(cè)定的結(jié)果相比較表明AGN193109在該系統(tǒng)中作為視黃醛衍生物興奮劑的抑制劑發(fā)揮作用。拮抗作用的實(shí)例用于測(cè)定AGN193109與視黃醛衍生物興奮劑共同給藥作用的一般化的實(shí)例中所介紹的方法在實(shí)施例17中類似地用于測(cè)定AGN193109在ECE-16-1轉(zhuǎn)化的頸上皮細(xì)胞中作為視黃醛衍生物興奮劑介導(dǎo)的對(duì)EGF-刺激的細(xì)胞增生阻遏作用的拮抗劑的功能。在該過程中，ECE-16-1細(xì)胞的處理包括單獨(dú)用EGF處理對(duì)照樣品(組1)、用EGF和AGN193109的組合物以終濃度為10-6M(組2)處理樣品、用終濃度為10-10-10-6MEGF和AGN193109的組合物與濃度為10-8M的單劑量的視黃醛衍生物興奮劑AGN191183共同給藥(組3)處理樣品和用濃度為10-8M的EGF和AGN191183組合物(組4)處理樣品。在處理三天后，測(cè)定細(xì)胞增生速率。測(cè)定由EGF已經(jīng)刺激增生的細(xì)胞是可能的，因?yàn)榘ㄆ渌鼘?duì)照處理，其中將細(xì)胞置于不含有EGF的限定培養(yǎng)基中。將組1中細(xì)胞的數(shù)目與組4中細(xì)胞的數(shù)目比較能夠測(cè)定RAR興奮劑AGN191183阻遏EGF-刺激的ECE-16-1細(xì)胞的增生。比較組3與組4表明AGN193109拮抗該系統(tǒng)中RAR興奮劑的活性。增強(qiáng)作用實(shí)例用于測(cè)定AGN193109與視黃醛衍生物興奮劑共同給藥作用的一般化的實(shí)例中所介紹的方法也用于實(shí)施例14中，以便確定AGN193109加強(qiáng)在用1，25-二羥基維生素D3誘導(dǎo)的MTV-VDRE-Luc報(bào)告基因轉(zhuǎn)染的Hela細(xì)胞中核受體興奮劑的活性。轉(zhuǎn)染細(xì)胞的處理包括單獨(dú)溶媒(對(duì)照，組1)、終濃度為10-10-10-7M的1，25-二羥基維生素D3(組2)、終濃度為10-10-10-7M的1，25-二羥基維生素D3與終濃度為10-8或10-7M的AGN193109共同給藥(組3)和以終濃度為10-8或10-7M的AGN193109的單一藥物處理(組4)。將組1(對(duì)照)細(xì)胞中所測(cè)熒光素酶活性與組2細(xì)胞熒光素酶活性比較能夠確定1，25-二羥基維生素D3刺激熒光素酶活性為劑量依賴性的。比較在組4(AGN193109單獨(dú)給藥處理)細(xì)胞中測(cè)定的熒光素酶活性與在組3(共同給予AGN193109)細(xì)胞中測(cè)定的熒光素酶活性，類似地能夠在給定濃度的AGN193109的存在下測(cè)定劑量依賴性1，25-二羥基維生素D3刺激的熒光素酶活性。在該情況下，零值代表在單獨(dú)用AGN193109(組4)處理的細(xì)胞中熒光素酶活性。該劑量制度考慮比較1，25-二羥基維生素D3三種劑量應(yīng)答曲線。比較無AGN193109情況下1，25-二羥基維生素D3的劑量應(yīng)答曲線與代表共同給予AGN193109(10-8或10-7M)的曲線的結(jié)果證明如通過在半數(shù)最大應(yīng)答中向左位移所證實(shí)的加強(qiáng)所述興奮劑的活性。增強(qiáng)作用的實(shí)例在用于測(cè)定AGN193109與視黃醛衍生物興奮劑共同給藥的作用的一般化的實(shí)例中所述方法進(jìn)一步用于在實(shí)施例19中測(cè)定AGN193109加強(qiáng)在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的初級(jí)培養(yǎng)物中RAR興奮劑的抗增生活性。細(xì)胞的處理包括單獨(dú)的乙醇溶媒(組1)、以終濃度為10-10-10-6M的視黃酸(組2)、以終濃度為10-10-10-6M的視黃酸共同給予10-6MAGN193109(組3)和以終濃度為10-10-10-6M單獨(dú)的AGN193109(組4)。比較使用組1和組2細(xì)胞獲得的測(cè)定結(jié)果考慮確定通過視黃酸的劑量依賴性抑制這些細(xì)胞的增生。類似地，比較使用組3細(xì)胞獲得的結(jié)果與組1所獲結(jié)果考慮確定在共同給予AGN193109的情況下，通過視黃酸的劑量依賴性抑制這些細(xì)胞的增生。組4證明AGN193109當(dāng)作為單獨(dú)處理藥物時(shí)，基本上沒有改變這些細(xì)胞增生速率的能力。比較在組2和組3中產(chǎn)生的視黃酸介導(dǎo)細(xì)胞增生的阻遏作用的劑量應(yīng)答曲線為AGN193109使初級(jí)RPE細(xì)胞對(duì)于所述RAR興奮劑的抗增生作用敏感，從而加強(qiáng)RAR興奮劑活性的結(jié)論提供基礎(chǔ)。如上所述，Agarwal等人[CancerRes.542108(1994)]認(rèn)為與HPV永生化ECE-16-1細(xì)胞生長(zhǎng)不同，CaSki細(xì)胞的生長(zhǎng)不受用視黃醛衍生物興奮劑處理的抑制。如同在此所公開的內(nèi)容，我們出乎意外地發(fā)現(xiàn)在不存在視黃醛衍生物興奮劑的情況下，CaSki細(xì)胞的生長(zhǎng)受到AGN193109的抑制。以下實(shí)施例解釋AGN193109如何用于抑制體內(nèi)CaSki細(xì)胞瘤的生長(zhǎng)。實(shí)施例22在給予AGN193109后抑制CaSki細(xì)胞瘤在裸鼠中的生長(zhǎng)將1×106CaSki細(xì)胞注射到一組裸鼠的每一只中。使用對(duì)于本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員所熟知的技術(shù)評(píng)價(jià)腫瘤的形成。注射后，將小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組和試驗(yàn)組。所述對(duì)照組接受空白藥。試驗(yàn)組給予AGN193109。給予空白藥的動(dòng)物接受胃內(nèi)插管給予玉米油。在治療期間，試驗(yàn)組的動(dòng)物每天接受20μmol/kg玉米油中的AGN193109。使用有刻度的測(cè)徑器測(cè)定以立方毫升為單位的腫瘤體積。以腫瘤體積作為時(shí)間的函數(shù)作圖。通過在研究期間腫瘤的大小和數(shù)目來判斷，接受AGN193109的小鼠與對(duì)照組小鼠的腫瘤相比顯示其腫瘤在生長(zhǎng)速率上明顯較低。該結(jié)果提供體內(nèi)的證明即AGN193109抑制對(duì)包括給予視黃醛衍生物興奮劑的治療具有耐藥性的晚期頸癌的生長(zhǎng)。如上所述，CaSki細(xì)胞為頸腫瘤的模型，它們對(duì)于視黃醛衍生物興奮劑治療不應(yīng)答。然而，我們公開在不用視黃醛衍生物興奮劑治療的情況下，用AGN193109抑制CaSki細(xì)胞的生長(zhǎng)。AGN193109抑制CaSki細(xì)胞增生的能力提示AGN193109可以用于治療對(duì)于視黃醛衍生物興奮劑治療不敏感的頸癌。下列實(shí)施例介紹一種能用于評(píng)價(jià)AGN193109在治療頸癌方面的治療效果的方法。實(shí)施例23評(píng)價(jià)在患有頸癌的患者中AGN193109的治療效果首先鑒定具有晚期頸癌的患者。根據(jù)本領(lǐng)域內(nèi)普通技術(shù)人員所熟知的方法進(jìn)行頸組織活檢。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將來自擴(kuò)散腫瘤的細(xì)胞在組織培養(yǎng)基中繁殖，以便提供足以分成三個(gè)樣品組的細(xì)胞數(shù)目。為此使用Agarwal等人[CancerRes.542108(1994)]所述的培養(yǎng)條件。第一組作為對(duì)照組并接受單獨(dú)的溶媒(乙醇)。第二組用濃度為10-10-10-6M的RAR興奮劑視黃酸處理。第三組用劑量范圍在10-10-10-6M的AGN193109處理。每日為細(xì)胞提供新的生長(zhǎng)培養(yǎng)基并提供對(duì)于每個(gè)樣品組為適當(dāng)?shù)纳鲜鲆朁S醛衍生物。三天后，使用電子細(xì)胞計(jì)數(shù)器記錄細(xì)胞個(gè)數(shù)。比較對(duì)照培養(yǎng)物中細(xì)胞的數(shù)目與在視黃酸處理培養(yǎng)物中細(xì)胞的數(shù)目的結(jié)果表明RAR興奮劑基本不抑制培養(yǎng)的頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)速度。相反，用AGN193109處理的細(xì)胞顯示當(dāng)與對(duì)照組中的細(xì)胞計(jì)數(shù)相比時(shí)，在細(xì)胞數(shù)目上顯示劑量依賴性降低。其中AGN193109處理抑制培養(yǎng)的頸癌細(xì)胞增生的結(jié)果顯示AGN193109是用于治療具有轉(zhuǎn)移的頸癌患者的有用的治療劑。在目的是證明AGN193109在所述疾病中的有益的治療作用的隨機(jī)臨床研究中，招募已經(jīng)經(jīng)過外科手術(shù)除去主要的腫瘤的頸癌患者。將患者分成兩組。第一組為對(duì)照組而第二組用AGN193109治療。將AGN193109與藥學(xué)上可接受的賦形劑混合產(chǎn)生適于全身給藥的組合物，所用技術(shù)為本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員所熟知的。所述對(duì)照組給予空白制劑試驗(yàn)組給予含有AGN193109負(fù)性激素的所述制劑。以最大耐受劑量給藥于患者每隔一天給藥，持續(xù)三個(gè)月到一年。通過測(cè)定一定時(shí)間后的無疾病存活使所述研究的結(jié)果定量。接受AGN193109的各患者顯示在無疾病存活上的顯著地增加，包括顯示其轉(zhuǎn)移疾病完全緩解的一些不成比例的患者。該結(jié)果顯示AGN193109具有體內(nèi)治療對(duì)視黃醛衍生物興奮劑例如視黃酸的抗增生作用不應(yīng)答的頸癌的用途。如上所述，AGN193109加強(qiáng)在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的初級(jí)培養(yǎng)物中RAR興奮劑的抗增生活性。因此，合理的期待在體內(nèi)共同給予AGN193109和RAR興奮劑增加該興奮劑的治療指數(shù)，因?yàn)闉楂@得相同的治療終點(diǎn)將需要較少量的RAR興奮劑。此外，已經(jīng)證明AGN193109使得人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的初級(jí)培養(yǎng)物對(duì)于糖皮質(zhì)激素和甲狀腺激素受體興奮劑的抗增生作用敏感。下列PVR兔模型將用于兩種獨(dú)立的研究中，以便證明通過共同給予AGN193109和RAR興奮劑(13-順式視黃酸)或分別給予甲狀腺激素受體興奮劑增加治療指數(shù)。引人注意的是由Sen等人[Arch.Opthalmol.1061291(1988)]提出的兔視網(wǎng)膜重新脫離模型已經(jīng)用于證明在體外抑制初級(jí)RPE細(xì)胞增生的視黃醛衍生物興奮劑也降低體內(nèi)視網(wǎng)膜脫離的次數(shù)[Araiaetal.Invest.Opthalmol.34522(1993)]。從而，對(duì)于它們作為預(yù)防視網(wǎng)膜脫離的藥物而言，在體外和體內(nèi)視黃醛衍生物的興奮劑的活性之間的聯(lián)系已經(jīng)建立。下列實(shí)施例解釋AGN193109如何可以用于針對(duì)預(yù)防視網(wǎng)膜脫離的治療用途中。實(shí)施例24AGN193109在治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病(PVR)中增加甾體超家族受體興奮劑的治療性的用途在第一個(gè)研究中，根據(jù)Sen等人(Arch.Opthalmol.1061291(1988)]所述的方法將人RPE細(xì)胞注射入兔眼的玻璃體腔。玻璃體腔內(nèi)注射后，將兔分為五組第一組(對(duì)照)通過玻璃體內(nèi)注射單獨(dú)接受溶媒。第二組通過玻璃體內(nèi)注射接受作為單獨(dú)藥物治療的視黃酸(100μg)。第三組通過玻璃體內(nèi)注射接受作為單獨(dú)藥物治療的AGN193109(100μg)。第四組通過玻璃體內(nèi)注射接受以組2給藥量的1/10劑量的RAR興奮劑(視黃酸)(10μg)。第五組通過玻璃體內(nèi)注射接受AGN193109(100μg)和視黃酸(10μg)的組合物。在玻璃體內(nèi)注射人RPE細(xì)胞后一天動(dòng)物接受單獨(dú)玻璃體內(nèi)注射適當(dāng)?shù)闹委熕幬?。通過間接檢眼鏡檢查法在第7天、第14天和第28天檢查兔子并就牽引性視網(wǎng)膜脫離的次數(shù)和嚴(yán)重性評(píng)分。注射100μg視黃酸組中的兔子顯示與對(duì)照組兔子或單獨(dú)接受AGN193109或視黃酸(10μg)的兔子相比顯著地降低視網(wǎng)膜脫離的次數(shù)和嚴(yán)重性。共同給予AGN193109和視黃酸(10μg)組中的兔子與對(duì)照組、AGN193109或視黃酸(10μg)組中的兔子相比顯示顯著地降低視網(wǎng)膜脫離的次數(shù)和嚴(yán)重性。這些結(jié)果證明AGN193109改善PVR體內(nèi)模型中RAR興奮劑視黃酸的治療指數(shù)。在第二個(gè)研究中，首先提供將人RPE細(xì)胞注射入兔眼的玻璃體腔中的兔子，然后分成四個(gè)組。第一組(對(duì)照)通過玻璃體內(nèi)注射單獨(dú)接受溶媒。第二組通過玻璃體內(nèi)注射接受作為單獨(dú)藥物治療的甲狀腺激素(100μg)。第三組通過玻璃體內(nèi)注射給予作為單獨(dú)藥物治療的AGN193109(100μg)。第四組給予AGN193109(100μg)和甲狀腺激素(100μg)的組合物。通過間接檢眼鏡檢查法在第7天、第14天和第28天檢查兔子并就牽引性視網(wǎng)膜脫離的次數(shù)和嚴(yán)重性評(píng)分。比較所述四個(gè)組中視網(wǎng)膜脫離的次數(shù)和嚴(yán)重性的結(jié)果顯示用AGN193109或甲狀腺激素的單獨(dú)藥物治療當(dāng)與對(duì)照組兔子相比不抑制視網(wǎng)膜脫離。相反，給予AGN193109和甲狀腺激素組合物的組的兔子顯示明顯降低視網(wǎng)膜脫離的次數(shù)和嚴(yán)重性。該結(jié)果證明AGN193109改善PVR體內(nèi)模型中甲狀腺激素的治療指數(shù)。以下實(shí)施例介紹AGN193109如何用于提高RAR興奮劑用于治療視網(wǎng)膜重新再附著外科手術(shù)后患者的治療指數(shù)。實(shí)施例25增加RAR興奮劑13-順式視黃酸治療指數(shù)首先鑒定具有由PVR引起的視網(wǎng)膜脫離的一些成年自愿者。每個(gè)人均經(jīng)過使用本領(lǐng)域內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行的視網(wǎng)膜脫離的外科修復(fù)手術(shù)。然后，將患者分成五組。對(duì)照組由經(jīng)過視網(wǎng)膜脫離外科修復(fù)且沒有接受任何視黃醛類化合物的患者所組成。第二組在手術(shù)后每天兩次口服接受40mg13-順式視黃酸達(dá)四周。第三組在手術(shù)后每日兩次口服接受40mgAGN103109達(dá)四周。第四組在手術(shù)后每天兩次口服接受4mg13-順式視黃酸達(dá)四周。在手術(shù)后每天兩次口服接受40mgAGN103109結(jié)合4mg的13-順式視黃酸達(dá)四周。基本按照Fekrat等人[Ophthalmology102412(1995)]所述進(jìn)行治療方案和評(píng)價(jià)藥物效力。使用為本領(lǐng)域內(nèi)普通技術(shù)人員所熟知的檢眼鏡檢查技術(shù)監(jiān)測(cè)在9個(gè)月的時(shí)間內(nèi)在所有五個(gè)組中術(shù)后患者視網(wǎng)膜重復(fù)脫離的次數(shù)和嚴(yán)重性。接受40mg口服13-順式視黃酸的患者當(dāng)與對(duì)照組患者、每天兩次接受4mg的13-順式視黃酸的患者或每日兩次接受40mgAGN193109的患者相比時(shí)顯示明顯地降低視網(wǎng)膜重復(fù)脫離的次數(shù)。檢驗(yàn)在手術(shù)后每天兩次聯(lián)合接受口服40mgAGN103109和口服4mg的13-順式視黃酸達(dá)四周患者組的結(jié)果顯示在該患者組中的治療結(jié)果等同或好于術(shù)后每天兩次接受口服40mg的13-順式視黃酸達(dá)四周的患者的治療效果。該結(jié)果證明AGN193109負(fù)性激素通過降低PVR患者中視網(wǎng)膜重復(fù)脫離的次數(shù)和嚴(yán)重性改善RAR興奮劑的治療指數(shù)。用于鑒定核受體負(fù)性激素的一般化檢測(cè)以上我們已經(jīng)證明AGN193109可以作為能夠阻遏RAR核受體的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄活性的負(fù)性激素發(fā)揮作用。其次，我們已經(jīng)介紹了使用由ERE-tk-Luc熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒和ER-RXR-α及RAR-γ-VP-16受體表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的CV-1細(xì)胞，以便為簡(jiǎn)單拮抗劑的RAR配體與那些具有負(fù)性激素活性的配體區(qū)別開來的檢測(cè)方法。我們已經(jīng)得出結(jié)論RAR負(fù)性激素通過促進(jìn)提高RAR和NCPs之間的相互作用介導(dǎo)阻遏RAR介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性。此外，我們已經(jīng)證明AGN193109可以以與甾體超家族的核受體的成員之間相互分享NCPs一致的方式加強(qiáng)其它核受體興奮劑的作用。如此，可以指定并篩選配體以便鑒定在這些非RAR核受體上具有負(fù)性激素活性的化合物。我們的基于使用由ERE-tk-Luc熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒和ER-RXR-α及RAR-γ-VP-16受體表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的CV-1細(xì)胞的RAR負(fù)性激素篩選的方法一般可以被采用，以至將RAR-γ-VP-16質(zhì)粒的RAR-γ部分轉(zhuǎn)化為過氧化物酶增生劑激活受體(PPAR)、維生素D受體(VDR)、甲狀腺激素受體(T3R)或任何其它能夠與RXR異質(zhì)二聚的甾體超家族核受體。與這些質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的CV-1細(xì)胞可以表達(dá)高基礎(chǔ)水平的熒光素酶活性。能夠結(jié)合取代RAR-γ部分的受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的配體通過測(cè)定其阻遏熒光素酶活性的能力可以容易地被篩選負(fù)性激素活性。對(duì)于不與RXR異質(zhì)二聚的的甾體超家族核受體(例如糖皮質(zhì)激素和雌激素受體)而言，使用GR-VP-16或ER-VP-16受體和由融合異質(zhì)啟動(dòng)子元件和熒光素酶或其它報(bào)告基因的適宜的糖皮質(zhì)激素或雌激素應(yīng)答元件組成的熒光素酶報(bào)告質(zhì)?？梢匀〉米罱K結(jié)果。一般化的負(fù)性激素篩選測(cè)試方法的基本特征為包括至少用于篩選反向興奮劑的特定核受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和用于將所述核受體配體結(jié)構(gòu)域集中于報(bào)告基因的啟動(dòng)子的方法。這可以通過使用受體的天然DNA結(jié)合位點(diǎn)或可選通過構(gòu)成具有異質(zhì)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的嵌合受體及相應(yīng)使用在DNA調(diào)節(jié)元件控制下的報(bào)告基因(它可以被所述異質(zhì)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域識(shí)別)而被達(dá)到。在優(yōu)選實(shí)施方案中，表達(dá)可用于篩選反向興奮劑的核受體的質(zhì)?？梢员磉_(dá)作為含有組合激活結(jié)構(gòu)域例如HSVVP-16激活結(jié)構(gòu)域的融合蛋白的該核受體，以便提供容許的高基礎(chǔ)活性。該高基礎(chǔ)活性有效地增加測(cè)試的靈敏度，從而使得能夠分析在沒有加入的核受體興奮劑的情況下阻遏基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄活性的核受體配體。下列實(shí)施例介紹可以用于篩選在甲狀腺激素受體上具有負(fù)性激素活性的化合物的一個(gè)方法。實(shí)施例26鑒定甲狀腺激素受體負(fù)性激素的方法用熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒ERE-tk-Luc和質(zhì)粒ER-RXR-α及T3R-VP-16共轉(zhuǎn)染CV-1細(xì)胞。T3R-VP-16與RAR-γ-VP-16相同，除了RAR-γ-VP-16受體的RAR-γ部分已經(jīng)被甲狀腺激素受體cDNA所代替。如此，T3R-VP-16表達(dá)在與甲狀腺激素受體的N端結(jié)構(gòu)中的HSVVP-16的激活結(jié)構(gòu)域的融合蛋白。為此使用標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染和細(xì)胞培養(yǎng)方法。在轉(zhuǎn)染后，漂洗細(xì)胞并提供含有已經(jīng)用活性炭提取的10％牛胚胎血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。用單獨(dú)的溶媒(乙醇)、甲狀腺激素(10-9-10-10M)或化合物TR-1(10-9-10-6M)處理細(xì)胞。TR-1為合成的甲狀腺激素受體配體，它顯示在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合研究中對(duì)于所述甲狀腺激素受體強(qiáng)的親合力，然而它在使用甲狀腺激素應(yīng)答報(bào)告基因和甲狀腺激素受體表達(dá)質(zhì)粒的短暫共轉(zhuǎn)染反式激活測(cè)試中不激活轉(zhuǎn)染的甲狀腺激素受體。此外，TR-1能夠拮抗甲狀腺激素介導(dǎo)的反式激活及本身為甲狀腺受體拮抗劑。分析來自用ERE-tk-Luc、ER-RXR-α及T3R-VP-16轉(zhuǎn)染的CV-1細(xì)胞的熒光素酶活性顯示在溶媒處理的細(xì)胞中高基礎(chǔ)水平的熒光素酶報(bào)告基因活性。用甲狀腺激素處理的細(xì)胞顯示以劑量依賴性方式熒光素酶的活性略有增加。用TR-1處理的細(xì)胞顯示在熒光素酶活性中劑量依賴性降低。這表明TR-1顯示甲狀腺受體反向興奮劑活性，假定是由于增加了NCP與甲狀腺激素受體的相互作用。通過用RAR興奮劑處理阻遏人初級(jí)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的增生速度。該觀察的治療值已經(jīng)顯示在視網(wǎng)膜重新附著手術(shù)后的術(shù)后使用視黃醛衍生物治療中。以上我們已經(jīng)證明AGN193109RAR負(fù)性激素可以使初級(jí)RPE細(xì)胞對(duì)于在共同給藥過程中的ATRA和13-順式視黃酸的抗增生作用敏感。此外，AGN193109也顯示使RPE細(xì)胞對(duì)于其它核受體興奮劑的抗增生作用敏感。更準(zhǔn)確地說，AGN193109使RPE細(xì)胞對(duì)于糖皮質(zhì)激素興奮劑、地塞米松和甲狀腺激素興奮劑3，3’，5-三碘代甲狀腺氨酸(T3)的抗增生作用敏感。這些數(shù)據(jù)與我們的工作模型一致，其中AGN193109調(diào)節(jié)在所述核受體家族成員之間分享的NCPs的有效性。用甲狀腺激素受體反向興奮劑TR-1處理RPE細(xì)胞將類似地改變分享NCPs的有效性，以至與非甲狀腺受體興奮劑例如RAR興奮劑13-順式視黃酸共同給藥將導(dǎo)致與作為單獨(dú)藥物處理的13-順式視黃酸相比增強(qiáng)對(duì)于RPE培養(yǎng)物的抗增生作用。下列實(shí)施例介紹可用于使初級(jí)RPE細(xì)胞對(duì)于RAR興奮劑的抗增生活性更敏感的一個(gè)方法。引人注意的是，該實(shí)施例進(jìn)一步介紹通過與負(fù)性激素共同給藥如何加強(qiáng)RAR興奮劑的活性。實(shí)施例27通過共同給予TR-1甲狀腺激素反向興奮劑使初級(jí)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞對(duì)于RAR興奮劑的抗增生作用敏感根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法得到人初級(jí)RPE細(xì)胞并培養(yǎng)。將該培養(yǎng)的細(xì)胞分成四個(gè)組并如下處理。組1接受單獨(dú)的溶媒(乙醇)。組2用濃度在10-11-10-6M的13-順式視黃酸處理。組3用濃度在10-11-10-1M的甲狀腺激素反向興奮劑TR-1處理。組4用濃度在10-11-10-6M的13-順式視黃酸及TR-1共處理。在總的五天處理過程中每?jī)商鞛榧?xì)胞重新提供新的生長(zhǎng)培養(yǎng)基并用合適的化合物重新處理。通過用電子細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定培養(yǎng)物中的細(xì)胞數(shù)目使在所述試驗(yàn)過程中的增生速率定量。TR-1處理細(xì)胞(組3)顯示基本與對(duì)照組(組1)細(xì)胞相同的細(xì)胞增生的速率并且這種反向興奮劑對(duì)于所述培養(yǎng)物測(cè)定的生長(zhǎng)速度沒有影響。用13-順式視黃酸(組2)處理的細(xì)胞顯示在細(xì)胞數(shù)目上的劑量依賴性降低。比較在組4細(xì)胞(共同給予13-順式RA和TR-1)的細(xì)胞增生中的劑量依賴性降低與在組3中所獲得結(jié)果證明如同通過組4相對(duì)組2細(xì)胞，所述RAR興奮劑的劑量應(yīng)答曲線向左位移所確定的，共同給予TR-1甲狀腺激素受體反向興奮劑使RPE培養(yǎng)物對(duì)于13-順式視黃酸的抗增生作用敏感。權(quán)利要求1.能夠與選自RARα、RARβ和RARγ的視黃酸受體亞型結(jié)合的視黃醛衍生物拮抗劑或負(fù)性激素在制備用于治療哺乳動(dòng)物的病理癥狀(所述癥狀對(duì)視黃醛衍生物拮抗劑或負(fù)性激素的治療敏感)的藥物中的用途。2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物用于改善由于給予所述哺乳動(dòng)物視黃醛衍生物所引起的毒性或不需要的副作用。3.根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述藥物用于改善由于所述哺乳動(dòng)物服用視黃醛衍生物藥物或維生素A或維生素A前體引起的預(yù)先存在的病理癥狀。4.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物用于局部給藥。5.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物用于全身性給藥。6.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述視黃醛衍生物拮抗劑或負(fù)性激素與Kd低于約1微摩爾的視黃醛衍生物受體的亞型結(jié)合。7.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述負(fù)性激素或拮抗劑具有下式有下式其中X為S、O、NR’，其中R’為H或1-6個(gè)碳原子的烷基，或X為[C(R1)2]n其中R1為H或1-6個(gè)碳原子的烷基，及n為0-2之間的整數(shù)；R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I、CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；Z為-C≡C-，-N＝N-，-N＝CR1-，-CR1＝N，-(CR1＝CR1)n’-其中n’為0-5的整數(shù)，-CO-NR1-，-CS-NR1-，-NR1-CO，-NR1-CS，-COO-，-OCO-，-CSO-，-OCS-；Y是苯基或萘基或選自吡啶基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基和吡唑基的雜芳基，所述苯基和雜芳基可選被一個(gè)或兩個(gè)R2基團(tuán)取代，或當(dāng)Z為-(CR1＝CR1)n’-和n’為3、4或5時(shí)，則Y代表在該(CR1＝CR1)n’基團(tuán)和B之間的直接價(jià)鍵；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基，和R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。8.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Y為苯基、吡啶基、噻吩基或呋喃基。9.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Y為苯基。10.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，所述苯環(huán)為1，4(對(duì)位)取代。11.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Y為萘基。12.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Y為吡啶基。13.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Y為噻吩基或呋喃基。14.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Z為-(CR1＝CR1)n’-和n’為3、4或5及Y代表在該(CR1＝CR1)n’基團(tuán)和B之間的直接價(jià)鍵。15.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R2為H、F或CF3。16.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R3為H或甲基。17.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-苯基。18.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-雜芳基。19.根據(jù)權(quán)利要求18的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-雜芳基其中所述雜芳基為具有1或2個(gè)雜原子的5或6元環(huán)。20.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中在所述拮抗劑的式中所述雜芳基選自2-吡啶基、3-吡啶基、2-噻吩基和2-噻唑基。21.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R15為H、CF3、F、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、羥基或氯。22.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Z為-C≡C-。23.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Z為-N＝N-。24.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Z為-CO-NR1-。25.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Z為-CS-NR1-。26.根據(jù)權(quán)利要求25的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R1為H。27.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Z為-COO-。28.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，Z為-(CR1＝CR1)n’-和n’為1。29.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，X為[C(R1)2]n和n為1或0。30.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，X為S、O或NR’。31.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述拮抗劑或負(fù)性激素具有下式其中R1為H或1-6個(gè)碳原子的烷基；R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I或CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基，和R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。32.根據(jù)權(quán)利要求31的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-苯基，(R15)r-吡啶基，(R15)r-噻唑基和(R15)r-噻吩基。33.根據(jù)權(quán)利要求32的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R15獨(dú)立為H，CH3，C2H5，F(xiàn)，CF3，Cl，CH3O或OH。34.根據(jù)權(quán)利要求33的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，A為(CH2)n其中n為0-5及其中B為COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽、COOR8或CONR9R10。35.根據(jù)權(quán)利要求34的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R1為CH3，R2為H或F和R3為H。36.根據(jù)權(quán)利要求35的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，n為0及B為COOH、其藥學(xué)上可接受的鹽或COOC2H5。37.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述拮抗劑或負(fù)性激素具有下式其中R1為H或1-6個(gè)碳原子的烷基；R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I或CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；X1為O或S；X2為O或NR1；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基，和R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。38.根據(jù)權(quán)利要求37的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-苯基，(R15)r-吡啶基，(R15)r-噻唑基和(R15)r-噻吩基。39.根據(jù)權(quán)利要求38的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R15獨(dú)立為H，CH3，C2H5，F(xiàn)，CF3，Cl，CH3O或OH。40.根據(jù)權(quán)利要求39的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，A為(CH2)n其中n為0-5及其中B為COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽、COOR8或CONR9R10。41.根據(jù)權(quán)利要求40的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R1為CH3，R2為H或F和R3為H。42.根據(jù)權(quán)利要求41的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，n為0及B為COOH、其藥學(xué)上可接受的鹽或COOC2H5。43.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述拮抗劑或負(fù)性激素具有下式其中R1為H或1-6個(gè)碳原子的烷基；R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I或CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基；R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。44.根據(jù)權(quán)利要求43的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-苯基，(R15)r-吡啶基，(R15)r-噻唑基和(R15)r-噻吩基。45.根據(jù)權(quán)利要求44的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R15獨(dú)立為H，CH3，C2H5，F(xiàn)，CF3，Cl，CH3O或OH。46.根據(jù)權(quán)利要求45的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，A為(CH2)n其中n為0-5及其中B為COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽、COOR8或CONR9R10。47.根據(jù)權(quán)利要求46的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R1為CH3，R2為H或F和R3為H。48.根據(jù)權(quán)利要求47的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，n為0及B為COOH、其藥學(xué)上可接受的鹽或COOC2H5。49.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述拮抗劑或負(fù)性激素具有下式其中R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I或CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基；R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。50.根據(jù)權(quán)利要求49的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-苯基，(R15)r-吡啶基，(R15)r-噻唑基和(R15)r-噻吩基。51.根據(jù)權(quán)利要求50的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R15獨(dú)立為H，CH3，C2H5，F(xiàn)，CF3，Cl，CH3O或OH。52.根據(jù)權(quán)利要求51的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，A為(CH2)n其中n為0-5及其中B為COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽、COOR8或CONR9R10。53.根據(jù)權(quán)利要求52的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R2為H或F和R3為CH3，及o為2。54.根據(jù)權(quán)利要求53的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，n為0及B為COOH、其藥學(xué)上可接受的鹽或COOC2H5。55.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述拮抗劑或負(fù)性激素具有下式其中X為O或S；R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I或CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基；R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。56.根據(jù)權(quán)利要求55的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-苯基，(R15)r-吡啶基，(R15)r-噻唑基和(R15)r-噻吩基。57.根據(jù)權(quán)利要求56的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R15獨(dú)立為H，CH3，C2H5，F(xiàn)，CF3，Cl，CH3O或OH。58.根據(jù)權(quán)利要求57的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，A為(CH2)n其中n為0-5及其中B為COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽、COOR8或CONR9R10。59.根據(jù)權(quán)利要求57的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，X為S。60.根據(jù)權(quán)利要求59的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R2為H或F和R3為H。61.根據(jù)權(quán)利要求60的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，n為0及B為COOH、其藥學(xué)上可接受的鹽或COOC2H5。62.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述拮抗劑或負(fù)性激素具有下式其中R1為氫或1-6個(gè)碳原子的烷基；其中R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I或CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基；R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。63.根據(jù)權(quán)利要求62的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-苯基，(R15)r-吡啶基，(R15)r-噻唑基和(R15)r-噻吩基。64.根據(jù)權(quán)利要求63的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R15獨(dú)立為H，CH3，C2H5，F(xiàn)，CF3，Cl，CH3O或OH。65.根據(jù)權(quán)利要求64的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，B為COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽、COOR8或CONR9R10。66.根據(jù)權(quán)利要求65的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R1為CH3，R2為H或F和R3為H或CH3。67.根據(jù)權(quán)利要求66的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，n為0及B為COOH、其藥學(xué)上可接受的鹽或COOC2H5。68.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述拮抗劑或負(fù)性激素具有下式其中R1為H或1-6個(gè)碳原子的烷基；R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I或CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基；R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。69.根據(jù)權(quán)利要求68的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-苯基，(R15)r-吡啶基，(R15)r-噻唑基和(R15)r-噻吩基。70.根據(jù)權(quán)利要求69的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R15獨(dú)立為H，CH3，C2H5，F(xiàn)，CF3，Cl，CH3O或OH。71.根據(jù)權(quán)利要求70的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，A為(CH2)n其中n為0-5及其中B為COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽、COOR8或CONR9R10。72.根據(jù)權(quán)利要求71的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R1為CH3，R2為H或F和R3為H。73.根據(jù)權(quán)利要求72的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，n為0及B為COOH、其藥學(xué)上可接受的鹽或COOC2H5。74.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述拮抗劑或負(fù)性激素具有下式其中R1為H或1-6個(gè)碳原子的烷基；R2為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、F、Cl、Br、I或CF3、1-6個(gè)碳原子的氟取代烷基、OH、SH、1-6個(gè)碳原子的烷氧基或1-6個(gè)碳原子的烷硫基；R3為氫、1-6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或F；m為0-3的整數(shù)；o為0-3的整數(shù)；A為(CH2)q其中q為0-5，具有3-6個(gè)碳原子的低級(jí)支鏈烷基，具有3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基、具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有2-6個(gè)碳原子和1或2個(gè)三鍵的炔基；B為氫，COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽，COOR8，CONR9R10，-CH2OH，CH2OR11，CH2OCOR11，CHO，CH(OR12)2，CHOR13O，-COR7，CR7(OR12)2，CR7OR13O或三-低級(jí)烷基甲硅烷基，其中R7為烷基、環(huán)烷基或含有1-5個(gè)碳原子的鏈烯基，R8為1-10個(gè)碳原子的烷基或三甲基甲硅烷基烷基其中所述烷基具有1-10個(gè)碳原子，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或R8為苯基或低級(jí)烷基苯基，R9和R10獨(dú)立為氫，1-10個(gè)碳原子的烷基，或5-10個(gè)碳原子的環(huán)烷基，或苯基或低級(jí)烷基苯基，R11為低級(jí)烷基、苯基或低級(jí)烷基苯基，R12為低級(jí)烷基，及R13為2-5個(gè)碳原子的二價(jià)烷基；R14為(R15)r-苯基，(R15)r-萘基或(R15)r-雜芳基，其中所述雜芳基具有選自O(shè)、S和N的1-3個(gè)雜原子，r為0-5的整數(shù)，和R15獨(dú)立為H，F(xiàn)，Cl，Br，I，NO2，N(R8)2，NH(R8)COR8，NR8CON(R8)2，OH，OCOR8，OR8，CN，具有1-10個(gè)碳原子的烷基，具有1-10個(gè)碳原子的氟代烷基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)雙鍵的鏈烯基，具有1-10個(gè)碳原子和1-3個(gè)三鍵的炔基，或三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基其中所述烷基獨(dú)立具有1-6個(gè)碳原子。75.根據(jù)權(quán)利要求74的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R14為(R15)r-苯基，(R15)r-吡啶基，(R15)r-噻唑基和(R15)r-噻吩基。76.根據(jù)權(quán)利要求75的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R15獨(dú)立為H，CH3，C2H5，F(xiàn)，CF3，Cl，CH3O或OH。77.根據(jù)權(quán)利要求76的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，A為(CH2)n其中n為0-5及其中B為COOH或其藥學(xué)上可接受的鹽、COOR8或CONR9R10。78.根據(jù)權(quán)利要求77的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，R1為CH3，R2為H或F和R3為H或CH3。79.根據(jù)權(quán)利要求78的用途，其中在所述拮抗劑或負(fù)性激素的式中，n為0及B為COOH、其藥學(xué)上可接受的鹽或COOC2H5。全文摘要芳基取代和芳基及(3－氧代－1－丙烯基)－取代的苯并吡喃、苯并噻喃、1,2－二氫喹啉和5,6－二氫萘衍生物具有視黃醛衍生物負(fù)性激素和/或拮抗劑樣的生物活性。為了預(yù)防或降低RAR興奮劑對(duì)于所結(jié)合的受體位點(diǎn)的作用,本發(fā)明的RAR拮抗劑可以給予哺乳動(dòng)物包括人類。尤其可以給予或與視黃醛衍生物藥物共同給予所述RAR興奮劑,以便預(yù)防或改善由視黃醛衍生物或維生素A或維生素A前體引起的毒性或副作用。所述視黃醛衍生物負(fù)性激素可用于加強(qiáng)其它視黃醛衍生物和核受體興奮劑的活性。例如,視黃醛衍生物負(fù)性激素(稱為AGN193109)在體外反式激活測(cè)試中有效地增加其它視黃醛衍生物和甾體激素的效力。此外,反式激活測(cè)試可以用于鑒定具有負(fù)性激素活性的化合物。這些測(cè)試方法基于負(fù)性激素下行調(diào)節(jié)設(shè)計(jì)用來加工組成性轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)構(gòu)域的嵌合視黃醛衍生物受體能力。文檔編號(hào)C07CGK1360890SQ01143840公開日2002年7月31日申請(qǐng)日期2001年12月10日優(yōu)先權(quán)日1995年9月1日發(fā)明者E·S·克萊恩,A·T·約翰森,A·M·斯坦德文,R·L·貝爾德,S·J·吉勒特,楊翠仙,S·納帕爾,V·維利貢達(dá),滕敏,R·A·錢德拉拉納申請(qǐng)人:阿勒根公司