專利名稱：一種四氫吡啶并[3,2－d]嘧啶類化合物及制備抗腫瘤藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本專利涉及新的8位去氮雜、N5位烷基取代的四氫葉酸衍生物、其光學(xué)純異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體混合物、其可藥用鹽、含有所述化合物的藥物組合物。本發(fā)明還涉及此類化合物在制備具有抗葉酸類蛋白酶作用、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的抗腫瘤藥物中的用途。
背景技術(shù)：
癌癥是危害人類生命和健康的重大疾病，全世界因患癌癥死亡人數(shù)每年在500萬以上，已成為僅次于心血管疾病的第二大殺手。我國每年新發(fā)現(xiàn)癌癥患者有170多萬，死亡約在140萬，成為致死率最高的疾病。多年來由于對不同癌癥的發(fā)病機(jī)理缺乏深入的了解，目前尚無有效的預(yù)防、早期診斷和治療方法?；瘜W(xué)治療(以下稱化療)是臨床三種主要治療方法的一種，現(xiàn)代的化療起始于20世紀(jì)40年代，經(jīng)過50多年的發(fā)展，目前臨床上應(yīng)用的抗癌藥物已有相當(dāng)數(shù)量，新藥尚在不斷出現(xiàn)，然而療效好、毒副作用小、不產(chǎn)生交叉耐藥性，特別是治療實(shí)體瘤的藥物不多，與根治癌癥的目標(biāo)相差甚遠(yuǎn)。因此，需要尋找新的選擇性高、毒副作用小、沒有耐藥性的抗腫瘤藥物。
1.葉酸與細(xì)胞增殖葉酸在細(xì)胞的增殖過程中起著很重要的作用，其活性體形式四氫葉酸在N5和(或)N10位結(jié)合一碳單位，參與嘌呤和嘧啶等核酸堿基的生物合成。
葉酸拮抗劑與葉酸或葉酸衍生物結(jié)構(gòu)相似，利用人體細(xì)胞和其它細(xì)胞中葉酸循環(huán)圈中的酶對藥物敏感性不同，干擾葉酸代謝有關(guān)的酶，潛在地阻斷嘌呤和嘧啶前體的生物合成，抑制腫瘤細(xì)胞的增長，用于癌癥化療。已知的抗葉酸化合物其作用靶點(diǎn)主要為二氫葉酸還原酶、甘氨酰胺核苷酸甲酰基轉(zhuǎn)移酶、多聚谷氨酸合成酶，但是都有選擇性差，毒副作用大的缺點(diǎn)，其毒副作用例如骨髓抑制(白細(xì)胞、血小板減少)、肝毒性、腎毒性、胃腸道反應(yīng)(腹瀉粘膜炎)，而且會產(chǎn)生耐藥性。例如已知抗腫瘤藥甲氨蝶蛉(MTX)為二氫葉酸還原酶抑制劑，已為廣泛應(yīng)用的抗葉酸化療藥物，由于抑制二氫葉酸還原酶就會造成一碳代謝的完全阻斷，并伴隨對快速繁殖的正常組織如骨髓和胃腸粘膜的生長抑制，產(chǎn)生較高毒性。
近十年來，隨著分子生物學(xué)、分子腫瘤學(xué)和分子藥理學(xué)等多學(xué)科知識和研究手段的快速發(fā)展，特別是隨著人類基因譜的完成，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變成癌細(xì)胞或防止細(xì)胞癌變的一些新機(jī)制和新靶點(diǎn)。目前國內(nèi)外學(xué)者正利用這些新發(fā)現(xiàn)，將腫瘤藥物研究的注意力由傳統(tǒng)方式轉(zhuǎn)向腫瘤病因?qū)W和病理學(xué)過程中起作用的特異分子及生物靶點(diǎn)上，探索抗腫瘤藥物研究的新途徑，發(fā)現(xiàn)作用靶點(diǎn)新、類型新的抗腫瘤藥物，以克服現(xiàn)有的治療藥物在發(fā)揮抗腫瘤活性的同時對人體正常細(xì)胞造成的一定損害這一缺點(diǎn)。
2.蛋氨酸合成酶抑制劑提高抗葉酸類化合物的一個有效途徑是尋找正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞敏感性差別更大的靶酶，并進(jìn)行有效的結(jié)構(gòu)設(shè)計。蛋氨酸合成酶(MS)作為這樣一個靶點(diǎn)，催化如下的反應(yīng)以甲基四氫葉酸(CH3-THF)為底物，通過SN2反應(yīng)將甲基四氫葉酸分子中的甲基轉(zhuǎn)移到酶分子中，然后再將甲基轉(zhuǎn)移到高半胱氨酸(Hcy)分子中，生成蛋氨酸(Met)，即(1)CH3-THF+MS→CH3-MS+THF(2)CH3-MS+Hcy→Met+MS。即通過兩次親核取代反應(yīng)，將甲基四氫葉酸的甲基轉(zhuǎn)移到高半胱氨酸中，生成蛋氨酸，同時恢復(fù)四氫葉酸的活性體形式，重新參與葉酸循環(huán)。
過去數(shù)年的研究證明①M(fèi)S是人類細(xì)胞中唯一以甲基四氫葉酸為底物的蛋白酶，在催化形成蛋氨酸過程中，同時提供葉酸進(jìn)入細(xì)胞的代謝途徑，也為嘌呤及嘧啶的合成提供單碳單位；②快速裂分的癌細(xì)胞所需的蛋氨酸是正常細(xì)胞所需要的5～6倍；③癌細(xì)胞中蛋氨酸合成酶的活性要比正常細(xì)胞中該酶的活性高21倍左右；④抑制蛋氨酸合成酶可能會使癌細(xì)胞的快速生長受到抑制，而對正常細(xì)胞無大的影響。從研究結(jié)果可以看出，蛋氨酸合成酶是腫瘤細(xì)胞生長的重要催化啟動因子，抑制其活性，可干擾癌細(xì)胞的生長、代謝和增殖過程，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡，達(dá)到治療目的。以MS作為新靶點(diǎn)發(fā)展抗腫瘤藥物，也是符合目前抗腫瘤藥物研究正在從傳統(tǒng)的細(xì)胞毒藥物轉(zhuǎn)向針對機(jī)制的多環(huán)節(jié)作用的新型抗腫瘤藥物方向發(fā)展。因此蛋氨酸合成酶是抗癌藥物設(shè)計的優(yōu)秀新靶點(diǎn)?？梢灶A(yù)測該酶的抑制劑應(yīng)該是抗癌譜廣、療效高、選擇性好、毒副作用低的抗癌新藥。但是到迄今為止，尚無以蛋氨酸合成酶為靶點(diǎn)的抑制劑的文獻(xiàn)報道，因此以蛋氨酸合成酶為新靶點(diǎn)，研發(fā)其抑制劑，有可能克服目前臨床上使用的抗腫瘤藥物的缺點(diǎn)。
已經(jīng)合成的葉酸類似物在喋啶環(huán)、對氨苯甲酸、谷氨酸酯部分均做過結(jié)構(gòu)修飾，但對五位氮取代的四氫葉酸較少報道，原因之一是無論在合成過程中還是在體內(nèi)四氫葉酸都容易氧化(如文獻(xiàn)J.Chem.Soc.Perk II，1974，80-88頁所述)，因此我們設(shè)計了去8位氮雜的化合物，以增加穩(wěn)定性，提高在體內(nèi)的溶解度及增加運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞中的速度。在五位氮上連接一個烴基是為了獲得與N5-甲基四氫葉酸類似結(jié)構(gòu)的化合物，但其能提供比N5-甲基四氫葉酸更強(qiáng)的親核中心，能夠優(yōu)先與蛋氨酸合成酶作用，阻斷轉(zhuǎn)移甲基的作用，抑制蛋氨酸的合成抑制腫瘤生長。并且選擇了對HL-60人白血病、PC-3MIE8人前列腺癌、BGC-823人胃癌、MDA-MB-435人乳腺癌、Bel-7402人肝癌、Hela人宮頸癌六種腫瘤細(xì)胞，在三種不同濃度下進(jìn)行抗腫瘤活性測試，其結(jié)果顯示此類化合物具有較好的抗腫瘤活性。根據(jù)此類化合物的電性性質(zhì)、構(gòu)象特征、與蛋氨酸合成酶的作用機(jī)理和此類化合物的活性測試，其分子中谷氨酸酯的水解產(chǎn)物應(yīng)該具有類似或更好的抗腫瘤活性。
專利US5786358A中N-(N-{4-[2-(2-氨基-4-羥基-5，6，7 8-四氫吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-)乙基]-苯甲?；鶀-L-γ-谷氨?；?-D-天冬氨酸，該化合物的作用靶點(diǎn)為苷氨酰胺核糖核苷酸甲?；D(zhuǎn)移酶(GARFT)，只是推測該類化合物具有抗腫瘤作用，但沒有生物學(xué)或細(xì)胞學(xué)實(shí)驗證實(shí)，因此本領(lǐng)域人員不能推測產(chǎn)生作用的方式及對不同腫瘤的選擇性和作用效果強(qiáng)弱，無法在產(chǎn)業(yè)上應(yīng)用。本發(fā)明作為蛋氨酸合成酶的抑制劑，從機(jī)理上比較有較大區(qū)別，其結(jié)構(gòu)與蛋氨酸合成酶的底物N5-甲基四氫葉酸的結(jié)構(gòu)具有相似性，首先一點(diǎn)是去掉8位氮雜而保留5位氮，N5-甲基四氫葉酸與蛋氨酸合成酶的反應(yīng)位點(diǎn)是在5位氮的甲基上，US5786358A中的化合物不含有5位氮，因此從反應(yīng)機(jī)理推斷不可能與蛋氨酸合酶作用而產(chǎn)生抗腫瘤作用。其次本發(fā)明具有N5和N10，可以通過連接N5和N10形成五元環(huán)或六元環(huán)，從而固定化合物的空間構(gòu)象，使其更有利于與蛋氨酸合酶作用，而US5786358A中的化合物不存在10位氮。因此基于蛋氨酸合成酶作用基理設(shè)計的本發(fā)明中的化合物，與US5786358A中的不含有5位與10位氮的化合物結(jié)構(gòu)有本質(zhì)區(qū)別。對本發(fā)明中的部分化合物分別進(jìn)行了HL-60人白血病、PC-3MIE8人前列腺癌、BGC-823人胃癌、MDA-MB-435人乳腺癌、Bel-7402人肝癌、Hela人宮頸癌六種腫瘤細(xì)胞的抑制率測試，對四個化合物測定了IC50值，活性測試證明此類化合物具有較好的抗腫瘤作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一類新型的去八位氮雜，且五位氮被烴基取代的四氫葉酸類似物的抗腫瘤藥物。
本發(fā)明已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通式I四氫葉酸衍生物可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，因此通式I可以用于治療和/或預(yù)防腫瘤的藥物，包括白血病、前列腺癌、胃癌、乳腺癌、肝癌、宮頸癌。
根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方案，本發(fā)明涉及通式I新型四氫葉酸類衍生物、其光學(xué)純異構(gòu)體、其非對映體混合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1為羥基或氨基，R2為氫或氨基保護(hù)基；所述氨基保護(hù)基通常指一步或多步反應(yīng)中具有保護(hù)氨基功能的官能團(tuán)，可為選自甲?；?、乙酰基、三苯甲基、苯二酰亞胺基、新戊?；?、三氯乙酰基、氯乙?；?、溴乙?；?、碘乙?；⒓谆交酋；⑾趸交酋；?、二苯磷氧基等，R3和R4獨(dú)立選自氫、甲?；⒁阴；?、丙?；⑷阴；?、芳烴基、雜環(huán)基、1-4個碳的支鏈或直鏈飽和或不飽和烴基；所述烴基可任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基、甲基磺酰氧基、環(huán)狀烷基取代；所述環(huán)狀烷基包括3-7個碳的環(huán)烷基；所述環(huán)烷基例如環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、環(huán)庚烷、多環(huán)烷基；所述多環(huán)烷基指兩個或多個環(huán)，每個環(huán)分別含有3-15個碳原子；所述環(huán)烷基可任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基、甲基磺酰氧基取代；或者R3和R4由烴基連接形成四氫咪唑環(huán)或六氫嘧啶環(huán)，任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、對甲苯磺酰氧基或甲基磺酰氧基取代，E為包括含有N、O、S三種雜原子的五元或六元芳香環(huán)；所述芳香環(huán)選自1，4-次苯基、1，3-次苯基、2，4-呋喃基、2，5-呋喃基、2，4-噻吩基、2，5-噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、吲哚、苯并呋喃或喹啉的雜芳香基；所述芳香基可以是未被取代的或任選地被1-4個選自溴、氯、氟、碘或1-4個碳的烷基、烷氧基、烷氧?；⑾┭趸?、苯氧基、芐氧基、羧基、氨基或硝基的取代基取代，F(xiàn)為-CO-或-SO2-，R5，R6獨(dú)立選自羥基、烷氧基、氨基、氨基酸或羧酸保護(hù)基；所選羥基、烷氧基指不同時滿足R1為羥基、R2為氫、R3為氫、R4為氫、E為苯環(huán)、F為-CO-。
谷氨酸部分*標(biāo)記為L構(gòu)型手性碳，該化合物中的另一個手性中心為6位碳原子，該類化合物包含兩個非對映體。兩個非對映異構(gòu)體的混合物可以用于藥物，作為相關(guān)酶的底物，分離開非對映異構(gòu)體中的任何一個純化合物也都可以用于藥物，作為相關(guān)酶的底物。
異構(gòu)體的混合物可以分離開，例如可以通過柱層析，或是與手性酸形成鹽通過重結(jié)晶的方法分開，例如可用的手性純的酸有10-樟腦磺酸、樟腦酸、α-溴樟腦酸、酒石酸、二乙?；剖?、馬來酸、吡咯酮-5-羧酸等。然后通過非手性堿的水解作用可以得到手性純的單體化合物。
分子中的四氫吡啶[3，2-d]并嘧啶會互變異構(gòu)生成3-H-4-氧代或3-H-4-亞氨基。為描述簡單此專利中簡寫為4-羥基或4-氨基化合物，相對應(yīng)的互變異構(gòu)體酮基和亞氨基結(jié)構(gòu)分別與此等同。例如 為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一些實(shí)施例。值得指出的是這些實(shí)施例應(yīng)理解為對本發(fā)明的解釋，而不應(yīng)作為對本發(fā)明有任何意義上的限制。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明涉及R3、R4為同一亞甲基或同一取代亞甲基的通式I化合物，其光學(xué)異構(gòu)體及可藥用的鹽 其中R1為氨基，R2為氨基，R為選自氫、甲?；⑷阴；⒁阴；?、1-4個碳的烷基、烯基、炔基、或任選地被烷氧基、氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基或甲基磺酰氧基取代的1-4個碳的烷基、烯基、炔基，E為可能包括含有N、O、S三種雜原子的五元或六元芳香環(huán)；所述芳香環(huán)選自1，4-次苯基、1，3-次苯基、2，4-呋喃基、2，5-呋喃基、2，4-噻吩基、2，5-噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、吲哚基、苯并呋喃或喹啉的雜芳香基；所述芳香基可以是未被取代的或任選地被1-4個選自溴、氯、氟、碘或1-4個碳的烷基、烷氧基、烷氧?；?、烯氧基、苯氧基、芐氧基、羧基或氨基的取代基取代，
F為-CO-或-SO2-，R5，R6分別獨(dú)立為羥基。
另一個優(yōu)選實(shí)施方案為下列通式I化合物，其中R1為氨基；R2為氨基；R3選自氫、甲酰基、乙?；?、三氟乙?；?、芳烴基、雜環(huán)基、1-4個碳的支鏈或直鏈飽或不飽和烴基；所述烴基可任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基、甲基磺酰氧基取代；R4為氫；E為苯環(huán)或取代苯環(huán)；F為-CO-；R5，R6獨(dú)立地為羥基或乙氧基。
列表中非限定性的列出本發(fā)明的一些優(yōu)選化合物表1.通式I化合物中優(yōu)選的化合物




本發(fā)明最優(yōu)選的化合物為N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-5，6-)二亞甲基]氨基]苯甲?；?L-谷氨酸

另一方面，本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括至少一種通式I類化合物或其光學(xué)異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥用載體或賦形劑。
本發(fā)明化合物的藥物組合物可采用下面的任意方式施用口服、噴霧吸入、直腸用藥、鼻腔用藥、頰部用藥、局部用藥、非腸道用藥，如皮下、靜脈、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、胸骨內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥方式。本發(fā)明的藥物組合物可單獨(dú)給藥也可與其它抗腫瘤藥物或甾體類藥物聯(lián)合用藥。被治療動物包括哺乳動物、爬行動物、甲殼動物、兩棲類、魚類、家禽類。主要范圍為哺乳動物特別是人。
當(dāng)口服用藥時，本發(fā)明化合物可制成任意口服可接受的制劑形式，包括但不限于片劑、膠囊、水溶液或水懸浮液。其中，片劑使用的載體可包括填充劑、潤滑劑、崩解劑、粘合劑。填充劑可包括但不限于淀粉、預(yù)膠化淀粉、糊精、糖粉、乳糖、甘露醇、微晶纖維素。潤滑劑包括但不限于硬脂酸、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、氧化植物油、聚乙二醇、十二烷基硫酸鎂、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠、滑石粉。崩解劑可包括但不限于交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、淀粉及其衍生物、低取代羥丙基纖維素、泡騰崩解劑。粘合劑可包括但不限于羥丙甲纖維素、聚維酮、淀粉漿、糊精、糖粉、糖漿、膠漿、纖維素及其衍生物。膠囊制劑使用的稀釋劑一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水懸浮液制劑則通常是將活性成分與適宜的懸浮劑混合使用，懸浮劑可包括但不限于潤濕劑、絮凝劑、反絮凝劑。任選地，以上口服制劑形式中還可加入一些甜味劑、芳香劑或著色劑。
當(dāng)局部用藥時，特別是治療局部外敷容易達(dá)到的患面或器官，如眼睛、皮膚或下腸道神經(jīng)性疾病時，可根據(jù)不同的患面或器官將本發(fā)明化合物制成不同的局部用藥制劑形式，具體說明如下當(dāng)眼部局部施用時，本發(fā)明化合物可配制成一種微粉化懸浮液或溶液的制劑形式，所使用載體為等滲的具有一定PH的無菌鹽水，其中可加入也可不加防腐劑如氯化芐基烷醇鹽。對于眼用，也可將化合物制成膏形式如凡士林膏。
當(dāng)皮膚局部施用時，本發(fā)明化合物可制成適當(dāng)?shù)能浉唷⑾磩┗蛩獎┲苿┬问?，其中將活性成分懸浮或溶解于一種或多種載體中。軟膏制劑可使用的載體包括但不限于礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、乳化蠟和水；洗劑或霜劑可使用的載體包括但不限于礦物油、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、吐溫60、十六烷酯蠟、十六碳烯芳醇、2-辛基十二烷醇、芐醇和水。
本發(fā)明化合物還可以無菌注射制劑形式用藥，包括無菌注射水或油懸浮液或無菌注射溶液。其中，可使用的載體和溶劑包括水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的非揮發(fā)油也可用作溶劑或懸浮介質(zhì)，如單甘油酯或二甘油酯。
另外需要指出，本發(fā)明化合物的使用劑量和使用方法取決于諸多因素，包括患者的年齡、體重、性別、自然健康狀況、化合物的活性強(qiáng)度、服用時間、代謝速率、病癥的嚴(yán)重程度，具體劑量和使用方法由主治醫(yī)師根據(jù)患者的具體病情判斷。
制備方法通式本發(fā)明化合物可選擇多種反應(yīng)路線制備，通過下述實(shí)施例將有助于理解本發(fā)明，但并不限制本發(fā)明的內(nèi)容
R1為羥基或氨基，R2為氫或氨基保護(hù)基；所述氨基保護(hù)基通常指一步或多步反應(yīng)中具有保護(hù)氨基功能的官能團(tuán)，可為選自甲?；⒁阴；?、三苯甲基、苯二酰亞胺基、新戊?；?、三氯乙酰基、氯乙?；?、溴乙?；?、碘乙酰基、甲基苯磺酰基、硝基苯磺酰基、二苯磷氧基等，R3和R4獨(dú)立選自氫、甲?；⒁阴；⒈；?、三氟乙?；⒎紵N基、雜環(huán)基、1-4個碳的支鏈或直鏈飽和或不飽和烴基，所述烴基可任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基、甲基磺酰氧基、環(huán)狀烷基取代；所述環(huán)狀烷基包括3-7個碳的環(huán)烷基；所述環(huán)烷基例如環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、環(huán)庚烷、多環(huán)烷基，所述多環(huán)烷基指兩個或多個環(huán)，每個環(huán)分別含有3-15個碳原子；所述環(huán)烷基可任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基、甲基磺酰氧基取代；或者R3和R4由烴基連接形成四氫咪唑環(huán)或六氫嘧啶環(huán)，任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、對甲苯磺酰氧基或甲基磺酰氧基取代，R為選自氫、甲?；?、三氟乙酰基、乙酰基、1-4個碳的烷基、1-4個碳的烯基、1-4個碳的炔基，或任選地被烷氧基、氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基或甲基磺酰氧基取代的1-4個碳的烷基、烯基、炔基，E為包括含有N、O、S三種雜原子的五元或六元芳香環(huán)；所述芳香環(huán)選自1，4-次苯基、1，3-次苯基、2，4-呋喃基、2，5-呋喃基、2，4-噻吩基、2，5-噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、吲哚、苯并呋喃或喹啉的雜芳香基；所述芳香基可以是未被取代的或任選地被1-4個選自溴、氯、氟、碘或1-4個碳的烷基、烷氧基、烷氧?；?、烯氧基、苯氧基、芐氧基、羧基或氨基的取代基取代，F(xiàn)為-CO-或-SO2-，R5和R6獨(dú)立地選自羥基、乙氧基、氨基、氨基酸或羧酸保護(hù)基；所選羥基、烷氧基指不同時滿足R1為羥基、R2為氫、R3為氫、R4為氫、E為苯環(huán)、F為-CO-。
在不脫離此發(fā)明主要思想的情況下，一些具體操作步驟可做一些改變或修正。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明可以通過下面的實(shí)施例進(jìn)一步說明，但這些實(shí)施例不意味著對本發(fā)明有任何限制。如無特殊說明，下述實(shí)施例中“減壓蒸干溶劑”或“減壓蒸出溶劑”一般指“水泵減壓條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸于溶劑”。
實(shí)施例1N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯將N-[4-[[(2，4-二氨基吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯(600 mg，1.2mmol)和PtO2(60mg)置于反應(yīng)瓶中，加入90ml乙醇，12ml醋酸(0.5N)，在40℃、0.3Kpa壓力下催化氫化48-96h，抽濾，濾液用5％NaHCO3調(diào)pH值為7～8，減壓蒸干溶劑，得淡黃色固體，抽真空至完全干燥。加入10ml氯仿，充分?jǐn)嚢韬筮^濾，濾液濃縮呈粘稠液體，硅膠柱層析分離，得409mg標(biāo)題化合物，白色固體，收率68％。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.15～1.20(m，6H)，1.59～1.64(m，1H)，1.97～2.01(m，2H)，2.05～2.11(m，1H)，2.41～2.44(t，2H，J＝9.0Hz)，2.55～2.63(m，2H)，3.18～3.21(m，2H)，3.30～3.31(m，1H)，4.03～4.12(m，4H)，4.37～4.41(m，1H)，6.38～6.40(t，1H，J＝6.6Hz)，6.50(s，2H)，6.66，(d，4H，J＝10.2Hz)，7.69(d，4H，J＝10.2Hz)，7.33(s，2H)，8.27～8.25(d，1H，J＝9.0Hz)。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ14.1，23.8，24.2，25.9，30.2，46.8，49.9，51.8，59.9，60.4，110.8，115.8，120.4，129.0，134.6，151.5，152.2，157.0，166.5，172.4，172.6。
FAB-MS[M+H]+m/z 500。
實(shí)施例2N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-5，6-)二亞甲基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯將N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯(400mg，0.8mmol)置于反應(yīng)瓶中，加入1.2ml水，滴加THF使固體溶解，加入120mg高聚甲醛，常溫超聲4h，減壓蒸干反應(yīng)液，向剩余物中加10ml水，用氯仿萃取，合并氯仿層，硅膠柱層析，得到317mg標(biāo)題化合物，淡黃色固體，收率77.4％。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.15～1.24(m，6H)，1.72～1.87(m，2H)，1.97～2.11(m，2H)，2.41～2.46(m，2H)，2.58～2.60(m，2H)，3.33～3.34(m，1H)，3.63～3.69(m，2H)，3.78～3.79(d，1H)，4.03～4.13(m，4H)，4.38～4.43(m，1H)，4.91～4.92(d，1H)，6.24(s，2H)，5.64(s，2H)，6.54 7.80(d，4H，J＝10.8Hz)，7.80(d，4H，J＝10.8Hz)，8.33～8.35(d，1H，J＝8.4Hz)。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ14.1，21.9，25.8，28.2，30.2，51.2，51.9，56.3，59.9，60.4，65.8，110.5，113.7，120.6，129.0，148.2，153.7，158.8，159.5，166.5，172.2，172.2。
ESI-TOF-MS[M+H]+m/z 512，[M+Na]+m/z 534。
實(shí)施例3N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-5，6-)二亞甲基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸將N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-5，6-)二亞甲基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯(23mg，0.05mmol)置于圓底燒瓶中，加入1.15ml THF，0.79ml NaOH水溶液(0.3N)，常溫攪拌2h，減壓蒸出THF，剩余液體用0.5N鹽酸調(diào)pH值為5，有大量白色固體出現(xiàn)，過濾，濾餅用少量水清洗兩次，充分干燥，得到14mg標(biāo)題化合物，白色固體，收率68％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.76～2.1(m，4H)，2.29～2.34(m，2H)，2.49～2.73(m，2H)，3.33～3.90(m，1H)，3.66～3.70(m，2H)，3.79～3.80(d，1H，J＝3.9Hz)，4.43～4.36(m，1H)，4.92～4.93(d，1H，J＝3.9 Hz)，6.48(bs，2H)，6.54(d，4H，J＝8.7Hz)，7.75(d，4H，J＝8.7Hz)，6.77(bs，2H)，8.13～8.16(d，1H，J＝7.5Hz)，13.0(bs)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ21.5，26.6，30.9，51.2，52.2，56.7，65.8，110.6，113.9，121.2，128.9，148.1，150.1，157.1，160.1，166.1，174.4。
ESI-TOF-MS[M+H]+m/z 456.1954。
IR(KBr)υ3330.64，2928.96，1607.55，1505.89，1392.01，1275.19，1201.58。實(shí)施例4N-4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯將干燥后N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯(280mg，0.5mmol)置于圓底燒瓶中，加入11.2ml無水DMF，1.4ml溴丙烯，112mg研細(xì)的NaHCO3粉未，常溫攪拌12小時，將反應(yīng)液減壓旋蒸至小體積，加入水約20ml，用氯仿萃取，氯仿層濃縮蒸干，硅膠柱層析，得到120mg標(biāo)題化合物，淡黃色固體，收率40％。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.14～1.18(m，6H)，1.62～1.66(m，1H)，1.94～1.99(m，1H)，2.03～2.09(m，2H)，2.82～2.44(m，4H)，2.81～2.85(m，1H)，2.95～3.01(m，1H)，3.12～3.18(m，2H)，3.36～3.41(m，1H)，4.01～4.10(m，4H)，4.34～4.38(m，1H)，5.09～5.11(d，1H，J＝17.5Hz)，5.23～5.27(d，1H，J＝10Hz)，5.57(s，2H)，5.97～6.03(m，1H)，6.03～6.11(m，3H)，6.57(d，4H)，7.64(d，4H)，8.21～8.23(m，1H)。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ14.1，17.8，24.4，25.8，30.2，43.3，51.7，51.8，59.9，60.4，110.9，115.2，116.9，120.2，128.9，136.9，151.5，153.2，158.3，160.0，166.5，172.2，172.3。
Space-ESIC27H38N7O5[M+H]+m/z理論值540.2928691，實(shí)測值540.2934010。
IR(KBr)υ3341.05，2930.63，1732.12，1607.45，1507.99，1449.34，1201.84。
實(shí)施例5N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸將N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯(26mg)溶于圓底燒瓶中，加入1.63ml四氫呋喃，1mlNaOH水溶液(0.3N)，常溫攪拌2h，真空旋蒸掉THF，剩余液體用0.5N HCl調(diào)pH值約為6，有固體析出，抽濾，濾餅用少量水沖洗，充分干燥后得19mg標(biāo)題化合物，類白色固體，收率81.5％。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.65～1.67(m，1H)，1.90～1.94(m，1H)，2.01～2.06(m，2H)，2.29～2.32(m，2H)，2.41～2.47(m，2H)，2.83～2.87(m，1H)，2.97～3.02(m，1H)，3.141～3.187(m，2H)，3.40～3.42(m，1H)，4.29～4.34(m，1H)，5.12～5.14(d，1H，J＝10Hz)，5.24～5.28(d，1H，J＝17Hz)，5.95～5.95(m，1H)，6.06～6.11(m，1H)，6.20(bs，2H)，6.50～6.59(m，4H)，7.64～7.65(d，2H)。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ17.3，22.4，26.7，30.9，43.2，51.7，52.2，55.6，111.0，115.2，117.4，120.8，128.8，136.5，151.3，156.2，160.8，166.1，173.8，174.4，174.5。
ESI-TOF-MS[M+H]+m/z 484.1848，ESI-TOF-MS[M+H]+m/z 482.4691。
實(shí)施例6N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]烯丙基氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯試驗過程同實(shí)施例4，收率42％，黃色固體。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.14～1.18(m，6H)，1.65～1.68(m，1H)，1.95～2.01(m，1H)，2.05～2.09(m，2H)，2.36～2.44(m，4H，CH2-8)，3.09～3.13(m，1H)，3.16～3.21(m，1H，CH-6)，3.25～3.38(m，3H)，3.85～3.88(m，1H)，4.01～4.09(m，5H)，4.35～4.39(m，1H)，4.93～4.97(m，2H)，5.04～5.06(d，1H，J＝10Hz)，5.17～5.20(d，1H，J＝17.0Hz)，5.70～5.77(m，1H)，5.82～5.88(m，1H)，6.59(d，4H，J＝8.5Hz)，7.67(d，4H，J＝8.5Hz)，8.27～8.28(m，1H)。
13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ14.1，17.7，24.0，25.8，30.2，51.3，51.6，51.8，53.2，55.5，59.9，60.4，110.6，115.3，115.8，116.4，119.9，128.9，133.6，136.6，150.4，152.5，157.9，159.7，166.5，172.2，172.3。
Space-ESIC30H41N7O5[M+H]+m/z計算值580.3241675，實(shí)測值580.3245750。.
實(shí)施例7N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]烯丙基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸將N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]烯丙基氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯(23mg，0.05mmol)置于圓底燒瓶中，加入1.2ml THF，0.8ml NaOH水溶液(0.3N)，常溫攪拌2h，減壓蒸出THF，剩余液體用0.5N鹽酸調(diào)pH值為5，有大量白色固體出現(xiàn)，過濾，濾餅用少量水清洗兩次，充分干燥，得到14mg標(biāo)題化合物，白色固體，收率68％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.76～2.11(m，4H)，2.29～2.34(m，2H)，2.49～2.73(m，2H)，3.33～3.90(m，1H)，3.66～3.69(m，2H)，3.79～3.80(d，1H，J＝3.9Hz)，4.43～4.36(m，1H)，4.92～4.93(d，1H，J＝3.9Hz)，6.48(bs，2H)，6.54(d，4H，J＝8.7Hz)，7.75(d，4H，J＝8.7Hz)，6.78(bs，2H)，8.13～8.16(d，1H，J＝7.5Hz)，13.0(bs，)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ21.5，26.6，30.9，51.2，52.2，56.7，65.8，110.6，113.9，121.2，128.9，148.1，150.1，157.1，160.1，166.1，174.4。
ESI-TOF-MS[M+H]+m/z 456。
IR(KBr)υ3330.64，2928.96，1607.55，1505.89，1392.01，1275.19，1201.58。
實(shí)施例8N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]-3-溴苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯(10mg，0.02mmol)置于冰浴至0℃的圓底燒瓶中，加入0.2ml無水THF，滴加溴水1μl，常溫攪拌2小時，制備薄層，得8mg標(biāo)題化合物，淡黃色固體，收率69.7％。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.15～1.19(m，6H)，1.63～1.68(m，1H)，1.96～2.09(m，2H)，2.10～2.15(m，1H)，2.37～2.44(m，3H)，2.48～2.55(m，1H)，2.92～2.97(m，1H)，3.14～3.22(m，2H)，3.28(m，1)，3.36～3.40(m，1H)，4.02～4.11(m，4H)，4.36～4.40(m，1H)，5.16～5.18(d，1H，J＝10.0Hz)，5.30～5.33(d，1H，J＝17.0Hz)，5.61～5.63(m，1H)，5.74(bs，2H)，5.99～6.06(m，3H)，6.63～6.64(m，H，J＝9Hz)，7.73～7.75(d，1H，，J＝8.5Hz)，8.03～8.03(d，1H，J＝1.5Hz)，8.48～8.50(d，1H)。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ14.1，17.7，24.1，25.7，30.2，43.1，51.6，51.9，55.6，59.9，60.4，107.6，110.2，114.8，117.5，121.7，128.6，131.5，136.4，147.3，152.8，158.1，159.7，165.2，172.0，172.2。
ESI-TOF-MS[M+H]+m/z 618.3293，620.3293。
實(shí)施例9N-[4-[[[2，4-二氨基-5-(1，2-二溴丙基)-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-]亞甲基]氨基]-3-溴苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯將N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯(10mg，0.02mmol)置于冰鹽浴至0℃的圓底燒瓶中，加入0.2ml.無水THF，滴入溴水2μl，在冰鹽浴條件下攪拌3分鐘，常溫攪拌2小時，反應(yīng)液真空抽干后加入2ml水，氯仿萃取，氯仿層濃縮后制備薄層，得9mg標(biāo)題化合物，淡黃色固體，收率62.3％。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.15～1.19(m，6H)，1.63～1.70(m，1H)，1.91～2.11(m，2H)，2.16～2.23(m，1H)，2.40～2.40(m，3H)，2.468～2.511(1H)，2.892～2.986(m，1H)，3.16～3.22(m，2H)，3.25～3.39(m，1H)，3.49～3.51(m，1H)，3.97～4.11(m，6H)，4.36～4.40(m，1H)，4.76～4.82(m，1H)，5.55～5.56(m，1H)，5.61～5.71(m，2H)，5.93(bs)，6.68(d，2H，J＝8.8Hz)，7.74(d，2H，J＝8.8Hz)，7.73～7.75(d，1H，J＝8.5Hz)，8.03～8.03(m，1H)，8.45～8.47(d，1H，J＝7.5Hz)。
ESI-TOF-MS[M+H]+m/z 776.2620，778.2552，780.25，782.2574。
實(shí)施例10N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸將N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨二乙酯(85mg，0.2mmol)置于圓底燒瓶中，加入4.25ml THF，3ml NaOH水溶液(0.3N)，常溫攪拌1h，用0.5N HCl調(diào)pH值至6～7，有白色固體析出，過濾，白色固體用少量水洗滌，干燥后得到69.7mg標(biāo)題化合物，類白色固體，收率82％，。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.59(m，1H)，1.90～2.06(m，3H)，2.26～2.29(t，2H，J＝9Hz)，2.53～2.59(m，2H)，3.134～3.77(m，2H)，3.29(m，1H)，4.24～4.28(m，1H)，6.26～6.28(m，1H)，6.62(d，4H，J＝10.8Hz)，7.64(d，4H，J＝10.8Hz)，6.93(bs，2H)，7.10(bs，2H)，7.87～7.91(m，1H)。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ23.9，24.3，27.2，31.4，46.9，50.0，52.7，110.9，115.4，121.1，128.7，136.1，151.3，153.1，157.0，165.8，174.9(COOH)，175.1。
ESI-Tof-MS[M+H]+m/z 444.1597。
實(shí)施例11N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]三氟乙?；被鵠苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯將N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯(44mg，0.08mmol)置于圓底燒瓶中，加入1ml三氟乙酸酐，常溫攪拌2h，減壓蒸去溶劑，向粘稠狀剩余物中加入水2ml，充分研磨，將水用滴管吸出，再重復(fù)洗滌一遍，剩余粘稠物用油泵抽真空干燥可得42mg標(biāo)題化合物，收率80.5％。
FAB-MS[M]+m/z 635.6。
實(shí)施例12N-[4-[[[2，4-二氨基-5-(1，2-二溴丙基)-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-]亞甲基]三氟乙?；被鵠苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]三氟乙?；被鵠苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯(42mg，0.07mmol)置于冰浴至0℃的圓底燒瓶中，加入1ml無水THF，滴入溴素12ul，5min后移開冰浴，常溫攪拌3小時，減壓蒸干溶劑，向反應(yīng)瓶中加入2ml水，用氯仿萃取，合并氯仿層，用無水NaSO4干燥后減壓蒸干得21mg標(biāo)題化合物，收率37.8％。
FAB-MS[M]+，[M+2]+，[M+4]+m/z 793.5，795.5，797.5。
實(shí)施例13N-[4-[[(2，4-二氨基-5-甲?；?5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]甲酰基氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯將N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯(10mg，0.02mmol)置于圓底燒瓶中，加入0.2ml甲酸(＞88％)，加熱回流10小時，或加入0.15ml甲酸(＞88％)，0.15ml甲酸甲酯，常溫攪拌48h，減壓蒸去溶劑，加入少量氯仿溶，制備薄層層析，得到3mg標(biāo)題化合物，收率30％。
ESI-TOF-MS[M+H]+m/z 528.4329。
實(shí)施例14N-[4-[[(2，4-二氨基-5-甲酰基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯按與實(shí)施例13相同的制備方法制備標(biāo)題化合物，產(chǎn)率為25％。
ESI-TOF-MSm/z[M+H]+m/z 556.4426。
實(shí)施例15取處于生長對數(shù)期的細(xì)胞接種于96孔板中，每孔3-4×103個細(xì)胞/100μL，24h后，吸取培養(yǎng)液，每孔加入含不同藥物的完全培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng)48h，棄去培養(yǎng)液，每孔加入四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)孵育4h，吸取四甲基偶氮唑藍(lán)液，每孔加入二甲基亞砜，輕輕震搖，用讀板機(jī)于490nm波長下測定96孔板每一孔的光密度OD值，每一化合物在10-6-10-4間設(shè)定5-6個濃度，每一測試設(shè)3-4個平等孔，重復(fù)3次。
藥物對細(xì)胞的生長抑制率(％)＝(溶劑對照組平均OD值-用藥組平均OD值)/對照組平均OD值。
實(shí)施例16生理活性測試(抑制率％)生理活性測試方法如表1所示表1

生理活性測試結(jié)果如表2、表3所示表2

表3

由圖表中數(shù)據(jù)可以看出，此類化合物對HL-60人白血病細(xì)胞、PC-3MIE8人前列腺癌細(xì)胞、BGE-823人胃癌細(xì)胞、MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞、Bel-7402人肝癌細(xì)胞或HL-60人白血病細(xì)胞的增殖具有抑制作用；其中部分化合物對某類腫瘤細(xì)胞顯示較好的抑制作用。
實(shí)施例17生理活性測試(IC50)生理活性測試方法如表1所示表1

五種化合物對Bel-7402人肝癌細(xì)胞和HL-60人白血病細(xì)胞增殖的影響如表2所示表2

由圖表中數(shù)據(jù)可以看出，所試化合物1、2、3、4、5對Bel-7402人肝癌細(xì)胞和HL-60人白血病細(xì)胞的增殖具有較好抑制作用；其中化合物2和化合物3的抑制作用最好。
權(quán)利要求
1.通式I化合物及其可藥用鹽， 其中R1為羥基或氨基，R2為氫或氨基保護(hù)基；所述氨基保護(hù)基通常指一步或多步反應(yīng)中具有保護(hù)氨基功能的官能團(tuán)，可為選自甲?；?、乙?；?、三苯甲基、苯二酰亞胺基、新戊?；⑷纫阴；?、氯乙?；?、溴乙?；⒌庖阴；⒓谆交酋；?、硝基苯磺?；?、二苯磷氧基等，R3和R4獨(dú)立選自氫、甲?；⒁阴；?、丙酰基、三氟乙?；?、芳烴基、雜環(huán)基、1-4個碳的支鏈或直鏈飽和或不飽和烴基；所述烴基可任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基、甲基磺酰氧基、環(huán)狀烷基取代；所述環(huán)狀烷基包括3-7個碳的環(huán)烷基；所述環(huán)烷基例如環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、環(huán)庚烷、多環(huán)烷基；所述多環(huán)烷基指兩個或多個環(huán)，每個環(huán)分別含有3-15個碳原子；所述環(huán)烷基可任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基、甲基磺酰氧基取代；或者R3和R4由烴基連接形成四氫咪唑環(huán)或六氫嘧啶環(huán)，任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、對甲苯磺酰氧基或甲基磺酰氧基取代，E為包括含有N、O、S三種雜原子的五元或六元芳香環(huán)；所述芳香環(huán)選自1，4-次苯基、1，3-次苯基、2，4-呋喃基、2，5-呋喃基、2，4-噻吩基、2，5-噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、吲哚、苯并呋喃或喹啉的雜芳香基；所述芳香基可以是未被取代的或任選地被1-4個選自溴、氯、氟、碘或1-4個碳的烷基、烷氧基、烷氧?；⑾┭趸?、苯氧基、芐氧基、羧基或氨基的取代基取代，F(xiàn)為-CO-或-SO2-，R5和R6獨(dú)立地選自羥基、烷氧基、氨基、氨基酸或羧酸保護(hù)基；所選羥基、烷氧基指不同時滿足R1為羥基、R2為氫、R3為氫、R4為氫、E為苯環(huán)、F為-CO-。
2.如權(quán)利要求1所述的通式I化合物，其中的R3和R4由亞甲基或取代亞甲基連接形成四氫咪唑環(huán)或取代四氫咪唑環(huán)，即為 其中，R1為羥基或氨基，R2為氫或氨基保護(hù)基；所述氨基保護(hù)基通常指一步或多步反應(yīng)中具有保護(hù)氨基功能的官能團(tuán)，可為選自甲?；?、乙?；?、三苯甲基、苯二酰亞胺基、新戊?；⑷纫阴；?、氯乙?；?、溴乙?；?、碘乙?；?、甲基苯磺?；?、硝基苯磺酰基、二苯磷氧基等，R為選自氫、甲?；⑷阴；?、乙?；?-4個碳的烷基、烯基、炔基、或任選地被烷氧基、氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基或甲基磺酰氧基取代的1-4個碳的烷基、烯基、炔基，E為含有N、O、S三種雜原子的五元或六元芳香環(huán)；所述芳香環(huán)選自1，4-次苯基、1，3-次苯基、2，4-呋喃基、2，5-呋喃基、2，4-噻吩基、2，5-噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、吲哚基、苯并呋喃或喹啉的雜芳香基；所述芳香基可以是未被取代的或任選地被1-4個選自溴、氯、氟、碘或1-4個碳的烷基、烷氧基、烷氧?；?、烯氧基、苯氧基、芐氧基、羧基或氨基的取代基取代，F(xiàn)為-CO-或-SO2-，R5，R6獨(dú)立地為羥基或乙氧基。
3.如權(quán)利要求1所述的通式I化合物，其中R1為氨基，R2為氨基，R3為選自氫、甲?；⒁阴；?、三氟乙?；⒎紵N基、雜環(huán)基、1-4個碳的支鏈或直鏈飽和或不飽和烴基；所述烴基可任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基或甲基磺酰氧基取代，R4為氫，E為苯環(huán)、取代苯環(huán)，F(xiàn)為-CO-，R5，R6獨(dú)立地為羥基或乙氧基。
4.權(quán)利要求1所述的通式I化合物，其具體為化合物N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]-3-溴苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]-3-溴苯甲?；鵠-L-谷氨酸，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]烯丙基氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]烯丙基氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸，N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-5，6-)二亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-5，6-)二亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-甲基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[(2-氨基-4-羥基-5-甲基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]-3-溴苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[[2，4-二氨基-5-(1，2-二溴丙烷基)-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-]亞甲基]氨基]-3-溴苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[[2，4-二氨基-5-(1，2-二溴丙烷)-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-]亞甲基]氨基]-3-溴苯甲酰]-L-谷氨酸，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]三氟乙?；被鵠苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]三氟乙酰基氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸，N-[4-[[[2，4-二氨基-5-(1，2-二溴丙基)-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-]亞甲基]三氟乙?；被鵠苯甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯，N-[4-[[[2，4-二氨基-5-(1，2-二溴丙基)-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-]亞甲基]三氟乙?；被鵠苯甲?；鵠-L-谷氨酸，N-[4-[[(2，4-二氨基-5-甲酰基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]甲?；被鵠苯甲?；鵠-L-谷氨酸二乙酯，和N-[4-[[(2，4-二氨基-5-甲?；?5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]甲?；被鵠苯甲?；鵠-L-谷氨酸。
5.權(quán)利要求1所述的通式I化合物，其為N-[4-[[(2，4-二氨基-5-烯丙基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸，N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-5，6-)二亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸，N-[4-[[(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫吡啶并[3，2-d]嘧啶-6-)亞甲基]氨基]苯甲?；鵠-L-谷氨酸。
6.權(quán)利要求1-5中任一項所述的化合物的制備方法，其包括步驟 R1為羥基或氨基，R2為氫或氨基保護(hù)基；所述氨基保護(hù)基通常指一步或多步反應(yīng)中具有保護(hù)氨基功能的官能團(tuán)，可為選自甲?；?、乙?；?、三苯甲基、苯二酰亞胺基、新戊?；⑷纫阴；⒙纫阴；?、溴乙?；?、碘乙酰基、甲基苯磺?；?、硝基苯磺?；?、二苯磷氧基等，R3和R4獨(dú)立選自氫、甲酰基、乙酰基、丙酰基、三氟乙酰基、芳烴基、雜環(huán)基、1-4個碳的支鏈或直鏈飽和或不飽和烴基；所述烴基可任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基、甲基磺酰氧基、環(huán)狀烷基取代；所述環(huán)狀烷基包括3-7個碳的環(huán)烷基；所述環(huán)烷基例如環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、環(huán)庚烷、多環(huán)烷基；所述多環(huán)烷基指兩個或多個環(huán)，每個環(huán)分別含有3-15個碳原子；所述環(huán)烷基可任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基、甲基磺酰氧基取代；或者R3和R4由烴基連接形成四氫咪唑環(huán)或六氫嘧啶環(huán)，任選地被氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、對甲苯磺酰氧基或甲基磺酰氧基取代，R為選自氫、甲?；⑷阴；?、乙酰基、1-4個碳的烷基、1-4個碳的烯基、1-4個碳的炔基，或任選地被烷氧基、氟、氯、溴、碘、環(huán)氧乙烷、羥基、烷氧基、對甲苯磺酰氧基或甲基磺酰氧基取代的1-4個碳的烷基、烯基、炔基，E為包括含有N、O、S三種雜原子的五元或六元芳香環(huán)；所述芳香環(huán)選自1，4-次苯基、1，3-次苯基、2，4-呋喃基、2，5-呋喃基、2，4-噻吩基、2，5-噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、吲哚、苯并呋喃或喹啉的雜芳香基；所述芳香基可以是未被取代的或任選地被1-4個選自溴、氯、氟、碘或1-4個碳的烷基、烷氧基、烷氧?；⑾┭趸?、苯氧基、芐氧基、羧基或氨基的取代基取代，F(xiàn)為-CO-或-SO2-，R5和R6獨(dú)立地選自羥基、氨基、氨基酸或羧酸保護(hù)基；所選羥基、烷氧基指不同時滿足R1為羥基、R2為氫、R3為氫、R4為氫、E為苯環(huán)、F為-CO-。
7.藥物組合物，其含有權(quán)利要求1-5中任一項所述的化合物、其旋光異構(gòu)體或其可藥用鹽以及至少一種可藥用載體。
8.如權(quán)利要求1-5中任一項所述的化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
9.如權(quán)利要求8的用途，其中所述的抗腫瘤藥物包括抑制葉酸循環(huán)中的蛋白酶，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥物。
10.權(quán)利要求9所述的用途，其中所述的抗腫瘤藥物包括用于治療人白血病、人前列腺癌、人胃癌、人乳腺癌、人肝癌、人宮頸癌的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式I的8位去氮雜、N
文檔編號C07D471/12GK1962658SQ20051011774
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月10日
發(fā)明者劉俊義, 張志麗 申請人:北京大學(xué)