專利名稱：一種分離加蘭他敏的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種分離加蘭他敏的方法，尤其是從含石蒜科生物堿的植物提取物 中，將加蘭他敏與其它眾多生物堿分離的方法。背景技術(shù)：
加蘭他敏(Galantamine)，又稱雪花蓮胺堿(Galanthamine)，為帶有叔胺的四環(huán) 生物堿，是一種具有可逆作用的膽堿酯酶抑制劑，可廣泛用于老年性癡呆(AD)、重癥肌無(wú) 力、腸麻痹和骨髓灰質(zhì)炎后遺癥等的治療。加蘭他敏常以氫溴酸鹽的形式用于臨床，并于 2003年上市。隨著全球老年人口增多，老年癡呆癥造成的疾病負(fù)擔(dān)日益增加，加蘭他敏作為 一種效果溫和且不良反應(yīng)輕微的中樞膽堿酯酶抑制劑，因而重新受到重視。最初從夏雪片蓮的干球莖中提取加蘭他敏，后來(lái)在天山雪蓮及同科的水仙屬、石 蒜屬植物中也有發(fā)現(xiàn)。野生資源中以忽地笑(又名黃花石蒜、鐵色箭)、換錦花及鹿蔥等品 種中加蘭他敏含量較高，其中又以忽地笑球莖的含量最高。但近年因無(wú)計(jì)劃的采挖及栽培 技術(shù)落后、種球繁殖數(shù)低等原因致使石蒜的野生資源逐漸減少。目前已有多種得到加蘭他敏的方法，石蒜中含加蘭他敏約0. 1%。，我國(guó)技術(shù)人員通 過(guò)大量實(shí)驗(yàn)，小試、中試，成功地從石蒜中提取單體加蘭他敏，然后加入氫溴酸合成加蘭他 敏氫溴酸鹽，最后用無(wú)水乙醇重結(jié)晶得到精品的氫溴酸加蘭他敏，所以從植物材料分離加 蘭他敏仍是其大規(guī)模制造的有效替代途徑，但傳統(tǒng)的分離純化方法操作復(fù)雜，成本高。專利200910027M3. 3描述的從石蒜鱗莖粗粉加入到(X)2超臨界萃取器中，用 HCl-CHCl3萃取，再通過(guò)氧化鋁色譜柱分離，洗脫，收集，濃縮，重結(jié)晶，洗滌，干燥。專利 20091023^06. 2提供了對(duì)這個(gè)方法的改進(jìn)，以萃取物調(diào)pH9_10，加入乙酸乙酯萃取，無(wú)水 硫酸鈉脫水，濾過(guò)，析晶來(lái)代替色譜柱分離，盡管如此，但超臨界流體(X)2萃取法只是減少粗 提中的雜質(zhì)，并不能細(xì)分各石蒜生物堿成分，如果用超臨界分離純化，工序繁瑣，所用的設(shè) 備儀器，使得成本更高。專利03142010. 9描述了用高速逆流色譜法分離石蒜粗提物，雖可避免被載體吸 附、損耗和變性等問(wèn)題，但只適用于實(shí)驗(yàn)室少量分離?；瘜W(xué)合成法(例如Kametani al.，J. Chem. Soc. C, 1971,6,1043-1047 ；Shimizu al.，Heterocycles, 1977,8, 277-282 ；ZL200810020491. 0 ；CN201010129674. 3)雖然可以不依靠植物資源來(lái)得到加蘭他敏，但該法合成路線長(zhǎng)，同時(shí)耗費(fèi)大量的有機(jī)試劑，對(duì)環(huán)境造成 污染，得到的只是外消旋體，并且還須拆分來(lái)得到左旋對(duì)映體，耗時(shí)，耗成本。氧化鋁層析或 硅酸鹽層析法，程序繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，溶劑消耗大，成本高，且載體會(huì)吸附一部分有效成分；堿 濃度梯度法，程序繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，溶劑消耗大，成本高；液-液萃取法，純度雖高，但耗時(shí)長(zhǎng)， 溶劑消耗大，程序繁瑣。制約加蘭他敏進(jìn)一步開發(fā)利用的關(guān)鍵在于從總提取物中分離單一的有效成 份。目前，已報(bào)道的鱗莖含總生物堿0.21%，其中石蒜堿(lycorine)占0.1%，其次有 高石蒜堿(homolycorine)、(多花)水仙堿(tazettine)，加蘭他敏占0. 0；35 %，石蒜3胺堿(Iycoramine)、石蒜寧堿(Iycorenine)、偽石蒜堿(pseudolycorine)禾口小星蒜堿 (hippeastrine)，莖的髓部含加蘭他敏、多花水仙堿和微量石蒜胺堿。采用傳統(tǒng)的分離工 藝，去除類似生物堿雜質(zhì)困難，不適應(yīng)目前世界各國(guó)對(duì)加蘭他敏的高質(zhì)量要求，因此高效 率、高純度、低成本來(lái)分離純化加蘭他敏的生產(chǎn)工藝具有深遠(yuǎn)的意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種利用包結(jié)法對(duì)石蒜科總生物堿提 取物進(jìn)行分離的方法。本發(fā)明的研究思路為由于加蘭他敏具有高位阻(不共面的苯基)、以及易形成氫 鍵基團(tuán)(羥基、氨基)，因而存在著很多特有分子能夠識(shí)別加蘭他敏。加蘭他敏顯堿性，可與 L-㈠-二苯甲酰酒石酸結(jié)合成鹽，氨基與羧基對(duì)接，形成N+-H—0-、O--H-N+這樣的氫鍵 形式。此處L-(-)-二苯甲酰酒石酸與加蘭他敏的分子對(duì)接是關(guān)鍵，然后進(jìn)行重新排序，形 成緊密堆積而從溶液中結(jié)晶析出。把酒石酸酯化成L- (-) - 二苯甲酰酒石酸，來(lái)增大其空間 位阻，從而增強(qiáng)主體分子對(duì)客體分子的選擇性。為解決本發(fā)明技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種分離加蘭他敏的方法，所述方法以含有加蘭他敏的石蒜總生物堿浸膏為原 料，所述的石蒜總生物堿浸膏是由石蒜鱗莖以酸為提取劑經(jīng)浸漉法提取得到的浸膏，所述 的方法為檢測(cè)石蒜總生物堿浸膏中加蘭他敏的含量，將石蒜總生物堿浸膏與L-(-)_ 二苯 甲酰酒石酸混合，用75 95%的乙醇作溶劑，在70 100°C下充分反應(yīng)，得澄清溶液，然后 冷卻至-10 25°C，靜置至析出結(jié)晶，過(guò)濾得到濾餅和濾液，濾餅用重結(jié)晶溶劑A重結(jié)晶后， 得到的晶體粗品加堿水溶液，調(diào)PH值為7 9進(jìn)行分解，再加入CHCl3萃取，取有機(jī)層蒸除 溶劑得到加蘭他敏粗品；將加蘭他敏粗品用丙酮溶解，并加入HBr水溶液，過(guò)濾得到加蘭他 敏氫溴酸鹽，用重結(jié)晶溶劑B重結(jié)晶，得到加蘭他敏純品；所述重結(jié)晶溶劑A或B各自獨(dú)立 為乙醇水溶液、甲醇、無(wú)水乙醇或丙酮；所述石蒜總生物堿浸膏中含有的加蘭他敏與L-(-)_ 二苯甲酰酒石酸、HBr水溶液 中HBr的物質(zhì)的量比為1 1 4 1 2。進(jìn)一步，所述的方法優(yōu)選為檢測(cè)石蒜總生物堿浸膏中加蘭他敏的含量，將石蒜總 生物堿浸膏與L- (-) - 二苯甲酰酒石酸混合，用75%的乙醇作溶劑，在80°C下充分反應(yīng)，得 澄清溶液，然后冷卻至室溫，靜置至析出結(jié)晶，過(guò)濾得到濾餅和濾液，濾餅用85 %的乙醇重 結(jié)晶后，得到的晶體粗品加10% NaOH水溶液，調(diào)pH值為8進(jìn)行分解，再加入CHCl3萃取，取 有機(jī)層蒸除溶劑得到加蘭他敏粗品；將加蘭他敏粗品用丙酮溶解，并加入HBr水溶液，過(guò)濾 得到的加蘭他敏氫溴酸鹽用50%乙醇重結(jié)晶，得到加蘭他敏純品。所述方法中，所述石蒜總生物堿浸膏中含有的加蘭他敏與75 95%的乙醇溶劑 的質(zhì)量之比為1 10 30。所述堿水溶液為NaOH溶液、KOH溶液、碳酸鈉溶液、碳酸鉀溶液、碳酸氫鈉溶液或 碳酸氫鉀溶液，優(yōu)選10% NaOH溶液。所述重結(jié)晶溶劑A優(yōu)選50 85 %的乙醇，所述重結(jié)晶溶劑B優(yōu)選35 65 %的乙 本發(fā)明所述的石蒜總生物堿浸膏為市售或由石蒜鱗莖以酸為提取劑經(jīng)浸漉法提取得到，通常按照以下方法制得取石蒜鱗莖，不加篩粉碎，裝入滲漉筒中，加入2%。鹽酸， 完全浸沒石蒜鱗莖，隨時(shí)添加鹽酸溶液以保證石蒜鱗莖充分浸泡，浸泡8 12小時(shí)后開始 收集滲漉液，并不斷補(bǔ)充鹽酸溶液以保證石蒜鱗莖充分浸泡，至滲漉液由黃褐色轉(zhuǎn)為暗綠 色，停止?jié)B漉。合并所有滲漉液，調(diào)ph至6 7，過(guò)濾得到沉淀，即得到石蒜總生物堿浸膏。本發(fā)明所述在70 100°c溫度的條件下充分反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間一般在30分鐘 1小 時(shí)，得到澄清溶液；然后冷卻至-10 25°c，靜置至析出結(jié)晶，析晶時(shí)間一般在6-8小時(shí)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本方法基于超分子組裝的基本原理，利用主體分子與客體分子 之間拓?fù)鋵W(xué)上的相匹配，使得顯堿性的加蘭他敏在總生物堿液中選擇性地與L-(-)_ 二苯 甲酰酒石酸形成穩(wěn)定的分子晶體，從而實(shí)現(xiàn)高效、迅速的分離作用，其優(yōu)點(diǎn)主要在于a)拆分的效率比較高。由于分子識(shí)別的高度選擇性，只需要一次結(jié)晶，加蘭他敏的 收率可在80 % -90 %之間，純度在90 % -99 %之間。b)操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，實(shí)施成本低，污染少，利于工業(yè)放大。具體實(shí)施例方式下面以具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于 此。石蒜總生物堿浸膏的制備取石蒜鱗莖^g，不加篩粉碎，用2%0 hcl潤(rùn)濕，裝入預(yù) 先墊有脫脂棉的滲漉筒中，邊裝邊倒鹽酸，待石蒜鱗莖裝到滲漉筒的一半時(shí)，即停止裝筒。 繼續(xù)加入2%。hc1，直到石蒜鱗莖完全浸沒，反復(fù)振搖，隨時(shí)添加鹽酸溶液以保證石蒜鱗莖 充分浸泡，浸泡過(guò)夜。第2天開始收集滲漉液，并不斷補(bǔ)充鹽酸溶液，至滲漉液由黃褐色轉(zhuǎn) 為暗綠色，停止?jié)B漉。合并所有滲漉液，調(diào)ph至7，過(guò)濾得到沉淀，即得到石蒜總生物堿浸膏 1. 2kgo實(shí)施例1將石蒜總生物堿浸膏(含加蘭他敏10 %，其他生物堿20 %，hplc測(cè)定)5. og與 0. 6g l-(-)_ 二苯甲酰酒石酸(購(gòu)于濟(jì)南比優(yōu)特化工有限公司)混合，用15.0ml 75%的 乙醇作溶劑，加熱至80°c，加熱30min得澄清溶液。然后將其冷卻至25°c，析出結(jié)晶[結(jié) 晶 i:ir(kbr， cm-1)3418,3068,3056,2960,1731，1635，1602，1586，1335，1318，1266，1179， 1026,1003,937,890,710,684,650,617ο 1h nmr (dms0-d6) δ 8· 046 (d，1h)，7· 742 (d，1h)， 7. 619 (d, 1h)，6. 85 (ab, 2h, j = 9. 6hz)，6. 15 (d, 1h, j = 7. 9hz)，5. 95 (dd, 1h, j = 7. 9hz, j = 3. 2hz), 5. 922 (d, 1h), 4. 85 (d, 1h, j = 16. ohz)，4. 60 (s，1h)，4. 47 (bs，1h)，4. 35 (d， 1h, j = 16. 0hz)，4. 10 (bs, 1h)，3. 70-3. 90 (s+m, 4h)，3. 50 (d, 1h, j = 12. 8hz)，2. 85 (bs, 3h)，2. 40-2. 00 (m，3h)，1.90 (d，lh，j= 16. ohz)]。過(guò)濾，同時(shí)回收溶劑及識(shí)別試劑、副產(chǎn) 混生物堿濾液。晶體i 0.46g再加入15. 0ml85%的乙醇重結(jié)晶，再過(guò)濾，同時(shí)回收乙醇溶 劑，然后滴加10%的naoh調(diào)ph至8進(jìn)行分解，加入ioomlchcl3萃取，取有機(jī)層蒸除溶劑， 最終得到加蘭他敏粗品0. 44g。將粗品加入15. oml丙酮溶解，并加入0. 7ml40 %的hbr 溶液，過(guò)濾得到的加蘭他敏氫溴酸鹽，用10.0ml 50%乙醇重結(jié)晶，最后干燥，得到其成品 0. 43g :ir(kbr, cnt1)3520，2582，2522，1618，1510，1418，1286，1048，1020，810，719，613， 428。1HnMR(DMSO-CI6) δ 6. 85(ab,2h, j = 9. 6hz)，6. 15 (d，1η，j = 7. 9hz)，5. 95 (dd，1h，j =7. 9hz, j = 3. 2hz)，4. 85 (d, 1h, j = 16. 0hz)，4. 60 (s, 1h)，4. 47 (bs, 1h)，4. 35 (d, 1h,j = 16. ohz)，4. 10 (bs, 1h)，3. 70-3. 90 (s+m, 4h)，3. 50 (d, 1h, j = 12. 8hz)，2. 85 (bs, 3h)， 2. 40-2. 00 (m, 3h)，1. 90 (d，1h，j = 16. ohz)。采用hplc測(cè)定加蘭他敏的含量。色譜條件 色譜柱 mrbaxcwosommx0. 46mm，0.5 μ m)；流動(dòng)相 v(水)v(甲醇)v(冰乙酸)= 91 8 l;流速lml·min-1;柱溫3(rc;壓力l bar;進(jìn)樣量lμl;檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。純 度 98.3%，收率 86.0%。實(shí)施例2將總生物堿(含加蘭他敏13 %，其他生物堿18 % ) 6. 4g與3. ogl-㈠-二苯甲酰酒 石酸混合，用19.2ml 85%的乙醇作溶劑，加熱至100°c，加熱ih得澄清溶液。然后將其冷 卻至 10°c，析出結(jié)晶[結(jié)晶 i :ir(kbr, cm-1) 3418, 3068, 3056, 2960,1731，1635，1602，1586， 1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。1HnMR(DMSO-CI6) δ 8. 046 (d， 1h)，7· 742(d，1h)，7· 619(d，1h)，6· 85(ab，2h，j = 9. 6hz) ,6. 15 (d, 1h, j = 7. 9hz)， 5. 95 (dd, 1h, j = 7. 9hz, j = 3. 2hz)，5. 922 (d, 1h)，4. 85 (d, 1h, j = 16. ohz)，4. 60 (s, 1h)， 4. 47 (bs, 1h)，4. 35 (d, 1h, j = 16. ohz)，4. 10 (bs, 1h)，3. 70-3. 90 (s+m, 4h)，3. 50 (d, 1h, j =12. 8hz)，2. 85(bs，3h)，2. 40-2. 00(m，3h)，1. 90(d，1h，j = 16. ohz)]。過(guò)濾，同時(shí)回收 溶劑及識(shí)別試劑、副產(chǎn)混生物堿濾液。晶體i 0. 78g再加入19. 2ml 75%的乙醇重結(jié)晶，再 過(guò)濾，同時(shí)回收乙醇溶劑，然后滴加10%的naoh調(diào)ph至7. 5進(jìn)行分解，加入ioomlchcl3 萃取，取有機(jī)層蒸除溶劑，最終得到加蘭他敏粗品0. 73g。將粗品加入19. 2ml丙酮溶解， 并加入0.6ml 40%的hbr溶液，過(guò)濾得到的加蘭他敏氫溴酸鹽，用12.8ml 65%乙醇重結(jié) 晶，最后干燥，得到其成品 0. 69g :ir(kbr, cnt1) 3520，2582，2522，1618，1510，1418，1286, 1048,1020,810,719,613,428ο 1H nmr(DMS0_d6) δ 6· 85 (αβ，2η，j = 9. 6ηζ)，6. 15 (d，1η， j = 7. 9ηζ)，5. 95 (dd, 1η, j = 7. 9hz, j = 3. 2ηζ)，4. 85 (d, 1η, j = 16. ohz)，4. 60 (s, 1η)，4.47 (bs, 1η)，4. 35 (d, 1η, j = 16. ohz)，4. 10 (bs, 1η)，3. 70-3. 90 (s+m, 4h)，3. 50 (d, 1h, j = 12. 8hz)，2. 85 (bs, 3h)，2. 40-2. 00 (m, 3h)，1. 90 (d, 1h, j = 16. ohz)。采用 hplc 測(cè)定加蘭他 敏的含量。色譜條件色譜柱mrbaxcwosommx 0. 46mm，0.5 μ m)；流動(dòng)相v (水)v (甲 醇)v(冰乙酸)=91 8 1 ；流速lml.mirt1 ；柱溫30°c;壓力126bar ；進(jìn)樣量iyl ； 檢測(cè)波長(zhǎng)觀此！!!。純度98.8%，收率82.9%。實(shí)施例3將總生物堿(含加蘭他敏8%，其他生物堿19% )7. 與0.8g l_(-)_二苯甲酰酒 石酸混合，用17ml 95%的乙醇作溶劑，加熱至70°c，加熱50min得澄清溶液。然后將其冷 卻至-10°c，析出結(jié)晶[結(jié)晶 i :ir(kbr, cm-1) 3418, 3068, 3056, 2960,1731，1635，1602，1586， 1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。1HnMR(DMSO-CI6) δ 8. 046 (d， 1h)，7· 742(d，1h)，7· 619(d，1h)，6· 85(ab，2h，j = 9. 6hz) ,6. 15 (d, 1h, j = 7. 9hz)，5.95 (dd, 1h, j = 7. 9hz, j = 3. 2hz)，5. 922 (d, 1h)，4. 85 (d, 1h, j = 16. ohz)，4. 60 (s, 1h)， 4. 47 (bs, 1h)，4. 35 (d, 1h, j = 16. ohz)，4. 10 (bs, 1h)，3. 70-3. 90 (s+m, 4h)，3. 50 (d, 1h, j =12. 8hz)，2· 85(bs，3h)，2· 40-2. 00 (m, 3h)，1. 90 (d, 1h, j = 16. ohz)]。過(guò)濾，同時(shí)回收溶 劑及識(shí)別試劑、副產(chǎn)混生物堿濾液。晶體i 0.48g再加入21.9ml 55%的乙醇重結(jié)晶，再過(guò) 濾，同時(shí)回收乙醇溶劑，然后滴加10%的naoh調(diào)ph至7進(jìn)行分解，加入ioomlchcl3萃取， 取有機(jī)層蒸除溶劑，最終得到加蘭他敏粗品0. 45g。將粗品加入21. 9ml丙酮溶解，并加入 0.6ml40%的hbr溶液，過(guò)濾得到的加蘭他敏氫溴酸鹽，用14.6ml 35%乙醇重結(jié)晶，最后干燥，得到其成品 0. 44g :IR(KBr, cm-1) 3520, 2582, 2522,1618，1510，1418，1286，1048，1020， 810，719，613，428。1H NMR(DMS0_d6) δ 6. 85(AB，2H，J = 9. 6Hz)，6· 15 (d, 1H, J = 7. 9Hz)， 5. 95 (dd, 1H, J = 7. 9Hz, J = 3. 2Hz)，4. 85 (d, 1H, J = 16. 0Hz)，4. 60 (s, 1H)，4. 47 (bs, 1H)， 4. 35 (d, 1H, J = 16. 0Hz)，4. 10(bs，1H)，3. 70-3. 90(s+m，4H)，3. 50(d，1H，J = 12. 8Hz)，2.85 (bs, 3H)，2. 40-2. OO (m，3H)，1. 90 (d，1H，J = 16. OHz)。采用 HPLC測(cè)定加蘭他敏的含量。 色譜條件色譜柱MrbaxC180. 46謹(jǐn)，0. 5 μ m)；流動(dòng)相V (水)V (甲醇)V (冰 乙酸)=91 8 1;流速11^.1^11-1;柱溫301;壓力1261^1~;進(jìn)樣量11^;檢測(cè)波長(zhǎng) 280nm。純度 99. 3%，收率 75. 3%。實(shí)施例4將總生物堿(含加蘭他敏15%，其他生物堿22% )8. 2g與4. 9g L_(-)_ 二苯甲 酰酒石酸混合，用24. 6ml90 %的乙醇作溶劑，加熱至80°C，加熱45min得澄清溶液。然 后將其冷卻至 0°C，析出結(jié)晶[結(jié)晶 I =IR (KBr, cm-1) 3418, 3068, 3056, 2960,1731,1635, 1602，1586，1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。1HnMR(DMSO-CI6) δ 8. 046 (d, 1H)，7. 742 (d, 1H) ,7. 619 (d, 1H)，6. 85 (AB, 2H, J = 9. 6Hz)，6. 15 (d, 1H, J = 7. 9Hz) ,5. 95 (dd, 1H, J = 7. 9Hz, J = 3. 2Hz)，5. 922 (d，1H)，4. 85 (d，1H，J = 16. OHz)， 4. 60 (s，1H)，4· 47 (bs, 1H)，4· 35 (d, 1Η, J = 16. OHz)，4· 10 (bs, 1Η)，3· 70-3. 90 (s+m, 4Η)，3.50 (d, 1Η, J = 12. 8Ηζ)，2. 85 (bs, 3Η)，2. 40-2. 00 (m, 3Η)，1. 90 (d, 1H, J = 16. OHz)]。過(guò) 濾，同時(shí)回收溶劑及識(shí)別試劑、副產(chǎn)混生物堿濾液。晶體II. 12g再加入M.6ml 85%的乙 醇重結(jié)晶，再過(guò)濾，同時(shí)回收乙醇溶劑，然后滴加10%的NaOH調(diào)pH至9進(jìn)行分解，加入 IOOmLCHCl3萃取，取有機(jī)層蒸除溶劑，最終得到加蘭他敏粗品1. 05g。將粗品加入Μ. 6ml丙 酮溶解，并加入1.5ml 40%的HBr溶液，過(guò)濾得到的加蘭他敏氫溴酸鹽，用16.細(xì)1 50%乙 醇重結(jié)晶，最后干燥，得到其成品 0. 97g :IR(KBr, cm"1) 3520, 2582, 2522,1618,1510,1418, 1286，1048，1020，810，719，613，428。1H NMR(DMS0_d6) δ 6. 85(AB，2H，J = 9. 6Hz)，6· 15 (d, 1H, J = 7. 9Hz)，5. 95 (dd, 1H, J = 7. 9Hz，J = 3. 2Hz)，4. 85 (d, 1H, J = 16. 0Hz)，4. 60 (s, 1H)，4.47 (bs, 1H)，4. 35 (d, 1H, J = 16. OHz)，4. 10 (bs, 1H)，3. 70-3. 90 (s+m, 4H)，3. 50 (d, 1H, J = 12. 8Hz)，2. 85 (bs, 3H)，2. 40-2. 00 (m, 3H)，1. 90 (d, 1H, J = 16. OHz)。采用 HPLC 測(cè)定加蘭他 敏的含量。色譜條件色譜柱MrbaxCwOSOmmX 0. 46mm，0.5 μ m)；流動(dòng)相V (水)V (甲 醇)V(冰乙酸)=91 8 1 ；流速lmL.mirT1 ；柱溫30°C;壓力126bar ；進(jìn)樣量IyL ； 檢測(cè)波長(zhǎng)觀此！!!。純度99. 1%，收率78.9%。實(shí)施例5將總生物堿(含加蘭他敏12%，其他生物堿20% )9. Ig與3. Og L_(-)_ 二苯甲 酰酒石酸混合，用27.3ml 75%的乙醇作溶劑，加熱至90°C，加熱70min得澄清溶液。然 后將其冷卻至 15°C，析出結(jié)晶[結(jié)晶 I =IR(KBr, cm-1) 3418, 3068, 3056, 2960,1731,1635, 1602，1586，1335，1318，1266，1179，1026，1003，937，890，710，684，650，617。1HnMR(DMSO-CI6) δ 8. 046 (d, 1H)，7. 742 (d, 1H) ,7. 619 (d, 1H)，6. 85 (AB, 2H, J = 9. 6Hz)，6. 15 (d, 1H, J = 7. 9Hz) ,5. 95 (dd, 1H, J = 7. 9Hz, J = 3. 2Hz)，5. 922 (d，1H)，4. 85 (d，1H，J = 16. OHz)， 4. 60 (s，1H)，4. 47 (bs, 1H)，4. 35 (d, 1H, J = 16. OHz)，4. 10 (bs, 1H)，3. 70-3. 90 (s+m, 4H)， 3. 50 (d, 1H, J = 12. 8Hz)，2. 85 (bs, 3H)，2. 40-2. 00 (m, 3H)，1. 90 (d, 1H, J = 16. OHz)]。過(guò) 濾，同時(shí)回收溶劑及識(shí)別試劑、副產(chǎn)混生物堿濾液。晶體I 1. 04再加入27. 3ml 50%的乙醇重結(jié)晶，再過(guò)濾，同時(shí)回收乙醇溶劑，然后滴加10%的NaOH調(diào)pH至8. 5進(jìn)行分解，加入 IOOmLCHCl3萃取，取有機(jī)層蒸除溶劑，最終得到加蘭他敏粗品0. 98g。將粗品加入27. 3ml 丙酮溶解，并加入1. 5ml40%的HBr溶液，過(guò)濾得到的加蘭他敏氫溴酸鹽，用18. 2ml 45%乙 醇重結(jié)晶，最后干燥，得到其成品 0. 91g :IR(KBr, cm"1) 3520, 2582, 2522,1618,1510,1418, 1286，1048，1020，810，719，613，428。1H NMR(DMS0_d6) δ 6. 85(AB，2H，J = 9. 6Hz)，6· 15 (d, 1H, J = 7. 9Hz)，5. 95 (dd, 1H, J = 7. 9Hz，J = 3. 2Hz)，4. 85 (d, 1H, J = 16. 0Hz)，4. 60 (s, 1H)， 4. 47 (bs, 1H)，4. 35 (d, 1H, J = 16. OHz)，4. 10 (bs, 1H)，3. 70-3. 90 (s+m, 4H)，3. 50 (d, 1H, J = 12. 8Hz)，2. 85 (bs, 3H)，2. 40-2. 00 (m, 3H)，1. 90 (d, 1H, J = 16. OHz)。采用 HPLC 測(cè)定加蘭他 敏的含量。色譜條件色譜柱MrbaxCwOSOmmX 0. 46mm，0.5 μ m)；流動(dòng)相V (水)V (甲 醇)V(冰乙酸)=91 8 1 ；流速lmL.mirT1 ；柱溫30°C;壓力126bar ；進(jìn)樣量IyL ； 檢測(cè)波長(zhǎng)觀此！!!。純度98.9%，收率83. 3%。
權(quán)利要求
1.一種分離加蘭他敏的方法，所述方法以含有加蘭他敏的石蒜總生物堿浸膏為原料， 所述的石蒜總生物堿浸膏是由石蒜鱗莖以酸為提取劑經(jīng)浸漉法提取得到的浸膏，其特征 在于所述的方法為檢測(cè)石蒜總生物堿浸膏中加蘭他敏的含量，將石蒜總生物堿浸膏與 L-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用75、5%的乙醇作溶劑，在7(T10(TC下充分反應(yīng)，得澄清溶 液，然后冷卻至_1(T25°C，靜置至析出結(jié)晶，過(guò)濾得到濾餅和濾液，濾餅用重結(jié)晶溶劑A重 結(jié)晶后，得到的晶體粗品加堿水溶液，調(diào)PH值為7、進(jìn)行分解，再加入CHCl3萃取，取有機(jī) 層蒸除溶劑得到加蘭他敏粗品；將加蘭他敏粗品用丙酮溶解，并加入HBr水溶液，過(guò)濾得到 加蘭他敏氫溴酸鹽，用重結(jié)晶溶劑B重結(jié)晶，得到加蘭他敏純品；所述重結(jié)晶溶劑A或B各 自獨(dú)立為乙醇水溶液、甲醇、無(wú)水乙醇或丙酮；所述石蒜總生物堿浸膏中含有的加蘭他敏與L-(-)_ 二苯甲酰酒石酸、HBr水溶液中 HBr的物質(zhì)的量比為1:1 4:1 2。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的方法為檢測(cè)石蒜總生物堿浸膏中加 蘭他敏的含量，將石蒜總生物堿浸膏與L- (-) - 二苯甲酰酒石酸混合，用75%的乙醇作溶劑， 在80°C下充分反應(yīng)，得澄清溶液，然后冷卻至室溫，靜置至析出結(jié)晶，過(guò)濾得到濾餅和濾液， 濾餅用85%的乙醇重結(jié)晶后，得到的晶體粗品加10%Na0H水溶液，調(diào)pH值為8進(jìn)行分解，再 加入CHCl3萃取，取有機(jī)層蒸除溶劑得到加蘭他敏粗品；將加蘭他敏粗品用丙酮溶解，并加 入HBr水溶液，過(guò)濾得到的加蘭他敏氫溴酸鹽用50%乙醇重結(jié)晶，得到加蘭他敏純品。
3.如權(quán)利要求1或所述的方法，其特征在于所述石蒜總生物堿浸膏中含有的加蘭他敏 與75 95%的乙醇溶劑的質(zhì)量之比為1:10 30。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述堿水溶液為NaOH溶液、KOH溶液、碳酸鈉 溶液、碳酸鉀溶液、碳酸氫鈉溶液或碳酸氫鉀溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種分離加蘭他敏的方法先檢測(cè)石蒜總生物堿浸膏中加蘭他敏的含量，將石蒜總生物堿浸膏與L-(-)-二苯甲酰酒石酸混合，用75~95%的乙醇作溶劑，在70~100℃下充分反應(yīng)，得澄清溶液，然后冷卻至-10~25℃，靜置至析出結(jié)晶，過(guò)濾取濾餅用重結(jié)晶溶劑A重結(jié)晶后，得到的晶體粗品加堿水溶液，調(diào)pH值為7~9進(jìn)行分解，加入CHCl3萃取，取有機(jī)層蒸除溶劑得到加蘭他敏粗品；然后用丙酮溶解，加入HBr水溶液，過(guò)濾得到加蘭他敏氫溴酸鹽，用重結(jié)晶溶劑B重結(jié)晶，得到加蘭他敏純品。本發(fā)明拆分的效率高，只需要一次結(jié)晶，加蘭他敏的收率可在80-90%之間，純度在90-99%之間。并且操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，實(shí)施成本低，污染少，利于工業(yè)放大。
文檔編號(hào)C07D491/107GK102050826SQ20101059826
公開日2011年5月11日 申請(qǐng)日期2010年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月21日
發(fā)明者王聰, 金志敏 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)