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      治療RNA-依賴性RNA病毒感染的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷的制作方法

      文檔序號(hào):3475921閱讀:426來源:國(guó)知局
      專利名稱:治療RNA-依賴性RNA病毒感染的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及作為RNA-依賴性RNA病毒聚合酶抑制劑的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物及其某些衍生物,它們的合成和它們的用途。本發(fā)明的化合物是RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制的抑制劑并且可用于治療RNA-依賴性RNA病毒病毒感染。特別地,它們可用作丙型肝炎病毒(HCV)NS5B聚合酶的抑制劑,用作HCV復(fù)制的抑制劑和用于治療丙型肝炎病毒感染。
      本發(fā)明的背景綜述治療HCV感染的現(xiàn)有技術(shù)水平在很多受感染的個(gè)體中丙型肝炎病毒(HCV)是導(dǎo)致慢性肝病,例如肝硬化和肝細(xì)胞癌的主要健康問題,估計(jì)受感染的個(gè)體為世界人口的2-15%。根據(jù)美國(guó)疾病控制中心的估計(jì)單在美國(guó)就有3900000人受到感染,大約是感染人類免疫缺陷性病毒(HIV)的五倍。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的估計(jì),全世界有超過1700,000,000的人受到感染,每年有3百萬到4百萬人受到感染。一旦被感染,大約20%的人可以清除病毒,而其余的人此后將終身攜帶HCV。10%至20%的慢性感染個(gè)體最終會(huì)發(fā)展成肝臟破壞的肝硬化或癌癥。該病毒病可通過被污染的血液和血液制品,被污染的針經(jīng)腸胃外途徑傳染,或經(jīng)性傳染和由受感染的母親或?yàn)閿y帶者的母親垂直傳染給她們的后代。當(dāng)前的HCV感染治療,僅限于單獨(dú)使用重組干擾素-α或?qū)⑵渑c核苷類似物利巴韋林聯(lián)合的免疫治療,其臨床益處有限。而且,還沒有確定的HCV疫苗。因此,急需能夠有效對(duì)抗慢性HCV感染的改善的治療劑。已經(jīng)對(duì)治療HCV感染的技術(shù)狀態(tài)進(jìn)行了綜述,可參考以下出版物B.Dymock,等.,″Novel approaches to the treatment ofhepatitis C virus infection,″Antiviral Chemistry &amp; Chemotherapy.1179-96(2000);H.Rosen,等.,″Hepatitis C viruscurrent understandingand prospects for future therapies,″Molecular Medicine Today.5393-399(1999);D.Moradpour,等.,″Current and evolving therapies forhepatitis C,″European J.Gastroenterol.Hepatol.,111189-1202(1999);R.Bartenschlager,″Candidate Targets for Hepatitis C Virus-SpecificAntiviral Therapy,″Intervirology.40378-393(1997);G.M.Lauer和B.D.Walker,″Hepatitis C Virus Infection,″N.Engl.J.Med..34541-52(2001);B.W.Dymock,″Emerging therapies for hepatitis C Virusinfection,″Emerging Drugs.613-42(2001);和C.Crabb,″Hard-WonAdvances Spark Excitement about Hepatitis C,″Science506-507(2001);將其全部?jī)?nèi)容完整引入本文作為參考。
      已經(jīng)采用不同的途徑治療HCV,包括抑制病毒的絲氨酸蛋白酶(NS3蛋白酶),解旋酶,和RNA-依賴性RNA聚合酶(NS5B),和開發(fā)疫苗。
      HCV病毒體是有包膜的正鏈RNA病毒,所具有的單個(gè)寡核糖核苷酸基因組序列有大約9600個(gè)堿基,能夠編碼具有大約3,010氨基酸的多蛋白。HCV基因的蛋白產(chǎn)物由結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)C,E1和E2與非結(jié)構(gòu)蛋白NS2,NS3,NS4,NS4B,NS5a和NS5B組成。認(rèn)為非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白質(zhì)為病毒復(fù)制提供催化手段(catalytic machinery)。NS3蛋白酶由多蛋白鏈釋放NS5B,其為RNA-依賴性RNA聚合酶。由在HCV復(fù)制循環(huán)中作為模板的單鏈病毒RNA合成雙鏈RNA需要HCV NS5B聚合酶。因此在HCV復(fù)制復(fù)合體中認(rèn)為NS5B聚合酶是必要組分。[參見K.Ishi,等.,″Expression of Hepatitis C Virus NS5B ProteinCharacterization of Its RNA Polymerase Activity and RNA Binding,″Hepatology,291227-1235(1999)和V.Lohmann,等.,″Biochemical andKinetic Analyses of NS5B RNA-Dependent RNA Polymerase of theHepatitis C Virus,″Viroloey.249108-118(1998)].抑制HCV NS5B聚合酶可防止形成雙鏈HCV RNA,因此,構(gòu)成開發(fā)HCV特異性抗病毒治療的頗具吸引力的途徑。
      已經(jīng)對(duì)潛在可治療HCV感染的HCV NS5B抑制劑的發(fā)展進(jìn)行了綜述,參見M.P.Walker等.″Promising candidates for the treatment ofchronic hepatitis C,″Expert Opin.Invest.Drugs.121269-1280(2003);P.Hoffmann等.,″Recent patents on experimental therapy for hepatitisC virus infection(1999-2002),″Expert Opin.Ther.Patents,″131707-1723(2003);和V.Brass,等,″Recent developments in targetidentification against HCV,″Expert Opin.Ther.Targets,″8295-307(2004).A.E.Eldrup等在″Structure-Activity Relationship of PurineRibonucleosides for Inhibition of HCV RNA-Dependent RNAPolymerase,″J.Med.Chem..472283-2295(2004)中報(bào)道了通過嘌呤核糖核苷抑制HCV復(fù)制。持續(xù)需要作為HCV聚合酶抑制劑的結(jié)構(gòu)不同的核苷衍生物作為HCV治療的治療途徑美國(guó)專利第6,777,396(2004年8月17日出版)公開了作為HCVNS5B聚合酶抑制劑用于治療HCV感染的一系列新結(jié)構(gòu)的吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷衍生物。D.B.Olsen等在″A 7-Deaza-Adenosine Analog is aPotent and Selective Inhibitor of HCV Replication with ExcellentPharmacokinetic Properties,″Antimicrob.Agents Chemother..483944-3953(2004)中和A.E.Eldrup,等在″Structure-ActivityRelationship of Heterobase-Modified 2′-C-Methyl Ribonucleosides asInhibitors of Hepatitis C Virus RNA Replication,″J.Med.Chem.,475284-5297(2004).對(duì)此類化合物的生物學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了描述?,F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)在吡咯并[2,3-d]嘧啶核的C-5的位置引入氟提供的核苷衍生物是具有優(yōu)良藥動(dòng)學(xué)性質(zhì),例如更好分布于肝臟的更為有效的HCV RNA復(fù)制抑制劑。
      因此,本發(fā)明的一個(gè)目的是提供用作RNA-依賴性RNA病毒聚合酶抑制劑,特別是HCV NS5B聚合酶抑制劑的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物和其某些衍生物。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用作RNA-依賴性RNA病毒聚合酶抑制劑,特別是丙型肝炎病毒復(fù)制抑制劑的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物和其某些衍生物。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于治療RNA-依賴性RNA病毒感染,特別是HCV感染的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物和其某些衍生物。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供包括與藥學(xué)上可接受的載體聯(lián)合的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物的藥物組合物。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供包括用作RNA-依賴性RNA病毒聚合酶抑制劑,特別是HCV NS5B聚合酶抑制劑的本發(fā)明的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物和其某些衍生物的藥物組合物。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供包括用作RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制的抑制劑,特別是HCV復(fù)制抑制劑的本發(fā)明的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物和其某些衍生物的藥物組合物。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供包括用于治療RNA-依賴性RNA病毒感染,特別是HCV感染的本發(fā)明的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物和其某些衍生物的藥物組合物。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是包括與其它抗RNA-依賴性RNA病毒,特別是抗HCV的活性劑聯(lián)合的本發(fā)明的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物和其某些衍生物的藥物組合物。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供抑制RNA-依賴性RNA病毒聚合酶,特別是HCV NS5B聚合酶的方法。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供抑制RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制,特別是抑制HCV復(fù)制的方法。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供治療RNA-依賴性RNA病毒感染,特別是治療HCV感染的方法。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供與其它抗RNA-依賴性RNA病毒聯(lián)合治療RNA-依賴性RNA病毒,感染,特別是與其它抗HCV的活性劑聯(lián)合治療HCV感染的方法。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是用作抑制RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制和/或治療RNA-依賴性RNA病毒感染,特別是抑制HCV復(fù)制和/或治療HCV感染的藥物的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物和其某些衍生物及其藥物組合物。
      本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供本發(fā)明的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物和其某些衍生物及其藥物組合物制備抑制RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制和/或治療RNA-依賴性RNA病毒感染,特別是抑制HCV復(fù)制和/或治療HCV感染的藥物的用途。
      根據(jù)以下的詳細(xì)描述這些和其它目的將變得顯而易見。
      發(fā)明概述本發(fā)明涉及標(biāo)明立體化學(xué)的構(gòu)型的結(jié)構(gòu)式I的核苷化合物
      及其藥學(xué)上可接受的鹽;其中R1是氫或者氟;R2是氟或者羥基;R3是氫,C1-16烷基羰基,C2-18烯基羰基,C1-10烷氧基羰基,C3-6環(huán)烷基羰基,C3-6環(huán)烷氧基羰基,或以下結(jié)構(gòu)式的氨基?;鶜埢?R4是氫,C1-10烷基羰基,磷?;蚱洵h(huán)狀前藥酯,二磷?;?,三磷?;珻2-18烯基羰基,C1-10烷氧基羰基,C3-6環(huán)烷基羰基,C3-6環(huán)烷氧基羰基,CH2O(C=O)C1-4烷基,CH(C1-4烷基)O(C=O)C1-4烷基或以下結(jié)構(gòu)式的氨基?;鶜埢?; 以下結(jié)構(gòu)式的殘基
      R5是氨基或者羥基;R6是氫,氨基或者氟;R7是氫,C1-5烷基或苯基C0-2烷基;和R8是氫,C1-4烷基,C1-4酰基,苯甲酰基。C1-4烷基氨基羰基,苯基C0-2烷基氨基羰基,C1-4烷基磺?;虮交鵆0-2烷基磺酰基;R9是氫,C1-5烷基,苯基或苯甲基,其中烷基未取代或被一個(gè)選自羥基,甲氧基,氨基,羧基,氨甲?;?,胍基,巰基,甲硫基,1H-咪唑啉基和1H-吲哚-3-基的取代基取代并且其中苯基和苯甲基未取代或被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立選自鹵素,羥基和甲氧基的取代基取代;R10是氫,C1-6烷基,C3-6環(huán)烷基,苯基或苯甲基,其中烷基和環(huán)烷基未取代或被一個(gè)至3個(gè)獨(dú)立選自鹵素,羥基,羧基,C1-4烷氧基的取代基取代并且其中苯基和苯甲基未取代或被一個(gè)至三個(gè)獨(dú)立選自鹵素,羥基,氰基,C1-4烷氧基和三氟甲基的取代基取代;Ar是未取代的苯基或被一個(gè)至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素,C1-4烷基,C1-4烷氧基,C1-4烷硫基,氰基,硝基,氨基,羧基,三氟甲基,C1-4烷基氨基,二(C1-4烷基)氨基,C1-4烷基羰基,C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基;條件是當(dāng)R1,R3,R4,和R6是氫并且R2是羥基時(shí),R5不是氨基。
      式I的化合物可用作RNA-依賴性RNA病毒聚合酶,特別是HCVNS5B聚合酶的抑制劑。它們也是RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制,特別是HCV復(fù)制的抑制劑并可用于治療RNA-依賴性RNA病毒感染,特別是治療HCV感染。
      本發(fā)明還包括單獨(dú)含有該化合物的藥物組合物或與其它抗RNA-依賴性RNA病毒,特別是抗HCV的其它活性劑聯(lián)合的該化合物的藥物組合物,以及抑制RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制和治療RNA-依賴性RNA病毒感染的方法。
      發(fā)明詳述本發(fā)明涉及標(biāo)明立體化學(xué)的構(gòu)型的結(jié)構(gòu)式I的核苷化合物 及其藥學(xué)上可接受的鹽;其中R1是氫或者氟;R2是氟或者羥基;R3是氫,C1-16烷基羰基,C2-18烯基羰基,C1-10烷氧基羰基,C3-6環(huán)烷基羰基,C3-6環(huán)烷氧基羰基,或以下結(jié)構(gòu)式的氨基?;鶜埢?; R4是氫,C1-10烷基羰基,磷?;蚱洵h(huán)狀前藥酯,二磷酰基,三磷酰基,C2-18烯基羰基,C1-10烷氧基羰基,C3-6環(huán)烷基羰基,C3-6環(huán)烷氧基羰基,CH2O(C=O)C1-4烷基,CH(C1-4烷基)O(C=O)C1-4烷基或以下結(jié)構(gòu)式的氨基酰基殘基; 以下結(jié)構(gòu)式的殘基
      R5是氨基或者羥基;R6是氫,氨基或者氟;R7是氫,C1-5烷基或苯基C0-2烷基;和R8是氫,C1-4烷基氨基羰基,苯基C0-2烷基氨基羰基,C1-4烷基磺?;虮交鵆0-2烷基磺?;?;R9是氫,C1-5烷基,苯基或苯甲基,其中烷基未取代或被一個(gè)選自羥基,甲氧基,氨基,羧基,氨甲?;一?,巰基,甲硫基,1H-咪唑啉基和1H-吲哚-3-基的取代基取代并且其中苯基和苯甲基未取代或被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立選自鹵素,羥基和甲氧基的取代基取代;R10是氫,C1-6烷基,C3-6環(huán)烷基,苯基或苯甲基,其中烷基和環(huán)烷基未取代或被一個(gè)至3個(gè)獨(dú)立選自鹵素,羥基,羧基,C1-4烷氧基的取代基取代并且其中苯基和苯甲基未取代或被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立選自鹵素,羥基和,氰基,C1-4烷氧基和三氟甲基的取代基取代;Ar是未取代的苯基或被一個(gè)至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素,C1-4烷基,C1-4烷氧基,C1-4烷硫基,氰基,硝基,氨基,羧基,三氟甲基,C1-4烷基氨基,二(C1-4烷基)氨基,C1-4烷基羰基,C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基的基團(tuán)取代;條件是當(dāng)R1,R3,R4,和R6是氫并且R2是羥基時(shí),R5不是氨基。
      式I化合物可用作RNA依賴性RNA病毒聚合酶的抑制劑。它們也是RNA依賴性RNA病毒復(fù)制的抑制劑,可用于治療RNA依賴性RNA病毒感染。
      在本發(fā)明化合物的一個(gè)實(shí)施方案中,R1是氫;R2是羥基;R3和R4是氫。
      在本發(fā)明化合物的第二個(gè)實(shí)施方案中,R1是氫;R2是氟;R3和R4是氫;條件是當(dāng)R1,R3,R4,和R6是氫并且R2是羥基時(shí),R5不是氨基。
      在本發(fā)明化合物的第三個(gè)實(shí)施方案中,Ar是未取代的苯基。
      在本發(fā)明化合物的第四個(gè)實(shí)施方案中,R9選自氫,甲基,乙基,正丙基,異丙基,異丁基,2-甲基-1-丙基,羥甲基,巰基甲基,羧甲基,氨基甲酰甲基,1-羥乙基,2-羧乙基,2-氨基甲酰甲基,2-甲硫乙基,4-氨基的-1-丁基,3-氨基-1-丙基,3-胍基-1-丙基,1H-咪唑-4-基甲基,苯基,4-羥基苯甲基,1H-吲哚-3-基甲基。在一類這種實(shí)施方案中,R9是甲基或苯甲基。
      在本發(fā)明化合物的第五個(gè)實(shí)施方案中,R10是C1-6烷基,環(huán)己基,苯基或者苯甲基。在一類這種實(shí)施方案中,R10是甲基。
      在本發(fā)明化合物的第六個(gè)實(shí)施方案中,Ar是未取代的苯基,R9是甲基或苯甲基,R10是甲基。
      用作RNA依賴性RNA病毒聚合酶的抑制劑的結(jié)構(gòu)式I的本發(fā)明化合物的例舉性而非限制性的實(shí)例如下 2,4-氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶; 2-氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶--4(3H)-酮;
      2,4-二氨基-5-氟-7-(2-氟-2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶; 4-氨基-5-氟-7-(2-氟-2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-; 2-氨基-5-氟-7-(2-氟-2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶--4(3H)-酮;及其藥學(xué)上可接受的鹽。
      在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物可用作正義單鏈RNA依賴性RNA病毒聚合酶的抑制劑,正義單鏈RNA依賴性RNA病毒復(fù)制的抑制劑,和/或用于治療正義單鏈RNA依賴性的RNA病毒感染。在一類這種實(shí)施方案中,正義單鏈RNA依賴性RNA病毒是黃病毒科(Flaviviridae)病毒或小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)病毒。在該類的亞類中,小核糖核酸病毒科病毒是鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒或甲型肝炎病毒。在該類的第二亞類中,黃病毒科病毒選自丙型肝炎病毒、黃熱病病毒、登革病毒、西尼羅病毒、日本腦炎病毒、班齊病毒和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)。在該亞類的子集中,黃病毒科病毒為丙型肝炎病毒。
      本發(fā)明的另一方面涉及抑制RNA依賴性RNA病毒聚合酶的方法,抑制RNA依賴性RNA病毒復(fù)制的方法,和/或治療需要這種治療的哺乳動(dòng)物的RNA依賴性RNA病毒感染的方法,該方法包括給哺乳動(dòng)物施用治療有效量的結(jié)構(gòu)式I的化合物。
      在本發(fā)明的這方面的一個(gè)實(shí)施方案中,RNA依賴性RNA病毒聚合酶是正義單鏈RNA依賴性RNA病毒聚合酶。在一類這種實(shí)施方案中,正義單鏈RNA依賴性RNA病毒聚合酶是黃病毒科病毒聚合酶或小核糖核酸病毒科病毒聚合酶。在該類的亞類中,小核糖核酸病毒科病毒聚合酶是鼻病毒聚合酶、脊髓灰質(zhì)炎病毒聚合酶或甲型肝炎病毒聚合酶。在該類的第二亞類中,黃病毒科病毒聚合酶選自丙型肝炎病毒聚合酶、黃熱病毒聚合酶、登革病毒聚合酶、西尼羅病毒聚合酶、日本腦炎病毒聚合酶、班齊病毒聚合酶和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)聚合酶。在該亞類的子集中,黃病毒科病毒聚合酶為丙型肝炎病毒聚合酶。
      在本發(fā)明的這方面的第二個(gè)實(shí)施方案中,RNA依賴性RNA病毒復(fù)制是正義單鏈RNA依賴性RNA病毒復(fù)制。在一類這種實(shí)施方案中,正義單鏈RNA依賴性RNA病毒復(fù)制是黃病毒科病毒復(fù)制或小核糖核酸病毒科病毒復(fù)制。在該類的亞類中,小核糖核酸病毒科病毒復(fù)制是鼻病毒復(fù)制、脊髓灰質(zhì)炎病毒復(fù)制或甲型肝炎病毒復(fù)制。在該類的第二亞類中,黃病毒科病毒復(fù)制選自丙型肝炎病毒復(fù)制、黃熱病毒復(fù)制、登革病毒復(fù)制、西尼羅病毒復(fù)制、日本腦炎病毒復(fù)制、班齊病毒復(fù)制和牛病毒復(fù)制性腹瀉病毒復(fù)制。在該亞類的子集中,黃病毒科病毒復(fù)制為丙型肝炎病毒復(fù)制。
      在本發(fā)明的這方面的第三個(gè)實(shí)施方案中,RNA依賴性RNA病毒感染是正義單鏈RNA依賴性RNA病毒感染。在一類這種實(shí)施方案中,正義單鏈RNA依賴性RNA病毒感染是黃病毒科病毒感染或小核糖核酸病毒科病毒感染。在該類的亞類中,小核糖核酸病毒科病毒感染是鼻病毒感染、脊髓灰質(zhì)炎病毒感染或甲型肝炎病毒感染。在該類的第二亞類中,黃病毒科病毒感染選自丙型肝炎病毒感染、黃熱病毒感染、登革病毒感染、西尼羅病毒感染、日本腦炎病毒感染、班齊病毒感染和牛病毒性腹瀉病毒感染。在該亞類的子集中,黃病毒科病毒感染為丙型肝炎病毒感染。
      貫穿本申請(qǐng)始終,以下術(shù)語具有指出的含意“烷基”,以及具有前綴“alk”的其他基團(tuán),例如烷氧基或烷硫基指直鏈或支鏈的碳鏈,或其組合,除非另外對(duì)碳鏈進(jìn)行定義。烷基的實(shí)例有甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基、庚基、辛基、壬基等。在規(guī)定碳原子數(shù)目的情況下,例如C3-10,術(shù)語“烷基”還包括環(huán)烷基,以及與環(huán)烷基結(jié)構(gòu)結(jié)合的直鏈或支鏈烷基鏈的組合。
      術(shù)語“環(huán)烷基”指一組烷基并且指具有規(guī)定數(shù)目碳原子的烷基飽和碳環(huán)。環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基或環(huán)辛基等。除非另外指明,環(huán)烷基通常為單環(huán)。除非另外指明,環(huán)烷基是飽和的。
      術(shù)語“鏈烯基”指總碳原子數(shù)為2-6或該范圍內(nèi)任何數(shù)字的直鏈或支鏈烯烴(例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基等)。
      術(shù)語“炔基”指總碳原子數(shù)為2-6或者該范圍內(nèi)任何數(shù)字的直鏈或支鏈炔烴(例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基等)。
      術(shù)語“烷氧基”指碳原子數(shù)為規(guī)定數(shù)目(例如C1-4烷氧基)或者該范圍內(nèi)任何數(shù)目的直鏈或支鏈烷基氧[即甲氧基(MeO-)、乙氧基、異丙氧基等]。
      術(shù)語“烷硫基”指碳原子數(shù)為規(guī)定數(shù)目(例如C1-4烷硫基)或者該范圍內(nèi)任何數(shù)目的直鏈或支鏈烷基硫[即甲硫基(MeS-)、乙硫基、異丙硫基等]。
      術(shù)語“烷基氨基”指碳原子數(shù)為規(guī)定數(shù)目(例如C1-4烷基氨基)或者該范圍內(nèi)任何數(shù)目的直鏈或支鏈烷基胺[即甲基氨基、乙基氨基、異丙基氨基、叔丁基氨基等]。
      術(shù)語“烷基磺?;敝柑荚訑?shù)為規(guī)定數(shù)目(例如C1-6烷基磺?;?或者該范圍內(nèi)任何數(shù)目的直鏈或支鏈烷基砜[即甲基磺酰基(MeSO2-)、乙基磺?;惐酋;萞。
      術(shù)語“烷氧基羰基”指碳原子數(shù)為規(guī)定數(shù)目(例如C1-4烷氧基羰基)或該范圍內(nèi)任何數(shù)目的本發(fā)明羧酸衍生物的直鏈或支鏈酯[即甲氧基羰基(MeOCO-)、乙氧基羰基或丁氧基羰基]。
      術(shù)語“烷基羰基”指碳原子數(shù)為規(guī)定數(shù)目(例如C1-4烷基羰基)或該范圍內(nèi)任何數(shù)目的直鏈或支鏈烷基?;鵞即甲基羰基(MeCO-)、乙基羰基或丁基羰基]。
      術(shù)語“鹵素”意欲包括鹵素原子氟、氯、溴和碘。
      術(shù)語“磷酰基”指-P(O)(OH)2-術(shù)語“二磷?;敝妇哂幸韵陆Y(jié)構(gòu)的基 術(shù)語“三磷酰基”指具有以下結(jié)構(gòu)的基 術(shù)語“取代的”應(yīng)被認(rèn)為包括被指定的取代基多重取代。當(dāng)多重取代部分被公開了或者被要求保護(hù)時(shí),取代化合物可以獨(dú)立被一個(gè)或多個(gè)公開的或者被要求保護(hù)的取代基部分單一或者多處取代。
      當(dāng)R3和R4的氨基酰基殘基實(shí)施方案中的R7在下式中不是氫時(shí), 氨基酰基殘基含有不對(duì)稱中心并且意欲包括單獨(dú)的R-和S-立體異構(gòu)體以及RS-非對(duì)映異構(gòu)混合物。
      術(shù)語“5’-三磷酸酯”指具有下述通用結(jié)構(gòu)式II的本發(fā)明氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物的5’-羥基的三磷酸酯衍生物 其中R1-R3,R5和R6如上定義。本發(fā)明化合物還意欲包括三磷酸酯的藥學(xué)上可接受的鹽和分別具有結(jié)構(gòu)式III和IV的5’-一磷酸酯和5’-二磷酸酯衍生物的藥學(xué)上可接受的鹽。
      “藥物組合物”中的術(shù)語“組合物”意欲包括包含活性成分和形成載體的惰性成分的產(chǎn)物,以及由任何兩種或多種成分混合、復(fù)合或聚集,或者由一種或多種成分離解,或者由一種或多種成分的其它類型反應(yīng)或相互作用而直接或間接得到的任何產(chǎn)物。相應(yīng)地,本發(fā)明藥物組合物包括通過混合本發(fā)明化合物與藥學(xué)上可接受的載體制成的任何組合物。
      術(shù)語“施與”和“施用”化合物應(yīng)理解為是指向有需要的個(gè)體提供本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物的前藥。
      本發(fā)明的另一方面涉及抑制HCV NS5B聚合酶,抑制HCV復(fù)制的方法,或者用本發(fā)明化合物與一種或多種用于治療HCV感染的試劑結(jié)合治療HCV感染的方法。這樣的可有效對(duì)抗HCV的試劑包括但不限于利巴韋林、左旋韋林(levovirin)、viramidine、胸腺素α-1、干擾素β、干擾素α、聚乙二醇化(pegylated)干擾素α(聚乙二醇干擾素-α)、干擾素-α與利巴韋林的聯(lián)合、聚乙二醇干擾素-α與利巴韋林的聯(lián)合、干擾素α與左旋韋林的聯(lián)合、聚乙二醇干擾素-α與左旋韋林的聯(lián)合。干擾素α包括但不限于重組干擾素α2a(如Hoffmann-LaRoche,Nutley,NJ獲得的Roferon interferon)、聚乙二醇化干擾素α2a(PegasysTM)、干擾素α2b(如Schering Corp.,Kenilworth,NJ獲得的Intron-Ainterferon)、聚乙二醇化干擾素α2b(PegIntronTM)、重組體共有干擾素(如干擾素alphacon-1)和純化的干擾素α產(chǎn)品。Amgen′s重組體共有干擾素具有商品名Infergen。左旋韋林是利巴韋林的L-對(duì)映異構(gòu)體,其顯示出近似于利巴韋林的免疫調(diào)節(jié)活性。Viramidine表示W(wǎng)O01/60379(轉(zhuǎn)讓給ICN Pharmaceuticals)中所公開的利巴韋林類似物。根據(jù)本發(fā)明的方法,可將聯(lián)合的各成分在治療期間內(nèi)的不同時(shí)間分別施用,或者以分開的或單一組合形式同時(shí)施用。因此,應(yīng)將本發(fā)明理解為包括所有這些同時(shí)或交替治療的療法,術(shù)語“施用”也作相應(yīng)解釋。應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明化合物與其它用于治療HCV感染的試劑聯(lián)合的范圍原則上包括與任何用于治療HCV感染的藥物組合物的任何聯(lián)合。當(dāng)將本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與可有效對(duì)抗HCV的第二種治療試劑聯(lián)合時(shí),各化合物的劑量可以與單獨(dú)使用化合物時(shí)的劑量相同或不同。
      為治療HCV感染,也可將本發(fā)明化合物與HCV NS3絲氨酸蛋白酶抑制劑的試劑聯(lián)合施用。HCV NS3絲氨酸蛋白酶是必需的病毒酶,并被描述為是抑制HCV復(fù)制的優(yōu)良靶標(biāo)。HCV NS3蛋白酶抑制劑的底物和非底物基抑制劑都公開在WO98/22496、WO98/46630、WO99/07733、WO99/07734、WO99/38888、WO99/50230、WO99/64442、WO00/09543、WO00/59929、GB2337262、WO02/48116、WO02/48172和美國(guó)專利第6,323,180號(hào)中。B.W.Dymock,″Emergingtherapies for hepatitis C virus infection,″Emerging Drugs,613-42(2001)中討論了作為開發(fā)HCV復(fù)制抑制劑和治療HCV感染的靶標(biāo)的HCV NS3蛋白酶。
      利巴韋林、左旋韋林和viramidine可通過經(jīng)由抑制胞內(nèi)酶肌苷一磷酸脫氫酶(IMPDH)調(diào)節(jié)鳥嘌呤核苷酸細(xì)胞內(nèi)池(pool)發(fā)揮其抗HCV作用。IMPDH是從頭鳥嘌呤核苷酸生物合成中生物合成途徑的限速酶。利巴韋林容易被細(xì)胞內(nèi)磷?;涣姿嵫苌锸荌MPDH的抑制劑。因此,IMPDH的抑制代表發(fā)現(xiàn)HCV復(fù)制抑制劑的另一有效靶標(biāo)。從而,本發(fā)明化合物也可與下述物質(zhì)聯(lián)合施用IMPDH抑制劑,如WO 97/41211和WO 01/00622(轉(zhuǎn)讓給Vertex)中公開的VX-497;另一IMPDH抑制劑,如WO 00/25780(轉(zhuǎn)讓給Bristol-Myers Squibb)中所公開的物質(zhì);或者麥考酚酸嗎乙酯[參見A.C.Allison和E.M Eugui,Agents Action,44(Suppl.)165(1993)]。
      為治療HCV感染,可將本發(fā)明化合物與抗病毒劑金剛烷胺(1-氨基金剛烷)聯(lián)合施用[該藥劑的綜述參見J.Kirschbaum,Anal.Profiles-DrugSubs.121-36(1983)]。
      本發(fā)明的化合物還可以與2′-C-支鏈核糖核苷聯(lián)合用于治療HCV感染,2′-C-支鏈核糖核苷公開于R.E.Harry-O′kuru等.,J.Org.Chem..621754-1759(1997);M.S.Wolfe等.,Tetrahedron Lett..367611-7614(1995);美國(guó)專利第3,480,613號(hào)(1969年11月25日);國(guó)際出版號(hào)WO01/90121(2001年11月29);國(guó)際出版號(hào)WO 01/92282(2001年12月6日);國(guó)際出版號(hào)WO 02/32920(2002年4月25日);國(guó)際出版號(hào)WO04/002999(2004年1月8日);國(guó)際出版號(hào)WO 04/003000(2004年1月8日);國(guó)際出版號(hào)WO 04/002422(2004年1月8日);將其內(nèi)容完整引入作為參考。這樣的2′-C-支鏈核糖核苷包括但是不限于2′-C-甲基胞苷,2′-C-甲基尿苷,2′-C-甲基腺苷,2′-C-甲基鳥苷,9-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-2,6-二氨基嘌呤,核糖C-2′,C-3和C-5′羥基相應(yīng)的氨基酸酯(例如,3′-O-(L-纈氨?;?-2′-C-甲基胞苷)和相應(yīng)的任選取代的5′-磷酸脂衍生物的環(huán)1,3-丙二醇酯。
      本發(fā)明的化合物還可與其它具有抗HCV性質(zhì)的其它核苷聯(lián)合用于治療HCV感染,其它核苷公開于WO02/51425(2002年7月4日),轉(zhuǎn)讓給Mitsubishi Pharma Corp.;WO01/79246,WO02/32920,WO02/48165(200年6月20日),轉(zhuǎn)讓給Pharmasset,Ltd.;WO01/686632001年9月20日),轉(zhuǎn)讓給ICN Pharmaceuticals;WO99/43691(1999年9月2日);WO02/18404(2002年3月7日),轉(zhuǎn)讓給Hoffmann-LaRoche;U.S2002/0019363(2002年2月14日);WO02/100415(2002年12月19日);WO03/026589(2003年4月3日);WO03/026675(2003年4月3日);WO03/093290(2003年11月13日)US2003/0236216(2003年12月25日);US2004/0006007(2004年1月8日);WO04/011478(2004年2月5日);WO04/013300(2004年2月12日);US 2004/0063658(2004年4月1日);WO04/028481(2004年4月8日)。
      本發(fā)明的化合物還可與HCV聚合酶抑制劑聯(lián)合用于治療HCV感染,HCV聚合酶抑制劑公開于WO01/77091(2001年10月18日),轉(zhuǎn)讓給Tularik,Inc.;WO01/47883(2001年7月5日),轉(zhuǎn)讓給JapanTobacco,Inc.;WO02/04425(2002年1月17日),轉(zhuǎn)讓給BoehringerIngelheim;WO02/06246(2002年1月24日),轉(zhuǎn)讓給Istituto di Ricerchedi Biologia Moleculare P.Angeletti S.P.A.;WO02/20497(2002年3月3日)。
      “藥學(xué)上可接受的”意指載體、稀釋劑或賦形劑必須與其它制劑成分相容,并且對(duì)其接受者無害。
      也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的是包含本發(fā)明氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物及其衍生物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)例是通過組合任何上述化合物和藥學(xué)上可接受的載體而制成的藥物組合物。本發(fā)明的另一示例制備藥物組合物的方法,該方法包括組合任何上述化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
      還包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的是可用于抑制RNA依賴性RNA病毒聚合酶,特別是HCV NS5B聚合酶的藥物組合物,該組合物包含有效量的本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體。可用于治療RNA依賴性RNA病毒感染,特別是HCV感染的藥物組合物也包括在本發(fā)明范圍內(nèi),還有抑制RNA依賴性RNA病毒聚合酶,特別是HCVNS5B聚合酶的方法,以及治療RNA依賴性RNA病毒復(fù)制,特別是HCV復(fù)制的方法也都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。此外,本發(fā)明涉及一種藥物組合物,該組合物包含治療有效量的本發(fā)明化合物和治療有效量的可有效對(duì)抗RNA依賴性RNA病毒,特別是對(duì)抗HCV的另一藥劑。有效對(duì)抗HCV的藥劑包括但不限于利巴韋林、左旋韋林、viramidine、胸腺素α-1、HCV NS3絲氨酸蛋白酶抑制劑、干擾素α、聚乙二醇化干擾素α(聚乙二醇干擾素-α)、干擾素-α與利巴韋林的聯(lián)合、聚乙二醇干擾素-α與利巴韋林的聯(lián)合、干擾素α與左旋韋林的聯(lián)合、聚乙二醇干擾素-α與左旋韋林的聯(lián)合。干擾素α包括但不限于重組干擾素α2a(如Hoffmann-LaRoche,Nutley,NJ獲得的Roferon interferon)、聚乙二醇化干擾素α2a(PegasysTM)、干擾素α2b(如Schering Corp.,Kenilworth,NJ獲得的Intron-Ainterferon)、聚乙二醇化干擾素α2b(PegIntronTM)、重組體共有干擾素(如干擾素alphacon-1)和純化的干擾素α產(chǎn)品。對(duì)利巴韋林及其對(duì)抗HCV的活性的討論參見J.O.Saunders和S.A.Raybuck,″Inosine Monophosphate DehydrogenaseCohsideration of Stmcture,Kinetics,and Therapeutic Potential,″Ann.Rep.Med.Chem,35201-210(2000)。
      本發(fā)明的另一方面提供氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物及其衍生物和它們的藥物組合物在制造藥物中的用途,所述藥物用于RNA依賴性RNA病毒復(fù)制,特別是HCV復(fù)制,和/或治療RNA依賴性RNA病毒感染,特別是HCV感染。本發(fā)明的再一方面提供可用作藥物的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物及其衍生物和它們的藥物組合物,所述藥物用于抑制RNA依賴性RNA病毒復(fù)制,特別是HCV復(fù)制,和/或治療RNA依賴性RNA病毒感染,特別是HCV感染。
      本發(fā)明的藥物組合物包含作為有效成分的結(jié)構(gòu)式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽,還可包含藥學(xué)上可接受的載體和任選的其它治療成分。
      組合物包括適于經(jīng)口、直腸、局部、腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)和靜脈內(nèi))、眼(眼用)、肺(經(jīng)鼻或口腔吸入)或者經(jīng)鼻施用的組合物,盡管在任何情況下最合適的給藥途徑將取決于所治療病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及活性成分的性質(zhì)。它們可方便地以單元?jiǎng)┝康男问酱嬖?,可通過藥劑學(xué)領(lǐng)域內(nèi)已知的任何方法制備。
      在實(shí)際應(yīng)用中,可將結(jié)構(gòu)式I的化合物作為活性成分與藥用載體通過常規(guī)制藥混合技術(shù)緊密摻混而組合。根據(jù)施用所需制劑,例如經(jīng)口或腸胃外(包括靜脈內(nèi))施用所需制劑的形式,所述載體可以采用各種形式。制備經(jīng)口劑型用組合物時(shí),在口服液制劑例如混懸液、酏劑和溶液的情況下,可以使用任何常用藥物介質(zhì),例如水、二醇、油、醇、調(diào)味劑、防腐劑、著色劑等;或者在口服固體制劑例如粉末、硬和軟膠囊劑以及片劑的情況下,可以使用載體如淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、?;瘎?rùn)滑劑、粘結(jié)劑、崩解劑等,固體口服制劑比液體制劑更優(yōu)選。
      由于易于施用,因而片劑和膠囊是最好的口服劑量單元形式,這時(shí)明顯是采用固體制藥載體。如果需要,可以用常規(guī)水性或非水性工藝對(duì)片劑進(jìn)行包衣。這樣的組合物和制劑應(yīng)含有至少0.1%活性化合物。當(dāng)然,這些組合物中活性化合物的百分比可以改變,適宜在該單元的約2%至約60%重量范圍內(nèi)?;钚曰衔镌谶@類可用于治療的組合物中的量是可以獲得有效劑量的量。所述活性化合物也可以經(jīng)鼻內(nèi)施用,例如作為液滴或噴霧施用。
      片劑、丸劑、膠囊等也可包含粘合劑如西黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠;賦形劑如磷酸二鈣;崩解劑如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸;潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂;和甜味劑如蔗糖、乳糖或糖精。當(dāng)單元?jiǎng)┬蜑槟z囊時(shí),它除了上述類型的材料外,還可以包含液體載體如脂肪油。
      可以存在各種其它材料作為包衣劑或用于改變劑量單元的物理形態(tài)。例如,可以用蟲膠、糖或兩種一起對(duì)片劑進(jìn)行包衣。糖漿劑或酏劑除了活性成分外,還可以包含蔗糖作為甜味劑、包含對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯作為防腐劑、包含染料和調(diào)味劑作為櫻桃味或橙味香料。
      結(jié)構(gòu)式I的化合物也可以腸胃外施用。這些活性化合物的溶液或混懸液可以通過在水中與表面活性劑如羥丙基纖維素適當(dāng)混合來制備。分散體也可以在乙二醇、液態(tài)聚乙二醇及其油中混合物中制備。在通常的儲(chǔ)存和使用條件下,這些制劑含有防腐劑以防止微生物生長(zhǎng)。
      適于注射用途的藥用劑型包括滅菌水溶液或分散體以及即時(shí)制備滅菌注射溶液或分散體的滅菌粉末。在各種情況下,所述劑型必須是滅菌的,并且必須是易于注射程度上的液態(tài)。在制造和儲(chǔ)存條件下必須是穩(wěn)定的,并且必須防止被微生物如細(xì)菌和真菌污染。載體可以是溶劑或含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇)、其穩(wěn)定的混合物和植物油的分散介質(zhì)。
      可以采用任何適合的施用途徑以向哺乳動(dòng)物,特別是人提供有效劑量的本發(fā)明化合物。例如,可以采用經(jīng)口、直腸、局部、腸胃外、眼、肺、鼻等。劑型包括片劑、錠劑、分散體、混懸液、溶液、膠囊、乳膏、軟膏、氣霧劑等。優(yōu)選經(jīng)口施用結(jié)構(gòu)式I的化合物。
      對(duì)人經(jīng)口施用時(shí),分劑量的劑量范圍為0.01-1000mg/kg體重。在一個(gè)實(shí)施方案中,分劑量的劑量范圍為0.1-100mg/kg體重。在另一個(gè)實(shí)施方案中,分劑量的劑量范圍為0.5-20mg/kg體重。對(duì)于經(jīng)口施用,優(yōu)選將組合物以含1.0-1000mg活性成分,特別是1、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、750、800、900和1000mg活性成分的片劑或膠囊的形式施用以調(diào)節(jié)所治療患者的癥狀。
      所用活性成分的有效劑量可以隨所采用的具體化合物、施用方式、所治療病癥和所治療病癥的嚴(yán)重程度而變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定這樣的劑量??梢哉{(diào)節(jié)該劑量方案以提供最佳治療反應(yīng)。
      本發(fā)明化合物包含一個(gè)或多個(gè)非對(duì)稱中心,因此可以作為外消旋體和外消旋混合物、單一的對(duì)映體、非對(duì)映體混合物和單獨(dú)的非對(duì)映體存在。本發(fā)明包括具有下述結(jié)構(gòu)式的五元呋喃糖環(huán)為β-D立體化學(xué)構(gòu)型的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物,即,其中五元呋喃糖環(huán)的C-1和C-4上的取代基具有β-立體化學(xué)構(gòu)型的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物(以粗線表示的“向上”方向)。
      本文所述的一些化合物包含烯屬雙鍵,除非另外指明,否則指包括E和Z兩種幾何異構(gòu)體。
      本文所述的一些化合物可以作為互變異構(gòu)體如酮-烯醇互變異構(gòu)體存在。各種互變異構(gòu)體及其混合物包括在結(jié)構(gòu)式I的化合物中。包括在本發(fā)明化合物范圍內(nèi)的酮-烯醇和亞胺-烯胺互變異構(gòu)體的例子如下 可以通過例如分級(jí)結(jié)晶從適當(dāng)?shù)娜軇├缂状蓟蛞宜嵋阴セ蚱浠旌衔镏谢蛘呓?jīng)由使用旋光活性固定相的手性色譜將結(jié)構(gòu)式I的化合物分離為它們的單獨(dú)的非對(duì)映體。
      可選地,可以通過使用已知構(gòu)型的光學(xué)純起始原料或試劑進(jìn)行立體有擇合成得到結(jié)構(gòu)式I的化合物的任何立體異構(gòu)體。
      本發(fā)明化合物可以以藥學(xué)上可接受的鹽的形式施用。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指由藥學(xué)上可接受的無毒堿或酸包括無機(jī)或有機(jī)堿和無機(jī)或有機(jī)酸所制成的鹽。包括在術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”范圍內(nèi)的堿性化合物的鹽指本發(fā)明化合物的無毒鹽,它通常通過游離堿與適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)或無機(jī)酸的反應(yīng)制備。本發(fā)明堿性化合物的具有代表性的鹽包括但不限于下列鹽乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、樟磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸鹽、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、依托酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酰對(duì)氨苯基胂酸鹽、己基間苯二酚鹽(hexylresorcinate)、海巴明、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥萘甲酸鹽、碘化物、異硫代硫酸鹽(isothionate)、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、N-甲基葡糖胺銨鹽、油酸鹽、草酸鹽、巴莫酸鹽(雙羥萘酸鹽)、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、硫酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘和戊酸鹽。此外,當(dāng)本發(fā)明化合物帶有酸性部分時(shí),其適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的鹽包括但不限于衍生自無機(jī)堿的鹽,包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳、mangamous、鉀、鈉、鋅等。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。衍生自藥學(xué)上可接受的有機(jī)無毒堿的鹽包括伯、仲和叔胺、環(huán)胺的鹽以及堿性離子交換樹脂,如精氨酸、甜菜堿、咖啡堿、膽堿、N,N-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、殼糖胺、組氨酸、海巴明、異丙基胺、賴氨酸、甲葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。
      還有,在本發(fā)明化合物中存在羧酸(-COOH),磷酸[-OP(O)(OH)2]或醇基的情況下,可以使用羧酸衍生物的藥學(xué)上可接受的酯,如甲基、乙基或新戊酰氧基甲基酯;氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷的5′-磷酸衍生物(包括5′-一磷酸酯,5′-二磷酸酯和5′-三磷酸酯)的藥學(xué)上可接受的前藥酯;或核糖C-2′,C-3′,和C-5′羥基的前藥?;苌?,如O-乙酸酯或O-馬來酸酯或O-氨?;?。包括在內(nèi)的有本領(lǐng)域已知用于改進(jìn)用作持續(xù)釋放或前藥制劑的生物利用度,組織分布,溶解性或水解特性的那些酯和?;?。還包括C-2′和C-3′的羥基的五元環(huán)碳酸酯衍生物。預(yù)期的衍生物在體外容易地轉(zhuǎn)化成所需的化合物。因此,在本發(fā)明的治療方法中,術(shù)語“施與”和“施用”指包括使用明確公開的化合物或使用沒有明確公開的但在給哺乳動(dòng)物包括人類患者施用后在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為指定化合物的化合物治療所描述的病毒感染。常規(guī)的選擇和制備適宜的前藥衍生物的方法例如在″Design of Prodrugs,″H.Bundgaard編輯,Elsevier,1985中有描述,將其完整引入本文作為參考。
      本發(fā)明化合物的制備用于制備本發(fā)明化合物的起始物料為4-氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1-9),流程

      圖1描述了其合成。
      流程圖1
      5-氟-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶的制備(1-4)步驟A5-溴-4氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶的制備(1-2)在0℃向在DMF(20 mL)中的4氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1-1)(1.53g,10.0mmol)的溶液中滴加在(10mL)中的N-溴代琥珀酰亞胺(1.78g,10.0mmol)的溶液。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌30分鐘然后在室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入甲醇(25mL),然后將反應(yīng)混合物攪拌另外1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并由甲醇重結(jié)晶殘留物得到為白色固體的標(biāo)題化合物。
      步驟B5-(三甲基甲錫烷基)-4氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1-3)的制備在-78℃向在THF(25mL)中的由步驟A獲得的化合物(0.92g,4mmol)的溶液中滴加n-BuLi(2.5M己烷溶液,3.48mL)。加完后,將反應(yīng)混合物在-78℃攪拌另外30分鐘。在10分鐘內(nèi)向該溶液中滴加在THF(8mL)中的三甲基氯化錫(0.88g,4.4mmol)。將反應(yīng)混合物緩慢恢復(fù)至室溫并在室溫?cái)嚢柽^夜。加入飽和的氯化銨溶液(60mL)并用乙酸乙酯進(jìn)行萃取(3×70mL)。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌,Na2SO4干燥,蒸發(fā)至變干。在硅膠上將殘留物純化得到為無色固體的標(biāo)題化合物。
      步驟C5-氟-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1-4)向在CH3CN(60mL)中的由步驟B獲得的化合物的溶液中加入一份[1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷雙(四氟硼酸酯)](SELECTFLUOR氟化試劑)(2.40g,6.5mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。濾出白色沉淀,將濾液蒸發(fā)至變干。在硅膠上使用乙酸乙酯/己烷(3∶7)作為洗脫液將殘留物純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分集中并真空蒸發(fā)得到為無色固體的標(biāo)題化合物。
      1H-NMR(500MHz,MeOH-d4)δ8.53(s,1H),7.37(d,J=2.8Hz);19F-NMR(DMSO-d6)δ-171.5.
      2-C-甲基-3.5-二-O-(對(duì)-甲苯酰基)-D-呋喃核糖(1-6)的制備向在35l乙腈中的3-O-苯甲基-1,2-O-異丙叉基-3-C-甲基-α-D-呋喃葡萄糖(1-5)(制備參見Carbohydr.Res..44275-283(1975)(5.0kg,15.4mol)和吡啶(3.7kg,46.2mol)的溶液中加入對(duì)-苯甲酰氯(5.2kg,33.9mol),將反應(yīng)在50-55℃加熱12小時(shí)。在50-55℃加入在9L水中的48wt%的HBF4(四氟硼酸)的溶液6.0L(46.2mol)。2小時(shí)后,蒸餾除去10L乙腈,加入10L乙腈。在轉(zhuǎn)化97%時(shí),蒸餾除去10L乙腈,將反應(yīng)溶液冷卻至0-5℃。加入在10L水中的高碘酸溶液(4.2kg,18.5mol)。在將反應(yīng)陳化30分鐘后,加入35L乙酸異丙酯和10L水。用25L水,隨后使用20L NaHCO3水溶液,15L在水中的5%硫代硫酸鈉,15L水洗滌有機(jī)相。將乙酸異丙酯溶液濃縮至10-15L,加入40L甲醇。將溶液冷卻至0℃并加入二異丙胺(0.78kg,7.7mol)。在0℃兩天后,在0-5℃加入HCl水溶液(1N,7.7L),隨后加入30L乙酸異丙酯和40L水。使用1N HCl,NaHCO3和鹽水洗滌有機(jī)相。通過共沸蒸餾干燥有機(jī)相并有活性炭進(jìn)行處理。通過過濾除去碳并使用乙酸異丙酯將所得溶液稀釋至75L并氫化(45psi,50℃,1.5kg 10%Pd/C)24小時(shí)。將濾液濃縮至15L并在50℃加入60L庚烷。用10L的在庚烷中20%乙酸異丙酯洗滌過濾分離得到晶物產(chǎn)物。干燥得到4.03kg需要的二醇1-6。
      1H NMR(CDCl3,400MHz)CDCl3中α∶β異構(gòu)體的比例為大約5∶1.對(duì)于主要的異構(gòu)體δ7.95-7.90(m,4H),7.26(d,J=8.0Hz,2H),7.17(d,J=8.0Hz,2H),5.53(d,J=7.2Hz,1H),5.22(d,J=2.8Hz,1H),4.65-4.49(m,3H),3.08(d,J=3.2Hz,1H),2.44(s,3H),2.38(s,3H),2.26(s,1H),1.44(s,3H)ppm;對(duì)于次要的異構(gòu)體δ7.95-7.90(m,4H),7.27(d,J=8.0Hz,2H),7.22(d,J=8.0Hz,2H),5.16(d,J=5.6Hz,1H),5.12(d,J=5.6Hz,1H),4.66-4.49(m,3H),3.54(d,J=5.6Hz,1H),2.91(s,1H),2.43(s,3H),2.40(s,3H),1.44(s,3H)ppm.。
      4-氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1-9)的制備步驟A1.2-脫水-3.5-二-O-(對(duì)-甲苯酰基)-2-C-甲基-α-D-呋喃核糖(1-7)向72L的容器中裝入干燥的二氯甲烷(32L),三乙胺(3.0L),和二醇(3.44kg,90wt%純)。將混合物加熱至30℃,然后在40分鐘內(nèi)加入甲磺酰氯(0.79L)。1小時(shí)后,將該批產(chǎn)物(batch)在pH7的緩沖液(20L)和甲基叔丁基醚(44L)之間分配。使用1M NaCl水溶液(38L)洗滌有機(jī)相,然后轉(zhuǎn)換到真空蒸餾甲苯,隨后濃縮至大約9L。所得環(huán)氧化物溶液直接步驟B中使用。
      步驟B4-氯-5-氟-7-(2-C-甲基-3,5-二-O-(對(duì)-甲苯?;?-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1-8)在室溫向在N,N-二甲乙酰胺(300mL)的4-氯-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1-4)(28.4g,0.165mol)的溶液中portionwise加入60%氫化鈉(6.6g,0.165mol)。加完后,將反應(yīng)混合物在60℃攪拌1小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入在THF(200mL)的1.2-脫水-3.5-二-O-(對(duì)-甲苯?;?-2-C-甲基-α-D-呋喃核糖(1-7)的溶液(63.4g,0.166mol),將反應(yīng)混合物在60℃加熱18小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫,倒入水(1L)和乙酸乙酯(2L)中。有機(jī)萃取物用水(500mL)洗滌,MgSO4干燥,蒸發(fā)至變干。將殘留物在硅膠上使用10-40%乙酸乙酯/己烷作為洗脫液進(jìn)行純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并濃縮得到泡沫狀物,直接在以下的步驟C中使用。
      步驟C4-氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1-9)在密封的容器中將在無水氨(300mL)中的4-氯-5-氟-7-(2-C-甲基-3,5-二-O-(對(duì)-甲苯酰基)-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶的溶液(29.4g,0.053mol)在85℃加熱48小時(shí)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫,將殘留物在甲醇(200mL)中成漿,過濾,將濾液吸附到硅膠(200g)上,然后通過色譜使用0-30%甲醇/二氯甲烷作為洗脫液進(jìn)行純化,將含有產(chǎn)物的級(jí)分合并,蒸發(fā)得到為固體的標(biāo)題化合物1-9。
      1H-NMR(500MHz,MeOH-d4)δ8.07(s,1H),7.41(d,J=2.2Hz,1H),6.25(d,J=1.8Hz),4.09-3.95(m,3H),3.82(dd,J=2.7,12.5Hz,1H);19F-NMR(MeOH-d4)δ-170.4;質(zhì)譜321(M+Na)+。
      在中間體1-9的6-氨基-7-氮雜嘌呤(7-deazaadenine)環(huán)的C-2位上引入氨基可按Zhao等,在J.Org.Chem.,627832-7835(1997)中所述合成方法進(jìn)行,如流程圖2所例示。2,6-二氨基-7-氮雜嘌呤環(huán)轉(zhuǎn)化為7-deazaguanine系統(tǒng)可按K.Alarcon等人在Tetrahedron Lett,417211-7215(2000)中所述方法進(jìn)行,如流程圖3所示。
      下面的實(shí)施例對(duì)在制備本發(fā)明化合物中使用的條件進(jìn)行了舉例說明。實(shí)施例無意以任何方式限制本發(fā)明的范圍,也不應(yīng)對(duì)其作如是解釋。核苷和核苷酸合成領(lǐng)域的技術(shù)人員將容易地意識(shí)到可對(duì)下述制備過程的條件和方法作眾所周知的變更,以制備本發(fā)明的這些和其它化合物。除非另有說明,否則所有的溫度都是攝氏度。
      流程圖2 實(shí)施例12,4-二氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2-4)
      步驟A4-氨基-5-氟-3-N-氧-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2-1)向在50%甲醇/水(20mL)的4-氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶的的溶液(268mg,0.899mmol)中加入m-氯過氧苯甲酸(444mg,1.80mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)并將殘留物與甲苯共沸兩次得到為米色固體的標(biāo)題化合物。
      步驟B2,4-二氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2-4)在0℃向在水中(3mL)的溴化氰生物溶液中加入在水中(3mL)的4-氨基-5-氟-3-N-氧-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2-1)(160mg,0.509mmol)的溶液。將所得溶液在0℃攪拌1.5小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并與甲苯共沸。向參禮物中加入N,N-二甲基酰胺(3.5mL)和三乙胺(0.25mL,1.79mol),將所得溶液在室溫?cái)嚢?5分鐘。分批加入碘甲烷(0.25mL,4.0mmol),在室溫避光情況下將反應(yīng)混合物攪拌1.5小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并向殘留物中加入0.25M氫氧化鈉水溶液(10mL),將其在室溫下攪拌30分鐘。用1M HCl中和反應(yīng)混合物,用乙醇(10mL)稀釋,在60℃加熱8小時(shí)。在冷卻至室溫后,加入濃縮的氫氧化銨(12mL),將反應(yīng)混合物加熱至90℃因此加入拉尼鎳。15分鐘后,通過將熱反應(yīng)混合物過濾,將溶劑蒸發(fā),在硅膠上使用甲醇/二氯甲烷作為洗脫液將殘留物純化。將含有產(chǎn)物的級(jí)分蒸發(fā)得到為固體的標(biāo)題化合物2-4。
      1H-NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 7.3(s,1H),6.1(s,1H),4.0(m,3H),3.8(d,1H),0.9(s,3H);質(zhì)譜314(M+1).
      流程圖3 實(shí)施例22-氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(3-2)該化合物通過使用在DMF中的1,2-雙[(二甲基氨基)-亞甲基]肼處理化合物2-4以提供化合物3-1,將其按K.Alarcon等人在TetrahedronLett,417211-7215(2000)中所述條件下使用在DMSO中的1N NaOH含水溶液水解來進(jìn)行制備。
      本發(fā)明的2-氟-2-C-甲基核糖核苷(結(jié)構(gòu)式I中R2=F)可根據(jù)核苷和核苷酸化學(xué)實(shí)踐中行之有效的合成方法進(jìn)行制備。提供了化合物6-3的合成作為示例,如流程圖4-6中所描述。D-核糖(4-1)首先被保護(hù)。在這種情況下,酯,例如乙酸酯和苯甲酸酯提供了合適的保護(hù)基,但是也可使用替代性的保護(hù)基。任選在溶劑,例如二乙醚,二惡烷,四氫呋喃和二氯甲烷存在的情況下使D-核糖與適當(dāng)?shù)孽;u或酐反應(yīng)實(shí)現(xiàn)酯化。這樣的轉(zhuǎn)化在化學(xué)文獻(xiàn)文獻(xiàn)中是眾所周知的,在Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,″ProtectiVe Groups in Organic Synthesis,″,John Wiley &amp; Sons,,Inc.,第3版,1999中可發(fā)現(xiàn)實(shí)例。
      流程圖4 中間體4-3可以使用很多方法進(jìn)行制造。在流程圖4中使用Vorbruggen反應(yīng)(″Synthesis of Nucleosides″,H.Vorbruggen和C.Ruh-Pohlenz,在Organic Reactions,vol.55,pp 1-630,2000中)連接nucleobase5-氟-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1-4)形成被保護(hù)的核苷4-3。然后通過任何的適當(dāng)?shù)姆椒?,例如酸或堿催化水解和酯交換(例如使用在甲醇中的甲醇鈉)除去酯保護(hù)基以提供4-4。
      接下來如流程圖5所述引入C-2′甲基。為了能夠正交操控(orthogonal manipulation)C-2′羥基,在5′和3′位的羥基首先被保護(hù)。這可以通過很多方法實(shí)現(xiàn),流程圖5對(duì)其中之一進(jìn)行了描述。前述參考文獻(xiàn),Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,″Protective Groups in OrganicSynthesis,″,John Wiley &amp; Sons,,Inc.,第3版,1999包括很多實(shí)例;特別適合的是四異丙基二硅惡烷基亞基(tetraisopropyldisiloxanylidene)環(huán)醚5-1。
      流程圖5 然后通過使用適宜的氧化方法,例如,Swern或Moffatt氧化或應(yīng)用Dess-Martin過碘烷(periodinane)將剩余游離羥基氧化成酮5-2。這樣的方法的實(shí)例可以在相關(guān)化學(xué)文獻(xiàn),例如,在作者為Richard C.Larock,VCH Publishers1989年出版的“Comprehensive Organic Transfor-mations”中找到。然后使5-2與適宜的有機(jī)金屬的試劑,例如,甲基鋰和鹵化甲基鎂反應(yīng)。這樣的反應(yīng)優(yōu)選在低溫在適當(dāng)?shù)娜軇?,例如四氫呋喃和二乙醚中進(jìn)行。在這種情況下,由阻礙更少的面引入甲基,這種立體控制主要產(chǎn)生一種異構(gòu)體。這樣的立體控制的實(shí)例可以在相關(guān)化學(xué)文獻(xiàn),例如,在作者為Ernest L.Eliel和Samuel H.Wilen由Wiley-IntersciencePublications在1994年出版的“Stereochemistry of Organic Compounds”中找到。然后如流程圖6所述在C-2′位引入氟基。
      流程圖6 如上所述可選擇性地保護(hù)在3′和5′位存在的羥基。使用低級(jí)烷基或簡(jiǎn)單芳香酯,例如乙酸酯和苯甲酸酯是有利的。如此選擇反應(yīng)條件以使空間位阻的C-2′羥基保持不受影響。任選在溶劑,例如芳烴,四氫呋喃,氯仿存在的情況下在低溫,室溫或升溫下通過使用三氟化二乙氨基硫(DAST)或其他的適宜的氟化試劑來實(shí)現(xiàn)引入氟。在美國(guó)專利公布第2005/0009737號(hào)(2005年1月13日出版)中描述了這樣的轉(zhuǎn)化的實(shí)例。然后通過水解除去酯保護(hù)基,隨后用氨置換在nucleobase中存在的氯原子得到需要的核苷。但是在一個(gè)釜中通過在適當(dāng)?shù)娜軇?,例如甲醇的氨在室溫或升溫下進(jìn)行最后兩步操作是有利的,需要的話,可使用高壓。
      實(shí)施例3 4-氨基-5-氟-7-(2-氟-2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶步驟A 使用對(duì)甲苯酰氯(22mL,165mmol)逐滴處理在無水DMF(80mL)中的D-核糖(5.00g,33mmol),三乙胺(46mL,330mmol)和DMAP(810mg,6.6mmol)的溶液并在室溫繼續(xù)攪拌3小時(shí)。通過傾倒在300g冰上使反應(yīng)淬滅。在冰融化后二氯甲烷萃取粗制產(chǎn)物(3×100mL),用無水硫酸鎂干燥,過濾并真空除去溶劑。由丙酮粉碎剩余的油狀殘留物。將溶劑傾析,將固體殘留物由異丙醇(200mL)重結(jié)晶。在下一步中使用該產(chǎn)物。
      步驟B 使用如H.Vorbruggen和U.Niedballa在J.Ore.Chem.,393654-3660(1974)所述方法合成該化合物。按A.B.Eldrup等人,在J.Med.Chem.,475284(2004)中所述方法制備在該轉(zhuǎn)化中使用的4-氯-5-氟-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1-4)。
      步驟C 由步驟B的產(chǎn)物按K.L.Smith等人,在Bioorg.Med.Chem.Lett,143517-3520(2004)中所述方法合成該化合物。
      步驟D 由步驟C的產(chǎn)物按G.Gaubert等人,在Tetrahedron Lett,455629-5632(2004)中所述方法合成該化合物。
      步驟E 由步驟D的產(chǎn)物按V.L.Moore等人,在Biochemistry,4114066-14075(2002)中所述方法合成該化合物。
      步驟F 由步驟E的產(chǎn)物按V.L.Moore等人,在Biochemistry,414066-14075(2002)中所述方法合成該化合物。
      步驟G 由步驟F的產(chǎn)物使用由M.Gallo等人,在Tetrahedron.575707-5713(2001).中公布的方法合成該化合物。
      步驟H 由步驟G的產(chǎn)物使用由M.Akira等人,在Chem.Pharm.Bull.,353967-3970(1987)。中公布的方法合成該二酯。
      步驟I 按照美國(guó)專利公布第2005/0009737號(hào)所述方法使用DAST處理步驟H的產(chǎn)物來制備該化合物。
      步驟J 通過按美國(guó)專利第6,777,395號(hào)實(shí)施例62,步驟F的條件使用甲醇氨處理步驟I的產(chǎn)物來合成實(shí)施例3,將其內(nèi)容完整引入作為參考。
      實(shí)施例4核苷5′-三磷酸酯按照Chem.Rev.1002047(2000)中所述的通用步驟制備本發(fā)明的核苷5′-三磷酸酯。
      實(shí)施例5核苷5′-三磷酸酯衍生物的純化和純度分析將三磷酸酯過用具有pH8的50mM Tris緩沖系統(tǒng)的30×100mmMono Q柱(Pharmacia)進(jìn)行陰離子交換(AX)色譜提純。洗脫梯度通常在兩柱體積內(nèi)為40mM NaCl至0.8M NaCl,6.5mL/分鐘。收集陰離子交換色譜得到的適當(dāng)?shù)募?jí)分,通過使用Luna C18 250×21mm柱(Phenomenex),流速為10mL/分鐘的反相(RP)色譜除去鹽分。洗脫梯度通常為1%-95%甲醇,14分鐘,5mM乙酸三乙銨(TEAA)的恒定濃度。
      在Hewlett-Packard(Palo Alto,CA)MSD 1100上用聯(lián)機(jī)HPLC質(zhì)譜測(cè)定純化三磷酸酯的質(zhì)譜。RP HPLC用Phenomenex Luna(C18(2)),150×2mm,加30×2mm保護(hù)柱,3-μm粒度。在負(fù)離子化模型中實(shí)施乙腈的20mM TEAA(乙酸三乙銨)pH7溶液的0-50%線性梯度(15分鐘)。用氮?dú)夂蜌鈩?dòng)噴霧器產(chǎn)生電噴射。以150-900的分子量范圍為樣本。用HP Chemstation分析程序包測(cè)定分子量。
      純化三磷酸酯的純度通過分析用RP和AX HPLC測(cè)定,具有Phenomonex Luna或Jupiter柱(250×4.6mm),5μm粒度通常用在100mM TEAA,pH7中的15分鐘內(nèi)2-70%乙腈梯度運(yùn)轉(zhuǎn)。AX HPLC在1.6×5mm Mono Q柱(Pharmacia)上進(jìn)行。以50mM Tris,pH8的恒定濃度,0-0.4M NaCl梯度洗脫三磷酸酯。三磷酸酯的純度一般>80%。
      生物學(xué)試驗(yàn)下面描述用于測(cè)定抑制HCV NS5B聚合酶和HCV復(fù)制的試驗(yàn)。
      在下面的試驗(yàn)中測(cè)定本發(fā)明化合物作為HCV NS5B RNA依賴性RNA聚合酶(RdRp)的抑制劑的有效性。
      A.抑制HCV NS5B聚合酶試驗(yàn)本試驗(yàn)用于測(cè)定本發(fā)明的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷三磷酸酯抑制丙型肝炎病毒(HCV)的RNA依賴性RNA聚合酶(NS5B)在異數(shù)(heteromeroc)RNA模板上的酶活性的能力。
      步驟試驗(yàn)緩沖條件(50μL-總量/反應(yīng)物)20mM Tris,pH7.550μM EDTA5mM DTT2mM MgCl280mM KCl0.4U/μL RNAsin(Promega,儲(chǔ)備液為40單位/μL)0.75μgt500(一個(gè)用T7 runoff轉(zhuǎn)錄制成的500-nt RNA,具有來自丙型肝炎基因組的NS2/3區(qū)域的序列)1.6μg純化丙型肝炎NS5B(由21個(gè)C-末端截短的氨基酸形成)1μM A,C,U,GTP(核苷三磷酸酯混合物)[α-32P]-GTP或[α-33P]-GTP在高達(dá)100μM最終濃度的各種濃度下測(cè)試核苷三磷酸酯。
      制備包括酶和模板t500的適當(dāng)體積的反應(yīng)緩沖液。將本發(fā)明的核苷三磷酸酯吸移到96孔板的孔中。制備包括放射性標(biāo)記GTP的核苷三磷酸酯(NTP’s)混合物,并將其吸移到96孔板的孔中。加入酶-模板反應(yīng)溶液引發(fā)反應(yīng),并使反應(yīng)在室溫下進(jìn)行1-2小時(shí)。
      加入20μL 0.5M EDTA,pH8.0淬滅反應(yīng)。包括空白試驗(yàn),空白試驗(yàn)中將淬滅溶液在加入反應(yīng)緩沖液之前加入到NTPs中。
      將50μL淬滅后的反應(yīng)物點(diǎn)滴到DE8l濾片(Whatman)上,并使其干燥30分鐘。用0.3M甲酸銨,pH8(每次洗滌用150mL,直到1mL洗液中的cpm小于100,通常洗6次)洗滌濾片。在閃爍計(jì)數(shù)器中在5mL閃爍液中對(duì)濾片計(jì)數(shù)。
      通過下述公式計(jì)算抑制百分比抑制%=[1-(測(cè)試反應(yīng)中的cpm-空白反應(yīng)中的cpm)/(對(duì)照反應(yīng)中的cpm-空白反應(yīng)中的cpm)]×100。
      在HCV NS5B聚合酶試驗(yàn)中測(cè)試的代表性的化合物顯示出小于50微摩爾的IC50值。
      B.抑制HCV RNA復(fù)制試驗(yàn)還評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物在含有亞基因組HCV復(fù)制子的培養(yǎng)肝癌(HuH-7)細(xì)胞中對(duì)丙型肝炎病毒RNA復(fù)制的影響。試驗(yàn)的細(xì)節(jié)如下所述。本復(fù)制子試驗(yàn)在V.Lohmann,F(xiàn).Komer,J-O.Koch,U.Herian,L.Theilmann和R.Bartenschlager,″Replication of a Sub-genomicHepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line,″Science28 5110(1999)中所述內(nèi)容的基礎(chǔ)上進(jìn)行了修改。
      實(shí)驗(yàn)方案本試驗(yàn)是原位核糖核酸酶保護(hù)、基于親和閃爍的平板測(cè)定(SPA)。將10,000-40,000個(gè)細(xì)胞加入到96孔cytostar板(Amersham)中的100-200μL含有0.8mg/mL G418的培養(yǎng)基中。在0-18小時(shí),以在1%DMSO中的高達(dá)100μM的各種濃度將化合物加入到細(xì)胞中,然后培養(yǎng)24-96小時(shí)。將細(xì)胞固定(20分鐘,10%福爾馬林),透化(20分鐘,0.25%TritonX-100/PBS)并與單鏈33P RNA探針雜交(過夜,50℃),所述單鏈33PRNA與RNA病毒基因組中所含的(+)鏈NS5B(或其它基因)互補(bǔ)。將細(xì)胞洗滌,用RNAse處理,洗滌,加熱至65℃,并在Top-Count中計(jì)數(shù)。讀取每分鐘計(jì)數(shù)(cpm)的減少作為對(duì)復(fù)制的抑制。
      被選擇來含有亞基因組復(fù)制子的人HuH-7肝癌細(xì)胞帶有細(xì)胞質(zhì)RNA,該細(xì)胞質(zhì)RNA由HCV 5’非翻譯區(qū)(NTR)、新霉素選擇性標(biāo)記、EMCV IRES(內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn))和HCV非結(jié)構(gòu)蛋白NS3-NS5B以及跟隨其后的3’NTR構(gòu)成。
      在本復(fù)制試驗(yàn)中測(cè)試的代表性的化合物顯示出小于100微摩爾的EC50值。
      C.細(xì)胞內(nèi)代謝試驗(yàn)還評(píng)價(jià)了本發(fā)明化合物進(jìn)入人肝癌細(xì)胞株以及在細(xì)胞內(nèi)被轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的核苷5′-單-,二-和三磷酸酯的能力將兩種細(xì)胞株,HuH-7和HBIlOA用于本發(fā)明化合物的細(xì)胞內(nèi)代謝研究。HuH-7是人肝癌細(xì)胞株,HBIlOA表示由存在HCV雙順反子復(fù)制子的HuH-7細(xì)胞獲得的克隆株。以每60-毫米培養(yǎng)皿1.5×106細(xì)胞將HuH-7細(xì)胞涂布到含有10%胎牛血清的完全Dulbecco′s改良Eagle′s培養(yǎng)基,將HBIlOA細(xì)胞涂布到含有G418(0.8mg/mL)的同樣的培養(yǎng)基中,以使在加入化合物的時(shí)候有80%的細(xì)胞融合。將氚標(biāo)記化合物以2μM在細(xì)胞培養(yǎng)基中孵育3或23小時(shí)。收集細(xì)胞,用磷酸鹽-緩沖鹽水洗滌,計(jì)數(shù)。然后將細(xì)胞用70%甲醇,20m氚標(biāo)記化合物EDTA,20mm EGTA提取并離心。將溶胞產(chǎn)物干燥,使用離子對(duì)反相(C-18)HPLC在與在線β-RAM閃爍檢測(cè)器連接的Waters Millenium系統(tǒng)上(IN/USSystems)測(cè)定放射性標(biāo)記的核苷酸。HPLC流動(dòng)相(a)具有2mm氫氧化四丁銨的10mm磷酸鉀和(b)包含具有2mm氫氧化四丁銨的10mm磷酸鉀的50%甲醇。通過比較相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的保留時(shí)間來進(jìn)行峰鑒別?;钚员硎緸樵?06HuH-7或HBIlOA細(xì)胞中檢測(cè)到的皮摩爾的核苷酸。
      在以下所述反過濾(counterscreens)中還評(píng)價(jià)本發(fā)明氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物的細(xì)胞毒性和抗病毒特異性。
      C.反過濾在下面的試驗(yàn)中測(cè)試了本發(fā)明氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物對(duì)人DNA聚合酶的抑制能力。
      a.對(duì)人DNA聚合酶α和β的抑制反應(yīng)條件
      50μL反應(yīng)體積反應(yīng)緩沖組分20mM Tris-HCl,pH7.5200μg/mL牛血清清蛋白100mM KCl2mM β-巰基乙醇10mM MgCl21.6μM dA,dG,dC,dTTPα-33P-dATP酶和模板0.05mg/mL缺口魚精子DNA模板0.01U/μL DNA聚合酶α或β缺口魚精子DNA模板的制備將5μL 1M MgCl2加入到500μL活化魚精子DNA(USB 70076)中;加熱至37℃,并加入30μL 65U/μL的外切核酸酶III(GibcoBRL18013-011);在37℃孵育5分鐘;通過加熱至65℃10分鐘終止反應(yīng);將50-100μL等分試樣裝到Bio-spin 6色譜柱(Bio-Rad 732-6002)中,該色譜柱已用20mM Tris-HCl,pH7.5進(jìn)行平衡;通過以1,000Xg離心4分鐘進(jìn)行洗脫;收集洗出液,并在260nm測(cè)定吸光度,以確定濃度。
      將DNA模板稀釋至20mM Tris-HCl,pH7.5的適當(dāng)體積,將酶稀釋至20mM Tris-HCl的適當(dāng)體積,含有2mM β-巰基乙醇和100mMKCl。將模板和酶吸移至微量離心管或96孔板中。還分別用酶稀釋緩沖液和測(cè)試化合物溶劑制備了排除酶的空白反應(yīng)物和排除測(cè)試化合物的對(duì)照反應(yīng)物。用具有上述組分的反應(yīng)緩沖液引發(fā)反應(yīng)。將反應(yīng)物在37℃孵育1小時(shí)。加入20μL 0.5M EDTA淬滅反應(yīng)。將50μL淬滅后的反應(yīng)物點(diǎn)滴到Whatman DE81濾片上并風(fēng)干。用150mL 0.3M pH8的甲酸銨反復(fù)洗滌濾片,直到1mL洗液<100cpm。將濾片用150mL無水乙醇洗滌兩次,用150mL無水乙醚洗滌一次,干燥并在5mL閃爍液中計(jì)數(shù)。
      通過下述公式計(jì)算抑制的百分比抑制%=[1-(測(cè)試反應(yīng)中的cpm-空白反應(yīng)中的cpm)/(對(duì)照反應(yīng)中的cpm-空白反應(yīng)中的cpm)]×100。
      b.對(duì)人DNA聚合酶γ的抑制在包含下述成分的反應(yīng)中測(cè)試了對(duì)人DNA聚合酶γ的抑制能力0.5ng/μL酶;10μm dATP,dGTP,dCTP和TTP;2μCi/反應(yīng)[a-33P]-dATP和0.4μg/μL活化魚精子DNA(購(gòu)自US Biochemical),在含有20mM Tris pH8,2mM β-巰基乙醇、50mM KCl、10mM MgCl2和0.1μg/μL BSA的緩沖液中。使反應(yīng)在37℃進(jìn)行1小時(shí),然后通過加入0.5M EDTA至142mM的最終濃度淬滅反應(yīng)。通過陰離子交換過濾結(jié)合和閃爍計(jì)數(shù)對(duì)所形成的產(chǎn)物定量。在高達(dá)50μM的濃度測(cè)試化合物。
      通過下述公式計(jì)算抑制的百分比抑制%=[1-(測(cè)試反應(yīng)中的cpm-空白反應(yīng)中的cpm)/(對(duì)照反應(yīng)中的cpm-空白反應(yīng)中的cpm)]×100。
      在下述試驗(yàn)中,測(cè)定了本發(fā)明氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物抑制HIV感染和HIV擴(kuò)散的能力。
      c.HIV感染性試驗(yàn)用表達(dá)CXCR4和CCR5的HeLa Magi細(xì)胞的變體進(jìn)行本試驗(yàn),根據(jù)低背景β-半乳糖苷酶(β-gal)表達(dá)進(jìn)行選擇。使細(xì)胞感染48小時(shí),用化學(xué)發(fā)光底物(Galactolight Plus,Tropix,Bedford,MA)對(duì)得自整合(integrated)HIV-1 LTR啟動(dòng)子的β-gal產(chǎn)物進(jìn)行定量。在開始于100μm的兩倍連續(xù)稀釋液中滴定(在重復(fù)試驗(yàn)中)抑制物;計(jì)算相對(duì)于對(duì)照感染的各濃度下的抑制百分比。
      d.對(duì)HIV擴(kuò)散的抑制通過美國(guó)專利第5,413,999號(hào)(1995年5月9日)和J.P.Vacca等的Proc.Natl.Acad.Sci.,914096-4100(1994)中所述的方法測(cè)試本發(fā)明化合物抑制人類免疫缺陷性病毒(HIV)擴(kuò)散的能力,將所述文獻(xiàn)的內(nèi)容完整引入作為參考。
      在下列試驗(yàn)中所述的基于MTS細(xì)胞的試驗(yàn)中,篩選了本發(fā)明氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物對(duì)含有亞基因組HCV復(fù)制子的培養(yǎng)肝癌(HuH-7)細(xì)胞的細(xì)胞毒性。在H.Nakabayashi等的Cancer Res.,423858(1982)中描述了HuH-7細(xì)胞株。
      e.細(xì)胞毒性試驗(yàn)在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中制備細(xì)胞培養(yǎng)物,濃度為大約1.5×105個(gè)細(xì)胞/mL用于3天孵育中的懸浮培養(yǎng),濃度為5.0×104個(gè)細(xì)胞/mL用于3天孵育中的貼壁培養(yǎng)。將99μL細(xì)胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至96孔組織培養(yǎng)處理板的孔中,加入1μL在DMSO中的100倍最終濃度的測(cè)試化合物。將平板在37℃和5%CO2條件下孵育一段特定時(shí)間。培育期之后,向各孔中加入20μL CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation試驗(yàn)試劑(MTS)(Promega),再將平板在37℃和5%CO2條件下培育最長(zhǎng)為3小時(shí)的一段時(shí)間。振蕩平板以使各孔混合,用平板讀數(shù)器讀取490nm下的吸光度。用臨添加MTS試劑前的已知細(xì)胞數(shù)制作懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)曲線。代謝活性細(xì)胞將MTS分解為甲月替,甲月替在490nm吸收。將化合物存在下490nm的吸光度與未添加任何化合物的細(xì)胞的吸光度相比。
      參考Cory,A.H等,“Use of an aqueous soluble tetrazolium/formazanassay for cell growth assays inculture,”Cancer Commun.3207(1991)。
      將下面的試驗(yàn)用于測(cè)定本發(fā)明化合物對(duì)其它RNA依賴性RNA病毒的活性。
      a.測(cè)定化合物對(duì)抗鼻病毒的體外抗病毒活性(致細(xì)胞病變效應(yīng)抑制試驗(yàn))試驗(yàn)條件描述在Sidwell and Huffman,″Use of disposablemicrotissue culture plates for antiviral and interferon inductionstudies,″Appl.Microbiol.22797-801(1971)的文章中。
      病毒
      如Sidwell and Huffman參考中所述,使用2型鼻病毒(RV-2)HGP毒株與KB細(xì)胞和培養(yǎng)基(0.1%NaHCO3,無抗生素)。由ATCC獲得的病毒取自具有輕微的急性發(fā)熱上呼吸道疾病的成年男性的咽喉棉棒。9型鼻病毒(RV-9)211毒株和14型鼻病毒(RV-14)Tow毒株也由Rockville,MD的American Type Culture Collection(ATCC)獲得。RV-9取自人咽喉洗液,RV-14取自具有上呼吸道疾病的年輕成人的咽喉棉棒。將這兩種病毒與人子宮頸上皮樣癌細(xì)胞HeLa Ohio-1細(xì)胞(Dr.FredHayden,UniV.of VA)一起使用。用具有5%胎牛血清(FBS)和0.1%NaHCO3的MEM(Eagle’s最低基礎(chǔ)培養(yǎng)基)作為生長(zhǎng)培養(yǎng)基。全部三種病毒類型的抗病毒測(cè)試培養(yǎng)基都是具有5%FBS、0.1%NaHCO3、50μg慶大霉素/mL和10mM MgCl2的MEM。
      2000μg/mL是用于測(cè)試本發(fā)明化合物的最高濃度。在加入受試化合物之后大約5分鐘,將病毒加入到試驗(yàn)板中。同時(shí)制作適當(dāng)?shù)膶?duì)照試樣。將試驗(yàn)板在潮濕空氣、5%CO2、37℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)。通過顯微鏡觀察對(duì)照細(xì)胞的形態(tài)變化來監(jiān)測(cè)細(xì)胞毒性。病毒CPE數(shù)據(jù)和毒性對(duì)照數(shù)據(jù)的回歸分析給出了ED50(50%有效劑量)和CC50(50%細(xì)胞毒性濃度)。通過式子SI=CC50÷ED50計(jì)算選擇性指數(shù)(SI)。
      b.測(cè)定化合物對(duì)抗登革熱 班齊和黃熱病的體外抗病毒活性(CPE抑制試驗(yàn))試驗(yàn)詳細(xì)內(nèi)容在上述Sidwell and Huffman參考文獻(xiàn)中給出。
      病毒從疾病控制中心獲取登革熱2型病毒New Guinea毒株。用兩株非洲綠猴腎細(xì)胞培養(yǎng)病毒(Vero)并進(jìn)行抗病毒測(cè)試(MA-104)。從ATCC獲得自被感染的鼠腦制取的黃熱病病毒17D毒株和分離自南非發(fā)熱男孩的血清的班齊病毒H336毒株。這兩種病毒和試驗(yàn)都使用Vero細(xì)胞。
      細(xì)胞和培養(yǎng)基在具有5%FBS和0.1%NaHCO3、沒有抗生素的199培養(yǎng)基中使用MA-104細(xì)胞(Bio Whittaker,Inc.,Walkersville,MD)和Vero細(xì)胞(ATCC)。
      用于登革熱、黃熱病和班齊病毒的測(cè)試培養(yǎng)基是MEM、2%FBS、0.18%NaHCO3和50μg慶大霉素/mL。
      本發(fā)明化合物的抗病毒測(cè)試按照Sidwell and Huffman參考文獻(xiàn)中所述進(jìn)行,類似于上述鼻病毒抗病毒測(cè)試。對(duì)于各種病毒,在5-6天后獲得適當(dāng)?shù)闹录?xì)胞病變效應(yīng)(CPE)記錄。
      c.測(cè)定化合物對(duì)西尼羅病毒的體外抗病毒活性(CPE抑制試驗(yàn))試驗(yàn)詳細(xì)內(nèi)容在上述引用的Sidwell and Huffman參考文獻(xiàn)中給出。從疾病控制中心獲得取自鴉腦的西尼羅病毒、New York分離物。使Vero細(xì)胞生長(zhǎng)并如上使用。測(cè)試培養(yǎng)基為MEM、1%FBS、0.1%NaHCO3和50μg慶大霉素/mL。
      本發(fā)明化合物的抗病毒測(cè)試按照Sidwell and Huffman參考文獻(xiàn)中所述方法進(jìn)行,類似于用于鼻病毒活性測(cè)試的那些方法。在5-6天后獲得適當(dāng)?shù)闹录?xì)胞病變效應(yīng)(CPE)記錄。
      d.測(cè)定化合物對(duì)抗鼻病毒、黃熱病、登革熱、班齊和西尼羅病毒的體外抗病毒活性(中心紅攝取試驗(yàn))如上進(jìn)行CPE抑制測(cè)試后,再使用“Microtiter Assay forInterferonMicrospectrophotometric Quantitation of CytopathicEffect,”Appl.Environ.Microbiol.3135-38(1976)中所述的細(xì)胞病變檢測(cè)方法。用EL309型小平板讀出器(Bio-Tek Instruments Inc.)對(duì)試驗(yàn)平板讀數(shù)。如上計(jì)算出ED50值和CD50值。
      藥物制劑的實(shí)施例作為本發(fā)明化合物的口服組合物的具體實(shí)施方案,用50mg實(shí)施例1或?qū)嵤├?的化合物與充分粉碎后的乳糖一起配制制劑,以提供580-590mg的總量,將其裝進(jìn)0號(hào)硬質(zhì)明膠膠囊中。
      雖然對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述并參照其具體實(shí)施方案進(jìn)行了舉例說明,但本領(lǐng)域技術(shù)人員都將意識(shí)到在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下,可以對(duì)其進(jìn)行各種變化、改進(jìn)和替換。例如,根據(jù)需要治療HCV嚴(yán)重傳染的人的反應(yīng)的各種變化的推斷,前文中列出的優(yōu)選劑量以外的有效劑量也是適用的。同樣,所觀察到的藥理學(xué)反應(yīng)也可根據(jù)并依賴所選擇的具體活性化合物或者是否存在藥學(xué)載體以及制劑類型和所用施用方式而變化,根據(jù)本發(fā)明的目的和實(shí)踐可預(yù)料這些預(yù)期的變化或結(jié)果差異。因此,本發(fā)明僅由所附權(quán)利要求的范圍限定,這些權(quán)利要求適當(dāng)?shù)乇3州^寬的范圍。
      權(quán)利要求
      1.結(jié)構(gòu)式I的核苷化合物 及其藥學(xué)上可接受的鹽;其中R1是氫或者氟;R2是氟或者羥基;R3是氫,C1-16烷基羰基,C2-18烯基羰基,C1-10烷氧基羰基,C3-6環(huán)烷基羰基,C3-6環(huán)烷氧基羰基,或以下結(jié)構(gòu)式的氨基?;鶜埢?R4是氫,C1-10烷基羰基,磷酰基或其環(huán)狀前藥酯,二磷?;?,三磷?;?,C2-18烯基羰基,C1-10烷氧基羰基,C3-6環(huán)烷基羰基,C3-6環(huán)烷氧基羰基,CH2O(C=O)C1-4烷基,CH(C1-4烷基)O(C=O)C1-4烷基或以下結(jié)構(gòu)式的氨基?;鶜埢?; 以下結(jié)構(gòu)式的殘基 R5是氨基或者羥基;R6是氫,氨基或者氟;R7是氫,C1-5烷基或苯基C0-2烷基;和R8是氫,C1-4烷基,C1-4?;?,苯甲?;1-4烷基氨基羰基,苯基C0-2烷基氨基羰基,C1-4烷基磺?;虮交鵆0-2烷基磺?;?;R9是氫,C1-5烷基,苯基或苯甲基,其中烷基未取代或被一個(gè)選自羥基,甲氧基,氨基,羧基,氨甲?;?,胍基,巰基,甲硫基,1H-咪唑啉基和1H-吲哚-3-基的取代基取代并且其中苯基和苯甲基未取代或被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立選自鹵素,羥基和甲氧基的取代基取代;R10是氫,C1-6烷基,C3-6環(huán)烷基,苯基或苯甲基,其中烷基和環(huán)烷基未取代或被一個(gè)至3個(gè)獨(dú)立選自鹵素,羥基,羧基,C1-4烷氧基的取代基取代并且其中苯基和苯甲基未取代或被一個(gè)至三個(gè)獨(dú)立選自鹵素,羥基,氰基,C1-4烷氧基和三氟甲基的取代基取代;Ar是未取代的苯基或被一個(gè)至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素,C1-4烷基,C1-4烷氧基,C1-4烷硫基,氰基,硝基,氨基,羧基,三氟甲基,C1-4烷基氨基,二(C1-4烷基)氨基,C1-4烷基羰基,C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基;條件是當(dāng)R1,R3,R4,和R6是氫并且R2是羥基時(shí),R5不是氨基。
      2.權(quán)利要求1的化合物,其中R1是氫;R2是羥基;R3和R4是氫。
      3.權(quán)利要求1的化合物,其中R1是氫;R2是氟;R3和R4是氫。
      4.權(quán)利要求1的化合物,是 2,4-氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶; 2-氨基-5-氟-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶--4(3H)-酮; 2,4-二氨基-5-氟-7-(2-氟-2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶; 4-氨基-5-氟-7-(2-氟-2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-; 2-氨基-5-氟-7-(2-氟-2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶--4(3H)-酮;及其藥學(xué)上可接受的鹽。
      5.包括權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
      6.權(quán)利要求1的化合物治療哺乳動(dòng)物丙型肝炎病毒感染的用途。
      7.權(quán)利要求1的化合物制備用于治療哺乳動(dòng)物丙型肝炎病毒感染的藥物的用途。
      全文摘要
      本發(fā)明是RNA-依賴性RNA病毒聚合酶抑制劑的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物。這些化合物是RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制的抑制劑并且可用于治療RNA-依賴性RNA病毒病毒感染。特別地,它們可用作丙型肝炎病毒(HCV)NS5B聚合酶的抑制劑,用作HCV復(fù)制的抑制劑的前體,和/或用于治療丙型肝炎病毒感染。本發(fā)明還描述了含有單獨(dú)此類氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷化合物或與其它對(duì)抗RNA-依賴性RNA病毒感染,特別是HCV感染的活性劑組合的該化合物的藥物組合物。還公開了使用本發(fā)明的氟化吡咯并[2,3-d]嘧啶核苷抑制RNA-依賴性RNA病毒聚合酶,抑制RNA-依賴性RNA病毒復(fù)制,和/或治療RNA-依賴性RNA病毒感染的方法。
      文檔編號(hào)C07H19/14GK101043893SQ200580036083
      公開日2007年9月26日 申請(qǐng)日期2005年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月21日
      發(fā)明者M·麥科斯, D·B·奧爾森, J·萊奧內(nèi), P·L·杜雷特 申請(qǐng)人:默克公司
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