專利名稱：：抗腫瘤化合物的制作方法抗腫瘤化合物發(fā)明領(lǐng)城本發(fā)明涉及新穎的抗腫瘤化合物，含有所述化合物的藥物組合物，以及所述化合物作為抗腫瘤劑的用途。發(fā)明背景已顯示若千對(duì)稱二聚大環(huán)內(nèi)酯具有抗腫瘤、抗病毒和/或抗真菌性質(zhì)。具體地，Kitagawa等人(Chem.Pharm.Bull.,1994，42(1)，19-26)分離了沖繩海綿7%eo"e//a;nW"/ioez'的若干對(duì)稱二聚大環(huán)內(nèi)酯9CH39°H36r26ch3swinholideA(1》R1=R2=CH3isoswinholideA(4)swinholideB(2;:R^H，R2=CH3swinholideC(3):R^CH;已顯示swinholideA(1)、B(2)和C(3)對(duì)L1210和KB細(xì)胞具有有效的細(xì)胞毒性，其ICso值分別為0.03jHg/mL、0.30pg/mL和0.14pg/mL(對(duì)L1210)以及0.04/Ag/mL、0.04pg/mL和0.05pig/mL(對(duì)KB)。然而，觀察到isoswinholideA(4)顯示低于其它前述類似物的細(xì)胞毒性[10501.35/ig/mL(L1210)和1.1ptg/mL(KB)]。Kitagawa等人還考察了由SwinholideA(l)衍生的數(shù)種二聚體的細(xì)胞毒性6CH8:R^R2-R^HO9:R1=H，R2,R3=-C(CH3)2-觀察到兩種二聚體(8和9)在KB細(xì)胞中均顯示不足的生長(zhǎng)抑制能力(50ptg/mL下51.1%抑制以及10/ig/mL下19.3%抑制)。從SwinholideA(l)獲得的其它二聚大環(huán)內(nèi)酯如下這些化合物(10-13)對(duì)L1210和KB細(xì)胞的細(xì)胞毒性低于SwinholideA(l)所顯示的細(xì)胞毒性。Kitagawa等人平行考察了SwinholideA(l)及其異構(gòu)體在CDF1小鼠中對(duì)P388白血病的抗肺瘤作用。出乎意料地觀察到SwinholideA(1)、isoswinholideA(4)及其異構(gòu)體(11)是有毒的并且沒(méi)有顯示有希望一蕓-:〈o------:的抗腫瘤活性。此外，專利申請(qǐng)WO88/00195描述了從77^0/^/^屬的海綿中提取的下列化合物(MisakinolideA(14)及衍生物(15)):在所述專利申請(qǐng)中，描述了MisakinolideA(14)對(duì)P388、HCT-8、A549和MDA-MB-231癌細(xì)胞的體外抗胖瘤活性。類似地，還描述了MisakinolideA除了具有有效的細(xì)胞毒性[ICso0.035/ig/mL(L1210)]之外，還具有抗腫瘤活性[在0.1mg/kg(小鼠)的劑量下對(duì)P388白血病的T/C140%](Chem.Pharm.Bull.,1994,42(1)，19-26)。癌癥始終是引起動(dòng)物和人死亡的主要原因之一。已經(jīng)進(jìn)行了并將繼續(xù)進(jìn)行巨大的努力以發(fā)現(xiàn)安全有效的新抗腫瘤劑，為增加有效治療患有該病的患者所需的治療武器做貢獻(xiàn)。在這個(gè)意義上，本發(fā)明的目的是解決該問(wèn)題，提供新穎的用于治療癌癥的化合物。發(fā)明概述本發(fā)明的目的在于具有通式I的不對(duì)稱二聚大環(huán)內(nèi)酯，以及其相應(yīng)的藥物可接受的鹽、衍生物、前藥和立體異構(gòu)體，其中，Rw6基團(tuán)獨(dú)立地選自氫、保護(hù)的或未保護(hù)的羥基、取代的或未取代的d-C24烷基、取代的或未取代的C2-C24烯基、取代的或未取代的C2-C24炔基、=0、ORa、OCORa、NRaRb、NRaCORb、CONRaRb、CORa、COORa或卣素；X和Y基團(tuán)獨(dú)立地選自取代的或未取代的d-C24烷基、取代的或未取代的CVC24烯基、取代的或未取代的CrC24炔基、=0、ORa、OCORa、NRaRb、NRaCORb、CONRaRb、CORa、COORa或卣素；Ra和Rb基團(tuán)獨(dú)立地選自氫、囟素、取代的或未取代的CrCn烷基、取代的或未取代的Crd2烯基、取代的或未取代的C2-d2炔基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的雜環(huán)；以及虛線表示任選存在的雙鍵。本發(fā)明還涉及乂人T7^owe〃zWae一牛，7T^owe〃a屬和sw/w/ioe/種的海綿中分離通式I化合物并從所分離的化合物形成衍生物。此外，本發(fā)明還涉及用作藥物的通式I化合物或其藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體。另外，本發(fā)明的目的在于通式I化合物或其藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。本發(fā)明同樣涉及藥物組合物，其包含通式I化合物或其對(duì)應(yīng)的藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體之一，以及藥物可接受的賦形劑或稀釋劑。發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明的化合物目標(biāo)對(duì)應(yīng)于通式I的不對(duì)稱二聚大環(huán)內(nèi)酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中Rw6基團(tuán)獨(dú)立地選自氫、保護(hù)的或未保護(hù)的羥基、取代的或未取代的d-C24烷基、取代的或未取代的C2-C24烯基、取代的或未取代的C2誦C24炔基、=0、ORa、OCORa、NRaRb、NRaCORb、CONRaRb、CORa、COORa或卣素；X和Y基團(tuán)獨(dú)立地選自取代的或未取代的d-C24烷基、取代的或未取代的C2-C24烯基、取代的或未取代的C2-C24炔基、=0、ORa、OCORa、NRaRb、肌CORb、CONRaRb、CORa、COORa或卣素；Ra和Rb基團(tuán)獨(dú)立地選自氫、鹵素、取代的或未取代的C廣d2烷基、取代的或未取代的Crd2烯基、取代的或未取代的C2-C!2炔基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的雜環(huán)；以及虛線表示任選存在的雙鍵。在這些化合物中，所述基團(tuán)或取代基能夠根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)選擇術(shù)語(yǔ)烷基表示具有1至24個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的碳鏈。優(yōu)選1至6個(gè)碳原子的烷基基團(tuán)，并且尤其優(yōu)選由1、2、3或4個(gè)碳原子構(gòu)成的烷基基團(tuán)。曱基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基和叔丁基基團(tuán)是本發(fā)明化合物中尤其優(yōu)選的烷基基團(tuán)。同樣地，本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)烷基涉及環(huán)狀和非環(huán)狀基團(tuán)，考慮到環(huán)狀基團(tuán)會(huì)在環(huán)中包含至少3個(gè)碳原子。其它優(yōu)選的烷基基團(tuán)是那些具有5至12個(gè)碳原子的烷基基團(tuán)，尤其優(yōu)選由6、7、8、9或IO個(gè)碳原子組成的烷基基團(tuán)。己基、庚基、1，3-二曱基戊基、辛基、1，3-二曱基己基和壬基基團(tuán)是本發(fā)明化合物中尤其優(yōu)選的烷基基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)烯基和炔基表示含有2至24個(gè)碳原子并包括一個(gè)或多個(gè)不飽和鍵的直鏈或支鏈的不飽和烴基鏈。優(yōu)選具有2至6個(gè)碳原子的烯基和炔基基團(tuán)，并且尤其優(yōu)選由2、3或4個(gè)碳原子構(gòu)成的烯基和炔基基團(tuán)。同樣地，本文所用的術(shù)語(yǔ)烯基和炔基涉及環(huán)狀的和非環(huán)狀的基團(tuán)，考慮到環(huán)狀基團(tuán)會(huì)在環(huán)中包含至少3個(gè)碳原子。其它優(yōu)選的烯基和炔基基團(tuán)是具有5至12個(gè)碳原子的烯基和炔基基團(tuán)。能夠存在于本發(fā)明化合物中的芳基基團(tuán)包括那些含有一個(gè)或多個(gè)環(huán)的芳基，包括具有分離的或稠合的芳基或雜芳基基團(tuán)的多環(huán)。通常，芳基基團(tuán)在環(huán)中含有1至3個(gè)環(huán)和4至18個(gè)碳原子。優(yōu)選的芳基基團(tuán)包括苯基、萘基、聯(lián)苯基、菲基和蒽基，所有基團(tuán)均可為取代的或未取代的。能夠存在于本發(fā)明化合物中的雜環(huán)基團(tuán)包括雜芳基和雜脂環(huán)基基團(tuán)。雜芳基基團(tuán)含有1個(gè)、2個(gè)或3個(gè)選自N、O或S的雜原子，并且包括例如優(yōu)選為8-香豆素基的香豆素基、優(yōu)選為8-喹啉基的喹啉基、p比咬基、哌嗪基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、巧l哚基、苯并呋喃基、和苯并噻唑基。雜脂環(huán)基團(tuán)含有1個(gè)、2個(gè)或3個(gè)選自N、O或S的雜原子，并且包括例如四氫吹喃基、四氫吡喃基、哌啶基、嗎啉基和吡咯烷基。雜環(huán)基團(tuán)能夠是取代的和未取代的。前述基團(tuán)能夠任選地在其一個(gè)或若干個(gè)可用的位置獨(dú)立地被一個(gè)或若干個(gè)適當(dāng)?shù)娜〈〈?，所述取代基例如OR，、=0、SR，、SOR，、S02R，、N02、NHR，、N(R，)2、=N-R，、NHCOR，、N(COR，)2、NHS02R，、NR，C(=NR，)NHR，、CN、卣素、C(K))R，、COOR，、OC(=0)R，、CONHR，、CON(R，)2、取代的或未取代的C廣Cn烷基、取代的或未取代的C2-C12烯基、取代的或未取代的C2-Cn炔基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的雜環(huán)，其中每一基團(tuán)R，獨(dú)立地選自H、OH、N02、NH2、SH、CN、卣素、=0、C(=0)H、C(O)烷基、COOH、取代的或未取代的d-Cn烷基、取代的或未取代的Crd2烯基、取代的或未取代的C2-C,2炔基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的雜環(huán)。能夠存在于本發(fā)明化合物中的卣素取代基包括F、Cl、Br和I。在這些基團(tuán)依次被取代的情況下，相應(yīng)的取代基能夠選自本文所述的取代基名單。羥基基團(tuán)能夠被任選地保護(hù)。有大量羥基保護(hù)基團(tuán)，并且其是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。作為指南，參見(jiàn)Protectinggroups(保護(hù)基團(tuán))，Kocienski，2004，第3版。術(shù)語(yǔ)"藥物可接受的鹽、衍生物、前藥"涉及任何藥物可接受的鹽、酯、溶劑化物、水合物或任何其它化合物，其在給予患者之后能夠(直接或間接)提供通式I化合物。然而，必須考慮到，非藥物可接受的鹽也在本發(fā)明的范圍內(nèi)，這是由于它們能夠用于制備藥物可接受的鹽。鹽、前藥和衍生物的制備能夠通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行。例如，本發(fā)明化合物的藥物可接受的鹽通過(guò)常規(guī)化學(xué)方法從具有酸或堿單元的相應(yīng)化合物獲得。通常，通過(guò)例如使所述化合物的相應(yīng)的堿形式或游離酸在水、有機(jī)溶劑或二者的混合物中與化學(xué)計(jì)量量的適當(dāng)?shù)膲A或酸反應(yīng)而制備所述的鹽。通常，優(yōu)選的非水介質(zhì)為醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。酸加合鹽包括無(wú)機(jī)酸加合鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽和磷酸鹽；以及有機(jī)酸加合鹽，例如乙酸鹽、三氟乙酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、蘋果酸鹽、扁桃酸鹽、曱烷磺酸鹽和對(duì)曱苯磺酸鹽。堿加合鹽包括無(wú)機(jī)鹽，例如鈉、鉀、鈣和銨鹽；以及有機(jī)鹽，例如乙二胺、乙醇胺、N，N-二亞烷基乙醇胺、三乙醇胺和堿性氨基酸鹽。本發(fā)明化合物能夠是游離化合物和溶劑化物(例如水合物)的結(jié)晶形式，其中兩種形式均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。溶劑化方法是本領(lǐng)域公知的。作為通式I化合物的前藥的任何化合物均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。術(shù)語(yǔ)"前藥"以其最廣的含義使用，并且包含所有那些在體內(nèi)容易被轉(zhuǎn)化為任何本發(fā)明化合物的衍生物。本領(lǐng)域技術(shù)人員均知曉能夠包括哪些衍生物，并包括例如這樣的化合物，其中游離羥基基團(tuán)被轉(zhuǎn)化為酯衍生物，或酯通過(guò)酯交換反應(yīng)被修飾，或形式適當(dāng)?shù)孽０贰Ｓ赏ㄊ絀表示的本發(fā)明化合物具有多于一個(gè)的手性中心，因此本發(fā)明同樣涉及能夠設(shè)計(jì)出的每一種可能的對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體，以及當(dāng)分子中存在雙鍵時(shí)能夠形成的可能的Z和E立體異構(gòu)體。所述化合物的純異構(gòu)體和異構(gòu)體的混合物均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括這樣的化合物，其中Rw6基團(tuán)獨(dú)立地選自氫、保護(hù)的或未保護(hù)的羥基、ORa、OCORa、=0、NRaRb、NRaCORb、卣素或者取代的或未取代的C!-C24烷基，其中Ra如前文所定義。尤其優(yōu)選的化合物中，RL7和Rw5基團(tuán)獨(dú)立地選自氫、羥基、CrQ烷基或ORa;以及其中優(yōu)選氫、羥基、曱基或曱氧基。同樣，Rg和R!6基團(tuán)優(yōu)選為=0。優(yōu)選地，X和Y基團(tuán)獨(dú)立地選自取代的或未取代的Cs-d2烷基或取代的或未取代的Cs-Cn烯基。尤其優(yōu)選其獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)適當(dāng)?shù)娜〈〈?，并且具體地被一個(gè)或多個(gè)下列取代基取代OH、OR，、NHCOR，或取代的或未取代的雜環(huán)，其中R，如前文所定義。更優(yōu)選地，X和Y由被一個(gè)或多個(gè)羥基基團(tuán)和/或取代的雜環(huán)取代的CVd2烷基基團(tuán)構(gòu)成。尤其優(yōu)選X和Y是通式I中的虛線指示的那些位置中雙鍵的存在是優(yōu)選的。下列化合物是本發(fā)明尤其優(yōu)選的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>化合物A化合物A是從海綿中、尤其是從7T^o"e〃asw/"AoeZ種的海綿(綱Demospongiae,亞纟岡Tetractinomorpha，目Lithistida，亞目Triaenosina,科Theonellidae)中分離的天然產(chǎn)物。所述生物體在格洛里厄斯群島(馬達(dá)加斯加西北)采集。該海綿物種在西太平洋、印度洋和紅海中是常見(jiàn)的，位于海岸以外高達(dá)48m深度。樣本發(fā)現(xiàn)于-肯尼亞蒙巴薩，貝殼海灘之外，暗礁的外斜面中，12m至16m的深度，誦北肯尼亞海岸(02O25.5，S-40。52.5，E,位于48m的深度)，-Ifaty地區(qū)的Tulear(馬達(dá)力o斯力口)，-阿爾達(dá)布拉群島(馬達(dá)加斯加西北)，-Ternate、西里伯斯島、安汶、馬尼拉、福摩薩(Filipinas)、臺(tái)灣。此外，本領(lǐng)域任何技術(shù)人員能夠通過(guò)例如酸或堿水解、氧化、酯化、醇醛縮合、臭氧分解、Wittig反應(yīng)、Horner-Emmons反應(yīng)、Sharpless環(huán)氧化反應(yīng)或Pictet-Spengler反應(yīng)合成所述化合物的類似物?；衔顰及其類似物的合成能夠通過(guò)例如對(duì)于適當(dāng)保護(hù)的SwinholideA和MisakinolideA單體單元所述的合成方法，隨后進(jìn)4亍大環(huán)內(nèi)脂化反應(yīng)以獲4尋化合物A及類似物(參見(jiàn)K國(guó)S.YeungandI.Paterson.CAem./"LW.2002，仏4632-4653)。本發(fā)明化合物的重要方面是其生物活性以及特別是其細(xì)胞毒性。因此，本發(fā)明提供具有細(xì)胞毒性的通式I化合物的新穎的藥物組合物，以及其作為抗腫瘤劑的用途。此外，本發(fā)明還提供包含本發(fā)明化合物或藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體與藥物可接受的賦形劑或稀釋劑的藥物組合物。藥物組合物的實(shí)例包括任何用于口服、局部或腸胃外給藥的固體(片劑、丸劑、膠嚢、顆粒劑等)或液體(溶液、混懸液或乳液)組合物。含有本發(fā)明化合物的藥物組合物還能夠被配制為脂質(zhì)體或納米球的形式、緩釋制劑形式或任何其它常規(guī)釋放體系的形式。能夠通過(guò)任何通常的方法，如通過(guò)靜脈輸注、口服制劑和/或腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)給藥進(jìn)行本發(fā)明的化合物或組合物的給藥。優(yōu)選地，所用的輸注時(shí)間不超過(guò)24小時(shí)，優(yōu)選1至12小時(shí)，甚至更優(yōu)選1至6小時(shí)。尤其期望短的輸注時(shí)間，這是由于其允許進(jìn)行治療，而不需在醫(yī)院中過(guò)夜。然而，若有必要，能夠使用12至24小時(shí)，包括更長(zhǎng)的輸注時(shí)間。能夠以適當(dāng)?shù)拈g隔進(jìn)行輸注，例如1至4周。所述化合物的正確劑量根據(jù)所用的制劑類型、應(yīng)用形式和位置、待治療的宿主和腫瘤而變化。還必須考慮到其它因素，例如年齡、體重、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄率、宿主的健康狀況、活性成分的聯(lián)合、在反應(yīng)和疾病方面的敏感性。能夠在最大耐受劑量范圍內(nèi)連續(xù)或周期性進(jìn)行給藥。在聯(lián)合療法中，本發(fā)明的化合物和組合物能夠與其它活性成分共同使用。所述其它活性成分能夠形成同一組合物的一部分，或能夠以不同組合物的方式提供，同時(shí)或不同時(shí)給藥。實(shí)施例實(shí)施例l:生物體和采集地點(diǎn)的描述2003年11月，通過(guò)在格洛里厄斯群島(馬達(dá)加斯加西北，印度洋西部)潛水至18m的深度采集海綿7%eo"e//asvW"/zoe/的若干樣品。釆樣地點(diǎn)的坐標(biāo)為綿度11。34，995"S和經(jīng)度47。16'829"E。海床為沙石的，并且樣品的基質(zhì)是石。生物體的描述塊狀海綿。上表面支撐若干個(gè)圓形開(kāi)口(排水孔)。表面光滑并且硬度很硬，然而保存的樣本很脆?；詈＞d的顏色是棕色的并且其內(nèi)部是淡米黃色的。真皮膜是均勾多孔的。該物種容易通過(guò)骨架元素表征。骨架由接近表面切向定向的圓線蟲(chóng)的不規(guī)則束以及稀有的分支骨針(desmas)形成。領(lǐng)細(xì)胞層骨架由四氮腙骨針構(gòu)成，其能夠是光滑的或長(zhǎng)有少許小瘤。實(shí)施例2:分離化合物A將實(shí)施例1的海綿的冷凍樣品(604g)分割成塊并用水萃取(3x500mL)、然后用MeOH:CH2Cl2混合物萃取(50:50,3x500mL)。將合并的有機(jī)萃取液濃縮以得到殘余物(7.48g)，使用從H20:MeOH至CH2C12的梯度將其在LichroprepRP-18的VLC中分餾。從用MeOH洗脫的餾分中分離化合物A(5.8mg)，將其用半制備HPLC純化(SymmetryPrepC國(guó)18，7/xm，7.8mmxl50mm，H20:CH3CISNiML，UV檢測(cè))以得到含有化合物A的餾分，將其通過(guò)半制備HPLC再次純化(SymmetryPrepC-18，719mmxl50mm,梯度H20:CH3CN,UV檢測(cè))。化合物A:MS(ESI)=1362(M+)。MS(APCI)=1345(M+l-H20)+。^和13CNMR參見(jiàn)表1。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>化合物A表1.化合物A的和13CNMR數(shù)據(jù)(CD30D)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>框中的上標(biāo)意思是化學(xué)位移的值能夠是可互換的。實(shí)施例3:抗腫瘤活性的生物測(cè)定抗腫瘤活性的生物測(cè)定允許在人類來(lái)源的腫瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)物中檢測(cè)萃取物或化合物的細(xì)胞毒性(細(xì)胞死亡)或抑制細(xì)胞活性(生長(zhǎng)抑制)。細(xì)胞系名稱ATCC號(hào)物種組織特性A549CCL-185人HT29HTB-38人MDA-MB-231HTB-26人肺"NSCL"肺癌結(jié)腸結(jié)腸腺癌乳乳腺癌Her2/neu+(胸腔積液)通過(guò)比色測(cè)定研究細(xì)胞生長(zhǎng)抑制用磺酰若丹明B(SRB)通過(guò)比色測(cè)定對(duì)體外細(xì)胞生長(zhǎng)進(jìn)行定量(按照PhilipSkehanWa/.1990，J.Natl.CancerInst"82:1107-1112的前述方法進(jìn)行調(diào)整)。該類測(cè)定使用96孔培養(yǎng)微孔板(Mosmann,1983，F(xiàn)aircloth，1988)。所用的大多數(shù)細(xì)胞系得自美國(guó)典型菌種收藏所(ATCC)并衍生自不同類型的人類腫瘤。于37°C、5%C02和98%濕度下將細(xì)胞培養(yǎng)物保持在DMEM培養(yǎng)基(補(bǔ)充有10。/。胎牛血清(FBS)、1%青霉素/鏈霉素、1%谷氨酰胺)中。為了測(cè)定，將細(xì)胞進(jìn)行胰蛋白酶消化并根據(jù)細(xì)胞系以不同濃度接種在96孔微孔板中，并且在不含活性成分的培養(yǎng)基中孵育24小時(shí)以穩(wěn)定化。然后用載體(DMSO:DMEM，l:l)或活性成分處理培養(yǎng)物(最終濃度根據(jù)測(cè)定的類型而變化)。暴露于活性成分48小時(shí)后，通過(guò)前述SRB方法測(cè)量抗腫瘤作用，其基本上由下列步驟組成用1%戊二醛溶液固定細(xì)胞(30min,RT)，在PBS中洗滌固定劑(3次洗滌，RT),用0.4%SRB溶液對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行染色(30min，RT)，在1%乙酸溶液中洗滌著色劑(3次洗滌，RT)，將板空氣干燥以及最終用Tris緩沖液萃取著色劑。通過(guò)在490nm的單一波長(zhǎng)下將板在分光光度微孔板讀數(shù)器中讀取光密度而進(jìn)行測(cè)定的定量。為了從獲得的光密度值來(lái)估計(jì)細(xì)胞生長(zhǎng)，應(yīng)用了算法(等同于NCI的抗腫瘤篩選程序中所應(yīng)用的算法)，其允許在存在或不存在被討論的活性成分時(shí)計(jì)算相對(duì)于時(shí)間0(實(shí)驗(yàn)開(kāi)始)的生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)。所計(jì)算的對(duì)活性成分的細(xì)胞響應(yīng)參數(shù)如下GIso-導(dǎo)致50%生長(zhǎng)抑制的濃度，TGI=導(dǎo)致總生長(zhǎng)抑制的濃度(生長(zhǎng)抑制作用)以及LC5Q=導(dǎo)致50%細(xì)胞死亡的濃度(細(xì)胞毒性作用)。表2顯示化合物A的生物活性數(shù)據(jù)。表2.抗腫瘤活性數(shù)據(jù)(摩爾濃度)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>權(quán)利要求1.通式I化合物或其藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體，其中R1-16基團(tuán)獨(dú)立地選自氫、保護(hù)的或未保護(hù)的羥基、取代的或未取代的C1-C24烷基、取代的或未取代的C2-C24烯基、取代的或未取代的C2-C24炔基、＝O、ORa、OCORa、NRaRb、NRaCORb、CONRaRb、CORa、COORa或鹵素；X和Y基團(tuán)獨(dú)立地選自取代的或未取代的C1-C24烷基、取代的或未取代的C2-C24烯基、取代的或未取代的C2-C24炔基、＝O、ORa、OCORa、NRaRb、NRaCORb、CONRaRb、CORa、COORa或鹵素；Ra和Rb基團(tuán)獨(dú)立地選自氫、鹵素、取代的或未取代的C1-C12烷基、取代的或未取代的C2-C12烯基、取代的或未取代的C2-C12炔基、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的雜環(huán)；以及虛線表示任選存在的雙鍵。2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中Rw6基團(tuán)獨(dú)立地選自氫、保護(hù)的或未保護(hù)的羥基、ORa、OCORa、=0、NRaRb、NRaCORb、卣素或取代的或未取代的CrC24烷基。3.如權(quán)利要求2所述的化合物，其中Rw和119-15基團(tuán)獨(dú)立地選自氫、羥基、CVC6烷基或ORa。4.如權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的化合物，其中Rg和5.如權(quán)利要求1至4中任一權(quán)利要求所述的化合物，其中X和Y基團(tuán)獨(dú)立地選自取代的或未取代的C5-C12烷基或取代的或未取代的C5陽(yáng)C12歸基。6.如權(quán)利要求5所述的化合物，其中X和Y基團(tuán)獨(dú)立地選自Cs-Q2烷基或(:5-(:12烯基，其被一個(gè)或若干個(gè)下列取代基取代OH、OR，、NHCOR，或取代的或未取代的雜環(huán)，其中R，選自H、OH、N02、NH2、SH、CN、卣素、=0、C(=0)H、C(-O)烷基、COOH、取代的或未取代的C,-d2烷基、取代的或未取代的Qrd2烯基、取代的或未取代的C2-C12炔基、或取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的雜環(huán)。7.如權(quán)利要求6所述的化合物，其中X和Y為Cs-d2烷基基團(tuán)，其被一個(gè)或若干個(gè)羥基基團(tuán)和/或取代的雜環(huán)取代。8.如權(quán)利要求1至7中任一權(quán)利要求所述的化合物，其具有下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>9.獲得任一前述權(quán)利要求所定義的化合物的方法，包括從rAeoe〃asiWw/ioez'物種的生物體的提取和分離。10.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至8中任一權(quán)利要求所述化合物或其藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體和藥物可接受的賦形劑或稀釋劑。11.用作藥物的通式I化合物或其藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體。12.通式I化合物或其藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及下列通式的新穎的抗腫瘤化合物以及其相應(yīng)的藥物可接受的鹽、衍生物、前藥和立體異構(gòu)體。通過(guò)從Theonellidae科，Theonella屬和swinhoei種中分離海綿，并從所分離的化合物形成衍生物，能夠獲得這些化合物。這些化合物具有細(xì)胞毒性活性并能夠被用于治療癌癥。文檔編號(hào)C07D493/18GK101331137SQ200680047130公開(kāi)日2008年12月24日申請(qǐng)日期2006年12月14日優(yōu)先權(quán)日2005年12月15日發(fā)明者勞拉·克爾羅莫利納羅,安德烈斯·弗蘭切斯基索洛索,瑪·赫蘇斯·馬丁洛佩斯,瑪麗亞·德?tīng)柨ㄩT·奎瓦斯馬昌特,約瑟·費(fèi)爾南多·雷耶斯貝尼特斯,羅格利奧·費(fèi)爾南德斯羅德里庫(kù)斯申請(qǐng)人:馬爾藥品公司