專利名稱：一種桑葉黃酮提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從天然藥用植物桑葉中提取其黃酮類有效成分的提取方法。
背景技術(shù)：
桑葉異名鐵扇子，為?？茖偕?Morus alba L.)的樹葉。桑葉甘、苦、寒，歸肺、肝經(jīng)，能疏散風(fēng)熱，清肺潤燥，清肝明目，中醫(yī)用它治療風(fēng)熱感冒，肺熱燥咳，頭昏頭痛，目赤昏花，現(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)，桑葉可抑制血糖升高，具有預(yù)防和治療糖尿病的作用。桑葉中含有豐富的蕓香甙、槲皮素、異槲皮素以及槲皮素-3-葡萄糖甙等黃酮類化合物，含量約在3％左右。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，桑葉黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化功能、降血脂功能以及通過抑制大鼠小腸雙糖酶活性而具有顯著的降血糖作用。鑒于桑葉黃酮具有多種多樣的生物活性，桑葉黃酮在醫(yī)藥和食品領(lǐng)域作為天然藥物、天然抗氧化劑有廣泛的應(yīng)用前景。至目前為止，尚未見有關(guān)從藥用植物桑葉中大量提取桑葉黃酮的提取方法報(bào)道，基于以上原因，本發(fā)明對桑葉黃酮的提取方法進(jìn)行了詳細(xì)研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種效率高、無污染且能工業(yè)化生產(chǎn)的桑葉黃酮提取方法。
本發(fā)明的提取方法包括如下步驟(1)將桑葉粉碎，用乙醇回流提取，合并浸取液，靜置，過濾，濾液濃縮回收乙醇，制得乙醇提取物浸膏；(2)控制溫度60～80℃，用水對乙醇提取物浸膏反復(fù)提取，至提取液無黃酮顯色反應(yīng)，合并提取液，靜置，過濾，濃縮得濃縮液；(3)濃縮液用酸調(diào)pH值至微酸性；(4)加入無機(jī)鹽調(diào)整溶液的鹽含量至1％～5％；(5)上述樣品用非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱層析，先用水充分淋洗，至淋洗液由混濁變清、變?yōu)榈S色，再用30～70％乙醇淋洗2～5個(gè)柱體積，收集淋洗液，濃縮、干燥即得產(chǎn)品。
步驟(1)中所述的桑葉可粉碎至20～50目，用乙醇回流提取3～4次。所述的乙醇回流提取使用的乙醇濃度優(yōu)選為50％～80％。這樣桑葉黃酮的提取效率高，提取液中雜質(zhì)含量低。
步驟(2)中所述的水濃縮液的體積與桑葉重量比最好是(4～8)∶1(v/w)。
步驟(3)中所述的pH值為2～6，在此酸度范圍內(nèi)，大孔吸附樹脂對桑葉黃酮的吸附效率高。
步驟(4)中所述的無機(jī)鹽可以是氯化鈉、硫酸鈉、硫酸銨等的任意一種。無機(jī)鹽的加入可提高大孔吸附樹脂對桑葉黃酮的吸附效率。
步驟(5)中所述大孔吸附樹脂可以是D101、D140、AB-8中的任一種，柱層析分離時(shí)，大孔吸附樹脂床體積與待分離桑葉用量比例優(yōu)選為(0.5～1)∶1(v/w)。大孔樹脂柱層析淋洗速度最好為1-5ml/cm2.min。大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層分離過程可進(jìn)行1-3次，以滿足桑葉黃酮含量的要求。大孔吸附樹脂可再生利用，如用95％乙醇淋洗柱體即可使樹脂再生，使用多次后，樹脂也可用3％氫氧化鈉浸泡淋洗，再用大量水淋洗再生。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明使用溶劑安全無毒，價(jià)格低廉可回收再用，對環(huán)境無污染。
(2)本發(fā)明使用分離材料為大孔吸附樹脂。大孔吸附樹脂是近年來發(fā)展起來的一類有機(jī)高聚物吸附劑，它具有較好的吸附性能。為分離有機(jī)化合物尤其是極性大的化合物的有效手段，在天然產(chǎn)物化學(xué)成分的提取等方面顯示了獨(dú)特作用。它不僅理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶媒，對有機(jī)物選擇性較好，不受無機(jī)鹽類及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，并且易于洗脫再生，可多次利用。
(3)采用本發(fā)明從藥用植物桑葉中提取分離桑葉黃酮，提取量大，可工業(yè)化生產(chǎn)。
(4)采用本發(fā)明從藥用植物桑葉中提取分離桑葉黃酮，黃酮含量大于50％，提取效率高。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1稱取500g桑葉，粉碎過20目篩，用80％的乙醇溶液3升、2升、2升分三次回流提取，首次回流2.0小時(shí)，二次、三次分別回流1.0小時(shí)，合并提取液，冷藏靜置24小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮得乙醇提取物；乙醇提取物用水分別提取五次，每次500ml，提取1小時(shí)，溫度保持在75℃，合并水提取液，靜置過濾、減壓濃縮至約2升；用鹽酸調(diào)pH值為3.5；加入NaCl使鹽含量為3％；濃縮液上柱分離，其柱高為60cm，柱徑為3.0cm，柱填料為D101大孔吸附樹脂，先用水淋洗至流出液變清后，改用40％乙醇淋洗5倍柱體積，淋洗速度為20ml/min，收集淋洗液，減壓濃縮、真空干燥即得棕黃色的桑葉黃酮產(chǎn)物。以蘆丁為對照品，利用差示分光光度法測定桑葉總黃酮的含量，桑葉黃酮含量為61％。
實(shí)施例2稱取1Kg桑葉，粉碎過40目篩，用75％的乙醇溶液5升、4升、4升分三次回流提取，首次回流2.0小時(shí)，二次、三次分別回流1.0小時(shí)，合并提取液，冷藏靜置24小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮得乙醇提取物；乙醇提取物用水分別提取五次，每次800ml，提取1小時(shí)，溫度保持在75℃，合并水提取液，靜置過濾；用鹽酸調(diào)pH值為4；加入NaCl使鹽含量為3％；上柱分離，其柱高為60cm，柱徑為4.0cm，柱填料為D101大孔吸附樹脂；先用水淋洗至流出液變清后，改用50％乙醇淋洗4倍柱體積，淋洗速度為25ml/min，收集淋洗液，減壓濃縮、真空干燥即得棕黃色的桑葉黃酮產(chǎn)物。以蘆丁為對照品，利用差示分光光度法測定桑葉總黃酮的含量，桑葉黃酮含量為54％。
實(shí)施例3稱取500g桑葉，粉碎過20目篩，用80％的乙醇溶液3升、2升、2升分三次回流提取，首次回流2.0小時(shí)，二次、三次分別回流1.0小時(shí)，合并提取液，冷藏靜置24小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮得乙醇提取物；乙醇提取物用水分別提取五次，每次500ml，提取1小時(shí)，溫度保持在75℃，合并水提取液，靜置過濾、減壓濃縮至約2升，用鹽酸調(diào)pH值為3.5；加入NaCl使鹽含量為2％；濃縮液上柱分離，其柱高為60cm，柱徑為3.0cm，柱填料為AB-8大孔吸附樹脂，先用水淋洗至流出液變清后，改用40％乙醇淋洗5倍柱體積，淋洗速度為20ml/min，收集淋洗液，減壓濃縮、真空干燥即得棕黃色的桑葉黃酮產(chǎn)物。以蘆丁為對照品，利用差示分光光度法測定桑葉總黃酮的含量，桑葉黃酮含量為63％。
權(quán)利要求
1.一種桑葉黃酮提取方法，其特征在于包括如下步驟(1)將桑葉粉碎，用乙醇回流提取，合并浸取液，靜置，過濾，濾液濃縮得乙醇提取物浸膏；(2)控制溫度60～80℃，用水對乙醇提取物浸膏反復(fù)提取，至提取液無黃酮顯色反應(yīng)，合并提取液，靜置，過濾，濃縮得濃縮液；(3)濃縮液用酸調(diào)pH值至微酸性；(4)加入無機(jī)鹽調(diào)整溶液的鹽含量至1％～5％；(5)上述樣品用非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱層析，先用水充分淋洗，再用30～70％乙醇淋洗2～5個(gè)柱體積，收集淋洗液，濃縮、干燥即得產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種桑葉黃酮提取方法，其特征在于步驟(1)所述的乙醇回流提取使用的乙醇濃度為50％～80％。
3.如權(quán)利要求1所述的一種桑葉黃酮提取方法，其特征在于步驟(2)所述濃縮液的體積與桑葉重量比是(4～8)∶1(v/w)。
4.如權(quán)利要求1所述的一種桑葉黃酮提取方法，其特征在于步驟(3)所述pH值為2～6。
5.如權(quán)利要求1所述的一種桑葉黃酮提取方法，其特征在于步驟(4)所述的無機(jī)鹽是氯化鈉、硫酸鈉、硫酸銨中的任意一種。
6.如權(quán)利要求1所述的一種桑葉黃酮提取方法，其特征在于步驟(5)所述大孔吸附樹脂床體積與待分離桑葉用量比例為(0.5～1)∶1(v/w)。
7.如權(quán)利要求1所述的一種桑葉黃酮提取方法，其特征在于步驟(5)所述的柱層析淋洗速度為1-5ml/cm2.min。
8.如權(quán)利要求1所述的一種桑葉黃酮提取方法，其特征在于步驟(5)所述的柱層析分離層析次數(shù)為1-3次。
9.如權(quán)利要求1所述的一種桑葉黃酮提取方法，其特征在于步驟(5)所述的大孔吸附樹脂是D101、D140、AB-8中的任一種。
全文摘要
一種桑葉黃酮提取方法，采用桑葉粉為原料，用乙醇和水作為提取溶劑和洗脫劑，大孔吸附樹脂為分離材料，提取物中桑葉黃酮含量大于50％。本發(fā)明具有使用溶劑安全無毒，價(jià)格低廉可回收再用，對環(huán)境無污染，提取量大，可工業(yè)化生產(chǎn)，提取效率高的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07H1/00GK1683360SQ200510012388
公開日2005年10月19日 申請日期2005年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月12日
發(fā)明者張立偉, 楊林 申請人:山西大學(xué)