專利名稱：地龍的類多金屬硫蛋白及固有生物活性物復(fù)配制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是采用一類新的生物載體——地龍，運(yùn)用物理化學(xué)誘導(dǎo)方法產(chǎn)生類多金屬硫蛋白與地龍固有生物活性物——蚓激酶，抗菌肽等地龍?zhí)崛∥?，并?fù)配黃芪提取物、丹參提取物、硫辛酸和1，6二磷酸鋅果糖等功能成分，作為藥物、保健品和化妝品添加劑等用途。
背景技術(shù)：
地龍作為中藥材已有幾千年的藥用歷史，具有活血化瘀，平喘止咳等功效。近代研究地龍含有蚓激酶，抗菌肽，嘌呤和琥珀酸等生物成分，采集地龍?zhí)崛∥锘虻佚埛?，作為藥物成分。專利申?qǐng)?zhí)?2124042.6把微量元素硒、鍺、錳和鋅添加到蚯蚓飼料中，制成富硒、鍺蛋白的方法，飼養(yǎng)周期長(zhǎng)達(dá)40～60天。存在飼養(yǎng)用期長(zhǎng)，微量元素的不均勻波動(dòng)；蛋白質(zhì)分子量偏大；飼料、土壤中的有害重金屬如鉛、鎘…汞等進(jìn)入蚯蚓體中等等諸多局限性，從而限制了對(duì)它充分、有效的利用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在利用新的生物載體——地龍采用有益微量元素特殊的誘導(dǎo)方法，使地龍產(chǎn)生類多金屬硫蛋白(Like-polybasicMetallothionein簡(jiǎn)稱L·pMT)并不影響地龍?jiān)械纳锘钚猿煞郑皇菙U(kuò)展生物的活性物的分子量范圍，類多金屬硫蛋白的分子量在(16～17)KD，蚓激酶的分子量在(20～30)KD。類金屬硫蛋白具有多種生物功能的蛋白質(zhì)，含有(21～26)％巰基，每個(gè)分子含有(5～6)金屬離子。類金屬硫蛋白的生物學(xué)功能是(1)捕捉自由基、(2)抗輻射、(3)重金屬解毒劑、(4)有益微量元素調(diào)節(jié)劑、(5)修復(fù)受損細(xì)胞。
類金屬硫蛋白與蚓激酶，抗菌肽、嘌呤和琥珀酸等不僅互不干擾，相反具有互補(bǔ)和協(xié)同效應(yīng)像是系列化的分子量，在不同的范圍。功能基團(tuán)各不相同。
本發(fā)明的特征在于兩個(gè)方面(1)通過(guò)物理、化學(xué)誘導(dǎo)方法產(chǎn)生類金屬硫蛋白，增加了地龍中活性蛋白質(zhì)；(2)把多種有益微量元素(Cr、Mn、Zn、Se等)引進(jìn)活性蛋白中，強(qiáng)化了兩者互補(bǔ)和協(xié)同作用，擴(kuò)展了地龍活性金屬蛋白的全息效應(yīng)。
類金屬硫蛋白還有一種重要的功能，即土壤中或飼料中的重金屬如鉛、鎘、汞等有毒元素進(jìn)入地龍活體中，類金屬硫蛋白與之絡(luò)合，起到解毒作用和化險(xiǎn)為夷的功效，這是其它方法所不具備的。
類金屬硫蛋白是生物體在應(yīng)激狀態(tài)下的產(chǎn)物，因而它有鎮(zhèn)靜，穩(wěn)定情緒，提高穩(wěn)定心理閾值的作用。它的抗輻射作用，在治療前服用本發(fā)明的制劑，起到保護(hù)機(jī)體正常細(xì)胞，同時(shí)具有增敏作用，強(qiáng)化放療效果。
本發(fā)明選擇優(yōu)良健壯的地龍，經(jīng)過(guò)人工誘導(dǎo)、凈化勻漿、離心粗提、離心沉降、柱析精提、超濾脫鹽、冷凍干燥得到地龍多組分活性蛋白的凍干粉類金屬硫蛋白、蚓激酶、抗菌肽等功能成分。所述工藝程序在低溫潔凈狀態(tài)下進(jìn)行。
人工誘導(dǎo)將鮮活健壯地龍導(dǎo)入誘導(dǎo)床上進(jìn)行，把氯化鋅或硫酸鋅、三氯化鉻、氯化錳，亞硒酸鈉等鹽類，分別配制相應(yīng)濃度的水溶液，然后分別加入到紅薯漿中，然后再摻入陳化后植物腐料，制成誘導(dǎo)劑餌料。通過(guò)誘導(dǎo)床對(duì)地龍進(jìn)行三方面刺激調(diào)控，溫度刺激(6℃至34℃，24h)、干濕刺激(濕度在30～80％)、電位刺激(4～5V/30cm)和饑餓刺激，按照誘導(dǎo)-休眠-誘導(dǎo)-休眠交替進(jìn)行，至第九天進(jìn)入下步操作程序。
凈化勻漿漿誘導(dǎo)后的地龍，清洗，用生理鹽水凈化內(nèi)腔泥砂，加入等容量Tris-HCl(0.01mol/L，PH～8，含0.5ml/L生理鹽水)緩沖液，搗碎勻漿，然后再加2～4倍體積緩沖液攪勻后靜置；粗提離心將勻漿后地龍液，以9000r/min，30min，取上清液；離心沉降將上清液在53℃恒溫水浴上加熱1h，取上清液；柱析精提將上步上清液在已處理好的Sephadex G-50柱上層析，以緩沖液洗脫；超濾脫鹽洗脫液經(jīng)超濾脫鹽，得超濾液；
冷凍干燥脫鹽后的地龍?zhí)崛∫?，在低溫冷凍干燥設(shè)備上，取得地龍?zhí)崛∥飪龈煞邸?br> 本發(fā)明誘導(dǎo)產(chǎn)生的類多金屬硫蛋白分別為類鉻金屬硫蛋白(L·CrMT)、類錳金屬硫蛋白(L·MnMT)、類鋅金屬硫蛋白(L·ZnMT)和類硒硫蛋白(L·SeMT)與蚓激酶、抗菌肽等地龍活性成分，復(fù)配黃芪提取物、丹參提取物、硫辛酸、1，6二磷酸鋅果糖制成腸溶膠囊配比是地龍活性提取物 (52.0-58.0)％黃芪提取物 (12.0-16.0)％丹參提取物 (10.0-15.0)％硫辛酸 (8.0-13.0)％1，6-二磷酸鋅果糖(8.0-16.0)％麥芽糊精 (3.0-4.0)％地龍保健膠囊具有溶栓、抗凝、降低血粘度、調(diào)節(jié)血壓、血糖和血脂的順利代謝功能。地龍活性提取物可以作為藥物、保健品和化妝品添加劑的生物活性成分。
具體實(shí)施例方式
根據(jù)本發(fā)明的方法，結(jié)合實(shí)施例說(shuō)明如下人工誘導(dǎo)(1)首先配制微量元素的水溶液，各微量元素溶液濃度如下Cr4.8g/L，Mn5.6g/L，Zn11.6g/L，Se3.6g/L(2)地龍誘導(dǎo)餌料，用紅薯糊加入陳化后植物腐料中；(3)微量元素溶液添加量，按每公斤餌料添加50ml溶液，每一種微量元素為一組分，分別進(jìn)行誘導(dǎo)；(4)誘導(dǎo)程序誘導(dǎo)-休眠-誘導(dǎo)-休眠。首先將鮮活健壯的地龍導(dǎo)入誘導(dǎo)床，投給一日量的餌料，緊接進(jìn)行三方面刺激調(diào)控溫度刺激，從室溫降至6℃維持8h，逐步升溫至34℃，維持8h，降溫升溫各4h。干濕刺激，濕度在(30-80)％范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，在低溫時(shí)為高濕度，在高溫時(shí)低濕度。電壓刺激，在休眠期在誘導(dǎo)床上加上電位差4～5V/30cm刺激3S間隙30S總共電激三次。
以上刺激交替進(jìn)行四個(gè)周期，到第九天進(jìn)行下步驟操作；凈化勻漿誘導(dǎo)后的地龍，清洗再用生理鹽水凈化地龍內(nèi)腔泥砂，加入等容量的Tris-HCl(0.01mol/L PH～80.5ml/L生理鹽水)緩沖液，搗碎勻漿后，加3.6倍容積緩沖液，攪勻后稍靜置；粗提離心將勻漿后地龍液，以9000r/min 30min，取上清液；離心沉降將上清液在53℃恒溫水浴上加熱1h，以10000r/min離心分離1h，取上清液；柱析精提將上步清液，注入已處理好的Sephadex G-50柱上層析，以緩沖液洗脫，收集洗脫液；超濾脫鹽洗脫液經(jīng)超濾脫鹽，在低溫冷凍干燥設(shè)備上，得到地龍?zhí)崛∥飪龈煞邸?br> 將四種地龍活性凍干粉L·CrMT L·MnMT L·ZnMT L·SeMT按5∶50∶160∶1組分比例混合抣勻后，再按下列復(fù)配成地龍保健膠囊地龍復(fù)合凍干粉 54.0％黃芪提取物 15.0％丹參提取物 11.0％硫辛酸 8.0％1，6二磷酸鋅果糖 9.0％麥芽糊精 3.0％所有操作在較低室溫和潔凈環(huán)境中操作。
權(quán)利要求
1.地龍通過(guò)物理化學(xué)誘導(dǎo)產(chǎn)生的類多金屬硫蛋白與地龍固有的蚓激酶、抗菌肽等生物活性物，用生化方法提取后，復(fù)配黃芪提取物、丹參提取物、硫辛酸，1，6二磷酸鋅果糖等制劑，類多金硫蛋白是由類鉻金屬硫蛋白、類錳金屬硫蛋白、類鋅金屬硫蛋白和類硒硫蛋白的復(fù)合物，類多金屬硫蛋白的分子量約(16～17)KD，含有(21％～26％)的巰基，每個(gè)分子含(5～6)個(gè)金屬離子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的物理化學(xué)誘導(dǎo)方法和操作程序，采用控溫刺激，控濕刺激，電位刺激和饑餓刺激，周期交替進(jìn)行，并按誘導(dǎo)—休眠—誘導(dǎo)—休眠操作程序誘導(dǎo)。誘導(dǎo)期為四個(gè)周期(約8～10天)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的誘導(dǎo)劑由無(wú)機(jī)鉻鹽、錳鹽、鋅鹽和亞硒酸鹽等配制一定濃度(Cr4.8g/L、Mn5.6g/L、Zn11.6g/L、Se3.6g/L)的溶液，以50ml/kg微量元素溶液量，均勻加入餌料制成誘導(dǎo)餌料。
4.根據(jù)權(quán)利要求權(quán)利要求2和3所述的誘導(dǎo)餌料由各個(gè)微量元素鹽類配成相應(yīng)濃度的溶液，分別添加到由紅薯糊和陳化后的植物腐料，(1∶5.0～10.0)配成誘導(dǎo)餌料。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地龍復(fù)配成分是地龍活性復(fù)合提取物 (52.0～58.0)％黃芪提取物 (12.0～16.0)％丹參提取物 (10.0～15.0)％硫辛酸 (8.0～13.0)％1，6磷酸鋅果糖 (8.0～16.0)％麥芽糊精(3.0～4.0)％地龍活性復(fù)合提取物的復(fù)合成分和比例類鉻金屬硫蛋白 相對(duì)比例5.0類錳金屬硫蛋白 相對(duì)比例5.0類鋅金屬硫蛋白 相對(duì)比例160.0類硒硫蛋白 相對(duì)比例1.0
全文摘要
本發(fā)明利用地龍通過(guò)物理、化學(xué)誘導(dǎo)產(chǎn)生的類多金屬硫蛋白(L－polybasic Metallothionein簡(jiǎn)稱L·pMT)與地龍固有的蚓激酶、抗菌肽等生物活性物，用生化方法提取后，復(fù)配黃芪提取物、丹參提取物、硫辛酸，1，6二磷酸鋅果糖等功效成分，配成制劑。類多金屬硫蛋白由L·CrMT、L·MnMT、L·ZnMT和L·SeMT復(fù)合構(gòu)成地龍活性提取物的組分，類多金屬硫蛋白與蚓激酶相互強(qiáng)化相互協(xié)同和互補(bǔ)效應(yīng)，具有降低血粘度、溶栓抗凝、調(diào)整血壓、血糖、血脂代謝等保健功能。作為藥物，保健品和化妝品添加劑等用途。
文檔編號(hào)C07K14/435GK1759856SQ200410067090
公開日2006年4月19日 申請(qǐng)日期2004年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月12日
發(fā)明者陶芒, 莊力楓 申請(qǐng)人:莊力楓