專利名稱：喜果苷的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉大孔吸附樹脂在中藥成分分離、純化中的應用，特別是一種喜果苷的提取方法。本發(fā)明利用大孔樹脂層析法，通過簡單的生產(chǎn)工藝，得到較高純度的喜果苷產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
科學家早在對喜樹(Camptotheca)堿的提取分離研究中，就發(fā)現(xiàn)了喜果甙的存在，但并未引起足夠重視。喜果甙對P388白血細胞有細胞毒活性，但對其藥用價值及其臨床療效并未做詳細研究。據(jù)文獻報道(徐任生，趙志遠，林隆澤，化學學報，1977，35(3，4)193)，喜果甙的分離可采用溶劑萃取和氧化鋁柱層析法，過程復雜，收率低。近年也有利用多種大孔樹脂配合法純化喜樹果苷的報道(王瑞芳，李家政，史作清等。高等學?；瘜W學報，2003，24(8)1534)，但步驟的增加不僅大大增加了成本，也降低了產(chǎn)率。
喜果苷，無色針晶，熔點210℃(分解)，不溶于水及一般有機溶劑，能溶于甲醇、丙二醇及二甲基亞砜，在空氣中放置漸變棕色。喜果苷具有顯著抗癌活性，且水溶性好，毒副作用小，有望成為一種重要的抗癌藥物。
喜樹果粉加熱酒精提液中，喜果甙的含量遠高于喜樹堿，喜樹果中喜果苷的含量高達0.27％，鑒于喜果甙具有抗癌活性且含量較高，因而具有重要的研究開發(fā)價值。另外從喜樹果中分離喜果甙對充分利用我國豐富的喜樹資源也具有重要的意義。
喜果苷的化學合成步驟繁瑣、收率低，無實際生產(chǎn)價值。喜樹果中分離純化喜果苷有望成為制備喜果苷的主流方法，且便于工業(yè)操作。關(guān)于由喜樹果中提起分離喜果苷至今未有文獻報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種喜果苷的提取方法，它是利用大孔樹脂吸附層析法由喜樹果中提取分離喜果苷，以充分利用我國豐富的喜樹資源。本發(fā)明的優(yōu)點為工藝簡單，產(chǎn)品質(zhì)量好，提取率高，原料豐富，成本低，無三廢，不污染環(huán)境，經(jīng)濟效益大。
本發(fā)明的工藝流程為喜樹果粉碎后以乙醇水溶液提取。提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷卻后過濾，得透明粗提液。在交換柱內(nèi)裝AL-2樹脂，喜樹果提液上柱后，先用一定濃度乙醇水溶液預洗，以去除大量雜質(zhì)；再用較高濃度的乙醇水溶液淋洗，得喜果苷流出液。喜果苷的流出液旋蒸濃縮至析出少量固體，放置冷卻析出大量針狀晶體，過濾。針晶用50％乙醇水溶液超聲溶解，過濾，濾液旋蒸濃縮，再次重結(jié)晶。多次重結(jié)晶后，晶體由淡黃色變?yōu)闊o色。
本發(fā)明喜果苷的提取方法詳細描述如下包括下述步驟1)將喜樹果原料粉碎，用乙醇溶液滲漉或乙醇溶液熱提取，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷卻至室溫后過濾，得透明提液。
2)將澄清提取液通入裝有大孔吸附樹脂(AL-2吸附樹脂，天津歐瑞生物科技有限公司生產(chǎn))的樹脂柱中吸附，用乙醇水溶液洗滌和解吸；吸附、洗滌、解吸的流速為0.5-2.5個床體積/小時。
3)喜果苷的流出液旋蒸濃縮至析出少量固體，放置冷卻至室溫析出大量針狀晶體。
4)針晶用50％乙醇水溶液超聲溶解，過濾，濾液旋蒸濃縮，再次重結(jié)晶，得喜果苷產(chǎn)品。
所述的乙醇溶液熱提取是25-80℃。
所述的喜樹果原料重量與樹脂的體積是2～4∶1(克∶毫升)。
所述的樹脂柱徑和柱高比為1∶5～30。
所述的洗滌液為5％-35％的乙醇，所述的解吸液為40％-90％的乙醇溶液。
本發(fā)明是利用大孔樹脂吸附層析法由喜樹果中提取分離喜果苷，充分利用了我國豐富的喜樹資源。僅通過“吸附——洗脫——重結(jié)晶”簡單的生產(chǎn)工藝，便可得到純品喜果苷產(chǎn)品。本發(fā)明工藝簡單，產(chǎn)品質(zhì)量好，提取率高，原料豐富，成本低，無三廢，不污染環(huán)境，經(jīng)濟效益大。
具體實施例方式實施例1取20g喜樹果粉碎后以50％的乙醇水溶液50℃加熱提取。提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷卻至室溫后過濾，得透明粗提液。在內(nèi)徑為1.5cm的交換柱內(nèi)裝AL-2樹脂10mL，喜樹果粗提液300mL上柱后，先用300mL30％乙醇水溶液預洗，以去除雜質(zhì)；再用300mL50％的乙醇水溶液淋洗，得喜果苷流出液。喜果苷的流出液旋蒸濃縮至析出少量固體，放置冷卻至室溫析出大量針狀晶體，過濾。針晶用50％乙醇水溶液超聲溶解，過濾，濾液旋蒸濃縮，再次重結(jié)晶，高效液相色譜測定，喜果苷純度98.6％。
實施例2取10g喜樹果粉碎后以50％的乙醇水溶液80℃加熱提取。提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷卻后過濾，得透明提液。內(nèi)徑0.9cm的交換柱內(nèi)裝AL-2吸附樹脂7mL(濕球)，將提純液(105mL)以約2BV/h的流速上柱(BV床體積)，用2BV的水洗柱，再用150mL30％乙醇水溶液淋洗，再用150mL50％的乙醇水溶液淋洗，得喜果苷流出液。喜果苷的流出液旋蒸濃縮至析出少量固體，放置冷卻析出大量針狀晶體，過濾。針晶用50％乙醇水溶液超聲溶解，過濾，濾液旋蒸濃縮，再次重結(jié)晶，高效液相色譜測定，喜果苷純度99.0％。
實施例3取200g喜樹果粉碎后以70％的乙醇水溶液70℃加熱提取。提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷卻后過濾，得透明提液。內(nèi)徑4cm的交換柱內(nèi)裝AL-2吸附樹脂100mL(濕球)，將提純液(1000mL)以約2BV/h的流速上柱(BV床體積)，用2BV的水洗柱，再用100mL30％乙醇水溶液淋洗，再用150mL60％的乙醇水溶液淋洗，得喜果苷流出液。喜果苷的流出液旋蒸濃縮至析出少量固體，放置冷卻析出大量針狀晶體，過濾。針晶用50％乙醇水溶液超聲溶解，過濾，濾液旋蒸濃縮，再次重結(jié)晶，高效液相色譜測定，喜果苷純度98.9％。
權(quán)利要求
1.一種喜果苷的提取方法，其特征在于它包括下述步驟1)將喜樹果原料粉碎，用乙醇溶液滲漉或乙醇溶液熱提取，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷卻至室溫后過濾，得透明提液；2)將澄清提取液通入裝有大孔吸附樹脂的樹脂柱中吸附，用乙醇水溶液洗滌和解吸；吸附、洗滌、解吸的流速為0.5-2.5個床體積/小時；3)喜果苷的流出液旋蒸濃縮至析出少量固體，放置冷卻至室溫析出大量針狀晶體；4)針晶用50％乙醇水溶液超聲溶解，過濾，濾液旋蒸濃縮，再次重結(jié)晶，得喜果苷產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的喜果苷的提取方法，其特征在于所述的乙醇溶液熱提取是50-80℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的喜果苷的提取方法，其特征在于所述的喜樹果原料重量與樹脂的體積是2～4∶1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的喜果苷的提取方法，其特征在于所述的樹脂柱徑和柱高比為1∶5～30。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的喜果苷的提取方法，其特征在于所述的洗滌液為5％-35％的乙醇，所述的解吸液為40％-90％的乙醇溶液。
全文摘要
本發(fā)明是一種喜果苷的提取方法，采用將喜樹果用乙醇溶液滲漉或乙醇溶液25－80℃熱提取、提取液通入裝有大孔吸附樹脂(AL－2吸附樹脂)的樹脂柱中吸附、用乙醇水溶液洗滌和解吸、流出液旋蒸濃縮和重結(jié)晶等步驟得喜果苷產(chǎn)品，喜樹果原料重量與樹脂的體積是2～4∶1。本發(fā)明工藝簡單、產(chǎn)品質(zhì)量好，提取率高，無三廢，不污染環(huán)境，原料來源豐富，成本低，經(jīng)濟效益大。
文檔編號C07H17/04GK1634951SQ200410072869
公開日2005年7月6日 申請日期2004年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月25日
發(fā)明者歐來良, 王瑞芳, 孔德鄰, 史作清 申請人:南開大學