專利名稱：從棗中提取環(huán)磷酸腺苷(cAMP)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了從棗中提取環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的工藝背景技術(shù)目前國內(nèi)外廠家生產(chǎn)的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)均為人工合成產(chǎn)物，其原料為核糖核酸(RNA)，它是由腺嘌呤核苷酸、鳥嘌呤核苷酸、尿嘧啶核苷酸、胞嘧啶核苷酸組成，其中腺嘌呤核苷酸的分子中含有腺嘌呤、核糖和磷酸。環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的分子中也含有腺嘌呤、核糖和磷酸，由磷酸基與核糖的3’和5’位兩個羥基構(gòu)成兩個酯鍵形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，因而得名為環(huán)磷酸腺苷(cAMP)。由于核糖核酸(RNA)含有合成環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的原料，因此目前國內(nèi)外廠家均采用核糖核酸(RNA)做原料通過下述兩個主要步驟制備環(huán)磷酸腺苷(cAMP)1.核糖核酸(RNA)反復(fù)水解將核糖核酸(RNA)分子中由3’，5’磷酸二酯鍵連接的四種核苷酸用催化劑反復(fù)水解成四種分離的核苷酸，該步驟所用催化劑須有專屬性，既能把四種核苷酸水解分離開，又不致水解過度產(chǎn)生更多的小分子物質(zhì)，因此難度較大且成本高；2.采用化學(xué)方法使磷酸基與核糖的3’和5’位兩個羥基構(gòu)成兩個酯鍵形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
現(xiàn)有工藝存在的問題
1.成本高由于使用核糖核酸(RNA)做為生產(chǎn)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的原料，核糖核酸(RNA)本身就很昂貴，每公斤約為25000元而其中的腺嘌呤核苷酸僅占核糖核酸(RNA)的1/4，所以目前國內(nèi)僅有的幾家采用核糖核酸(RNA)為原料生產(chǎn)的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)每公斤至少在12萬元以上，國外廠家如Sigma公司每公斤環(huán)磷酸腺苷(cAMP)高達(dá)21.5萬美元約合人民幣178.5萬元。
2.毒副作用大由于在核糖核酸(RNA)反復(fù)水解過程和環(huán)化步驟中添加了一些非天然的催化劑和化學(xué)試劑，使得最后產(chǎn)品中混有少量雜質(zhì)，進(jìn)入人體內(nèi)造成一定的毒副作用，有些雜質(zhì)甚至長期滯留體內(nèi)成為致癌、致畸、致突變物質(zhì)，因此目前國內(nèi)外生產(chǎn)的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)僅用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)研究中做為生化試劑使用和動物實驗治療中使用，尚未見用于患者臨床的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種生產(chǎn)成本低、產(chǎn)品純天然無任何毒副作用的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的生產(chǎn)工藝。
本發(fā)明從棗中提取環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的工藝是按照以下程序?qū)崿F(xiàn)的浸泡棗經(jīng)洗凈、涼干、去核后稱重，按500克添加蒸餾水5升比例，加蒸餾水浸泡24-48小時；勻漿將上述浸泡液用組織搗碎機(jī)或組織勻漿機(jī)進(jìn)行搗碎勻漿，每次連續(xù)3分鐘，靜止20分鐘，反復(fù)進(jìn)行3次，該步驟及以后各步驟均在4℃±1℃溫度條件下進(jìn)行；離心將上述勻漿液用高速冷凍離心機(jī)在轉(zhuǎn)速為12000g離心15分鐘；取出上清液，取出上清液后的沉淀物再用2.5升蒸餾水按勻漿項下條件勻漿和按離心項下條件離心，上清液與前次合并；濃縮將合并后的上清液用薄膜蒸發(fā)器或水浴鍋蒸發(fā)，使其最后體積為1000ml左右；第一次柱層析將上述濃縮后的上清液通過陰離子交換樹脂柱進(jìn)行離子交換柱層析；開始用少許蒸餾水洗脫下來深棕色液體棄去后，收集用0.05N甲酸洗脫下來的淺黃色液體。
調(diào)整酸堿度(pH)將上述收集的淺黃色液體用1N HN4OH調(diào)pH至中性(pH＝7)；第二次柱層析上述呈中性洗脫液第二次通過陰離子交換樹脂柱層析，洗脫液及其收集同第一次柱層析；氧化鋁柱層析將第二次柱層析洗脫液通過氧化鋁柱層析，先用少許蒸餾水洗脫棄去棕色液體后用Tris緩沖液洗脫并收集洗脫液；第四次柱層析上述洗脫液第三次通過陰離子交換樹脂柱層析，洗脫液及其收集同第2次柱層析；冷凍干燥將上述洗脫液用冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成環(huán)磷酸腺苷(cAMP)凍干粉。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有的優(yōu)點
1.成本低廉由于本工藝提取環(huán)磷酸腺苷(cAMP)所用原料為棗，眾所周知，棗含有較高含量的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)，以靜海棗為例，其含量為749nmol/g，按70％收率計算，每公斤95％純度的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)成本約為5萬元人民幣，其成本明顯低于合成方法制備的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)；2.無毒副作用棗屬藥食同源，既可做為干鮮果品食用又可作為中藥材入藥，因此從棗中提取的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)屬純天然產(chǎn)品，無毒副作用。


本發(fā)明無附圖具體實施方式
實施例1，以靜海地區(qū)金絲小棗為原料生產(chǎn)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的工藝是按照以下程序?qū)崿F(xiàn)的浸泡金絲小棗經(jīng)洗凈、涼干、去核后稱重，按500克添加蒸餾水5升比例，加蒸餾水浸泡24-48小時；勻漿將上述浸泡液用組織搗碎機(jī)或組織勻漿機(jī)進(jìn)行搗碎勻漿，每次連續(xù)3分鐘，靜止20分鐘，反復(fù)進(jìn)行3次，該步驟及以后各步驟均在4℃±1℃溫度條件下進(jìn)行；離心將上述勻漿液用高速冷凍離心機(jī)在轉(zhuǎn)速為12000g離心15分鐘；取出上清液，取出上清液后的沉淀物再用2.5升蒸餾水按勻漿項下條件勻漿和按離心項下條件離心，上清液與前次合并；
濃縮將合并后的上清液用薄膜蒸發(fā)器或水浴鍋蒸發(fā)，使其最后體積為1000ml左右；第一次柱層析將上述濃縮后的上清液通過陰離子交換樹脂柱進(jìn)行離子交換柱層析；開始用少許蒸餾水洗脫下來深棕色液體棄去后，收集用0.05N甲酸洗脫下來的淺黃色液體。
調(diào)整酸堿度(pH)將上述收集的淺黃色液體用1N HN4OH調(diào)pH至中性(pH＝7)；第二次柱層析上述呈中性洗脫液第二次通過陰離子交換樹脂柱層析，洗脫液及其收集同第一次柱層析；氧化鋁柱層析將上述洗脫液通過氧化鋁柱層析，先用少許蒸餾水洗脫棄去棕色液體后，用Tris緩沖液洗脫并收集洗脫液；第四次柱層析上述洗脫液第三次通過陰離子交換樹脂柱層析，洗脫液及其收集同第2次柱層析；冷凍干燥將上述洗脫液用冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成環(huán)磷酸腺苷(cAMP)凍干粉。
權(quán)利要求
1.從棗中提取環(huán)磷酸腺苷(cAMP)工藝，其特征在于本發(fā)明從棗中提取環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的工藝是按照以下程序?qū)崿F(xiàn)的浸泡棗經(jīng)洗凈、涼干、去核后稱重，按500克添加蒸餾水5升比例，加蒸餾水浸泡24-48小時；勻漿將上述浸泡液用組織搗碎機(jī)或組織勻漿機(jī)進(jìn)行搗碎勻漿，每次連續(xù)3分鐘，靜止20分鐘，反復(fù)進(jìn)行3次，該步驟及以后各步驟均在4℃±1℃溫度條件下進(jìn)行；離心將上述勻漿液用高速冷凍離心機(jī)在轉(zhuǎn)速為12000g離心15分鐘；取出上清液，取出上清液后的沉淀物再用2.5升蒸餾水按勻漿項下條件勻漿和按離心項下條件離心，上清液與前次合并；濃縮將合并后的上清液用薄膜蒸發(fā)器或水浴鍋蒸發(fā)，使其最后體積為1000ml左右；第一次柱層析將上述濃縮后的上清液通過陰離子交換樹脂柱進(jìn)行離子交換柱層析；開始用少許蒸餾水洗脫下來深棕色液體棄去后，收集用0.05N甲酸洗脫下來的淺黃色液體。調(diào)整酸堿度(pH)將上述收集的淺黃色液體用1N HN4OH調(diào)pH至中性(pH＝7)；第二次柱層析上述呈中性洗脫液第二次通過陰離子交換樹脂柱層析，洗脫液及其收集同第一次柱層析；氧化鋁柱層析將第二次柱層析洗脫液通過氧化鋁柱層析，先用少許蒸餾水洗脫棄去棕色液體后用Tris緩沖液洗脫并收集洗脫液；第四次柱層析上述洗脫液第三次通過陰離子交換樹脂柱層析，洗脫液及其收集同第2次柱層析；冷凍干燥將上述洗脫液用冷凍干燥機(jī)冷凍干燥成環(huán)磷酸腺苷(cAMP)凍干粉。
全文摘要
本發(fā)明提供了從棗中提取環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的工藝。大棗經(jīng)洗凈、晾干、去核后按比例添加蒸餾水浸泡24－48小時后勻槳，高速冷凍離心，取上清液反復(fù)經(jīng)離子交換柱層析，進(jìn)行分離、純化、冷凍干燥成凍干粉末。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有1.成本低廉由于本工藝提取環(huán)磷酸腺苷(cAMP)所用原料為棗，以靜海棗為例，其含量為749nmol/g，按70％收率計算，每公斤95％純度的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)成本約為5萬元人民幣，其成本明顯低于合成方法制備的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)；2.無毒副作用棗屬藥食同源，既可做為干鮮果品食用又可作為中藥材入藥，因此本產(chǎn)品屬純天然產(chǎn)品，無毒副作用。
文檔編號C07H19/00GK1702076SQ20041001861
公開日2005年11月30日 申請日期2004年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月15日
發(fā)明者李明潤, 于文才, 杜恩祥, 高向耘, 林木強, 劉志忠 申請人:靜?？h科學(xué)技術(shù)委員會, 天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所, 天津順祥乳業(yè)有限公司