專利名稱：：阿糖胞苷5’-o-氨基酸酯鹽酸鹽及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及干擾DNA合成的藥物1-^阿拉伯呋喃糖基-4-氨基-2(l勸-胞嘧啶酮的5'-^氨基酸酯鹽酸鹽，也就是阿糖胞苷的5'-^氨基酸酯鹽酸鹽及其制備方法。
背景技術(shù)：
：俗稱為阿糖胞苷的化合物其化學(xué)名稱為1-^阿拉伯呋喃糖基-4-氨基-2(l歷-胞嘧啶酮。阿糖胞苷在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成活性的三磷酸阿糖胞苷，三磷酸阿糖胞苷通過抑制DNA多聚酶及少量滲入DNA，阻止DNA的合成，抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，在臨床上阿糖胞苷主要用于治療急性粒細(xì)胞白血病。但是阿糖胞苷分子極性很大，導(dǎo)致小腸的膜通透性差，因此差的膜通透性使得阿糖胞苷口服生物利用度很低(約為20%)。因此有必要尋找一種途徑來提高阿糖胞苷的膜通透性差，進(jìn)而提高其口服生物利用度。根據(jù)大量的文獻(xiàn)報(bào)道，如果對(duì)核苷類藥物的自由羥基進(jìn)行修飾，可能會(huì)提高這類藥物的膜通透性和口服生物利用度。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種合成^阿拉伯呋喃糖基-4-氨基-2(1歷-胞嘧啶酮的5，-^氨基酸酯鹽酸鹽，也就是阿糖胞苷的5，-^氨基酸酯鹽酸鹽的制備方法，以及這些化合物在提高阿糖胞苷小腸通透性和生物利用度中的應(yīng)用。所述的阿糖胞苷5，-^氨基酸酯鹽酸鹽包括a.5'纈氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(I),結(jié)構(gòu)如下b.5'-O-iK纈氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(n),結(jié)構(gòu)如下:c.5，-。-Z-異亮氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(m)，結(jié)構(gòu)如下:(III)d.5，-0-Z-苯丙氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(IV),結(jié)構(gòu)如下:OH(IV)e.5，-。-^苯丙氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(V),結(jié)構(gòu)如下:(V)f.5'-O-Z-脯氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(VI),結(jié)構(gòu)如下:(VI)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>g.5，-0-Z-色氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(VII),結(jié)構(gòu)如下:阿糖胞苷的5'-^氨基酸酯鹽酸鹽的合成可以按照以下通用路線進(jìn)行第一步:將10.6mL(75mmol)氯甲酸芐酯慢慢滴加到12.15g(50mmol)阿糖胞苷和12.6g(150mmol)碳酸氫鈉的"f二甲基乙酰胺("0mL)溶液中。加畢，繼續(xù)于室溫反應(yīng)24小時(shí)。抽濾，減壓濃縮除去《^二甲基乙酰胺，殘佘物以硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和二氯甲烷梯度洗脫，得化合物(雨)，結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>第二步攪拌，25。C時(shí)，將11mmo1(1.78g)的羰基二咪唑加至11mmol的^叔丁氧甲酰基-氨基酸與52m一L無水四氫呋喃的混和液中。加畢，25。C反應(yīng)90分鐘后，緩慢升溫至40—5(TC并繼續(xù)反應(yīng)20分鐘。將該反應(yīng)液于80。C時(shí)慢慢滴加至ij10腿ol(3.77g)化合物糧、1mmol(122mg)4-二甲基氨基吡啶、25.6mL無水三乙胺和50mL無水#，l二甲基甲酰胺的混和液中。加畢，繼續(xù)于80。C反應(yīng)1小時(shí)。冷卻，減壓蒸去四氫呋喃和三乙胺，將余下的《^二甲基甲酰胺溶液用冰醋酸調(diào)PH值至7.69,減壓濃縮蒸去《f二甲基甲酰胺，殘余物以乙酸乙酯提取，依次用蒸餾水、飽和食鹽水洗。有機(jī)層濃縮后，加入5y。鈀碳(W/W)進(jìn)行常壓催化氫化，反應(yīng)約需7其中R是節(jié)氧羰基(IX)結(jié)構(gòu)如下:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>小時(shí)。抽濾，濾液用硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和乙酸乙酯梯度洗脫，收集柱層析物，減壓濃縮至干，殘余物以少量乙醇溶解，冰水浴冷卻下通入氯化氫氣體，反應(yīng)約為4-7小時(shí)，析出固體。抽濾，乙醇和乙酸乙酯洗，得化合物(i)-(vn)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明第一次合成了系列阿糖胞苷的5'-^氨基酸酯鹽酸鹽，這些化合物顯著提高了阿糖胞苷的膜通透性，其中口服化合物(I)后，阿糖胞苷在大鼠體內(nèi)的絕對(duì)生物利用度由21.6%提高到60%。圖1是化合物U)和阿糖胞苷的血藥濃度-時(shí)間曲線(n=4)a.口服化合物(I)(以阿糖胞苷計(jì)30mg/Kg):()阿糖胞苷和(△):化合物(I);b.口服阿糖胞苷(口)阿糖胞苷；c.靜脈注射阿糖胞苷(x)阿糖胞苷。具體實(shí)施例方式根據(jù)通用合成路線，分別制得實(shí)施例1-7的化合物(見表1)。實(shí)施例1:',叔丁氧甲?；?Z-纈氨酸與羰基二咪唑反應(yīng)，反應(yīng)溶劑是無水四氫呋喃、二氯甲烷或環(huán)己烷，反應(yīng)溫度是0。C至溶劑沸點(diǎn)，優(yōu)選20-6(TC,反應(yīng)時(shí)間110分鐘；將該反應(yīng)液慢慢滴加到化合物VIII、4-二甲基氨基吡嚏、三乙胺與A,二甲基甲酰胺的混和液中。加畢，繼續(xù)反應(yīng)1-2小時(shí)，溫度50-100°C,優(yōu)選60-90。C。減壓蒸去低沸點(diǎn)溶劑，將余下的《薩二甲基甲酰胺溶液用冰醋酸調(diào)PH值至7.69,減壓蒸去《l二甲基甲酰胺，殘佘物以乙酸乙酯稀釋，依次用蒸餾水、飽和食鹽水洗。有機(jī)層濃縮到一定程度，加入鈀碳并進(jìn)行常壓催化氫化，反應(yīng)時(shí)間約需7小時(shí)。抽濾，濾液用硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和乙酸乙酯梯度洗脫，收集柱層析物，濃縮，殘余物以少量乙醇溶解，冰水洛冷卻下通入氯化氫氣體，約需4-7小時(shí),析出固體。抽濾，用乙醇和乙酸乙酯洗，得U)。實(shí)施例2:薩叔丁氧甲?；?^纈氨酸與羰基二咪唑反應(yīng)，反應(yīng)溶劑是無水四氫呋喃、二氯甲烷或環(huán)己烷，反應(yīng)溫度是(TC至溶劑沸點(diǎn)，優(yōu)選20-6(TC，反應(yīng)時(shí)間110分鐘；將該反應(yīng)液慢慢滴加到化合物雨、4-二甲基氨基吡嚏、三乙胺與A^二甲基甲酰胺的混和液中。加畢，繼續(xù)反應(yīng)1-2小時(shí)，溫度50-100°C,優(yōu)選60-90。C。減壓蒸去低沸點(diǎn)溶劑，將余下的戊f二甲基申酰胺溶液用冰醋酸調(diào)PH值至7.69,減壓蒸去《薩二甲基甲酰胺，殘余物以乙酸乙酯稀釋，依次用蒸餾水、飽和食鹽水洗。有機(jī)層濃縮到一定程度，加入鈀碳并進(jìn)行常壓催化氫化，反應(yīng)時(shí)間約需7小時(shí)。抽濾，濾液用硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和乙酸乙酯梯度洗脫，收集柱層析物，濃縮，殘余物以少量乙醇溶解，冰水洛冷卻下通入氯化氫氣體，約需4-7小時(shí)，析出固體。抽濾，用乙醇和乙酸乙酯洗，得(n)。實(shí)施例3:F叔丁氧甲?；?z-異亮氨酸與羰基二咪唑反應(yīng)，反應(yīng)溶劑是無水四氫呋喃、二氯甲垸或環(huán)己烷，反應(yīng)溫度是(TC至溶劑沸點(diǎn)，優(yōu)選20-60°C,反應(yīng)時(shí)間110分鐘；將該反應(yīng)液慢慢滴加到化合物雨、4-二甲基氨基口比p定、三乙胺與戊l二甲基甲酰胺的混和液中。加畢，繼續(xù)反應(yīng)1-2小時(shí)，溫度50-100°C,優(yōu)選60-90。C。減壓蒸去低沸點(diǎn)溶劑，將余下的#,1二甲基甲酰胺溶液用冰醋酸調(diào)PH值至7.69,減壓蒸去《^二甲基甲酰胺，殘余物以乙酸乙酯稀釋，依次用蒸餾水、飽和食鹽水洗。有機(jī)層濃縮到一定程度，加入鈀碳并進(jìn)行常壓催化氫化，反應(yīng)時(shí)間約需7小時(shí)。抽濾，濾液用硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和乙酸乙酯梯度洗脫，收集柱層析物，濃縮，殘余物以少量乙醇溶解，冰水浴冷卻下通入氯化氫氣體，約需4-7小時(shí)，析出固體。抽濾，用乙醇和乙酸乙酯洗，得(m)。實(shí)施例4:^叔丁氧甲?；?Z-苯丙氨酸與羰基二咪唑反應(yīng)，反應(yīng)溶劑是無水四氫呋喃、二氯甲烷或環(huán)己烷，反應(yīng)溫度是(TC至溶劑沸點(diǎn)，優(yōu)選20-6(TC，反應(yīng)時(shí)間110分鐘；將該反應(yīng)液慢慢滴加到化合物V1II、4-二甲基氨基吡P定、三乙胺與《^二甲基甲酰胺的混和液中。加畢，繼續(xù)反應(yīng)1-2小時(shí)，溫度50-100°C,優(yōu)選60-9(TC。減壓蒸去低沸點(diǎn)溶劑，將余下的戊薩二甲基甲酰胺溶液用冰醋酸調(diào)pH值至7.69,減壓蒸去《l二甲基甲酰胺，殘余物以乙酸乙酯稀釋，依次用蒸餾水、飽和食鹽水洗。有機(jī)層濃縮到一定程度，加入鈀碳并進(jìn)行常壓催化氫化，反應(yīng)時(shí)間約需7小時(shí)。抽濾，濾液用硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和乙酸乙酯梯度洗脫，收集柱層析物，濃縮，殘余物以少量乙醇溶解，冰水洛冷卻下通入氯化氫氣體，約需4-7小時(shí)，析出固體。抽濾，用乙醇和乙酸乙酯洗，得(IV)。實(shí)施例5:^叔丁氧甲?；?^苯丙氨酸與羰基二咪唑反應(yīng)，反應(yīng)溶劑是無水四氫呋喃、二氯甲烷或環(huán)己烷，反應(yīng)溫度是0'C至溶劑沸點(diǎn)，優(yōu)選20-6(TC,反應(yīng)時(shí)間110分鐘；將該反應(yīng)液慢慢滴加到化合物雨、4-二甲基氨基吡嚏、三乙胺與A薩二甲基甲酰胺的混和液中。加畢，繼續(xù)反應(yīng)1-2小時(shí)，溫度50-100°C，優(yōu)選60-90。C。減壓蒸去低沸點(diǎn)溶劑，將余下的戊f二甲基甲酰胺溶液用冰醋酸調(diào)pH值至7.69,減壓蒸去《^二甲基甲酰胺，殘佘物以乙酸乙酯稀釋，依次用蒸餾水、飽和食鹽水洗。有機(jī)層濃縮到一定程度，加入鈀碳并進(jìn)行常壓催化氫化，反應(yīng)時(shí)間約需7小時(shí)。抽濾，濾液用硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和乙酸乙酯梯度洗脫，收集柱層析物，濃縮，殘余物以少量乙醇溶解，冰水浴冷卻下通入氯化氫氣體，約需4-7小時(shí)，析出固體。抽濾，用乙醇和乙酸乙酯洗，得(V)。實(shí)施例6:^叔丁氧甲?；?脯氨酸與羰基二咪唑反應(yīng)，反應(yīng)溶劑是無水四氫呋喃、二氯甲垸或環(huán)己烷，反應(yīng)溫度是(TC至溶劑沸點(diǎn)，優(yōu)選20-6(TC,反應(yīng)時(shí)間110分鐘；將該反應(yīng)液慢慢滴加到化合物V111、4-二甲基氨基吡嚏、三乙胺與A^二甲基甲酰胺的混和液中。加畢，繼續(xù)反應(yīng)1-2小時(shí)，溫度50-100°C，優(yōu)選60-90。C。減壓蒸去低沸點(diǎn)溶劑，將余下的《薩二甲基甲酰胺溶液用冰醋酸調(diào)pH值至7.69,減壓蒸去A^二甲基甲酰胺，殘余物以乙酸乙酯稀釋，依次用蒸餾水、飽和食鹽水洗。有機(jī)層濃縮到一定程度，加入鈀碳并進(jìn)行常壓催化氫化，反應(yīng)時(shí)間約需7小時(shí)。抽濾，濾液用硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和乙酸乙酯梯度洗脫，收集柱層析物，濃縮，殘余物以少量乙醇溶解，冰水浴冷卻下通入氯化氫氣體，約需4-7小時(shí)，析出固體。抽濾，用乙醇和乙酸乙酯洗，得(VI)。實(shí)施例7:^叔丁氧甲酰基-Z-色氨酸與羰基二咪唑反應(yīng)，反應(yīng)溶劑是無水四氫呋喃、二氯甲烷或環(huán)己烷，反應(yīng)溫度是(TC至溶劑沸點(diǎn)，優(yōu)選20-6(TC，反應(yīng)時(shí)間110分鐘；將該反應(yīng)液慢慢滴加到化合物VlIl、4-二甲基氨基吡嚏、三乙胺與《f二甲基甲酰胺的混和液中。加畢，繼續(xù)反應(yīng)1-2小時(shí)，溫度50-100°C,優(yōu)選60-9(TC。減壓蒸去低沸點(diǎn)溶劑，將佘下的《,二甲基甲酰胺溶液用冰醋酸調(diào)PH值至7.69,減壓蒸去戊^二甲基甲酰胺，殘佘物以乙酸乙酯稀釋，依次用蒸餾水、飽和食鹽水洗。有機(jī)層濃縮到一定程度，加入鈀碳并進(jìn)行常壓催化氫化，反應(yīng)時(shí)間約需7小時(shí)。抽濾，濾液用硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和乙酸乙酯梯度洗脫，收集柱層析物，濃縮，殘佘物以少量乙醇溶解，冰水洛冷卻下通入氯化氫氣體，約需4-7小時(shí)，析出固體。抽濾，用乙醇和乙酸乙酯洗，得(VII)。實(shí)施例8:利用大鼠在體小腸單灌流技術(shù)，選取10cm長(zhǎng)的大鼠空腸，兩端插管。將阿糖胞苷和化合物(1)-(VII)分別溶解在Kreb-Ringer，s營(yíng)養(yǎng)液(pH5.5),濃度是O.05mM，以0.2mL/min灌流通過大鼠空腸，得到阿糖胞苷和化合物(i)-(vn)在空腸的膜通透率。表2阿糖胞苷和化合物(I)-(VII)的膜通透率<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例9:大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究由實(shí)施例8可知在化合物(i)-(VII)中，化合物(I)的膜通透率最高。給實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組Sprague-Dawley大鼠分別灌胃(I)水溶液和阿糖胞苷水溶液(以阿糖胞苷計(jì)均為30mg/Kg)，測(cè)定血漿中阿糖胞苷的濃度。同時(shí)Sprague-Dawley大鼠靜脈注射阿糖胞苷水溶液(8mg/Kg)。由圖1和表3可以得出，阿糖胞苷在實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組吸收明顯加快，實(shí)驗(yàn)組阿糖胞苷的生物利用度是60%,而對(duì)照組僅為21.6%。因此，化合物(I)能明顯提高ara-C的口服生物利用度。表3口服化合物(I)和阿糖胞苷后，阿糖胞苷的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(以阿糖胞苷計(jì)30mg/Kg)給藥AUC。-t(ngh/mL)t1/2(h)T顕(h)C陽(yáng)(|ag/mUF(%)u)53.754.310.7517.1660.0阿糖胞苷19.531.721.55.021.8說明Sprague-Dawley大鼠靜脈注射阿糖胞苷水溶液(8mg/Kg)后,平均AUCO-t是23.89|ig.h/mL。表1實(shí)施例1-7的化合物<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>權(quán)利要求1、阿糖胞苷5’-O-氨基酸酯鹽酸鹽，其特征在于其結(jié)構(gòu)如下a.5’-O-L-纈氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(I)，結(jié)構(gòu)如下b.5’-O-D-纈氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(II)，結(jié)構(gòu)如下c.5’-O-L-異亮氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(III)，結(jié)構(gòu)如下d.5’-O-L-苯丙氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(IV)，結(jié)構(gòu)如下e.5’-O-D-苯丙氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(V)，結(jié)構(gòu)如下f.5’-O-L-脯氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(VI)，結(jié)構(gòu)如下g.5’-O-L-色氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽(VII)，結(jié)構(gòu)如下。2、一種如權(quán)利要求l所述的阿糖胞苷5'-^氨基酸酯鹽酸鹽的制備方法，其特征在于將75腿o1的氯甲酸節(jié)酯10.6mL慢慢滴加到含12.15g50腿ol的阿糖胞苷和12.6g150腿ol碳酸氫鈉的二甲基乙酰胺溶液250mL中，滴加完畢后繼續(xù)室溫反應(yīng)24小時(shí)；反應(yīng)結(jié)東后，抽濾，減壓蒸去濾液中的A^二甲基乙酰胺，殘余物以硅膠膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和二氯甲烷梯度洗脫，得化合物(VIID,結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(vm)其中R是芐氧羰基(IX),結(jié)構(gòu)如下。3、一種如權(quán)利要求1所述的阿糖胞苷5'-^氨基酸酯鹽酸鹽的制備方法，其特征在于25。C時(shí)，將llmmol的羰基二咪唑1.78g加至11腿ol的AS叔丁氧甲?；?氨基酸與52mL無水四氫吹喃的混和液中；加畢，25。C反應(yīng)90分鐘后，緩慢升溫至40-5(TC并繼續(xù)反應(yīng)20分鐘，將該反應(yīng)液于80。C時(shí)慢慢滴加到含10mmo13.77g化合物雨、1mmo1122mg4-二甲基氨基吡啶、25.6mL無水三乙胺和50mL無水《f二甲基甲酰胺的混和液中；加畢，繼續(xù)于80。C反應(yīng)l小時(shí)，冷卻，減壓蒸去四氫吹喃和三乙胺，將佘下的《^二甲基甲酰胺溶液用冰醋酸調(diào)pH值至7.69,減壓濃縮蒸去《^二甲基甲酰胺，殘佘物以乙酸乙酯提取，依次用蒸僧水、飽和食鹽水洗；有機(jī)層濃縮后，加入5"/。鈀碳(W/W)進(jìn)行常壓催化氫化，反應(yīng)約需7小時(shí)；抽濾，濾液用硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析，甲醇和乙酸乙酯梯度洗脫，收集柱層析物，減壓濃縮至干，殘余物以少量乙醇溶解，冰水浴冷卻下通入氯化氫氣體，反應(yīng)約為4-7小時(shí)，析出固體；抽濾，乙醇和乙酸乙酯洗，得化合物(1)-(VII)。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的阿糖胞苷5'-^氨基酸酯鹽酸鹽的制備方法，其特征在于所述的^叔丁氧甲酰基-氨基酸為y^叔丁氧甲?；?z-纈氨酸、^叔丁氧甲?；?,纈氨酸、^叔丁氧甲?；?Z-異亮氨酸、I叔丁氧甲?；?Z-苯丙氨酸、1叔丁氧甲?；?/"苯丙氨酸、^叔丁氧甲?；?Z-脯氨酸、^叔丁氧甲?；?Z-色氨酸。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，公開了一種涉及干擾DNA合成的藥物1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-4-氨基-2(1H)-胞嘧啶酮的5’-O-氨基酸酯鹽酸鹽，即阿糖胞苷5’-O-氨基酸酯鹽酸鹽及其制備方法。本發(fā)明所涉及的鹽包括5’-O-L-纈氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽、5’-O-D-纈氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽、5’-O-L-異亮氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽、5’-O-L-苯丙氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽、5’-O-D-苯丙氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽、5’-O-L-脯氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽、5’-O-L-色氨酰阿糖胞苷鹽酸鹽。其制備方法簡(jiǎn)單易行，適應(yīng)工業(yè)化生產(chǎn)，所制備的產(chǎn)品能夠較好地提高了阿糖胞苷的膜通透性，且其口服后大鼠體內(nèi)的絕對(duì)生物利用度由21.6％提高到60％。文檔編號(hào)C07H19/09GK101250209SQ20081008319公開日2008年8月27日申請(qǐng)日期2008年3月6日優(yōu)先權(quán)日2007年3月27日發(fā)明者何仲貴,進(jìn)孫,孫勇兵,張?zhí)旌?施世良,許佑君申請(qǐng)人:沈陽(yáng)藥科大學(xué)