專利名稱：：誘導(dǎo)針對肺炎鏈球菌多糖的免疫應(yīng)答的制作方法
背景技術(shù)：
：通常已知針對具體的疫苗抗原引起的免疫應(yīng)答的性質(zhì)對于所述疫苗的總體效力是重要的。在碳水化合物抗原的情形中，研究了許多種方法，試圖增強(qiáng)它們的免疫原性，所述方法包括化學(xué)修飾(Jennings，等.在TowardsBetterCarbohydrateVaccines中，Bell和Torrigiani(eds)第11-17頁，J.Wiley&Sons，London，1987)，與佐劑一起施用，與蛋白非共價復(fù)合，共價附著到免疫原性蛋白載體上(Schneerson，等.在TowardsBetterCarbohydrateVaccines中，如前所述，第307-327頁)，和用蛋白復(fù)制品代替碳水化合物表位，所述蛋白復(fù)制品為重新合成的肽(所謂的模擬表位(mimitopes)，Geyson，等.在TowardsBetterCarbohydrateVaccines中，如前所述，第103-118頁)或抗獨(dú)特型(antiidiotypic)抗體(Soederstroem在TowardsBetterCarbohydrateVaccines中，如前所述，第119-138頁)。將碳水化合物抗原共價附著到免疫原性T依賴的蛋白載體上是已知的(參見，例如，Schneerson，等.，152361-376(1980)；Lepow，等.，J.Pediatr.106185-189(1985)；Chu，等.，Infect.Immun.，50245-256(1983)；Marborg等.，Am.Chem.Soc.1085282-5287(1985)；Anderson等.，Infect.Immun.，39233-238(1983)；Bartoloni，等.，Vaccine13463-470(1995)；和Wessels，等.，JInfect.Dis.171879-884(1995))。免疫原肽，其含有被T輔助細(xì)胞識別的表位，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其有效地用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。例如，在Hervas-Stubbs，等.，Vaccine12867-871(1994)中描述了應(yīng)用輔助肽來增強(qiáng)針對具體的決定簇的抗體應(yīng)答。盡管填充MHC等位基因的肽結(jié)合口袋的等位基因特異的多態(tài)性殘基傾向于賦予每種等位基因結(jié)合獨(dú)特系列的肽的能力，但是在許多情況下給定的肽表現(xiàn)出結(jié)合多于一種MHC等位基因。這在人DR同種型的情形中得到最好的證明，在所述人DR同種型的情形中，已經(jīng)注意到一些DR等位基因似乎識別相似的基序，并且獨(dú)立地，一些研究者報道在多種DR型的情況下簡并結(jié)合和/或識別某些表位，這形成這樣的觀念，即，某些肽可能代表“通用的”表位(Busch，等.，Int.Immunol.2443-451(1990)；Panina-Bordignon，等.，Eur.JImmunol.192237-2242(1989)；Sinigaglia，等.，Nature336778-780(1988)；O′Sullivan，等.，J.Immunol.1472663-2669(1991)；Roache，等.，JImmunol.1441849-1856(1991)；Hill，等.，JImmunol.147189-197(1991))。盡管先前報道的肽的確具有結(jié)合幾種DR等位基因的能力，但是它們決不是通用的。例如，在WO95/07707，Alexander，等.，Immunity1751-761(1994)和美國專利號6,413,935中描述了Pan-DR結(jié)合肽。已經(jīng)表明這些肽在產(chǎn)生針對需要的抗原的CTL應(yīng)答中起輔助作用。通過它們的多糖被膜而免疫辨別的多于90種的肺炎鏈球菌血清型，可以潛在地引起疾病。(Pneumococcaldisease.InEpidemiologyandpreventionofvaccine-preventablediseases.第六版.Waldorf(MD)PublicHealthFoundation；2000.第249-63頁；KalinM.，Thorax53(3)159-162(1998)；HedlundJ，等.ClinInfectDis.21(4)948-53(1995))。盡管抗生素已經(jīng)成功地用于治療肺炎鏈球菌感染，但是增加的抗生素抗性使得疾病的治療變得復(fù)雜(LinaresJ等.，1992，ClinInfectDis1599-105；KoornhofHF等.，1992，ClinInfectDis1584-94；ZhanelGG等.，1999，AntimicrobAgentsChemother432504-9)。存在至少40種血清組，一些血清組包括免疫學(xué)上交叉反應(yīng)性的多種血清型?，F(xiàn)有的肺炎鏈球菌疫苗制劑是含有來自更常見的血清型的被膜多糖的混合物的組合疫苗，并且有效地抵抗較大年齡的兒童和成人中的侵入性疾病(FedsonDS，MusherDM，EskolaJPneumococcalvaccine.InPlotkinSA，OrensteinWA.Ed.VACCINES.第三版PhiladelphiaWBSaunders，1998553-607)。全世界許多制造者已經(jīng)使得這種23價的肺炎鏈球菌多糖疫苗是可用的，并且在2歲或更年長的個體中有效然而，由于它們激發(fā)不依賴T細(xì)胞的應(yīng)答，所以這些疫苗在小于2歲的兒童中是無效的(EskolaJ，AnttilaM.1999，18543-51)。目前，唯一可用的綴合物肺炎鏈球菌疫苗是一種7價的制劑，其針對目前，唯一可用的綴合物肺炎鏈球菌疫苗是一種7價的制劑，其針對無毒的白喉變種(CRM197)，來自Wyeth的PREVNAR。發(fā)明簡述本發(fā)明提供包括來自不同的肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)血清型至少2種肺炎鏈球菌被膜多糖的組合物，其中來自每種血清型的所述被膜多糖綴合到獨(dú)立的多肽上，所述多肽包括panDR結(jié)合肽序列。在一些實施方案中，所述panDR結(jié)合肽序列獨(dú)立地選自式R1-R2-R3-R4-R5，其中R1是兩個氨基酸，其中在后的氨基酸為丙氨酸或賴氨酸；R2是選自由酪氨酸、苯丙氨酸或環(huán)己環(huán)己丙氨酸(cyclohexylalanine)組成的組；R3是3或4個氨基酸，其中每個氨基酸獨(dú)立地選自由丙氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、谷氨酸和纈氨酸組成的組；R4是選自由蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸、賴氨酸-蘇氨酸、或色氨酸-蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸組成的組；和，R5由由2-4個氨基酸組成的前面部分和由單獨(dú)氨基酸組成的后面部分組成，其中2-4個氨基酸中的每個獨(dú)立地選自由丙氨酸、絲氨酸和纈氨酸組成的組。本發(fā)明還提供在哺乳動物中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法。在一些實施方案中，所述方法包括給所述哺乳動物施用來自不同的肺炎鏈球菌血清型的至少2種肺炎鏈球菌被膜多糖的混合物，其中來自每種血清型的所述被膜多糖綴合到獨(dú)立的panDR結(jié)合肽序列上，所述panDR結(jié)合肽序列選自式R1-R2-R3-R4-R5，其中R1是兩個氨基酸，其中在后的氨基酸為丙氨酸或賴氨酸；R2是選自由酪氨酸、苯丙氨酸或環(huán)己丙氨酸組成的組；R3是3或4個氨基酸，其中每個氨基酸獨(dú)立地選自由丙氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、谷氨酸和纈氨酸組成的組；R4是選自由蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸、賴氨酸-蘇氨酸、或色氨酸-蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸組成的組；和，R5由由2-4個氨基酸組成的前面部分和由單獨(dú)氨基酸組成的后面部分組成，其中2-4個氨基酸中的每個獨(dú)立地選自由丙氨酸、絲氨酸和纈氨酸組成的組。本發(fā)明還提供制備肺炎鏈球菌疫苗的方法。在一些實施方案中，所述方法包括將來自不同的肺炎鏈球菌血清型的至少2種肺炎鏈球菌被膜多糖綴合到2種獨(dú)立的多肽上，每種多肽包括panDR結(jié)合肽序列，其中所述panDR結(jié)合肽序列選自式R1-R2-R3-R4-R5，其中R1是兩個氨基酸，其中在后的氨基酸為丙氨酸或賴氨酸；R2是選自由酪氨酸、苯丙氨酸或環(huán)己丙氨酸組成的組；R3是3或4個氨基酸，其中每個氨基酸獨(dú)立地選自由丙氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、谷氨酸和纈氨酸組成的組；R4是選自由蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸、賴氨酸-蘇氨酸、或色氨酸-蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸組成的組；和，R5由由2-4個氨基酸組成的前面部分和由單獨(dú)氨基酸組成的后面部分組成，其中2-4個氨基酸中的每個獨(dú)立地選自由丙氨酸、絲氨酸和纈氨酸組成的組。在一些實施方案中，所述組合物包括來自下述血清型的至少任意5種的被膜多糖1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，33F，6A，7A，7B，7C，9A，9L，12A，13，15A，15C，16F，18A，18B，18F，19B，19C，21，22A，23A，23B，24F，25，27，29，31，34，35，38，45，或46，其中每種多糖綴合到包括panDR結(jié)合肽序列的獨(dú)立的多肽上。在一些實施方案中，所述組合物包括來自血清型4，6B，9V，14，18C，19F，和23F的被膜多糖，其中每種多糖綴合到包括panDR結(jié)合肽序列的獨(dú)立的多肽上。在一些實施方案中，所述組合物包括來自血清型1，4，5，6B，9V，14，18C，19F，和23F的被膜多糖，其中每種多糖綴合到包括panDR結(jié)合肽序列的獨(dú)立的多肽上。在一些實施方案中，所述組合物包括來自血清型1，3，4，5，6B，7F，9V，14，18C，19F，和23F的被膜多糖，其中每種多糖綴合到包括panDR結(jié)合肽序列的獨(dú)立的多肽上。在一些實施方案中，所述組合物包括來自血清型1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F和33F的被膜多糖，其中每種多糖綴合到在一些實施方案中，所述被膜多糖從每種血清型的細(xì)菌純化并且綴合到所述多肽上。在一些實施方案中，來自每種血清型的被膜多糖獨(dú)立地綴合到包括panDR肽的多肽上，并且隨后將所獲得的綴合物組合，以形成綴合物的混合物。在一些實施方案中，將來自每種血清型的被膜多糖組合，以形成多糖的混合物，并且隨后將所述混合物綴合到包括panDR結(jié)合肽的多肽上。在一些實施方案中，包括panDR結(jié)合肽的多肽由50個或更少的氨基酸組成。在一些實施方案中，包括panDR結(jié)合肽的多肽由25個或更少的氨基酸組成。在一些實施方案中，包括panDR結(jié)合肽的多肽由15個或更少的氨基酸組成。在一些實施方案中，包括panDR結(jié)合肽的多肽包括氨基酸序列AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)，aKXVAAWTLKAAa，AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)，或aKFVAAWTLKAAa，其中X是環(huán)己丙氨酸。在一些實施方案中，包括panDR結(jié)合肽的多肽由下列氨基酸序列組成AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)，aKXVAAWTLKAAa，AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)，或aKFVAAWTLKAAa，其中X是環(huán)己丙氨酸。在一些實施方案中，所述多糖和所述多肽通過連系物而連接在一起。定義“寡肽”或“肽”當(dāng)用于本文時是指至少4個氨基酸或氨基酸模擬物的鏈，例如，至少6個，例如，8-10個，例如，11-14個殘基，例如，少于約50個殘基，例如，少于約25個殘基，例如，少于15個，例如8-14個殘基。所述寡肽或肽可以是各種長度，以其中性(不帶電)形式或以鹽的形式，并且沒有修飾，諸如糖基化、側(cè)鏈氧化、或磷酸化，或者包含這些修飾，但是滿足這樣的條件，即，所述修飾不應(yīng)該破壞本文所述的多肽的生物活性。當(dāng)指肽、寡肽或蛋白中的氨基酸殘基時，術(shù)語“氨基酸殘基”，“氨基酸”和“殘基”可互換地應(yīng)用，當(dāng)用于本文時，意指通過酰胺鍵或模擬酰胺鍵與至少1種其它氨基酸或氨基酸模擬物共價連接的氨基酸或氨基酸模擬物。當(dāng)用于本文時，術(shù)語“氨基酸”，當(dāng)未限定時，是指“L-氨基酸”或L-氨基酸模擬物。盡管所述肽可以基本上沒有其它天然存在的蛋白和其片段，在一些實施方案中，所述肽可以被合成地綴合到其它肽或多肽上，例如，化學(xué)綴合或重組融合。當(dāng)用于本文時，術(shù)語“生物活性”意指結(jié)合適當(dāng)?shù)腗HC分子的能力，并且，在用于刺激免疫應(yīng)答的肽的情形中，誘導(dǎo)T輔助細(xì)胞應(yīng)答的能力，所述T輔助細(xì)胞應(yīng)答又幫助誘導(dǎo)針對目標(biāo)免疫原或免疫原模擬物的免疫應(yīng)答。在用于刺激抗體應(yīng)答的肽的情形中，所述肽將誘導(dǎo)T輔助細(xì)胞應(yīng)答，所述T輔助細(xì)胞應(yīng)答又幫助誘導(dǎo)針對目標(biāo)免疫原的體液應(yīng)答。本發(fā)明的“panDR-結(jié)合肽”(也稱為“PADRE肽”)是能夠結(jié)合12種最常見的DR等位基因(DR1，2w2b，2w2a，3，4w4，4w14，5，7，52a，52b，52c，和53)中的至少約7種的肽。術(shù)語“免疫原”和“抗原”可互換地應(yīng)用，并且意指細(xì)胞或體液免疫應(yīng)答所針對的任何化合物。當(dāng)用于本文時，術(shù)語“抗原決定簇”是可以激發(fā)、促進(jìn)、或被誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的任何結(jié)構(gòu)，例如碳水化合物表位、脂質(zhì)、蛋白、肽、或其組合。本發(fā)明的“CTL表位”是衍生于潛在的目標(biāo)抗原，諸如衍生于鏈球菌的蛋白抗原，的所選的表位區(qū)域的一種表位。本發(fā)明的“體液應(yīng)答”是針對抗原決定簇的各種區(qū)域的抗體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。有經(jīng)驗的人應(yīng)該認(rèn)識到，體液應(yīng)答還可以被誘導(dǎo)指向panDR結(jié)合肽，其中所述panDR結(jié)合肽也將被包括在所述決定簇中。因此，所激發(fā)的免疫應(yīng)答可以針對抗體誘導(dǎo)決定簇和所述panDR結(jié)合肽。當(dāng)用于本文時，“碳水化合物表位”是指碳水化合物結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為糖綴合物，例如，糖蛋白、糖肽、糖脂等，或多糖，寡糖，或單糖，針對其的免疫應(yīng)答是需要的。所述碳水化合物表位可以誘導(dǎo)寬范圍的免疫應(yīng)答。有經(jīng)驗的人應(yīng)該意識到，本文示例的各種碳水化合物結(jié)構(gòu)可以按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行不同的修飾，而沒有不利地影響抗原性。例如，糖類的單糖單位可以用小的有機(jī)分子不同地取代或甚至是置換，所述小的有機(jī)分子作為單糖的模擬物。當(dāng)用于本文時，“血清型”是指本領(lǐng)域通常所知的作為血清型或血清組的那些。本文所描述的血清型是指它們的Danish名稱。很好地確定了與Danish名稱相對應(yīng)的肺炎球菌類型。例如，下述表格提供了部分轉(zhuǎn)換列表。短語“分離的”或“生物純的”是指基本上或本質(zhì)上沒有通常如在其天然狀態(tài)中發(fā)現(xiàn)的那樣與其相伴隨的成分。因此，本發(fā)明的肽不含通常與其原位環(huán)境相關(guān)的物質(zhì)，例如，抗原呈遞細(xì)胞的MHCI類分子。即使蛋白在電泳凝膠上被分離成均一的或占優(yōu)勢的條帶，仍存在天然蛋白的5-10％范圍的痕量污染物，其同需要的蛋白一起純化出來。本發(fā)明分離的肽不含這樣的內(nèi)源共純化蛋白。類似地，分離的多糖不包括多于痕量的蛋白或來自它們所來源的細(xì)菌的其它細(xì)胞成分。當(dāng)用于本文時，“連系物”是用于在2個官能團(tuán)(例如，panDR結(jié)合肽和需要的免疫原)之間提供共價連接和間隔的任何化合物。典型地，所述連系物包括中性分子，諸如脂肪族碳鏈、氨基酸或氨基酸模擬物，它們在生理條件下基本上不帶電，并且可以具有線性或有分支的側(cè)鏈。在一些情形中，所述連系物可以本身是免疫原性的，盡管不是治療性針對的。用于本發(fā)明的各種連系物在下文中更詳細(xì)地描述。另外，動詞“連接”和“綴合”在本文可以互換的應(yīng)用，并且是指2種或多種種類的共價附著。當(dāng)用于本文時，“T輔助肽”是指由T輔助細(xì)胞的T細(xì)胞受體識別的肽。本發(fā)明的panDR結(jié)合肽是T輔助肽。“來自肺炎鏈球菌血清型的被膜多糖”是指從所述血清型的肺炎鏈球菌細(xì)菌純化的多糖(或至少其表位)或合成制備的多糖，所述合成的多糖具有同所述血清型的天然多糖相同的結(jié)構(gòu)(或至少其表位)?！皩碜?種血清型的被膜多糖綴合到獨(dú)立的肽上”是指這樣的過程，即，所述過程導(dǎo)致來自第一種血清型的被膜多糖同第一種肽的綴合和來自第二種血清型被膜多糖同第二種肽的綴合。第一種和第二種肽可以具有相同的氨基酸序列，或可以具有不同的序列。發(fā)明詳述本發(fā)明的組合物通常包括2種成分，即，panDR結(jié)合肽和一種或多種細(xì)菌被膜多糖。一般地，將所述panDR結(jié)合肽，或包括所述肽序列的多肽，綴合到例如來自肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)血清型的細(xì)菌被膜多糖上。本發(fā)明還提供包括這樣的綴合物的混合物的組合物，以致將來自至少2種血清型的多糖組合在所述組合物中(例如，綴合到一條panDR結(jié)合肽的來自一種血清型的被膜多糖與綴合到第二條(相同的或不同的)panDR結(jié)合肽的來自第二種血清型的被膜多糖相混合)。本發(fā)明有效用于激發(fā)免疫應(yīng)答，典型地，體液應(yīng)答，其針對碳水化合物免疫原的抗原決定簇，并且特別地是肺炎鏈球菌的被膜多糖。用來描述肽化合物的命名法遵循常規(guī)的慣例，其中所述氨基存在于每個氨基酸殘基的左側(cè)(N端)和羧基存在于右側(cè)(C端)。在氨基酸結(jié)構(gòu)式中，每個殘基一般由標(biāo)準(zhǔn)的3個字母或單個字母命名而代表。氨基酸殘基的L形式由大寫的單個字母或三字母符號中大寫第一個字母而代表，并且那些具有D形式的氨基酸的D形式由小寫的單個字母或小寫三字母符號而代表。甘氨酸沒有不對稱的碳原子，并且簡單地寫作″Gly″或G。用來描述碳水化合物的命名法包括下述縮寫Ara＝阿拉伯糖基；Fru＝果糖基；Fuc＝巖藻糖基；Gal＝半乳糖基；GalNAc＝N-乙酰半乳糖基(N-acetylgalacto)；Glc＝葡糖基；GlcNAc＝N-乙酰葡糖基(N-acetylgluco)；Man＝甘露糖基；和NeuAc＝唾液酸(N-乙酰神經(jīng)氨糖基)。無論在還原端的糖類事實上是否為還原糖，認(rèn)為碳水化合物具有還原端和非還原端。本文所有的碳水化合物這樣進(jìn)行描述，即，用于非還原糖類的相同的名稱或縮寫(例如，Gal)，接著是糖苷鍵的構(gòu)型(α或β)，環(huán)鍵，參與該鍵的還原糖類的環(huán)的位置，然后是還原糖類的的名稱或縮寫(例如，GIcNAc)。例如，2個糖之間的連接鍵可以表示為2，3，2→3，或(2，3)。每種糖是吡喃糖。1.PanDR-結(jié)合肽本發(fā)明提供有效用于鑒定對于初始肽的修飾的方法，所述修飾擴(kuò)大了初始肽的特異性。例如，國際申請公布號WO92/02543描述了適用于鑒別能夠結(jié)合DR分子的肽的方法。WO92/02543描述了來自流感病毒的血凝素(″HA″)的應(yīng)用，用作與HLA-DR特異性反應(yīng)的肽的來源。篩選所述蛋白片段的反應(yīng)性，以提供結(jié)合適當(dāng)?shù)腄R分子的序列，適當(dāng)?shù)腄R分子諸如DR1，DR4w4或DR4w14。一旦鑒定了與所選擇的MHC分子結(jié)合的免疫原或其肽，可以通過合成重疊的肽，和/或應(yīng)用N端或C端刪除(剪截)或加成而確定所述抗原或肽的“核心結(jié)合區(qū)域”。在確定核心結(jié)合區(qū)域和關(guān)鍵的接觸殘基時，具有單一的氨基酸取代的一系列肽可以用來確定靜電荷、疏水性等對結(jié)合的作用。在核心區(qū)域內(nèi)，“關(guān)鍵的接觸位點(diǎn)”，即，必須存在于肽中，以便保留結(jié)合MHC分子并且抑制向T細(xì)胞呈遞的能力的那些殘基(或它們的功能等價物)，可以通過單一氨基酸取代、刪除、或插入而確定。另外，人們還可以用特異的氨基酸(例如，Ala)進(jìn)行系統(tǒng)的掃描，以探測由關(guān)鍵的接觸殘基的側(cè)鏈所做出的貢獻(xiàn)。除了在基本的MHC和TCR接觸位點(diǎn)，本發(fā)明的肽對于使用中性氨基酸的單一氨基酸取代相對不敏感，并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的肽耐受多種取代。示例性的多種取代是小的、相對中性的部分，諸如Ala，Gly，Pro，或類似的殘基。取代或添加的殘基的數(shù)目和類型取決于在基本接觸點(diǎn)之間必需的間隔和所探尋的某些功能性質(zhì)(例如，疏水性對親水性)。與母本肽的親和力相比較，對于MHC分子增加的結(jié)合親和力還可以通過這樣的取代而獲得。無論如何，這樣的“間隔”取代應(yīng)該應(yīng)用這樣的氨基酸殘基或其它分子片段，即，它們被選擇來避免，例如，可能破壞結(jié)合的空間的和電荷的干擾。單一氨基酸取代的作用還可以應(yīng)用D-氨基酸進(jìn)行探測。這樣的取代可以應(yīng)用公知的肽合成方法而進(jìn)行，例如，所述合成方法如在Merrifield，Science232341-347(1986)，Barany和Merrifield，THEPEPTIDES，Gross和Meienhofer，eds.(N.Y.，AcademicPress)，第1-284頁(1979)；和Stewart和Young，SOLIDPHASEPEPTIDESYNTHESIS，(Rockford，III.，Pierce)，第二版.(1984)中描述。本發(fā)明應(yīng)用的所述肽不必要與本文所公開的肽相同，只要所述化合物能夠結(jié)合適當(dāng)?shù)腗HC分子或提供針對目標(biāo)免疫原的體液或細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活性。因此，有經(jīng)驗的人應(yīng)該意識到，可以進(jìn)行許多保守取代，而基本上不影響所述肽的活性。保守取代，其中一個氨基酸殘基被另一個生物和/或化學(xué)相似的氨基酸殘基置換，例如，一個疏水性的置換另一個疏水性的，或一個極性的置換另一個極性的。所述取代包括組合，諸如Gly，Ala；Val，Ile，Leu，Met；Asp，Glu；Asn，Gln；Ser，Thr；Lys，Arg；和Phe，Tyr。另外，所述肽或寡肽序列可以不同于天然序列，其通過應(yīng)用末端-NH2酰化，例如，通過烷?；?C1-C20)或巰基乙醇?；阴；饔?，末端羧基酰胺化作用，例如，氨，甲胺，等，而進(jìn)行修飾。在一些實例中，這些修飾可以提供連接支持物或其它分子的位點(diǎn)?？梢詰?yīng)用另一種方法，其中將含有對于結(jié)合MHC關(guān)鍵的側(cè)鏈的錨定殘基插入到13個殘基的聚丙氨酸肽。Jardetzky，等.，Nature353326-329(1990)已經(jīng)應(yīng)用了這種方法。他們證明用單個主要的MHC接觸殘基(Tyr)修飾的聚丙氨酸肽賦予所述肽對DR1的高親和力結(jié)合能力。除了應(yīng)用酪氨酸作為主要的MHC接觸殘基，還可以應(yīng)用環(huán)己丙氨酸或苯丙氨酸。關(guān)于肽結(jié)合那些DR等位基因的能力，所述DR等位基因能夠高親和性結(jié)合HA肽，這些殘基可以與Tyr互換，并且此外還允許與在DRβ鏈第86位殘基含有G→V取代的MHC分子結(jié)合。這種變化影響II類MHC中B結(jié)合口袋的結(jié)合特異性，以致酪氨酸不再能夠有效地結(jié)合，而環(huán)己丙氨酸，以及苯丙氨酸，可以結(jié)合。上文所鑒定的肽的生物活性可以在各種系統(tǒng)中進(jìn)行檢測。例如，可以應(yīng)用應(yīng)答用所述肽免疫的CD4+細(xì)胞活性，例如，如在實施例中所描述的那樣。備選地，檢測抑制抗原特異性T細(xì)胞活化的能力。在一個示例性的流程中，將過量的肽與下列各項一起溫育已知表達(dá)MHC(例如，DR1)的抗原呈遞細(xì)胞，和抑制抗原特異性(例如，破傷風(fēng)毒素830-843)與MHC限制性(又是DR1)的T細(xì)胞集落，以及免疫原性肽本身(即，破傷風(fēng)毒素830-843)。將檢測的培養(yǎng)物溫育足夠的時間使得T細(xì)胞增殖，諸如4天，然后應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的方法測定增殖，諸如在溫育的最后18小時期間使用[3H]-胸腺嘧啶核苷脈沖。然后計算與沒有接受肽的對照相比較的抑制百分?jǐn)?shù)。體外檢測中肽抑制抗原呈遞的能力與所述肽在體內(nèi)抑制免疫應(yīng)答的能力相關(guān)。體內(nèi)活性可以在動物模型中確定，例如，通過施用已知受限于由所述肽識別的具體的MHC分子的免疫原，和免疫調(diào)節(jié)性肽。隨后，用劑量范圍的免疫原將T淋巴細(xì)胞從所述動物和培養(yǎng)物中去除。刺激的抑制通過常規(guī)方法測定，例如，使用[3H]-胸腺嘧啶核苷脈沖，和與適當(dāng)?shù)膶φ障啾容^。同樣參見，Adorini，等.，Nature334623-625(1988)，其通過參考并入本文。大量的具有確定的MHC分子，特別是MHCII類分子的細(xì)胞是已知的，并且易于獲得，例如，從美國典型培養(yǎng)物收藏中心(ATCC)(″細(xì)胞系和雜交瘤目錄″，第六版，(1988))Rockville，Maryland，U.S.A。本發(fā)明肽的一個示例性實施方案包括對N和C端殘基的修飾。技術(shù)人員將容易理解，可以修飾N和C端以改變所述肽的物理或化學(xué)特性，諸如，例如，以影響結(jié)合、穩(wěn)定性、生物利用度、連接的容易度、等。例如，在N或C端，用各種氨基酸模擬物或D-氨基酸修飾肽，例如，有效地增加所述肽在體內(nèi)的穩(wěn)定性。這樣的肽可以以“反轉(zhuǎn)(inverso)”或“逆反轉(zhuǎn)(retroinverso)”形式合成，即，通過用D-氨基酸置換L-氨基酸，或通過顛倒氨基酸的序列并且用D-氨基酸置換L-氨基酸。由于D肽可以更抗肽酶，并且因此與它們的L肽副本相比，在血清和組織中可以更穩(wěn)定，因此，與相應(yīng)的L肽相比，D肽在生理條件下的穩(wěn)定性可以更多地補(bǔ)償親和性的差別。此外，有或沒有取代的含有L-氨基酸的肽可以用D-氨基酸加帽，以抑制免疫原肽的外肽酶破壞。穩(wěn)定性可以在許多方法中檢測。例如，應(yīng)用肽酶和各種生物介質(zhì)，諸如人血漿和血清，來檢測穩(wěn)定性。參見，例如，Verhoef，等.，Eur.JDrugMetab.Pharmacokin.11291-302(1986)；Walter，等.，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.14898-103(1975)；Witter，等.，Neuroendocrinology30377-381(1980)；Verhoef，等.，JEndocrinology110557-562(1986)；Handa，等.，Eur.J.Pharmacol.70531-540(1981)；Bizzozero，等.，Eur.J.Biochem.122251-258(1982)；Chang，Eur.JBiochem.151217-224(1985)。還可以通過在肽的C和N端引入D-氨基酸而增加穩(wěn)定性。先前的研究表明，當(dāng)在含有血清的介質(zhì)中溫育時，通過在C和N端引入D-氨基酸而賦予所述肽對外肽酶活性的抗性，可以極大地延長含有L-氨基酸的肽在體內(nèi)和體外的半衰期。本發(fā)明的肽或類似物可以通過改變某些殘基的順序或組成而進(jìn)行修飾，易于理解，對于生物活性重要的氨基酸殘基，例如，在關(guān)鍵接觸位點(diǎn)的那些，一般不可以被改變，從而對生物活性沒有不利的影響。非關(guān)鍵性的氨基酸不必被限制為在蛋白中天然存在的那些，諸如Lα-氨基酸，或它們的D-異構(gòu)體，但是還可以包括非蛋白氨基酸，諸如β-γ-δ氨基酸，以及許多L-α-氨基酸的衍生物。如所討論的，本發(fā)明的肽通?？梢园↙-氨基酸或D-氨基酸，但不是在核心結(jié)合區(qū)內(nèi)的D-氨基酸。在本文所描述的任何序列中，肽的末端可以是D或L形式。本發(fā)明的肽可以以廣泛種類的方法進(jìn)行制備。由于它們相對短的大小，所述肽可以按照常規(guī)技術(shù)在溶液中或在固體支持物上合成。許多自動化的合成儀可以商購獲得，并且可以按照已知的流程應(yīng)用。參見，例如，Stewart和Young，SolidPhasePeptideSynthesis，第二版，PierceChemicalCo.(1984)，如前所述。備選地，可以應(yīng)用重組DNA技術(shù)，其中將編碼目的免疫原肽的核苷酸序列插入到表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染到適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞中，并且在適于表達(dá)的條件下培養(yǎng)。這些方法在本領(lǐng)域內(nèi)通常是已知的，如一般在Sambrook，等.，MolecularCloning，ALaboratoryManual，ColdSpringHarborPress，ColdSpringHarbor，NewYork(1989)中所描述的那樣。因此，包括本發(fā)明的一種或多種肽序列的融合蛋白可以用來呈遞適當(dāng)?shù)腡細(xì)胞表位。本領(lǐng)域內(nèi)公知，盡管包括一種或多種D-氨基酸殘基的肽不能由重組DNA技術(shù)產(chǎn)生，但是其典型可接受的取代物可以通過結(jié)合編碼與初始肽中的每個D-氨基酸殘基相對應(yīng)的L-氨基酸殘基的DNA序列而產(chǎn)生。由于本文預(yù)期長度的肽的編碼序列可以通過化學(xué)技術(shù)而合成，例如，Matteucci，等.，JAm.Chem.Soc.1033185(1981)的磷酸三酯方法，修飾可以簡單地通過用適當(dāng)?shù)膲A基取代編碼天然肽序列的那些堿基而進(jìn)行。然后，可以將編碼適當(dāng)?shù)倪B系物的核酸序列添加到肽編碼序列上，并且連接到本領(lǐng)域通?？色@得的表達(dá)載體上，并且將所述載體用于轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗饕援a(chǎn)生需要的融合蛋白?，F(xiàn)在許多這樣的載體和適當(dāng)?shù)乃拗飨到y(tǒng)是可用的。對于融合蛋白的表達(dá)，所述編碼序列可以具有可操作性連接的起始和終止密碼子、啟動子和終止子區(qū)域和使得表達(dá)載體在需要的細(xì)胞宿主中表達(dá)的常見的復(fù)制系統(tǒng)。例如，在質(zhì)粒中提供與細(xì)菌宿主兼容的啟動子序列，其含有便利的限制性位點(diǎn)用于插入所需要的編碼序列。將所獲得的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到適當(dāng)?shù)募?xì)菌宿主中。當(dāng)然，也可以應(yīng)用酵母菌或哺乳動物細(xì)胞，應(yīng)用適當(dāng)?shù)妮d體和控制序列。本發(fā)明的示例性pan-DR肽包括，例如，少于50個氨基酸殘基的寡肽，和抗原決定簇，其中所述寡肽和抗原決定簇任選地彼此共價附著。所述抗原決定簇可以來自細(xì)菌、病毒、癌細(xì)胞、真菌、或寄生蟲。當(dāng)所述panDR結(jié)合寡肽和抗原決定簇彼此共價附著時，它們將直接連接或通過連接基團(tuán)附著。在一組實施方案中，所述panDR結(jié)合肽選自由下列各項組成的組aAXAAAKTAAAAa，aAXAAAATLKAAa，aAXVAAATLKAAa，aAXIAAATLKAAa，aKXVAAWTLKAAa，aKFVAAWTLKAAa，AAXAAAKTAAAAA(SEQIDNO1)，AAXAAAATLKAAA(SEQIDNO2)，AAXVAAATLKAAA(SEQIDNO3)，AAXIAAATLKAAA(SEQIDNO4)，AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)和AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)，其中a是D-丙氨酸，A是L-丙氨酸，X是環(huán)己丙氨酸，K是賴氨酸，T是蘇氨酸，L是亮氨酸，V是纈氨酸，I是異亮氨酸，W是色氨酸，和F是苯丙氨酸。在一些實施方案中，panDR結(jié)合肽是aKXVAAWTLKAAa。本發(fā)明提供用于激發(fā)針對免疫原性碳水化合物的免疫應(yīng)答的組合物，所述組合物包括少于約50個氨基酸殘基的panDR結(jié)合寡肽和至少一種碳水化合物表位。在一些實施方案中，所述panDR結(jié)合肽具有式R1-R2-R3-R4-R5，從N端到C端，其中R1由至少2個殘基組成；R2選自由環(huán)己丙氨酸殘基、酪氨酸殘基、苯丙氨酸殘基和對此的保守性取代組成的組；R3是3-5個氨基酸殘基；R4選自由蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸、賴氨酸-蘇氨酸、和色氨酸-蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸、以及對此的保守性取代組成的組；和R5由至少2個殘基組成。在某些實施方案中，式R1-R2-R3-R4-R5代表的肽的每種氨基酸殘基成分可以是D-氨基酸殘基或L-氨基酸殘基。本發(fā)明的panDR結(jié)合肽，除了促進(jìn)針對第二決定簇的免疫應(yīng)答，本身還可以作為目標(biāo)免疫原。因此，例如，在包括panDR結(jié)合肽序列的多糖與碳水化合物表位連接的情形中，免疫應(yīng)答可以是針對panDR結(jié)合肽和所述碳水化合物表位的，并且任選地針對所述多肽內(nèi)的其它肽序列。2.本發(fā)明的多糖肺炎鏈球菌被膜多糖可以按照本發(fā)明的方法進(jìn)行應(yīng)用。目前已知多于90種血清型的肺炎鏈球菌。參見，例如，Pneumococcaldisease.InEpidemiologyandpreventionofvaccine-preventablediseases.第六版.Waldorf(MD)PublicHealthFoundation；2000.第249-63頁；KalinM.，Thorax53(3)159-162(1998)；HedlundJ，等.ClinInfectDis.21(4)948-53(1995)。示例性的鏈球菌被膜多糖抗原包括，但不限于來自肺炎鏈球菌血清型1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，或95的那些。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物包括來自2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30或多種上文所列出的血清型的被膜多糖的混合物。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物包括本發(fā)明獨(dú)立的panDR肽與來自下列各項的被膜多糖的綴合物的混合物2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30或更多下述血清型1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，33F，6A，7A，7B，7C，9A，9L，12A，13，15A，15C，16F，18A，18B，18F，19B，19C，21，22A，23A，23B，24F，25，27，29，31，34，35，38，45，或46。包括不同的血清型的多糖的綴合物的混合物可以包括，下述血清型的一些或全部的組合1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，和33F。在一些實施方案中，鏈球菌被膜多糖抗原的組合包括來自肺炎鏈球菌血清型4，6B，9V，14，18C，19F，和23F的那些。在一些實施方案中，鏈球菌被膜多糖抗原的組合包括來自肺炎鏈球菌血清型1，4，5，6B，9V，14，18C，19F，和23F的那些。在一些實施方案中，鏈球菌被膜多糖抗原的組合包括來自肺炎鏈球菌血清型1，3，4，5，6B，7F，9V，14，18C，19F，和23F的那些。在某些實施方案中，本發(fā)明的肺炎鏈球菌多糖/PanDR結(jié)合肽綴合物由下述組成，或備選地包括，肺炎鏈球菌多糖，其選自肺炎鏈球菌血清型和/或血清組的下述列表1，2，3，4，5，6，6A，6B，7，8，9，9V，10，11，12，14，15，15A，16，17，18，19，19A，19F，20，21，22，23，23F，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，35B，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，和73，應(yīng)用本領(lǐng)域公知的和/或本文所描述的連接化學(xué)，將所述肺炎鏈球菌多糖綴合到PanDR結(jié)合肽上，所述PanDR結(jié)合肽選自下述列表(其中X＝環(huán)己丙氨酸)aAXAAAKTAAAAa，aAXAAAATLKAAa，aAXVAAATLKAAa，aAXIAAATLKAAaaKXVAAWTLKAAa，aKFVAAWTLKAAa，AAXAAAKTAAAAA(SEQIDNO1)，AAXAAAATLKAAA(SEQIDNO2)，AAXVAAATLKAAA(SEQIDNO3)，AAXIAAATLKAAA(SEQIDNO4)，AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)，AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)，AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO8)，aAFAAAKTAAAAa，aAFAAAATLKAAa，aAFVAAATLKAAa，aAFIAAATLKAAaaKFVAAWTLKAAa，aKFVAAWTLKAAa，AAFAAAKTAAAAA(SEQIDNO1)，AAFAAAATLKAAA(SEQIDNO2)，AAFVAAATLKAAA(SEQIDNO3)，AAFIAAATLKAAA(SEQIDNO4)，AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)，AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)，AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO9)，aKXAAAATLKAAa，aEXAAAATLKAAa，aOXAAAATLKAAa，aQXAAAATLKAAa，aVXAAAATLKAAa，aFXAAAATLKAAa，aAXKAAATLKAAa，aAXEAAATLKAAa，aAXQAAATLKAAa，aAXFAAATLKAAa，aAXLAAATLKAAa，aAXAKAATLKAAa，aAXAEAATLKAAa，aAXAQAATLKAAa，aAXAVAATLKAAa，aAXAFAATLKAAa，aAXAAKATLKAAa，aAXAAEATLKAAa，aAXAAQATLKAAa，aAXAAVATLKAAa，aAXAAFATLKAAa，aAXAAAKTLKAAa，aAXAAAETLKAAa，aAXAAAQTLKAAa，aAXAAAVTLKAAa，aAXAAAFTLKAAa，aAXAAATTLKAAa，aAXAAAATKKAAa，aAXAAAATEKAAa，aAXAAAATQKAAa，aAXAAAATVKAAa，aAXAAAATFKAAa，aAXAAAATIKAAa，aAXAAAATLEAAa，aAXAAAATLQAAa，aAXAAAATLVAAa，aAXAAAATLFAAa，aAXAAAATLRAAa，aAXAAAATLKKAa，aAXAAAATLKEAa，aAXAAAATLKQAa，aAXAAAATLKVAa，aAXAAAATLKFAa，aAXAAAATLKLAa，aAXAAAATLKAKa，aAXAAAATLKAEa，aAXAAAATLKAQa，aAXAAAATLKAVa，aAXAAAATLKAFa，aKXVKANTLKAAa，aKXVKANTLKAAa，aKXVKAWTLKAAa，aKXVKAWTLKAAa，aKXVWANTLKAAa，aKXVWAYTLKAAa，aKXVWAVTLKAAa，aKXVYAWTLKAAa，aRXVRANTLKAAa，aKXVKAHTLKAAa，aKXVKAHTLKAAa，aKXVAANTLKAAa，aKVAANTLKAAa，aKXVAAYTLKAAa，aKXVAAYTLKAAa，aKXVAAWTLKAAa，aKXVAAKTLKAAa，aKXVAAHTLKAAa，aKXVAAATLKAAa，KSSaKXVMAATLKAAa，AKXAAAATLKAAA(SEQIDNO＿)，AEXAAAATLKAAA(SEQIDNO10)，AOXAAAATLKAAA(SEQIDNO11)，AQXAAAATLKAAA(SEQIDNO12)，AVXAAAATLKAAA(SEQIDNO13)，AFXAAAATLKAAA(SEQIDNO14)，AAXKAAATLKAAA(SEQIDNO15)，AAXEAAATLKAAA(SEQIDNO16)，AAXQAAATLKAAA(SEQIDNO17)，AAXFAAATLKAAA(SEQIDNO18)，AAXLAAATLKAAA(SEQIDNO19)，AAXAKAATLKAAA(SEQIDNO20)，AAXAEAATLKAAA(SEQIDNO21)，AAXAQAATLKAAA(SEQIDNO22)，AAXAVAATLKAAA(SEQIDNO23)，AAXAFAATLKAAA(SEQIDNO24)，AAXAAKATLKAAA(SEQIDNO25)，AAXAAEATLKAAA(SEQIDNO26)，AAXAAQATLKAAA(SEQIDNO27)，AAXAAVATLKAAA(SEQIDNO28)，AAXAAFATLKAAA(SEQIDNO29)，AAXAAAKTLKAAA(SEQIDNO30)，AAXAAAETLKAAA(SEQIDNO31)，AAXAAAQTLKAAA(SEQIDNO32)，AAXAAAVTLKAAA(SEQIDNO33)，AAXAAAFTLKAAA(SEQIDNO34)，AAXAAATTLKAAA(SEQIDNO35)，AAXAAAATKKAAA(SEQIDNO36)，AAXAAAATEKAAA(SEQIDNO37)，AAXAAAATQKAAA(SEQIDNO38)，AAXAAAATVKAAA(SEQIDNO39)，AAXAAAATFKAAA(SEQIDNO40)，AAXAAAATIKAAA(SEQIDNO41)，AAXAAAATLEAAA(SEQIDNO42)，AAXAAAATLQAAA(SEQIDNO43)，AAXAAAATLVAAA(SEQIDNO44)，AAXAAAATLFAAA(SEQIDNO45)，AAXAAAATLRAAA(SEQIDNO46)，AAXAAAATLKKAA(SEQIDNO47)，AAXAAAATLKEAA(SEQIDNO48)，AAXAAAATLKQAA(SEQIDNO49)，AAXAAAATLKVAA(SEQIDNO50)，AAXAAAATLKFAA(SEQIDNO51)，AAXAAAATLKLAA(SEQIDNO52)，AAXAAAATLKAKA(SEQIDNO53)，AAXAAAATLKAEA(SEQIDNO54)，AAXAAAATLKAQA(SEQIDNO55)，AAXAAAATLKAVA(SEQIDNO56)，AAXAAAATLKAFA(SEQIDNO57)，AKXVKANTLKAAA(SEQIDNO58)，AKXVKANTLKAAA(SEQIDNO59)，AKXVKAWTLKAAA(SEQIDNO60)，AKXVKAWTLKAAA(SEQIDNO61)，AKXVWANTLKAAA(SEQIDNO62)，AKXVWAYTLKAAA(SEQIDNO63)，AKXVWAVTLKAAA(SEQIDNO64)，AKXVYAWTLKAAA(SEQIDNO65)，ARXVRANTLKAAA(SEQIDNO66)，AKXVKAHTLKAAA(SEQIDNO67)，AKXVKAHTLKAAA(SEQIDNO68)，AKXVAANTLKAAA(SEQIDNO69)，AKXVAANTLKAAA(SEQIDNO70)，AKXVAAYTLKAAA(SEQIDNO71)，AKXVAAYTLKAAA(SEQIDNO72)，AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO73)，AKXVAAKTLKAAA(SEQIDNO74)，AKXVAAHTLKAAA(SEQIDNO75)，AKXVAAATLKAAA(SEQIDNO76)，KSSAKXVMAATLKAAA(SEQIDNO77)，aKFAAAATLKAAa，aEFAAAATLKAAa，aOFAAAATLKAAa，aQFAAAATLKAAa，aVFAAAATLKAAa，aFFAAAATLKAAa，aAFKAAATLKAAa，aAFEAAATLKAAa，aAFQAAATLKAAa，aAFFAAATLKAAa，aAFLAAATLKAAa，aAFAKAATLKAAa，aAFAEAATLKAAa，aAFAQAATLKAAa，aAFAVAATLKAAa，aAFAFAATLKAAa，aAFAAKATLKAAa，aAFAAEATLKAAa，aAFAAQATLKAAa，aAFAAVATLKAAa，aAFAAFATLKAAa，aAFAAAKTLKAAa，aAFAAAETLKAAa，aAFAAAQTLKAAa，aAFAAAVTLKAAa，aAFAAAFTLKAAa，aAFAAATTLKAAa，aAFAAAATKKAAa，aAFAAAATEKAAa，aAFAAAATQKAAa，aAFAAAATVKAAa，aAFAAAATFKAAa，aAFAAAATIKAAa，aAFAAAATLEAAa，aAFAAAATLQAAa，aAFAAAATLVAAa，aAFAAAATLFAAa，aAFAAAATLRAAa，aAFAAAATLKKAa，aAFAAAATLKEAa，aAFAAAATLKQAa，aAFAAAATLKVAa，aAFAAAATLKFAa，aAFAAAATLKIAa，aAFAAAATLKAKa，aAFAAAATLKAEa，aAFAAAATLKAQa，aAFAAAATLKAVa，aAFAAAATLKAFa，aKFVKANTLKAAa，aKFVKANTLKAAa，aKFVKAWTLKAAa，aKFVKAWTLKAAa，aKFVWANTLKAAa，aKFVWAYTLKAAa，aKFVWAVTLKAAa，aKFVYAWTLKAAa，aRFVRANTLKAAa，aKFVKAHTLKAAa，aKFVKAHTLKAAa，aKFVAANTLKAAa，aKFVAANTLKAAa，aKFVAAYTLKAAa，aKFVAAYTLKAAa，aKFVAAWTLKAAa，aKFVAAKTLKAAa，aKFVAAHTLKAAa，aKFVAAATLKAAa，KSSaKVMAATLKAAAa，AKFAAAATLKAAA(SEQIDNO78)，AEFAAAATLKAAA(SEQIDNO79)，AOFAAAATLKAAA(SEQIDNO80)，AQFAAAATLKAAA(SEQIDNO81)，AVFAAAATLKAAA(SEQIDNO82)，AFFAAAATLKAAA(SEQIDNO83)，AAFKAAATLKAAA(SEQIDNO84)，AAFEAAATLKAAA(SEQIDNO85)，AAFQAAATLKAAA(SEQIDNO86)，AAFFAAATLKAAA(SEQIDNO87)，AAFLAAATLKAAA(SEQIDNO88)，AAFAKAATLKAAA(SEQIDNO89)，AAFAEAATLKAAA(SEQIDNO90)，AAFAQAATLKAAA(SEQIDNO91)，AAFAVAATLKAAA(SEQIDNO92)，AAFAFAATLKAAA(SEQIDNO93)，AAFAAKATLKAAA(SEQIDNO94)，AAFAAEATLKAAA(SEQIDNO95)，AAFAAQATLKAAA(SEQIDNO96)，AAFAAVATLKAAA(SEQIDNO97)，AAFAAFATLKAAA(SEQIDNO98)，AAFAAAKTLKAAA(SEQIDNO99)，AAFAAAETLKAAA(SEQIDNO100)，AAFAAAQTLKAAA(SEQIDNO101)，AAFAAAVTLKAAA(SEQIDNO102)，AAFAAAFTLKAAA(SEQIDNO103)，AAFAAATTLKAAA(SEQIDNO104)，AAFAAAATKKAAA(SEQIDNO105)，AAFAAAATEKAAA(SEQIDNO106)，AAFAAAATQKAAA(SEQIDNO107)，AAFAAAATVKAAA(SEQIDNO108)，AAFAAAATFKAAA(SEQIDNO109)，AAFAAAATIKAAA(SEQIDNO110)，AAFAAAATLEAAA(SEQIDNO111)，AAFAAAATLQAAA(SEQIDNO112)，AAFAAAATLVAAA(SEQIDNO113)，AAFAAAATLFAAA(SEQIDNO114)，AAFAAAATLRAAA(SEQIDNO115)，AAFAAAATLKKAA(SEQIDNO116)，AAFAAAATLKEAA(SEQIDNO117)，AAFAAAATLKQAA(SEQIDNO118)，AAFAAAATLKVAA(SEQIDNO119)，AAFAAAATLKFAA(SEQIDNO120)，AAFAAAATLKLAA(SEQIDNO121)，AAFAAAATLKAKA(SEQIDNO122)，AAFAAAATLKAEA(SEQIDNO123)，AAFAAAATLKAQA(SEQIDNO124)，AAFAAAATLKAVA(SEQIDNO125)，AAFAAAATLKAFA(SEQIDNO126)，AKFVKANTLKAAA(SEQIDNO127)，AKFVKANTLKAAA(SEQIDNO128)，AKFVKAWTLKAAA(SEQIDNO129)，AKFVKAWTLKAAA(SEQIDNO130)，AKFVWANTLKAAA(SEQIDNO131)，AKFVWAYTLKAAA(SEQIDNO132)，AKFVWAVTLKAAA(SEQIDNO133)，AKFVYAWTLKAAA(SEQIDNO134)，ARFVRANTLKAAA(SEQIDNO135)，AKFVKAHTLKAAA(SEQIDNO136)，AKFVKAHTLKAAA(SEQIDNO137)，AKFVAANTLKAAA(SEQIDNO138)，AKFVAANTLKAAA(SEQIDNO139)，AKFVAAYTLKAAA(SEQIDNO140)，AKFVAAYTLKAAA(SEQIDNO141)，AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO142)，AKFVAAKTLKAAA(SEQIDNO143)，AKFVAAHTLKAAA(SEQIDNO144)，AKFVAAATLKAAA(SEQIDNO145)，和KSSAKFVMAATLKAAA(SEQIDNO146)。因此，本發(fā)明的肺炎鏈球菌多糖/PanDR結(jié)合肽綴合物的非限制性實例由下列各項組成，或任選地包括6B-AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)(其中“6B”代表肺炎鏈球菌血清型6B，并且“AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)”代表包括氨基酸序列AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)的PanDR結(jié)合肽)；6B-aKFVAAWTLKAAa；4-AKFVMAAWTLKAAA(SEQIDNO6)；4-aKFVAAWTLKAAa；9V-AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)；9V-aKFVAAWTLKAAa；14-AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)；14-aKFVAAWTLKAAa；18C-AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)；18C-aKFVAAWTLKAAa；19F-AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)；19F-aKFVAAWTLKAAa；23F-AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)；23F-aKFVAAWTLKAAa；6B-aKXVAAWTLKAAa；4-AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)；4-aKXVAAWTLKAAa；9V-AKXVAAWTLKAA(SEQIDNO5)；9V-aKXVAAWTLKAAa；14-AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)；14-aKXVAAWTLKAAa；18C-AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)；18C-aKXVAAWTLKAAa；19F-AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)；19F-aKXVAAWTLKAAa；23F-AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)；和23F-aKFVAAWTLKAAa。許多不同的肺炎鏈球菌血清型可以從ATCC(P.O.Box1549，Manassas，VA20108)獲得，其包括表1中所列出的那些。表1可從ATCC獲得的代表性血清型細(xì)菌的列表來自至少下列血清型的純化的被膜多糖可以從ATCC獲得1，2，3，4，5，8，9N，12F，14，17F，19F，20，22F，23F，25，6B，10A，11A，7F，15B，18C，19A，9V，和33F。已經(jīng)確定了許多血清型被膜多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)。例如，vanSelm，等.，Infect.Immun.71(11)6192-6198(2003)提供了血清型14，15B和15C被膜多糖的結(jié)構(gòu)，如下其中“+0.7OAc*”表明平均有70％的重復(fù)單位是O-乙酰化的。Jiang等.，Infect.Immun.69(3)1244-1255(2001)提供了血清型4，6B，8，或18C被膜多糖的結(jié)構(gòu)，如下血清型4血清型6B血清型8Morona等.，JBacterial.181(17)5355-5364(1999)提供了血清型19F，19A，19B和19C的被膜多糖的結(jié)構(gòu)，如下Karlsson等.，Eur.JBiochem.255296-302(1998)提供了血清型32A和32F被膜多糖的結(jié)構(gòu)，如下血清型32FR＝H血清型32AR＝Ac本發(fā)明所用的碳水化合物可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行制備。通過本領(lǐng)域已知的方法，可以從它們各自的細(xì)菌菌株制備鏈球菌多糖。在示例性方法中，鏈球菌多糖從細(xì)菌菌株中純化出來，其通過將細(xì)菌成分與堿性試劑相接觸，以獲得混合物，其中所述混合物的pH在大約，例如，9和14之間，(例如，其中pH＝9，pH＝9.5，pH＝10，pH＝10.5，pH＝11，pH＝11.5，pH＝12，pH＝12.5，pH＝13，pH＝13.5或pH＝14)，從細(xì)胞成分中分離出被膜多糖，并且回收基本上沒有其它細(xì)胞成分的所述被膜多糖。參見，例如，美國專利號6,248,570。也參見，Wessels，M.R.，等.Infect.Immun.571089-1094(1989)；Wessels，M.R.，等.JClin.Invest.861428-1433(1990)。備選地，本發(fā)明的多糖可以通過形成配糖鍵從適當(dāng)?shù)膯翁侵苽?，或從天然來源分離并適當(dāng)?shù)匦揎?。例如，?糖基鍵可以在帶有1-鹵取代基的一個糖和適當(dāng)保護(hù)的第二個糖之間形成，所述的第二個糖具有至少1個未保護(hù)的羥基。典型地，這樣的轉(zhuǎn)化在碳酸銀(Ag2CO3)或silvertriflate存在下進(jìn)行。備選地，所述配糖鍵可以通過酶促手段形成，其應(yīng)用國際專利申請公布號WO96/32492中描述的方法進(jìn)行。簡要地，糖基轉(zhuǎn)移酶，諸如唾液酸轉(zhuǎn)移酶，可以用來構(gòu)建具體的配糖鍵。許多唾液酸轉(zhuǎn)移酶為本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員所知。這種酶將唾液酸(NeuAc)轉(zhuǎn)移到Gal，在這2種糖之間形成α-連接。糖間鍵(連接)是在NeuAc的位置2和Gal的位置3之間。通常被叫作唾液酸轉(zhuǎn)移酶的一種示例性的α(2，3)唾液酸轉(zhuǎn)移酶(EC2.4.99.6)，將唾液酸轉(zhuǎn)移到Galβ1→3G1c二糖或配糖的非還原末端Gal上。參見，例如，VandenEijnden，等.，JBiol.Chem.，2563159(1981)，Weinstein，等.，JBiol.Chem.，25713845(1982)和Wen，等.，JBiol.Chem.，26721011(1992)。另一種示例性α-2，3-唾液酸轉(zhuǎn)移酶(EC2.4.99.4)將唾液酸轉(zhuǎn)移到二糖或配糖的非還原末端Gal上。參見，例如，Rearick，等.，JBiol.Chem.，2544444(1979)和Gillespie，等.，JBiol.Chem.，26721004(1992)。其它示例性酶包括Gal-β-1，4-GlcNAcα-2，6唾液酸轉(zhuǎn)移酶。參見，例如，Kurosawa，等.Eur.JBiochem.219375-381(1994)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明白，其它糖基轉(zhuǎn)移酶可以被取代進(jìn)入相似的轉(zhuǎn)移酶循環(huán)，如對于唾液酸轉(zhuǎn)移酶所詳細(xì)描述的那樣。例如，糖基轉(zhuǎn)移酶還可以是糖基轉(zhuǎn)移酶類，例如，Alg8(Stagljov，等.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA915977(1994))或Alg5(Heesen，等.Eur.JBiochem.22471(1994))。適當(dāng)?shù)腘-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶包括α(1，3)N-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶，β(1，4)N-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶(Nagata，等.JBiol.Chem.26712082-12089(1992)和Smith，等.JBiolChem.26915162(1994))和多肽N-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶(Homa，等.JBiolChem.26812609(1993))。適當(dāng)?shù)腘-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶包括GnTI(2.4.1.101，Hull，等.，BBRC176608(1991))，GnTII，和GnTIII(Ihara，等.，J.Biolchem.113692(1993))，GnTV(Shoreiban，等.，JBiol.Chem.26815381(1993))，O-連接的N-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶(Bierhuizen，等.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA899326(1992))，和乙酰透明質(zhì)酸合成酶。適當(dāng)?shù)母事短腔D(zhuǎn)移酶包括α(1，2)甘露糖基轉(zhuǎn)移酶，α(1，3)甘露糖基轉(zhuǎn)移酶，β(1，4)甘露糖基轉(zhuǎn)移酶，Dol-P-Man合成酶，Ochl，和Pmtl。在Ichikawa，等.，J.Am.Chem.Soc.1149283(1992)，Wong，等.，J.Org.Chem.574343(1992)，DeLuca，等.，J.Am.Chem.Soc.1175869-5870(1995)，和Ichikawa，等.，inCarbohydratesandCarbohydratePolymers，Yaltami，ed.(ATLPress，1993)描述了其它適當(dāng)?shù)奶腔D(zhuǎn)移酶循環(huán)。對于上述糖基轉(zhuǎn)移酶循環(huán)，過程中所用的各種反應(yīng)物的濃度或用量取決于許多因素，包括反應(yīng)條件，諸如溫度和pH，和要被糖基化的受體糖的選擇和用量。由于糖基化過程允許在存在催化用量的酶下再生活化的核苷酸、活化的供體糖并且清除所產(chǎn)生的焦磷酸，因此，所述過程受到前文所討論的化學(xué)計量底物的濃度或用量的限制。按照本發(fā)明方法可以應(yīng)用的反應(yīng)物的濃度上限由所述反應(yīng)物的溶解度決定。包括附加的多肽(例如，來自肺炎鏈球菌衍生的多肽)的CTL肽還可以與本發(fā)明的多肽/多糖綴合物一起施用?？梢院铣砂ㄟm當(dāng)?shù)谋砦坏腃TL肽，并且然后在檢測中檢測它們結(jié)合MHCI類分子的能力，所述檢測應(yīng)用，例如，純化的I類分子和碘化肽和/或表達(dá)空I類分子的細(xì)胞，通過，例如，免疫熒光染色和流動顯微熒光檢測，依賴肽的I類裝配檢測，和肽競爭對CTL識別的抑制。結(jié)合I類分子的那些肽可以進(jìn)一步評估它們作為衍生于被感染的或免疫的個體的CTLs的靶點(diǎn)的能力，以及它們在體外或體內(nèi)誘導(dǎo)初級CTL應(yīng)答的能力，所述CTL應(yīng)答可以使得CTL群體能夠作為潛在的治療劑與病毒感染的靶點(diǎn)細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞反應(yīng)。在某些實施方案中，抗體誘導(dǎo)肽，即，包括抗體表位的肽，可以與本發(fā)明的多肽/多糖綴合物一起施用。所述一種或多種CTL和/或抗體誘導(dǎo)肽可以與在混合物中的一種或多種panDR肽一起施用，所述混合物可以或可以不包含肽間非共價締合。例如，一種或多種肽可以被脂化(lipidated)。備選地，所述肽可以共價連接(例如，以重組融合形式)。為了促進(jìn)抗原決定簇與panDR結(jié)合肽的締合，可以將附加的氨基酸添加到所述肽的末端。所附加的殘基還可以用于同載體、支持物或更大的肽而偶聯(lián)，出于本文所討論的原因，或為了修飾所述肽或寡肽的物理或化學(xué)特性，等。可以將氨基酸，諸如酪氨酸、半胱氨酸、賴氨酸、谷氨酸或天冬氨酸、等，引入所述肽或寡肽的C或N端。另外，所述肽或寡肽的序列可以不同于天然序列，通過末端-NH2酰化，例如，通過烷?；?C1-C20)或巰基乙醇?；阴；饔茫┒唆然０坊饔?，例如，氨、甲胺、等，而進(jìn)行修飾。在一些實例中，這些修飾可以提供連接支持物或其它分子的位點(diǎn)。關(guān)于panDR結(jié)合肽，應(yīng)該理解，抗原決定簇可以被修飾，以提供其它必要的特性，例如，改善的藥理學(xué)特征，同時增加或至少基本上保留未修飾的肽的所有生物活性。例如，所述肽可以通過在所述肽氨基酸序列中延長、減少或取代而進(jìn)行修飾，通過在從本文所公開的序列衍生的肽的氨基端或羧基端、或兩端添加或刪除氨基酸而實現(xiàn)。通常，除了其中附加的氨基酸可以被添加在任一端，出于修飾所述肽易于連接或偶聯(lián)等的物理或化學(xué)特性的目的之外，意欲充分地模擬CTL-或抗體刺激表位的序列部分將不會與靶點(diǎn)抗原蛋白序列有多于約20％的差別。在發(fā)現(xiàn)所述肽序列的區(qū)域在病毒亞型中是多態(tài)性的情形中，可以必要地改變一個或多個具體的氨基酸，以更有效地模擬不同的病毒毒株或血清型的變化的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞表位。本發(fā)明的肽可以通過連接形成聚合物(多聚體)而組合，或可以在沒有連接的組合物中配制，作為混合物。在將肽連接到相同的肽上，由此形成均聚物的情形中，呈現(xiàn)出多個重復(fù)的表位單位。例如，多抗原肽(MAP)技術(shù)可以用來構(gòu)建包含CTL和/或抗體肽和panDR結(jié)合肽的聚合物。當(dāng)所述肽不同時，例如，代表不同的病毒亞型、亞型內(nèi)不同的表位、不同的HLA限制性特異性、或含有T輔助表位的肽的混合物，可以提供具有重復(fù)的單位的雜聚物。除了共價連接外，能夠形成分子間和結(jié)構(gòu)內(nèi)鍵的非共價連接在考慮中。3.綴合物的制備可以通過許多方法將需要的多糖綴合到包括panDR肽序列的多肽上。可以通過酶促或化學(xué)反應(yīng)將多糖連接到本發(fā)明的多糖上。例如，在Hermanson，BIOCONJUGATETECHNIQUES(AcademicPress，1996)；Lockhart，″ConjugateVaccines，″ExpertRev.Vaccines2(5)633-648(2003)中描述了廣泛范圍的連接策略。通過末端或通過賴氨酸的ε-氨基的離子相互作用是可能的。殘基側(cè)面基團(tuán)和抗原決定簇之間的氫鍵也是可能的。在一些實施方案中，多糖/panDR結(jié)合肽綴合物通過間隔分子或連系物而連接。備選地，所述多糖可以無需連系物直接附著到panDR結(jié)合肽上。所述間隔或連系物可以由中性分子組成，諸如，脂肪族碳鏈、氨基酸或氨基酸模擬物，其在生理條件下基本不帶電，并且可以具有線性或有分支的側(cè)鏈。用于連接各種生物分子的許多組合物和方法是為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所知的。將panDR結(jié)合肽共價連接到，例如，碳水化合物表位上的具體方法可以是不同的。例如，適用于連接panDR結(jié)合肽和碳水化合物抗原的方法在WO93/21948中公開。許多連系物是公知的，并且是可以商購獲得的，或在科學(xué)文獻(xiàn)中描述過。示例性的連系物包括，例如，同-或異-雙功能連系物。本發(fā)明所用的連接分子任選地可以是充分的長度，足以允許分子的2部分獨(dú)立地而且自由地同暴露于它們的分子相互作用。在碳水化合物表位的情形下，所述連接分子典型地為1-50個(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49或50個)原子長。例如，所述連接分子可以是芳基乙炔、含有2-14個(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13或14個)單體單位的乙二醇低聚物、二胺、二酸、氨基酸、或其組合。其它適當(dāng)?shù)倪B系物包括脂質(zhì)分子，諸如神經(jīng)酰胺和氨基酸殘基，其中不同的碳水化合物部分通過所述氨基酸的側(cè)鏈連接到所述氨基酸上?？梢曰谄浠瘜W(xué)/物理特性而選擇所用的具體的連接分子。所述連接分子在每端具有適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)，一個基團(tuán)適于附著到碳水化合物部分的反應(yīng)位點(diǎn)上，和另一基團(tuán)適于附著到氨基酸/肽部分。例如，適于附著到碳水化合物部分的基團(tuán)是羧酸、酯、異氰酸鹽、鹵代烷、酰鹵和異硫氰酸鹽。類似的基團(tuán)將用于附著到氨基酸部分。官能團(tuán)的適當(dāng)選擇將取決于氨基酸或肽的反應(yīng)部分的性質(zhì)。應(yīng)用各種可以商購獲得的連系物可以實現(xiàn)間接連接。反應(yīng)末端可以是各種功能性中的任一種，其包括，但不限于氨基活性末端，諸如N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活性酯、酰亞胺酯、醛、環(huán)氧化物、磺酰鹵、異氰酸鹽、異硫氰酸鹽、和硝基芳基鹵；和硫醇活性末端，諸如吡啶基二硫化物、順丁烯二酰亞胺、硫代苯鄰二甲酸亞胺，和活性鹵。在Hermanson，G.T.，BIOCONJUGATETECHNIQUES(AcademicPress，Inc.1996)和thePIERCE(Pierce/Endogen)2001-2002目錄中詳細(xì)討論了交聯(lián)劑和其它生物綴合物。在一些實施方案中，所述多糖被轉(zhuǎn)化成活化的酰肼(例如，在NaHCO3中使用己二酸二酰肼(adipicaciddihydrizde))。然后，通過多肽羧基碳二亞胺介導(dǎo)的縮合反應(yīng)，可以將活化的多糖酰肼綴合到包括pan-DR結(jié)合肽序列的多肽上。另外，一種雙功能連系物，其具有一個與具體的配體上的基團(tuán)反應(yīng)的官能團(tuán)，和與核酸結(jié)合分子反應(yīng)的另一個基團(tuán)，可以用來形成需要的綴合物。異雙功能交聯(lián)劑具有2個不同的活性末端，例如，氨基活性末端和硫羥活性末端，而同雙功能試劑具有2個相似的活性末端，例如，雙馬來酰亞胺己烷(BMH)，其允許含有巰基的化合物交聯(lián)。所述間隔可以是脂肪族或芳香族的。異雙功能試劑包括可商購獲得的活性鹵-NHS活性酯偶聯(lián)劑，諸如N-琥珀酰亞胺基溴乙酸和N-琥珀酰亞胺基(4-碘乙酸基)氨基苯甲酸酯(SIAB)，和磺基琥珀酰亞胺基衍生物，諸如磺基琥珀酰亞胺基(4-碘乙酸基)氨基苯甲酸酯(磺基-SIAB)(Pierce)。另一組偶聯(lián)劑是異雙功能的和硫醇分裂劑，諸如N-琥珀酰亞胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)(N-succinimidyl3-(2-pyridyidithio)propionate)(Pierce)。其它雙功能連系物包括，例如，ABH(對-疊氮苯甲酰肼)；BMPH(N-[b-Maleimidoproprionicacid]hydrazideTFA)，和KMUH(N-[k-馬來酰亞胺基十一烷酸]酰肼，M2C2H(4-[N-馬來酰亞胺基甲基]環(huán)己烷-1-careboxylhydrazideHCl1/2二噁烷)，和MPBH(4-[4-N-馬來酰亞胺基苯基]丁酸酰肼HCl)。異雙功能連系物，諸如馬來酰亞胺-羥基琥珀酰亞胺酯，也可以用作選擇性的連接(參見，例如，美國專利號5,851,527)。馬來酰亞胺-羥基琥珀酰亞胺酯與多肽靶點(diǎn)的反應(yīng)將在蛋白上產(chǎn)生胺基，并且所述衍生物然后可以與，例如，具有游離巰基的目的物反應(yīng)。用于將各種化合物附著到蛋白上的許多其它方法和連系物分子是已知的。參見，例如，歐洲專利申請?zhí)?88,256；美國專利號4,671,958；4,659,839；4,414,148；4,699,784；4,680,338；4,569,789；5,856,571；5,824,805；5,470,997；5,470,843；5,470,932；5,843,937和4,589,071；和Borlinghaus等.CancerRes.474071-4075(1987)?？缮藤彨@得的同雙功能交聯(lián)試劑的實例包括，但不限于，亞胺酸酯類，諸如二甲基己二酰亞胺酸二鹽酸酯(dimethyladipimidatedihydrochloride，DMA)；二甲基庚二酰亞胺酸二鹽酸酯(dimethylpimelimidatedihydrochloride，DMP)；和二甲基辛二酰亞胺酸二鹽酸酯(dimethylsuberimidatedihydrochloride，DMS)。在一組實施方案中，烷基或亞烷基可以用作連接基團(tuán)，并且可以具有1-20個碳原子(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19或20)。例如，可以應(yīng)用包括聚乙二醇和相關(guān)結(jié)構(gòu)的連系物。術(shù)語“聚乙二醇”用來指具有乙二醇重復(fù)單位的那些分子，例如，六乙二醇(HO-(CH2CH2O)5-CH2CH2OH)。當(dāng)術(shù)語“聚乙二醇”用于指連接基團(tuán)時，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解，也可以應(yīng)用其它聚醚或多羥基化合物(即，聚丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物)。在另一組實施方案中，所述烷基或亞烷基連接基團(tuán)將被全氟化，使得它們對生物降解更不敏感。參見，美國專利號5,055,562。示例性的連接基團(tuán)包括氨基己酸、4-羥基丁酸、4-巰基丁酸、3-氨基-1-丙醇、乙醇胺、全氟代乙醇胺、和全氟代羥基丁酸。在一組實施方案中，兩部分通過聚乙二醇部分而連接。在連系物處于panDR結(jié)合肽和其它肽之間(例如，panDR結(jié)合肽和CTL誘導(dǎo)肽)的情形中，所述間隔可以，例如，選自Ala，Gly，或非極性氨基酸或中性極性氨基酸的其它中性間隔。在本文的一些實施方案中，所述中性間隔是Ala。應(yīng)該理解，任選地所述間隔不必要由相同的殘基組成，并且因此可以是雜-或同-低聚物。示例性的間隔可以是Ala的同-低聚物。當(dāng)存在間隔時，所述間隔通常為至少1個或2個殘基，例如，3-6個殘基(即，3，4，5或6個)。在其它實施方案中，所述panDR結(jié)合肽綴合到CTL或抗體誘導(dǎo)肽上，優(yōu)選地使得所述panDR結(jié)合肽位于氨基端。所述肽可以通過中性連系物結(jié)合，諸如Ala-Ala-Ala，等，并且優(yōu)選地還包含脂質(zhì)殘基，諸如棕櫚酸等，其被附著到Lys殘基的α和ε氨基上((PAM)2Lys)，其被附著到所述肽綴合物的氨基端，典型地通過Ser-Ser連接，等。CTL或抗體誘導(dǎo)肽可以直接地或者通過在CTL肽氨基或羧基端的間隔而連接到panDR結(jié)合肽上。所述CTL或抗體誘導(dǎo)肽或者所述panDR結(jié)合肽的氨基端可以被?；Ａ硗?，CTL肽/panDR結(jié)合綴合物可以通過一種或多種連接殘基，諸如Gly，Gly-Gly，Ser，Ser-Ser，如下文所描述的那樣，被連接到某些烷?；?C1-C20)脂質(zhì)上。其它有用的脂質(zhì)部分包括膽固醇、脂肪酸、等。在一些實施方案中，理想地在本發(fā)明的藥物組合物中包括至少一種輔助引發(fā)CTL的成分。已經(jīng)將脂質(zhì)鑒定為能夠在體內(nèi)輔助針對病毒抗原的引發(fā)CTL的制劑。例如，類固醇，諸如膽固醇，脂肪酸，諸如棕櫚酸殘基，可以附著到半胱氨酸殘基的巰基上，Lys殘基的α和ε氨基上，并且然后，例如，通過一種或多種連接殘基，諸如Gly、Gly-Gly-、Ser、Ser-Ser等，連接到免疫原肽上，諸如panDR結(jié)合肽。備選地，代替脂肪酸，長鏈烷基可以通過酯鍵連接到最末氨基酸上(例如，半胱氨酸殘基)。脂質(zhì)化的肽可以以微團(tuán)形式直接注射，結(jié)合到脂質(zhì)體中或在佐劑，例如，不完全弗氏佐劑中乳化而注射。在一些實施方案中，一種特別有效的免疫原包括附著到Lys的α和ε氨基上的棕櫚酸，其通過連接，諸如，Ser-Ser，附著到所述免疫原肽的氨基端。作為CTL應(yīng)答的脂質(zhì)引發(fā)的另一個實例，大腸桿菌(E.coli)脂蛋白，諸如三棕櫚酰-S-甘油基半胱氨酰絲氨酰-絲氨酸(P3CSS)，當(dāng)共價附著到適當(dāng)?shù)碾纳蠒r，可以用來引發(fā)病毒特異的CTL。參見，Deres，等.，Nature342561-564(1989)。例如，可以將本發(fā)明的肽偶聯(lián)到P3CSS上，并且將所述脂蛋白施用給個體，以特異性地引發(fā)針對目標(biāo)抗原的CTL應(yīng)答。此外，由于當(dāng)將P3CSS綴合到展現(xiàn)出適當(dāng)?shù)谋砦坏碾纳蠒r，還可以引發(fā)中和性抗體的誘導(dǎo)，所以可以將這2種組合物組合，以更有效地激發(fā)針對感染的體液和細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答。在panDR結(jié)合肽綴合到碳水化合物表位上的情形中，所述脂質(zhì)部分可以被連接到碳水化合物的相反末端(例如，碳水化合物連接到C端，和脂質(zhì)連接到N端)。備選地，脂質(zhì)和碳水化合物部分都可以連接到所述肽的同一端。例如，這兩部分可以連接到N端的同一連系物上。4.藥物組合物本發(fā)明的化合物，及其藥物和疫苗組合物，可以施用給哺乳動物，特別是人，用于預(yù)防和/或治療目的。本發(fā)明可以用于激發(fā)和/或增強(qiáng)針對多糖或肽免疫原的免疫應(yīng)答。例如，鏈球菌多糖/panDR結(jié)合肽混合物可以用來治療和/或預(yù)防細(xì)菌感染。在一些實施方案中，本發(fā)明的鏈球菌多糖/panDR結(jié)合肽綴合物用于治療和/或預(yù)防中耳感染，肺炎，和與人或其它哺乳動物感染肺炎鏈球菌相關(guān)的腦膜炎。本發(fā)明針對疫苗，所述疫苗含有免疫原性有效量的組合物作為活性成分，所述組合物包括至少一種如本文所討論的本發(fā)明的綴合物。所述疫苗還含有生理學(xué)上耐受的(可接受的)稀釋劑，諸如水、磷酸緩沖鹽、或鹽水，并且還典型地包括佐劑。佐劑，諸如不完全弗氏佐劑，鋁膠Al(OH)3、磷酸鋁、氫氧化鋁、或明礬，是本領(lǐng)域內(nèi)公知的物質(zhì)。并且，如上文所提及的，免疫應(yīng)答可以通過將本發(fā)明的組合物綴合到脂質(zhì)，諸如P3CSS上而引發(fā)。一旦通過注射、氣溶膠、口服、透皮或其它途徑用本文所描述的組合物免疫時，宿主的免疫系統(tǒng)通過產(chǎn)生增強(qiáng)的免疫應(yīng)答，體液的和/或細(xì)胞的，而應(yīng)答。本發(fā)明的疫苗組合物可以施用給易患或另外處于疾病危險中的患者，所述患者包括，例如，2歲以下兒童或老年人(大于65歲)，以激發(fā)和/或增強(qiáng)針對抗原決定簇的免疫應(yīng)答。將這樣的用量定義為“免疫原性有效劑量”，用于治療或預(yù)防應(yīng)用。在這種應(yīng)用中，精確的用量又取決于患者的健康狀況和體重、施用的模式、制劑的性質(zhì)、等，但是通常在每70千克的患者約1.0μg-約5000μg的范圍，更常見地從每70kg體重約10μg-約500μg。在一些實例中，可以必要地將本發(fā)明的組合物與誘導(dǎo)針對其它感染和目的癌癥的中和性抗體應(yīng)答的疫苗組合。當(dāng)應(yīng)用多次施用方案時，存在許多不同的技術(shù)用于免疫的時機(jī)?？赡芏嘤谝淮蔚貞?yīng)用本發(fā)明的組合物，以增加由所免疫的動物表達(dá)的免疫球蛋白全體表達(dá)的水平和多樣性。典型地，如果給予多次免疫，它們應(yīng)該間隔1-2月給予。在治療應(yīng)用中，本發(fā)明施用給已經(jīng)遭受癌癥或感染了目的微生物的個體。處于疾病的潛伏期或急性期的那些患者可以用本發(fā)明獨(dú)立地治療或適當(dāng)?shù)嘏c其它治療聯(lián)合治療。在治療性應(yīng)用中，本發(fā)明的組合物以充分的量施用給患者，所述量足以激發(fā)有效的針對所述微生物或腫瘤抗原的CTL應(yīng)答或體液應(yīng)答，并且足以治愈、或至少部分抑制，癥狀和/或并發(fā)癥。足以實現(xiàn)這一效果的量定義為“治療有效劑量”。有效用于這種應(yīng)用的量將部分取決于所述肽組合物，施用的方式，治療的疾病的階段和嚴(yán)重度，患者的體重和健康的綜合狀態(tài)，以及開處方醫(yī)師的判斷。對于用于治療或預(yù)防性施用的初始免疫，本發(fā)明組合物的治療有效量通常在對于70kg的患者約1.0μg-約10,000μg肽的范圍，經(jīng)常約100μg-約8000μg，并且優(yōu)選地約200μg-約6000μg。這些劑量之后是從約1.0μg-約1000μg肽的增強(qiáng)劑量，按照持續(xù)幾周到幾個月的增強(qiáng)方案，這取決于通過測量具體的免疫應(yīng)答而確定的患者的反應(yīng)和狀況。必須記住，本發(fā)明的組合物通?？梢栽趪?yán)重疾病狀況中應(yīng)用，即，威脅生命或潛在地威脅生命的狀況。在這樣的情形中，考慮到將外源物質(zhì)最弱化，和所述綴合物的相對無毒的性質(zhì)，可能地并且感到有必要通過治療醫(yī)師施用基本上過量的這些組合物。此外，本發(fā)明可以預(yù)防性地應(yīng)用，以預(yù)防和/或改善細(xì)菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生蟲感染和癌癥。有效地用量如上文所描述。另外，疫苗領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員應(yīng)該也知道怎樣適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)或改進(jìn)預(yù)防性治療，例如通過增強(qiáng)并且調(diào)整劑量和給藥方案而實現(xiàn)。治療性施用可以在疾病的最初跡象時開始，或者發(fā)現(xiàn)或手術(shù)移除腫瘤時或者在急性感染病例中診斷之后立即開始。這之后是增強(qiáng)劑量，直到癥狀基本上消除，并且之后持續(xù)一段時間。在慢性感染中，可能需要在初始高劑量之后進(jìn)行增強(qiáng)劑量。用本發(fā)明的組合物治療受感染的個體可以在急性感染個體中加速感染的消退。對于那些易于(或易傾向于)發(fā)展慢性感染的個體，所述組合物在用于防止從急性進(jìn)展成慢性感染的方法中特別有效。例如，在感染之前或過程中確定易受感染的個體時，如本文所述，所述組合物可以針對他們，從而將對更大的人群的施用的需要減到最小。本發(fā)明還可以用于慢性感染的治療，并且在患有潛伏的感染的個體中刺激免疫系統(tǒng)清除被病毒感染的細(xì)胞。在制劑和施用方式中提供一定量的本發(fā)明的組合物是重要的，所述量足以有效地激發(fā)和/或增強(qiáng)免疫應(yīng)答。因此，對于慢性感染的治療，代表性的劑量對于70kg的患者每劑量在約1.0μg-約5000μg范圍內(nèi)，優(yōu)選地約5μg-約1000μg。免疫劑量之后在確定的時間間隔進(jìn)行增強(qiáng)劑量，例如，從1-4周，可能是需要的，延長的時間階段可能有效地免疫個體。在慢性感染的情形中，施用應(yīng)該持續(xù)到至少臨床癥狀或?qū)嶒炇覚z測表明病毒感染已經(jīng)被消除了或基本上被消除了，并且此后再持續(xù)一段時間。用于治療性或預(yù)防性治療的藥物組合物易于用于腸胃外、表面局部(topical，)、口服或局部(local)施用。典型地，所述藥物組合物進(jìn)行腸胃外施用，例如，靜脈內(nèi)、皮下地、皮內(nèi)地、或肌內(nèi)地施用。由于施用的容易性，本發(fā)明的疫苗組合物特別適用于口服施用。因此，本發(fā)明提供用于腸胃外施用的組合物，其包括溶解在或懸浮在可用載體，優(yōu)選地水性載體中的所述肽或綴合物的溶液?？梢詰?yīng)用各種水性載體，例如，水、緩沖的水、0.9％鹽水、0.3％甘氨酸、透明質(zhì)酸等。這些組合物可以通過常規(guī)、公知的殺菌技術(shù)進(jìn)行滅菌，或可以進(jìn)行滅菌過濾。由此獲得的水性溶液可以進(jìn)行包裝以備按照包裝的水性溶液的樣子應(yīng)用，或者進(jìn)行凍干，所述凍干的制劑在施用前與無菌溶液組合。所述組合物可以含有藥用輔助物質(zhì)，所述藥用輔助物質(zhì)需要接近的生理條件，諸如緩沖劑、張力調(diào)節(jié)劑、濕潤劑等，例如，醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、山梨聚糖單月桂酸酯、油酸合三乙醇胺、等。本發(fā)明的組合物在所述藥物制劑中的濃度可以變化很大，即，從低于約0.1重量％，通常在或至少約2重量％到多達(dá)20重量％-50重量％或者更多，并且按照具體的施用模式，主要通過流體體積、粘度等進(jìn)行選擇。本發(fā)明還可以通過脂質(zhì)體進(jìn)行施用，其使得所述綴合物靶向特定的組織，諸如淋巴組織，或選擇性地靶向被感染的細(xì)胞，以及增加所述肽組合物的半衰期。脂質(zhì)體包括乳劑、泡沫、微團(tuán)、不溶性單層、液晶、磷脂分散液、薄層等。在這些制劑中，要被遞送的組合物作為脂質(zhì)體的一部分而結(jié)合，所述制劑單獨(dú)的或與某種分子結(jié)合，例如，所述分子結(jié)合在淋巴細(xì)胞中普通存在的受體。這些分子包括單克隆抗體，其結(jié)合CD45抗原，或者與其它治療或免疫原性組合物一起。因此，可以將充滿了本發(fā)明的需要的組合物的脂質(zhì)體導(dǎo)向淋巴細(xì)胞位點(diǎn)，然后在那里所述脂質(zhì)體遞送所選擇的治療/免疫原性肽組合物。用于本發(fā)明的脂質(zhì)體從標(biāo)準(zhǔn)的小泡形成脂質(zhì)制成，其通常包括中性的和負(fù)電荷的磷脂和固醇，諸如膽固醇。脂質(zhì)的選擇通常通過考慮脂質(zhì)體的大小、酸不穩(wěn)定性和所述脂質(zhì)體在血流中的穩(wěn)定性而指導(dǎo)。許多方法可以用于制備脂質(zhì)體，例如，如在Szoka，等.，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9467(1980)，美國專利號4,235,871，4,501,728，4,837,028，和5,019,369中所描述的那樣，其通過參考結(jié)合在本文中。為了靶向免疫細(xì)胞，結(jié)合到脂質(zhì)體上的配體包括對所需要的免疫系統(tǒng)細(xì)胞的細(xì)胞表面決定簇特異的抗體或其片段。含有本發(fā)明的組合物的脂質(zhì)體混懸液可以進(jìn)行靜脈內(nèi)、局部、表面局部等施用，以特別按照施用的方式、要遞送的組合物、和所治療的疾病的階段而變化的劑量施用。備選地，編碼一種或多種panDR結(jié)合肽，和含有一種或多種CTL表位或抗體誘導(dǎo)表位的多肽的DNA或RNA，可以被引入個體中，以獲得針對所述核酸編碼的多肽的免疫應(yīng)答。Wolff，等.，Science2471465-1468(1990)描述了核酸編碼的多肽的表達(dá)。于固體組合物，可以應(yīng)用常規(guī)無毒的固體載體。這些載體可以包括，例如，藥物級別的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂、等。對于口服施用，藥用無毒組合物，通過將任何通常所用的賦形劑，諸如先前列出的那些載體，和通常10-95％的活性成分，即，一種或多種本發(fā)明的綴合物，并且更優(yōu)選地以25-75％的濃度，相結(jié)合而制備。對于氣溶膠施用，本發(fā)明的組合物優(yōu)選地以連同表面活性劑和推進(jìn)劑的細(xì)粒形式提供。所述組合物典型的百分比是0.01-20重量％，優(yōu)選地1-10％。當(dāng)然，所述表面活性劑必須是無毒的，并且優(yōu)選地可溶于所述推進(jìn)劑。這樣的試劑的典型是含有6-22個碳原子的脂肪酸與脂肪族多羥基醇或其環(huán)酐的酯或偏酯，所述脂肪酸諸如己酸、辛酸、月桂酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、olesteric和油酸?？梢詰?yīng)用混合的酯，諸如混合的或天然的甘油酯。所述表面活性劑可以組成所述組合物的0.1-20重量％，優(yōu)選地0.25-5重量％。所述組合物的余量是常見的推進(jìn)劑。如果需要的話，還可以包括載體，如同卵磷脂一起用于鼻內(nèi)遞送。本發(fā)明的組合物還可以找到作為診斷試劑的用途。例如，本發(fā)明的組合物可以用于確定具體的個體對應(yīng)用抗原決定簇的治療方案的敏感性，并且因此可以有助于改進(jìn)現(xiàn)有的治療流程或為受影響的個體確定預(yù)后。另外，本發(fā)明的組合物還可以用于預(yù)測哪些個體基本上處于發(fā)展慢性感染的危險中。實施例下述實施例通過舉例說明的方式并不是限制的方式提供。生產(chǎn)了實驗的碳水化合物-綴合物疫苗，其由13個氨基酸的通用PanHLA-DR表位和來自血清型14，6B和9V的肺炎鏈球菌被膜多糖組成。簡單的碳二亞胺介導(dǎo)的縮合化學(xué)用于將panDR結(jié)合合成的肽以1∶1的摩爾比與3種化學(xué)上不同的被膜多糖綴合。所述綴合物疫苗panDR結(jié)合肽成分的免疫原性通過在C57BL/6小鼠免疫后誘導(dǎo)panDR結(jié)合肽特異性的CD4+輔助T細(xì)胞(HTL)應(yīng)答而證實。應(yīng)用完全弗氏佐劑和鋁膠Al(OH)3制劑，誘導(dǎo)對肺炎鏈球菌血清型14，6B和9V特異的高滴度抗體應(yīng)答。所述HTL，或載體，panDR結(jié)合合成肽的作用只有在應(yīng)用panDR結(jié)合肽-多糖綴合物時是明顯的；panDR結(jié)合肽和多糖的簡單混合物基本上是沒有免疫原性的。多糖特異性抗體的功能性或潛在的保護(hù)性價值作為對于6B血清型的調(diào)理噬菌細(xì)胞(opsonophagocytic)活性的函數(shù)而測量。在來自用含有2種佐劑的制劑免疫的小鼠血清中，測定高滴度的調(diào)理噬菌細(xì)胞活性。這些數(shù)據(jù)表明，panDR結(jié)合合成肽可以誘導(dǎo)HTL應(yīng)答，支持對綴合物疫苗中所用的細(xì)菌碳水化合物特異的抗體的發(fā)展需要所述HTL應(yīng)答。這些實驗的詳情在下文中提供。方法和材料PanDR結(jié)合肽合成和肺炎鏈球菌多糖的綴合將panDR結(jié)合肽設(shè)計成以中高親和力結(jié)合最常見的HLA-DR等位基因產(chǎn)物，以表位的帶電的或大的氨基酸作為T細(xì)胞受體(TCR)接觸點(diǎn)(AlexanderJ，等.Immunity1(9)751-61(1994)；AlexanderJ，等.，JImmunol164(3)1625-33(2000))。panDR結(jié)合肽結(jié)合鼠I-Ab分子，并且在C57BL/6小鼠中是免疫原性的；這使得在可能在充分表征的動物模型種類中評估綴合物疫苗的體內(nèi)免疫原性。所述panDR結(jié)合合成肽，其具有AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)的序列，其中X＝環(huán)己丙氨酸，是應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)F-moc固相合成方法(RuppertJ，等.Cell74(5)929-37(1993))而合成的。通過反相高壓液相色譜，將panDR結(jié)合肽純化到＞95％的同質(zhì)性，并且通過質(zhì)譜進(jìn)行特性分析。來自血清型6B，9V和14的被膜多糖制劑(mwave，15,000)從美國典型培養(yǎng)物收藏中心(Rockville，MD)作為凍干的粉劑獲得。將單個的被膜多糖制劑溶解于蒸餾H2O中，濃度為9mg/ml，并且用1mg的溴化氰(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)在pH10.5和4℃活化6min。用0.2MHCl將pH調(diào)整到8.5后，將在NaHCO3(0.5M)中的己二酸二酰肼溶液添加到反應(yīng)混合物中，以獲得0.3M的碳水化合物終濃度。允許反應(yīng)在8℃攪拌時進(jìn)行過夜，并且將所述物質(zhì)透析到0.2MNaCl中，持續(xù)24h。將所述溶液凍干，并且將所獲得的固體溶解在蒸餾H2O中，并在用蒸餾H2O平衡的BioradBio-gelP2柱(BioradHercules，CA)上脫鹽處理。將含有顯著量的多糖的級分收集到一起并且凍干。通過碳二亞胺介導(dǎo)的縮合反應(yīng)，應(yīng)用1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亞胺(EDC)(Sigma)，將panDR結(jié)合肽偶聯(lián)到上述活化的被膜多糖酰肼上。將panDR結(jié)合合成肽(7.4μmol/ml)和活化的碳水化合物(7μmol/ml)在H2O中混合，并且用0.2MHCl將pH調(diào)整到4.9。添加固體EDC至終濃度0.1M，并且將所述混合物在4℃攪拌3h。接著將反應(yīng)環(huán)境在0.2MNaCl中過夜透析(mw截留，4,500)，接著進(jìn)行第二次水中透析的步驟，并且隨后將所述透析液凍干。應(yīng)用用0.2MNaCl平衡的CL-6B瓊脂糖柱(3×100cm)，通過層析，將這些綴合的物質(zhì)同未結(jié)合的panDR肽分離。檢測柱洗脫液的碳水化合物和蛋白含量，對于碳水化合物應(yīng)用Schiff檢測，和對于panDR結(jié)合肽含量應(yīng)用MicroBCA蛋白檢測試劑試劑盒(PierceRockford，IL)。佐劑制劑和免疫應(yīng)用沒有佐劑的制劑和基于完全和不完全弗氏佐劑(CFA/IFA)的制劑，評估疫苗制劑的免疫原性。將8-10周齡的3只C57BL/6小鼠組(JacksonLaboratories，BarHarborME)，用配制在100μl體積的CFA中的50，5或0.5μg的實驗疫苗在尾巴底部進(jìn)行皮下免疫，并且在4wk后施用在IFA中的增強(qiáng)劑量。在初次免疫后4wk和增強(qiáng)免疫后2wk對小鼠采血。應(yīng)用50μg未綴合的被膜多糖的免疫用來記錄這些物質(zhì)的基線免疫原性。鋁膠Al(OH)3(SuperfosBiosector，Vedback，Denmark)用作適用于人的疫苗佐劑的典型代表。將50,5和0.5μg的實驗疫苗劑量分別吸附到250μg的Al(OH)3中，并且用于免疫小鼠。疫苗以100μl體積在尾巴底部通過皮下注射施用，3-4wk時間間隔進(jìn)行2或3次。在免疫前和每月的時間間隔，通過尾靜脈采血獲得血液樣品。在CD4+-特異的ELISPOT測定的情形中，將panDR結(jié)合肽-Ps9V綴合物在CFA中乳化，并且用100μl在尾巴底部對小鼠進(jìn)行皮下免疫(最終100μg/小鼠)。所述panDR結(jié)合肽表位(最終10μg/小鼠)和Ps9V(最終50μg/小鼠)對照相似地制備，并且用來免疫小鼠。免疫后11-14天，將小鼠處死，并且純化脾細(xì)胞用于ELISPOT測定。所有的流程以與NationalInstitutesofHealth指導(dǎo)方針一致的方式，應(yīng)用InstitutionalAnimalCareandUseCommittee核準(zhǔn)的動物方案而完成。免疫應(yīng)答的測定應(yīng)用ELISPOT檢測來測定由CD4+淋病細(xì)胞應(yīng)答所述panDR結(jié)合肽而產(chǎn)生的干擾素-γ(IFN-γ)(TangriS，等.JExpMed194(6)833-46(2001))。應(yīng)用HCV核心28表位(GQIVGGVYLLPRRGPR(SEQIDNO7)和來自免疫小鼠的脾細(xì)胞測定應(yīng)答，并且未免疫小鼠針對panDR結(jié)合肽的應(yīng)答用來建立背景值。t-檢驗用來確定三重檢驗方式之間差異的顯著性。通過ELISA測定對鏈球菌多糖特異的抗體(YuX，等.ClinicalandDiagnosticLaboratoryImmunology6(4)519-24(1999))。測定了全抗體水平和同種型特異性應(yīng)答。對6B血清型(毒株DS2212)特異的調(diào)理噬菌細(xì)胞殺死檢測被用來評估與保護(hù)活性相關(guān)的抗體功能(NahmMH，等.Vaccine18(24)2768-71(2000))。結(jié)果panDR結(jié)合肽在實驗肺炎鏈球菌被膜多糖綴合物疫苗中的免疫原性綴合到肺炎鏈球菌被膜多糖上后所述panDR結(jié)合肽的完整性作為免疫原性的函數(shù)進(jìn)行評估。來自用在CFA/IFA中乳化的panDR結(jié)合肽-Ps9V綴合物免疫的小鼠的CD4+淋巴細(xì)胞特異性地并且有力地應(yīng)答所述綴合物疫苗和所述panDR結(jié)合肽。這些數(shù)據(jù)支持這樣的結(jié)論，即，在應(yīng)用己二酸二酰肼化學(xué)綴合到肺炎鏈球菌被膜多糖上之后，所述panDR結(jié)合肽是有功能的。針對panDR結(jié)合肽-肺炎鏈球菌多糖綴合物疫苗的抗體應(yīng)答應(yīng)用基于CFA/IFA的制劑，首次記錄了所述panDR結(jié)合肽-多糖綴合物疫苗的免疫原性。未綴合的多糖只有極少的免疫原性，而所述綴合物形式證明是有效的免疫原。所述產(chǎn)物的效力不同，血清型14是最多免疫原性的，和血清型9是最少免疫原性的。還在與人體應(yīng)用相容的制劑中，特別是PBS或Al(OH)3中，評估實驗疫苗。在吸附到Al(OH)3或在PBS中施用時，血清型14的產(chǎn)物免疫原性相等，而血清型6B和9V的產(chǎn)物在Al(OH)3制劑中更有免疫原性。這些數(shù)據(jù)清楚地表明與所述多糖同所述panDR結(jié)合肽綴合相關(guān)的免疫原性的增加，及其與可以用于人體疫苗產(chǎn)物的制劑形式的相容性。對于疫苗載體效果，對panDR結(jié)合肽與多糖的綴合的要求將panDR結(jié)合肽和游離的碳水化合物吸附到Al(OH)3上。將相同的多糖的綴合形式混合，吸附到Al(OH)3上并且用作比較免疫原。直到未綴合的panDR結(jié)合肽和多糖3次免疫后才檢測到對所述多糖特異的抗體，具有相對低的滴度，在200-1,000范圍內(nèi)。相反，應(yīng)用相同劑量的綴合到panDR結(jié)合肽上并且吸附到Al(OH)3上的多糖，誘導(dǎo)了高滴度的多糖特異性抗體應(yīng)答。這些數(shù)據(jù)證明了對于所述panDR結(jié)合肽和多糖的綴合的完全需要，所述panDR結(jié)合肽為所述免疫原的載體成分，所述多糖為B淋巴細(xì)胞表位成分。還要注意到，所述多糖-panDR結(jié)合肽綴合物免疫原，以多價形式施用，同當(dāng)單獨(dú)施用時免疫原性相等；它們沒有以任何顯著的程度相互干涉或競爭。抗體同種型和功能在不存在佐劑時，所述實驗綴合物疫苗誘導(dǎo)占優(yōu)勢的IgG1(37-82％)，具有分別由panDR結(jié)合肽-Ps6B和panDR結(jié)合肽-Ps9V誘導(dǎo)的IgM(44和58％)的顯著貢獻(xiàn)。將所述疫苗吸附到Al(OH)3上也導(dǎo)致IgG1作為所觀察到的主要同種型應(yīng)答。唯一的例外是高度免疫原性的panDR結(jié)合肽-Ps14，其誘導(dǎo)顯著量的IgG2b和IgG3，分別為總量的10.6％和6.8％。在CFA/IFA中乳化的實驗疫苗的遞送增加了相對量的IgG2b(7.2-25.2％)和IgG3(2.0-8.3％)。因此，IgG1是所產(chǎn)生的主要抗體同種型，但是有效的CFA/IFA佐劑的應(yīng)用改變了應(yīng)答。在應(yīng)答免疫中產(chǎn)生的抗體同種型提供了潛在的疫苗功效。對于抗肺炎鏈球菌保護(hù)，其中需要噬菌作用和殺傷作用的增加，IgG1應(yīng)該是適當(dāng)?shù)耐N型。為了直接評估這一結(jié)論，在存在來自接種小鼠的血清稀釋物時，我們通過粒細(xì)胞測定了肺炎鏈球菌毒株6B的噬菌作用和殺傷作用，并且應(yīng)用常規(guī)的調(diào)理噬菌作用檢測補(bǔ)充。調(diào)理性滴度與全抗體滴度相關(guān)；在來自用未綴合的Ps6B免疫的小鼠血清中，它們是最低的，但是當(dāng)應(yīng)用實驗綴合物疫苗時，它們顯著地增加了。一個有趣的觀察是，Al(OH)3證明是更好適用的佐劑，其比CFA/IFA誘導(dǎo)顯著更高的調(diào)理性滴度。這些數(shù)據(jù)表明，由用PADRE-Ps6B免疫誘導(dǎo)的抗體是有功能的，并且在體內(nèi)是有保護(hù)性的。提供上述實施例舉例說明本發(fā)明，但不是限制其范圍。本發(fā)明的其它變化對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員是顯而易見的，并且包含在附上的權(quán)利要求中。本文所引用的所有的出版物、專利、和專利申請通過參考結(jié)合于此。序列表<110>J.L.亞歷山大A.塞特M.J.紐曼Epimmune，Inc.<120>誘導(dǎo)針對肺炎鏈球菌多糖的免疫應(yīng)答<130>018623-016710PC<140>WOPCT/US05/19467<141>2005-06-03<150>US60/577,103<151>2004-06-04<160>171<170>用于Windows版本4.0的FastSEQ<210>1<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>1AlaAlaPheAlaAlaAlaLysThrAlaAlaAlaAlaAla1510<210>2<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>2AlaAlaPheAlaAlaAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>3<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>3AlaAlaPheValAlaAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>4<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>4AlaAlaPheIleAlaAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>5<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>5AlaLysXaaValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>6<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>6AlaLysPheValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>7<211>16<212>PRT<213>人工序列<220><223>HCV核心28表位<400>7GlyGlnIleValGlyGlyValTyrLeuLeuProArgArgGlyProArg151015<210>8<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>panDR結(jié)合肽<223><221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>8AlaLysXaaValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>9<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>9AlaLysPheValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>10<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>10AlaGluXaaAlaAlaAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>11<400>11000<210>12<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>12AlaGlnXaaAlaAlaAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>13<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<22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jié)合肽<400>135AlaArgPheValArgAlaAsnThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>136<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>136AlaLysPheValLysAlaHisThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>137<400>137000<210>138<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>138AlaLysPheValAlaAlaAsnThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>139<400>139000<210>140<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>140AlaLysPheValAlaAlaTyrThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>141<400>141000<210>142<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>142AlaLysPheValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>143<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>143AlaLysPheValAlaAlaLysThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>144<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>144AlaLysPheValAlaAlaHisThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>145<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>145AlaLysPheValAlaAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>146<211>16<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<400>146LysSerSerAlaLysPheValMetAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla151015<210>147<211>14<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝任何氨基酸<221>MOD_RES<222>(2)...(2)<223>Xaa＝Ala或Lys<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸環(huán)己酯<221>MOD_RES<222>(4)...(6)<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val<221>MOD_RES<222>(7)...(7)<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val，位置7的Xaa可以存在或不存在<221>MOD_RES<222>(11)...(12)<223>Xaa＝Ala，Ser或Val<221>MOD_RES<222>(13)...(14)<223>Xaa＝Ala，Ser或Val，位置13和14的Xaa可以存在或不存在<400>147XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaThrLeuLysXaaXaaXaaXaa1510<210>148<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝任何氨基酸<221>MOD_RES<222>(2)...(2)<223>Xaa＝Ala或Lys<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸環(huán)己酯<221>MOD_RES<222>(4)...(6)<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val<221>MOD_RES<222>(7)...(7)<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val，位置7的Xaa可以存在或不存在<221>MOD_RES<222>(10)...(11)<223>Xaa＝Ala，Ser或Val<221>MOD_RES<222>(12)...(13)<223>Xaa＝Ala，Ser或Val，位置13和14的Xaa可以存在或不存在<400>148XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaLysThrXaaXaaXaaXaa1510<210>149<211>15<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝任何氨基酸<221>MOD_RES<222>(2)...(2)<223>Xaa＝Ala或Lys<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸環(huán)己酯<221>MOD_RES<222>(4)...(6)<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val<221>MOD_RES<222>(7)...(7)<223>Xaa＝Ala，Ile，Ser，Glu或Val，位置7的Xaa可以存在或不存在<221>MOD_RES<222>(12)...(13)<223>Xaa＝Ala，Ser或Val<221>MOD_RES<222>(14)...(15)<223>Xaa＝Ala，Ser或Val，位置13和14的Xaa可以存在或不存在<400>149XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaTrpThrLeuLysXaaXaaXaaXaa151015<210>150<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>在panDR結(jié)合肽式R1-R2-R3-R4-R5中的任選的R4<400>150TrpThrLeuLys1<210>151<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>151AlaAlaXaaAlaAlaAlaLysThrAlaAlaAlaAlaAla1510<210>152<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>152AlaAlaXaaAlaAlaAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>153<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>153AlaAlaXaaValAlaAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>154<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>154AlaAlaXaaIleAlaAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>155<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(1)...(2)<223>Xaa＝任何氨基酸<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸環(huán)己酯<221>MOD_RES<222>(4)...(6)<223>Xaa＝任何氨基酸<221>MOD_RES<222>(7)...(8)<223>Xaa＝任何氨基酸，位置7和8的Xaa可以存在或不存在<221>MOD_RES<222>(12)...(13)<223>Xaa＝任何氨基酸<400>155XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaThrLeuLysXaaXaa1510<210>156<211>12<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(1)...(2)<223>Xaa＝任何氨基酸<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸環(huán)己酯<221>MOD_RES<222>(4)...(6)<223>Xaa＝任何氨基酸<221>MOD_RES<222>(7)...(8)<223>Xaa＝任何氨基酸，位置7和8的Xaa可以存在或不存在<221>MOD_RES<222>(11)...(12)<223>Xaa＝任何氨基酸<400>156XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaLysThrXaaXaa1510<210>157<211>14<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(1)...(2)<223>Xaa＝任何氨基酸<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝Tyr，Phe或丙氨酸環(huán)己酯<221>MOD_RES<222>(4)...(6)<223>Xaa＝任何氨基酸<221>MOD_RES<222>(7)...(8)<223>Xaa＝任何氨基酸，位置7和8的Xaa可以存在或不存在<221>MOD_RES<222>(13)...(14)<223>Xaa＝任何氨基酸<400>157XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaTrpThrLeuLysXaaXaa1510<210>158<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>panDR結(jié)合肽<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>158AlaLysXaaAlaAlaAlaAlaThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>159<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖6B/panDR結(jié)合肽序列SEQIDNO6綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖6B上<400>159XaaLysPheValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>160<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖4/panDR結(jié)合肽SEQIDNO6綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖4上<400>160XaaLysPheValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>161<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖9V/panDR結(jié)合肽SEQIDNO6綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖9V上<400>161XaaLysPheValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>162<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖14/panDR結(jié)合肽SEQIDNO6綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖14上<400>162XaaLysPheValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>163<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖18C/panDR結(jié)合肽SEQIDNO6綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖18C上<400>163XaaLysPheValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>164<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖19F/panDR結(jié)合肽SEQIDNO6綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖19F上<400>164XaaLysPheValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>165<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖23F/panDR結(jié)合肽SEQIDNO6綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖23F上<400>165XaaLysPheValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>166<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖4/panDR結(jié)合肽SEQIDNO5綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖4上<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>166XaaLysXaaValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>167<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖9V/panDR結(jié)合肽SEQIDNO5綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖9V上<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>167XaaLysXaaValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>168<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖14/panDR結(jié)合肽SEQIDNO5綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖14上<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>168XaaLysXaaValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>169<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖18C/panDR結(jié)合肽SEQIDNO5綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖18C上<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>169XaaLysXaaValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaA1a1510<210>170<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖19F/panDR結(jié)合肽SEQIDNO5綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖19F上<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>170XaaLysXaaValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510<210>171<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>肺炎鏈球菌多糖23F/panDR結(jié)合肽SEQIDNO5綴合物<221>MOD_RES<222>(1)...(1)<223>Xaa＝Ala，其綴合到肺炎鏈球菌多糖23F上<221>MOD_RES<222>(3)...(3)<223>Xaa＝丙氨酸環(huán)己酯<400>171XaaLysXaaValAlaAlaTrpThrLeuLysAlaAlaAla1510權(quán)利要求1.一種組合物，其包括來自不同的肺炎鏈球菌血清型的至少2種肺炎鏈球菌被膜多糖的混合物，其中來自每種血清型的所述被膜多糖綴合到獨(dú)立的多肽上，所述多肽包括panDR結(jié)合肽序列，所述panDR結(jié)合肽序列獨(dú)立地選自式R1-R2-R3-R4-R5，其中R1是兩個氨基酸，其中在后的氨基酸為丙氨酸或賴氨酸；R2是選自由酪氨酸、苯丙氨酸或環(huán)己丙氨酸組成的組；R3是3或4個氨基酸，其中每個氨基酸獨(dú)立地選自由丙氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、谷氨酸和纈氨酸組成的組；R4是選自由蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸、賴氨酸-蘇氨酸、或色氨酸-蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸組成的組；和，R5由由2-4個氨基酸組成的前面部分和由單獨(dú)氨基酸組成的后面部分組成，其中所述2-4個氨基酸中的每個獨(dú)立地選自由丙氨酸、絲氨酸和纈氨酸組成的組。2.權(quán)利要求1的組合物，其包括來自下述血清型的至少任意5種的被膜多糖1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，33F，6A，7A，7B，7C，9A，9L，12A，13，15A，15C，16F，18A，18B，18F，19B，19C，21，22A，23A，23B，24F，25，27，29，31，34，35，38，45，或46，其中每種多糖綴合到包括panDR結(jié)合肽序列的獨(dú)立的多肽上。3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述被膜多糖從每種血清型的細(xì)菌純化而來并且綴合到所述多肽上。4.權(quán)利要求3的組合物，其中來自每種血清型的被膜多糖獨(dú)立地綴合到包括panDR肽的多肽上，并且隨后將由此獲得的綴合物組合以形成綴合物的混合物。5.權(quán)利要求3的組合物，其中來自每種血清型的被膜多糖組合形成多糖的混合物，并且隨后將所述混合物綴合到包括panDR結(jié)合肽的多肽上。6.權(quán)利要求1的組合物，其中包括panDR結(jié)合肽的多肽包括氨基酸序列AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)，aKXVAAWTLKAAa，AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)，或aKFVAAWTLKAAa，其中X是環(huán)己丙氨酸。7.一種制備肺炎鏈球菌疫苗的方法，所述方法包括，將來自不同的肺炎鏈球菌血清型的至少2種肺炎鏈球菌被膜多糖綴合到2種獨(dú)立的多肽上，每種多肽包括panDR結(jié)合肽序列，所述panDR結(jié)合肽序列選自式R1-R2-R3-R4-R5，其中R1是兩個氨基酸，其中在后的氨基酸為丙氨酸或賴氨酸；R2是選自由酪氨酸、苯丙氨酸或環(huán)己丙氨酸組成的組；R3是3或4個氨基酸，其中每個氨基酸獨(dú)立地選自由丙氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、谷氨酸和纈氨酸組成的組；R4是選自由蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸、賴氨酸-蘇氨酸、或色氨酸-蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸組成的組；和，R5由由2-4個氨基酸組成的前面部分和由單獨(dú)氨基酸組成的后面部分組成，其中所述2-4個氨基酸中的每個獨(dú)立地選自由丙氨酸、絲氨酸和纈氨酸組成的組。8.權(quán)利要求7的方法，其包括來自下述血清型的至少任意5種的被膜多糖1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，33F，6A，7A，7B，7C，9A，9L，12A，13，15A，15C，16F，18A，18B，18F，19B，19C，21，22A，23A，23B，24F，25，27，29，31，34，35，38，45，或46，其中每種多糖綴合到包括panDR結(jié)合肽序列的獨(dú)立的多肽上。9.權(quán)利要求7的方法，其中來自每種血清型的所述被膜多糖獨(dú)立地綴合到包括panDR結(jié)合肽的多肽上，并且隨后將由此獲得的綴合物組合以形成綴合物的混合物。10.權(quán)利要求7的方法，其中來自每種血清型的被膜多糖組合形成多糖的混合物，并且隨后將所述混合物綴合到包括panDR結(jié)合肽的多肽上。11.權(quán)利要求7的方法，其中每種所述多肽包括氨基酸序列AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)，aKXVAAWTLKAAa，AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)，或aKFVAAWTLKAAa，其中X是環(huán)己丙氨酸。12.一種在哺乳動物中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括，給所述哺乳動物施用來自不同的肺炎鏈球菌血清型的至少2種肺炎鏈球菌被膜多糖的混合物，其中來自每種血清型的所述被膜多糖綴合到獨(dú)立的panDR結(jié)合肽序列上，所述panDR結(jié)合肽序列選自式R1-R2-R3-R4-R5，其中R1是兩個氨基酸，其中在后的氨基酸為丙氨酸或賴氨酸；R2是選自由酪氨酸、苯丙氨酸或環(huán)己丙氨酸組成的組；R3是3或4個氨基酸，其中每個氨基酸獨(dú)立地選自由丙氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、谷氨酸和纈氨酸組成的組；R4是選自由蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸、賴氨酸-蘇氨酸、或色氨酸-蘇氨酸-亮氨酸-賴氨酸組成的組；和，R5由由2-4個氨基酸組成的前面部分和由單獨(dú)氨基酸組成的后面部分組成，其中所述2-4個氨基酸中的每個獨(dú)立地選自由丙氨酸、絲氨酸和纈氨酸組成的組。13.權(quán)利要求12的方法，其包括來自下述血清型的至少任意5種的被膜多糖1，2，3，4，5，6B，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15B，17F，18C，19A，19F，20，22F，23F，33F，6A，7A，7B，7C，9A，9L，12A，13，15A，15C，16F，18A，18B，18F，19B，19C，21，22A，23A，23B，24F，25，27，29，31，34，35，38，45，或46，其中每種多糖綴合到包括panDR結(jié)合肽序列的獨(dú)立的多肽上。14.權(quán)利要求12的方法，其中所述被膜多糖從適當(dāng)?shù)难逍偷募?xì)菌純化而來，并且綴合到所述多肽上。15.權(quán)利要求12的方法，其中來自每種血清型的被膜多糖獨(dú)立地綴合到包括panDR結(jié)合肽的多肽上，并且隨后將由此獲得的綴合物組合以形成綴合物的混合物。16.權(quán)利要求12的方法，其中來自每種血清型的被膜多糖組合形成多糖的混合物，并且隨后將所述混合物綴合到包括panDR結(jié)合肽的多肽上。17.權(quán)利要求12的方法，其中包括panDR結(jié)合肽的多肽包括氨基酸序列AKXVAAWTLKAAA(SEQIDNO5)，aKXVAAWTLKAAa，AKFVAAWTLKAAA(SEQIDNO6)，或aKFVAAWTLKAAa，其中X是環(huán)己丙氨酸。全文摘要本發(fā)明提供panDR結(jié)合肽與肺炎鏈球菌多糖的綴合物，和使用這樣的綴合物預(yù)防和治療與肺炎鏈球菌相關(guān)的疾病的方法。文檔編號C07K4/00GK1993141SQ200580025786公開日2007年7月4日申請日期2005年6月3日優(yōu)先權(quán)日2004年6月4日發(fā)明者J·L·亞歷山大,A·塞特,M·J·紐曼申請人:法麥克薩有限公司