專利名稱：替加氟的硒代卵磷脂類化合物及其合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種含替加氟的硒代卵磷脂類化合物及其合成，涉及有機(jī)硒和一種核苷類物質(zhì)，具體是替加氟的硒代磷脂衍生物。
背景提要磷脂具有廣泛的生理活性，大量的磷脂已被合成并證明具有良好的抗癌活性，同時它又是藥物的有效載體，對腫瘤組織具有一定的靶向作用；核苷及其類似物在臨床上廣泛用作抗腫瘤和抗病毒藥物；硒是人體必須微量元素，它具有非常明顯的防癌、抗癌作用，臨床結(jié)果表明，有機(jī)態(tài)硒能極為有效地提高硒的生物利用度及其作為生命必須微量元素的生理功能，且其毒性比無機(jī)硒大大降低。其化合物在治療癌癥方面發(fā)揮了重大的作用，近幾年，將Se引入到藥物分子中或合成新的含Se藥物是一個研究的熱點(diǎn)。但是核苷的硒代卵磷脂類化合物的合成與活性還未見報(bào)道。因此，合成這類化合物并研究它們的生物活性，對磷脂類新藥的創(chuàng)制將會具有一定的指導(dǎo)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于合成核苷的硒代卵磷脂類化合物，以期解決核苷類藥物療效低，毒性大等不足。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是本發(fā)明的化合物是一種如通式所示的替加氟的硒卵磷脂類化合物
n＝2，3，6其合成方法為 下面進(jìn)一詳述本發(fā)明合成的替加氟的硒代卵磷脂類化合物的元素分析用YanacoCHN CORDER MT-3型自動元素分析儀測定。元素分析結(jié)果及理化數(shù)據(jù)見表1。
表1.2a～c的31P NMR，元素分析及理化數(shù)據(jù)Entry n分子式 Rf狀態(tài)Yield(％)元素分析 分析值(計(jì)算值)碳 氫 氮2a 2C35H65FN3O7PSe 0.25 Syrup56 54.9(54.6) 8.47(8.45) 5.45(5.46)2b 3C36H67FN3O7PSe 0.28 Syrup63 55.3(55.2) 8.67(8.66) 5.37(5.34)2c 6C39H73FN3O7PSe 0.35 Syrup68 56.9(56.7) 8.83(8.85) 5.12(5.09)說明測定比移值Rf所用的流動相是氯仿/甲醇(9∶1)；收率是柱層析后的產(chǎn)率。
用BRUKER AC-P400HE型儀測定31P NMR(85％H3PO4為外標(biāo))，和1H NMR(以TMS為內(nèi)標(biāo))，結(jié)果見表2。
表2.2a～c核磁共振氫譜及31P NMR如下2a1H NMR(δppm)0.879(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.213～1.298(s，26H(CH2)13)，1.337(t，J＝7.2Hz，9H，N(CH2CH3)3)，1.531～1.548(m，2H，O CH2C15H31)，1.880～1.952(m，1H，1/2 CH2CHN)，2.008～2.049(m，1H，1/2 CH2CHN)，2.175～2.192(m，1H，1/2 CH2CH2OCHN)；2.302～2.410(m，1H，1/2 CH2CH2OCHN)，3.009～3.165(m，6H，N( CH2CH3)3)，3.416～4.387(m，13H)，5.975(N(CH2CH3)3)，7.360～7.383(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR55.782，56.083，56.234，56.507ppm.
2b1H NMR(δppm)0.879(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.215～1.299(s，28H(CH2)13，OCH2CH2CH2N)；1.339(t，J＝7.2Hz，9H，N(CH2CH3)3)，1.533～1.552(m，2H，O CH2C15H31)，1.883～1.955(m，1H，1/2 CH2CHN)，2.010～2.051(m，1H，1/2 CH2CHN)，2.179～2.195(m，1H，1/2 CH2CH2OCHN)；2.305～2.413(m，1H，1/2 CH2CH2OCHN)，3.011～3.167(m，6H，N( CH2CH3)3)，3.419～4.391(m，13H)，5.975(N(CH2CH3)3)，7.363～7.386(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR55.653，55.956，56.013，56.327ppm.
2c1H NMR(δppm)0.879(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.215～1.332(s，36H(CH2)13，OCH2( CH2)4CH2N)；1.342(t，J＝7.2Hz，9H，N(CH2CH3)3)，1.536～1.559(m，2H，O CH2C15H31)，1.887～1.965(m，1H，1/2 CH2CHN)，2.013～2.058(m，1H，1/2 CH2CHN)，2.183～2.225(m，1H，1/2 CH2CH2OCHN)；2.317～2.469(m，1H，1/2 CH2CH2OCHN)，3.015～3.178(m，6H，N( CH2CH3)3)，3.422～4.395(m，13H)，5.978(N(CH2CH3)3)，7.363～7.386(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR55.332，55.635，55.938，56.257ppm.
我們研究了化合物(2a～c)對人體對膀胱癌細(xì)胞T-24抑制作用的體外試驗(yàn)，本試驗(yàn)選用體外連續(xù)培養(yǎng)的膀胱癌細(xì)胞株。細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，37℃、5％CO2條件下；細(xì)胞倍增時間為24～30h.以替加氟作為參照。其結(jié)果見表3。
表3化合物2a～c對膀胱癌細(xì)胞T-24抑制作用(半數(shù)置死量IC50，μg/ml)Entry Tegafur2a 2b 2cT-24 1277.03.512從表3可知，化合物2a～c對膀胱癌細(xì)胞T-24生長抑制效果遠(yuǎn)優(yōu)于原藥替加氟，說明硒的引入，增強(qiáng)了抗癌活性。
合成路線設(shè)計(jì)方案開環(huán)是有機(jī)反應(yīng)中的一類重要反應(yīng)。在合成天然產(chǎn)物及其衍生物方面有巨大應(yīng)用，卵磷脂的合成是通過1.3.2-二氧磷雜環(huán)戊烷的開環(huán)，我們設(shè)計(jì)替加氟的硒代卵磷脂類化合物的合成通過三乙胺對替加氟的環(huán)甘油硒代磷脂綴合物的親核開環(huán)來實(shí)現(xiàn)。
化合物(1a～c)與三乙胺發(fā)生開環(huán)反應(yīng)在室溫下即能進(jìn)行，得目標(biāo)分子(2a～c)。
硒代卵磷脂類化合物是一類結(jié)構(gòu)新型的化合物。其光譜性質(zhì)未見文獻(xiàn)報(bào)道，通過與其相應(yīng)的硫代卵磷脂類化合物的光譜性質(zhì)的比較，我們可以確定其結(jié)構(gòu)。
首先通過比較反應(yīng)物與產(chǎn)物的1H NMR，可以確定已經(jīng)引入了(CH3CH2)3N基團(tuán)。在產(chǎn)物分子中，它除了具有與原料基本相同的1H NMR值外，在δ1.33處有一個三重峰，在δ3.16處有一個四重峰。這些都表明(CH3CH2)3N基團(tuán)的存在。
反應(yīng)物環(huán)甘油硒磷脂綴合物的31P NMR值為δ87ppm左右，而生成物的31P NMR值為δ55ppm左右，表明反應(yīng)物已經(jīng)發(fā)生了轉(zhuǎn)化。產(chǎn)物為下列結(jié)構(gòu) 前面，我們報(bào)道了替加氟的硫代卵磷脂類化合物的31P NMR值為δ62ppm左右。硒代卵磷脂類化合物與硫代卵磷脂類化合物的31P NMR值之差異，可歸結(jié)于硒的電負(fù)性比硫小的原故。
其反應(yīng)機(jī)理可以認(rèn)為是親核試劑進(jìn)攻甘油骨架上位阻較小碳原子的側(cè)面而形成目標(biāo)產(chǎn)物。
化合物(2a～c)與(1a～c)相比，性質(zhì)有較大區(qū)別反應(yīng)物不溶于水，僅能溶于有機(jī)溶劑中。室溫下，產(chǎn)物在水中有一定的溶解度，與乙醇、二氯甲烷、苯等有機(jī)溶劑則混溶，具有親水親脂性，這是由于目標(biāo)分子中有強(qiáng)親水性基氧負(fù)離子.對于提高藥物生物利用率具有重要的意義。
具體實(shí)施例方式1、替加氟的硒代卵磷脂類化合物的合成將334mg(0.5mmol)硒代甘油磷脂替加氟綴合物1a溶于5ml干燥苯中，加入2ml三乙胺。室溫下避光攪拌6小時。(攪拌速度為800轉(zhuǎn)/分鐘)，旋轉(zhuǎn)去掉溶劑苯和剩余的三乙胺，將殘余物進(jìn)行快速色譜分離(CH3Cl-CH3OH＝9∶1)。按表1中比移值收集。
2、抗腫瘤活性測定首先以DMSO為溶劑將樣品和對照物分別稀釋為10，0.1mg.ml-1，再分別取10ul加入到完全培養(yǎng)基1ml中，使之在實(shí)驗(yàn)中的終濃度為100ug.ml-1、1mg.ml-1。同時以不加樣品的DMSO為實(shí)驗(yàn)陽性對照。
以完全培養(yǎng)基為溶劑，分別配制成100，10和1ug.ml-1，作為實(shí)驗(yàn)使用。同時以完全培養(yǎng)基作為陰性對照。
細(xì)胞鋪板與觀察計(jì)數(shù)取正常生長處于對數(shù)期的T-24和BGC-823細(xì)胞，用0.02％EDTA消化液將細(xì)胞從種子瓶中消化下來，制備成細(xì)胞濃度為1.5×104個/ml的細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液接種于24孔板，1ml/孔，正常培養(yǎng)24h后，吸取培養(yǎng)基，換入各組含有測試樣品的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
給藥后，并分別于給藥后24、48、72、96、120h觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，同時消化各組仍處于生長狀態(tài)的活細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。得出樣品對癌細(xì)胞的抑制作用結(jié)果。在不同時段，在倒置顯微鏡下，可清晰的觀察到對照組細(xì)胞生長正常。細(xì)胞排列緊密，呈對數(shù)生長狀態(tài)。細(xì)胞分裂指數(shù)相為惡性腫瘤細(xì)胞分裂指數(shù)狀態(tài)。以DMSO為溶劑組由于DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用，因此在實(shí)驗(yàn)中設(shè)置空白組。在給藥組，細(xì)胞分裂指數(shù)相下降。隨藥物農(nóng)度的增加，其下降趨勢增大，細(xì)胞死亡增加，存活細(xì)胞出現(xiàn)縮圓、胞質(zhì)濃縮、精糙、顆粒性內(nèi)涵物增加。
權(quán)利要求
1.一種含替加氟的硒代卵磷脂類化合物，其特征在于該化合物的通式為
2.一種如權(quán)利要求1所述的替加氟的硒代卵磷脂類化合物合成方法，其特征在于環(huán)甘油硒代磷脂綴合物與三乙胺在室溫下發(fā)生親核開環(huán)反應(yīng)得到含替加氟的硒代卵磷脂類化合物，反應(yīng)式為
全文摘要
含替加氟的硒代卵磷脂類化合物及其合成涉及有機(jī)硒和一種核苷類物質(zhì)。該化合物的結(jié)構(gòu)式如通式所示如上式化合物的合成，是將替加氟的環(huán)甘油硒代磷脂綴合物與三乙胺在室溫下發(fā)生親核開環(huán)反應(yīng)。經(jīng)抗腫瘤活性測定，本發(fā)明化合物對人體膀胱癌抑制效果比原藥替加氟好。
文檔編號C07H19/10GK1634960SQ20041004692
公開日2005年7月6日 申請日期2004年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月12日
發(fā)明者許新華, 陳雄, 周冰 申請人:湖南大學(xué)