專利名稱：苯醌衍生物e3330聯(lián)合化療劑用于治療癌癥和血管生成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明通常涉及分子生物學(xué)、生物化學(xué)和病理學(xué)領(lǐng)域。較具體的，在某些方面，本發(fā)明涉及Apel/Ref-Ι氧化還原抑制劑在癌癥治療及血管生成抑制方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶(Apel)，也稱為氧化還原效應(yīng)因子(Ref-I)(以下均寫為Apel/Ref-Ι)，是一種具有雙重作用的酶。除了其DNA堿基切除修復(fù)(BER)活性之外， Apel/Ref-Ι還可作為一種氧化還原效應(yīng)物保持轉(zhuǎn)錄因子呈一種活化的還原狀態(tài)而發(fā)揮作用(見圖1)。Apel/Ref-Ι已證實可刺激幾種轉(zhuǎn)錄因子如HIF-1 α , NFkβ , AP-I和ρ53以及其他已知和未知的與腫瘤存活和演進相關(guān)因子的DNA結(jié)合活性(Evans et al. , Mutat Res 2000，461，83)。已證實Apel/Ref-Ι在多種癌癥包括乳腺癌、宮頸癌、生殖細(xì)胞瘤、成人和兒童膠質(zhì)瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、非小細(xì)胞性肺癌以及多發(fā)性硬化癥中表達發(fā)生改變 (Puglisi et al.，Oncol Rep 2002，9，11 ；Thomson et al, Am JPediatr Hematol Oncol 2001,23,234 ；Roberston et al. , cancer Res 2001,61,2220 ；Puglisi et al. ,Anticancer Res 2001,21,4041 ；Koukourakis et al.，Int J Radiat OncolBiol Phys 2001,50,27 ； Kakolyris et al.，BrJCancer 1998，77，1169 ；Bobola et al.，Clin CancerRes 2001，7， 3510)。Apel/Ref-l高表達與放化療效果差、完全應(yīng)答率低、局部無復(fù)發(fā)間隔較短、生存較差以及血管生成較多有關(guān)(Koukourakis et al. ,Int J Radiat Oncol Biol Phys 2001，50， 27 ；Kakolyris et al. ,BrJCancer 1998, 77,1169 ；Bobola et al. , Clin Cancer Res 2001, 7,3510).血管生成是癌癥生長、存活、遷移和轉(zhuǎn)移的一個重要要素。癌性腫瘤的部位形成新血管為腫瘤加速生長和擴散提供營養(yǎng)源，并為腫瘤細(xì)胞進入血流并擴散至身體的其他部分提供路徑。因此，有效抑制血管生成是一種減緩或防止癌癥生長及擴散的有效機制。Apel/ Ref-I活性的增加與血管生成有關(guān)。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是血管發(fā)生和血管生成中牽涉到的重要信號傳導(dǎo)蛋白。Apel/Ref-Ι是在血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)基因的缺氧反應(yīng)元件上形成的低氧誘導(dǎo)性轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的一個組分(Ziel et al. , Faseb J2004，18，986)。除了癌癥，血管生成改變促進了與心血管疾病、慢性感染性疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、 糖尿病性視網(wǎng)膜病、退行性黃斑病變、視網(wǎng)膜后纖維增生、特發(fā)性肺纖維變性、急性成人呼吸窘迫綜合征、哮喘、子宮內(nèi)膜異位癥、銀屑病、瘢痕瘤以及全身性硬化癥相關(guān)的病理學(xué)癥狀。對于減緩或預(yù)防涉及過量血管生成的疾病，抑制血管生成是一種理想的臨床結(jié)局。

發(fā)明內(nèi)容
靶向抑制Apel/Ref-Ι的氧化還原功能是一種治療癌癥和血管生成的新途徑。在一個實施方式中，本發(fā)明涉及到應(yīng)用抑制Apel/Ref-Ι氧化還原功能的抗癌治療劑。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及Apel/Ref-Ι氧化還原功能的抗血管生成試劑。


圖1 :Apel/Ref-l在調(diào)節(jié)腫瘤存活中非常重要的轉(zhuǎn)錄因子方面的氧化還原功能。圖2 =VEGF的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。圖 3 =VEGF ELISA 檢測。圖 4 =VEGF ELISA 檢測。圖 5 =VEGF ELISA 檢測。圖 6 =VEGF ELISA 檢測。圖 7 =VEGF ELISA 檢測。圖8 利用鋪種于基質(zhì)膠上的CB-ECFC細(xì)胞實施的毛細(xì)管形成試驗。圖9 限制性稀釋試驗(LDA)。圖10 在用或不用堿性纖維母細(xì)胞生長因子(bFGF)處理的細(xì)胞中對視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖進行MTS增殖檢測。圖11 :E3330(RN_3)對視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞(RVEC)-野生型/sv40細(xì)胞的作用。圖12 利用源自人乳腺癌的MCF-7腫瘤細(xì)胞進行MTS檢測。四甲基偶氮唑鹽(MTS) 試驗用于細(xì)胞存活/生長分析。圖13 利用源自人卵巢腺癌的0VCAR-3腫瘤細(xì)胞進行MTS檢測。圖14 :E3330 (RN_3)和化療藥物美法侖聯(lián)合應(yīng)用對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的作用。圖15 =MTS檢測中，72小時后E3330 (RN-3)和化療藥物美法侖聯(lián)合應(yīng)用對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的作用。圖16 在24和48小時，E3330 (RN-3)和吉西他濱(0. · 25 μ M)對胰腺腫瘤細(xì)胞的作用。圖17 =MTS細(xì)胞活性檢測。圖18 =MTS細(xì)胞活性檢測。圖19 給藥 E3330(RN_3) (0_50mg/kg)的雄性小鼠體重。圖20 以不同量RN_3(E3330)處理的小鼠在處理后第2、3、4或5天觀察到的存活數(shù)據(jù)。圖21 :E3330 (RN-3)在Mhr時程的實驗過程中的藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)。圖22 :E3330 (RN3-3)的藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)。圖23 :E3330 (RN-3)和視黃酸對促進細(xì)胞分化的作用。圖M 如圖23所述利用Armexin/PI試驗進行HL-60細(xì)胞的凋亡分析。圖25 :RN-3 (E3330)和不同劑量RA的作用。圖沈:E3330 (RN-3)和RA對正發(fā)生凋亡(Annexin/PI試驗)的HL-60細(xì)胞的作用。
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圖27 :E3330(RN-3)和小分子甲氧胺聯(lián)合應(yīng)用對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的作用。
具體實施例方式本發(fā)明涉及到應(yīng)用選擇性抑制Apel/Ref-Ι氧化還原功能的抗癌和抗血管生成試劑。這種選擇性抑制包括特異性抑制，或者，換句話說，對Apel/Ref-Ι的BER功能無影響或者無可估計到的影響，且相對于BER功能而言，主要對氧化還原功能產(chǎn)生影響。本發(fā)明還涵蓋了這些試劑與其他化療/治療性試劑的聯(lián)合應(yīng)用。最好所述其他試劑以與那些選擇性抑制Apel/Ref-Ι氧化還原功能的試劑不同的方式作用于患者。與血管生成發(fā)生改變相關(guān)的生理性疾病涵蓋那些與血管生成不當(dāng)(其直接或間接有害于患者)相關(guān)的疾病。除了其他疾病，血管生成改變促進與癌癥(包括生長、存活、遷移、微環(huán)境和轉(zhuǎn)移)以及心血管疾病、慢性感染性疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、 退行性黃斑病變、視網(wǎng)膜后纖維增生、特發(fā)性肺纖維變性、急性成人呼吸窘迫綜合征、哮喘、 子宮內(nèi)膜異位癥、銀屑病、瘢痕瘤和全身性硬化癥相關(guān)的病理學(xué)癥狀。術(shù)語患者包括脊椎動物，優(yōu)選人類患者。術(shù)語抑制及其衍生語，包括其通常公認(rèn)的含義，其包括阻止、防止、遏制和減慢、中斷或逆轉(zhuǎn)進程或嚴(yán)重程度。因此，本發(fā)明所述方法既包括內(nèi)科治療性給藥又包括預(yù)防性給藥，視情況而定。就其本身而言，當(dāng)涉及到本文所述的治療性應(yīng)用時，需要該治療的患者是經(jīng)鑒定需要或希望醫(yī)學(xué)干預(yù)的個體。有效量是抑制本文所述病理性疾病和病癥所需試劑的量。當(dāng)給藥患者至少一種其他治療劑時，這些試劑可依次、并列(concurrently)或同時(simultaneously)給藥，以實現(xiàn)這些試劑的優(yōu)勢。人們已發(fā)現(xiàn)Apel/Ref-Ι的氧化還原功能可被3_[ (5- ，3_ 二甲氧基_6_甲基 1，4_苯醌基)]-2_壬基-2-丙酸選擇性抑制，見下圖(下文的“E3330”，本申請中也稱為 “RN3-3”)。
權(quán)利要求
1.一種用于抑制與改變的血管生成相關(guān)的生理疾病的方法，包括將有效量的選擇性抑制Apel/Ref-Ι的氧化還原功能的試劑向需要的患者給藥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述試劑是E3330或其藥學(xué)可接受的鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述疾病選自癌癥、心血管疾病、慢性感染性疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、退行性黃斑病變、晶狀體后纖維組織增生癥、特發(fā)性肺纖維變性、急性成人呼吸窘迫綜合征、哮喘、子宮內(nèi)膜異位癥、銀屑病、瘢痕瘤以及全身性硬化癥。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述疾病是癌癥。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述試劑是E3330或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中給藥所述患者至少一種其他的治療劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6述的方法，其中所述一種其他的治療劑選自美法侖、吉西他濱、順鉬、甲氧胺、沙利度胺及其衍生物，以及視黃酸。
8.一種用于抑制癌癥的方法，包括將有效量的選擇性抑制Apel/Ref-Ι氧化還原功能的試劑向需要的患者給藥。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述試劑是E3330或其藥學(xué)可接受的鹽。
10.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述癌癥選自乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、生殖細(xì)胞瘤、成人及兒童膠質(zhì)瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、非小細(xì)胞性肺癌、白血病和多發(fā)性骨髓瘤。
11.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述試劑是E3330或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中給藥所述患者至少一種其他的治療劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述一種其他的治療劑選自美法侖、吉西他濱、 順鉬、沙利度胺及其衍生物，以及視黃酸。
14.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中給藥所述患者至少另外一種治療劑。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述一種其他的治療劑是阿瓦斯丁。
全文摘要
本發(fā)明披露了用于治療癌癥和血管生成的新方法。酶Ape I/Aef-1通過其氧化還原功能，增強與癌癥演進相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性。本發(fā)明闡述了應(yīng)用這些試劑來選擇性抑制Ape I/Aef-1的氧化還原功能從而減弱腫瘤細(xì)胞的生長、存活、遷移和轉(zhuǎn)移。Ape I/Aef-1的抑制活性已證實可增強其他治療劑的療效并保護正常細(xì)胞免遭毒性。此外，Ape I/Aef-1抑制已證實可減少血管生成，可用于治療癌癥以及其他那些血管生成改變是組分之一的病理學(xué)癥狀。
文檔編號C07K16/22GK102215833SQ200880117660
公開日2011年10月12日 申請日期2008年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月21日
發(fā)明者馬克·R·凱利 申請人:印第安納大學(xué)研究及科技有限公司