專利名稱：Pai-1產(chǎn)生抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制PAI-I產(chǎn)生的物質(zhì)的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
已知纖溶酶原激活物抑制劑-1 (PAI-I)的過表達通過激活纖溶酶原激活物(例 如，組織型纖溶酶原激活物和尿激酶型纖溶酶原激活物)而抑制纖溶酶產(chǎn)生，纖溶酶能分 解纖維蛋白血栓和組織蛋白并造成血栓形成(Nature，346卷，6279，第74-76頁，1990)。此外，在動脈硬化損傷中觀察到PAI-I過表達，并已知這種過表達會增加心肌梗 塞，深部靜脈血栓形成(DVT)，敗血癥后的彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)等血栓形成疾病的風險 (Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α.，89 卷，15，第 6998-7002 頁，1992)。由此，抑制PAI-I的活性或產(chǎn)生的化合物可用于抑制血栓形成，并可作為有用的 藥物以治療由于形成血栓而造成的疾病如血栓形成疾病、涉及血栓形成的疾病等等。此外，已知PAI-I促進胞外基質(zhì)沉淀和累積，并與以纖維化為特征的組織損傷和 血管壁硬化損傷的發(fā)展密切相關(guān)。由于通過PAI-I敲除可減輕哮喘模型小鼠氣道內(nèi)的胞外 基質(zhì)累積(Biochem. Biophys. Res. Commun.，294 卷，5，第 1155-1160 頁，2002)，提示 PAI-1 直接參與纖維化。因此，制PAI-I的活性或產(chǎn)生的化合物可用于抑制組織纖維化，并且可作 為治療組織纖維化所造成疾病的有效藥物。此外，PAI-I也由肥大細胞分泌(J. Immunol.，165 卷，6，第 3154-3161 頁，2000)，并 報道稱，其在肥胖癥模型小鼠體內(nèi)具有較高血液水平，且不僅在內(nèi)皮組織和肝組織內(nèi)合成， 并且在脂肪組織內(nèi)合成。尤其在內(nèi)臟脂肪內(nèi)，PAI-I的合成量與其沉積一起指數(shù)增長(Mol. Med.，2卷，5，第568-582頁，1996)。此外，在敲除PAI-I基因的肥胖癥模型小鼠內(nèi)，報道了 體重減輕和血糖水平及血液胰島素水平下降(FASEB J.，15卷，10，第1840-1842頁，2001)， 顯示PAI-I有可能加劇由脂肪沉積造成的各種病理狀況。因此，抑制PAI-I的活性或產(chǎn)生 的化合物可用于抑制內(nèi)臟脂肪沉積，并可作為藥物以治療由內(nèi)臟脂肪沉積而造成的疾病。此外，從PAI-I通過結(jié)合細胞粘附因子玻璃體結(jié)合蛋白而抑制細胞和胞外基質(zhì) 粘附的事實可知，PAI-I抗體在癌癥模型中抑制癌轉(zhuǎn)移(Gen. Diagn. Pathol.，141卷，1，第 41-48頁，1995)，當將惡性角質(zhì)形成細胞植入PAI-I敲除小鼠時癌癥浸潤和血管生成被抑 制(Nat. Med.，4卷，8，第923-928頁，1998)，抑制PAI-I的活性或產(chǎn)生的化合物可用于抑制 細胞遷移、細胞轉(zhuǎn)移、血管生成等等，并且能治療由細胞遷移、細胞轉(zhuǎn)移、血管生成等造成的 疾病。此外，動脈損傷作為心臟或腎臟移植后的一種急性抑制和慢性抑制被認為是產(chǎn)生 組織纖維化、形成血栓、以及增殖和動脈內(nèi)皮細胞重建而造成的。因此，在心臟移植試驗小 鼠中，當給予對PAI-I具有抑制活性的化合物時，與對照組相比移植存活時間顯著延長，同 時嚴重性內(nèi)膜肥大的幾率降至1/3(歐洲專利申請公布號1666469說明書)，抑制PAI-I的 活性或產(chǎn)生的化合物可用作藥物以抑制移植后、心臟或腎臟移植后、或者其他器官移植后 的急性排斥和動脈損傷。
另一方面，可通過抑制PAI-I而激活的纖溶酶不僅涉及血栓分解，而且涉及組織 重建、細胞遷移、轉(zhuǎn)移和浸潤、排卵和移植、細胞抑制因子轉(zhuǎn)化生長因子的活化、以及膠原酶 的活化，因此抑制PAI-I的活性或產(chǎn)生的化合物可用于抑制組織重建、細胞增殖、遷移、浸 潤和轉(zhuǎn)移、血管生成等等，以及治療由細胞增殖、血管生成、組織籌建等造成的疾病。
過去，曾報道了許多具有PAI-I抑制活性的化合物(歐洲專利申請公布號1666469 說明書；國際公布號95/32190小冊子；國際公布號95/21832小冊子；英國專利申請公 布號2372740說明書；國際公布號03/000253小冊子；國際公布號03/000258小冊子； 國際公布號03/000649小冊子國際公布號03/000671小冊子；國際公布號03/000684小 冊子；國際公布號2004/052856小冊子；國際公布號2004/052893小冊子；國際公布號 2005/030192小冊子；國際公布號2005/030204小冊子；國際公布號2005/030715小冊子； 國際公布號2005/030716小冊子；國際公布號2005/030756小冊子；美國專利申請公布號 2005/0124664說明書；美國專利申請公布號2005/0124667說明書；美國專利申請公布號 2005/0143384 說明書；生物化學(Biochemistry)，37 卷，5，第 1227-1234 頁，1998 J. Med Chem.，47卷，14，第3491-3494頁，2004)。此外，PMA (12-肉豆蔻酸佛波酯-13-乙酸鹽)誘 導的PAI-I基因表達的抑制物質(zhì)的例子包括環(huán)孢霉素和放線菌酮(J. Immunol.，165卷，第 3154-3161 頁，2000)。然而，還報道稱，PMA(12_肉豆蔻酸佛波酯-13-乙酸鹽)誘導的PAI-I (纖溶酶 原激活物抑制劑-1)基因表達不受類固醇藥物地塞米松抑制(J. Immunol.，165卷，6，第 3154-3161頁，2000)。此外，還報道稱，地塞米松能增加TGF-β和TNF-α誘導的PAI-I產(chǎn) 生(Comp. Hepatol.，2007/5/2 ；6 :5 和病理學(Pathobiology)，71 卷，第 295-301 頁，2004)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的問題本發(fā)明的一個目的是提供新的抑制PAI-I產(chǎn)生并用來抑制血液凝固或血栓形成 的物質(zhì)及其應(yīng)用。解決該問題的方案本發(fā)明的發(fā)明人進行了各項研究來解決上述問題，發(fā)現(xiàn)以下通式(I)表示的化合 物對PAI-I產(chǎn)生具有抑制活性，并獲得了本發(fā)明。 在式⑴中，R1代表氫原子、烷基羰基、或4_(嗎啉基)羰基；環(huán)D代表苯環(huán)、或具有一個或多個選自下組的基團的苯環(huán)商原子、硝基、氰基、烷 基、烷氧基亞氨基烷基、芐氧基亞氨基烷基、苯基烯基、苯基炔基、三甲基甲硅烷基炔基、苯 基、苯基烷基、鹵代烷基、吡咯基、烷基吡咯基、噻吩基、烷基噻吩基、烷基噻唑基、吡啶基、烷 基吡啶基、烷基羰基、烷氧基羰基、吡咯基磺酰基、(4-硝基苯基)二氮烯基和羥基；和苯基E是被一個或多個選自下組的基團取代的苯基鹵原子、鹵代烷基、苯基、烷基、商代烷氧基、苯基烷基、烷氧基、環(huán)己基、苯基烷氧基、氰基、商代烷基硫烷基、商代烷 基磺?；?、乙炔基、苯甲?；?、烷基硫烷基、烷基磺?；徇?、烷基呋喃基、烷基羰基、 1-(5-苯基)-3-(鹵代烷基)吡唑基、1-(5-烷基)-3-(鹵代烷基)吡唑基、和1-[3，5_雙 (鹵代烷基)]吡唑基。因此，本發(fā)明包括(a) 一種PAI-I產(chǎn)生抑制劑，其包括選自下組的物質(zhì)作為活性成分通式(I)表示 的化合物、其鹽、其水合物及其溶劑合物；(b)如(a)所述的PAI-I產(chǎn)生抑制劑，其中，R1是氫原子、C1^6烷基羰基、或4_(嗎啉基)羰基，D是苯環(huán)、或具有一個或多個選自下組的基團的苯環(huán)鹵原子、硝基、氰基、C1, 烷基、CV6烷氧基亞氨基Ch6烷基、芐氧基亞氨基Ch6烷基、苯基c2_6烯基、苯基c2_6炔基、三 甲基甲硅烷基c2_6炔基、苯基、苯基Ch6烷基、鹵代Ch6烷基、吡咯基、CV6烷基吡咯基、噻吩 基、C1^6烷基噻吩基、C1^6烷基噻唑基、吡啶基、C1^6烷基吡啶基、C1^6烷基羰基、C1^6烷氧基羰 基、吡咯基磺?；?、(4-硝基苯基)二氮烯基、和羥基，E是被一個或多個選自下組的基團取 代的苯基鹵原子、鹵代CV6烷基、苯基、C1^6烷基、鹵代CV6烷氧基、苯基CV6烷基、Ch6烷氧 基、環(huán)己基、苯基Ch6烷氧基、氰基、商代CV6烷基硫烷基、商代Ch6烷基磺?；⒁胰不?、苯甲 酰基、C1^6烷基硫烷基、C1^6烷基磺?；?、嗎啉代基、C1^6烷基呋喃基、C1^6烷基羰基、1-(5-苯 基)-3-(鹵代Cp6烷基)吡唑基、1-(5-Ch烷基)-3-(鹵代CV6烷基)吡唑基、和1- [3，5-雙 (鹵代(V6烷基)]吡唑基；(c)如(a)所述的PAI-I產(chǎn)生抑制劑，其中，通式⑴所示化合物是用以下式 (1)-(3)中的任意一個表示的化合物(下文分別稱為“化合物(1)”、“化合物(2)”和“化合 物⑶，，)； (d) 一種預防或改善由PAI-I過度產(chǎn)生而造成的疾病的藥物，其包含如(a)-(c)中 任一項所述的物質(zhì)作為活性成分；(e) 一種抑制PAI-I產(chǎn)生的方法，包括使如(a)-(c)中任一項所述的物質(zhì)作用于產(chǎn) 生PAI-I的細胞的步驟；(f) 一種預防或改善由PAI-I過度產(chǎn)生而造成的疾病的方法，包括給予包括人在 內(nèi)的哺乳動物有效劑量的如(a)-(c)中任一項所述的物質(zhì)。(g)如(a)-(c)中任一項所述的物質(zhì)在制造PAI-I產(chǎn)生抑制劑中的應(yīng)用；和(h)如(a)-(c)中任一項所述的物質(zhì)在制造用于預防或改善由于PAI-I過度產(chǎn)生 而造成的疾病的藥物中的應(yīng)用。附圖簡述[

圖1]在本發(fā)明的一個實施例中，該圖表示了化合物⑴對PAI-I產(chǎn)生的抑制作用。[圖2]在本發(fā)明的一個實施例中，該圖表示了化合物(1)對膠原累積的抑制作用。[圖3]在本發(fā)明的一個實施例中，該圖表明，當將化合物(1)給予暴露于香煙煙霧 的豚鼠導致表達PAI-I細胞與浸潤細胞總數(shù)的比值發(fā)生變化。本發(fā)明的最佳實施方式下面詳細解釋了基于上述發(fā)現(xiàn)完成的本發(fā)明實施方式，并給出了實施例。在沒有 具體說明時，按照所述說明書使用試劑盒和測量裝置。通過對本發(fā)明說明書的描述，本發(fā)明的目的、特征、優(yōu)點和觀念對于本領(lǐng)域技術(shù)人 員是顯而易見的，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明說明書的描述容易重現(xiàn)本發(fā)明。下述實施方 式和具體實施例顯示了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式。列出它們是為了舉例或例舉，本發(fā)明不限 于此。在本說明書所披露的本發(fā)明的目的和范圍內(nèi)，根據(jù)本說明書的描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員 能夠方便地進行各種改變和修飾。用于本發(fā)明的物質(zhì)的例子包括通式(I)所示化合物或其鹽，上述化合物或其鹽的 水合物，或者上述化合物或其鹽的溶劑合物。此外，通式(I)所示化合物的例子包括以下通 式(II)表示的化合物。 在本發(fā)明中，通式⑴或(II)中的R1代表氫原子、烷基羰基、或4_(嗎啉基)羰 基。優(yōu)選的是，通式(I)或(II)中的R1是氫原子、乙?；⒒?-(嗎啉基)羰基。此外，通 式(I)中的環(huán)D代表苯環(huán)，或具有一個或多個選自下組的基團的苯環(huán)鹵原子、硝基、氰基、 烷基、烷氧基亞氨基烷基、芐氧基亞氨基烷基、苯基烯基、苯基炔基、三甲基甲硅烷基炔基、 苯基、苯基烷基、鹵代烷基、吡咯基、烷基吡咯基、噻吩基、烷基噻吩基、烷基噻唑基、吡啶基、 烷基吡啶基、烷基羰基、烷氧基羰基、吡咯基磺?；?4-硝基苯基)二氮烯基或羥基。優(yōu)選 的是，通式(1)中的環(huán)D是苯環(huán)，或具有一個或多個選自下組的基團的苯環(huán)鹵原子、硝基、 氰基、甲基、丁基(例如叔丁基)、辛基(例如1，1，3，3_四甲基丁基)、丙基(例如異丙基)、 甲氧基亞氨基乙基(例如1_(甲氧基亞氨基)乙基)、芐氧基亞氨基乙基(例如1_[(芐氧 基)亞氨基]乙基)、苯乙烯基、苯基乙炔基、(三甲基甲硅烷基)乙炔基、苯基、苯基乙基 (例如2-苯基乙基)、三氟甲基、五氟乙基、吡咯基(例如1-吡咯基)、噻吩基(例如2-噻 吩基或3-噻吩基)、甲基噻唑基(例如2-甲基噻唑-4-基)、吡啶基(例如2-吡啶基)、 乙酰基、異丁酰基、甲氧基羰基、吡咯基磺?；?例如(吡咯-1-基)磺?；?、(4-硝基苯 基)二氮烯基、或羥基。通式⑴中的苯基E具有以下基團中的至少一個或多個鹵原子、鹵代烷基、苯基、 烷基、商代烷氧基、苯基烷基、烷氧基、環(huán)己基、苯基烷氧基、氰基、商代烷基硫烷基、商代烷基磺?；?、乙炔基、苯甲?；?、烷基硫烷基、烷基磺酰基、嗎啉代基、烷基呋喃基、烷基羰基、 1-(5-苯基)-3-(鹵代烷基)吡唑基、1-(5-烷基)-3-(鹵代烷基)吡唑基、或1-[3，5_雙 (鹵代烷基)]吡唑基。優(yōu)選的是，通式(I)中的苯基E具有以下基團中的至少一個或多 個鹵原子、三氟甲基、2-氯-1，1，1，3，3，3-六氟丙基、苯基、甲基、丁基(例如正丁基、叔 丁基或仲丁基)、己基(例如正己基)、丙基(例如異丙基)、2，2，2_三氟乙氧基、三氟甲氧 基、二氟甲氧基、芐基、甲氧基、己氧基、環(huán)己基、芐氧基、氰基、三氟甲基硫烷基、三氟甲基磺 ?；?、乙炔基、苯甲?；?、甲基硫烷基、甲基磺?；徇?、甲基呋喃基(例如5-甲基呋 喃-2-基)、丁基羰基(例如叔丁基羰基)、1_(5-苯基)3-(三氟甲基)吡唑基、1-(5_叔丁 基)-3_(三氟甲基)吡唑基、或1-[3，5_雙(三氟甲基)]吡唑基。
通式(II)中的R2、R3、R4和R5獨立表示氧原子、鹵原子、硝基、氰基、烷基、烷氧基 亞氨基烷基、芐氧基亞氨基烷基、苯基烯基、苯基炔基、三甲基甲硅烷基炔基、苯基、苯基烷 基、鹵代烷基、吡咯基、烷基吡咯基、噻吩基、烷基噻吩基、烷基噻唑基、吡啶基、烷基吡啶基、 烷基羰基、烷氧基羰基、吡咯基磺?；?、(4-硝基苯基)二氮烯基、或羥基。優(yōu)選的是，通式 (II)中的R2、R3、R4和R5獨立表示氫原子、鹵原子、硝基、氰基、甲基、丁基(例如叔丁基)、 辛基(例如1，1，3，3-四甲基丁基)、丙基(例如異丙基)、甲氧基亞氨基乙基(例如1-(甲 氧基亞氨基)乙基)、芐氧基亞氨基乙基(例如1-[(芐氧基)亞氨基]乙基)、苯乙烯基、 苯基乙炔基、(三甲基甲硅烷基)乙炔基、苯基、苯基乙基(例如2-苯基乙基)、三氟甲基、 五氟乙基、吡咯基(例如1-吡咯基)、噻吩基(例如2-噻吩基或3-噻吩基)、甲基噻唑基 (例如2-甲基噻唑-4-基)、吡啶基(例如2-吡啶基)、乙酰基、異丁?；⒓籽趸驶?、批 咯基磺?；?例如(吡咯-1-基)磺?；?、(4-硝基苯基)二氮烯基、或羥基。通式(II)中的R6、R7、R8、R9和Rltl獨立表示氧原子、鹵原子、鹵代烷基、苯基、烷基、 鹵代烷氧基、苯基烷基、烷氧基、環(huán)己基、苯基烷氧基、氰基、商代烷基硫烷基、商代烷基磺酰 基、乙炔基、苯甲?；?、烷基硫烷基、烷基磺?；?、嗎啉代基、烷基呋喃基、烷基羰基、1-(5_苯 基)-3_(鹵代烷基)吡唑基、1-(5-烷基)-3-(鹵代烷基)吡唑基、或1-[3，5_雙(鹵代烷 基)]吡唑基。優(yōu)選的是，通式(II)中的R6、R7、R8、R9和Rltl獨立表示氫原子、鹵原子、三氟 甲基、2-氯-1，1，1，3，3，3-六氟丙基、苯基、甲基、丁基(例如正丁基、叔丁基或仲丁基)、己 基(例如正己基)、丙基(例如異丙基)、2，2，2_三氟乙氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、芐 基、甲氧基、己氧基、環(huán)己基、芐氧基、氰基、三氟甲基硫烷基、三氟甲基磺?；⒁胰不?、苯甲 ?；?、甲基硫烷基、甲基磺?；徇?、甲基呋喃基(例如5-甲基呋喃-2-基)、丁基羰 基(例如叔丁基羰基)、1- (5-苯基)3-(三氟甲基)吡唑基、1-(5-叔丁基)-3-(三氟甲基) 吡唑基、或1-[3，5_雙(三氟甲基)]吡唑基。然而，條件是，通式(II)中的R6、R7、R8、R9和 R10不全是氫原子。在本說明書中，鹵原子的例子包括，例如，氟原子、氯原子、溴原子、和碘原子。烷基的例子包括，例如，以下CV15直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選C1,烷基，尤其優(yōu)選CV6烷 基。 烷氧基(烷基氧基)的例子包括，例如，Ch5直鏈或支鏈烷基氧基，優(yōu)選C1,烷基， 尤其優(yōu)選Cp6烷基氧基。烯基的例子包括，例如，以下C2_15直鏈或支鏈烯基，優(yōu)選C2_7烯基。 炔基的例子包括，例如，以下C2_15直鏈或支鏈炔基，優(yōu)選C2_7炔基。 烷基羰基包括，例如，C1^6烷基羰基。此外，CV6烷基羰基包括，例如，乙?；?，異丁 ?；?，或丁基羰基。烷基硫烷基包括，例如，Cp6烷基硫烷基。此外，Cp6烷基硫烷基包括，例如，甲基硫焼基。烷基磺?；?，例如，Cp6烷基磺?；４送?，Cp6烷基磺?；?，例如，甲基磺 ?；?。烷基呋喃基包括，例如，Cp6烷基呋喃基。此外，Cp6烷基呋喃基包括，例如，2- (5-甲 基)呋喃基。烷基吡咯基包括，例如，1_、2_、或3-烷基吡咯基。烷基噻吩基包括，例如，2-或 3-烷基噻吩基。烷基噻唑基包括，例如，2_、4_、或5-烷基噻唑基。2-烷基噻唑基包括，例如，2-Ch 烷基噻唑基。此外，2-Ch烷基噻唑基包括，例如，2-甲基噻唑-4-基。4-烷基噻唑基包括， 例如，4-(V6烷基噻唑基。此外，4-Ch烷基噻唑基包括，例如，4-甲基噻唑-4-基。5-烷基噻 唑基包括，例如，5-(V6烷基噻唑基。此外，5-Ch烷基噻唑基包括，例如，5-甲基噻唑-4-基。烷基吡啶基包括，例如，2_、3_、或4-烷基吡啶基。鹵代烷基表示烷基中的一個或多個氫原子被鹵原子取代的烷基。鹵代烷基的例子 包括，例如，鹵代(V6烷基。此外，鹵代Cp6烷基包括，例如，三氟甲基，ι-氯乙基，五氟乙基， 和2-氯-1，1，1，3，3，3_六氟丙基。鹵代烷氧基表示烷氧基中的一個或多個氫原子被鹵原子取代的烷氧基。鹵代烷氧 基的例子包括，例如，鹵代Cp6烷氧基。此外，鹵代CV6烷氧基包括，例如，三氟甲氧基，二氟 甲氧基，和2，2，2-三氟乙氧基。鹵代烷基硫烷基表示烷基硫烷基中的一個或多個氫原子被鹵原子取代的烷基硫烷基。鹵代烷基硫烷基的例子包括，例如，鹵代(V6烷基硫烷基。此外，鹵代Cp6烷基硫烷基 包括，例如，三氟甲基硫烷基。鹵代烷基磺?；硎就榛酋；械囊粋€或多個氫原子被鹵原子取代的烷基磺 酰基。鹵代烷基磺酰基的例子包括，例如，鹵代Ch6烷基磺?；?。此外，鹵代Ch6烷基磺?；?包括，例如，三氟甲基磺?；?。苯基烷基包括，例如，苯基Cp6烷基。此外，苯基Cp6烷基包括，例如，芐基或苯基乙基。苯基烷氧基包括，例如，苯基CV6烷氧基。此外，苯基CV6烷氧基包括，例如，芐氧基。苯基烯基包括，例如，苯基C2_7烯基。此外，苯基C2_7烯基包括，例如，2-苯基乙 烯-1-基(苯乙烯基)。苯基炔基包括，例如，苯基C2_7炔基。此外，苯基C2_7炔基包括，例如苯基乙炔基。烷氧基羰基包括，例如，Cp6烷氧基羰基。此外，Cp6烷氧基羰基包括，例如，甲氧基 羰基。烷氧基亞氨基烷基包括，例如，CV6烷氧基亞氨基CV6烷基。此外，Cp6烷氧基亞氨 基Cp6烷基包括，例如，1-甲氧基亞氨基乙基。芐氧基亞氨基烷基包括，例如，芐氧基亞氨基Cp6烷基。此外，芐氧基亞氨基Cp6烷 基包括，例如，1-(芐氧基亞氨基)乙基。三甲基甲硅烷基炔基包括，例如，三甲基甲硅烷基C2_7炔基。此外，三甲基甲硅烷 基c2_7炔基包括，例如，三甲基甲硅烷基乙炔基。1-(5-苯基)-3_(鹵代烷基)吡唑基包括，例如，1-(5-苯基)-3-(鹵代C^6烷基) 吡唑基。此外，1-(5-苯基)-3-(鹵代Cp6烷基)吡唑基包括，例如，1-(5_苯基)-3-(三氟 甲基)吡唑基。1-(5-烷基)-3_(鹵代烷基)吡唑基包括，例如，I-G-Ch烷基)-3_(鹵代C^6烷 基)吡唑基。此外，1-(5-(^_6烷基)-3-(鹵代CV6烷基)吡唑基的例子包括，例如，1-(5_叔 丁基)-3-(三氟甲基)吡唑基。1-[3，5_雙(鹵代烷基)]吡唑基包括，例如，1-[3，5_雙(鹵代C^6烷基)]吡唑 基。此外，1-[3，5_雙(鹵代C^6烷基)]吡唑基的例子包括，例如，1-[3，5_雙(三氟甲基)] 吡唑基。選自下組的物質(zhì)可用作PAI-I產(chǎn)生抑制劑以及作為藥物以預防或改善由于PAI-I 過度產(chǎn)生而造成的疾病用上述通式(I)表示的化合物、其鹽、其水合物以及其溶劑合物。由于PAI-I過度產(chǎn)生而造成的疾病的例子包括，例如，血栓形成，纖維化，內(nèi)臟脂 肪沉積，血管生成，胞外基質(zhì)沉積和重建，由細胞(例如，腫瘤細胞、血管內(nèi)皮細胞等)增殖、 遷移、浸潤和轉(zhuǎn)移造成的疾病，組織重建(例如，心臟重塑，血管重構(gòu)等)等等，具體包括膽 道梗阻，腦血栓，腦硬化，腦梗塞，短暫性腦缺血發(fā)作，中風，腦血管性癡呆，缺血性腦血管疾 病，心絞痛，心房顫動造成的心房血栓形成，心力衰竭，缺血性心臟病，肺血栓形成，肺栓塞， 血栓性肺病，深靜脈血栓形成(DVT)，血栓性靜脈炎，靜脈閉塞癥，急性動脈栓塞，慢性動脈 閉塞，閉塞性外周動脈疾病，旁路血管移植后的血栓形成，播散性血管內(nèi)凝血綜合征(DIC)， 經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動脈成形術(shù)(PTCA)后的急性冠狀動脈阻塞，先天性血栓造成的血管病和血栓如基因異常，腎血栓形成，腎閉塞，血栓栓塞性腎病，血栓性疾病，血栓形成，血液凝固，缺 血性疾病，心臟病，深層靜脈血栓形成，靜脈血栓，腎硬化，代謝綜合征，醛固酮組織病，器官 衰竭，間質(zhì)性膀胱炎，前列腺增生，肌肉萎縮，記憶障礙，年齡相關(guān)性黃斑變性，囊性纖維化， 肝纖維化，淋巴水腫，排尿困難，或者腦、心臟等的血管事件。此外，上述藥物被用于預防或改善與PAI-I過度產(chǎn)生有關(guān)的疾病，例如，播散性血 管內(nèi)凝血綜合征(DIC)，免疫疾病如抗磷脂抗體綜合征，動脈硬化，代謝癥候群，經(jīng)濟艙綜 合癥，內(nèi)毒素休克，過敏性疾病，血管炎，非細菌性血栓性心內(nèi)膜炎，敗血癥等嚴重感染性疾 病，纖維蛋白依賴關(guān)節(jié)炎疼痛，視網(wǎng)膜病，腎病，神經(jīng)癥，周圍循環(huán)障礙，糖尿病并發(fā)癥，高血 壓，糖尿病，高胰島素血癥，高膽固醇血癥，胰島素抵抗，高脂血癥，肥胖，腫瘤，腫瘤浸潤，腫 瘤轉(zhuǎn)移，哮喘，心臟或腎臟移植后排斥，血栓形成如組織移植后動脈損傷，或囊性腎病。此 夕卜，由于本發(fā)明的藥物能預防或改善血栓形成，因此對傷口愈合和褥瘡愈合有效。用于本發(fā)明的通式(I)所示化合物可通過以下文獻中描述的方法制備例如，國 際公布號99/65449小冊子，國際公布號02/049632小冊子，國際公布號03/103654小冊子， 和國際公布號03/103658。此外，通式(I)所示化合物的鹽，以及所述鹽或通式(I)所示化 合物的水合物或溶劑合物可通過本領(lǐng)域常規(guī)方法制備。通式(I)所示化合物的鹽優(yōu)選為上 述化合物的藥學上可接受的鹽。上述鹽的例子包括，例如，堿金屬鹽、堿土金屬鹽、其他金屬 鹽、無機鹽，和有機鹽。所述PAI-I產(chǎn)生抑制劑或本發(fā)明藥物可以僅由通式(I)所示化合物或其藥學上可 接受的鹽、或其水合物或溶劑合物構(gòu)成，也可以是還包含一種或兩種以上藥學上可接受的 藥物添加物的組合物。上述藥物添加物的例子包括現(xiàn)有添加物，例如，賦形劑、粘合劑、潤滑 齊U、崩解劑、矯正藥、溶劑、穩(wěn)定劑、基質(zhì)、潤濕劑、和防腐劑。本發(fā)明藥物可采取任何劑型，例 如，片劑、膠囊、顆粒、粉末、溶液、可溶顆粒、粉狀藥物、糖漿、注射劑、搽劑、推進劑、貼片和 栓劑。此外，本發(fā)明藥物可以任何方式給予，例子包括口服給藥、腸胃外給藥如靜脈給藥。
實施例下面通過例子更具體闡述了本發(fā)明；然而，本發(fā)明的范圍不限于以下實施例。實施 例5的檢測物使用了各種用通式(II)表示的化合物，其中，化合物的R1-Rltl是下表列出的 取代基。該表中，Me代表甲基，t-Bu代表叔丁 基，n-Hex代表正| 丁基| [Ghl]，i_Pr代表異 丙基，sec-Bu代表仲丁基。[表1-1] [表1-2] [表 1-3] [表1-5] 實施例1 化合物(1)對PAI-I產(chǎn)生的抑制作用給10名鑒別為過度產(chǎn)生PAI-I的II型糖尿病并伴有肥胖癥的患者每天兩次口服 200mg化合物(1)(在早餐和午餐后服用)，持續(xù)20周。在2、4、8和12周后，在給予化合物 (1)之前采集每名患者的血液，并用Human PAI-I ELISAKit(AssayPro)測量血漿PAI-I濃度。結(jié)果示于圖1。如圖1所示，由于血液PAI-I濃度隨給予化合物(1)而降低，因此發(fā)現(xiàn)化合物(1) 對于異常升高的PAI-I產(chǎn)生有抑制作用。因此，化合物(1)具有抗血液凝固活性和抗血栓 形成活性，說明該化合物能改善血栓形成傾向。實施例2 化合物(1)對膠原沉積的抑制作用 采用煙霧暴露系統(tǒng)(INH06-CIG01A，MIPS公司)，使6周齡豚鼠(Std 雄性 Hartley,日本SLC公司)暴露于40支香煙(Peace (注冊商標)，日本煙草公司)煙霧一天 (20支煙，兩次)，連續(xù)25天(慢性阻塞性肺病(COPD)模型組對照組n = 10)。從暴露于 煙草煙霧那天起給這些豚鼠連續(xù)口服施用化合物(1) (30mg/kg/天或100mg/kg/天)或潑 尼松龍(10mg/kg/天)，每天一次，共25天(化合物(l)30mg給藥組n = 5，化合物(I)IOOmg 給藥組n = 5，潑尼松龍給藥組m = 5)。此外，正常組豚鼠(η = 5)暴露于空氣且未施用 化合物(1)和潑尼松龍。在最后一次暴露之后的那天，準備每只豚鼠的肺部石蠟切片，膠原 通過馬森三色法(Masson-trichrome method)染色，并用圖像分析通過面積比率測量膠原 在腔區(qū)的累積。結(jié)果示于圖2。如圖2所示，類固醇潑尼松龍不能抑制膠原累積。另一方面，化合物(1)能夠抑制 膠原累積。因此，發(fā)現(xiàn)化合物(1)對膠原累積具有抑制活性，并有效抑制纖維化。由于這些 結(jié)果與抗炎類固醇藥物無法抑制PAI-I產(chǎn)生的事實良好吻合，因此可以假設(shè)這種作用是由 于抑制PAI-I產(chǎn)生造成的。之后，通過免疫染色法用抗PAI-I抗體(PAI-1H-135 ；Santa Cruz ；250倍稀釋) 染色上述石蠟切片，并測量表達PAI-I的細胞與肺內(nèi)浸潤細胞總數(shù)的比例。用IHC Select HRP/DAB(CHEMIC0N)進行免疫染色。結(jié)果示于圖3。如圖3所示，證實給予化合物(1)能降低表達PAI-I的細胞與浸潤細胞總數(shù)的比 例。此外，由于正常組和化合物(I)IOOmg給藥組的浸潤細胞總數(shù)處于相同水平，證明給予 化合物(1)能夠使表達PAI-I的細胞與浸潤細胞總數(shù)的比例相比正常組的水平得到改善。 從上述結(jié)果可知，化合物(1)對膠原累積的抑制作用與抑制PAI-I產(chǎn)生有關(guān)。實施例3 化合物(1)對纖維化的抑制作用用戊巴比妥鈉麻醉8周齡大鼠(SPF 雄性SD，日本SLC公司)，取出它們的心臟， 用帶有線的縫針結(jié)扎左前下行冠狀動脈(LAD)。30分鐘后除去結(jié)扎線，并使血液再灌注24 小時。之后口服給予化合物(1) (10mg/kg/天，30mg/kg/天，100mg/kg/天)，每天一次，連 續(xù)28天。此外，準備對照大鼠，即在再灌注后不給予化合物(1)(心肌梗塞(局部缺血-再 灌注)模型大鼠)。在再灌注后的第29天準備每只大鼠左心室的心肌石蠟切片，然后進行 Azan-Mallory染色，通過圖像分析獲得染色區(qū)與心肌壞死遠端部位的比例作為纖維化比 例。結(jié)果顯示在下表中。[表 2] 如該表所示，化合物(1)有效抑制纖維化。由此可知，化合物(1)可用于抑制心臟重塑。實施例4 化合物⑴對纖維化的抑制作用在7周齡大鼠(SPF 雄性Crj，日本查爾斯河公司(Charles River Japan, Inc))的 尿道中插入聚乙烯管并在膀胱內(nèi)注入0.4mL 5%芥子油(用含20%異硫氰酸烯丙酯的液體 石蠟稀釋)。60分鐘后抽出膀胱內(nèi)的液體并用鹽水沖洗旁觀內(nèi)部。每天一次口服施用化合 物⑴(100mg/kg/天)，共10天，其中包括灌注芥子油的3天和灌注芥子油后的7天(給予 化合物(1)的大鼠n = 6)。此外，準備未施用化合物(1)的芥子油灌注大鼠作為對照(膀 胱炎大鼠n = 6)。在灌注芥子油后的第8天，取出膀胱制備石蠟切片，通過Azan染色對纖 維化程度評分，并進行評價。評分指數(shù)如下“1”表示相比正常組織沒有任何異常；“2”表 示有極少纖維化；“3”表示有輕微纖維化；“4”表示中等纖維化；“5”表示嚴重纖維化。結(jié) 果是，對照組的評分為2.6士0. 1，化合物(1)給藥組為2.0士0.2，有顯著差異(ρ < 0. 01 Wilcoxon檢測)。從該結(jié)果可知，化合物(1)可有效抑制纖維化。實施例5 檢測物對TGF- β誘導的PAI-I產(chǎn)生的抑制作用將ΗΤ1080細胞在含10% FBS (胎牛血清)的MEM培養(yǎng)基內(nèi)培育48小時，之后 將培養(yǎng)基更換成含1 % FBS的MEM培養(yǎng)基，僅加入TGF-β 1 (終濃度10ng/mL)，或者加入 TGF-β 1(終濃度10ng/mL)和檢測物，并培育。準備不含TGF-β 1且不含檢測物的培養(yǎng)液 作為對照。培育6小時后收集培養(yǎng)液，并通過Western印跡測量培養(yǎng)液中PAI-I的含量。當 僅加入TGF- β 1時PAI-I含量為“ 100 % ”，而對照中的PAI-I含量為“0 % ”，計算每種檢測 物濃度下的PAI-I含量(ΡΑΙ-1抑制比率)，并獲得以50%抑制PAI-I產(chǎn)生的化合物的濃度 (IC5tl)。結(jié)果示于下表中。[表 3] 實施例6 檢測物對TGF- β誘導的PAI-I產(chǎn)生的抑制作用將H印G2細胞以2χ104細胞/孔接種于96孔培養(yǎng)板，在含1 % NEAA(非必需氨基 酸)、lmM丙酮酸鹽和10% FBS的MEM培養(yǎng)基內(nèi)培育24小時。然后將培養(yǎng)基更換為含1 % NEAA、ImM丙酮酸鹽和1 % FBS的MEM培養(yǎng)基，再將細胞培育24小時。將培養(yǎng)基更換為含1 % NEAA, ImM丙酮酸鹽和1 % FBS的MEM培養(yǎng)基之后用檢測物(終濃度1 μ M或0. 1 μ Μ)處理細胞1小時，加入TGF- β 1 (終濃度lng/mL)并將細胞再培育24小時。準備僅添加TGF- β 1 的培養(yǎng)液以及不含檢測物且不含TGF-β 1的培養(yǎng)液作為對照。培育后用HumanSerpin El/ PAI-IDuoSet (R&D系統(tǒng))測量PAI-1含量。僅用TGF-β 1處理時ΡΑΙ-1含量為“100%”，既 不含檢測物也不含TGF- β 1時的PAI-I含量為“0% ”，計算每種檢測物的PAI-I抑制率。結(jié) 果示于下面的兩張表格中?；衔?2)的IC5tl約為50ηΜ。[表 4]__ 化合物濃度1 μ M[表 5] __ 化合物濃度0·1μΜ工業(yè)應(yīng)用通過本發(fā)明可知，有可能提供抑制PAI-I產(chǎn)生并有效抑制血液凝固或血栓形成的
新物質(zhì)，以及該物質(zhì)的應(yīng)用。
權(quán)利要求
一種抑制PAI-1產(chǎn)生的方法，該方法包括使以下通式(I)表示的化合物或其鹽作用于產(chǎn)生PAI-1的細胞的步驟，其中R1代表氫原子、烷基羰基、或4-(嗎啉基)羰基；D代表苯環(huán)、或具有一個或多個選自下組的基團的苯環(huán)鹵原子、硝基、氰基、烷基、烷氧基亞氨基烷基、芐氧基亞氨基烷基、苯基烯基、苯基炔基、三甲基甲硅烷基炔基、苯基、苯基烷基、鹵代烷基、吡咯基、烷基吡咯基、噻吩基、烷基噻吩基、烷基噻唑基、吡啶基、烷基吡啶基、烷基羰基、烷氧基羰基、吡咯基磺?；?4-硝基苯基)二氮烯基和羥基；和E是被一個或多個選自下組的基團取代的苯基鹵原子、鹵代烷基、苯基、烷基、鹵代烷氧基、苯基烷基、烷氧基、環(huán)己基、苯基烷氧基、氰基、鹵代烷基硫烷基、鹵代烷基磺酰基、乙炔基、苯甲?；?、烷基硫烷基、烷基磺酰基、嗎啉代基、烷基呋喃基、烷基羰基、1-(5-苯基)-3-(鹵代烷基)吡唑基、1-(5-烷基)-3-(鹵代烷基)吡唑基、和1-[3，5-雙(鹵代烷基)]吡唑基。FPA00001115128900011.tif
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中R1是氫原子、(V6烷基羰基、或4-(嗎啉基)羰基；D是苯環(huán)，或具有一個或多個選自下組的基團的苯環(huán)鹵原子、硝基、氰基、烷基、 (V6烷氧基亞氨基Cm烷基、芐氧基亞氨基CM烷基、苯基C2_6烯基、苯基C2_6炔基、三甲基甲 硅烷基C2_6炔基、苯基、苯基Cm烷基、鹵代(V6烷基、吡咯基、(V6烷基吡咯基、噻吩基、CM 烷基噻吩基、(V6烷基噻唑基、吡啶基、Cm烷基吡啶基、(V6烷基羰基、CM烷氧基羰基、吡咯 基磺?；?、(4-硝基苯基)二氮烯基、和羥基；E是被一個或多個選自下組的基團取代的苯基；鹵原子、鹵代Cm烷基、苯基、(V6烷基、 鹵代Cm烷氧基、苯基(V6烷基、(V6烷氧基、環(huán)己基、苯基(V6烷氧基、氰基、鹵代Cm烷基 硫烷基、商代烷基磺?；⒁胰不⒈郊柞；?、C^e烷基硫烷基、C^e烷基磺?；徇?基、(^烷基呋喃基、(V6烷基羰基、1-(5_苯基)-3-(鹵代烷基)吡唑基、1-(5-(^6烷 基)-3_(鹵代Ch烷基)吡唑基、和1-[3，5_雙(鹵代Ch烷基)]吡唑基。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述化合物是用以下式(1)_(3)中的任意一個表示 的化合物
4. 一種預防或改善由PAI-I過度產(chǎn)生而造成的疾病的方法，所述方法包括給予包括人 在內(nèi)的哺乳動物有效劑量的如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽。
全文摘要
用以下通式(I)表示的對PAI-1產(chǎn)生具有抑制活性的化合物；其中R1代表，例如，氫原子，或4-(嗎啉基)羰基，環(huán)D代表，例如，苯環(huán)或具有取代基的苯環(huán)，且苯基E具有諸如鹵原子、鹵代烷基、烷基、鹵代烷氧基或烷氧基的取代基。
文檔編號C07D295/20GK101842093SQ200880113369
公開日2010年9月22日 申請日期2008年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月23日
發(fā)明者板井昭子, 武藤進 申請人:株式會社醫(yī)藥分子設(shè)計研究所