專利名稱：蘆薈大黃素及大黃酸的分離制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種采用高速逆流色譜法從大黃中分離制備出高純度單體蘆薈大黃素(Aloe-emodin)及大黃酸(rhein)的制備分離方法。
背景技術(shù)：
大黃是中藥的四大名藥材之一，其藥理用途十分廣泛，主要功效為破淤活血，攻下瀉熱，抗菌消炎，保肝利尿，調(diào)解免疫，延緩衰老，降脂減肥，抗腫瘤，止血止痛等。而且，還用于配制果糖、飲料、香料、釀酒和工業(yè)染料等行業(yè)。大黃性味苦寒，有攻下積滯、瀉火涼血、活血化瘀、利膽退黃的功效。主要用于實(shí)熱性腸胃積滯、大便燥結(jié)等癥；亦適用于火熱上炎而致的咽喉、牙齦腫痛；還可用于因瘀血阻滯所致的經(jīng)閉疼痛、產(chǎn)后腹痛以及濕熱黃疸等癥，或作熱毒瘡瘍的外敷藥?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究分析，大黃內(nèi)含有大黃酸、大黃素、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、番瀉葉甙A等，還含有鞣質(zhì)，能刺激大腸，增加腸的張力和蠕動，減少水分吸收，因而有瀉下作用。并對葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、痢疾桿菌、大腸桿菌等細(xì)菌有抑制作用，能促進(jìn)膽汁等消化液的分泌，降低毛細(xì)血管通透性，增加血小板，促進(jìn)血液凝固，降低血壓和膽固醇?，F(xiàn)有文獻(xiàn)報道采用柱層析及高效液相色譜的方法分離，但純度不高，回收率很低。高速逆流色譜(High-speed Countercurrent Chromatography，HSCCC)是近些年發(fā)展起來的一種連續(xù)的無需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術(shù)，它避免了固態(tài)支持體或載體帶來的各種問題如樣品易被吸附、損耗和變性，使用其它液相色譜法進(jìn)行制備量分離時，其分配效率會明顯降低，溶劑消耗量大，HSCCC保證較高峰型分辨度，分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環(huán)境緩和，節(jié)約溶劑。逆流色譜儀能直接進(jìn)大量粗提樣品或合成混合物，分離結(jié)果能達(dá)到相當(dāng)高的純度，甚至能直接接質(zhì)譜儀等儀器，已廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、環(huán)保等領(lǐng)域化學(xué)物質(zhì)的制備分離和純化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是采用高速逆流色譜的方法得到純度98％以上的單體蘆薈大黃素及單體大黃酸。本發(fā)明的方案是首先選擇溶劑的兩相組合，可選用的兩相體系有多個，含水溶劑體系由三個組分或四個組分構(gòu)成，三個組分為石油醚，或正庚烷、或正己烷、或正戊烷，或氯仿、或二氯甲烷、或四氯化碳，和乙腈、或甲醇、或乙醇、或丙酮，和水。四個組分為石油醚，或正庚烷、或正己烷、或正戊烷，和乙酸乙酯、或乙酸丙酯、或乙酸異丙酯、或乙酸正丁酯，和乙腈、或甲醇、或乙醇、或丙酮和水。
采用三個組分體系，以上相為固定相，下相為流動相，在保證上下相體積比大于1前提下，根據(jù)溶解度常數(shù)，在不破壞體系平衡的情況下，調(diào)節(jié)三組分的體積比依次為2-5∶0.5-1.5∶1-5，經(jīng)過一次分離得到單體蘆薈大黃素及單體大黃酸純品?；虿捎盟慕M分體系，以上相為固定相，下相為流動相，在保證上下相體積比小于1前提下，根據(jù)溶解度常數(shù)，在不破壞體系平衡的情況下，調(diào)節(jié)四組分的體積比依次為3-9∶1-7∶3-6∶2-6，經(jīng)過一次分離得到單體蘆薈大黃素及單體大黃酸純品。實(shí)驗(yàn)條件適合室溫15-30℃，室溫對分離效率影響不大。在上述溫度范圍內(nèi)，室溫較高時，出峰時間略有提前，分離效率變化不大，對蘆薈大黃素及大黃酸峰形無影響。
首先按體積比將上述溶劑體系配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開。采用分析型或半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，2mL或20mL進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為40或240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa3057便攜式記錄儀，F(xiàn)C-95自動餾份收集器。將大黃粗提物樣品溶解于流動相中待用。進(jìn)樣品前，先用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為500-1000rpm(半制備型儀器轉(zhuǎn)速)1500-2000rpm(分析型儀器轉(zhuǎn)速)，以0.5-3.0mL/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待整個體系建立動態(tài)平衡后，從進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測器紫外譜圖，接收目標(biāo)成分，得到固體。
用此方法提取的單體蘆薈大黃素及大黃酸純度都可達(dá)到98％以上。適用于從各種工藝途徑制備的不同含量蘆薈大黃素及大黃酸的大黃粗提物分離制備出高純度(98％以上)的單體蘆薈大黃素及單體大黃酸。適用于用各種型號的逆流色譜儀分離制備蘆薈大黃素及大黃酸，能直接進(jìn)大量的粗提樣品或合成混合物，分離結(jié)果能達(dá)到相當(dāng)高的純度。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1選取正己烷-乙醇-水在半制備型逆流色譜儀上來分離純化索式抽提得大黃粗提物中的蘆薈大黃素及大黃酸，首先按5∶1∶5體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后，靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相作為固定相，下相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa3057便攜式記錄儀，F(xiàn)C-95自動餾份收集器。稱取400mg大黃粗提物樣溶解于20mL流動相中待用。進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)；待整個體系建立動態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；然后根據(jù)檢測器蘆薈大黃素及大黃酸的紫外譜圖，分別接收蘆薈大黃素及大黃酸目標(biāo)成分。分別得到兩種黃色固體，其HPLC純度均達(dá)到98％。
實(shí)施例2選取氯仿-甲醇-水在半制備型逆流色譜儀上來分離純化回流抽提大黃粗提物中蘆薈大黃素及大黃酸。先按4∶3∶2體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相作為固定相，下相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，F(xiàn)C-95自動餾份收集器。稱取100mg大黃粗提物樣溶解于20mL流動相中待用，進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)；待整個體系建立動態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；然后根據(jù)檢測器蘆薈大黃素及大黃酸的紫外譜圖，分別接收蘆薈大黃素及大黃酸目標(biāo)成分。分別得到兩種黃色固體，其HPLC純度達(dá)到98％左右。
實(shí)施例3取石油醚-乙酸丙酯-乙腈-水組分在分析型逆流色譜儀上來分離純化經(jīng)柱層析后大黃粗提物中蘆薈大黃素及大黃酸。首先按9∶1∶5∶5體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相作為固定相，下相作為流動相。采用分析型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，1mL進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為40mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，F(xiàn)C-95自動餾份收集器。稱取15mg大黃粗提物樣溶解于1mL流動相中待用。進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為1900rpm，以1.0mL/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)；待整個體系建立動態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；然后根據(jù)檢測器蘆薈大黃素及大黃酸的紫外譜圖，分別接收蘆薈大黃素及大黃酸目標(biāo)成分。分別得到兩種黃色固體，其HPLC純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例4選取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水在半制備型逆流色譜儀上來分離純化大黃粗提物中蘆薈大黃素及大黃酸，首先按7∶3∶3∶7體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相作為固定相，下相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，F(xiàn)C-95自動餾份收集器。稱取370mg大黃粗提物樣溶解于20mL流動相中待用。進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)；待整個體系建立動態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；然后根據(jù)檢測器蘆薈大黃素及大黃酸的紫外譜圖，分別接收蘆薈大黃素及大黃酸目標(biāo)成分。分別得到兩種黃色固體，其HPLC純度達(dá)到98％左右。
實(shí)施例5選取正庚烷-乙酸異丙酯-乙醇-水在半制備型逆流色譜儀上來分離純化大黃粗提物中蘆薈大黃素及大黃酸，首先按3∶7∶5∶5體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相作為固定相，下相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa3057便攜式記錄儀，F(xiàn)C-95自動餾份收集器。稱取360mg大黃粗提物樣溶解于20mL流動相中待用。
進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)；待整個體系建立動態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；然后根據(jù)檢測器蘆薈大黃素及大黃酸的紫外譜圖，分別接收蘆薈大黃素及大黃酸目標(biāo)成分。分別得到兩種黃色固體，其HPLC純度達(dá)到98％左右。
實(shí)施例6選取正戊烷-乙酸正丁酯-丙酮-水在半制備型逆流色譜儀上來分離純化大黃粗提物中蘆薈大黃素及大黃酸，首先按1∶1∶1∶1體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相作為固定相，下相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為450mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa3057便攜式記錄儀，F(xiàn)C-95自動餾份收集器。稱取650mg大黃粗提物樣溶解于20mL流動相中待用。
進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)；待整個體系建立動態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；然后根據(jù)檢測器蘆薈大黃素及大黃酸的紫外譜圖，分別接收蘆薈大黃素及大黃酸目標(biāo)成分。分別得到兩種黃色固體，其HPLC純度達(dá)到98％左右。
實(shí)施例7選取正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水在半制備型逆流色譜儀上來分離純化大黃粗提物中蘆薈大黃素及大黃酸，首先按5∶5∶4∶6體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取上相作為固定相，下相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa3057便攜式記錄儀，F(xiàn)C-95自動餾份收集器。稱取340mg大黃粗提物樣溶解于20mL流動相中進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)；待整個體系建立動態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；然后根據(jù)檢測器蘆薈大黃素及大黃酸的紫外譜圖，分別接收蘆薈大黃素及大黃酸目標(biāo)成分。分別得到兩種黃色固體，其HPLC純度達(dá)到98％左右。
實(shí)施例8-11選取二氯甲烷-丙酮-水，按4∶1∶3體積比配制溶劑，或選取四氯化碳-乙醇-水，按4∶3∶2體積比配制溶劑，或選取正戊烷-甲醇-水，按5∶2∶4體積比配制溶劑，或選取正庚烷-乙腈-水，按5∶1∶4體積比配制溶劑，按實(shí)施例1的方法，從大黃粗提物中分離制備高純度單體蘆薈大黃素及大黃酸，分別得到純度達(dá)到98％的蘆薈大黃素及大黃酸。
權(quán)利要求
1 一種蘆薈大黃素及大黃酸的分離制備方法，其特征在于它是采用逆流色譜法從大黃粗提物中分離制備出高純度蘆薈大黃素及大黃酸，其溶劑體系由三個組分或四個組分構(gòu)成，三個組分為石油醚，或正庚烷、或正己烷、或正戊烷，或氯仿、或二氯甲烷、或四氯化碳，和乙腈、或甲醇、或乙醇、或丙酮，和水，體積比依次為2-5∶0.5-1.5∶1-5四個組分為石油醚，或正庚烷、或正己烷、或正戊烷，和乙酸乙酯、或乙酸丙酯、或乙酸異丙酯、或乙酸正丁酯，和乙腈、或甲醇、或乙醇、或丙酮和水，體積比依次為3-9∶1-7∶3-6∶2-6。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用高速逆流色譜法從大黃中分離制備高純度蘆薈大黃素及大黃酸的方法，其所用的溶劑為石油醚，正庚烷、正己烷、正戊烷、氯仿、二氯甲烷、四氯化碳，乙腈、甲醇、乙醇、丙酮；乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯、水，其溶劑的兩相組合可由其中的三個或四個組分構(gòu)成，適用于對各種途徑獲得的大黃粗提物提純，純度可達(dá)到98％以上，適用于用各種型號的逆流色譜儀分離制備蘆薈大黃素及大黃酸，能直接進(jìn)大量粗品或合成混合物，分離效果能達(dá)到很高的純度。
文檔編號C07B63/00GK1490298SQ0315322
公開日2004年4月21日 申請日期2003年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月8日
發(fā)明者魏蕓, 張?zhí)煊? 魏 蕓 申請人:北京天純維通生物技術(shù)有限公司