專利名稱：1－芳甲基－3－芳基－1h－吡唑－5－碳酰肼衍生物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及吡唑碳酰肼衍生物及其制備方法與應(yīng)用，尤其涉及1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物及其合成、分離、純化方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
吡唑衍生物和碳酰肼衍生物是兩類非常重要的化合物，在新藥開發(fā)中受到廣泛關(guān)注。
吡唑類化合物具有消炎、止痛、退熱、抑菌、殺菌、抗高血糖、抗癌、抗凝血劑等藥理活性，例如在專利JP5017470、US5134142、WO96/03385中描述的吡唑衍生物具有消炎、抗風(fēng)濕、抗細(xì)菌、抗病毒的藥理活性；專利US4000281所涉及的4，5-芳基/雜環(huán)芳基取代的吡唑具有抗RNA和DNA病毒例如黏病毒、腺病毒、鼻病毒以及各種皰疹病毒的活性；專利號為US3984431的專利所涉及的吡唑-5-醋酸化合物，尤其是1-叔丁基-3，4-二苯基-1H吡唑-5-醋酸具有消炎藥理活性。另外，吡唑衍生物還可以作為細(xì)胞及酶的抑制劑，在專利JP5345772、WO97/01551、US 5559137、EP115640中均有涉及。而在專利WO02076949中也涉及到對治療精神病和神經(jīng)錯亂有很好藥理活性的(4S)-4，5-二氫-1H-吡唑衍生物。在其他方面，專利WO92/19615、EP515041所涉及的吡唑化合物及嘧啶取代的新型吡唑衍生物在農(nóng)業(yè)上具有殺真菌的藥理活性，而專利JP4145081中吡唑羧酸衍生物可以作為除草劑來應(yīng)用。
碳酰肼是一種重要的化工中間體，可用于醫(yī)藥、除草劑、植物生長調(diào)節(jié)劑、染料等行業(yè)，如專利US 4269717、US 4259717、EP0103400、US5078966中所涉及的碳酰肼化合物。而用碳酰肼作配體，可制備多種化合物，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、石油、國防等工業(yè)中。在生物醫(yī)藥方面，碳酰肼衍生物的藥理活性報道較少。以前的研究表明碳酰肼衍生物可抑制蛋白酶，用于治療骨質(zhì)疏松，牙齦疾病包括牙齦炎、牙周炎，關(guān)節(jié)炎惡性腫瘤和骨代謝疾病等，如專利號為US6284777，US2002077455的專利所涉及的碳酰肼衍生物；另外碳酰肼衍生物還具有抗腫瘤活性，如專利號為US4166810，DK14083的專利所涉及的碳酰肼衍生物。
在結(jié)構(gòu)修飾方面通過藥效基團的合理搭配往往可以得到更好的生物活性，文獻檢索表明，目前吡唑碳酰肼衍生物鮮有報道，尤其未見有關(guān)于1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物和應(yīng)用或與其相關(guān)內(nèi)容的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種吡唑碳酰肼衍生物1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物及其合成、分離、純化方法與其在誘導(dǎo)人肺癌A549細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑5-碳酰肼衍生物用下述通式(I)表示 其中R1代表氫、C1～4烷基、烷氧基、鹵素、硝基之一；R2代表氫、C1～4烷基、烷氧基、鹵素、硝基之一；X代表碳、氮之一。
上述的化合物中R1優(yōu)選氫或者C1～4烷基、烷氧基、鹵素之一；R2優(yōu)選氫或者C1～4烷基、烷氧基、鹵素、硝基之一；X代表碳或者氮。
具體地說，上文所述的化合物中R1代表氫，2-甲基，2-乙基，2-丙基，2-異丙基，2-丁基，2-異丁基，2-叔丁基，2-仲丁基，4-甲基，4-乙基，4-丙基，4-異丙基，4-丁基，4-異丁基，4-叔丁基，4-仲丁基，2-甲氧基，2-乙氧基，4-甲氧基，4-乙氧基，2-氯，2-溴，4-氯，4-溴之一；R2代表氫，2-甲基，2-乙基，2-丙基，2-異丙基，2-丁基，2-異丁基，2-叔丁基，2-仲丁基，4-甲基，4-乙基，4-丙基，4-異丙基，4-丁基，4-異丁基，4-叔丁基，4-仲丁基，2-甲氧基，2-乙氧基，4-甲氧基，4-乙氧基，2-氯，2-溴，4-氯，4-溴，2-硝基，4-硝基之一；X代表碳或者氮。
其中R1優(yōu)選氫、烷氧基、Cl、Br之一；R2優(yōu)選氫、叔丁基、Cl、Br、NO2之一；X代表碳或者氮。
其中R1進一步優(yōu)選H、OCH3、Cl之一；R2進一步優(yōu)選H、C(CH3)3、Cl、NO2之一；
X代表碳或者氮。
其中R1最優(yōu)選H、OCH3、Cl之一；R2最優(yōu)選H、C(CH3)3、Cl之一；X代表碳或者氮。
本發(fā)明所述的通式(I)化合物1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物制備方法，包括下述步驟將芳甲基氯與3-芳基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯以摩爾數(shù)比為1～3∶1的比例加入到極性溶劑中，以等摩爾比為吡唑化合物的量加入縛酸劑，在回流溫度下，反應(yīng)2～10小時；減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮；濃縮物用硅膠柱層析分離，所用展開劑為石油醚/乙酸乙酯，其體積比是2∶1，得到1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯的衍生物；將得到的1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯衍生物與80％的水合肼以其摩爾數(shù)比為1∶5～25的比例加入到極性溶劑中，回流反應(yīng)1～5小時；靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用乙醇重結(jié)晶制得高純度1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物。
在上述化合物的制備方法中所述的芳甲基氯與3-芳基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯摩爾數(shù)之比優(yōu)選為1∶1；所述的1-芳甲基-3-芳基吡唑-5-羧酸乙酯衍生物與水合肼的摩爾數(shù)之比優(yōu)選為1∶20。
在上述化合物的制備方法中所述的極性溶劑是甲醇，乙腈，乙醇之一。
在上述化合物的制備方法中所述的縛酸劑是碳酸鍶，碳酸鈉，碳酸鉀之一。
其中所述的縛酸劑是碳酸鉀。
上述通式(I)所示化合物的制備反應(yīng)式如下 本發(fā)明所述的化合物1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物在制備促進人肺癌A549細(xì)胞凋亡藥物中的應(yīng)用。
經(jīng)實驗證實本發(fā)明所述1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物在誘導(dǎo)人肺癌A549細(xì)胞凋亡中具有重要作用，具備很大的應(yīng)用開發(fā)前景。
具體實施方案實施例11-芐基-3-苯基-1H-吡唑-5-碳酰肼的制備1)在100毫升的圓底燒瓶中加入0.690克碳酸鉀(0.005摩爾)，1.080克3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0.005摩爾)，0.633克芐基氯(0.005摩爾)以及乙腈(25毫升)，裝置回流冷凝器，上部接干燥管。加熱回流8小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯(30毫升)溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮，用乙酸乙酯-石油醚(V/V＝1/2)作洗脫劑硅膠柱色譜分離剩余物(100～200目硅膠)，得到1-芐基-3-苯基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯，產(chǎn)率為79％。
2)在0.336克(0.001摩爾)1-芐基-3-苯基1H-吡唑-5-羧酸乙酯的甲醇(5毫升)溶液中加入1.2毫升80％的水合肼，攪拌回流反應(yīng)4小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用8毫升乙醇重結(jié)晶制得高純度1-芐基-3-苯基-1H-吡唑-5-碳酰肼，產(chǎn)率為93％。
結(jié)構(gòu)式如下 分子式C17H16N4O分子量292.34性狀白色固體熔點132-133℃核磁共振數(shù)據(jù)如下1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ4.03(s，2H，NH2)，5.80(s，2H，CH2)，6.80(s，1H，4-H)，7.24-7.43(m，9H，ArH，NH)，7.79(d，J＝7.2Hz，2H，ArH)。
紅外光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr)v3302-3031(NH)，1681(C＝0)cm-1。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下MS(EI)m/z 293.5(M+H)+。
實施例21-(4-叔丁基芐基)-3-苯基-1H-吡唑-5-碳酰肼的制備1)在100毫升的圓底燒瓶中加入0.690克碳酸鉀(0.005摩爾)，1.080克3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0.005摩爾)，0.913克對叔丁基芐基氯(0.005摩爾)以及乙腈(25毫升)，裝置回流冷凝器，上部接干燥管。加熱回流6小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯(30毫升)溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮，用乙酸乙酯-石油醚(V/V＝1/2)作洗脫劑硅膠柱色譜分離剩余物(100～200目硅膠)，得到1-(4-叔丁基芐基)-3-苯基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯，產(chǎn)率為80％。
2)在0.362克(0.001摩爾)1-(4-叔丁基芐基)-3-苯基1H-吡唑-5-羧酸乙酯的甲醇(5毫升)溶液中加入1.2毫升80％的水合肼，攪拌回流反應(yīng)4小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用8毫升乙醇重結(jié)晶制得高純度1-(4-叔丁基芐基)-3-苯基-1H-吡唑-5-碳酰肼，產(chǎn)率為76％。
結(jié)構(gòu)式如下 分子式C21H24N4O分子量348.44性狀白色固體熔點148-149℃核磁共振數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.27(s，9H，3CH3)，4.0l(s，2H，NH2)，5.77(s，2H，CH2)，6.79(s，1H，4-H)，7.24-7.43(m，8H，ArH，NH)，7.79(d，J＝7.8Hz，2H，ArH)。
紅外光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr)v3329-2865(NH)，1663(C＝0)cm-1。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下MS(EI)m/z 349.4(M+H)+。
實施例31-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-苯基-1H-吡唑-5-碳酰肼的制備1)在100毫升的圓底燒瓶中加入0.690克碳酸鉀(0.005摩爾)，1.080克3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0.005摩爾)，0.810克2-氯-5-氯甲基吡啶(0.005摩爾)以及乙腈(25毫升)，裝置回流冷凝器，上部接干燥管。加熱回流4小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯(30毫升)溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮，用乙酸乙酯-石油醚(V/V＝1/2)作洗脫劑硅膠柱色譜分離剩余物(100～200目硅膠)，得到1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-苯基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯，產(chǎn)率為87％。2)在0.341克(0.001摩爾)1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-苯基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯的甲醇(5毫升)溶液中加入1.2毫升80％的水合肼，攪拌回流反應(yīng)1小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用8毫升乙醇重結(jié)晶制得高純度1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-苯基-1H-吡唑-5-碳酰肼，產(chǎn)率為86％。
結(jié)構(gòu)式如下
分子式C16H14ClN5O分子量327.77性狀白色固體熔點152-154℃核磁共振數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.03(s，2H，NH2)，5.79(s，2H，CH2)，6.82(s，1H，4-H)，7.26(d，J＝8.1Hz，1H，PyH)，7.33-7.44(m，4H，ArH，NH)，7.68(dd，J＝2.1，8.1Hz，1H，PyH)，7.77(d，J＝7.2Hz，2H，ArH)，8.45(d，J＝2.1Hz，1H，PyH)。
紅外光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr)v3423-2944(NH)，1676(C＝0)cm-1。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下MS(EI)m/z 328.5(M+H)+。
實施例41-芐基-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼的制備1)在100毫升的圓底燒瓶中加入0.690克碳酸鉀(0.005摩爾)，1.253克3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0.005摩爾)，0.633克芐基氯(0.005摩爾)以及乙腈(25毫升)，裝置回流冷凝器，上部接干燥管。加熱回流8小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯(30毫升)溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮，用乙酸乙酯-石油醚(V/V＝1/2)作洗脫劑硅膠柱色譜分離剩余物(100～200目硅膠)，得到1-苯甲基-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯，產(chǎn)率為83％。
2)在0.340克(0.001摩爾)1-芐基-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯的甲醇(5毫升)溶液中加入1.2毫升80％的水合肼，攪拌回流反應(yīng)4小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用8毫升乙醇重結(jié)晶制得高純度1-芐基-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼，產(chǎn)率為89％。
結(jié)構(gòu)式如下 分子式C17H15ClN4O
分子量326.78性狀白色固體熔點180-182℃核磁共振數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.98(s，2H，NH2)，5.79(s，2H，CH2)，6.77(s，1H，4-H)，7.28-7.29(m，6H，ArH，NH)，7.37(d，J＝8.7Hz，2H，ArH)，7.72(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)。
紅外光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr)v3266-2958(NH)，1630(C＝0)cm-1。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下MS(EI)m/z 327.3(M+H)+。
實施例51-(4-叔丁基芐基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼的制備1)在100mL的圓底燒瓶中加入0.690克碳酸鉀(0.005摩爾)，1.253克3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0.005摩爾)，0.913克對叔丁基芐基氯(0.005摩爾)以及乙醇(25毫升)，裝置回流冷凝器，上部接干燥管。加熱回流5小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯(30毫升)溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮，用乙酸乙酯-石油醚(V/V＝1/2)作洗脫劑硅膠柱色譜分離剩余物(100～200目硅膠)，得到1-(4-叔丁基芐基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯，產(chǎn)率為80％。
2)在0.396克(0.001摩爾)1-(4-叔丁基芐基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯的甲醇(5毫升)溶液中加入1.2毫升80％的水合肼，攪拌回流反應(yīng)5小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用8毫升乙醇重結(jié)晶制得高純度1-(4-叔丁基芐基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼，產(chǎn)率為79％。
結(jié)構(gòu)式如下 分子式C21H23ClN4O分子量382.89性狀白色固體熔點122-124℃核磁共振數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.28(s，9H，3CH3)，4.02(s，2H，NH2)，5.75(s，2H，CH2)，6.76(s，1H，4-H)，7.24-7.31(m，3H，ArH，NH)，7.32(d，J＝8.4，2H，ArH)，7.37(d，J＝8.4，2H，ArH)，7.73(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)。
紅外光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr)v3319-2860(NH)，1654(C＝0)cm-1。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下MS(EI)m/z 383.5(M+H)+(M+H)+。
實施例61-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼的制備1)在100毫升的圓底燒瓶中加入0.690克碳酸鉀(0.005摩爾)，1.253克3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0.005摩爾)，0.810克2-氯-5-氯甲基吡啶(0.005摩爾)以及乙腈(25毫升)，裝置回流冷凝器，上部接干燥管。加熱回流2小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯(30毫升)溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮，用乙酸乙酯-石油醚(V/V＝1/2)作洗脫劑硅膠柱色譜分離剩余物(100～200目硅膠)，得到1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯，產(chǎn)率為90％。
2)在0.376克(0.001摩爾)1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-苯基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯的乙醇(5毫升)溶液中加入1.2毫升80％的水合肼，攪拌回流反應(yīng)1小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用8毫升乙醇重結(jié)晶制得高純度1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼，產(chǎn)率為84％。
結(jié)構(gòu)式如下 分子式C16H13Cl2N5O分子量361.05性狀白色固體熔點192-193℃核磁共振數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.11(s，2H，NH2)，5.78(s，2H，CH2)，6.78(s，1H，4-H)，7.26-7.30(m，2H，ArH，NH)，7.39(d，J＝8.7Hz，2H，ArH)，7.70-7.72(m，3H，ArH，PyH)，8.45(s，1H，PyH)。
紅外光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr) v3299-2936(NH)，1675(C＝0)cm-1。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下
MS(EI)m/z 362.3(M+H)+。
實施例71-芐基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼的制備1)在100毫升的圓底燒瓶中加入0.53克無水碳酸鈉(0.005摩爾)，1.230克3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0.005摩爾)，0.633克芐基氯(0.005摩爾)以及乙腈(25毫升)，裝置回流冷凝器，上部接干燥管。加熱回流10小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯(30毫升)溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮，用乙酸乙酯-石油醚(V/V＝1/2)作洗脫劑硅膠柱色譜分離剩余物(100～200目硅膠)，得到1-苯甲基-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯，產(chǎn)率為87％。2)在0.336克(0.001摩爾)1-芐基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯的甲醇(5毫升)溶液中加入1.2毫升80％的水合肼，攪拌回流反應(yīng)4小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用8毫升乙醇重結(jié)晶制得高純度1-芐基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼，產(chǎn)率為75％。
結(jié)構(gòu)式如下 分子式C18H18N4O2分子量322.36性狀白色固體熔點142-144℃核磁共振數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.84(s，3H，OCH3)，4.01(s，2H，NH2)，5.78(s，2H，CH2)，6.72(s，1H，4-H)，6.94(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.23-7.28(m，6H，ArH，NH)，7.72(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)。
紅外光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr)v3306-2835(NH)，1673(C＝0)cm-1。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下MS(EI)m/z 323.4(M+H)+。
實施例81-(4-叔丁基芐基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼的制備1)在100毫升的圓底燒瓶中加入0.738克碳酸鍶(0.005摩爾)，1.230克3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0.005摩爾)，0.913克對叔丁基芐基氯(0.005摩爾)以及乙腈(25毫升)，裝置回流冷凝器，上部接干燥管。加熱回流5小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯(30毫升)溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮，用乙酸乙酯-石油醚(V/V＝1/2)作洗脫劑硅膠柱色譜分離剩余物(100～200目硅膠)，得到1-(4-叔丁基芐基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯，產(chǎn)率為80％。
2)在0.392克(0.001摩爾)1-(4-叔丁基芐基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5羧酸乙酯的甲醇(5毫升)溶液中加入1.2毫升80％的水合肼，攪拌回流反應(yīng)5小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用8毫升乙醇重結(jié)晶制得高純度1-(4-叔丁基芐基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼，產(chǎn)率為72％。
結(jié)構(gòu)式如下 分子式C22H26N4O2分子量378.47性狀白色固體熔點142-144℃核磁共振數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.27(s，9H，3CH3)，3.84(s，3H，OCH3)，4.01(s，2H，NH2)，5.75(s，2H，CH2)，6.71(s，1H，4-H)，6.93(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.26-7.32(m，5H，ArH，NH)，7.72(d，J＝8.1Hz，2H，ArH)。
紅外光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr)v3325-2867(NH)，1656(C＝0)cm-1。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下MS(EI)m/z 379.6(M+H)+(M+H)+。
實施例91-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-碳酰肼的制備1)在100毫升的圓底燒瓶中加入0.690克碳酸鉀(0.005摩爾)，1.230克3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0.005摩爾)，0.810克2-氯-5-氯甲基吡啶(0.005摩爾)以及乙腈(25毫升)，裝置回流冷凝器，上部接干燥管。加熱回流4小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯(30毫升)溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮，用乙酸乙酯-石油醚(V/V＝1/2)作洗脫劑硅膠柱色譜分離剩余物(100～200目硅膠)，得到1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯，產(chǎn)率為92％。
2)在0.371克(0.001摩爾)1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯的甲醇(5毫升)溶液中加入1.2毫升80％的水合肼，攪拌回流反應(yīng)1小時，反應(yīng)至原料完全消耗，用TLC檢測反應(yīng)終點。靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用8毫升乙醇重結(jié)晶制得高純度1-(3-(6-氯吡啶)甲基)-3-甲氧基苯基-1H-吡唑-5-碳酰肼，產(chǎn)率為86％。
結(jié)構(gòu)式如下 分子式C17H16ClN5O2分子量357.79性狀黃色固體熔點157-159℃核磁共振數(shù)據(jù)如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.84(s，3H，OCH3)，4.01(s，2H，NH2)，5.76(s，2H，CH2)，6.74(s，1H，4-H)，6.94(d，J＝8.4Hz，2H，ArH)，7.25(d，J＝7.8Hz，1H，PyH)，7.42(s，1H，NH)，7.66-7.70(m，3H，ArH，PyH)，8.44(s，1H，PyH)。
紅外光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr)v3410-2834(NH)，1669(C＝0)cm-1。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下MS(EI)m/z 358.5(M+H)+。
實施例101-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物在制備促進人肺癌A549細(xì)胞凋亡藥物中的應(yīng)用。
以常規(guī)方法培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞，選取生長狀態(tài)良好且處于指數(shù)生長期的人肺癌A549細(xì)胞，備用。
應(yīng)用吡唑碳酰肼衍生物1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物對人肺癌A549細(xì)胞進行藥理實驗來說明其在人肺癌A549細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用。
實驗證實本發(fā)明所述1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物對人肺癌A549細(xì)胞凋亡有明顯促進作用。
權(quán)利要求
1.下述通式(I)的化合物， 其中R1代表氫、C1～4烷基、烷氧基、鹵素、硝基之一；R2代表氫、C1～4烷基、烷氧基、鹵素、硝基之一；X代表碳、氮之一。
2.按照權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是R1代表氫，2-甲基，2-乙基，2-丙基，2-異丙基，2-丁基，2-異丁基，2-叔丁基，2-仲丁基，4-甲基，4-乙基，4-丙基，4-異丙基，4-丁基，4-異丁基，4-叔丁基，4-仲丁基，2-甲氧基，2-乙氧基，4-甲氧基，4-乙氧基，2-氯，2-溴，4-氯，4-溴之一；R2代表氫，2-甲基，2-乙基，2-丙基，2-異丙基，2-丁基，2-異丁基，2-叔丁基，2-仲丁基，4-甲基，4-乙基，4-丙基，4-異丙基，4-丁基，4-異丁基，4-叔丁基，4-仲丁基，2-甲氧基，2-乙氧基，4-甲氧基，4-乙氧基，2-氯，2-溴，4-氯，4-溴，2-硝基，4-硝基之一；X代表碳或者氮。
3.按照權(quán)利要求2所述的化合物，其特征是R1代表H、OCH3、Cl之一；R2代表H、C(CH3)3、Cl之一；X代表碳或者氮。
4.權(quán)利要求1～3之一所述的化合物的制備方法，包括下述步驟將芳甲基氯與3-芳基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯以摩爾數(shù)比為1～3∶1的比例加入到極性溶劑中，以等摩爾比為吡唑化合物的量加入縛酸劑，在回流溫度下，反應(yīng)2～10小時；減壓濃縮，去除溶劑，加入乙酸乙酯溶解產(chǎn)物，過濾，濾液濃縮；濃縮物用硅膠柱層析分離，所用展開劑為石油醚/乙酸乙酯，其體積比是2∶1，得到1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯的衍生物；將得到的1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯衍生物與80％的水合肼以其摩爾數(shù)比為1∶5～25的比例加入到極性溶劑中，回流反應(yīng)1～5小時；靜置過夜，析出固體，過濾，減壓抽濾得粗產(chǎn)物；用乙醇重結(jié)晶制得高純度1-芳甲基-3-芳基-1H-吡唑-5-碳酰肼衍生物。
5.如權(quán)利要求4所述的化合物的制備方法，其特征是所述的芳甲基氯與3-芳基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯摩爾數(shù)之比優(yōu)選為1∶1；所述的1-芳甲基-3-芳基吡唑-5-羧酸乙酯衍生物與水合肼的摩爾數(shù)之比優(yōu)選為1∶20。
6.如權(quán)利要求4所述的化合物的制備方法，其特征是所述的極性溶劑是甲醇，乙腈，乙醇之一。
7.如權(quán)利要求4所述的化合物的制備方法，其特征是所述的縛酸劑是碳酸鍶，碳酸鈉，碳酸鉀之一。
8.如權(quán)利要求7所述的化合物的制備方法，其特征是所述的縛酸劑是碳酸鉀。
9.權(quán)利要求1～3中任意一項所述的化合物在制備促進人肺癌A549細(xì)胞凋亡藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)的1－芳甲基－3－芳基－1H－吡唑－5－碳酰肼衍生物。其中R
文檔編號C07D401/00GK101085758SQ20071001666
公開日2007年12月12日 申請日期2007年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月3日
發(fā)明者趙寶祥, 苗俊英, 張尚立, 夏永, 董志武 申請人:山東大學(xué)