專利名稱：取代的2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物及其作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用的制作方法
專利說明取代的2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物及其作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用 本發(fā)明涉及取代的2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物，其藥學(xué)上可接受的鹽，包含它們的藥物組合物及其作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用。
作為本發(fā)明目的的衍生物具有作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的活性且由此用于預(yù)防、緩解和治愈廣泛的病理情況，所述的病理情況包括，但不限于神經(jīng)病學(xué)的，認(rèn)知，精神病，炎性，泌尿生殖和胃腸疾病，其中上述機理已被描述為扮演病理角色。
本發(fā)明的化合物基本上不具有單胺氧化酶(MAO)抑制作用，尤其是在預(yù)防、緩解和/或治愈所述疾病中為治療有效的劑量。

背景技術(shù)：
化學(xué)背景 GB 586,645專利中描述了下述通式的氨基酸衍生物的合成
它特別描述了具有刺激子宮平滑肌特性的N-羥基烷基酰胺類的合成。
專利申請WO 90/14334中描述了下述通式的單-取代的N-苯基烷基α-氨基羧酰胺衍生物，其用作抗癲癇藥，抗帕金森病藥，神經(jīng)保護(hù)劑，抗抑郁藥，解痙藥和/或安眠劑
其中 R為(C1-C8)烷基，(C3-C8)環(huán)烷基，呋喃基，噻吩基，吡啶基或苯基環(huán)，其任選被1-4個獨立地選自鹵素，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基和三氟甲基的取代基取代；A為-(CH2)m-，-(CH2)p-X-(CH2)q-基團(tuán)，其中m為1-4的整數(shù)，p和q之一為0且另一個為0或1-4的整數(shù)，X為-O-，-S-或-NR4-，其中R4為氫或(C1-C4)烷基；n為0或1；各R1和R2獨立地為氫或(C1-C4)烷基；R3為氫，任選被羥基取代的(C1-C4)烷基或任選如上所述被取代的苯基；R3′為氫或R3和R3′共同構(gòu)成(C3-C6)環(huán)烷基環(huán)；R5和R6各自獨立地為氫或(C1-C6)烷基，條件是當(dāng)R為(C1-C8)烷基時，A為-(CH2)p-X-(CH2)q-基團(tuán)，其中p和q均為0，X為-O-，-S-或-NR4-，其中R4為氫或C1-C4烷基。
我們的專利申請中合成的衍生物無一在WO 90/14334中被披露和制備。
在其它專利申請中，請求保護(hù)屬于WO 90/14334中通式選擇的化合物在具有其它活性的組合物中的應(yīng)用，特別地 WO 99/35125用作止痛藥的α-氨基酰胺衍生物 WO 03/020273包含加巴噴丁或其類似物和α-氨基酰胺和其類似物的藥物組合物及其止痛應(yīng)用 WO 04/062655用作抗偏頭痛藥的α-氨基酰胺衍生物 WO 05/018627用作抗炎藥的α-氨基酰胺衍生物 WO 05/070405用于治療下泌尿道疾病的α-氨基酰胺衍生物 WO 05/102300用于治療多動腿綜合征和附帶病癥的α-氨基酰胺衍生物 WO 06/027052(鹵素芐氧基)芐氨基-丙酰胺類在制備作為鈉和/或鈣通道選擇性調(diào)節(jié)劑有效的藥物中的應(yīng)用 EP Appl.N°06012352.8用于治療認(rèn)知障礙的α-氨基酰胺衍生物。
在專利申請WO 98/35957中描述了下式的酰胺衍生物
并且請求保護(hù)它們在減肥和進(jìn)食障礙中的應(yīng)用。
實際上我們的專利申請中合成的化合物中無一在WO 98/35957中被合成或具體列舉。
-在WO 2004/087125中描述了下式的化合物
請求保護(hù)鈉通道的阻斷機理和許多藥理學(xué)活性，特別是抗痛和抗膀胱功能失調(diào)活性。
必須強調(diào)的是當(dāng)X2為亞烷基時，它不能為-CH2-CH2-，而僅為-CH2-，由此本申請中的2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物中無一屬于上述報導(dǎo)的通式范圍。
-Eleonora Ghidini等在Bioorganic & Medicinal Chemistry2006，14，3263-3274中描述了下式的化合物
已經(jīng)測試了這些化合物的抗驚厥活性。
本專利申請中披露和合成的化合物中無一屬于上述通式的范圍。
-2006年11月29日提交的懸而未決的申請PCT/EP2006/011443(WO 2007/071311)涉及下式的2-苯基乙氨基衍生物
本申請中請求保護(hù)的化合物中無一屬于PCT/EP 2006/011443(WO2007/071311)范圍內(nèi)。
生物學(xué)背景 鈉通道在神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)中扮演重要角色，在細(xì)胞和細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)各處迅速傳遞電脈沖，由此協(xié)調(diào)從運動到認(rèn)知的高級過程。這些通道是大型跨膜蛋白質(zhì)，它們能夠在不同的狀態(tài)之間切換，使鈉離子能夠選擇性地滲透。就這種過程而言，需要動作電位使膜去極化，因此這些通道是電壓-門控的。過去幾年中，已經(jīng)對鈉通道有更好的了解，并開發(fā)了與它們相互作用的藥物。
電壓-門控鈉通道最初基于它們對河豚毒素的敏感性加以分類，從低的納摩爾級(河豚毒素敏感性，TTXs)到高的微摩爾級(河豚毒素耐受性，TTXr)。迄今，已經(jīng)鑒定了9種不同的鈉通道α亞單位，分為Nav1.1至Nav1.9。
Nav1.1至Nav1.4、Nav1.6和Nav1.7是TTXs，而Nav1.5、Nav1.8和Nav1.9是TTXr，具有不同程度的敏感性。Nav1.1至Nav1.3和Nav1.6主要在CNS中被表達(dá)，而Nav1.4和Nav1.5主要在肌肉中被表達(dá)(分別為骨骼肌和心臟)，且Nav1.7，Nav1.8和Nav1.9主要在小DRG感覺神經(jīng)元中被表達(dá)。
已經(jīng)清楚，一些具有未知作用機理的藥物實際上通過調(diào)節(jié)鈉通道電導(dǎo)發(fā)揮作用，包括局部麻醉劑、I類抗心律失常劑和抗驚厥劑。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了神經(jīng)元鈉通道阻斷劑在治療癲癇(苯妥英和卡馬西平)、雙相性精神障礙(拉莫三嗪)、預(yù)防神經(jīng)變性和減少神經(jīng)病性疼痛中的應(yīng)用。各種使神經(jīng)元興奮性穩(wěn)定的抗癲癇藥在神經(jīng)病性疼痛中是有效的(例如卡馬西平)。
另外，在若干炎性疼痛模型中已經(jīng)觀察到鈉通道表達(dá)或活性的增加，提示了鈉通道在炎性疼痛中的角色。
鈣通道是跨膜性多亞單位蛋白質(zhì)，控制鈣離子從細(xì)胞外液進(jìn)入細(xì)胞。通常，鈣通道是電壓依賴性的，被稱為電壓門控性鈣通道(VGCC)。VGCC見于哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)各處，它們調(diào)節(jié)對于細(xì)胞存活和功能而言是重要的細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平。細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度與動物體內(nèi)的許多生命過程有關(guān)，例如神經(jīng)遞質(zhì)釋放，肌肉收縮，起搏點活動和激素分泌。動物中所有“可興奮的”細(xì)胞、例如中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的神經(jīng)元、外周神經(jīng)細(xì)胞和肌肉細(xì)胞、包括骨骼肌、心肌和靜脈與動脈平滑肌的那些，都具有電壓依賴性鈣通道。
鈣通道是一個大型家族，具有很多在遺傳、生理學(xué)和藥理學(xué)上不同的亞型。基于從個別神經(jīng)元記錄的鈣電流的生物物理性質(zhì)，已經(jīng)描述了兩種超家族高電壓活化(HVA)和低電壓活化(LVA)鈣通道。被稱為L-型、P-型、Q-型、N-型、R-型的鈣電流是HVA，而被稱為T-型的是LVA。通過分子鑒定已經(jīng)鑒定、克隆和表達(dá)了十種不同的鈣亞型，分為三個家族Cav1家族(Cav1.1，1.2，1.3，1.4)在功能上涉及L-型Ca電流；Cav2家族(Cav2.1，2.2，2.3)在功能上涉及P/Q、N、R-型電流；且Cav3家族(Cav3.1，3.2，3.3)在功能上涉及T-型電流 據(jù)信鈣通道與某些疾病狀態(tài)有關(guān)聯(lián)。一些可用于治療哺乳動物、包括人的各種心血管疾病的化合物被認(rèn)為通過調(diào)節(jié)存在于心臟和/或血管平滑肌中的電壓依賴性鈣通道的功能來發(fā)揮它們的有益效果。具有鈣通道活性的化合物也已被推斷用于治療疼痛。特別是負(fù)責(zé)神經(jīng)遞質(zhì)釋放調(diào)節(jié)的N-型鈣通道(Cav2.2)被認(rèn)為在傷害感受傳遞中扮演突出的角色，這不僅由于它們的組織分布，也來自若干藥理研究的結(jié)果。在損傷的神經(jīng)病性疼痛模型中發(fā)現(xiàn)N-型鈣通道在同側(cè)背側(cè)角中被增量調(diào)節(jié)了(Cizkova D.，Marsala J.，Lukacova N.，Marsala M.，JergovaS.，Orendacova J.，Yaksh T.L.Exp.Brain Res.(2002)147456-463)。Specific N-type calcium channel blockers were shownto be effective in reducing pain responses in neuropathic painmodels(Mattews E.A.，Dickenson A.H.Pain(2001)92235-246)、II期福爾馬林試驗(Diaz A.，Dickenson A.H.Pain(1997)6993-100)和由膝關(guān)節(jié)炎癥誘發(fā)的痛覺過敏(Nebe J.，Vanegas H.，Schaible H.G.Exp.Brain Res.(1998)12061-69)中顯示有效降低疼痛反應(yīng)。缺乏N-型鈣通道的突變小鼠被發(fā)現(xiàn)降低了對持續(xù)性疼痛反應(yīng)，表現(xiàn)為II期福爾馬林試驗期間的疼痛反應(yīng)降低(Kim C.，Jun K.，Lee T.，Kim S.S.，Mcenery M.W.，Chin H.，Kim H.L，Park J.M.，Kim D.K.，Jung S.J.，Kim J.，Shin H.S.Mol.Cell Neurosci.(2001)18235-245；Hatakeyama S.，Wakamori M，Ino M.，Miyamoto N.，TakahashiE.，Yoshinaga T.，Sawada K.，Imoto K.，Tanaka I.，Yoshizawa T.，Nishizawa Y.，Mori Y.，Nidome T.，Shoji S.Neuroreport(2001)122423-2427)，以及降低了神經(jīng)病性疼痛反應(yīng)，表現(xiàn)為脊神經(jīng)結(jié)扎模型中的機械性異常疼痛和熱性痛覺過敏降低。有趣的是，這些小鼠也顯示比野生型更低的焦慮水平(Saegusa H.，Kurihara T.，Zong S.，Kazuno A.，Matsuda Y.Nonaka T.，Han W.，Toriyama H.，TanabeT.，EMBO J.(2001)202349-2356)。N-型鈣通道在疼痛中的牽連性已經(jīng)在臨床上得到齊考諾肽的進(jìn)一步驗證，這是一種從海洋小螺Conus Magnus毒液衍生的肽。這種肽在治療應(yīng)用上的限制在于它只能對人類鞘內(nèi)進(jìn)行給藥(Bowersox S.S.和Luther R.Toxicon，(1998)361651-1658)。
所有這些發(fā)現(xiàn)都表明，具有鈉和/或鈣通道阻斷作用的化合物在預(yù)防、減輕和治愈廣泛的病狀中具有很高的治療潛力，包括神經(jīng)病學(xué)的、精神病學(xué)的、泌尿生殖和胃腸疾病，其中上述機理已被描述為扮演病理學(xué)角色。
有很多文章和專利描述過治療或調(diào)節(jié)多種障礙的鈉通道和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑或拮抗劑，例如它們用作局部麻醉劑、抗躁狂抗抑郁劑、治療單極性抑郁、尿失禁、腹瀉、炎癥、癲癇、神經(jīng)變性病癥、神經(jīng)細(xì)胞死亡、神經(jīng)病性疼痛、偏頭痛、急性痛覺過敏與炎癥、腎疾病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、支氣管痙攣、痛經(jīng)、食管痙攣、青光眼、尿道障礙、胃腸運動障礙的藥物。
這類描述鈉和/或鈣通道阻斷劑及其應(yīng)用的文章和專利/專利申請的不完全列表包括如下所示的參考文獻(xiàn) C.Alzheimer在Adv.Exp.Med.Biol.2002，513，161-181中描述了作為神經(jīng)保護(hù)物質(zhì)靶標(biāo)的鈉和鈣通道。
Vanegas e Schaible(Pain 2000，85，9-18)討論了鈣通道拮抗劑對于疼痛、痛覺過敏和異常疼痛的脊髓機理的效應(yīng)。
WO 03/057219涉及用作治療或調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙，例如神經(jīng)病性疼痛，炎性疼痛，與炎癥相關(guān)的疼痛或癲癇的鈉通道阻斷劑。
WO99/14199中披露了取代的1，2，3，4，5，6-六氫-2，6-亞甲基-3-苯并吖辛因-10-oles作為用于治療幾種疾病的有效鈉通道阻斷劑，所述的疾病例如中風(fēng)，神經(jīng)變性疾患，阿爾茨海默病，帕金森病海心血管疾患。
WO01/74779中披露了新的氨基吡啶鈉通道阻斷劑及其作為抗驚厥藥，局部麻醉劑，抗心律失常藥在治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾患，例如肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)，治療或預(yù)防急性或慢性痛和治療或預(yù)防糖尿病神經(jīng)病變中的應(yīng)用。
WO04/087125中披露了作為用于治療慢性和急性痛，耳鳴，腸紊亂，膀胱功能障礙和脫髓鞘疾病的哺乳動物鈉通道抑制劑的氨基酸衍生物。
美國專利US5,051,403涉及降低與局部缺血、例如中風(fēng)有關(guān)的神經(jīng)元損傷的方法，給予結(jié)合性/抑制性ω-芋螺毒素肽，其中該肽是以選擇性地特異性抑制神經(jīng)元組織中電壓-門控鈣通道電流為特征的。
美國專利US5,587,454涉及產(chǎn)生痛覺缺失的組合物和方法，特別是在疼痛和神經(jīng)病性疼痛的治療中。
美國專利US5,863,952涉及治療缺血性中風(fēng)的鈣通道拮抗劑。
美國專利US6,011,035涉及鈣通道阻斷劑，可用于治療例如中風(fēng)和疼痛等病癥。
美國專利US6,117,841涉及鈣通道阻斷劑和它們在中風(fēng)、腦缺血、疼痛、頭部創(chuàng)傷或癲癇治療中的應(yīng)用。
美國專利US6,362,174涉及治療治療中風(fēng)、腦缺血、疼痛、癲癇和頭部創(chuàng)傷的N-型鈣通道阻斷劑。
美國專利US6,420,383和美國專利US6,472,530涉及新穎的鈣通道阻斷劑，可用于治療和預(yù)防許多障礙，例如高血壓、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、支氣管痙攣、痛經(jīng)、食管痙攣、青光眼、早產(chǎn)、尿道障礙、胃腸運動障礙和心血管疾患。
美國專利US6,458,781涉及阻斷鈣通道的化合物和它們治療中風(fēng)、腦缺血、疼痛、頭部創(chuàng)傷或癲癇的應(yīng)用化合物。
美國專利US6,521,647涉及鈣通道阻斷劑在動物腎疾病治療中的應(yīng)用，尤其慢性腎衰竭。
WO 97/10210涉及三環(huán)雜環(huán)衍生物和它們在療法中的應(yīng)用，特別是作為鈣通道拮抗劑，例如用于治療局部缺血，特別是缺血性休克。
WO 03/018561涉及作為N-型鈣通道拮抗劑的喹啉化合物和使用這類化合物治療或預(yù)防疼痛或傷害感受的方法。
單胺氧化酶(MAO)是存在于神經(jīng)元與非神經(jīng)元細(xì)胞的外部線粒體膜中的酶。MAO存在兩種同工型MAO-A和MAO-B。MAO酶負(fù)責(zé)內(nèi)源性與外來性胺的氧化性脫氨基作用，并具有不同的底物優(yōu)先性、抑制劑特異性和組織分布。5-羥色胺，去甲腎上腺素和腎上腺素是MAO-A優(yōu)先的底物，氯吉蘭是選擇性MAO-A抑制劑；而MAO-B優(yōu)選β-苯基乙基胺作為底物，幾乎選擇性地被司來吉蘭所抑制。多巴胺、酪胺和色胺都被MAO-A和MAO-B所氧化，特別是在人腦中，多巴胺被MAO-B脫氨基達(dá)80％ MAO的抑制允許內(nèi)源性與外源性底物蓄積下來，由此當(dāng)幾乎完全被抑制時(＞90％)，可以改變規(guī)律性單胺遞質(zhì)的動力學(xué)。MAO調(diào)節(jié)大多數(shù)重要神經(jīng)遞質(zhì)的腦中濃度，例如去甲腎上腺素、5-羥色胺和多巴胺，它們涉及情緒、焦慮和運動。因而，MAO被認(rèn)為與各種精神和神經(jīng)病學(xué)障礙有密切聯(lián)系，例如抑郁、焦慮和帕金森氏病(PD)。
MAO-A抑制劑主要在精神病學(xué)中被用于治療重癥、頑固性與非典型性抑郁，因為它們能夠增加降低的5-羥色胺和去甲腎上腺素腦中水平。最近，MAO-A抑制劑已經(jīng)用于治療患有焦慮癥的患者，例如社交恐怖、恐慌癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙和強迫觀念與行為障礙。
MAO-B抑制劑主要在神經(jīng)病學(xué)中被用于治療PD。
最近也有證據(jù)和興趣在于MAO-B在其他病理條件中的角色，例如阿爾茨海默氏病(AD)。迄今尚未報道過MAO-B在輔助遞質(zhì)代謝中的牽連性的證據(jù)，例如膽囊收縮素、P物質(zhì)、促生長素抑制素和神經(jīng)降壓素，它們牽涉疼痛感覺的調(diào)節(jié)。為此，MAO-B抑制劑在疼痛綜合征中的應(yīng)用不存在科學(xué)原理。
在臨床實踐期間已經(jīng)報道過采用MAO抑制劑的不良藥物反應(yīng)。第一代非選擇性和不可逆性MAO抑制劑、例如反苯環(huán)丙酰胺(tranylcypromide)和苯乙肼具有嚴(yán)重的副作用，包括肝毒性、體位性低血壓和最重要的高血壓危象，其發(fā)生在攝入含有酪胺的食物之后(Cooper AJ.-Tyramine and irreversible monoamine oxidaseinhibitors in clinical practice.-Br J Psych Suppl 198938-45)。
在使用這些非選擇性和不可逆性MAO抑制劑時，必須遵守嚴(yán)格的限酪胺飲食。在反苯環(huán)丙胺療法停止后4周和苯乙肼療法停止后11周以上，對于酪胺的增壓敏感性才會正常。
司來吉蘭是一種不可逆性MAO-B抑制劑，尤其在與左旋多巴聯(lián)合使用時能夠?qū)е翽D患者的厭食/惡心、口干、運動障礙和體位性低血壓，后者是最成問題的(Volz H.P.和Gleiter C.H.-Monoamineoxidase inhibitors.A perspective on their use in the elderly.-Drugs Aging 13(1998)，pp.341-355)。
在單一療法中，接受司來吉蘭的患者比接受安慰劑的患者更經(jīng)常發(fā)生厭食/惡心、骨骼肌損傷和心律失常。除了這些副作用以外，注意到血清AST和ALT水平升高的速率也增加了。
最頻繁報道的嗎氯貝胺的副作用是睡眠紊亂、焦慮增加、不安靜和頭痛，這是一種選擇性和可逆性MAO-A抑制劑。
選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs)與嗎氯貝胺的組合在頑固性抑郁的情況下具有良好的功效，但是關(guān)于由這種組合導(dǎo)致的毒副作用引發(fā)了爭論，例如血清素源性綜合征(Baumann P.-Pharmacokinetic-pharmacodynamic relationship of the selectiveserotonin reuptake inhibitors.Clin Pharmacokinet 31(1996)，pp 444-469)。由于心律失常和肝酶水平增加，應(yīng)當(dāng)定期檢查心電圖和實驗室數(shù)值。
伴隨衰老而發(fā)生的很多類型生理變化影響MAO抑制劑的藥效學(xué)和藥動學(xué)。事實上，老年人的藥動學(xué)變量明顯不同于更年輕的患者。包括吸收、分布、代謝和排泄在內(nèi)的這些變量不得不加以考慮，以避免或者最小化某些不良效應(yīng)和藥物-藥物相互作用。老年患者一般比年輕患者更敏感于副作用，包括不良的藥物反應(yīng)。高血壓危象可能在老年人中比在年輕患者中更頻繁發(fā)生，因為老年人的心血管系統(tǒng)已經(jīng)老化。
擬交感神經(jīng)藥與MAO抑制劑組合的使用也可以升高血壓。另外，與安慰劑相比，苯乙肼與顯著更高發(fā)的下列副作用有關(guān)嗜睡、震顫、運動障礙、腹瀉、排尿困難、體位效應(yīng)和不良的皮膚病學(xué)效應(yīng)。有趣的是在老年人中，據(jù)報道在用嗎氯貝胺治療期間頭痛的頻率高于年輕患者(Volz H.P.和Gleiter C.H.-Monoamine oxidase inhibitors.Aperspective on their use in the elderly.Drugs Aging 13(1998)，pp.341-355)。
MAO抑制劑(優(yōu)選MAO-A，但并不是無選擇的MAO-A/MAO-B)有時是用于抑郁的處方用藥。由于潛在的自殺風(fēng)險，由過量服用引起的不良藥物反應(yīng)和毒性是在選擇抗抑郁劑時考慮的重要因素。另外，在使用高劑量的MAO抑制劑時，不良的心血管效應(yīng)似乎明顯增加；因為在如此高的劑量下喪失MAO選擇性，酪胺能夠誘發(fā)潛在危險的高血壓反應(yīng)。急性過量服用MAO抑制劑導(dǎo)致激動、幻覺、高熱、反射亢進(jìn)和驚厥。異常血壓也是中毒的跡象，以致可能需要灌胃和維持心肺功能。過量服用傳統(tǒng)的非選擇性和不可逆性MAO抑制劑是相當(dāng)危險的，有時是致命的(Yamada和Richelson，1996.Pharmacology ofantidepressants in the elderly.InDavid JR，Snyder L.，editors.Handbook of pharmacology of aging.Boca RatonCRC Press 1996)。
在治療其中鈉和鈣通道機理扮演病理角色的病變中，MAO酶抑制沒有益處。此外，MAO抑制副作用可能帶來至少兩種類型的消極性限制 1)飲食進(jìn)食酪胺含量高的食物可以導(dǎo)致嚴(yán)重的、甚至危及生命的系統(tǒng)血壓增加(所謂的“奶酪效應(yīng)”)。
2)藥理作為例子經(jīng)常用藥物組合治療疼痛，例如類阿片衍生物和三環(huán)抗抑郁劑。這類與MAO抑制劑的組合是危險的，因為這可能導(dǎo)致5-羥色胺能綜合征(激動、震顫、幻覺、高熱和心律失常)。
因而，消除或者顯著減少有鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑活性的藥物的MAO抑制活性可用于預(yù)防、減輕和治愈其中所述機理扮演病理角色的廣泛病狀，包括神經(jīng)病學(xué)、精神病學(xué)的、炎性、泌尿生殖和胃腸疾病，這是相對于具有相似功效以及上述副作用的化合物而言的一項意外的和實質(zhì)性治療改進(jìn)。
考慮這些關(guān)于MAO抑制劑的發(fā)現(xiàn)、特別是缺乏任何關(guān)于MAO-B在病理性病變中的角色的證據(jù)，象疼痛、偏頭痛、炎性、泌尿生殖和胃腸疾病，可以想象MAO-B抑制作用不應(yīng)當(dāng)是用于上述病變的化合物的必要特征，避免在慢性和/或長期治療期間的任何可能的副作用。
上述問題的一種有利解決方案將在于提供如下藥物，它們是“有選擇性的鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑活性”或者可用于“選擇性治療”其中鈉和/或鈣通道機理扮演病理角色的病變、障礙或疾病。用這種措辭表示如下藥物，在對有此需要的患者給予有效治療其中上述機理扮演病理角色的上述病變的量時，不表現(xiàn)任何MAO抑制活性或者表現(xiàn)顯著降低的MAO抑制活性，從而避免由內(nèi)源性與外源性單胺遞質(zhì)蓄積引起的副作用。
本發(fā)明的主要目標(biāo)是作為具有鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑活性的2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物在制備藥物的應(yīng)用，其中上述機理扮演病理角色的病狀，其為神經(jīng)病學(xué)、認(rèn)知、精神病學(xué)的、炎性、泌尿生殖和胃腸疾病，所述的藥物基本上沒有任何MAO抑制活性或者具有顯著降低的MAO抑制活性，因此減少了不希望的副作用的可能性。因此，本發(fā)明的主要目的在于提供2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物作為治療上述病理情況的藥物的應(yīng)用，其特征在于該藥物基本上沒有任何MAO抑制活性或者提供了顯著降低的MAO抑制活性，且由此具有降低的不希望的副作用的可能性。所述的應(yīng)用提供了預(yù)防，減輕和/或治愈上述病癥，特別是對因MAO抑制活性導(dǎo)致的不希望的副作用，例如上文所述的那些特別敏感的患者的改進(jìn)的選擇性來源。
本發(fā)明的另一個方面在于提供治療因壓力門通鈉和/或鈣通道功能障礙導(dǎo)致的紊亂造成的病癥侵害的患者的方法，包括對所述的患者給予有效量的2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物。
上述神經(jīng)性障礙包括慢性和急性類型的疼痛，特別是神經(jīng)病性和炎性痛，頭痛，痙攣；神經(jīng)變性病癥，例如阿爾茨海默病，帕金森病，癲癇，多動腿綜合征，中風(fēng)和腦缺血；認(rèn)識病，例如輕度認(rèn)知缺損(MCI)和精神病，包括抑郁癥，雙相性精神障礙(bipolar disorder)，躁狂，精神分裂癥，精神病，焦慮和成癮。上述炎性病癥包括侵害所有身體系統(tǒng)的炎癥過程，例如骨骼肌系統(tǒng)的炎癥過程，關(guān)節(jié)病，侵害皮膚和相關(guān)組織的病癥；呼吸系統(tǒng)病癥和免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)病癥。上述所有病理情況的更具體解釋在下文中給出。
本發(fā)明的描述 本申請的目的為一類新的2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物，它們作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑具有高度活性并且基本上沒有任何MAO抑制活性或具有顯著降低的MAO抑制活性，且由此在預(yù)防、減輕和治愈廣泛病狀中具有潛在地減少了的副作用，所述病癥包括但不限于神經(jīng)病學(xué)的、認(rèn)知、精神病學(xué)的、炎性、泌尿生殖和胃腸疾病，其中上述機理已被描述為扮演病理角色。
在本說明書和權(quán)利要求書中，措辭“鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑”表示能夠以電壓依賴性方式阻斷鈉和/或鈣電流的化合物。
因此，本發(fā)明的目的在于式(I)的化合物
其中 X為-O-，-S-或-SO2-； Y為氫，OH或O(C1-C4)烷基； Z為＝O或＝S； R為(C3-C10)烷基；ω-三氟(C3-C10)烷基； R1和R2獨立地為氫，羥基，(C1-C8)烷氧基，(C1-C8)烷硫基，鹵素，三氟甲基或2，2，2-三氟乙基；或R1和R2之一位于R-X-的鄰位上，并且與同一R-X-共同表示

基團(tuán)，其中R0為(C2-C9)烷基； R3和R′3獨立地為氫或(C1-C4)烷基； R4和R5獨立地為氫，(C1-C4)烷基；或R4為氫且R5為選自-CH2-OH，-CH2-O-(C1-C6)烷基，-CH(CH3)-OH，-(CH2)2-S-CH3，芐基和4-羥基芐基的基團(tuán)；或R4和R5與相鄰碳原子共同構(gòu)成(C3-C6)環(huán)烷基殘基； R6和R7獨立地為氫或(C1-C6)烷基；或與相鄰氮原子共同構(gòu)成5-6元單環(huán)飽和雜環(huán)，其任選包含一個額外的選自-O-，-S-和-NR8-的雜原子，其中R8為氫或(C1-C6)烷基； 條件是當(dāng)X為-S-或-SO2-時，Y不為OH或O(C1-C4)烷基； 如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
盡管本申請中具體描述的某些化合物屬于WO 90/14334的通式范圍，但是它們中無一被該申請具體描述。本申請式(I)定義的化合物中無一在WO 90/14334中被具體描述或提及。事實上，僅極少2-(2-苯基-乙氨基)烷酰胺衍生物在所述在先對比文件中鑒定，然而，它們在苯基部分的4-位上帶有芐氧基，芐氨基或芐基取代基。
另外，本申請式(I)的下列選擇類型的化合物不屬于WO 90/14334的通式范圍 a)化合物，其中X為-SO2-； b)化合物，其中Y為OH或O(C1-C4)烷基； c)化合物，其中Z為＝S； d)化合物，其中R為(C9-C10)烷基或ω-三氟(C3-C10)烷基； e)化合物，其中R1和/或R2不為氫； f)化合物，其中R3和R′3均不為氫 g)化合物，其中R4和R5均不為氫，并且在與相鄰碳原子結(jié)合時也不構(gòu)成(C3-C6)環(huán)烷基殘基； h)化合物，其中R6和R7與相鄰氮原子共同構(gòu)成單環(huán)5-6元飽和雜環(huán)，其任選包含一個額外的選自-O-，-S-和-NR8-的雜原子，其中R8為氫或(C1-C6)烷基。
本說明書和權(quán)利要求書中所用的術(shù)語“烷基”，如果不在另外的部分中有具體說明，那么認(rèn)定為直鏈或支鏈烷基；所述基團(tuán)或部分的實例包括甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，戊基，異戊基，己基，庚基，辛基，壬基，癸基及其異構(gòu)體。
本說明書和權(quán)利要求書中所用的術(shù)語“烷氧基”認(rèn)定直鏈或支鏈烷氧基；所述基團(tuán)的實例包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，丁氧基，異丁氧基，叔-丁氧基，戊氧基，異戊氧基，己氧基，異己氧基，庚氧基，辛氧基及其異構(gòu)體。
術(shù)語“(C3-C6)環(huán)烷基”認(rèn)定為環(huán)脂族環(huán)；所述環(huán)的實例包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基和環(huán)己基。
術(shù)語“鹵素”表示鹵原子基團(tuán)，例如氟，氯，溴和碘。
任選包含一個選自-O-，-S-或-NR8-(其中R8為氫或(C1-C6)烷基)的額外的雜原子的單環(huán)5或6元飽和雜環(huán)的實例，例如為吡咯烷，吡唑烷，咪唑烷，噁唑烷，異噁唑烷，哌啶，哌嗪，N-甲基哌嗪，嗎啉和硫代嗎啉。
當(dāng)本發(fā)明的化合物包含一個或多個不對稱碳原子且由此它們可以作為旋光異構(gòu)體或其混合物存在時，本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括分離形式及其任意比例的混合物形式的所述化合物的所有可能的單一旋光異構(gòu)體(例如對映體，非對映異構(gòu)體)，包括外消旋混合物。
式(I)的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的實例為與有機酸和無機酸形成的鹽，所述的無機酸和有機酸例如為鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硝酸，硫酸，磷酸，乙酸，丙酸，酒石酸，富馬酸，檸檬酸，苯甲酸，琥珀酸、肉桂酸，扁桃酸，水楊酸，乙醇酸，乳酸，草酸，蘋果酸，馬來酸，丙二酸，富馬酸，酒石酸，對-甲苯磺酸，甲磺酸，戊二酸和其它例如可以在P.Heinrich Stahl，Camille G.Wermuth“Handbookof pharmaceutical saltsproperties，selection and use”，WILEY-VCH，2002中找到的酸. 式(I)的化合物作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑具有活性且由此用于預(yù)防，減輕和治愈廣泛的病理狀況，包括但不限于神經(jīng)學(xué)的、認(rèn)知、精神病學(xué)的、炎性、泌尿生殖和胃腸疾病，其中上述機理已被描述為扮演病理角色。
式(I)的優(yōu)選化合物為化合物，其中 X為-O-，-S-； Y為氫，OH或O(C1-C3)烷基； Z為＝O或＝S； R為(C4-C7)烷基或ω-三氟(C4-C6)烷基； R1和R2獨立地為氫，(C1-C4)烷氧基，鹵素，三氟甲基或2，2，2-三氟乙基；或R1和R2之一位于R-X-鄰位上，并且與同一R-X-共同表示

基團(tuán)，其中R0為(C2-C5)烷基； R3和R′3獨立地為氫或(C1-C3)烷基； R4和R5獨立地為氫或(C1-C4)烷基；或R4為氫且R5為選自-CH2-CH、-CH2-O-(C1-C3)烷基、-(CH2)2-S-CH3、芐基和4-羥基芐基的基團(tuán)； R6和R7獨立地為氫或(C1-C4)烷基；或與相鄰的氮原子共同構(gòu)成5-6元單環(huán)飽和雜環(huán)，任選包含一個額外的選自-O-和-NR8-的雜原子，其中R8為氫或(C1-C3)烷基； 條件是當(dāng)X為-S-時，Y不為OH或O(C1-C4)烷基； 如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
式(I)的更優(yōu)選的化合物為化合物，其中 X為-O-，-S-； Y為氫或O(C1-C3)烷基； Z為＝O或＝S； R為(C4-C7)烷基或ω-三氟(C4-C6)烷基； R1和R2獨立地為氫，(C1-C3)烷氧基，氟，氯，三氟甲基或2，2，2-三氟乙基；或R1和R2之一位于R-X-鄰位上并且與同一R-X-共同表示

基團(tuán)，其中R0為(C3-C4)烷基； R3和R′3獨立地為氫或(C1-C3)烷基； R4和R5獨立地為氫或(C1-C4)烷基；或R4為氫且R5為選自-CH2-OH，-CH2-O-(C1-C3)烷基，芐基和4-羥基芐基的基團(tuán)； R6和R7獨立地為氫或(C1-C3)烷基；或與相鄰氮原子共同構(gòu)成5-6元單環(huán)飽和雜環(huán)，任選包含一個額外的選自-O-和-NR8-的雜原子，其中R8為氫或(C1-C3)烷基； 條件是當(dāng)X為-S-時，Y不為O(C1-C4)烷基； 如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
甚至更優(yōu)選式(I)的化合物為那些化合物，其中 X為-O-； Y為氫； Z為＝O； R為(C4-C6)烷基； R1和R2獨立地為氫或鹵素，優(yōu)選氟； R3，R′3，R4和R5為氫； R6和R7獨立地為氫或(C1-C3)烷基； 如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽； 最優(yōu)選本發(fā)明式(I)的化合物選自 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-乙酰胺 2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-乙酰胺 2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基乙酰胺 2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基乙酰胺 2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁硫基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁基磺?；交?-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-(N′-羥基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-(N′-甲氧基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-(N′-丙氧基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基-硫代乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-2-甲基丙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-{2-[3-(4，4，4-三氟丁氧基)苯基]-乙氨基}-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁硫基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基-2-氯苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基-2-氟苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基-4-甲氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基-4-甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基-2，4-二氟-4-甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基-2，6-二氟-4-甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二乙基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二丙基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二丁基乙酰胺 2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-1-吡咯烷-1-基-乙-1-酮 2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-1-吡咯烷-1-基-乙-1-酮 2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-1-吡咯烷-1-基-乙-1-酮 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基丙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-3-羥基-N，N-二甲基丙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-3-甲氧基-N，N-二甲基丙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-3-丙氧基-N，N-二甲基丙酰胺 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-2，N，N-三甲基丙酰胺 2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-2，N，N-三甲基丙酰胺 2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-2，N，N-三甲基丙酰胺 (S)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-丙酰胺 (S)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基丙酰胺 (S)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基丙酰胺 (R)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-丙酰胺 (R)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基丙酰胺 (R)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基丙酰胺 2-[2-(3-丁氧基-2-三氟甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基-4-三氟甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 2-[2-(3-丁氧基-5-三氟甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，優(yōu)選其與鹽酸或甲磺酸形成的鹽。
按照更詳細(xì)描述在實驗部分中的常規(guī)操作制備本發(fā)明的化合物。
特別地，按照如下方案I中所示的合成方法制備為本發(fā)明目的的式(I)的大部分化合物，其中X為-O-且Y為氫 方案I
其中 R，R1，R2，R3，R′3，R4，R5，R6和R7具有與上述式(I)中定義的相同的含義，Ph表示苯基，boc為叔-丁氧羰基且EWG表示“吸電子基團(tuán)”，例如，鹵素或甲磺酰氧基或甲苯磺酰氧基或三氟甲磺酸酯基。Lawessons試劑為2，4-雙(4-甲氧基苯基)-1，3，2，4-二硫雜二磷雜環(huán)丁烷-2，4-二硫化物(The Merck Index，13th Ed.，5408，966頁)。
按照本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案，在有堿存在下進(jìn)行與R-EWG的烷基化反應(yīng)，且更優(yōu)選所述的堿選自K2CO3，三乙胺和二異丙基乙胺。
用于制備式(I)的化合物的可替代方法，其中R，R1，R2，R3，R′3，R4，R5，R6和R7具有與式(I)中相同的含義，X為O且Y為氫，在于使下式的醛
與下式的α-氨基烷酰胺進(jìn)行還原烷基化
還原劑可以選自NaBH4，NaBH3CN和氰基硼氫化(聚苯乙烯基甲基)-三甲基銨。
所得式(I)的2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺化合物，其中Z為＝O，可以通過如方案I中所示用boc2O保護(hù)-NH-基團(tuán)，使N-boc保護(hù)的衍生物與Lawesson試劑反應(yīng)且最終用HCl脫保護(hù)被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的化合物，其中Z為＝S。
作為這些方法的另一種可替代選擇，使式的胺
通過與下式的鏈烷酸酯反應(yīng)烷基化
該反應(yīng)在有堿(例如三乙胺)存在下進(jìn)行，并且使所得下式的鏈烷酸酯衍生物
與式HNR6R7的胺任選在有酰胺化催化劑(例如三甲基鋁)存在下反應(yīng)而得到式(I)的化合物，其中Y為氫。
式(I)的化合物，其中R5為氫，任選可以被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的式(I)的化合物，其中R5為(C1-C4)烷基，-CH2OH，-CH2-O-(C1-C6)烷基，-CH(CH3)-OH，-(CH2)2-S-CH3，芐基或4-羥基芐基，通過下列步驟進(jìn)行用式EWGR5的烷基化試劑使上述式(I)化合物的N-保護(hù)的衍生物進(jìn)行C-烷基化過程，其中EWG具有與上述相同的含義并且R5表示上述所列基團(tuán)之一。在這種情況中，當(dāng)式(I)的最終化合物為需要的，其中基團(tuán)R5包含羥基部分時，通常使用試劑EWGR5，其中相應(yīng)的羥基部分例如通過乙?；槐Ｗo(hù)。
然后從所得C-烷基化化合物中除去所有保護(hù)基。
如果需要，當(dāng)獲得游離堿形式的式(I)的化合物時，可以通過常規(guī)操作將其轉(zhuǎn)化成其鹽(例如用鹽酸)。
按照如下方案II中所示的合成方法制備式(I)的化合物，其中X為S或SO2且Y為氫 方案II
其中 R，R1，R2，R3，R′3，R4，R5，R6和R7具有與式(I)中定義的相同的含義，boc為叔-丁氧羰基且EWG具有與上述相同的含義，“oxone”表示過氧化一硫酸鉀且Lawessons試劑為2，4-雙(4-甲氧基苯基)-1，3，2，4-二硫雜二磷雜環(huán)丁烷-2，4-二硫化物。
按照如下方案III中所示的合成方法制備式(I)的化合物，其中X為-O-且Y為OH或O(C1-C4)烷基 方案III
其中 R，R1，R2，R3，R′3，R4，R5，R6和R7具有與式(I)中定義的相同的含義，Ph表示苯基且EWG具有與上述相同的含義。Dress-Martinperiodinane參見Dess，D.B.；Martin，J.C.J.Am.Chem.Soc.，1991，113，7277。
方案I，II和III中使用的中間體為商購的或由商購化合物按照眾所周知的方法制備。
按照制備本發(fā)明化合物進(jìn)行的反應(yīng)評價任選保護(hù)的有用性和對合適的保護(hù)基的選擇和被保護(hù)的官能基屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的公知常識范圍。
任選的保護(hù)基的除去按照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。
就一般涉及的保護(hù)基在有機化學(xué)中的應(yīng)用而言參見Theodora W.Greene和Peter G.M.Wuts “Protective groups in organicsynthesis”，John Wiley & Sons，Inc.，II Ed.，1991。
式(I)的化合物的鹽的制備按照公知方法進(jìn)行。
為了制備式(I)的化合物的單一旋光異構(gòu)體，可以通過空間受控的合成或通過使用具有適當(dāng)手性的試劑或按照常規(guī)操作從其對映異構(gòu)體混合物中分離所需的異構(gòu)體獲得所述的化合物。
藥理學(xué) 本發(fā)明化合物可以用于制備具有鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑活性的藥物，用于由電壓門控鈉和/或鈣通道功能障礙導(dǎo)致的障礙。
這類化合物是鈉和/或鈣通道的電壓-依賴性阻斷劑，即使在低微摩爾范圍內(nèi)也有效力，這得到鈉和/或鈣流入的阻斷(熒光測定法)和電流的電壓-依賴性阻斷(膜片箝技術(shù))的證明。
將本發(fā)明有代表性的化合物的活性與已知來自WO 90/14334的化合物的活性進(jìn)行比較，所述來自WO 90/14334的化合物已經(jīng)在臨床上被研發(fā)用于治療應(yīng)用，例如“ralfinamide”(S)-(+)-2-[4-(2-氟芐氧基)-芐氨基]-丙酰胺和/或“safinamide”(S)-(+)-2-[4-(3-氟芐氧基)-芐氨基]-丙酰胺。
Safinamide(NW-1015，F(xiàn)CE-26743A，PNU-151774E)為鈉通道阻斷劑，鈣通道調(diào)節(jié)劑，單胺氧化酶B(MAO-B)抑制劑，谷氨酸鹽釋放抑制劑和多巴胺代謝調(diào)節(jié)劑。
Safinamide用于治療CNS障礙，特別是癲癇，帕金森病，阿爾茨海默病，多動腿綜合征(WO 90/14334，WO 04/089353，WO 05/102300)和認(rèn)知障礙(EP Appl.N°06/012352.8)。
Ralfinamide(NW-1029，F(xiàn)CE-26742A，PNU-0154339E)為鈉和鈣通道抑制劑和NMDA受體調(diào)節(jié)劑用于治療通性疾患，包括急性和慢性類型的神經(jīng)病性和炎性痛，偏頭痛，抑郁癥，心血管、炎性、泌尿生殖、代謝和胃腸道病癥(WO 99/35125，WO 03/020273，WO 04/062655，WO05/018627，WO 05/070405，WO 06/02705)。
通過基于熒光的鈉流入測定法分別在ND7/23細(xì)胞系中(表1)和通過在大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元中的電生理膜片鉗技術(shù)(表3)和在ND7/23細(xì)胞系(表4)中測定2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物的鈉通道調(diào)節(jié)活性。
通過基于熒光的鈣流入測定法(表2)在AtT20細(xì)胞系中測定2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物的鈣通道調(diào)節(jié)活性。
使用放射性酶測定法(表5)測定上述化合物在大鼠腦線粒體中的MAO-B活性。
在小鼠“福爾馬林試驗”中(表6)并且在大鼠“神經(jīng)病性疼痛的脊神經(jīng)結(jié)扎模型(SNL)”(

圖1)中評價上述化合物的體內(nèi)止痛活性。使用大鼠“完全弗氏佐劑模型(CFA)”測定抗炎性疼痛活性。
使用小鼠“乙酸-誘發(fā)的內(nèi)臟痛”模型測定抗內(nèi)臟痛活性(圖2)。
使用小鼠“最大電休克試驗”測定抗驚厥活性(表7和表8)。
使用“苯丙胺和氯氮卓誘發(fā)的小鼠運動過多”模型(圖3)和“反常睡眠紊亂”大鼠模型測定抗躁狂活性。
使用“Morris水迷宮試驗”評價抗遺忘活性，其中用東莨菪堿在大鼠中并且在大鼠“新目標(biāo)認(rèn)知試驗”中誘發(fā)健忘癥。
為了研究化合物的抗抑郁癥活性，使用小鼠“尾部懸掛試驗”模型。
使用小鼠和大鼠“精神分裂癥中的認(rèn)知缺損試驗”和“驚恐前沖動抑制(PPI)”評價抗精神分裂癥活性(圖4)。
使用大鼠“可卡因-誘發(fā)的行為敏感試驗”評價化合物的抗成癮活性。
將“大鼠的乙酸急性膀胱刺激”和“大鼠的環(huán)磷酰胺中等膀胱刺激”用作泌尿疾病的模型。
使用大鼠“偏頭痛試驗”測定抗偏頭痛活性。
在電生理膜片鉗研究中，這類物質(zhì)也表現(xiàn)“使用與頻率-依賴性”，也就是當(dāng)存在失活狀態(tài)通道的大量蓄積時在高頻刺激期間的阻斷的強化，例如在神經(jīng)元病理條件中。在功能上，使用-依賴性阻斷導(dǎo)致神經(jīng)元活動在高頻放電下的抑制，在正常放電速率下的阻斷能力降低，提示了本發(fā)明化合物可能選擇性地抑制鈉和/或鈣通道的異?；顒?，不影響生理活動，從而限制CNS抑制效應(yīng)(W.A.Catterall，TrendsPharmacol.Sci.(1987)857-65)。
本發(fā)明有代表性的化合物之一為2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽(NW-3509)，發(fā)現(xiàn)他在幾乎所有體外和體內(nèi)模型中均具有非?；钚?。
本發(fā)明的化合物在以0.1-100mg/kg在本文如下描述的不同動物模型中口服，腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥時具有活性。
鑒于上述作用機理，本發(fā)明化合物可用于預(yù)防或治療神經(jīng)病性疼痛。神經(jīng)病性疼痛綜合征包括但不限于糖尿病性神經(jīng)??；坐骨神經(jīng)痛；非特異性下背部疼痛；多發(fā)性硬化疼痛；纖維肌痛；HIV-相關(guān)性神經(jīng)?。簧窠?jīng)痛，例如皰疹后神經(jīng)痛與三叉神經(jīng)痛、Morton氏神經(jīng)痛、灼痛；和由物理創(chuàng)傷、截肢、幻肢、癌癥、中毒或慢性炎性病癥導(dǎo)致的疼痛；中樞性疼痛，例如見于丘腦綜合征，疼痛的混合中樞與外周形式，例如復(fù)合局部疼痛綜合征(CRPS)，也稱反射交感神經(jīng)營養(yǎng)不良。
本發(fā)明化合物也可用于治療慢性疼痛。慢性疼痛包括但不限于由炎癥或炎性-相關(guān)病癥、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性損傷或創(chuàng)傷導(dǎo)致的慢性疼痛、上背部疼痛或下背部疼痛(由全身、局部或原發(fā)性脊柱疾病所致，例如神經(jīng)根病)、骨疼痛(由骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、骨代謝或未知原因引起)、骨盆疼痛、與脊髓損傷有關(guān)的疼痛、心胸疼痛、非心胸疼痛、中樞性中風(fēng)后疼痛、肌筋膜疼痛、鐮狀細(xì)胞疼痛、癌癥疼痛、法布里氏病、AIDS疼痛、老年病性疼痛或者由頭痛、顳下頜關(guān)節(jié)綜合征、痛風(fēng)、纖維化或胸出口綜合征導(dǎo)致的疼痛，特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。
本發(fā)明化合物也可用于治療急性疼痛(由急性損傷、疾病、運動醫(yī)學(xué)損傷、腕管綜合征、灼傷、肌與骨骼扭傷與勞損、肌腱勞損、頸臂疼痛綜合征、消化不良、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位或手術(shù)(例如開心或旁路手術(shù))導(dǎo)致、手術(shù)后疼痛、腎結(jié)石疼痛、膽囊疼痛、膽結(jié)石疼痛、分娩疼痛或牙痛。
本發(fā)明化合物也可用于治療頭痛、偏頭痛、緊張型頭痛、轉(zhuǎn)化性偏頭痛或進(jìn)化性頭痛、簇性頭痛，以及繼發(fā)性頭痛癥，例如從感染、代謝障礙或其他全身疾病衍生，和其他急性頭痛、發(fā)作性偏頭痛等，由上述原發(fā)性與繼發(fā)性頭痛的惡化所致。
本發(fā)明化合物也可用于治療神經(jīng)病癥，例如癲癇，包括單純性部分癲癇發(fā)作、復(fù)合性部分癲癇發(fā)作、繼發(fā)性泛化性癲癇發(fā)作，進(jìn)一步包括失神性癲癇發(fā)作、肌痙攣性癲癇發(fā)作、陣攣性癲癇發(fā)作、緊張性癲癇發(fā)作、緊張性陣攣性癲癇發(fā)作和弛緩性癲癇發(fā)作。本發(fā)明化合物也可用于治療各種起源的神經(jīng)變性障礙，包括阿爾茨海默病，帕金森病其他癡呆病癥，例如利維小體、額-顳性癡呆和τ蛋白??；肌萎縮側(cè)索硬化和其他帕金森綜合征；其他脊髓小腦變性和Charcot-Marie-Toot神經(jīng)病，外傷性腦損傷，中風(fēng)和腦缺血。
本發(fā)明化合物也可用于治療認(rèn)知障礙和精神病學(xué)障礙。認(rèn)知障礙的實例為輕度認(rèn)知缺損(MCI)和與孤獨癥，誦讀困難，注意力缺陷多動癥，精神分裂癥，強迫癥，精神病，雙相性精神障礙，抑郁癥，圖雷特綜合征和兒童、青少年和成人中的學(xué)習(xí)障礙相關(guān)的那些，與年齡相關(guān)的記憶缺陷，與年齡相關(guān)的認(rèn)知下降，阿爾茨海默病，帕金森病，唐氏綜合征，外傷性腦損傷，亨廷頓舞蹈病，進(jìn)行性核上麻痹(PSP)，HIV，中風(fēng)，血管疾病，皮克病或克-雅病，多發(fā)性硬化(MS)和其它白質(zhì)病癥和藥物-誘發(fā)的認(rèn)知惡化。精神病學(xué)障礙包括但不限于重癥抑郁、情感淡漠、心境惡劣、躁狂、雙相性精神障礙(例如I型雙相性精神障礙、II型雙相性精神障礙)、循環(huán)性精神障礙、快速循環(huán)、極端循環(huán)、躁狂、輕癥躁狂、精神分裂癥、精神分裂癥樣精神障礙、分裂情感性精神障礙、人格障礙、伴有或沒有多動行為的注意力障礙、妄想癥、短暫性精神病、分享性精神病、由一般醫(yī)學(xué)病癥引起的精神病、物質(zhì)-誘發(fā)的精神病或者沒有其它指定的精神病，焦慮癥，例如泛化性焦慮癥，恐慌癥、創(chuàng)傷后緊張癥、沖動控制障礙、恐怖癥、分離狀態(tài)，尤其在吸煙、藥物成癮和酒精中毒。特別是雙相性精神障礙、精神分裂癥、精神病、焦慮和成癮。
本發(fā)明化合物抑制影響所有機體系統(tǒng)的炎性過程。因此可用于治療肌肉-骨骼系統(tǒng)的炎性過程，下面是所有靶障礙實例的列表而非全部關(guān)節(jié)炎癥，例如強直性脊椎炎、宮頸關(guān)節(jié)炎、纖維肌痛、痛風(fēng)、青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰骶關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕?。挥绊懫つw和相關(guān)組織的障礙濕疹、牛皮癬、皮炎和炎性病癥，例如曬傷；呼吸系統(tǒng)的障礙哮喘、變應(yīng)性鼻炎和呼吸窘迫綜合征，其中牽涉有炎癥的肺障礙，例如哮喘和支氣管炎；慢性阻塞性肺疾??；免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)的障礙結(jié)節(jié)性關(guān)節(jié)周炎、甲狀腺炎、再生障礙性貧血、硬化病、重癥肌無力、多發(fā)性硬化和其他脫髓鞘障礙、腦脊髓炎、肉樣瘤病、腎炎綜合征、貝切特綜合征、多肌炎、齒齦炎。
本發(fā)明化合物也可用于治療胃腸(GI)道障礙，例如炎性腸障礙，包括但不限于潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、回腸炎、直腸炎、腹腔疾病、腸病、微觀或膠原性結(jié)腸炎、嗜曙紅細(xì)胞性胃腸炎、或者直腸結(jié)腸切除術(shù)后和回腸吻合術(shù)后導(dǎo)致的盲腸炎，和腸易激綜合征，包括任何與腹部疼痛和/或腹部不適有關(guān)的障礙，例如幽門痙攣、神經(jīng)性不消化、痙攣性結(jié)腸、痙攣性結(jié)腸炎、痙攣性腸、小腸神經(jīng)機能病、功能性結(jié)腸炎、粘液性結(jié)腸炎、輕瀉性結(jié)腸炎和功能性消化不良；也用于治療萎縮性胃炎、變形性胃炎、潰瘍性結(jié)腸炎、消化性潰瘍、胃熱(pyresis)和其他GI道損傷，例如幽門螺桿菌、胃食管反流疾病、胃輕癱，例如糖尿病性胃輕癱；和其他功能性腸障礙，例如非潰瘍性消化不良(NUD)；嘔吐、腹瀉和內(nèi)臟炎癥。
發(fā)明化合物也可用于治療生殖-泌尿道的障礙，例如活動過度性膀胱、前列腺炎(慢性細(xì)菌性和慢性非細(xì)菌性前列腺炎)、前列腺痛、間質(zhì)性膀胱炎、尿失禁與良性前列腺增生、子宮附件炎、骨盆炎癥、前庭大腺炎和陰道炎。特別是活動過度性膀胱和尿失禁。
將被領(lǐng)會的是，本發(fā)明化合物可以有利地與一種或以上其他治療劑結(jié)合使用。適合于附屬療法的藥物實例包括5-羥色胺受體調(diào)節(jié)劑，包括5HT1B/1D激動劑，例如曲坦類(例如舒馬普坦或那拉曲坦)；腺苷A1激動劑；腺苷A2拮抗劑；嘌呤能P2X拮抗劑；EP配體；NMDA調(diào)節(jié)劑，例如甘氨酸拮抗劑；AMPA調(diào)節(jié)劑；P物質(zhì)拮抗劑(例如NK1拮抗劑)；大麻素；煙堿受體激動劑；α-1或2腎上腺素能激動劑；對乙酰氨基酚或非那西汀；5-脂氧合酶抑制劑；白三烯受體拮抗劑；DMARD(例如甲氨蝶呤)；加巴噴丁、普瑞巴林和相關(guān)化合物；L-多巴和/或多巴胺激動劑；兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑；三環(huán)抗抑郁劑(例如阿米替林)；神經(jīng)元穩(wěn)定性抗癲癇藥；單胺能攝取抑制劑(例如文拉法辛)；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑；一氧化氮合成酶(NOS)抑制劑，例如iNOS或nNOS抑制劑；自由基清除劑；α-突觸核蛋白聚集抑制劑；膽堿酯酶抑制劑、膽固醇降低劑；α-分泌酶調(diào)節(jié)劑；β-分泌酶調(diào)節(jié)劑；β-淀粉樣蛋白聚集抑制劑；腫瘤壞死因子α釋放或作用抑制劑；抗體療法，例如單克隆抗體療法；抗病毒劑，例如核苷抑制劑(例如拉米夫定)或免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑(例如干擾素)；阿片類止痛劑，例如嗎啡；類香草醛受體激動劑和拮抗劑；止痛劑，例如環(huán)加氧酶-1和/或環(huán)加氧酶-2抑制劑；局部麻醉劑，例如利多卡因和衍生物；興奮劑，包括咖啡因；H2-拮抗劑(例如雷尼替丁)；質(zhì)子泵抑制劑(例如奧美拉唑)；抗酸劑(例如鋁或鎂的氫氧化物)；抗胃腸氣脹藥(例如semethicone)；減充血劑(例如苯福林、苯丙醇胺、偽麻黃堿、羥甲唑啉、腎上腺素、萘唑啉、賽洛唑啉、丙己君或左脫氧麻黃堿)；鎮(zhèn)咳劑(例如可待因、氫可酮、carmiphen、噴托維林或右美沙芬)；利尿劑；或鎮(zhèn)靜性或非鎮(zhèn)靜性抗組胺劑；抗精神病藥，包括典型和非典型抗精神病藥物(例如氟哌啶醇，利培酮，氯氮平)；抗抑郁藥，例如選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑，5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取抑制劑，MAO抑制劑和三環(huán)抗抑郁藥；情緒穩(wěn)定劑(例如鋰，拉莫三嗪，丙戊酸鹽)；抗焦慮藥(例如苯二氮卓類，丁螺環(huán)酮，β腎上腺素能受體拮抗劑)；嗎啡或嗎啡衍生物；其他鈣或鈉通道阻斷劑。
可以理解的是，本發(fā)明涵蓋式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種治療劑組合的應(yīng)用， 本發(fā)明化合物可用于人和獸醫(yī)藥物。可以理解的是，本文所用的術(shù)語“治療”無論是否具體定義，包括病理病變的預(yù)防、減輕和治愈，確切而言，它們包括既定癥狀的治療和預(yù)防性治療。治療性或預(yù)防性用在上述病變中的本發(fā)明化合物將被優(yōu)選地用作藥物組合物中的活性成分。
因此，本發(fā)明的進(jìn)一步目標(biāo)是藥物組合物，含有治療有效量的本發(fā)明化合物或其鹽，混合有藥學(xué)上可接受的載體。
因此，措辭“治療有效的”在表示本發(fā)明化合物的“量”或“劑量”時，表示任何所述化合物足以用于既定癥狀治療和上述病理病變的預(yù)防性治療的“量”或“劑量”。
本發(fā)明的藥物組合物客體可以在多種即時與改性釋放的劑型中給藥，例如口服方式，劑型為片劑、錠劑、膠囊劑、糖衣或膜衣片劑、液體溶液、乳液或懸浮液；直腸方式，劑型為栓劑；非腸道方式，例如肌內(nèi)和/或儲庫制劑；靜脈內(nèi)注射或輸注；局部和透皮方式，劑型為貼劑和凝膠和霜劑。
適合于制備這類組合物的藥學(xué)上可接受的、治療惰性的有機和/或無機載體材料例如包括水、明膠、阿拉伯膠、乳糖、淀粉、纖維素、硬脂酸鎂、滑石粉、植物油、環(huán)糊精、聚亞烷基二醇等。
包含如上定義的式(I)苯基乙基氨基衍生物的組合物可以被滅菌，并且可以含有其他熟知的組分，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤或乳化劑，例如石蠟油、二縮甘露醇單油酸酯、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽、緩沖劑等。
例如，除了活性成分以外，固體口服劑型還可以含有稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；潤滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、鎂或鈣的硬脂酸鹽，和/或聚乙二醇；粘合劑，例如淀粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑，例如淀粉、藻酸、藻酸鹽或淀粉乙醇酸鈉；泡騰混合物；染料；甜味劑；濕潤劑，例如卵磷脂、聚山梨醇酯、月桂基硫酸鹽；和一般用在藥物制劑中的無毒的與無藥理活性的物質(zhì)。所述藥物制劑可以按已知方式制備，例如借助混合、造粒、壓片、糖包衣或膜包衣過程。
本發(fā)明的藥物組合物目標(biāo)的制備可以按照普通技術(shù)進(jìn)行。
口服制劑包含持續(xù)釋放制劑，這可以按常規(guī)方式制備，例如向片劑和顆粒劑涂以腸溶衣。
口服給藥用液體分散體例如可以是糖漿、乳液和懸浮液。
糖漿可以含有作為載體的例如蔗糖或蔗糖與甘油和/或甘露糖醇和/或山梨醇。
懸浮液和乳液可以含有作為載體的例如天然樹膠、瓊脂、藻酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯醇。除了活性化合物以外，肌內(nèi)注射用懸浮液或溶液還可以含有藥學(xué)上可接受的載體，例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二醇類，例如丙二醇，和如果需要的話適量鹽酸利多卡因。靜脈內(nèi)注射或輸注溶液可以含有作為載體的例如無菌水，或者優(yōu)選地它們可以是無菌、水性、等滲鹽水溶液的形式。
除了活性成分以外，栓劑還可以含有藥學(xué)上可接受的載體，例如可可脂、聚乙二醇、聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯表面活性劑或卵磷脂。
包含如上定義的式I苯基乙基氨基衍生物的組合物將在每劑量單元中、例如膠囊劑、片劑、干粉注射劑、茶匙、栓劑等，含有0.1mg至約500mg的一種或多種活性成分，最優(yōu)選1至10mg。
所要給予的最佳治療有效劑量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員來決定，并且基本上將因制劑濃度、給藥的方式和所治療的病癥或障礙的進(jìn)展而異。另外，與特定受治療者有關(guān)的因素、包括受治療者的年齡、體重、飲食和給藥時間，也將需要調(diào)節(jié)劑量至適當(dāng)?shù)闹委熡行健?br> 可以理解的是，盡管結(jié)合其優(yōu)選的實施方式描述了發(fā)明，不過本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉能夠?qū)崿F(xiàn)其他實施方式，而不背離發(fā)明的精神。
實驗部分 利用Varian Gemini 200MHz光譜計，在CDCl3或DMSO-d6溶液中測定1H-NMR光譜。化學(xué)位移用CDCl3或DMSO-d6定義為δ，以D2O為內(nèi)標(biāo)。
利用與UV檢測器(220nm)偶聯(lián)的X-Terra RP18柱(5μm，4.6x50mm)和Finnigan Aqa質(zhì)譜計(電噴射，陽性電離模式)，在Gilson儀器中測定HPLC/MS分析。用于分析的條件流速1.2ml/min；柱溫50℃；A/B洗脫梯度(洗脫劑A0.1％甲酸水溶液，洗脫劑B0.1％甲酸乙腈溶液)0至8.0分鐘為5-95％B，8.0至9.5分鐘為95％B。
為了更好地闡述發(fā)明，現(xiàn)在給出下列實施例。
實施例1 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 按照方案I合成該化合物。
步驟12-(3-羥基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙胺 方法A 向2-(3-芐氧基苯基)-乙胺鹽酸鹽(12.6g，47.7mmol)在H2O(120ml)和1M NaOH(95ml)中的混懸液中滴加boc2O(15.6g，71.5mmol)在THF(120ml)中的溶液并且在室溫下攪拌該混合物。16小時后，在減壓下除去有機溶劑并且用CH2Cl2(2×100ml)萃取該混合物。用Na2SO4干燥收集的有機相，過濾該溶液并且在減壓下蒸發(fā)溶劑而得到粗油，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化使用。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.47-7.28(m，5H)，7.22(m，1H)，6.87-6.77(m，3H)，5.05(s，2H)，4.52(bs，1H)，3.38(dt，J＝6.5Hz，J＝6.5Hz，2H)，2.77(t，J＝7.1Hz，2H)，1.44(s，9H)。ESI+MS對C20H25NO3的計算值327.43；測定值328.1(MH+)。
在35psi下和Parr儀中將步驟1中獲得的2-(3-芐氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙胺和在MeOH(240ml)中的10％Pd/C(1.3g)氫化16小時。通過用C鹽(Celite)墊過濾除去催化劑并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。將粗油不經(jīng)進(jìn)一步純化使用。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.19(dd，J＝7.8Hz，J＝7.8Hz，1H)，6.82-6.66(m，3H)，4.56(b s，1H)，3.39(dt，J＝7.0Hz，J＝6.3Hz，2H)，2.76(t，J＝7.0Hz，2H)，1.46(s，9H)。ESI+MS對C13H19NO3的計算值237.30；測定值238.2(MH+)。
方法B 將33％HBr在乙酸中的溶液(150ml)冷卻至0℃并且逐步加入3-甲氧基苯乙胺(10.0g，66.0mmol)。將該混合物加熱至80℃并且攪拌16小時。在減壓下蒸發(fā)溶劑并且將殘余物溶于水(160ml)。加入4M NaOH(15ml)，隨后加入2M NaOH(130ml)。滴加boc2O(15.8g，72.6mmol)在THF(160ml)中的溶液并且將該混合物在室溫下攪拌16小時。分離所得混合物上部的有機層并且用CH2Cl2(3×100ml)萃取水層。用Na2SO4干燥合并的有機溶液，過濾并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。得到粗的標(biāo)題化合物(16.8g)，為棕色樹膠，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化用于隨后的步驟。
ESI+MS對C13H19NO3的計算值237.3；測定值182.1(MH+-叔-丁基，主要碎片)。
步驟22-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙胺 向步驟1中獲得的2-(3-羥基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙胺在丙酮中的溶液(240ml)中加入K2CO3(19.8g)和1-溴丁烷(15ml)。將該混懸液回流3天并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶于H2O(200ml)并且用CH2Cl2(2×200ml)萃取。在減壓下除去溶劑并且通過快速色譜法純化殘余物(石油醚/EtOAc 85∶15)而得到1(11.3g，3步內(nèi)81％)標(biāo)題化合物，為無色的油。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.22(dd，J＝7.6Hz，J＝7.6Hz，1H)，6.81-6.72(m，3H)，4.55(bs，1H)，3.97(t，J＝6.3Hz，2H)，3.39(dt，J＝6.5Hz，J＝6.5Hz，2H)，2.78(t，J＝7.1Hz，2H)，1.78(m，2H)，1.51(m，2H)，1.45(s，9H)，0.99(t，J＝7.3Hz，3H)。
ESI+MS對C17H27NO3的計算值293.41；測定值294.1(MH+)。
步驟32-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 向在0℃下冷卻的NaH(60％，2.0g，51mmol)在干DMF(125ml)中的混懸液中滴加2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙胺(7.5g，25.5mmol)在干DMF(125ml)中的溶液。在室溫下1小時后，加入2-氯-N，N-二甲基乙酰胺(5.2ml，51mmol)并且將該混合物在室溫下攪拌16小時。加入H2O(10ml)并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶于H2O(150ml)并且用CH2Cl2(2×150ml)萃取。用Na2SO4干燥收集的有機相，過濾并且蒸發(fā)。通過快速色譜法純化粗產(chǎn)物(石油醚/EtOAc 4∶6)而得到標(biāo)題化合物(7.2g，75％)，為淡黃色油狀物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.1(m，1H)，6.79-6.71(m，3H)，3.97(t，J＝6.0Hz，2H)，3.96(s，2H)，3.40(dd，J＝8.7Hz，J＝7.2Hz，2H)，2.88(s，6H)，2.76(dd，J＝7.9Hz，J＝6.4Hz，2H)，1.76(m，2H)，1.46(m，2H)，1.37(s，9H)，0.95(t，J＝7.3Hz，3H)。
ESI+MS對C21H34N2O4的計算值378.52；測定值379.0(MH+)。
步驟42-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 將2-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺(9.6g，25.3mmol)在HCl/Et2O(127ml)中的溶液在室溫下攪拌16小時。在減壓下蒸發(fā)溶劑，將殘余物與Et2O/iPr2O 50/50的混合物一起研磨，過濾并且用Et2O/iPr2O洗滌而得到標(biāo)題化合物，為白色固體(1，71g，產(chǎn)率95％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.63(br.s.，1H)，7.23(dd，1H)，6.83-6.91(m，2H)，6.80(ddd，1H)，3.96(s，2H)，3.96(t，2H)，3.32-3.44(m，2H)，3.22-3.32(m，2H)，2.97(s，6H)，1.70-1.83(m，2H)，1.41-1.58(m，2H)，0.99(t，3H)。
ESI+MS對C16H26N2O2的計算值278.40；測定值279.3(MH+)。
類似地，以適當(dāng)?shù)闹虚g體開始制備下列化合物 2-{2-[3-(4，4，4-三氟丁氧基)苯基]-乙氨基}-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.00(br.s.，2H)，7.17-7.32(m，1H)，6.78-6.94(m，3H)，4.04(br.s.，2H)，3.91-4.20(m，2H)，3.08-3.22(m，2H)，2.93-3.00(m，2H)，2.94(s，3H)，2.90(s，3H)，2.30-2.48(m，2H)，1.78-2.05(m，2H)。
ESI+MS對C16H23F3N2O2(游離堿)的計算值332.27；測定值333.25(MH+)。
2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.03(brs，2H)，7.14-7.29(m，1H)，6.70-6.88(m，3H)，4.03(s，2H)，3.95(t，2H)，3.06-3.21(m，2H)，2.94(s，3H)，2.90(s，3H)，2.81-3.02(m，2H)，1.62-1.80(m，2H)，1.23-1.48(m，4H)，0.90(t，3H)。
ESI+MS對C17H28N2O2(游離堿)的計算值292.42；測定值293.25(MH+)。
2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.01(brs，2H)，7.23(dd，1H)，6.65-6.93(m，3H)，4.03(s，2H)，3.95(t，2H)，3.05-3.24(m，2H)，2.94(s，3H)，2.91-3.01(m，2H)，2.90(s，3H)，1.57-1.84(m，2H)，1.35-1.51(m，2H)，1.22-1.36(m，4H)，0.70-1.01(m，3H)。
ESI+MS對C18H30N2O2(游離堿)的計算值306.45；測定值307.32(MH+)。
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二丙基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.88(br.s.，2H)，7.15-7.30(m，1H)，6.68-6.88(m，3H)，4.02(s，2H)，3.96(t，2H)，3.23-3.28(m，2H)，3.09-3.22(m，4H)，2.87-2.98(m，2H)，1.62-1.75(m，2H)，1.35-1.62(m，6H)，0.94(t，3H)，0.85(dt，6H)。
ESI+MS對C20H34N2O2(游離堿)的計算值334.50；測定值335.34(MH+)。
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二丁基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.85(br.s.，2H)，7.19-7.28(m，1H)，6.62-6.88(m，3H)，4.01(t，2H)，3.96(t，2H)，3.30(t，2H)，3.06-3.24(m，4H)，2.85-3.00(m，2H)，1.61-1.82(m，2H)，1.40-1.55(m，6H)，1.20-1.38(m，4H)，0.94(t，6H)，0.89(t，3H)。ESI+MS對C20H38N2O2(游離堿)的計算值362.55；測定值363.35(MH+)。
2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二丙基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6+Na2CO3)δ7.50(br.s.，1H)7.07-7.24(m，1H)6.62-6.83(m，3H)3.93(t，2H)3.06-3.22(m，5H)2.58-2.81(m，5H)1.62-1.78(m，2H)1.28-1.56(m，8H)0.68-0.99(m，9H)。
ESI+MS對C21H36N2O2(游離堿)的計算值348.53；測定值349.28(MH+)。
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.96(brs，2H)，7.87(brs，1H)，7.54(brs，1H)，7.23(dd，1H)，6.58-6.83(m，3H)，3.96(t，2H)，3.70(s，2H)，3.04-3.18(m，2H)，2.82-3.01(m，2H)，1.57-1.80(m，2H)，1.32-1.54(m，2H)，0.81-1.04(m，3H)。
ESI+MS對C14H22N2O2的計算值250.34；測定值251.1(MH+)。
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.99(brs，2H)，8.39(q，1H)，7.08-7.37(m，1H)，6.65-6.95(m，3H)，3.96(t，2H)，3.70(s，2H)，3.04-3.25(m，2H)，2.79-3.04(m，2H)，2.67(d，3H)，1.57-1.82(m，2H)，1.44(sxt，2H)，0.94(t，3H)。
BSI+MS對C15H24N2O2的計算值264.37；測定值265.2(MH+)。1H 2-[2-(3-異丙氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.04(brs，2H)，7.12-7.32(m，1H)，6.70-6.81(m，3H)，4.60(spt，1H)，4.03(s，2H)，3.04-3.21(m，2H)，2.94(s，3H)，2.91-3.01(m，2H)，2.90(s，3H)，1.26(d，6H)。
ESI+MS對C15H24N2O2的計算值264.37；測定值265.2(MH+)。
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二乙基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.89 8.98(brs，2H)，7.24(dd，1H)，6.72-6.88(m，3H)，4.03(s，2H)，3.96(t，2H)，3.34(q，2H)，3.26(q，2H)，3.08-3.21(m，2H)，2.86-3.03(m，2H)，1.59-1.78(m，2H)，1.33-1.54(m，2H)，1.13(t，3H)，1.07(t，3H)，0.94(t，3H)。
ESI+MS對C18H30N2O2的計算值306.45；測定值307.2(MH+)。
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-1-吡咯烷-1-基-乙酮 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.94(s，2H)，7.14-7.33(m，1H)，6.64-6.93(m，3H)，4.00(t，2H)，3.88(s，2H)，3.33-3.45(m，4H)，3.19-3.29(m，2H)，2.96-3.05(m，2H)，1.78-2.00(m，4H)，1.65-1.78(m，2H)，1.37-1.56(m，2H)，0.96(t，3H)。
ESI+MS對C18H28N2O2的計算值304.44；測定值305.2(MH+)。
2-[2-(3-丁氧基-4-氟苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.91(brs，2H)7.15(dd，1H)7.05(dd，1H)6.79(ddd，1H)3.97-4.12(m，4H)3.09-3.21(m，2H)2.94(s，3H)2.92-2.99(m，2H)2.90(s，3H)1.65-1.82(m，2H)1.36-1.54(m，2H)0.87-1.01(m，3H)。
ESI+MS對C16H25FN2O2(游離堿)的計算值296.38；測定值297.22(MH+)。
2-[2-(3-丁氧基-4-甲氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.97(brs，2H)，6.90(d，1H)，6.84(d，1H)，6.74(dd，1H)，4.02(br s，2H)，3.94(t，2H)，3.73(s，3H)，3.04-3.22(m，2H)，2.94(s，3H)，2.90(s，3H)，2.84-2.92(m，2H)，1.57-1.84(m，2H)，1.44(sxt，2H)，0.94(t，3H)。
ESI+MS對C17H28N2O3(游離堿)的計算值308.42；測定值309.21(MH+)。
實施例2 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-2，N，N-三甲基丙酰胺鹽酸鹽 步驟12-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-2-甲基丙酸乙酯 向2-(3-丁氧基苯基)-乙胺鹽酸鹽(0.27g，1.42mmol；按照實施例1步驟4中所述的標(biāo)準(zhǔn)操作獲自實施例1步驟2的化合物)在乙腈(8ml)中的溶液中加入2-溴-2-甲基丙酸乙酯(0.27ml，1.85mmol)和三乙胺(0.52ml，3.70mmol)。將該溶液在100℃下在微波照射中加熱3h。將該混合物冷卻至室溫并且使其分配在水與CH2Cl2之間。分離有機層，用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。通過快速色譜法純化殘余物(二氧化硅，CH2Cl2∶MeOH從100∶0到95∶5)而得到標(biāo)題化合物(0.17g，39％產(chǎn)率)，為無色的油。
ESI+MS對C18H29NO3的計算值307.44；測定值308.2(MH+)。
步驟22-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-2，N，N-三甲基丙酰胺鹽酸鹽 向甲苯(3ml)的THF(0.6ml，1.1mmol)中的2M二甲胺溶液中加入在己烷中的2M三甲基鋁(1.4ml，2.77mmol)并且將該混合物在室溫下攪拌15分鐘。加入在干甲苯(8ml)中的2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-2-甲基-丙酸乙酯(0.17g，0.55mmol)并且將該溶液加熱至90℃并且攪拌24h。將該混合物冷卻至室溫并且在減壓下除去溶劑。使殘余物分配在水與乙醚之間。分離有機層，用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。通過快速色譜法純化殘余物(第一次純化二氧化硅，CH2Cl2∶MeOH從100∶0至97∶3；第二次純化二氧化硅，EtOAc)而得到標(biāo)題化合物，將其溶于HCl/Et2O并且攪拌20分鐘。過濾所得鹽酸鹽，用iPr2O洗滌并且在40℃下和真空中干燥。得到純的標(biāo)題化合物(18.5mg，20％產(chǎn)率)，為白色固體。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.39(bs，2H)，7.24(t，1H)，6.71-6.97(m，3H)，3.97(t，2H)，3.13-3.36(m，4H)，3.09(s，6H)，1.90(s，6H)，1.69-1.86(m，2H)，1.51(sxt，2H)，0.99(t，3H)。
ESI+MS對C18H30N2O2的計算值306.45；測定值307.32(MH+)。
實施例3 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基丙酰胺鹽酸鹽 步驟12-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基丙酰胺 將2-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺(0.410g，1.1mmol；按照實施例1步驟3制備)在干THF(5ml)中的溶液冷卻至-78℃并且滴加在THF中的1M LiHMDS(六甲基二硅氮化鋰(lithium hexamethyl disilazide))(1.43ml，1.4mmol)。將該混合物攪拌30min，然后滴加甲基碘(0.187g，1.3mmol)在干THF(1ml)中的溶液。將該混合物攪拌2小時，允許中斷冷卻浴。在減壓下蒸發(fā)溶劑并且將殘余物溶于EtOAc(15ml)并且用水(2×15ml)洗滌。用Na2SO4干燥有機相，過濾并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。通過快速色譜法純化殘余物(二氧化硅，石油醚∶EtOAc從8∶2至6∶4)而得到標(biāo)題化合物(0.22g，52％產(chǎn)率)，為無色的油。
ESI+MS對C22H36N2O4的計算值392.54；測定值393.3(MH+)。
步驟22-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基丙酰胺鹽酸鹽 按照實施例1步驟4中所述的標(biāo)準(zhǔn)操作由2-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基-丙酰胺制備標(biāo)題化合物。白色固體(47％產(chǎn)率)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.16(brs，1H)，8.82(brs，1H)，7.14-7.31(m，1H)，6.64-6.93(m，3H)，4.39(q，1H)，3.96(t，2H)，3.08-3.22(m，1H)，3.00(s，3H)，2.96-3.06(m，1H)，2.87-2.96(m，2H)，2.90(s，3H)，1.59-1.82(m，2H)，1.37-1.53(m，2H)，1.38(d，3H)，0.94(t，3H)。
ESI+MS對C17H28N2O2(游離堿)的計算值292.42；測定值293.25(MH+)。
實施例4 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-3-羥基-N，N-二甲基丙酰胺鹽酸鹽 步驟12-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-3-乙酰氧基-N，N-二甲基-丙酰胺 按照施例3步驟1由[2-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺和乙酸溴甲酯制備標(biāo)題化合物。無色的油(38％產(chǎn)率)。
ESI+MS對C24H38N2O6(游離堿)的計算值450.58；測定值451.2(MH+)。
步驟22-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-3-羥基-N，N-二甲基-丙酰胺 將2-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-3-乙酰氧基-N，N-二甲基丙酰胺(0.19g，0.42mmol)溶于3％NH4OH/MeOH(15ml)并且在室溫下攪拌5小時。在減壓下蒸發(fā)溶劑并且通過快速色譜法純化殘余物(二氧化硅，石油醚∶EtOAc從7∶3到3∶7)而得到標(biāo)題化合物(0.13g，66％產(chǎn)率)，為無色的油。
ESI+MS對C22H36N2O5的計算值408.54；測定值409.2(MH+)。
步驟32-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-3-羥基-N，N-二甲基丙酰胺鹽酸鹽 按照施例1步驟4由2-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-3-乙酰氧基-N，N-二甲基丙酰胺制備標(biāo)題化合物。作為白色固體獲得(76％產(chǎn)率)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.46-9.44(m，2H)7.10-7.33(m，1H)6.65-6.92(m，3H)5.54(t，1H)4.44(t，1H)3.95(t，2H)3.65-3.88(m，2H)3.11-3.22(m，1H)3.03-3.09(m，1H)3.02(s，3H)2.91-2.99(m，2H)2.90(s，3H)1.61-1.79(m，2H)1.35-1.53(m，2H)0.86-1.00(m，3H)。
ESI+MS對C17H28N2O3(游離堿)的計算值308.42；測定值309.21(MH+)。
實施例5 2-[2-(3-丁氧基-4-甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 步驟1(3-羥基-4-甲基苯基)-乙腈 向冷卻至-78℃的3-甲氧基-4-甲基苯基乙腈(2.0g，12.4mmol)在干CH2Cl2(50ml)中的溶液中滴加在CH2Cl2中的BBr3 1M(27ml，27mmol)。將該混合物攪拌過夜，允許切斷冷卻浴。將該混合物在攪拌下緩慢傾入冰/水。當(dāng)冰熔化時，用EtOAc萃取水相并且用Na2SO4干燥有機相，過濾并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。將粗的標(biāo)題化合物(1.7g，93％產(chǎn)率)不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步。
步驟2(3-丁氧基-4-甲基苯基)-乙腈 向(3-羥基-4-甲基苯基)-乙腈(1.7g，11.5mmol)在丙酮(100ml)中的溶液中加入K2CO3(7.9g，57.5mmol)和1-溴丁烷(6.1ml，57.5mmol)。將該混懸液回流24小時并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶于CH2Cl2并且用水和鹽水洗滌。用Na2SO4干燥有機層，過濾并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。通過快速色譜法純化粗產(chǎn)物(石油醚∶EtOAc 9.5∶0.5)而得到標(biāo)題化合物(1.43g，61％產(chǎn)率)，為無色的油。
ESI+MS對C13H17NO的計算值203.29；測定值204.1(MH+)。
步驟3N-[2-(3-丁氧基-4-甲基苯基)-乙基]-氨基甲酸叔-丁酯 向3-(3-丁氧基苯基)-丙腈(0.94g，5.0mmol)在甲醇(38ml)中的溶液中加入氯化鎳六水合物(0.12g，0.5mmol)和boc2O(2.18g，10.0mmol)。將該溶液冷卻至0℃并且在30分鐘內(nèi)逐步加入硼氫化鈉(1.32g，35.0mmol)。將該混合物攪拌過夜，允許中斷冷卻浴。通過添加二亞乙基三胺(0.54ml，5mmol)使反應(yīng)停止并且攪拌30分鐘。在減壓下除去溶劑并且將殘余物再溶于EtOAc，用水洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。通過快速色譜法純化粗產(chǎn)物(二氧化硅，石油醚∶EtOAc 90∶10)而得到標(biāo)題化合物。無色的油(80％產(chǎn)率)。ESI+MS對C18H29NO3的計算值307.44；測定值308.1(MH+)。
步驟42-[2-(3-丁氧基-4-甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 按照實施例1步驟3和4中所述的標(biāo)準(zhǔn)操作由[2-(3-丁氧基-4-甲基苯基)-乙基]-氨基甲酸叔-丁酯制備標(biāo)題化合物。作為白色固體獲得。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.93(brs，2H)，7.08(dd，1H)，6.79(d，1H)，6.69(dd，1H)，4.03(s，2H)，3.97(t，2H)，3.08-3.19(m，2H)，2.93(s，3H)，2.91-2.97(m，2H)，2.90(s，3H)，2.11(s，3H)，1.65-1.79(m，2H)，1.39-1.54(m，2H)，0.95(t，3H)。
ESI+MS對C17H28N2O2(游離堿)的計算值292.42；測定值293.25(MH+)。
類似地，以(2，6-二氟-3-甲氧基苯基)-乙腈開始制備下列化合物 2-[2-(3-丁氧基-2，6-二氟苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.16(brs，2H)，7.07-7.18(m，1H)，6.96-7.07(m，1H)，4.07(s，2H)，4.02(t，2H)，3.08(s，4H)，2.93(s，3H)，2.90(s，3H)，1.63-1.76(m，2H)，1.36-1.51(m，2H)，0.93(t，3H)。
ESI+MS對C16H24F2N2O2(游離堿)的計算值314.37；測定值315.20(MH+)。
實施例6 2-[2-(3-丁氧基苯基)-2-甲基丙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 步驟12-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙腈 向冷卻至0℃的(3-甲氧基苯基)-乙腈(8.0g，0.054mol)在DMF(25ml)中的溶液中加入NaH(1.3g，0.054mol)。將該反應(yīng)體系攪拌30min并且加入MeI(3.3mL，0.054mol)。將該反應(yīng)體系在室溫下攪拌1小時。在該期間后，再次將該反應(yīng)混合物冷卻至0℃，加入NaH(1.3g，0.054mol)，隨后在30分鐘后加入MeI(3.3ml，0.054mol)。將該反應(yīng)體系在室溫下攪拌過夜。蒸發(fā)DMF并且用鹽水稀釋粗產(chǎn)物且用Et2O萃取。用水洗滌有機相，用Na2SO4干燥，在減壓下蒸發(fā)溶劑并且通過快速色譜法純化殘余物(石油醚∶AcOEt 95∶5)而得到標(biāo)題化合物(4g，42％產(chǎn)率)，為無色的油。ESI+MS對C11H13NO的計算值175.23；測定值176.1(MH+)。
步驟22-[2-(3-丁氧基苯基)-2-甲基丙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 按照實施例5中所述的操作由2-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙腈制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.44(br.s.，2H)，7.28(t，1H)，6.90-7.04(m，2H)，6.77-6.90(m，1H)，3.99(t，2H)，3.88(s，2H)，3.16(s，2H)，2.88(s，6H)，1.64-1.78(m，2H)，1.42-1.55(m，2H)，1.36-1.42(m，6H)，0.90-1.04(m，3H)。
ESI+MS對C18H30N2O2(游離堿)的計算值306.45；測定值307.26(MH+)。
實施例7 2-[2-(3-丁硫基苯基(butylthiophenyl))-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 步驟1(3-丁硫基苯基)-乙腈 向(3-碘苯基)-乙腈(2.0g，8.2mmol)和乙酸S-丁酯(2.4ml，24.6mmol)在正丁醇(5ml)中的溶液中加入CuI(0.156g，0.8mmol)，乙二醇(0.96ml，1.7mmol)和K2CO3(2.4g，17.3mmol)并且將該混合物在微波照射下加熱至110℃1小時。用AcOEt稀釋該反應(yīng)混合物并且用C鹽墊過濾。用水和鹽水洗滌有機相，用Na2SO4干燥并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。通過快速色譜法純化粗產(chǎn)物(石油醚∶AcOEt從10∶0到9∶1)而得到純的標(biāo)題化合物，為淡黃色油狀物(1.0g，64％產(chǎn)率)，不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步。
ESI+MS對C12H15NS的計算值205.32，質(zhì)量不可檢測。
步驟22-[2-(3-丁硫基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 按照實施例5中所述的操作由(3-丁硫基苯基)-乙腈制備標(biāo)題化合。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.08(br.s.，2H)，7.23-7.36(m，1H)，7.15-7.23(m，2H)，6.95-7.11(m，1H)，4.03(s，2H)，3.08-3.21(m，2H)，2.92-3.02(m，4H)，2.94(s，3H)，2.90(s，3H)，1.49-1.67(m，2H)，1.30-1.49(m，2H)，0.89(t，3H)。
ESI+MS對C16H26N2OS(游離堿)的計算值294.46；測定值295.20(MH+)。
實施例8 2-[2-(3-丁基磺?；交?-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 步驟12-[2-(3-丁基磺?；交?-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 在5分鐘內(nèi)向2-[2-(3-丁硫基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽(0.25g，0.62mmol；通過按照實施例1步驟1第一部分中所述的操作與boc2O反應(yīng)由實施例7步驟2的化合物制備)在乙腈(20ml)/水(10ml)中的溶液中逐步加入oxone(0.92g，1.5mmol)和NaHCO3(0.2g，2.3mmol)的混合物。將該混合物在室溫下攪拌2小時。使該混合物分配在水與CH2Cl2之間，用水和鹽水洗滌有機層，用Na2SO4干燥并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。通過快速色譜法純化粗產(chǎn)物(石油醚∶AcOEt 3∶7)而得到純的標(biāo)題化合物，為無色的油(0.20g，75％產(chǎn)率)。
ESI+MS對C21H34N2O5S的計算值426.58；測定值427.1(MH+)。
步驟22-[2-(3-丁基磺酰基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽 按照實施例1步驟4中所述的標(biāo)準(zhǔn)操作由2-[2-(3-丁基磺?；交?-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)δ8.84-9.10(m，2H)，7.74-7.86(m，2H)，7.57-7.71(m，2H)，4.06(t，2H)，3.03-3.34(m，6H)，2.95(s，3H)，2.91(s，3H)，1.45-1.63(m，2H)，1.24-1.42(m，2H)，0.84(s，3H)。
ESI+MS對C16H26N2OS(游離堿)的計算值294.46；測定值295.20(MH+)。
實施例9 2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基硫代乙酰胺鹽酸鹽 步驟12-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基硫代乙酰胺 向2-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺(0.38g，1.0mmol)在干甲苯(20ml)中的溶液中一鍋加入Lawesson試劑(0.58g，1.2mmol)并且將該混合物加熱至回流并且攪拌2小時。在減壓下蒸發(fā)溶劑并且通過快速色譜法純化殘余物(石油醚∶AcOEt從9∶1到8∶2)而得到純的標(biāo)題化合物，為無色的油(0.11g，28％產(chǎn)率)。
ESI+MS對C21H34N2O3S的計算值394.58；測定值395.1(MH+)。
步驟22-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基硫代乙酰胺鹽酸鹽 按照實施例1步驟4中所述的標(biāo)準(zhǔn)操作由2-[2-(3-丁氧基苯基)-(叔-丁氧羰基)乙氨基]-N，N-二甲基硫代乙酰胺制備標(biāo)題化合物。作為白色固體獲得。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.88(s，2H)，7.16-7.34(m，1H)，6.73-6.88(m，3H)，4.17(s，2H)，3.96(dd，2H)，3.43(s，3H)，3.31(s，3H)，3.16-3.26(m，2H)，2.92-3.04(m，2H)，1.62-1.76(m，2H)，1.36-1.50(m，2H)，0.94(t，3H)。
ESI+MS對C16H26N2OS(游離堿)的計算值294.46；測定值295.22(MH+)。
實施例10 2-[2-(3-丁氧基苯基)]-(N′-甲氧基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 步驟12-(3-丁氧基苯基)-乙醛 向2-(3-丁氧基苯基)-乙醇(3.00g，15.4mmol；由按照實施例1步驟2中所述的操作從2-(3-羥基苯基)-乙醇制備)在CH2Cl2(100ml)中的溶液中加入Dess-Martin periodinane試劑(8.5g，20.1mmol)并且將該反應(yīng)體系保持在室溫下過夜。將該溶液傾入包含Na2S2O3(35g)的NaHCO3飽和溶液，并且將該混合物攪拌30min。分離有機層，用Na2SO4干燥，過濾并且在減壓下蒸發(fā)。
將包含標(biāo)題化合物的殘余物(2.9g，99％產(chǎn)率)不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步。
步驟22-(3-丁氧基苯基)-(N-甲氧基)乙胺 在0℃下和攪拌中向2-(3-丁氧基苯基)-乙醛(2.00g，10.4mmol)和O-甲氧基胺鹽酸鹽(1.12g，13.4mmol)在水(13ml)中的混懸液中滴加Na2CO3(0.66g，6.2mmol)在水(20ml)中的溶液。將該反應(yīng)體系保持在室溫下過夜且然后用乙醚萃取。用Na2SO4干燥有機層，過濾并且在減壓下蒸發(fā)。
將包含所需肟中間體的殘余物(2.24g，10.2mmol)溶于甲醇(60ml)并且加入乙酸(8.8ml，153.0mmol)。將該溶液冷卻至0℃并且逐步加入NaCNBH3。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜，然后在減壓下除去溶劑并且使殘余物分配在5％NaHCO3溶液與乙酸乙酯之間。用Na2SO4干燥有機相，過濾并且在真空中濃縮至干。通過柱色譜法純化粗殘余物(石油醚∶乙酸乙酯9∶1)而得到0.88g(38％產(chǎn)率)標(biāo)題化合物。
步驟32-[2-(3-丁氧基苯基)]-(N′-甲氧基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺 將如步驟2中所述獲得的2-(3-丁氧基苯基)-(N-甲氧基)乙胺(0.5g，2.25mmol)溶于乙腈(15ml)并且加入乙基二異丙基胺(1.95ml，11.25mmol)，隨后加入2-氯-N，N-二甲基乙酰胺(1.15ml，11.25mmol)。將該溶液在130℃下和微波照射中加熱6小時。將該混合物冷卻至室溫，在減壓下除去溶劑并且使殘余物分配在5％NaHCO3與乙酸乙酯之間。用Na2SO4干燥有機相，過濾并且在真空中濃縮至干。通過柱色譜法純化粗殘余物(石油醚∶乙酸乙酯1∶1)而得到0.25g(36％產(chǎn)率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+TFA)7.17(t，1H)，6.61-6.89(m，3H)，3.94(t，2H)，3.56(s，2H)，3.47(s，3H)，2.98(s，3H)，2.89-2.97(m，2H)，2.80(s，3H)，2.72-2.86(m，2H)，1.58-1.77(m，2H)，1.34-1.53(m，2H)，0.93(t，3H)。
ESI+MS對C17H28N2O3(游離堿)的計算值308.42；測定值309.18(MH+)。
實施例11TTXs-鈉通道流入測定法 ND7/23大鼠脊根神經(jīng)節(jié)-衍生細(xì)胞系內(nèi)源性地表達(dá)TTXs鈉通道的混合種群。這些細(xì)胞缺乏TTXr鈉通道，正如所示不存在它們各自的轉(zhuǎn)錄物。
使ND7/23細(xì)胞生長在含有10％FBS和1mM丙酮酸鈉的DMEM中。將細(xì)胞按50,000細(xì)胞/孔接種在96孔聚-L-賴氨酸-涂覆的平板上，進(jìn)一步溫育18-24h，備用。
使用Membrane Potential Kit Assay(Molecular Devices)進(jìn)行測定，它基于帶負(fù)電的熒光染劑，能夠監(jiān)測由通道開放引起鈉流入所導(dǎo)致的膜電位變化。
將細(xì)胞與染料加載在25℃下溫育30分鐘，然后單獨加入或者在TTX(作為參照標(biāo)準(zhǔn))或供試化合物存在下加入100nM毒素Anemoniasulcata(用作通道開放反應(yīng)的強化劑)，進(jìn)一步溫育15分鐘。
在鈉通道開放劑藜蘆定(100μM)的自動注射之前和之后(40-45sec)，利用Victor平板讀數(shù)器(Perkin Elmer)測量熒光(激發(fā)530nm，發(fā)射565nm波長)。
從5種濃度計算抑制曲線，各為一式三份，并利用線性回歸分析確定IC50。
本發(fā)明化合物抑制TTXs鈉通道，具有藥理學(xué)上顯著的IC50值。
使用本發(fā)明全部類型中有代表性的某些化合物獲得與標(biāo)準(zhǔn)品ralfinamide和safinamide比較的所得結(jié)果報導(dǎo)在表1中。
表1 *為與甲磺酸形成的鹽 實施例12鈣通道流入測定法 AtT20/D16v-F2小鼠垂體腫瘤細(xì)胞系優(yōu)先表達(dá)L-型鈣通道。
使AtT20細(xì)胞生長在含有10％FBS、4mM谷氨酰胺的DMEM中。將細(xì)胞按200,000細(xì)胞/孔接種在96孔聚-L-賴氨酸-涂覆的平板上，進(jìn)一步溫育18-24小時，備用。
使用Ca++ Kit Assay(Molecular Devices)進(jìn)行測定，它基于熒光鈣指示劑，并且能夠檢測取決于去極化條件的鈣流入。
將細(xì)胞與鈣染料加載在37℃下溫育30分鐘，然后單獨加入或者在尼非地平(作為參照標(biāo)準(zhǔn))或供試化合物存在下加入ω-芋螺毒素(1μM)，進(jìn)一步溫育15分鐘。
在100mM KCl去極化溶液的自動注射之前和之后(30-40秒)，利用Victor平板讀數(shù)器(Perkin Elmer)測量熒光(激發(fā)485nm-發(fā)射535nm波長)。
從5種濃度計算抑制曲線，各為一式三份，并利用線性回歸分析確定IC50。
某些化合物是全部本發(fā)明化合物種類的代表，比較它們與ralfinamide和safinamide的所得結(jié)果，報告在表2中。
表2 *為與甲磺酸形成的鹽 實施例13大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元Na+鈉電流阻斷的膜片鉗評價 細(xì)胞制備和培養(yǎng) 在與遵從國家(D.L.n.116，G.U.，suppl.40，F(xiàn)eb.18，1992)和國際法律和政策(EEC Council directive 86/609，OJL358.1，Dec.121987；Guide for the Care and Use of Laboratory Animals，U.S.National Research Council，1996)的公共指導(dǎo)原則一致的情況下進(jìn)行涉及動物及其護(hù)理的操作。
由胚胎Wistar大鼠(E17-E19)制備皮質(zhì)神經(jīng)元。麻醉并且處死妊娠17-19日的雌性大鼠。取出胎兒(n＝4-5)并且放入冰冷的Hank′s溶液(Hank′s溶液(Life tech.14170-088)+30％葡萄糖+Pen-Strep100x(Life Tech.15140-122)100U-100μg/ml和Hepes-NaOH 5mM)。取出子宮和胎盤，將胎兒斷頭并且將頭放入冰冷的Hank′s溶液。
使用撥釘鉗取下頭部皮膚，從背部側(cè)面至眼部切開頭皮并且使用彎曲的撥釘鉗取出腦。
將腦切成兩半，使用撥釘鉗取下外部結(jié)締組織膜，并且保持腦倒置朝下，使用彎曲拔釘鉗取出小腦、腦干和間腦，試圖盡可能將皮質(zhì)內(nèi)部清潔。
使用剪刀將每一皮質(zhì)切成較小部分，使用5ml移液管將各片轉(zhuǎn)入15ml離心管并且用Hank′s溶液洗滌兩次。
取出溶液，但留下1-2ml并且首先用5ml移液管然后用熱拋光Pasteur移液管(分別為中等和小開口)分離組織。
在機械分離后，加入5ml完全DMEM(Dulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基)(Gibco 41966-029)+FBS(Hyclone)10％+谷氨酰胺(Life Tech.25030-024)2mM+Pen-Strep 100U-100μg/ml并且以1000rpm將細(xì)胞混懸液離心5min。除去上清液并且加入5ml完全Neurobasal培養(yǎng)基(NB培養(yǎng)基(Life tech.21103-049)+B27(Life tech.17504-044)2％+2mM谷氨酰胺+Pen-Strep 100U-100μg/ml)。
計數(shù)細(xì)胞并且用Neurobasal培養(yǎng)基稀釋至400000個細(xì)胞/聚-D-賴氨酸5μg/ml處理的培養(yǎng)皿的濃度。
從鋪板后第6天開始到第11天使用皮質(zhì)神經(jīng)元并且每周一次改變Neurobasal培養(yǎng)基。
全細(xì)胞膜片鉗記錄 使用標(biāo)準(zhǔn)全細(xì)胞膜片鉗法對皮質(zhì)神經(jīng)元進(jìn)行實驗(Hamill等，1981)。記錄膜電流并且使用Axon Axopatch 200B放大器在5kHz下濾過，且使用Axon Digidata 1322A(Axon Instruments，CA，USA)進(jìn)行數(shù)據(jù)數(shù)字化。使用Axon pClamp8軟件在線控制方案實施和數(shù)據(jù)采集。測定和參比電極為AgCl-Ag電極。Sutter Instrument P-87Puller(CA，USA)用于由Harward硼硅玻璃試管拉出具有2-3MΩ電阻的膜片鉗移液管。應(yīng)用溶液轉(zhuǎn)換器Biologic RSC-200連續(xù)使用胞外溶液流過細(xì)胞。
電壓方案和數(shù)據(jù)分析 為了測試化合物對皮質(zhì)神經(jīng)元中鈉電流的效應(yīng)，在-90mV下固定細(xì)胞，然后將兩步方案用于測定阻滯的電壓依賴性。通過從2000ms的-110mV預(yù)處理電勢(靜止條件)和～-50mV電勢(半最大穩(wěn)態(tài)條件)30ms階躍脈沖至-10mV(測試脈沖)來活化鈉電流。將在指定藥物濃度下靜止和去極化電流的增強阻滯計算為對照外浴溶液中的峰值Na+電流與使用測試物質(zhì)的峰值電流之差除以對照峰值。
通過繪制靜止和去極化條件下增強阻滯與藥物濃度之間關(guān)系的圖獲得藥物濃度-抑制曲線。按照對數(shù)方程使劑量-響應(yīng)曲線與增強阻滯數(shù)據(jù)擬合y＝A2+(A1-A2)/[1+(x/IC50)p]。A1和A2為0和相當(dāng)于0的1的固定值和100％電流抑制率，x為藥物濃度，IC50為導(dǎo)致50％電流抑制的藥物濃度且p為相應(yīng)的坡度因子。
根據(jù)方程1/Kdep＝h/Kr+(1-h)/Ki計算對失活狀態(tài)的藥物表觀親和力(Ki)，其中Kr為藥物對靜止/關(guān)閉狀態(tài)的親和力；Kdep為去極化條件下的IC50，h和(1-h)分別為靜止和去極化電勢下存在的通道分?jǐn)?shù)。
溶液和藥物 對照浴溶液包含(mM)NaCl 60，膽堿Cl 60，CaCl2 1.3，MgCl22，KCl 2，CdCl2 0.4，NiCl2 0.3，TEACl 20，Hepes 10，葡萄糖10。
內(nèi)部移液管溶液由如下成分組成(mM)CsF 65，CsCl 65，NaCl 10，CaCl2 1.3，MgCl2 2，Hepes 10，EGTA 10，MgATP1。
將化合物溶于DMSO作為儲備溶液(20mM)。將它們稀釋至在外溶液中的終濃度。
結(jié)果 本發(fā)明的化合物能夠阻斷大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元中的Na+電流。將使用本發(fā)明化學(xué)類型中有代表性的化合物2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽(NW-3509)與我們的標(biāo)準(zhǔn)品safinamide和ralfinamide比較獲得的結(jié)果報導(dǎo)在表3中。
表3 *為與甲磺酸形成的鹽 表示為在μM濃度下的IC50值的數(shù)據(jù)以及對失活狀態(tài)的親和力(Ki)證實本發(fā)明化合物極為有效并且為電壓依賴的鈉通道阻斷劑。
實施例14ND7/23細(xì)胞系中Na+電流阻斷的膜片鉗評價 細(xì)胞系維持 ND7/23(來自SIGMA的ECACC No 92090903)為來源于融合了小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤N18Tg2的新生大鼠DRG的雜交細(xì)胞系(Wood等，1990)。ND7/23細(xì)胞表現(xiàn)出感覺神經(jīng)元樣特性并且表達(dá)河豚毒素-敏感性(TTX-S)，但不表達(dá)河豚毒素-抗性(TTX-R)電流(Zhou等；2003；John等，2004)。TTX-R電流缺乏與這些細(xì)胞中不存在TTX-R通道轉(zhuǎn)錄物一致。
負(fù)責(zé)TTX-S電導(dǎo)的通道的分子鑒定為未知的，但推斷能夠因鈉通道的混合的群體活性產(chǎn)生。
通常細(xì)胞維持在含有10％FBS，4mM谷氨酰胺，1mM丙酮酸鈉的DMEM中。在膜片鉗實驗前的那天分離細(xì)胞并且以100,000個細(xì)胞/聚賴氨酸包被的35mm培養(yǎng)皿中接種。
全細(xì)胞膜片鉗記錄 使用如上所述部分中所述的標(biāo)準(zhǔn)全細(xì)胞膜片鉗法對ND7/23細(xì)胞進(jìn)行實驗(Hamill等，1981)。
電壓方案和數(shù)據(jù)分析 為了測試化合物對ND7/23細(xì)胞中鈉電流的效應(yīng)，將保持膜電勢維持在-90mV，然后將兩步方案用于測定阻滯的電壓依賴性。通過從2000ms的-110mV預(yù)處理電勢(靜止條件)和～-70mV電勢(半最大穩(wěn)態(tài)條件)30ms階躍脈沖至0mV(測試脈沖)來活化鈉電流。
將在指定藥物濃度下靜止和去極化電流的增強阻滯計算為對照外浴溶液中的峰值Na+電流與使用測試物質(zhì)的峰值電流之差除以對照峰值。
通過繪制靜止和去極化條件下增強阻滯與藥物濃度之間關(guān)系的圖獲得藥物濃度-抑制曲線。按照對數(shù)方程y＝A2+(A1-A2)/[1+(x/IC50)p]使劑量-響應(yīng)曲線與增強阻滯數(shù)據(jù)擬合。A1和A2為0和相當(dāng)于0的1的固定值和100％電流抑制率，x為藥物濃度，IC50為導(dǎo)致50％電流抑制的藥物濃度且p為相應(yīng)的坡度因子。
根據(jù)方程1/Kdep＝h/Kr+(1-h)/Ki計算對失活狀態(tài)的藥物表觀親和力(Ki)，其中Kr為藥物對靜止/關(guān)閉狀態(tài)的親和力；Kdep為去極化條件下的IC50，h和(1-h)分別為靜止和去極化電勢下存在的通道分?jǐn)?shù)。
溶液和藥物 對照浴溶液包含(mM)NaCl 80，HCl膽堿40，CaCl2 1.3，MgCl22，KCl 2，CdCl2 0.4，NiCl2 0.3，TEACl 20，Hepes 10，葡萄糖10。
內(nèi)部移液管溶液由如下成分組成(mM)CsF 65，CsCl 65，NaCl 10，CaCl2 1.3，MgCl2 2，Hepes 10，EGTA 10，MgATP 1。
將化合物溶于DMSO作為儲備溶液(20mM)。將它們稀釋至在外溶液中的終濃度。
結(jié)果 本發(fā)明的化合物能夠阻斷ND7/23細(xì)胞中的Na+電流。將使用本發(fā)明化學(xué)類型中有代表性的化合物2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽NW-3525與我們的標(biāo)準(zhǔn)ralfinamide比較獲得的結(jié)果報導(dǎo)在表4中。
表4 *為與甲磺酸形成的鹽 表示為在μM濃度下的IC50值的數(shù)據(jù)以及對失活狀態(tài)的親和力(Ki)證實本發(fā)明化合物極為有效并且為電壓依賴的鈉通道阻斷劑。
實施例15體外MAO-B酶活性測定法 膜制備物(粗線粒體級分) 在輕微麻醉下處死雄性Wistar大鼠(Harlan，Italy-175-200g)，迅速取出腦，在8體積冰冷的0.32M蔗糖緩沖液中勻化，所述緩沖液含有0.1M EDTA，pH7.4。將粗的勻化產(chǎn)物在2220rpm下離心10分鐘，回收上清液。將沉淀再次勻化和離心。匯集兩份上清液，于+4℃下在9250rpm下離心10分鐘。將沉淀重新懸浮在新鮮的緩沖液中，在11250rpm下離心10分鐘，溫度+4℃。將所得沉淀貯存在-80℃下。
體外酶活性測定 利用放射性酶測定法，應(yīng)用對MAO-B具有特異性的底物14C-苯基乙胺(PEA)評估酶活性。
將線粒體沉淀(500μg蛋白質(zhì))重新懸浮于0.1M磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)中。將200μl混懸液加入到50μl供試化合物溶液或緩沖液中，在37℃下溫育30min(預(yù)溫育)，然后加入底物(50μl)。在37℃下進(jìn)行溫育，時間為10分鐘(14C-PEA，0.5μM)。
加入0.2ml高氯酸終止反應(yīng)。離心后，將脫氨基的代謝產(chǎn)物用3ml甲苯萃取，借助液體閃爍光譜法測量包含作為MAO-B活性結(jié)果形成的中性和/或酸性代謝物的放射性有機相，效率為90％。
將MAO-B活性表示為nmoles轉(zhuǎn)化的底物/mg蛋白質(zhì)/min。
本發(fā)明全部化學(xué)類型中有代表性的化合物在相關(guān)濃度下未表現(xiàn)出MAO-B抑制作用，正如表5中作為IC50值報導(dǎo)的(化合物能夠?qū)AO-B酶活性抑制50％的濃度)。
當(dāng)IC50值在亞-微摩爾范圍中時，例如我們的標(biāo)準(zhǔn)品safinamide和ralfinamide，實際上認(rèn)為MAO-B顯著抑制。
表5 *為與甲磺酸形成的鹽 實施例16福爾馬林試驗 按照來自Rosland等的改進(jìn)的方案(Rosland J.H.，Tjolsen A.，Maehle B.，Hole K.Pain(1990)42235-242)，經(jīng)皮下(s.c.)將20μl 2.7％福爾馬林溶液注入小鼠左后爪跖面并且即刻放入澄明的PVC觀察室(23×12×13cm)。通過對注射爪的累積舔爪次數(shù)進(jìn)行計數(shù)對疼痛行為進(jìn)行定量。在福爾馬林注射后早期(0-5min)和晚期(20-40min)過程中取測量值(Tjolsen A.，Berge O.G.，Hunskaar S.，RoslandJ.H.，Hole K.Pain(1992)515-17)。
在以10ml/kg體重的體積進(jìn)行福爾馬林注射前5-45分鐘通過p.o.或s.c.對10只小鼠的足給予每次劑量的供試化合物。對照組用載體處理。
可以發(fā)現(xiàn)通過口服和皮下給予的本發(fā)明化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂谢钚浴?br> 以0.6-20mg/kg p.o.和s.c.給予的一種化合物(即本發(fā)明全部類型化合物中有代表性的化合物)所獲得的表示為ED50值的結(jié)果報導(dǎo)在表6中，其證實該化合物具有良好的止痛活性。
表6 *為與甲磺酸形成的鹽 實施例17神經(jīng)性疼痛的脊神經(jīng)結(jié)扎模型 在脊神經(jīng)結(jié)扎模型(SNL)中測試對神經(jīng)性疼痛的效果(Kim S.H.和Chung J.M.(Pain(1992)50355-363)。
動物使用稱重為175-200g的成年雄性Wistar大鼠。使所有動物以8/10的組寄居在溫度(22±0.5℃)和相對濕度(60-70％)受控室內(nèi)，給予12小時光照/黑暗周期(光照在6a.m.-6p.m.)并且允許自由飲水和取嚙齒動物標(biāo)準(zhǔn)膳食。
藥物在測定基礎(chǔ)異常性疼痛閾值后，將溶于蒸餾水的供試化合物以在2ml/kg體積中的0.5-100mg/kg的劑量通過口服給予。對照組大鼠用載體處理。
脊神經(jīng)結(jié)扎按照Kim S.H.和Chung J.M.所述的改進(jìn)方法制作神經(jīng)病變(Pain(1992)50355-363)。簡言之，用硫噴妥鈉35mg/kgi.p.(如果需要加上額外劑量)麻醉動物并且在暴露從L4到S2的背側(cè)脊椎后，用4-0號絲縫線緊固結(jié)扎暴露的L5和L6脊神經(jīng)，并且封閉切口。允許大鼠在手術(shù)后測試前恢復(fù)約5-14天。
機械性異常性疼痛按照Chaplan等的方法測定機械性異常性疼痛閾值(Chaplan S.R.，Bach F.W.，Pogrel J.W.，Chung J.M.和Yaksh T.L.J.Neurosc.Method.(1994)5355-63)。將大鼠放入各自24×10×15cm的塑料盒的網(wǎng)狀金屬底部上并且允許它們在測試前適應(yīng)約30min分鐘。測定對使用具有對數(shù)遞增硬度0.41-15g(4-150mN)的8個標(biāo)刻度的von Frey絲(Stoelting，Wood Dale，IL)探測的反應(yīng)的大鼠后爪的爪撤回閾值。將每種絲垂直施加在大鼠結(jié)扎爪的足面上。使用15g的最大截止值。通過依次增加和減少刺激強度(“上-下”法)測定撤回閾值，通過使用Dixon非參數(shù)檢驗來分析并且表示為平均撤回閾值(Dixon W.J.Am.Stat.Assoc.(1965)60967-978)。在p.o.處理前(給藥前)和之后的15，30，60，90，120，180，240，300，360和420min時測定假擬手術(shù)和手術(shù)動物中機械性異常性疼痛閾值。還在兩種處理方案中測定了24小時閾值。在9a.m.-6p.m.之間進(jìn)行試驗。觀察者不了解實驗和處理條件。
熱痛覺過敏使用足底試驗評價熱痛覺過敏(Ugo Basile，Varese，Italy)。將大鼠放入樹脂玻璃盒的澄明玻璃板上。在大鼠仍然相對穩(wěn)定的情況下，玻璃底部下的的輻射熱源定向于后爪跖面，并且測定撤回潛伏期。在評價熱痛覺過敏前，調(diào)整輻射熱的強度以便產(chǎn)生來自具有自動設(shè)定在30秒的截止值的首次用于實驗的大鼠約20秒的基線潛伏期，以避免組織損害。
發(fā)現(xiàn)口服給藥的本發(fā)明有代表性的化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂谢钚浴?br> (圖1在SNL大鼠熱痛覺過敏中口服給予的2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽(NW-3509)的效果。ED50＝10.58mg/kg(6.7-16.6)。數(shù)值代表每組10只動物的平均值±SEM)。
實施例18慢性炎性疼痛的完全Freund氏佐劑模型 向左后爪跖肌內(nèi)注射100μl完全Freund氏佐劑(CFA，Sigma)，在大鼠(200g重)中誘發(fā)單關(guān)節(jié)炎，所述佐劑在石蠟油與乳化劑二縮甘露醇單油酸酯的混合物中含有加熱滅活的和干燥的結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tubercolosis)。首次用于實驗的大鼠組用作對照組。CFA注射產(chǎn)生局部化的水腫和炎癥區(qū)域，開始于注射后幾個小時，伴有機械性撤回閾值的進(jìn)行性降低。
在試驗之前允許每只動物歷經(jīng)8-9天形成關(guān)節(jié)炎。
機械性異常疼痛按照Chaplan等的方法測定機械性異常疼痛閾值(Chaplan S.R.，Bach F.W.，Pogrel J.W.，Chung J.M.和YakshT.L.J.Neurosc.Method.(1994)5355-63)。將大鼠置于底部為金屬網(wǎng)的單個塑料盒24×10×15cm中，在試驗之前允許適應(yīng)約30分鐘。測定作為對向爪子施用8次校準(zhǔn)的von Frey毛發(fā)(Stoelting，WoodDale，IL)的反應(yīng)的大鼠后爪的撤回閾值，其硬度增量的對數(shù)值為0.41-15g(4-150mN)。垂直于結(jié)扎大鼠足面施加每根毛發(fā)。使用15g最大截止值。通過依次增加和減小刺激強度(“上-下”法)測定撤回閾值，通過Dixon非參數(shù)檢驗來分析并且表示為平均撤回閾值(Dixon W.J.Am.Stat.Assoc.(1965)60967-978)。在p.o.治療前(給藥前)和之后15，30，60，90，120，180，240，300，360和420min測定模擬和手術(shù)動物中的機械性異常疼痛閾值。還在兩個治療方案中測定了24小時閾值。本試驗在9a.m.-6p.m.進(jìn)行。觀察人員不了解實驗和治療條件。
發(fā)現(xiàn)口服給予的本發(fā)明有代表性的化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂谢钚浴?br> 實施例19乙酸-誘發(fā)的小鼠內(nèi)臟痛模型 內(nèi)臟痛仍然為最常見形式的尋求醫(yī)療處理的疼痛之一。盡管可以將內(nèi)臟痛概括為軀體痛的變化形式，但是它在神經(jīng)學(xué)機理和傳遞途徑方面不同。內(nèi)臟痛的特征在于涉及痛覺過敏并且還在于它并不總是與組織損傷有關(guān)。
乙酸誘發(fā)的內(nèi)臟痛模型廣泛應(yīng)用于產(chǎn)生腹部收縮的實驗研究(Korster R等.Fed.Pro.(1959)18412；Friese N等，LifeSci.(1997)60625-634)。該模型由腹膜內(nèi)(i.p.)注射誘發(fā)稱作‘扭體’的綜合征的刺激物組成，所述稱作的‘扭體’的綜合征由腹部收縮，扭動和軀干轉(zhuǎn)動，后背弓形和后肢伸展組成。
動物和操作使用稱重為25-33g的雄性CD1小鼠。允許每個處理組30min習(xí)慣于各自聚丙烯透明盒內(nèi)的實驗室環(huán)境。通過對在i.p.注射0.6％乙酸(10ml/kg體重)后扭體10min的次數(shù)計數(shù)對內(nèi)臟痛進(jìn)行評分。評價乙酸給藥后的扭體次數(shù)。對完全身體拉長(完全扭體)或具有明顯腹部收縮的部分拉長(部分扭體)進(jìn)行計數(shù)。在乙酸注射前5min通過口服對單獨各組的10只小鼠各自給予載體(10ml/kg)或不同劑量的溶于所述載體的供試化合物(10ml/kg)。將數(shù)據(jù)表示為10min觀察期過程中的平均扭體次數(shù)。
發(fā)現(xiàn)口服給予的本發(fā)明有代表性的化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂袦p少乙酸誘發(fā)的扭體次數(shù)的活性。
(圖2口服給予20mg/Kg p.o.的2-[2-(3-丁氧基苯基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽(NW-3509)在乙酸誘發(fā)的內(nèi)臟痛試驗中的效果。***p＜0.01與載體相比的t-檢驗。數(shù)值代表n＝10只動物/組的平均值±SEM。***p＜0.01 Dunnet檢驗)。
實施例20小鼠最大電擊試驗(MES) 在嚙齒動物模型中篩選抗癲癇藥時普遍采用最大電擊試驗(MES)。
動物和儀器使用體重25g的雄性CD1小鼠。遵循White等所述工藝(White H.S.，Woodhead J.H.，F(xiàn)ranklin M.R.，Swinyard E.A.，和Wolf H.H.Antiepileptic Drugs(1995)4th ed99-110，RavenPress，Ltd.，New York)。利用Ugo Basile電驚厥生成器(Model ECTUNIT 7801)遞送足以在至少97％對照動物中產(chǎn)生后肢強直性伸展反應(yīng)的電刺激。在小鼠中通過夾式電極耳內(nèi)遞送刺激(0.7s的40mA電擊，脈沖列為80Hz，脈沖持續(xù)時間為0.4ms)。檢查在MES誘導(dǎo)之前5-120分鐘腹膜內(nèi)(i.p.)、皮下(s.c.)、靜脈內(nèi)(i.v.)或口服給予的化合物的急性效果，與載體對照組比較。每組研究十只小鼠。癲癇發(fā)作的后肢強直性伸展組分的完全抑制被視為抗驚厥活性的證據(jù)。
在0.1-100mg/kg的劑量下p.o或i.v.內(nèi)給予本發(fā)明化合物。
將表示為使用本發(fā)明全部類型中有代表性的某些化合物獲得的ED50值報導(dǎo)在表7和表8中，表明這些化合物具有作為抗驚厥藥的活性。
表7 表8 *為與甲磺酸形成的鹽。
實施例21苯丙胺和氯氮卓-誘導(dǎo)的小鼠運動過多 在這種模型中，將小鼠用d-苯丙胺加抗焦慮劑量的苯并二氮雜卓類氯氮卓處理(Rushton R，Steinberg H.Combined effects ofchlordiazepoxide and d-amphetamine on activity of rats in anunfamiliar environment.Nature 1966；2111312-3；.R.Arban，G.Maraia，K.Brackenborough，L.Winyard，A.Wilson，P.Gerrard，C.Large，.Evaluation of the effects of lamotrigine，valproateand carbamazepine in a rodent model of mania Behavioural BrainResearch，158123-132)。該模型已被要求模擬雙相性精神障礙中的一些躁狂方面。重要的是，由d-苯丙胺與氯氮卓混合物誘導(dǎo)的活動過多能夠被在先給藥的既定情感穩(wěn)定劑鋰以及其他情感穩(wěn)定藥(例如丙戊酸鎂和卡馬西平)所預(yù)防。因此，這種模型作為雙相性精神障礙的模型可以呈現(xiàn)和預(yù)測有效性，并代表了確定供試化合物是否能夠成為有潛力的情感穩(wěn)定藥候選的有價值的工具。
向雄性Albino Swiss小鼠(25-32g)以體積為10ml/kg給予苯丙胺(AMP)(2.5mg/kg)加鹽酸氯氮卓(CDZ)(3mg/kg/ip)。利用Opto-M3System(Columbus Instruments)記錄運動活動，這是一種多通道活動監(jiān)測器。Opto-M3系統(tǒng)具有10個紅外發(fā)射器和各自數(shù)量的接收器(光束間距(beam spacing)0.5”)，與PC計算機連接，并計算移動活動和總計數(shù)。因而，該系統(tǒng)區(qū)分向前運動(移動)與刻板樣運動(總計數(shù))。將小鼠用供試化合物(0.5-20mg/kg)預(yù)處理，10min后用AMP(2.5mg/kg)或者AMP連同CDZ(3mg/kg)處理。連續(xù)30min后，將小鼠再次用相同劑量的供試化合物處理，分別置于運動活動籠中。評價30min的運動活動(移動和總活動計數(shù))。每組由8-10只小鼠組成。
統(tǒng)計學(xué)分析借助方差分析(ANOVA)評價數(shù)據(jù)，酌情再分別利用Dunnett氏檢驗與對照組進(jìn)行個別比較。
結(jié)果表明苯丙胺和苯丙胺-氯氮卓(CDZ)給藥誘導(dǎo)顯著的運動活動增加。
口服給予的本發(fā)明有代表性的化合物在減少苯丙胺和苯丙胺-氯氮卓誘導(dǎo)的活動過度的本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂谢钚浴?br> (圖3移動超過30min。
a)氯氮卓(3.0mg/Kg ip)；b)2-[2-(3-丁氧基苯基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽(NW-3509)(20.0mg/Kg po)；c)苯丙胺(2.5mg/kgi.p.)。
單獨的苯丙胺和苯丙胺+氯氮卓混合物顯著增加了運動行為**p＜0.001與載體比較的Dunnet′s檢驗。
2-[2-(3-丁氧基苯基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽(NW-3509)減少了由單獨的苯丙胺和苯丙胺與氯氮卓混合物誘導(dǎo)的活動過度，以統(tǒng)計學(xué)顯著性方式##p＜0.001與苯丙胺或苯丙胺+氯氮卓比較的Dunnet′s檢驗。數(shù)據(jù)表示n＝10只小鼠/組的平均值±SEM)。
實施例22Morris水迷宮試驗(東莨菪堿在大鼠中誘發(fā)的健忘癥) 檢測抗健忘癥活性的方法遵循Morris所述的方法(Learn.Motiv.，12，239-260，1981)。Morris迷宮由充滿了水并且維持在26-28℃下的具有距離邊界18cm并且始終處于水面下1.5cm相同位置的逃逸平臺(直徑＝15cm)的環(huán)形水槽(直徑＝150cm)組成。通過添加無毒性著色劑(例如奶粉)使水變不透明，使得平臺不可見。
在4個連續(xù)天內(nèi)給予動物4個訓(xùn)練期(第1天到第4天)。每個訓(xùn)練期由在Morris迷宮中的4次試驗組成，每次間隔1分鐘。就每次試驗而言，將動物放入迷宮內(nèi)相等分布在迷宮周圍的4個起點之一上并且允許找到逃逸平臺。將動物放置在逃逸平臺上60秒，此后放回其寄居的籠中。如果動物在120秒內(nèi)未發(fā)現(xiàn)平臺，那么實驗者從水中將其取出并且將其放置在平臺上60秒，此后將其放回到寄居的籠中。在4次試驗過程中，動物以每只動物隨機確定的次序開始從各自的起點迷失一次。
視頻跟蹤記錄試驗并且使用視頻跟蹤系統(tǒng)(PanlabSMART)分析動物行為。取的主要測量值是每次試驗時的逃逸潛伏期。額外的測量值為游泳速度和游行的距離。
東莨菪堿-處理的動物(0.5mg/kg i.p.，在每一期限前30分鐘給予)表現(xiàn)出如無法減小從試驗到試驗和從期限到期限的逃逸潛伏期所示的在該任務(wù)中的健忘癥。在第5天時進(jìn)行探頭試驗。從迷宮中取出平臺并且使動物在迷宮中自由游泳60秒。所取的主要測量值為花費在目標(biāo)四分體(即預(yù)先包含平臺的)上的時間，將其與花費在其它四分體上的時間和隨機預(yù)測的值(即25％的探頭試驗期限)比較。每組研究12只東莨菪堿-處理的大鼠。本實驗還包括接受鹽水而非東莨菪堿的正常對照組。以3種劑量評價供試物質(zhì)，p.o.給予5-60分鐘，此后進(jìn)行每一訓(xùn)練期限和探頭試驗，即東莨菪堿前30分鐘，并且與載體對照組比較。本實驗由此包括5組。
通過比較處理組與東莨菪堿對照組，使用未配對斯氏t檢驗分析數(shù)據(jù)。
發(fā)現(xiàn)口服給予的本發(fā)明有代表性的化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂谢钚浴?br> 實施例23認(rèn)知模型-新物體識別試驗 物體識別試驗由樣品試驗和試驗間間隔(ITI)分開的選擇試驗組成。在樣品試驗時，提供兩個相同的物體。在選擇試驗時，用新物體替代樣品試驗中提供的物體之一(稱作熟悉物體)。在ITI為1小時或1小時以下時，大鼠能夠辨別熟悉物體與新物體，但24小時ITI時不能(Deschaux O等，1997，Neurosci.Lett.222，159-162；Ennaceur A等，1989.，Behav.Brain Res.33，197-207；Puma C，Bizot JC，1998，Neurosci.Lett.248，183-186)。因此，使用1小時ITI的物體識別任務(wù)能夠檢測藥物的遺忘效應(yīng)，且是否這種遺忘效應(yīng)被另一種藥物減輕。使用24小時ITI的物體識別試驗?zāi)軌驒z測藥物誘發(fā)的記憶力增強。已經(jīng)進(jìn)行了大量研究以便評價藥物的記憶效果。例如，過去的研究證實煙堿改善了24-小時ITI條件中的記憶力并且減輕了1-小時ITI條件中東莨菪堿誘發(fā)的健忘癥。
方法如Bizot JC等，2005 Prog Neuropsychopharmacol BiolPsychiatry.29928-935中所述進(jìn)行物體識別任務(wù)。
受試者使用首次用于實驗的8周齡雄性Wistar大鼠 儀器物體識別任務(wù)的儀器為灰色不透明樹脂玻璃構(gòu)成的開放盒子(40cm L，40cm W，40cm H)。辨別的物體(3.5cm L，6cm H)在顏色和形狀上不同。它們?yōu)榘咨T按鈕圓形和灰色門按鈕星形。顯然，它們對大鼠而言不具有天然的顯著性差別并且它們始終與強化無關(guān)。為了排除遺留在物體上的氣味痕量的可能性和由此大鼠對在嗅覺線索上的識別能力的依賴性，用澄清水洗滌物體和盒子的底部并且在每次試驗之間進(jìn)行干燥。將電視攝像機固定在盒子上方的天花板上以便監(jiān)測動物活動。
實驗在2天(東莨菪堿誘發(fā)的健忘癥)或3天(自然忘記)內(nèi)進(jìn)行。本試驗由15-min習(xí)慣試驗(第1天)，3-min樣品試驗(第2天)和3-min選擇試驗(第2或第3天)組成。
東莨菪堿誘發(fā)的健忘癥實驗。本實驗對隨機再分成不同組(n＝12/組)的大鼠進(jìn)行，它們接受 -對照組本試驗前30min 1次腹膜內(nèi)(IP)注射鹽水(樣品試驗)，本試驗前15min 1次經(jīng)口(PO)注射鹽水。
-東莨菪堿組本試驗前30min 1次IP注射東莨菪堿(0.1mg/kg)，本試驗前15min 1次PO注射鹽水(樣品試驗) -東莨菪堿+煙堿組本試驗前30min 1次IP注射東莨菪堿(0.1mg/kg)和本試驗前20min 1次IP注射煙堿(0.4mg/kg)(樣品試驗) -東莨菪堿+有代表性的供試化合物組本試驗前30min 1次IP注射東莨菪堿(0.1mg/kg)(樣品試驗)和本試驗前15min 1次PO注射不同劑量的供試化合物(樣品試驗)。
在第1天允許大鼠探查儀器15min(習(xí)慣試驗)。在第2天將大鼠放入在盒子的兩個角落上提供兩個相同物體的儀器3min(樣品試驗)。1hr后，將大鼠放入帶有兩個物體的儀器；用新的物體替代樣品試驗中提供的物體之一(稱作熟悉物體)(選擇試驗)。
自然忘記實驗本實驗對隨機再分成不同組(n＝12/組)的大鼠進(jìn)行，它們接受 -對照組本試驗前20min 1次腹膜內(nèi)(IP)注射鹽水和本試驗前15min 1次經(jīng)口(PO)注射鹽水。
-煙堿組本試驗前20min 1次I P注射煙堿(0.2mg/kg)和本試驗前15min 1次PO注射鹽水。
-有代表性的供試化合物組本試驗前20min 1次IP注射鹽水和本試驗前15min 1次PO注射不同劑量的供試化合物。
在第1天允許大鼠探查儀器15min(習(xí)慣試驗)。在第2天將大鼠放入在盒子的兩個角落上提供兩個相同物體的儀器3min(樣品試驗)。24小時后(第3天)，將大鼠放入帶有兩個物體的儀器；用新的物體替代樣品試驗中提供的物體之一(稱作熟悉物體)。
數(shù)據(jù)基礎(chǔ)測量值為大鼠在樣品試驗和選擇試驗過程中探查物體所花費的時間。物體識別任務(wù)指數(shù)包括下列參數(shù) -樣品試驗中的總探查時間。
-選擇試驗中的總探查時間。
-選擇試驗中的新物體與熟悉物體之間探查時間之差(N-F)。
-辨別指數(shù)，其為100×(N-F)除以選擇試驗中的總探查時間。
用ANOVA和斯氏t檢驗分析數(shù)據(jù)。
發(fā)現(xiàn)口服給予的本發(fā)明有代表性的化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂袦p輕東莨菪堿在1-小時試驗間間隔(1hr ITI)的物體識別任務(wù)中誘發(fā)的健忘癥中和改善自然忘記情況中的記憶力、即在具有24小時試驗間間隔(24hr ITI)的物體識別任務(wù)中具有活性。
實施例24抑郁試驗小鼠的尾部懸掛試驗 尾部懸掛試驗為所謂的“行為絕望”模型之一并且應(yīng)用于篩選抗抑郁藥。它們基于常見的現(xiàn)象接觸在激動與穩(wěn)定之間的不相容厭惡情況選擇的正常動物。激動的原因正在研究，其為高度耗能的，而穩(wěn)定的目的在于節(jié)能?？挂钟羲幪幚砗蟮膭游锷踔猎诮^望的情況下也更為抗?fàn)?，并且它們幾乎不會花費時間穩(wěn)定。可以借助于這些模型研究神經(jīng)官能性抑郁癥的某些方面。
本方法檢測抗抑郁藥和抗焦慮藥活性并且遵循Stéru等所述(Psychopharmacology，85，367-370，1985)。尾部懸掛的嚙齒動物快速變不動。抗抑郁藥減少了穩(wěn)定期限，而安定劑增加了穩(wěn)定期限。使用Stéru等(Prog.Neuropsychopharmacol.Exp.Psychiatry，11，659-671，1987)研發(fā)的計算機化裝置(Itematic-TST)在6分鐘過程中自動記錄動物行為。同時研究6只小鼠。記錄兩種參數(shù) -穩(wěn)定期限本參數(shù)與用于″行為絕望″試驗的參數(shù)類似(Arch.Int.Pharmacodyn.Ther.，229，327-336，1977)。
-運動能力本參數(shù)基于動物消耗的能量，不依賴于活動期限。
每組研究10只小鼠。不進(jìn)行盲性試驗，但由Itematic-TST產(chǎn)生的隨機化方案確保了每只動物在儀器中的位置和時間方面的處理的均勻分布。評價3種劑量下的供試物質(zhì)，試驗前5-60分鐘p.o.給予并且與載體對照組比較。在相同實驗條件下給予的丙咪嗪(128mg/kgp.o.)和地西泮(8mg/kg p.o.)用作參比物。
本實驗由此包括6組。通過使用未配對斯氏t檢驗比較處理組與載體對照組分析數(shù)據(jù)。
發(fā)現(xiàn)口服給予的本發(fā)明有代表性的化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂谢钚浴?br> 實施例25精神分裂癥方法中的認(rèn)知缺損 認(rèn)知缺損經(jīng)常與精神分裂癥有關(guān)，其已被認(rèn)知是該障礙的核心要素，影響患者的恢復(fù)和重新融入社會。
最近關(guān)注的焦點在于精神分裂癥中認(rèn)知功能障礙的藥理模型，它基于谷氨酸鹽NMDA受體拮抗劑的效應(yīng)，所述受體拮抗劑例如苯環(huán)利定(PCP)和氯胺酮(Javitt等，1991)，它們在進(jìn)行復(fù)雜任務(wù)的小鼠中削弱注意力，增加“沖動性”和“強迫性”持續(xù)動作(Greco等，2005)。
材料和方法 動物使用雄性DBA/2N小鼠(Charles River，Italy)。小鼠在實驗開始時體重25-30g，在控溫條件(21℃)和12小時光照12小時黑暗循環(huán)(光照7:00am-7:00pm)下喂養(yǎng)?？梢噪S意進(jìn)食(Rieper，Italy)。動物在每天試驗結(jié)束時有兩小時的飲水時間。
五選項系列反應(yīng)時間任務(wù)儀器試驗儀器由四個21.6x17.8x12.7cm箱組成(Med Associates Inc.USA)，如前面所述[Greco，2005#26]。由SmartCtrlTM Package 8 In/16 Out(MedAssociates Inc.USA)控制刺激和反應(yīng)記錄，附帶MED-PC for Windows界面(Med AssociatesInc.USA)。5-CSRT任務(wù)的運行程序是根據(jù)客戶定制的。
行為操作習(xí)慣于液體增強劑和向小孔中伸鼻子對小鼠操作一周，記錄它們的體重。然后通過允許它們在傍晚飲水2h直至它們的體重已經(jīng)穩(wěn)定來禁止飲水(8天)。然后在后面的兩天里，使小鼠在它們的籠子中習(xí)慣于在手術(shù)操作中后來使用的增強劑(10％蔗糖溶液)。在后面的兩天里，使小鼠習(xí)慣于手術(shù)盒子。在此階段，將一小碗10％蔗糖溶液放置在盒子接受孔下方。首先，小鼠不得不學(xué)習(xí)每5秒鐘在接受孔的小杯中有液體獎賞。在此階段記錄頭部進(jìn)入次數(shù)。在下一階段，訓(xùn)練小鼠向有照明的小孔中伸鼻子。在向水接受器中伸鼻子之后立即打開小孔之一后方的LED。在光照小孔中伸鼻子抵消光刺激，滴液器在接受孔中提供0.01mL的液體獎賞。其他四個小孔之一中的任何反應(yīng)都沒有結(jié)果，沒有記錄。以隨機順序在全部五個小孔中呈遞光刺激。在一個30min期間中已經(jīng)完成至少50次獲得獎賞的伸鼻子試驗的小鼠轉(zhuǎn)向5-CSRT任務(wù)。
五選項系列反應(yīng)時間任務(wù)該時期的開始以開燈照明和0.01mL液體獎賞為標(biāo)志。在接受孔中伸鼻子開始第一次試驗。固定的延遲(試驗間間隔，ITI)后，小孔之一后方的LED短時間打開。在完整的時期期間在每個小孔中呈遞相同次數(shù)的LED刺激，呈遞的順序由計算機隨機安排。在開燈的同時，以及隨后短時間內(nèi)(有限的保持)，在照明小孔中的反應(yīng)(正確反應(yīng))導(dǎo)致液體獎賞。在無照明小孔中的反應(yīng)(不正確反應(yīng))或者在有限的保持內(nèi)沒能反應(yīng)(忽略)導(dǎo)致照明光短時間關(guān)閉(暫停時間(time out))。在照明光關(guān)閉的同時在小孔中的反應(yīng)重新開始暫停時間。在液體獎賞的遞送之后或者在暫停時間結(jié)束時，小鼠開始下一試驗，鼻子伸入接受孔。在正確反應(yīng)后，或者在暫停時間結(jié)束后鼻子伸入接受孔之前在小孔中所進(jìn)行的反應(yīng)(持續(xù)反應(yīng))，導(dǎo)致暫停時間階段。在ITT(先行反應(yīng))期間在小孔中的反應(yīng)也導(dǎo)致暫停時間期間。先行反應(yīng)之后，鼻子伸入接受孔重新開始當(dāng)前的試驗。每天的試驗期由100次試驗或者30min試驗組成，無論是否更快地完成，然后關(guān)閉全部光源，進(jìn)一步的反應(yīng)沒有效應(yīng)。在試驗安排的前一時期，刺激和有限的保持各自持續(xù)1min，依賴于個體的表現(xiàn)，逐漸減少至1sec。刺激持續(xù)時間以如下順序減少60、30、10、5、2.5、2、1.5和1秒(基線)。ITI和暫停時間在第一時期都持續(xù)2秒，ITI在隨后的時期升至5秒；暫停時間沒有變化。在全部訓(xùn)練和實驗階段，每只小鼠每天有一個5-CSRT任務(wù)期間。
藥物和處置安排將供試化合物溶于水，腹膜內(nèi)(IP)給藥，劑量為10mg/kg。處置后5分鐘，向小鼠注射載體(鹽水)或PCP(1.5mg/kg)，10min后它們開始試驗期間。在每次實驗中，按照拉丁方設(shè)計給予供試化合物與載體或PCP的各種組合。在藥物試驗日之間留出至少48h。在這些中間日期期間，試驗小鼠的5-CSRT任務(wù)，以重新建立基線表現(xiàn)和檢查任何殘留的藥物效應(yīng)。
統(tǒng)計學(xué)分析選擇用于分析的主要依賴性變量為(a)正確反應(yīng)的百分比(總正確反應(yīng)/總正確+總不正確反應(yīng)x100)；(b)忽略的百分比(總忽略/總正確反應(yīng)+總不正確反應(yīng)+總忽略x100)；(c)在ITI期間小孔中先行反應(yīng)的次數(shù)；(d)在正確反應(yīng)后小孔中持續(xù)反應(yīng)的次數(shù)。按照ANOVA模型，按照下式轉(zhuǎn)化正確反應(yīng)和忽略的百分比2arcsin(SQRT(％X/100))，以標(biāo)準(zhǔn)化分布(Winer，1971)。
利用因子藥物(供試化合物)和PCP，在主體2×2 ANOVA內(nèi)獨立地分析供試化合物(n＝12)對PCP誘導(dǎo)的5-CSRT任務(wù)缺陷的效應(yīng)。隨后，利用post-hoc Tukey-Kramer檢驗比較處理組平均值。在MicroVAX3500計算機(Digital，USA)上運行統(tǒng)計軟件(SAS Institute Inc.，USA)。
PCP對DBA/2N小鼠的注意力表現(xiàn)導(dǎo)致突出的效應(yīng)，表現(xiàn)為先行和持續(xù)反應(yīng)增加。本發(fā)明有代表性的化合物以10mg/kg i.p.給藥，能夠逆轉(zhuǎn)PCP-誘導(dǎo)的先行 實施例26小鼠和大鼠中驚恐的前沖動抑制 前沖動抑制(PPI)為跨種現(xiàn)象(即它存在于小鼠與人范圍的哺乳動物)，而它在精神分裂癥患者中相對不存在。無關(guān)聽覺刺激中過濾出的能力下降為特征，認(rèn)為該特征促成了這些情況中的某些表現(xiàn)，包括注意力不集中，注意渙散和認(rèn)知短缺。PPI操作應(yīng)用于評價受試者“門控”或過濾環(huán)境信息的能力。在感覺運動門控聽覺(驚恐模型)中，弱聽覺刺激(前置脈沖)減少了二次更強烈刺激(脈沖)產(chǎn)生的反射性畏縮反應(yīng)(驚恐)。藥物，如地佐環(huán)平(MK-801)或苯丙胺破壞PPI并且代表精神分裂癥的動物模型?？咕癫∷幠軌蝾A(yù)防PPI缺乏。本試驗對篩選潛在的抗精神病藥非常有用。
類似地，小鼠的某些品系，例如DBA/J展示出可以用抗精神病藥物逆轉(zhuǎn)的PPI的自發(fā)性損害并且還可以用作精神分裂癥動物模型。
大鼠中的PPI使用Wistar或Sprague-Dawley大鼠(稱重為200-300g)或3周齡DBA/2J小鼠。驚恐儀器(San Diego Instruments，CA)由12個塑料透明籠子組成，它們各自放置在隔音的柜子中，其安裝了與記錄平臺垂直運動的傳感器連接的可移動的平臺底部。通過懸掛在籠子上方并且連接發(fā)聲器的揚聲器傳遞的聽覺刺激引起驚恐反應(yīng)。使用PC計算機在距聽覺刺激啟動200ms記錄窗測定的過程中記錄因驚恐反應(yīng)引起的平臺運動產(chǎn)生的短暫力，數(shù)字化并且儲存在計算機中以便進(jìn)一步評價。在整個記錄窗(200ms)過程中測定驚恐反應(yīng)的振幅并且取振幅的平均值用于進(jìn)一步評價。將對照組和處理組放入各自的測試籠子。習(xí)慣5min后(背景白色噪聲，65dB)，以隨機的次序使用兩種類型的聽覺刺激在刺激前將單獨的聽覺刺激[120dB，40ms，(P)]或被前置脈沖操控的刺激[75dB，20ms(PP)]施加100ms。在每次實驗期限過程中以20s的刺激間期提供每種類型的20次試驗。對每一單獨動物分別求兩種類型試驗的振幅的平均值(單獨的刺激或被前置脈沖操控的刺激)。使用下列公式計算PPI百分比100-[(前置脈沖的平均驚恐振幅+脈沖試驗/單獨脈沖試驗的平均驚恐振幅)x100]，即100-(PP/P)x100。計算的％PPI較高值表示前置脈沖抑制了對脈沖刺激的反應(yīng)，而較低值表示前置脈沖的較弱抑制。在試驗前5min ip給予的MK-801(0.2mg/kg)或在試驗前10min sc給予的苯丙胺(2.5mg/kg)誘導(dǎo)感覺運動門控缺乏。發(fā)現(xiàn)口服給予的本發(fā)明有代表性的化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂谢钚?，逆轉(zhuǎn)了MK-801(圖4)或苯丙胺誘導(dǎo)的PPI缺乏。
DBA小鼠中的PPI使用雄性3周齡DBA/2J和C57BL/6J小鼠。
如Bortolato等在Psychopharmacology，2007，Oct；194(3)361-9中所述對聽覺驚恐反應(yīng)和PPI進(jìn)行檢測。
在每次實驗中，指定小鼠接受本發(fā)明的化合物或載體并且使用受試者之間的設(shè)計在PPI期限中測試。
使用下列公式計算PPI百分比100-[(前置脈沖的平均驚恐振幅+脈沖試驗/單獨脈沖試驗的平均驚恐振幅)x100]，即100-(PP/P)x100。將聽覺驚恐反應(yīng)的振幅計算為對所有單獨的脈沖試驗的反應(yīng)平均值，從而排除了提供的5次單獨的脈沖試驗中第一次或最后一次的阻滯。
發(fā)現(xiàn)口服給予的本發(fā)明有代表性的化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂袦p少BDA/2J小鼠PPI缺乏的活性。
(圖42-[2-(3-丁氧基苯基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽(NW-3509)在大鼠MK-801 PPI破壞中的效果。將數(shù)據(jù)表示為n＝10只動物的平均值+SEM。p＜0.01表示載體與MK-801之間統(tǒng)計學(xué)上的顯著性差異。*p＜0.05**p＜0.01表示載體+MK-801處理的動物和使用2-[2-(3-丁氧基苯基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺鹽酸鹽(NW-3509)處理的動物之間具有統(tǒng)計學(xué)上的顯著性差異。
Dunnet檢驗后為變異分析) 實施例27大鼠的反常睡眠紊亂 已經(jīng)使用大量典型臨床觀察結(jié)果和心理學(xué)報告驗證了睡眠與神經(jīng)病現(xiàn)象之間的精神病理學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)相關(guān)性。精神分裂癥患者表現(xiàn)出嚴(yán)重的失眠癥與大量睡眠體系結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)改變，例如REM入睡前的等待時間和期間減少和SWS(慢波睡眠)時間減少。大量研究已經(jīng)證實睡眠剝奪延長事實上有利于大量暫時性的心理紊亂，包括言詞結(jié)構(gòu)受損，分裂的思維，人格解體和從最小的紊亂和異常體覺到復(fù)雜的聽覺和幻覺的知覺改變。一般而言，這些紊亂無法與神經(jīng)病現(xiàn)象區(qū)分，但通常在恢復(fù)性睡眠延長后消除。幾項研究記錄了在強迫性睡眠剝奪期后，大鼠表現(xiàn)出有限時間的奇異的一組行為改變，例如刻板行為和活動過度。另外，大鼠睡眠剝奪強化了驚恐反應(yīng)并且破壞了PPI，這種效應(yīng)為時間依賴性的并且可通過抗精神病藥物逆轉(zhuǎn)(Gessa，GL等(1995)European Neuropsychopharmacology 5，89-93)。這類現(xiàn)象通常被解釋為與精神病相關(guān)，因為它們一般由擬精神病劑在大鼠中產(chǎn)生。大鼠睡眠剝奪模型可以被視為躁狂模型。
動物使用Sprague-Dawley大鼠(稱重200-300g)。
方法在大鼠中誘發(fā)反常睡眠紊亂(SD)的操作基于平臺法(從Jouvet等(1964)。Journal of Physiology(Paris)，56，381中的改進(jìn))。將大鼠保持在充滿水的深槽內(nèi)的小的樹脂玻璃平臺上(7cm直徑)。每個平臺周圍環(huán)繞距表面下達(dá)1cm的水。使食物顆粒和水瓶位于槽上部的柵格上。在整個SD研究過程中，將槽內(nèi)部的試驗室和水的溫度維持在23±1℃。將對照組大鼠放入其寄居籠子或相當(dāng)于用于SD的那些的水槽上的實驗室，但平臺直徑為12cm，允許它們達(dá)到REM睡眠，但不落入水中。在SD期結(jié)束時(72hr)，即刻使大鼠離開水干燥并且放入驚恐室(用于PPI測定)或活動籠子(活動過度)以便進(jìn)行行為測試。在整個SD期過程中每日改變槽中的水。將對照組大鼠維持在與睡眠剝奪大鼠相同的室內(nèi)其SD的持續(xù)期間。在PPI或行為測試前給予供試化合物。
數(shù)據(jù)分析對每只動物而言，使用兩種方式或三種方式方差分析(ANOVA)來分析該期限第二期中的第一次和第二次平分期限的平均值驚恐振幅(阻滯，6次各自單獨的脈沖試驗)，其中預(yù)處理(如果存在)和處理作為受試者之間的因素且阻滯作為反復(fù)的措施。使用下列公式計算PPI百分比100-[(前置脈沖的平均驚恐振幅+脈沖試驗/單獨脈沖試驗的平均驚恐振幅)x100]，即100-(PP/P)x100并且使用多因素ANOVAs分析(使用對每次實驗而言特定的設(shè)計和如下所述的比較)，其中預(yù)處理與處理的注射的不同組合作為受試者之間的因素并且試驗類型作為反復(fù)措施。使用Tukey檢驗進(jìn)行Post hoc分析。使用一種方式或兩種方式方差分析(ANOVA)來分析運動行為數(shù)據(jù)，如果合適，可以使用反復(fù)措施，隨后進(jìn)行作為post-hoc檢驗的Tukey檢驗。
發(fā)現(xiàn)口服或腹膜內(nèi)或皮下給予的本發(fā)明有代表性的化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂袦p少PPI缺乏和被睡眠剝奪誘發(fā)的活動過度的活性。
實施例28可卡因-誘導(dǎo)的行為敏化試驗 藥物成癮是以強迫性藥物尋找和攝入為特征的病理行為。這些行為改變的一種動物模型是長時間的運動活動增加，由反復(fù)向嚙齒動物給予精神刺激藥所誘導(dǎo)(Robinson T.E.and Berridge K.C.Brain Res.Brain Res.Rev.(1993)18，247-91)，被稱為藥物-誘導(dǎo)的行為敏化。在可卡因誘導(dǎo)的大鼠行為敏化模型中評價供試化合物的效應(yīng)。
運動活動儀器使用雄性Wistar大鼠，到達(dá)時體重200-250g。在十六只相同的金屬絲懸掛籠中測量運動活動，尺寸為36cm(L)x25cm(W)x20cm(H)。每籠含有兩套紅外發(fā)射器-檢測器光電池，位于格柵底部上方長軸1cm、前方8cm和籠子后部。由白噪音生成器提供背景噪音。在籠子內(nèi)的運動產(chǎn)生光電池中斷，由I BM兼容計算機自動記錄之。
敏化操作和處置在實驗之前，使動物習(xí)慣于運動活動箱達(dá)連續(xù)2-3天。大鼠接受5天的i.p.注射可卡因(15mg/kg)或鹽水和供試化合物(0.1-100mg/kg)或其載體，記錄3h的運動活動。最后一次可卡因或鹽水注射后十天(第15天)，在沒有供試化合物的存在下用15mg/kg可卡因攻擊動物，再次監(jiān)測3h的運動活動。
用可卡因處置的第五天，用載體i.p.預(yù)處理的動物顯示運動反應(yīng)增加(比第一天高20％，p＜0.05)。最后一次注射可卡因或鹽水后十天，在沒有供試化合物的存在下用15mg/kg可卡因攻擊動物，再次監(jiān)測3h的運動活動。預(yù)先用可卡因處置并且沒有接受供試化合物的大鼠被預(yù)期顯示對可卡因的運動活動反應(yīng)增加(比第一天高30％，p＜0.05)。如果在5天可卡因處置期間用供試化合物預(yù)處理的大鼠沒有顯示運動活動增加，那么該供試化合物被認(rèn)為具有預(yù)防精神刺激藥成癮的效應(yīng)(Koob G.F.，Sanna P.P.，Bloom F.E.Neuron(1998)21467-476；Robinson T.E.，Berridge K.C.Brain Res Brain Res Rev(1993)18247-291)。
統(tǒng)計學(xué)分析利用雙道ANOVA分析數(shù)據(jù)(3小時內(nèi)光束中斷的總數(shù))，反復(fù)測量一種因子，包括四個實驗組(也就是鹽水/載體、鹽水/供試化合物、可卡因/載體和可卡因/供試化合物)和兩個時間點(第1天和第5天)，繼之以單純效應(yīng)分析。利用第二種反復(fù)測量一種因子的雙道ANOVA對比第1天和攻擊當(dāng)天，繼之以Newman-Keuls post hoc檢驗。
發(fā)現(xiàn)口服給予的本發(fā)明有代表性的化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂谢钚浴?br> 實施例29乙酸對大鼠的急性膀胱刺激 使用成年麻醉雌性Sprague Dawley大鼠(170-200g)進(jìn)行實驗。通過膀胱穹頂向膀胱內(nèi)經(jīng)由中線腹部切口插入導(dǎo)管(PE-50)，然后測量膀胱內(nèi)壓力，以監(jiān)測連續(xù)輸注0.15％乙酸期間的膀胱活動。乙酸的連續(xù)膀胱內(nèi)輸注在麻醉大鼠中刺激膀胱，減少收縮間間隔(ICI)。在向用本發(fā)明化合物處理過的大鼠膀胱內(nèi)輸注乙酸之前和之后，測量ICIs、最大收縮壓力和誘導(dǎo)反射性膀胱收縮的壓力閾值。
發(fā)現(xiàn)腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給予有代表性的本發(fā)明化合物在本實驗?zāi)Ｐ椭芯哂谢钚浴?br> 實施例30環(huán)磷酰胺(CYP)對大鼠的中等膀胱刺激 使用成年清醒和麻醉雌性Sprague Dawley大鼠(170-200g)進(jìn)行實驗。由CYP誘發(fā)化學(xué)性膀胱炎，CYP被代謝為丙烯醛，是一種在尿中消除的刺激物。在實驗前一天給予CYP(150mg/kg/i.p.)。用CYP預(yù)處理導(dǎo)致膀胱刺激和非常頻繁的排泄，排泄之間的ICI為約150-200秒。
腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給予有代表性的本發(fā)明化合物增加用于這種實驗?zāi)Ｐ椭械那逍押吐樽泶笫蟮腎CI。
實施例31大鼠偏頭痛試驗 動物和手術(shù)將雄性Wistar大鼠(250-350g)用戊巴比妥鈉的鹽水溶液麻醉(50mg/kg i.p.)。
向氣管和左股動脈插套管，分別用于人工換氣(55沖程(stroke)/min)和測量平均血壓(MBP)。向股靜脈插套管，用于供試活性劑的靜脈內(nèi)給藥。
通過自動控釋加熱墊，維持體溫在37-38℃。將動物置于趨實體框架中，在頭皮中進(jìn)行縱向切開。在顱骨中鉆孔，向三叉神經(jīng)節(jié)的左眼分支(背側(cè)至前囟3.8mm，中線側(cè)面2.5mm，硬腦膜表面下方9.5mm)插入不銹鋼雙極性電極(Plastic One MS 306)，用牙科膠粘劑固定。借助簡單的電刺激確認(rèn)電極放置正確，這導(dǎo)致由三叉神經(jīng)纖維活化引起的頜運動。除去腦后，在每次實驗結(jié)束時肉眼檢查電極在纖維內(nèi)的正確位置。
在電極的同側(cè)鉆第二個孔(嘴側(cè)至前囟1.5mm，矢狀縫側(cè)面1.5mm)，固定激光多普勒流量計的探針(尖端直徑0.8mm)，使其尖端指向中腦動脈(MCA)的分支，借助PeriFlux 4001激光多普勒系統(tǒng)在線記錄腦血流(CBF)變化。
由于肌肉運動，在三叉神經(jīng)節(jié)的電刺激期間讀取的激光多普勒人 為現(xiàn)象被神經(jīng)肌肉阻斷劑泮庫溴銨的一次性i.v.推注(0.6mg/kgi.v.)所阻止。
利用戊巴比妥鈉和泮庫銨輸注(分別為12.5mg/kg/h+2.4mg/kg/h)維持全部實驗期間的麻醉和神經(jīng)肌肉阻斷。
實驗方案在手術(shù)結(jié)束時，暫停三十分鐘，目的是使所測量的參數(shù)穩(wěn)定。
電刺激增加了靜止CBF，矩形脈沖為0.5ms長，1-10Hz，0.5-1mA，時間30s。兩次平均化的預(yù)藥物刺激后，給予載體或藥物。
靜脈內(nèi)給予的本發(fā)明有代表性的化合物降低由三叉神經(jīng)刺激誘導(dǎo)的血流增加。
權(quán)利要求
1)式(I)的化合物
其中
X為-O-，-S-或-SO2-；
Y為氫，OH或O(C1-C4)烷基；
Z為＝O或＝S；
R為(C3-C10)烷基；ω-三氟(C3-C10)烷基；
R1和R2 獨立地為氫，羥基，(C1-C8)烷氧基，(C1-C8)烷硫基，鹵素，三氟甲基或2，2，2-三氟乙基；或R1和R2之一位于R-X-鄰位上，并且與同一R-X-共同表示
基團(tuán)，其中R0為(C2-C9)烷基；
R3和R′3 獨立地為氫或(C1-C4)烷基；
R4和R5獨立地為氫，(C1-C4)烷基；或R4為氫且R5為選自-CH2-OH，-CH2-O-(C1-C6)烷基，-CH(CH3)-OH，-(CH2)2-S-CH3，芐基和4-羥基芐基的基團(tuán)；或R4和R5與相鄰的碳原子共同構(gòu)成(C3-C6)環(huán)烷基殘基；
R6和R7獨立地為氫或(C1-C6)烷基；或與相鄰的氮原子共同構(gòu)成5-6元單環(huán)飽和雜環(huán)，其任選包含一個額外選自-O-，-S-和-NR8-的雜原子，所述R8為氫或(C1-C6)烷基；
條件是當(dāng)X為-S-或-SO2-時，Y不為OH或O(C1-C4)烷基；
如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
2)權(quán)利要求1的化合物，其中
X為-O-，-S-；
Y為氫，OH或O(C1-C3)烷基；
Z為＝O或＝S；
R為(C4-C7)烷基或ω-三氟(C4-C6)烷基；
R1和R2 獨立地為氫，(C1-C4)烷氧基，鹵素，三氟甲基或2，2，2-三氟乙基；或R1和R2之一位于R-X-鄰位上，并且與同一R-X-共同表示
基團(tuán)，所述R0為(C2-C5)烷基；
R3和R′3 獨立地為氫或(C1-C3)烷基；
R4和R5獨立地為氫或(C1-C4)烷基；或R4為氫且R5為選自-CH2-OH，-CH2-O-(C1-C5)烷基，-(CH2)2-S-CH5，芐基和4-羥基芐基的基團(tuán)；
R6和R7獨立地為氫或(C1-C4)烷基；或與相鄰的氮原子共同構(gòu)成5-6元單環(huán)飽和雜環(huán)，其任選包含一個額外的選自-O-和-NR8-的雜原子，所述R8為氫或(C1-C6)烷基；
條件是當(dāng)X為-S-時，Y不為OH或O(C1-C4)烷基；
如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
3)權(quán)利要求1的化合物，其中
X為-O-，-S-；
Y為氫或O(C1-C3)烷基；
Z為＝O或＝S；
R為(C4-C7)烷基或ω-三氟(C4-C6)烷基；
R1和R2 獨立地為氫，(C1-C3)烷氧基，氟，氯，三氟甲基或2，2，2-三氟乙基；或R1和R2之一位于R-X-鄰位上，并且與同一R-X-共同表示
基團(tuán)，所述R0為(C3-C4)烷基；
R3和R′3 獨立地為氫或(C1-C3)烷基；
R4和R5獨立地為氫或(C1-C4)烷基；或R4為氫且R5為選自-CH2-OH，-CH2-O-(C1-C3)烷基，芐基和4-羥基芐基的基團(tuán)；
R6和R7獨立地為氫或(C1-C3)烷基；或與相鄰的氮原子共同構(gòu)成5-6元單環(huán)飽和雜環(huán)，任選包含一個額外選自-O-和-NR8-的雜原子，所述R8為氫或(C1-C6)烷基；
條件是當(dāng)X為-S-時，Y不為O(C1-C4)烷基；
如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
4)權(quán)利要求1的化合物，其中
X為-O-；
Y為氫；
Z為＝O；
R為(C4-C6)烷基；
R1和R2 獨立地為氫或鹵素，優(yōu)選氟；
R3，R′3，R4和R5為氫；
R6和R7 獨立地為氫或(C1-C3)烷基；
如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
5)權(quán)利要求1的化合物，其選自
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-乙酰胺
2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-乙酰胺
2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基乙酰胺
2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基乙酰胺
2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁硫基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁基磺?；交?-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-(N′-羥基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-(N′-甲氧基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-(N′-丙氧基)乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基-硫代乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-2-甲基丙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-{2-[3-(4，4，4-三氟丁氧基)苯基]-乙氨基}-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁硫基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基-2-氯苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基-2-氟苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基-4-甲氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基-4-甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基-2，4-二氟-4-甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基-2，6-二氟-4-甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二乙基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二丙基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二丁基乙酰胺
2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-1-吡咯烷-1-基-乙-1-酮
2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-1-吡咯烷-1-基-乙-1-酮
2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-1-吡咯烷-1-基-乙-1-酮
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基丙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-3-羥基-N，N-二甲基丙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-3-甲氧基-N，N-二甲基丙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-3-丙氧基-N，N-二甲基丙酰胺
2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-2，N，N-三甲基丙酰胺
2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-2，N，N-三甲基丙酰胺
2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-2，N，N-三甲基丙酰胺
(S)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-丙酰胺
(S)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基丙酰胺
(S)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基丙酰胺
(R)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-丙酰胺
(R)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N-甲基丙酰胺
(R)-2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基丙酰胺
2-[2-(3-丁氧基-2-三氟甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基-4-三氟甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
2-[2-(3-丁氧基-5-三氟甲基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺
如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，優(yōu)選與鹽酸或甲磺酸形成的鹽。
6)權(quán)利要求5的化合物，其為2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺，2-[2-(3-丁氧基-2，6-二氟苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺，2-[2-(3-戊氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺，或2-[2-(3-己氧基苯基)-乙氨基]-N，N二甲基乙酰胺，
及其藥學(xué)上可接受的鹽，優(yōu)選與鹽酸或甲磺酸形成的鹽。
7)權(quán)利要求6的化合物，其為2-[2-(3-丁氧基苯基)-乙氨基]-N，N-二甲基乙酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽，優(yōu)選鹽酸鹽或甲磺酸鹽。
8)權(quán)利要求1的化合物，其中
X為-SO2-；或
Y為OH或O(C1-C4)烷基；或
Z為＝S；或
R為(C9-C10)烷基或ω-三氟(C3-C10)烷基；或
R1和/或R2 不為氫；或
R3和R′3 都不為氫；或
R4和R5 都不為氫，但在與相鄰碳原子結(jié)合時也不構(gòu)成(C3-C6)環(huán)烷基殘基；或
R6和R7 與相鄰的氮原子共同構(gòu)成單環(huán)5-6元飽和雜環(huán)，任選包含一個額外的選自-O-，-S-和-NR8-的雜原子，所述R8為氫或(C1-C6)烷基，
如果可能，為分離形式的單一旋光異構(gòu)體或其任意比例的混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
9)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物，其用作藥物。
10)權(quán)利要求1的化合物，作為具有治療其中上述機制起病理作用的病理情況的鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的活性的藥物的用途，所述的病理作用為神經(jīng)性，認(rèn)知，精神病，炎性，泌尿生殖或胃腸疾病，所述的藥物基本上沒有任何MAO抑制活性或具有明顯降低的MAO抑制活性。
11)權(quán)利要求2，3和4中任意項的化合物在權(quán)利要求10中的應(yīng)用。
12)權(quán)利要求5的化合物在權(quán)利要求10中的應(yīng)用。
13)權(quán)利要求6的化合物在權(quán)利要求10中的應(yīng)用。
14)權(quán)利要求7的化合物在權(quán)利要求10中的應(yīng)用。
15)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物在權(quán)利要求10中的應(yīng)用，其中所述的病癥為選自疼痛和偏頭痛的神經(jīng)障礙。
16)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物在權(quán)利要求15中的應(yīng)用，其中所述的疼痛為神經(jīng)性疼痛綜合征或炎性痛綜合征。
17)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物在權(quán)利要求15中的應(yīng)用，其中疼痛為為急性或慢性疼痛。
18)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物在權(quán)利要求10中的應(yīng)用，其中所述的病癥為選自阿爾茨海默病，帕金森病，癲癇癥，多動腿綜合征，中風(fēng)或腦缺血的神經(jīng)障礙。
19)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物在權(quán)利要求10中的應(yīng)用，其中所述的病癥為侵害所有身體系統(tǒng)的炎癥過程，所述所有身體系統(tǒng)諸如骨骼肌系統(tǒng)，關(guān)節(jié)炎癥，侵害皮膚和相關(guān)組織的病癥，呼吸系統(tǒng)病癥或免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)病癥。
20)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物在權(quán)利要求10中的應(yīng)用，其中所述的病癥為選自輕度認(rèn)知缺損，抑郁癥，雙相性精神障礙，躁狂，精神分裂癥，精神病，焦慮和成癮的認(rèn)知病和/或精神病。
21)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物在權(quán)利要求10中的應(yīng)用，其中所述的病癥為泌尿生殖器病癥。
22)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物在權(quán)利要求10中的應(yīng)用，其中所述的病癥為胃腸道病癥。
23)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物在權(quán)利要求10和15-22任意項中的應(yīng)用，其中所述化合物與一種或多種其它治療劑結(jié)合使用。
24)權(quán)利要求1-8中任意項的化合物在制備治療病理情況的作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑具有活性的藥物中的應(yīng)用，其中上述機理扮演病理角色，所述的病理情況為神經(jīng)病學(xué)，認(rèn)知，精神病學(xué)，炎性，泌尿生殖或胃腸疾病，所述的藥物基本上沒有任何MAO抑制活性或具有顯著降低的MAO抑制活性。
25)權(quán)利要求24的應(yīng)用，其中所述的病癥如權(quán)利要求15-22中任意項中所述。
26)藥物組合物，包含權(quán)利要求1-8中任意項的化合物作為活性組分與藥學(xué)上可接受的治療惰性有機或無機載體物質(zhì)。
27)治療因電壓-門控的鈉和/或鈣通道功能障礙導(dǎo)致的病癥所侵害的患者的方法，該方法包括對所述患者給予有效量的權(quán)利要求1-8中任意項的化合物。
28)權(quán)利要求27的方法，其中所述的病癥為神經(jīng)病學(xué)，認(rèn)知，精神病學(xué)，炎性，泌尿生殖或胃腸疾病。
29)權(quán)利要求27和28中任意項的方法，其中所述的病癥為選自疼痛和偏頭痛的病癥。
30)權(quán)利要求27和28中任意項的方法，其中所述的病癥為選自阿爾茨海默病，帕金森病，癲癇，多動腿綜合征，中風(fēng)和腦缺血的神經(jīng)障礙。
31)權(quán)利要求27和28中任意項的方法，其中所述的病癥為選自輕度認(rèn)知缺損，抑郁癥，雙相性精神障礙，躁狂，精神分裂癥，精神病，焦慮和成癮的認(rèn)知病和/或精神病。
32)權(quán)利要求27-31中任意項的方法，其中對有此需要的患者給予的化合物的有效量不會表現(xiàn)出任何MAO-抑制活性或表現(xiàn)出顯著降低的MAO-抑制活性。
33)權(quán)利要求27-32中任意項的方法，其中所述的患者對因MAO抑制活性導(dǎo)致的不期望的副作用特別敏感。
34)如權(quán)利要求27-33中任意項中所述的方法，其中對有此需要的患者給予有效量的權(quán)利要求1-8中任意項的化合物聯(lián)合一種或多種其它的治療劑。
全文摘要
式(I)的取代的2-[2-(苯基)乙氨基]烷酰胺衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽如右式其中X，Y，Z，R，R1，R2，R3，R′3，R4，R5，R6，R7具有本說明書中定義的含義，包含它們作為活性組分的藥物組合物及其作為用于預(yù)防，緩解和治愈廣泛病理情況的鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用，所述的病理情況包括，但不限于神經(jīng)病學(xué)，認(rèn)知，精神病學(xué)，炎性，泌尿生殖和胃腸疾病，其中上述機理已被描述為扮演病理角色。
文檔編號C07D295/182GK101687773SQ200880020386
公開日2010年3月31日 申請日期2008年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月15日
發(fā)明者P·梅洛尼, A·雷斯蒂沃, E·伊佐, S·弗朗西斯科尼, E·科隆布, C·薩比多-大衛(wèi) 申請人:紐朗制藥有限公司