專利名稱：從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種應(yīng)用逆流色譜技術(shù)分離加蘭他敏的方法，特別涉及一種應(yīng)用高速逆流色譜技術(shù)從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法。
背景技術(shù)：
加蘭他敏(galanthamine)是50年代開發(fā)的膽堿酯酶抑制劑，是由石蒜科石蒜等植物提取的生物堿，多年來一直用于治療重癥肌無力、肌營養(yǎng)不良和小兒麻痹后遺癥。加蘭他敏(4a，5，9，10，11，12-六氫-3-甲氧基-11-甲基-6H-苯并呋喃并(3a，3，2-ef)-(2)并氮雜卓-6-醇)是一種四環(huán)生物堿，因其藥理特性其作用類似于毒扁豆堿和新斯的明，但加蘭他敏的治療范圍比毒扁豆堿和新斯的明寬，副作用更小。加蘭他敏還被用于脊髓灰質(zhì)炎和各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療，在治療青光眼方面也具有較好治療作用。近年，很多國家相繼開展了大量加蘭他敏深入研究相關(guān)的藥理學(xué)、藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，研究表明，作為第二代膽堿酯酶抑制劑的加蘭他敏在神經(jīng)突觸中通過與乙酰膽堿競爭同乙酰膽堿酯酶結(jié)合，阻斷此酶對乙酰膽堿的降解，進(jìn)而增加腦內(nèi)乙酰膽堿的濃度。加蘭他敏治療早老性癡呆的新適應(yīng)癥因此得到了深入廣泛的研究，相繼獲得世界各國的批準(zhǔn)。
加蘭他敏在石蒜科植物中的含量很低，只有萬分之一左右，相伴其它生物堿的種類卻很多，因而提取分離純加蘭他敏存在很大的困難。采用傳統(tǒng)的提取萃取分離工藝，得率低，純度差，周期長，類似生物堿雜質(zhì)去除困難，不適應(yīng)目前世界各國對加蘭他敏的高質(zhì)量要求，迫切需要一種穩(wěn)定的高純度的加蘭他敏生產(chǎn)工藝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是采用逆流色譜技術(shù)分離得到98％以上高純度的加蘭他敏。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案以逆流色譜為分離技術(shù)，以逆流色譜設(shè)備為分離設(shè)備，應(yīng)用動(dòng)態(tài)液-液分配原理，以混合后上下分層的兩相溶劑組合為流動(dòng)相和固定相，利用相對移動(dòng)的互不混溶的兩相溶劑，在處于動(dòng)態(tài)平衡的兩相中將具有不同分配比的石蒜粗提取物溶解液組進(jìn)行分離，收集目標(biāo)成分加蘭他敏，得到固體，其溶劑系統(tǒng)組合可為烷烴、鹵代烴、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚類、無機(jī)鹽緩沖液、水等溶劑的其中三個(gè)、四個(gè)或二個(gè)組分所構(gòu)成；根據(jù)粗提物性質(zhì)任一溶劑系統(tǒng)可包含適當(dāng)無機(jī)鹽類等；其中烷烴是正乙烷、正庚烷、正戊烷；鹵代烴是氯仿、二氯甲烷、四氯化碳；脂肪醇、脂肪酮是甲醇、乙醇、丙酮；脂肪酯是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯；醚類是乙醚、石油醚、叔丁基甲基醚等，無機(jī)鹽類是磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、碳酸氫鈉與碳酸鈉緩沖液等；典型的溶劑系統(tǒng)組合可以為鹵代烴、脂肪醇、水組合以上相為流動(dòng)相，下相為固定相，調(diào)節(jié)體積比為2-6∶0-4∶2-6，經(jīng)一次分離得到加蘭他敏純品。
脂肪酯、脂肪醇、水組合以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，調(diào)節(jié)體積比為2-5∶0-3∶2-5，經(jīng)一次分離得到加蘭他敏純品。
烷烴、脂肪酯、脂肪醇、水組合以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，調(diào)節(jié)體積比為2.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3，經(jīng)一次分離得到加蘭他敏純品。
醚類、烷烴、脂肪醇、水組合以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，調(diào)節(jié)體積比為1.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3，經(jīng)一次分離得到加蘭他敏純品。
具體操作按以下步驟進(jìn)行按體積比將上述溶劑體系配置，搖勻后靜置分層。將上、下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿色譜柱中，使主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，進(jìn)樣，控制流速，按目標(biāo)成份收集洗脫液，得到固體。
本發(fā)明的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法與傳統(tǒng)方法相比，它是一種連續(xù)的無需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術(shù)，避免了固態(tài)支持體或載體帶來的被吸附、損耗和變性等問題，具有分離量大，樣品無損失，回收率高，分離環(huán)境溫和，節(jié)約溶劑等特點(diǎn)，可以直接用粗提物分離結(jié)果能達(dá)到相當(dāng)高的純度，且適用于各種工藝途徑制備的不同含量石蒜粗提取物分離制備高純度加蘭他敏單體。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用三氯甲烷-甲醇-水，溶劑組分按4∶3∶2配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例2本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用二氯甲烷-乙醇-水，溶劑組分按4∶3∶2配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例3本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用乙醚-正己烷-甲醇-水，溶劑組分按4∶1∶3∶4配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例4本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，溶劑組分按1∶1∶1∶1配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例5本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用正己烷-乙酸丙酯-甲醇-水，溶劑組分按2∶4∶3∶4配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例6本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用乙酸乙酯-甲醇-水，溶劑組分按4∶2∶3配置，加入適當(dāng)無機(jī)鹽搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例7本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用乙酸乙酯-乙醇-水，溶劑組分按4∶2∶3配置，加入適當(dāng)無機(jī)鹽搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例8本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用叔丁基甲基醚-正乙烷-甲醇-水，溶劑組分按1∶3∶2∶3配置，加入適當(dāng)無機(jī)鹽搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例9本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用三氯甲烷-磷酸鹽緩沖液，溶劑組分按1∶1配置，搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例10本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用正戊烷-乙酸乙酯-碳酸鈉緩沖液，溶劑組分按1∶5∶5配置，搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例11本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用乙醚-正庚烷-甲醇-水，溶劑組分按2∶4∶3∶4配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例12本實(shí)施例溶劑系統(tǒng)采用正己烷-乙酸正丁酯-乙醇-水，溶劑組分按2∶4∶3∶4配置搖勻后靜置分層，待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。稱取石蒜粗提物溶解于流動(dòng)相中，先用固定相充滿整個(gè)色譜柱，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-600rpm，以4.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，調(diào)整設(shè)備平衡后，進(jìn)樣，用收集器收集洗脫液，根據(jù)檢測器接收目標(biāo)成分。得到固體，用HPLC檢測純度達(dá)到98％以上。
權(quán)利要求
1.一種從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于它是采用逆流色譜技術(shù)從石蒜粗提物中分離制備加蘭他敏，所用的溶劑體系為烷烴、鹵代烴、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚類、無機(jī)鹽緩沖液、水等其中的三個(gè)、四個(gè)或二個(gè)組分所構(gòu)成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于其三個(gè)組分構(gòu)成的溶劑體系是由鹵代烴、脂肪醇、水構(gòu)成，體積比為2-6∶0-4∶2-6。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于其三個(gè)組分構(gòu)成的溶劑體系是由脂肪酯、脂肪醇、水構(gòu)成，體積比為2-5∶0-3∶2-5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于其四個(gè)組分構(gòu)成的溶劑體系是由烷烴、脂肪酯、脂肪醇、水構(gòu)成，體積比為2.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于其四個(gè)組分構(gòu)成的溶劑體系是由醚類、烷烴、脂肪醇、水構(gòu)成，體積比為1.5-4∶1.5-3.5∶1.5-3∶1.5-3。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于其二個(gè)組分構(gòu)成的溶劑體系是由鹵代烴或脂肪醇與無機(jī)鹽緩沖液構(gòu)成，體積比為1∶1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于烷烴是正乙烷、正庚烷、正戊烷。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于鹵代烴是氯仿、二氯甲烷、四氯化碳。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于脂肪醇、脂肪酮是甲醇、乙醇、丙酮。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于脂肪酯是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于醚類是乙醚、石油醚、叔丁基甲基醚等。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法，其特征在于無機(jī)鹽類是磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、碳酸氫鈉與碳酸鈉緩沖液等。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用逆流色譜技術(shù)從石蒜粗提物中分離制備高純度加蘭他敏的方法，其所用的溶劑體系為烷烴、鹵代烴、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚類、無機(jī)鹽緩沖液、水等溶劑其中的三個(gè)、四個(gè)或二個(gè)組分構(gòu)成，具體是按體積比將上述溶劑體系配置，搖勻后靜置分層，以混合后上下分層的兩相溶劑組合為流動(dòng)相和固定相，利用相對移動(dòng)的互不混溶的兩相溶劑，在處于動(dòng)態(tài)平衡的兩相中將具有不同分配比的石蒜粗提取物溶解液組份進(jìn)行分離，得到固體加蘭他敏。該方法避免了固態(tài)支持體或載體帶來的被吸附、損耗和變性等問題，具有分離量大，樣品無損失，回收率高，分離環(huán)境溫和，節(jié)約溶劑等特點(diǎn)。
文檔編號C07D491/00GK1490319SQ03142010
公開日2004年4月21日 申請日期2003年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月28日
發(fā)明者鄭亞津, 陳紅輝 申請人:浙江一新制藥股份有限公司