專利名稱：作為rock-i抑制劑的6-取代的異喹啉衍生物的制作方法
作為R0CK-I抑制劑的6-取代的異壹啉衍生物
本發(fā)明涉及6-取代的異喹啉衍生物，包含所述化合物的藥物組合 物，以及這些衍生物在制備治療與R0CK-I有關的疾病例如青光眼、高 血壓和動脈粥樣硬化的藥物中的應用。
通過蛋白質的可逆砩酸化可以控制大多數(shù)的信號轉導途徑?，F(xiàn)在 大約有500種已知的蛋白激酶，它們負責蛋白質的磷酸化，因此控制 細胞發(fā)信號事件。很多疾病都與由蛋白激酶介導的事件引起的細胞異 常應答有關，在藥物化學領域已經(jīng)付出了大量的努力來發(fā)現(xiàn)與治療劑 一樣有效的蛋白激酶抑制劑?；谒鼈兞姿峄陌被釟埢?，蛋白激 酶家族分為酪氨酸激酶和絲氨酸/蘇氨酸激酶。近來，還發(fā)現(xiàn)了組氨酸 激酶(其磷酸化組氨酸殘基上的咪唑氮)。
AGC亞族的激酶屬于絲氨酸和蘇氨酸家族的激酶，參與各種的發(fā) 信號過程。該亞族包括Rho相關巻曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)。已經(jīng) 凈艮道了 2種ROCK亞型ROCK-I / ROK P / pl60ROCK和ROCKII / ROK oc /Rho-激酶。這兩種蛋白質在氨基酸水平上有65%的相似性，在它 們的激酶域則有92°/。的相似性。ROCK-I和ROCK-II是所發(fā)現(xiàn)的Rho家 族的小GTP酶的第 一效應子。Rho-ROCK發(fā)信號途徑控制細胞形狀粘著、 收縮性、細胞運動性和侵入。第一代的抑制劑Y-27632和法舒地爾的 廣泛^f吏用已經(jīng)說明了 ROCK-I和ROCK-II在各種疾病和/或病癥中的生 物學作用。結果，已經(jīng)提示ROCK抑制劑對于支氣管哮喘、腦血管痙攣、 冠狀動脈痙攣、勃起機能障礙、青光眼、早產、血管平滑肌增生、心 肌肥厚、惡黑病(malignoma)、缺血/再灌注-誘導的損傷、內皮機能 障礙、克勞恩病和結腸炎、神經(jīng)突外生、雷諾病、咽峽炎、阿爾茨海 默病、良性前列腺增生、神經(jīng)性疼痛、高血壓和動脈粥樣硬化是有治療價值的(Mueller B， K等人，Nature Reviews Drug Discovery 4， 387-398(2005); Hirooka Y.and Shimokawa H. Am. J. Cardiovasc. Drugs 5 (1), 31-39 (2005); Hu E. and Ue D. Current Opinion Ther. Targets 9 ( 4), 715-736 (2005))。
在國際專利申請W0 2004/00955 (EP 1541559; Asahi Kasei Pha簡 Corporation)中已經(jīng)公開了 5-取代的異奮啉衍生物是Rho/Rho激酶 途徑的抑制劑。在國際專利申請WO 2004/024717 (EP 1550660; Kirin Brewerey Kabashiki Kaisha)中已經(jīng)公開了 N-取代的5-異喹啉胺衍 生物是Rho激酶抑制劑。在國際專利申請WO 2006/051290中已經(jīng)公開 了會唑啉酮化合物抑制或調節(jié)蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶B(PKB)的 活性。仍然需要其他化合物來用于治療Rho激酶介導的疾病例如青光 眼、高血壓和動脈粥樣>5更化。
為此，本發(fā)明提供具有通式I的6-取代的異喹啉衍生物
其中
X是O， S或NH; Y是OH或NH2; m是0， 1或2; n是0或1; o是0或1;
、 式I當Y是冊2時，R,是H;或當Y是0H時，K是H、 (Cw)烷基或卣
素；
R2和R3獨立地是H、 (d-4)烷基或卣素；
R4是H或任選被卣素取代的(CH)烷基、(Cw)環(huán)烷基、(Ch。)芳基 或者包含1-3個獨立地選自0、S和N的雜原子的飽和5-或6-元雜環(huán)， 所述(Cw。)芳基和雜環(huán)任選被(Ch)烷基、(Cw)烷氧基或g素取代；
Rs是H或(Cw)烷基；或其藥學可接受的鹽，
條件是排除其中X是O， Y是OH， n是0且m+o =2的式I的化合物。
所述條件所涉及的是近來在國際專利申請wo
2007/012422 (Sanofi-Aventis Deutsland GMBH)中公開的作為Rho-激酶抑制劑的環(huán)己胺異喹諾酮衍生物。
在式I的定義中所使用的術語(CH)烷基是指具有1-4個碳原子的 支鏈或無支鏈的垸基，例如丁基、異丁基、叔丁基、丙基、異丙基、 乙基和甲基。
同樣，在式I的定義中所使用的術語(CH)烷基是指具有1-6個碳 原子的支鏈或無支鏈的烷基，例如己基、戊基、異戊基、丁基、異丁 基、叔丁基、丙基、異丙基、乙基和甲基。
術語(Cw)環(huán)烷基是指具有3-7個碳原子的環(huán)烷基，例如環(huán)庚基、 環(huán)己基、環(huán)戊基、環(huán)丁基和環(huán)丙基。
在術語(Ch)烷氧基中，(Ch)烷基具有如上述的含義。
術語卣素是指F、 Cl、 Br或I。
術語(C^。)芳基是指具有6-10個碳原子的芳香環(huán)系統(tǒng)，例如苯基 或萘基。
在式I的定義中包含1-3個選自0、 S和N的雜原子的飽和5-或 6-元雜環(huán)可例舉的是四氫吡喃基、四氫呋喃基、四氫確zR吡喃基、四 氫瘞吩基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基和硫代嗎啉基。
6優(yōu)選其中Y是OH的式I的6-取代的異喹啉衍生物。應當理解的 是這些化合物可以是互變異構的酰胺0-形式，因此也可以描述為2H-異會啉-l-酮
1-羥基-異喹啉 2H-異喹啉-l-酮
式I的其他優(yōu)選化合物是其中X是0的那些。在本發(fā)明更優(yōu)選的 式I化合物中，Ri和R3獨立地是H、甲基或卣素，并且R2是H。
本發(fā)明特別優(yōu)選的6-取代的異喹啉衍生物是 -(1S， 3R)-6-(3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮； -6- (4-氨基曱基環(huán)己氧基)-2H-異喹啉-l-酮； -(1R， 3R)-6-(3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮； -(1R， 3S) -6- (3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮； -(1S, 3S)-6-(3-氨基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮； - (1R， 3R) -6- (3-氨基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮； -順式-6- (4-氨基環(huán)己基硫烷基)異喹啉-l-基胺； -(IS， 3S)-6-(3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮；及其藥學 可接受的鹽。
式I的化合物可以由式II的化合物通過下述來制備，其中R「R3，R5， X, Y， m， n和o具有上述含義，Y中的任何反應性基團任選具有 保護基，并且Pg是N-保護基，即通過除去所述N-保護基(Pg)，隨后 用式RrHal的適當卣化物進行N-烷基化，或者通過用得自基團R4的 適當醛還原氨基化，然后除去任何剩余的保護基。
術語N-保護基是通常用于保護氨基的基團，例如烯丙氧羰基 (Alloc)、叔丁氧基羰基(Boc)、節(jié)氧羰基(Z)或9-芴基甲氧基羰基 (Fmoc)。根據(jù)這些保護基的性質，可以以不同的方式進行這些和其他 保護基的除去。對保護基以及除去它們的方法的綜述在T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd edition, 1991, John Wiley & Sons, Inc.中給出。
式II的化合物可以4吏用標準的Mitsunobu條件由式III和式IV 化合物的偶合來制備，其中式III中R!-R3， X和Y具有上述定義的含 義，式IV中其中m， n， o， 115和Pg具有上述給出的含義，其中L是 OH [R丄Elliot, H. Kopecka，D. E. Guim,H.N. Linan線S. Garvey， Bioorg. Med. Chem. Lett, 6， 2283 (1996); K. Wisniewski， A. S. Koldziejczyk and B. Falkiewicz, J. Pept. Sc. 4, 1(1998)]。
式III<formula>formula see original document page 8</formula>
式IV<formula>formula see original document page 8</formula>可替代的，其中L代表適當?shù)碾x去基團例如OMs、 0Ts、 I、 Br或 Cl的式IV的化合物可用于在適當?shù)膲A存在下與式III的化合物的在 Williamson SN2介導的置換反應中得到式II的化合物。
其中X是S的式III的化合物可以由其中X是0并且Y是冊2并 具有保護基例如Alloc、鄰苯二甲?；虮郊柞；氖絀II的化合物， 通過用二甲基硫代氨基甲酰氯處理來制備，得到相應的0-酯(Newman, M. S.和Karnes， H. A. J. Org. Chem. 1966, 1^980)，然后用孩"皮 輻射將該0-酯經(jīng)Newman-Karnes轉化成S-酯，然后將該S-酯水解。
其中X是0的式III的化合物可以由其中Ri-R3和Y具有上述給出 的含義并且其中R是甲基的式V的化合物，通過與BBr3[J. F. W. McOmieandD. E. West, Org. Synth., Collect. Vol. V， 412 (1973)] 或EtSNa [A. S. Kende and J. P. Rizzi, Tetrahedron Lett.,旦， 1779 (1981)]的脫甲基化來獲得?？商娲兀部梢允褂闷渲蠷是芐基 的式V的化合物，并用適當?shù)臍浠瘲l件除去芐基。
式VI的化合物是制備式V的化合物的合適的起始物質?？梢酝ㄟ^ 減壓下用氨加熱式VI的化合物來將其氯基直接轉化成胺基?？商娲?地，通過在堿性條件下與酚反應，將式VI的化合物的氯基轉化成苯氧 基。用乙酸銨處理苯氧基衍生物得到了式V的胺衍生物。也可以通過 用疊氮化鈉處理式VI的化合物，然后用PPh3還原疊氮芳基來獲得式V
式VI的化合物。
可以通過用磷酰氯處理由其中Y是0H的式V的化合物獲得式VI 的化合物。
式vn 式vni 其中y是oh的式v的化合物可以由式vn的相應肉桂酸來制備。 將該酸轉化成?；?，然后轉化成式vni的?；B氮，在加熱下經(jīng)
Curtius重排得到中間體異氰酸酯，將其進一步加熱導致分子內閉環(huán)
反應，得到式v的異喹啉酮。
通過下述制備其中X = NH的式I的化合物將式III的化合物中 酚性0H轉化成相應的溴，隨后通過鈀催化的氨基化反應與式IV (L -Niy的胺衍生物偶合(Wolfe J. P. ， Tomori H， Sadighi L P. ， Yin， J和Buchwald S. L. L Org. Chem. 2000， &， 1158-1174)。
式I的6-取代的異會啉衍生物和它們的鹽可以包含至少一個手性 中心，因此存在立體異構體，包括對映體和非對映體。本發(fā)明在其范 圍內包括上述立體異構體，式I的化合物和它們的鹽的各個R和S個 體對映體基本上不含，即少于5%，優(yōu)選少于2%，特別是少于1%的其 他對映體，以及任意比例的這些對映體的混合物，包括包含基本上等 量的兩種對映體的外消旋混合物。
獲得純立體異構體的不對稱合成或手性分離的方法是本領域公知 的，例如用手性誘導或由商業(yè)可用的手性底物來合成，或分離立體異 構體，例如用手性介質上的色鐠法或通過手性逆離子結晶。
本發(fā)明的6-取代的異喹啉衍生物的藥學可接受的鹽可以通過用 無機酸例如鹽酸、氫溴酸、磷酸和硫酸，或有機酸例如抗壞血酸、檸
10檬酸、酒石酸、乳酸、馬來酸、丙二酸、延胡索酸、羥乙酸、琥珀酸、 丙酸、乙酸和甲磺酸來處理式I的化合物的游離堿獲得。
本發(fā)明的化合物可以是非溶劑化形式以及與藥學可接受的溶劑例 如水、乙醇等形成溶劑化形式。 一般地，對于本發(fā)明的目的而言，認 為溶劑化形式等同于非溶劑化形式。
本發(fā)明進一步提供了藥物組合物，其包含與藥學可接受的輔料混
合的根據(jù)通式I的6-取代的異喹啉衍生物或其藥學可接受的鹽，以及 任選的其他治療劑。術語"可接受的"是指與組合物中的其他成分相 容，不會危害其接受者。組合物包括，例如那些適合口服、舌下、皮 下、靜脈內、硬膜外、膜內、肌內、經(jīng)皮、肺、局部或直腸等施用的 那些，所有的用于施用的單位劑型。 優(yōu)選的施用途徑是口服途徑。
對于口服，活性成分可以以分離的單元存在，例如，片劑、膠囊、 粉末、顆粒、溶液、混懸液等等。對于胃腸外施用，本發(fā)明的藥物組 合物可以存在于單位劑量或多劑量容器中，例如是預定量的注射液體， 例如在密封的管和安瓿中，其可以貯存在冷凍干燥(凍干)條件下，在
使用前其僅需要加入無菌液體栽體，例如水。
如標準參考文獻Gennaro， A. R.等人,Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th Edition, Lippincott Williams & Wilkins, 2000，特另U是參見Part 5: Pharmaceutical Manufacturing) 與藥學可接受的助劑混合時，活性劑可以壓制成固體劑量單元，例如 丸劑、片劑，或加工成膠嚢、栓劑或貼劑。通過藥學可接受的液體， 活性劑可以用作液體組合物，例如作為溶液、混懸液、乳劑形式的注 射制劑，或作為噴霧劑，例如鼻腔噴霧。
為了制備固體劑量單元，預期使用常規(guī)添加劑例如填充劑、著色 劑、聚合性粘合劑等等。 一般地，可以使用不干擾活性化合物功能的任何藥學可接受的添加劑?？梢耘c本發(fā)明的活性劑作為固體組合物施 用的適當載體包括以適當量使用的乳糖、淀粉、纖維素衍生物等等， 或其混合物。對于胃腸外施用，可以使用水性混懸液、等滲鹽水溶液 和無菌可注射溶液，包含藥學可接受的分散劑和/或潤濕劑，例如丙二 醇或丁二醇。
本發(fā)明進一步包括如上所述的藥物組合物，與適合所述組合物的 包裝材料的組合，所述包裝材料包括用于如上所述用途的組合物的使 用說明書。
該組合物可以用于治療Rho激酶介導的疾病，例如青光眼、高血 壓和動脈粥樣硬化。
本發(fā)明的化合物可以以足夠量和足夠長的時間施用于人，以緩解 癥狀。說明性地，用于人的劑量水平的范圍可以是0.001-50 mg/kg 體重，優(yōu)選劑量時0. 01-20 mg/kg體重。
通過下列實施例說明本發(fā)明。
一般方面 使用下列縮寫
洗脫液在溶劑B中的x-y %溶劑A是指所使用的是從在溶劑B 中的x。/。(v/v)溶劑A的洗脫液到在溶劑B中的y。/。(v/v)溶劑A的梯度。
實施例1 :順式-6-(4-氨基環(huán)己氧基)異喹啉-l-基胺
A:鹽酸6-甲氣基-異喹啉-N-氧化物
在環(huán)境溫度下，將133 g的間氯過氧苯曱酸(純度75%)分份加入到6-甲氧基-異會啉[Hendricks, J. B. and Rodriguez, C. ， J. Org. Chem. 1983， 48， 3344-3346; 79.8 g; 500 mmol]的1.2 L二氯甲烷 攪拌溶液中。繼續(xù)攪拌3小時，然后加入甲醇(l L)。將體積減少至 700ffll，然后加入800 ml的氯化氫的乙醚飽和溶液。用1.5L的乙醚 稀釋得到了黃色晶體的沉淀，過濾分離沉淀，用冷乙醚洗滌，真空干 燥，得到鹽酸6-甲氧基-異喹啉-N-氧化物(85 g， 80%) ， (+)-FAB-MS 176+。
B: l-氯-6-甲氧基異喹啉
在90。C的溫度下，將鹽酸6-曱氧基-異喹啉-N-氧化物(85 g; 400 mmol)小心分份加入到磷酰氯(550 mL)中，然后在90。C下攪拌混合物6 小時。真空除去過量的磷酰氯。用水洗滌剩余的白色固體，過濾并真 空干燥，得到l-氯-6-甲氧基異喹啉(68 g， 88%)， EI-MS: 193 [M]+。
C: 6-曱氧基-l-苯氧基異喹啉
向1-氯-6-甲氧基異喹啉(16. 8 g， 87 ramol)和苯酚(67 g)的混合 物中加入粉末狀的氫氧化鉀(8, 4g)。在氮氣氣氛下，將混合物加熱至 140'C3小時，使其冷卻至環(huán)境溫度，隨后用280 ml的3N氫氧化鈉溶 液和500 ml的二氯甲烷稀釋。用2N氫氧化鈉，水和鹽水洗滌有機層， 在硫酸鎂上干燥并在真空中干燥，得到6-甲氧基-l-苯氧基異喹啉 (21.3 g， 98 %)， ESI-MS: 251.8 [M+H]+。
D: 1-氨基-6-甲氧基異全啉
在氮氣氣氛下，將6-甲氧基-1-苯氧基異喹啉(21. 3 g, 85 mmol) 和乙酸銨(55 g)的混合物加熱至15(TC，攪拌過夜。將混合物冷卻至 環(huán)境溫度，然后攪拌下加入3 N氫氧化鈉(280 ml)。用乙酸乙酯(2 x 300 ml)萃取這樣得到的溶液，用2N鹽酸(100ml)萃取合并的有機層。 隨后，用2 N氫氧化鈉將水層的pH調節(jié)至12。然后用乙酸乙酯(300 ml) 萃取得到有機層，用鹽水(IOO ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)并減壓濃縮， 得到1-氨基_6-甲氧基異喹啉(11 g， 75%)， ESI-MS: 175.2 [M+H〗+
E: l-氨基-6-羥基異會啉
在10C下，將三溴化硼(18. 2 ml， 370 mmol)的20 ml 二氯甲烷溶液滴加到1-氨基-6-甲氧基異喹啉(11. 0 g， 63 mmol)的150 ml 二 氯甲烷攪拌溶液中。在攪拌4天后，在環(huán)境溫度下將反應混合物倒入 冰中，通過加入濃氨水將pH調節(jié)至9。過濾收集沉淀物并真空干燥， 得到1-氨基-6-羥基異會啉(8. 9 g， 88%)， EI-MS: 160 [M]+。 F:反式-甲磺酸4-叔丁氧基羰基氨基環(huán)己基酯
將甲磺酰氯(135iLi 1， 1.74 mmol)加入到反式-(4-羥基環(huán)己基)氨 基甲酸叔丁基酯(O. 25 g， 1.16 mmol)和三乙胺(243 n 1, 1.74 mmol) 的二氯甲烷(1G ml)的冷(水浴，G-4X:)攪拌溶液中。在加入后，在該 溫度下攪拌反應30分鐘，然后加熱至環(huán)境溫度。在環(huán)境溫度下攪拌2 小時后，加入碳酸氳鈉水溶液(IO ml)，然后劇烈攪拌30分鐘。用二 氯甲烷(2Q ml)和碳酸氫鈉水溶液(20 ml)稀釋反應，在分配后，用水 (20ml)洗滌有機相，干燥(硫酸鎂)并減壓蒸發(fā)至干燥，得到甲磺酸反 式-4-叔丁氧基羰基氨基環(huán)己基酯(340 mg， 100%)。
G:順式-[4- (l-氨基異喹啉-6-基氧基)環(huán)己基]氨基曱酸叔丁基酯
用微波將l-氨基-6-羥基異喹啉(O. 08g， 0. 5mmo1)，甲磺酸反式-叔丁氧基羰基氨基環(huán)己基酯(176mg)和聚苯乙烯上的2-叔丁基亞氨基 -2-二乙基氨基-1， 3-二甲基-全氫化-1， 3， 2-二氮雜膦(270mg， ~ 2. 2mmol/g負載)的乙腈(2ml)混懸液在120'C下加熱15分鐘的時間段。 過濾除去過量負載的試劑，先用乙腈再用甲醇洗滌，減壓蒸發(fā)濾液至 干燥。通過制備型-HPLC實現(xiàn)純化，得到順式-[4-(1-氨基異喹啉-6-基氧基)環(huán)己基]氨基甲酸叔丁基酯(14 mg)。
EI-MS: m/z == 358. 5 [M+H]+。
H:順式_6-(4-氨基-環(huán)己氧基)-異會啉-l-基胺將順式-[4- (l-氨基異喹啉-6-基氧基)環(huán)己基]氨基甲酸叔丁基酯 (14 mg)在二氯甲烷(900ju 1)和三氟乙酸(100jLi 1)中的混合物在環(huán)境 溫度下攪拌3小時。真空濃縮混合物，然后通過制備型-HPLC純化， 得到順式-6-(4-氨基環(huán)己氧基)異喹啉-1-基胺(8. lmg)， EI-MS: m/z = 258.5 [M+H]+。 ^ NMR(甲醇D4)M. 55-1.80 (6H， m) ， 2. 05-2. 15 (2H， m), 2.75-2.85 (1H， m) ， 4. 65-4. 75 (1H，不清楚的寬峰s)， 6.88(1H， d), 7. 08-7. 15(2H, m) ， 7.64(1H, d), 7. 99(1H， d)。
實施例2:反式-6-(4-氨基環(huán)己氧基)異喹啉-l-基胺
用順式-(4-羥基環(huán)己基)氨基曱酸叔丁基酯，通過如實施例E、 ^_和近所述的方法來制備標題化合物EI-MS: m/z - 258. 5 [M+H]+。
實施例3:反式-6-(4-氨基環(huán)己基硫烷基)異唾啉-1-基胺
A: N-(6-幾基異會啉-l-基)-苯曱酰胺
在環(huán)境溫度下，將苯曱酸酐(IO. 27 g)加入到1-氨基異喹啉-6-醇(3. 312 g)的吡咬(53 ml)溶液中。將該混合物在125。C下加熱1小 時，減壓除去吡啶，通過與甲苯(X2)共沸來除去過量的吡啶。加入水， 用二氯甲烷(X3)萃取該混合物，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮，得到固體 沉淀物。用二氯甲烷-乙醚再結晶，得到苯甲酸l-千基氨基異喹啉-6-基酯(6 g)， EIMS: m/z = 369.1 [M+H]+。
15將Na0H(981 mg)的水H20 (65 ml)溶液加入到苯曱酸1-爺基氨基 異會啉-6-基酯(6 g)的甲醇(65 ml)和四氫呋喃(65 ml)的溶液中。將 該混合物在環(huán)境溫度下攪拌1.5小時，然后真空除去有機物。用水稀 釋該混合物，然后用乙酸乙酯(x l)萃取。然后用稀鹽酸(pH ~ 3.5) 酸化水相。加入乙酸乙酯產生固體沉淀物，過濾沉淀并先用冷MeOH 再用庚烷洗滌，得到N-(6-羥基異喹啉-1-基)苯甲酰胺(3. 6g)， EIMS: m/z = 265. 1 [M+H]+。
B: N-(6-巰基異喹啉-l-基)苯曱酰胺
在氮氣和0t;下，向N-(6-羥基異喹啉-1-基)苯曱酰胺(IOO mg， 0. 379 mniol)，三乙胺(105 mL， 0. 758 mmol)和p比咬(306 mL， 3. 79 mmol) 的無水四氫呋喃(2 ml)溶液中加入N， N-二甲基氨基硫代氨基甲酰基 氯(70mg， 0. 568 mmo1)。將混合物加熱至65。C并攪拌48小時。減壓 除去有機物，通過與曱苯(X2)共沸來除去過量的吡啶。加入飽和NaHC03 水溶液，用二氯甲烷(X2)萃取該混合物，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮， 得到殘留物。通過殘留物的快速色鐠法(洗脫液5-50%乙酸乙酯在庚
烷中的溶液)，得到二甲基硫代氨基甲酸o-(i-苯甲?；被愢?br> -6-基)酯(70 mg)， EIMS: m/z = 352.7 [M+H]+。
在2 3 (TC下，在微波中將二甲基硫代氨基甲酸0- (1 -苯甲酰基氨基 異會啉-6-基)酯(70mg，)的鄰-二氯苯(3ml)溶液照射30分鐘。通過 混合物的快速色鐠法(洗脫液5-50%乙酸乙酯在庚烷中的溶液中)，得 到二曱基硫代氨基甲酸S- (l-苯甲?；被愢?6-基)酯(70 mg), EIMS: m/z = 352.7 [M+H]+。
將NaOH(92 mg)的水H20(1 ml)溶液加入到二曱基硫代氨基甲酸 S-(l-苯甲?；被愢?6-基)酯(70 mg)的MeOH(l ml)和THF(l ml) 溶液中。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌1小時，然后在56。C下再攪拌1 小時。真空除去有機物，然后用水稀釋混合物，用稀鹽酸(pH ~ 3.5) 酸化。用乙酸乙酯(X3)萃取該混合物，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮，得 到殘留物。通過殘留物的快速色鐠法(洗脫液1-5%乙酸乙酯在庚烷 中的溶液)，得到N-(6-巰基異喹啉-l-基)-苯甲酰胺(30 mg)。C:反式-6-(4-氨基環(huán)己基硫烷基)異喹啉-l-基胺 將碳酸鉀(160 mg)和甲磺酸順式-4-叔丁氧基羰基氨基環(huán)己基酯 (140 mg， 0.47 mmol)加入到N-(6-巰基異會啉-l-基)苯甲酰胺殘留物 的DMA (4 ml)溶液中。在120。C下用微波將該混合物照射600s,然后 真空濃縮，得到殘留物。通過制備型HPLC純化殘留物，得到反式 —[4- (1-苯甲?；被愢?6-基硫烷基)環(huán)己基]氨基甲酸叔丁基 酯。將冰醋酸(l ml)和6M鹽酸(2 ml)加入到反式-[4-(1-苯甲?；?基異喹啉-6-基硫烷基)環(huán)己基]氨基甲酸叔丁基酯中，將混合物回流 24小時。然后真空濃縮混合物，得到殘留物。用曱醇將殘留物負載到 預酸化的SCX柱上，然后用2M氨的甲醇洗脫，得到粗的反式-6-(4-氨基環(huán)己基硫烷基)異喹啉-l-基胺，用制備型-HPLC進一步純化(9 mg) ， EIMS: m/z = 274. 5 [M+H]+。
用反式-叔丁氧基羰基氨基環(huán)己基酯，通過2、 1^_和近所述的方 法來制備下列化合物
實施例4:順式-6- (4-氨基環(huán)己基硫烷基)異會啉-l-基胺
EIMS: m/z = 274. 3 [M+H]+
<formula>formula see original document page 17</formula>
實施例5:反式-6- (4-氨基環(huán)己氧基)-7-甲基異奮啉-1-基胺
<formula>formula see original document page 17</formula>
A: l-氨基-7-曱基-異喹啉-6-醇氫溴酸鹽
將3-甲氧基-4-甲基苯甲醛(19. 3 g， 0. 129mol)，甲酯基亞甲基三苯基膦(51 g)的甲苯(250 ml)混合物回流24小時。用氯化銨水溶液 淬滅混合物，并用乙酸乙酯萃取，真空濃縮，得到殘留物。用乙酸乙 酯-庚烷(l : 1)，通過快速色鐠法純化該殘留物，得到3-(3-甲氧基 -4-甲基-苯基)丙烯酸甲基酯(27 g， 0. 126mol)。將3-(3-甲氧基-4-甲基苯基) 丙烯酸甲基酯 (27 g)，氫氧化鈉(14 g)，水(70 ml)，甲醇 (140 ml)和四氫呋喃(70 ml)的混合物在50。C下回流1小時。真空濃 縮殘留物，然后加入水。過濾混合物，加入5 M HC1直至出現(xiàn)沉淀。 過濾混合物，用水洗滌固體沉淀物，真空干燥，得到3-(3-甲氧基-4-甲基苯基)丙烯酸(23. 5g， 0.122 mol)。
隨后在室溫下將甲苯(750 ffll)和亞石危酰氯(ll ml)加入到3-(3-甲 氧基-4-甲基苯基)丙烯酸(20 g， 0. 104 mol)中。將混懸液回流2小時， 同時強烈攪拌，得到澄清的淡黃色溶液。真空濃縮反應混合物，然后 加入甲苯，真空再濃縮該混合物，得到3-(3-甲氧基-4-甲基苯基)丙 烯酰氯，用于下一步驟。
將3-(3-甲氧基-4-甲基苯基)丙烯酰氯溶解于丙酮(800 ml)中。 在OX:下將所得到的溶液緩慢加入到(15分鐘)疊氮化鈉(13 g)在水 (100 ml)和丙酮(100 ml)的混合物中，同時劇烈攪拌并用水浴冷卻。
在加入完成后，在ox:下將反應混合物攪拌90分鐘，同時劇烈攪拌。
然后將反應混合物倒出到水-水(300ml)上。在攪拌15分鐘后，過濾混 合物，用過量的水洗滌固體殘留物。將剩余的固體殘留物溶解于二氯 甲烷(45 ml)中。用分液漏斗除去釋放出的水。用Na2S04干燥二氟甲 烷層并過濾，得到3-(3-甲氧基-4-甲基苯基)丙烯酰疊氮化物的二氯 曱烷溶液，其可以立即用于下一步驟。
用滴液漏斗分份(小心！)將二氯甲烷疊氮化物溶液加入到，以在 150"C下在配有Dean-Stark分離器的三頸圓底燒瓶中預熱的二苯基 醚(50ml)中，同時溫和攪拌。在加入時，在形成異氰酸酯下放出氮氣。 蒸發(fā)所加入的二氯甲烷，并用Dean-Stark分離器收集。在加入完成(~ 30分鐘)并觀察到?jīng)]有氣體釋放后，攪拌下將混合物加熱至回流(~ 250*0 (在 200X:下，不再蒸發(fā)出二氯甲烷，迅速移除Dean-Stark
18分離器)。將反應混合物在 250X:下保持1小時，然后冷卻至125'C， 并傾倒到丙酮和庚烷(l: IO)的混合物中。固體沉淀出來，將其過濾， 并真空干燥，得到6-曱氧基-7-甲基-2H-異喹啉-l-酮(12 g, 63.49 mmol)。
在室溫下，用三氯氧磷(22 ml)處理6-甲氧基-7-甲基-2H-異會啉 -l-酮(5g， 26. 45 mmol)的混懸液。攪拌下將混合物在1001C下加熱1 小時，然后真空濃縮，得到殘留物。將甲苯加入到該殘留物中，進一 步真空濃縮，得到殘留物，將其溶解到甲苯中，緩慢加入到飽和的碳 酸鈉水溶液中。然后分離甲苯層。進一步混合水層，用甲苯萃取。干 燥(MgS04)合并的曱苯層并真空濃縮，得到殘留物。用乙醚研磨殘留物， 然后過濾，并真空干燥，得到1-氯-6-甲氧基-7-甲基-異喹啉(4 g， 19. 32 mmol)。
將1-氯-6-甲氧基-7-甲基-異喹啉(9 g, 43. 48 mol),苯酚(16. 3 g),氫氧化鉀(9.45 g)和二曱苯(100 ml)的混合物回流4天。將該反 應混合物倒出到氫氧化鈉水溶液(4M)中，分離二甲苯層。用甲苯萃取 水層2次。干燥(Na2S0,)合并的有機層并真空濃縮，得到殘留物。使用 二氯曱烷，通過快速色譜法純化該殘留物，得到6-曱氧基-7-甲基-1-苯氧基異喹啉(9 g， 33.96 mmol)。
在170'C和攪拌下將粗6-甲氧基-7-甲基-1-苯氧基異喹啉(9 g， 33. 96 mmol)和乙酸銨(26 g)的混合物熔化5小時。將混合物在氫氧化 鈉水溶液(2M)和乙酸乙酯之間分配。分離各相，用稀鹽酸水溶液萃取 有機相。用氫氧化鈉(2M)將酸性水相中和至pH 12，用乙酸乙酯萃取， 干燥(MgS04),然后真空干燥，得到6-甲氧基-7-甲基異喹啉-l-基胺 (5. 11 g， 27. 18 mmol)。
將6-曱氧基-7-甲基異喹啉-1-基胺(5. 11 g, 27.18 ramol)和48。/。 的氫溴酸水溶液的混合物(150 ml)在125X:下加熱2天。真空濃縮混 合物，用乙醚研磨，真空干燥，得到1-氨基-7-甲基-異喹啉-6-醇氫 溴酸鹽(5g)， EIMS: m/z = 175, 1 [M+H〗+。 ^ NMR (DMS0-D6) 5 7.06(1H， d) , 7. 16 (1H， d) ， 7. 25 (1H， dd) ， 7. 56 (1H， d) ， 8. 44 (1H， dd) ， 8. 66 (2H，寬峰s), 11.05(1H， s)， 12.45(1H, s)。
B:反式-6-(4-氨基環(huán)己氧基)-7-甲基異喹啉-l-基胺 將l-氨基-7-甲基異喹啉-6-醇氫溴酸鹽(100 mg， 0.57 mmol)， 碳酸鉀(78 mg， 0.57 mmol)和甲磺酸順式-4-叔丁氧基羰基-氨基環(huán)己 基酯(166 mg, 0.57 mmol)與N, N-二甲基甲酰胺(3 ml)混合。在IOO 匸下將該混合物在微波中加熱15分鐘。用水稀釋混合物，用冰醋酸酸 化，用甲醇稀釋，負載到預-酸化的SCX柱上。用2M氨的甲醇溶液洗 脫后得到粗產品，通過制備型HPLC純化該粗產品，得到反式-6-(4-氨基環(huán)己氧基)-7-甲基異喹啉-1-基胺(8 mg), EI-MS: m/z = 272.7 [M+H〗+。
用適當?shù)暮铣傻臅趸撬猁}，通過上述的方法制備下列化合物。 實施例6:順式-6-(4-氨基環(huán)己氧基)-7-曱基異喹啉-1-基胺
EI-MS: m/z - 272. 7 [M+H]+。
實施例7A:順式-6-(4-氨基環(huán)己氧基)-2H-異喹啉-l-酮(參照實 施例)
A: 6-羥基-2H-異奮啉-l-酮
根據(jù)實施例1A或由3-曱氧基苯甲醛，使用與實施例5A相同的方 法來制備l-氯-6-甲氧基異喹啉。然后根據(jù)實施例1 E將1-氯-6-甲氧 基-7-甲基異喹啉去甲基化，得到l-氯異喹啉-6-醇。
20將1-氯異喹啉-6-醇(5g， 27.84 mmol)與鹽酸(5M, 40 ml)混合， 在微波條件下在180t:下加熱40分鐘。使混合物冷卻，然后過濾。用 乙醚洗滌該棕色固體，將其在50。C下在烘箱中真空干燥，得到6-羥基 -2H-異喹啉-l-酮，4.45g(98%)， EI-MS: m/z = 162. 4 [M+H]+。 !H纖(甲 醇-D4) 5 6, 80(1H， d)， 7. 01 (1H， d) ， 7.10(1H， dd) ， 7. 25(1H, d)， 8. 22(1H， d)。
B:甲磺酸反式-叔丁氧基羰基氨基-環(huán)己基酯
將甲磺酰氯(135pl， 1.74 mmol)加入到(反式-4-羥基環(huán)己基)氨 基甲酸叔丁基酯(O. 25 g, 1.16 mmol)和三乙胺(243 in 1, 1.74 mmol) 的二氯曱烷(IO ml)的冷卻(冰浴，0-4。C)、攪拌溶液中。在加入后， 在該溫度下攪拌反應30分鐘，然后加熱至環(huán)境溫度。在環(huán)境溫度下攪 拌2小時后，加入碳酸氫鈉水溶液(IO ml)，然后劇烈攪拌30分鐘。 用二氯甲烷(20 ml)和碳酸氫鈉水溶液(20 ml)稀釋反應，在分配后， 用水(20 ml)洗滌有機相，干燥(MgSO,)，減壓蒸發(fā)至干燥，得到甲磺 酸反式-4-叔丁氧基羰基氨基環(huán)己基酯(340 mg， 100%)。
C: 6-(順式-4-氨基環(huán)己氣基)-2H-異喹啉-1-酮
將6-羥基-2H-異全啉-l-酮(0. 1 g， 0. 62 mmol)和碳酸鉀(O, 13 g， 0.93 mmol)的DMF(2. 5 ml)混懸液加熱至ll(TC ,滴加甲磺酸反式-4-叔丁氧基羰基氨基環(huán)己基酯(0. 27 g, 0. 93 mmol)的DMF (1. 5 ml)溶液。 在IIOX:下繼續(xù)加熱16小時，真空除去溶劑。將殘留物溶解到氯仿/ 異丙醇(3: l)中，用lMNaOH洗滌。通過疏水性玻璃料收集有機物， 并濃縮得到粗產物。通過制備型HPLC純化殘留物，得到順式-[4-(1-氧代-1， 2-二氫異會啉-6-基氧基)環(huán)己基]氨基甲酸叔丁酯，EI-MS: m/z =359.1 [M+H]+。在環(huán)境溫度下，將上述順式-[4-(1-氧代-1，2_二氫 異喹啉-6-基氧基)環(huán)己基]氨基甲酸叔丁基酯在二氯甲烷(0. 9 ml)和 三氟乙酸(O. 1 ml)中的混合物攪拌1小時。真空收集該混合物，然后 通過離子交換色譜法純化，得到順式-6- (4-氨基環(huán)己氧基)-2H-異喹啉 =1一酮(3. 1 mg)， EI-MS: m/z - 259.1 [M+H]+。用適當?shù)腂oc-保護的氨基醇，通過參照實施例l所述的方法制
備本發(fā)明的下列化合物
實施例7B: 6-(4-氨基甲基環(huán)己氧基)-2H-異會啉-l-酮<formula>formula see original document page 22</formula>
實施例7C: (1R， 3R)-6-(3-曱基氨基曱基-環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉 一l一酮
ESI-MS: m/z - 273.1
實施例7D: (1S， 3R)-6-(3-甲基氨基曱基-環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉 -l一酮
ESI-MS: m/z = 273.1
實施例7E: (1R, 3S)-6-(3-甲基氨基曱基-環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉 +酮
BSI-MS: m/z = 273.1
實施例7F: (1S， 3S)-6-(3-甲基氨基曱基-環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉 -l-酮
<formula>formula see original document page 22</formula>實施例7G: (IS, 3S)-6-(3-乙基氨基甲基-環(huán)戊氧基)-2H-異嗇啉-l一酮ESI-MS: m/z = 287. 2 [M+H]+。實施例7H: (1S, 3R)-6-[3-(環(huán)丙基氨基曱基)環(huán)戊氧基]-2H-異喹 啉-l-酮ESI-MS: m/z = 313. 2 [M+H]+。實施例7I: (1R, 3R)-6-(3-乙基氨基曱基-環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉一l一酉同■0''ESI-MS: m/z - 287. 2 [M+H]+。實施例7J: (1S， 3R)-6-(3-乙基氨基甲基-環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉 .l-酮ESI-MS: m/z - 287. 2 [M+H〗+。實施例7K: (1R， 3S)-6-(3-乙基氨基曱基-環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮23ESI-MS: m/z - 287.2 [M+H]+。實施例7L: 6-(4-環(huán)丙基甲基氨基甲基-環(huán)己氧基)-2H-異會啉-l-ESI-MS: m/z - 327. 3 [M+H]+。實施例7M: 6-(4-乙基氨基甲基-環(huán)己氧基)-2H-異喹啉-l-酮ESI-MS: m/z - 301.1 [M+H]+。實施例8:反式-6-(4-曱基氨基環(huán)己氧基)-2H-異喹啉-l-酮(參照 實施例)A:順式-曱基氨基環(huán)己醇在環(huán)境溫度下，攪拌下將2M氫化鋰鋁的THF(4. 6 ml)溶液滴加到 順式-(4-羥基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁基酯(1 g， 4. 6mmol)的THF(5ml) 溶液中。在攪拌30分鐘后，混合物在回流下加熱16小時。在使其冷 卻后，小心加入水(O. 35 ml)，然后加入2N氫氧化鈉(0. 35 ml)和水 (0. 35ml)。過濾除去白色沉淀，減壓濃縮濾液。用水稀釋剩余的水性 液，并通過滴加4N鹽酸中和。水性液緩慢通過離子交換柱(SCX，10g)， 在用曱醇洗滌后，用2M氨的甲醇溶液洗脫產物。合并餾分并減壓濃縮， 得到順式-4-曱基氨基環(huán)己醇(455 mg， 76%)。B:順式-(4-羥基環(huán)己基)甲基氨基甲酸叔丁基酯向順式-4-甲基氨基-環(huán)己醇(450 mg， 3.48 mmol)的甲醇(30 ml)24溶液中加入二碳酸二叔丁酯(840 mg, 3. 83 mmol)和碳酸氫鈉(1. 75 g， 20. 9mmo1)。在40。C下將所得到的混懸液聲處理3小時，然后真空除 去溶劑，得到分配于水和二氯曱烷中的殘留物。分離有機層，先用飽 和鹽水再用水洗滌，然后干燥(MgSOj并減壓濃縮，得到順式-(4-羥基 環(huán)己基)曱基氨基甲酸叔丁基酯。C:甲磺酸順式-4-(叔丁氧基羰基甲基氨基)環(huán)己基酯 將甲磺酰氯(290 p 1， 3.72 mmol)加入到順式-(4-羥基環(huán)己基)甲 基氨基甲酸叔丁基酯(710 mg, 3. 10mmol)和三乙胺(520 ju 1， 3. 72腿ol) 的二氯甲烷(15 ml)的冷卻(冰浴，0-4。C)，攪拌溶液中。在加入后， 將反應在該溫度下攪拌30分鐘，然后將其加熱至環(huán)境溫度。在環(huán)境溫 度下攪拌2小時后，加入碳酸氫鈉水溶液(15 ml)，然后劇烈攪拌30 分鐘。用二氯曱烷(30 ml)和碳酸氫鈉水溶液(30 ml)稀釋反應，在分 配后收集有機相并減壓蒸發(fā)至干燥，得到甲磺酸順式-4-(叔丁氧基羰 基甲基氨基)環(huán)己基酯(930 mg， 98%)。D:反式-曱基[4- (l-氧代-l， 2-二氫異喹啉-6-基氧基)環(huán)己基]氨 基甲酸叔丁基酯將6-羥基-2H-異奮啉-l-酮(410 mg， 2. 52 mmol)和碳酸鉀(420 mg， 3.03 minol)的DMF (7 ml)的混懸液加熱至110°C，滴加甲磺酸順式 -4-(叔丁氧基羰基甲基氨基)環(huán)己基酯(930 mg， 3. 03 mmol)的,(3 ml) 的溶液。在ll(TC下繼續(xù)加熱16小時，真空除去溶劑。將殘留物溶解 到氯仿/異丙醇(3: l)中，用碳酸氫鈉水溶液洗滌。通過疏水性玻璃料 收集有機物，并濃縮得到粗產物。在硅石上通過快速色譜法(洗脫液 二氯甲烷，然后2M氨的甲醇)純化殘留物，得到反式甲基-[4-(l-氧代 -1,2-二氫異喹啉-6-基氧基)環(huán)己基]氨基甲酸叔丁酯(400 mg， 42%)， EI-MS: m/z = 373. 1 [M+H]+。E:反式-6-(4-曱基氨基環(huán)己氧基)-2H-異喹啉-l-酮 將反式-甲基[4- (l-氧代-l， 2-二氫異喹啉-6-基氧基)環(huán)己基]氨 基甲酸叔丁酯(400 mg，1. 07 mmol)在二氯曱烷(9ml)和三氟乙酸(1 ml) 中的溶液在環(huán)境溫度下攪拌1小時。真空收集混合物，然后通過離子交換色i普法純化，得到反式-6-(4-甲基氨基環(huán)己氧基)-2H-異喹啉-l-酮，EI-MS: m/z = 273. 4 [M+H〗+。實施例9A:反式-6-(4-二曱基氨基環(huán)己氧基)-2H-異喹啉-l-酮 (參照實施例)將數(shù)滴的水醋酸加入到反式-6 (4-甲基氨基環(huán)己氧基)-2H-異喹啉 -l-酮(實施例U; 25 mg， 92 ju mol)和甲醛(40 ju 1)于乙腈(1 ml)的溶 液中。將混合物攪拌20分鐘，然后加入三乙酰氧硼氫化鈉(IOO mg)。 將該混合物在環(huán)境溫度下攪拌16小時，然后真空濃縮。殘留物分配于 氯仿/異丙醇(3: l)和碳酸氫鈉水溶液中。分離有機層，然后濃縮，得 到殘留物，其通過制備型HPLC純化，得到反式-6(4-二甲基氨基環(huán)己 氧基)-2H-異會啉-l-酮，EI-MS: ra/z - 287.3 [M+H〗+。用適當?shù)陌?，通過與參照實施例L和^所述相同的方法來制備下 列化合物實施例9B: (1R， 3S)-6-(3-二甲基氨基甲基-環(huán)戊氣基)-2H-異喹 啉-l-酮ESI-MS: m/z - 287.2 [M+H]+。實施例9C: (1R， 3S)-6-[3-((環(huán)丙基曱基甲基氨基)-甲基)-環(huán)戊 氧基]-2H-異喹啉-l-酮<formula>formula see original document page 27</formula>
ESI-MS: m/z - 327. 3 [M+H]+。
實施例9D: (1R， 3S)-6-[3-((乙基曱基氨基)-甲基)-環(huán)戊氧 基]-2H-異喹啉-l-酮
<formula>formula see original document page 27</formula>
ESI-MS: m/z = 301. 3 [M+H]+。
實施例9E: (1R， 3S)-6-(3-(二乙基氨基甲基-環(huán)戊氧基)-2H-異 會啉一l-酮
<formula>formula see original document page 27</formula>
ESI-MS: m/z = 315. 2 [M+H]+。
實施例9F: (1R， 3S)-6-(3-(丙基曱基氨基曱基-環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮
ESI-MS: m/z = 315. 3 [M+H]+。
實施例9G: (1S， 3S)-6-(3-(二曱基氨基曱基-環(huán)戊氧基)-2H-異
奮啉一l-酮ESI-MS: m/z - 287.2 [M+H]+。
實施例9H: (1S， 3S)-6-(3-(丙基甲基氨基甲基-環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-1-酮
ESI-MS: m/z = 315. 3 [M+H]+。
實施例10: (1R, 3S)-6-(3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-1-酮
在~ 5'C下，將二碳酸二叔丁酯(260mg， 1.2 mmol)加入到(lS， 3S)3-氨基曱基環(huán)戊醇(100 mg, 1 mmol)在二氯甲烷(l. 5 ml)和三乙 胺(415iil， 3mmol)中的溶液中。將混合物加熱至環(huán)境溫度，然后攪 拌過夜。加入水，用二氯甲烷稀釋該混合物，分離有機相，并真空濃 縮，得到(1S， 3R)-(3-羥基環(huán)戊基曱基)氨基曱酸叔丁基酯。無需進一 步純化，將殘留物溶解于二氯甲烷(2 ml)和三乙胺(182 p 1)中。在~ 5 。C下加入甲烷磺酰氯(102iLi1),將該混合物加熱至環(huán)境溫度，攪拌3 天。加入NaHC03飽和水溶液，用二氯曱烷稀釋混合物，分離有機相并 真空濃縮，得到甲磺酸(lR，3S)-3-(叔丁氧基羰基氨基甲基)環(huán)戊基酉旨， 其可以不需進一步純化用于下一步驟。
在100。C下，在15分鐘的時間里，將甲磺酸(1R, 3S)-3-(叔丁氧 基羰基-氨基甲基)環(huán)戊基酯的N， N-二甲基甲酰胺(2 ml)溶液加入到 6-羥基-2H-異會啉-l-酮(161 mg， 1 mmol)和碳酸鉀(276 mg)在N， N-二甲基甲酰胺(2ml)中的攪拌溶液中。將混合物在90X:下攪拌4小時， 使其冷卻至環(huán)境溫度并攪拌過夜。加入NaHC03的飽和水溶液，用氯仿 異丙醇(3: l)萃取該混合物，真空濃縮有機相，得到殘留物。向該殘 留物中加入二氯甲烷三氟乙酸溶液(3: 1，3 ml),將所得到的混合 物攪拌3. 5小時，然后真空濃縮，得到殘留物。用甲醇將該殘留物質 載到預酸化的SCX柱上，用2M氨的曱醇洗脫，得到粗(1R， 3S)-6-(3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮，其通過制備型HPLC純化(2 mg); EI-MS: m/z - 259. 1 [M+H]+。
用適當?shù)募谆撬狨ズ?-羥基-2H-異喹啉-l-酮，通過如實施例U 所述的方法來制備下列化合物
實施例11A: (1S, 3R)-6-(3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異會啉-l-
酮
EI-MS: m/z = 259. 0 [M+H]+。<formula>formula see original document page 29</formula>
實施例11B: (1R， 3R)-6-(3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異會啉-l-
塑
EI—MS: m/z - 259. 0 [M+H]+。
<formula>formula see original document page 29</formula>
實施例11C: (1S, 3S)-6-(3-氨基曱基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-
塑
EI-MS: m/z - 259.1 [M+H]+。實施例11 D: (1S， 3S)-6-(3-氨基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮 EI-MS: m/z = 245. 3 [M+H]+。
實施例11 E: (1R， 3R)-6-(3-氨基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮 EI-MS: m/z = 245. 3 [M+H]+。
實施例12
本發(fā)明的化合物對重組人R0CK-1的抑制活性的體外測定。 向384孔微量滴定板中加入含4。/。二甲亞砜(DMSO)的5 ji 1 250 pM 受試化合物的分析緩沖液(20mM Hepes pH7. 4， 0.01%吐溫)的溶液， 以及5 ja 1的混合物，該混合物包含100nM熒光素-標記的肽(來自the Peptide Institute, Japan的AKRRRLSSLRAK-熒光素)、20jaM ATP， 在包含2mM 二硫蘇糖醇的分析緩沖液中稀釋的lOmM MgCh。然后將 10 ja 1的0. 1 ng/ n 1的重組人ROCK-I的分析緩沖液溶液加入到各孔 中，其中分析緩沖液包含2mM 二硫蘇糖醇，使得最終的受試化合物的 濃度是10jaM。室溫下在黑暗中培養(yǎng)1小時后，通過向各孔中加入60 Ili 1的IMAP結合試劑(Molecular Devices)來檢測酶活性。室溫下將 該板在黑暗中再培養(yǎng)30分鐘，在激發(fā)波長485nM，發(fā)射波長530nM下， 在Analyst HT (Molecular Devices)上測定熒光極化的改變。通過將 該活性與包含30juM來自Tocris的Y-27632的溶液的活性(產生對 ROCK-1活性的最大抑制)相比較來計算酶活性的百分比。隨后將化合
30物經(jīng)過劑量應答曲線分析，以確定活性化合物的IC5。值(其中ICs。是導
致50%酶活性抑制時的受試化合物濃度)。本發(fā)明的大多數(shù)化合物的特 征在于ICs。大于5。本發(fā)明的優(yōu)選化合物，例如在實施例4， 21， 12， IIA， 11 B, 11C, IID和11E中所述的那些的值具有大于6. 5的pIC5。。
實施例13
本發(fā)明的化合物的單核細胞遷移抑制活性的體外測定 在抑制性受試化合物存在和不存在下，以2xl()6個細胞/ml的濃度 將人單核細胞(THP-l)懸浮于遷移介質(RPMI 1640，包含O. 1%BSA) 中。然后將細胞混懸液在37C下培養(yǎng)30分鐘。然后將在遷移介質中 的濃度為10ng/ml的人單核細胞趨化蛋白l(MCP-l)溶液加入到QCMTM Chemotaxis 5 |i M 96—孑L細胞遷移試劑盒(ECM512 , Chemicon International)的底部室中。在引入遷移插入物和10分鐘的預平衡步 驟后，將100ju 1的細胞混懸液加入到上部室中，在5%二氧化碳和37 匸下培養(yǎng)該試劑盒4小時。也包括空白和基礎遷移孔，其分別不包含 細胞和MCP-1。通過施用裂解緩沖液和核酸敏感性熒光染料(CyQuant GR dye， Molecular Probes)來確定遷移細胞的數(shù)量。然后用 FlexStation板讀數(shù)器確定熒光。用下列等式計算抑制遷移的百分比 特異性遷移抑制(%) = (1-{(受試化合物存在下遷移的細胞-基礎 的遷移細胞)/ (不存在受試化合物時遷移的細胞-基礎的遷移細胞)}) x 100
權利要求
1. 具有通式I的6-取代的異喹啉衍生物其中X是O，S或NH；Y是OH或NH2；m是0，1或2；n是0或1；o是0或1當Y是NH2時，R1是H；或當Y是OH時，R1是H、(C1-4)烷基或鹵素；R2和R3獨立地是H、(C1-4)烷基或鹵素；R4是H或任選被鹵素取代的(C1-6)烷基、(C3-7)環(huán)烷基、(C6-10)芳基或者包含1-3個獨立地選自O、S和N的雜原子的飽和5-或6-元雜環(huán)，所述(C6-10)芳基和雜環(huán)任選被(C1-4)烷基、(C1-4)烷氧基或鹵素取代；R5是H或(C1-4)烷基；或其藥學可接受的鹽，條件是排除其中X是O，Y是OH，n是0且m+o＝2的式I的化合物。
2. 權利要求1的6-取代的異喹啉衍生物，其中Y是0H。
3. 權利要求1或2的6-取代的異喹啉衍生物，其中X是O。
4. 權利要求1-3任一項的6-取代的異喹啉衍生物，其中K和R3 獨立地是H、甲基或卣素，并且R2是H。
5. 權利要求l-4任一項的6-取代的異喹啉衍生物，其中n是0。
6. 6-取代的異喹啉衍生物，其選自- (1S， 3R) -6- (3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮； -6- (4-氨基曱基環(huán)己氧基)-2H-異喹啉-l-酮；- (1R， 3R) -6- (3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異會啉-l-酮；- (1R, 3S) -6- (3-氨基曱基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-1-酮； -(1S， 3S) -6- (3-氨基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮；- (1R, 3R) -6- (3-氨基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮； -順式-6- (4-氨基環(huán)己基硫烷基)異喹啉-l-基胺；-(1S， 3S)-6-(3-氨基甲基環(huán)戊氧基)-2H-異喹啉-l-酮；或其藥學 可接受的鹽。
7. 權利要求l-6任一項的6-取代的異喹啉衍生物，其用于治療。
8. —種藥物組合物，包含與藥學可接受的輔料混合的權利要求 l-6任一項的6-取代的異喹啉衍生物或其藥學可接受的鹽。
9. 權利要求1-6任一項的6-取代的異喹啉衍生物在制備用于治 療與R0CK-I有關的疾病例如青光眼、高血壓和動脈粥樣硬化的藥物中 的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有通式I的6-取代的異喹啉衍生物，其中X是O、S或NH；Y是OH或NH₂；m是0，1或2；n是0或1；o是0或1；當Y是NH₂時，R₁是H；或當Y是OH時，R₁是H、(C_1-4)烷基或鹵素；R₂和R₃獨立地是H、(C_1-4)烷基或鹵素；R₄是H或任選被鹵素取代的(C_1-6)烷基、(C_3-7)環(huán)烷基、(C_6-10)芳基或者包含1-3個獨立地自O、S和N的雜原子的飽和5-或6-元雜環(huán)，所述(C_6-10)芳基和雜環(huán)任選被(C_1-4)烷基、(C_1-4)烷氧基或鹵素取代；R₅是H或(C_1-4)烷基；或其藥學可接受的鹽，條件是排除其中X是O，Y是OH，n是0且m+o＝2的式I的化合物，涉及包含所述化合物的藥物組合物，以及所述6-取代的異喹啉衍生物在制備治療與ROCK-I有關的疾病例如青光眼、高血壓和動脈粥樣硬化的藥物中的應用。
文檔編號C07D217/22GK101522633SQ200780036804
公開日2009年9月2日 申請日期2007年8月17日 優(yōu)先權日2006年8月18日
發(fā)明者B·舍伯恩, J·R·莫菲, P·C·雷, S·拉特斯 申請人:歐加農股份有限公司